雷公藤多苷及其製劑中雷公藤內酯甲的含量測定方法
2023-12-05 15:36:16 2
專利名稱：雷公藤多苷及其製劑中雷公藤內酯甲的含量測定方法
技術領域：
本發明涉及一種雷公藤多苷及其製劑中雷公藤內酯甲的含量測定方法，屬於對藥品進行質量控制的技術領域。
背景技術：
雷公藤多苷為衛矛科植物雷公藤根經提取、純化、精製而成的有效部位，是一個良好的免疫抑制劑。它不僅具有免疫抑制作用，同時還有抗炎作用，是治療類風溼性關節炎的首選藥物。目前市場上治療風溼病的藥物還相當缺乏，主要有非甾體抗炎藥、甾體激素類、慢性作用抗風溼藥。非甾體抗炎藥、慢性作用抗風溼藥的療效並不理想，主要緩解疼痛症狀，不能有效防治病情的發展；而激素類藥物療效雖好，但其特殊的副作用，決定其不能長期使用，只能作短期的衝擊治療。而中藥具有獨特的優勢，其副作用小，對腸胃亦無刺激，且風溼病以外邪入內為病因，中醫扶正祛邪可直接治本。因此，國家藥品監督管理局藥品審評中心在2001年12月針對雷公藤製劑舉行了專題會議，參會專家一致認為雷公藤製劑雖然有一定毒性，但其治療風溼病的療效非常肯定，希望有更多的「安全有效、質量穩定」的雷公藤製劑的開發。
雷公藤多苷由於除去了主要有毒部份和雜質，有效組份的純度提高，副作用和毒性比生藥製劑下降，安全範圍提高。但從臨床研究的統計數字來看，還有一定的副作用約1/5的患者服藥後有胃腸道不適。因此為保證臨床用藥的有效性及安全性，建立一個有效的質量控制方法顯得尤為重要。
雷公藤內酯甲為雷公藤多苷中有效成分之一，經查閱國內外相關文獻資料，雷公藤內酯甲的測定方法較少，有用薄層掃描法進行測定，但薄層掃描法操作繁瑣，誤差較大。
發明內容
本發明的目的在於提供一種雷公藤多苷及其製劑中雷公藤內酯甲的含量測定方法，本發明針對現有技術的不足，建立了專屬性強、精密度好、回收率高的高效液相色譜法，可有效控制雷公藤多苷的質量，從而保證臨床用藥的有效性及安全性。
本發明所述的雷公藤多苷是取雷公藤根粉碎，醇提，經柱層析分離收集有效組份而得，其製劑是用雷公藤多苷製成的製劑。本發明方法不僅適用於雷公藤多苷及其製劑，還可用於雷公藤藥材或雷公藤多苷與其他藥材或藥材的有效成分組合後製備的藥物製劑。
本發明是這樣構成的它是以雷公藤內酯甲對照品為對照，以水∶乙腈＝10～40∶90～60為流動相的高效液相色譜法。
具體的測定方法為色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以水∶乙腈＝10～40∶90～60為流動相，流速為1ml/min；檢測波長為210nm；理論板數按雷公藤內酯甲計算應不低於3000；對照品溶液的製備 取雷公藤內酯甲對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1ml含30μg的溶液，即得；供試品溶液的製備 取相當於雷公藤多苷細粉約0.12g，精密稱定，置20ml量瓶中，加氯仿溶解，並稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上清液5ml，加到100～200目、6g、內徑1cm、溼法裝柱、用適量氯仿預洗、含水份2～4％的中性氧化鋁柱上，以乙酸乙酯∶丙酮＝2～4∶1的溶液20～30ml，在30～50℃恆溫條件下洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解，轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；雷公藤多苷中含雷公藤內酯甲不得少於1mg/g。
更具體的測定方法為色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以水∶乙腈＝25∶75為流動相，流速為1ml/min；檢測波長為210nm；理論板數按雷公藤內酯甲計算應不低於3000；對照品溶液的製備 取雷公藤內酯甲對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1ml含30μg的溶液，即得；供試品溶液的製備 取相當於雷公藤多苷細粉約0.12g，精密稱定，置20ml量瓶中，加氯仿溶解，並稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上清液5ml，加到100～200目、6g、內徑1cm、溼法裝柱、用適量氯仿預洗、含水份3％的中性氧化鋁柱上，以乙酸乙酯∶丙酮＝3∶1的溶液25ml，在38～40℃恆溫條件下洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解，轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；雷公藤多苷中含雷公藤內酯甲不得少於1mg/g。
為了確保本發明含量測定方法科學、合理、可行，申請人進行了以下試驗研究，以確定相關的技術條件、數據等等試驗例
1、流動相的選擇以水-乙腈、甲醇-乙腈-水及0.1％H2PO4-乙腈的不同比例的混合溶液為流動相進行試驗、比較，結果表明以水-乙腈(10～40∶90～60)為流動相的分離效果較好，特別是在水-乙腈(25∶75)流動相條件下，分離效果最好。
2、色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以水-乙腈(10～40∶90～60)為流動相，流速為1ml/min；檢測波長為210nm。理論板數按雷公藤內酯醇計算應不低於3000。
3、樣品溶液製備對照品溶液的製備 取雷公藤內酯甲對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的製備 取相當於雷公藤多苷細粉約0.12g，精密稱定，置20ml量瓶中，加氯仿溶解，並稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上清液5ml，加到已準備好含水份2～4％的中性氧化鋁柱(100～200目，6g，內徑1cm，溼法裝柱，用適量氯仿預洗)上，以乙酸乙酯-丙酮(2～4∶1)20～30ml，在30～50℃恆溫條件下洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解，轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
4、線性範圍精密稱取雷公藤內酯甲對照品適量，加甲醇溶解稀釋製成約含雷公藤內酯甲為6μg/ml、12μg/ml、24μg/ml、48μg/ml、72μg/ml、120μg/ml的溶液。照色譜條件與系統適用性試驗條件測定，以峰面積(A)對樣品濃度作直線，得回歸方程y＝4638.3X+5760.3R＝0.9997結果表明雷公藤內酯甲在6～120μg/ml範圍內呈良好的線性關係。
