植物組織切片中多酚化合物的快速檢查方法
2023-12-05 16:35:01 1
專利名稱：植物組織切片中多酚化合物的快速檢查方法
技術領域：
本發明屬於植物組織化學定性分析，具體涉及一種植物組織切片 中多酚化合物的快速檢査方法。
背景技術：
目前，在植物組織徒手切片、滑走切片、冰凍切片等切片中，一般用於簡單檢驗多酚類化合物的Ho印fner-Vorsatz反應，是由溶液 中的亞硝酸鈉氧化多酚化合物，多酚化合物氧化後通過溶液中的尿素 聚合，聚合物在鹼性條件下顯紅色。所述Ho印fner-Vorsatz反應不 能區別多酚化合物和多酚氧化物的聚合物，在多酚氧化物聚合物的幹 擾下其定性分析誤差較大，並且Ho印fner-Vorsatz反應的溶液配製 過程較為繁瑣。紫外光激發多酚化合物與鋁離子的配位化合物發出螢光的相關 理論及技術已經運用於環境科學，化學分析等領域，但在植物組織切 片的組織化學定性定位中沒有發明出相關的研究技術。發明內容本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種簡便快速的植物 組織切片中多酚化合物檢査方法。本發明的目的通過以下技術方案來予以實現提供一種植物組織切片中多酚化合物的快速檢査方法，採用鋁離子與植物組織切片中多酚化合物形成配位化合物，通過觀察紫外光激 發多酚化合物與鋁離子的配位化合物發出螢光進行定性定位測定多 酚化合物。所述植物組織切片中多酚化合物的快速檢查方法包括以下步驟(1) 用蒸餾水配製O. lmol/L AlCl3溶液；(2) 製備植物組織切片；(3) 將植物切片放置在載玻片上，滴加O. lmol/L AlCl3溶液， 蓋上蓋玻片；靜置時間不宜超過30min;(4) 把裝有切片的玻片放置在帶有紫外光裝置的顯微鏡下觀察 植物組織結構中出現的銀灰色螢光。步驟(2)所述植物組織切片為徒手切片、滑走切片或冰凍切片 的任意一種新鮮切片。本發明優選冰凍切片。步驟(3) AlCl3溶液滴加1 2滴。步驟(4)所述紫外光波長範圍為340 380nm。作為本發明的優選方案，所述植物組織切片為小於20微米的冰 凍切片，顯微鏡放大倍數為40x或100x。本發明還可以包括運用顯微拍照系統對結果進行拍照記錄的步 驟，以便獲得更直觀的分析結果。本發明的思路是鋁離子可以與多酚化合物形成配位化合物，在 紫外光照射下產生螢光；植物體內的多酚化合物氧化後，氧化物自身 聚合或與細胞內的蛋白質反應產生的黑色或褐色沉積物不會吸收紫外光產生螢光。所以，本發明建立了紫外光激發多酚化合物與鋁離子 的配位化合物發出螢光的理論基礎。本發明的有益效果是本發明克服了現有檢測方法屮多酚氧化物 聚合物的幹擾，不能準確定性植物切片中多酚化合物的缺點，不僅能 為植物組織切片中的多酚化合物準確定性定位，排除一般多酚組織化 學定性分析屮多酚氧化物聚合物對分析結果的幹擾，而且在同一條件 處理下可根據螢光的強弱判斷多酚化合物含量的多少，並觀察多酚化 合物在植物細胞組織中的變化情況。本發明方法操作簡單，快速準確。
圖1滴加AlCl3溶液處理後的紫錐菊根莖的20微米冰凍切片紫外光 照射下發出的螢光照片圖2酒精提取多酚後，滴加AlCl3溶液處理的紫錐菊根莖的20微米冰凍切片紫外光照射下發出的螢光照片圖3不採用AlCl3處理的情況下紫錐菊根莖的20微米冰凍切片紫外 光照射下發出的螢光照片圖4常溫下處理的紫錐菊根莖切片採用本發明方法觀察到的紫外光 照射下發出的螢光照片圖5 6CTC水浴處理的紫錐菊根莖切片採用本發明方法觀察到的紫外 光照射下發出的螢光照片圖6 8(TC水浴處理的紫錐菊根莖切片採用本發明方法觀察到的紫外 光照射下發出的螢光照片圖7 IO(TC水浴處理的紫錐菊根莖切片採用本發明方法觀察到的紫外光照射下發出的螢光照片具體實施方式
下面結合具體實施例來進一歩說明本發明。 實施例1(1) 用蒸餾水配製O. lmol/L AlCl3溶液；(2) 製備新鮮的植物組織切片，可採用常規的徒手切片、滑走 切片和冰凍切片等各種新鮮切片 ，(3) 將植物切片放置在載玻片上，滴加1 2滴0. lmol/L A1C13 溶液，蓋上蓋玻片；(4) 把裝有切片的玻片放置在帶有紫外光裝置的顯微鏡下觀察 植物組織結構中出現的銀灰色螢光。在波長範圍340 380nm的紫外光照射下，植物組織結構中出現 有銀灰色的螢光，此螢光即為多酚化合物與鋁離子的配位化合物發出 的螢光。如果，切片厚度小，例如20微米的冰凍切片，高放大倍數 例如40x或100x的情況下，還可觀察到植物組織切片屮多酚化合物 的具體分布位置，可對其進行定位分析。如果顯微鏡連有拍照裝置，可進行拍照記錄結果，獲得直觀的分 析結果。步驟(2)中要儘量避免切片在空氣暴露，不能把切片擱置太久， 通常不宜超過30min，避免因為取材而使材料創傷面的多酚物質被空 氣中的氧氣氧化。切片滴加AlCl3溶液後應儘快在紫外光下觀察，因為長時間放置後可能會發生螢光猝滅現象，最好在30分鐘之內觀察完畢。按照上述實驗步驟，選取紫錐菊根莖的20微米冰凍切片，在紫 外螢光下，皮層薄壁細胞中多酚化合物發出銀灰色螢光，見附圖1 ;同時，選用上述相同的紫錐菊根莖的20微米冰凍切片採用酒精 提取多酚後，再滴加A1C13溶液可看見細胞有一定量的螢光，見附圖 2，這是由於多酚提取不完全、切片中仍留有一部分多酚造成的。選用上述相同的紫錐菊根莖的20微米冰凍切片，但不採用A1C13 處理的情況下，細胞中只可看見細胞物質自身發出的藍色光，見附圖 3 。實施例2定性觀察相同材料通過不同溫度處理後多酚含量的變化 選取同一時期和生長條件下的材料紫錐菊根莖部位，在同一時間分別經過常溫和6crc、 80°c、 iocrc水浴處理各10分鐘。由於不同 溫度對多酚氧化酶的滅活程度不同，不同活性的酶氧化多酚的量不同 導致了保留的多酚的含量不同。再採用本發明的方法進行定性觀察， 可以通過圖片顯示細胞中的螢光亮度的變化來觀察紫錐菊根莖切片中多酚化合物保存量。附圖4 7顯示細胞中的螢光亮度變化，表明通常隨著處理溫度升高，多酚氧化酶活性降低，多酚化合物保存量逐 漸增多。常溫下處理得到的切片，多酚氧化酶活性最高，但正常情況下酶 與多酚底物在細胞內有不同的區域分布，兩者不接觸，所以酶不影響多酚的含量，螢光下顯示多酚物質含量很高，見附圖4。6(TC水浴處理得到的切片，多酚氧化酶依然保持較高活性，但由 於高溫處理時酶與多酚底物在細胞內的區域分布被打破，兩者接觸， 大量的多酚被氧化成多酚氧化物，多酚保留的量很少，螢光下螢光強度很低，顯示多酚物質含量很低，見附圖5。8crc水浴處理得到的切片，多酚氧化酶活性很低，儘管酶與多酚 底物在細胞內的區域分布被打破，兩者接觸，但由於酶活性低對多酚 的含量有一定影響，但影響不大。與6crc相比，螢光下螢光強度轉為增強'，顯示多酚物質含量較高，見附圖6。IO(TC水浴處理得到的切片，多酚氧化酶已瞬間完全滅活，多船的含量不受酶的影響。螢光強度很高，顯示多酚物質含量高，見附圖7。
權利要求
1、一種植物組織切片中多酚化合物的快速檢查方法，其特徵在於採用鋁離子與植物組織切片中多酚化合物形成配位化合物，通過觀察紫外光激發多酚化合物與鋁離子的配位化合物發出螢光進行定性定位測定多酚化合物。
2、 根據權利要求1所述植物組織切片中多酚化合物的快速檢査方法，其特徵在於包括以下步驟(1) 用蒸餾水配製O. lmol/L AlCl3溶液；(2) 製備植物組織切片；(3) 將植物切片放置在載玻片上，滴加O. lmol/L AlCl3溶液， 蓋上蓋玻片；靜置時間不宜超過30分鐘；(4) 把裝有切片的玻片放置在帶有紫外光裝置的顯微鏡下觀察 植物組織結構中出現的銀灰色螢光。
3、 根據權利要求2所述植物組織切片中多酚化合物的快速檢查 方法，其特徵在於步驟(2)所述植物組織切片為徒手切片、滑走切 片和冰凍切片的任意一種新鮮切片。
4、 根據權利要求3所述植物組織切片中多酚化合物的快速檢查 方法，其特徵在於步驟(2)所述植物組織切片為冰凍切片。
5、 根據權利要求2所述植物組織切片中多酚化合物的快速檢查 方法，其特徵在於步驟(3) AlCl3溶液滴加1 2滴。
6、 根據權利要求2所述植物組織切片中多酚化合物的快速檢查方法，其特徵在於步驟(4)所述紫外光波長範圍為340 380nm。
7、 根據權利要求2所述植物組織切片中多酚化合物的快速檢査 方法，其特徵在於所述植物組織切片為小於20微米的冰凍切片，顯 微鏡放大倍數為40x或100x。
8、 根據權利要求2所述植物組織切片屮多酚化合物的快速檢査. 方法，其特徵在於所述步驟還包括運用顯微拍照系統對結果進行拍照 記錄。
全文摘要
本發明公開了一種植物組織切片中多酚化合物的快速檢查方法，採用鋁離子與植物組織切片中多酚化合物形成配位化合物，通過觀察紫外光激發多酚化合物與鋁離子的配位化合物發出螢光進行定性定位測定多酚化合物。本發明不僅能為植物組織切片中的多酚化合物準確定性定位，排除一般多酚組織化學定性分析中多酚氧化物聚合物對分析結果的幹擾，而且在同一條件處理下可根據螢光的強弱判斷多酚化合物含量的多少，並觀察多酚化合物在植物細胞組織中的變化情況。本發明方法操作簡單，快速準確。
文檔編號G01N21/64GK101246124SQ200810026200
公開日2008年8月20日 申請日期2008年1月31日 優先權日2008年1月31日
發明者鴻 吳, 唐鐵鑫, 章豔麗 申請人:華南農業大學