5、幹擾性試驗照「3項下供試品溶液的製備方法」製備一份不加樣品的空白溶液，並同法測定，結果在相應位置未見有色譜峰，表明空白無幹擾。
6、精密度試驗6.1重複性試驗取樣品細粉約0.12g，六份，精密稱定，按「3項下供試品溶液的製備方法」製備供試品溶液，依法測定，結果見下表
6.2中間精密度 不同人員在不同日期取樣品細粉約0.12g，六份，精密稱定，按「3項下供試品溶液的製備方法」製備供試品溶液，依法測定，結果見下表
7、穩定性試驗取樣品細粉約0.12g，精密稱定，按「3項下供試品溶液的製備方法」製備供試品溶液，按下表時間測定6次，其峰面積如下表
8、回收率試驗取3項下的處理的供試液溶液，按雷公藤內酯甲的測定方法測定含量，計算其回收率。結果見下表
該方法雷公藤內酯甲平均回收率為98.98％，相對平均偏差為1.99％，可見該方法回收率較理想。
9、含量測定按「3項下供試品溶液的製備方法」製備供試品溶液，依法測定不同年份的十批樣品，結果見下表
根據以上十批樣品中雷公藤內酯甲的含量測定結果，暫定雷公藤多苷中含雷公藤內酯甲不得少於1mg/g。
與現有技術相比，本發明含量測定採用高效液相色譜法，其專屬性強、精密度好、回收率高，測量結果準確，可有效控制雷公藤多苷的質量，從而確保臨床用藥的有效性及安全性。
具體實施例方式本發明的實施例1雷公藤多苷中雷公藤內酯甲的含量測定方法為色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以水∶乙腈＝25∶75為流動相，流速為1ml/min；檢測波長為210nm；理論板數按雷公藤內酯甲計算應不低於3000。
對照品溶液的製備取雷公藤內酯甲對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的製備取雷公藤多苷細粉約0.12g，精密稱定，置20ml量瓶中，加氯仿溶解，並稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上清液5ml，加到100～200目、6g、內徑1cm、溼法裝柱、用適量氯仿預洗、含水份3％的中性氧化鋁柱上，以乙酸乙酯∶丙酮＝3∶1的溶液25ml，在38～40℃恆溫條件下洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解，轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
雷公藤多苷中含雷公藤內酯甲不得少於1mg/g。
本發明的實施例2所述含量測定方法也可以為色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以水∶乙腈＝10∶90為流動相，流速為1ml/min；檢測波長為210nm；理論板數按雷公藤內酯甲計算應不低於3000。
對照品溶液的製備 取雷公藤內酯甲對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的製備 取雷公藤多苷細粉約0.12g，精密稱定，置20ml量瓶中，加氯仿溶解，並稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上清液5ml，加到100～200目、6g、內徑1cm、溼法裝柱、用適量氯仿預洗、含水份2％的中性氧化鋁柱上，以乙酸乙酯∶丙酮＝2∶1的溶液20ml，在30～38℃恆溫條件下洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解，轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
雷公藤多苷中含雷公藤內酯甲不得少於1mg/g。
本發明的實施例3所述含量測定方法還可以為色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以水∶乙腈＝40∶60為流動相，流速為1ml/min；檢測波長為210nm；理論板數按雷公藤內酯甲計算應不低於3000。
對照品溶液的製備 取雷公藤內酯甲對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1ml含30μg的溶液，即得。
供試品溶液的製備 取雷公藤多苷細粉約0.12g，精密稱定，置20ml量瓶中，加氯仿溶解，並稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上清液5ml，加到100～200目、6g、內徑1cm、溼法裝柱、用適量氯仿預洗、含水份4％的中性氧化鋁柱上，以乙酸乙酯∶丙酮＝4∶1的溶液30ml，在40～50℃恆溫條件下洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解，轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
雷公藤多苷中含雷公藤內酯甲不得少於1mg/g。
權利要求
1雷公藤多苷及其製劑中雷公藤內酯甲的含量測定方法，其特徵在於它是以雷公藤內酯甲對照品為對照，以水∶乙腈＝10～40∶90～60為流動相的高效液相色譜法。
2按照權利要求1所述雷公藤多苷及其製劑中雷公藤內酯甲的含量測定方法，其特徵在於具體的測定方法為色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以水∶乙腈＝10～40∶90～60為流動相，流速為1ml/min；檢測波長為210nm；理論板數按雷公藤內酯甲計算應不低於3000；對照品溶液的製備 取雷公藤內酯甲對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1ml含30μg的溶液，即得；供試品溶液的製備 取相當於雷公藤多苷細粉約0.12g，精密稱定，置20ml量瓶中，加氯仿溶解，並稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上清液5ml，加到100～200目、6g、內徑1cm、溼法裝柱、用適量氯仿預洗、含水份2～4％的中性氧化鋁柱上，以乙酸乙酯∶丙酮＝2～4∶1的溶液20～30ml，在30～50℃恆溫條件下洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解，轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；雷公藤多苷中含雷公藤內酯甲不得少於1mg/g。
3按照權利要求2所述雷公藤多苷及其製劑中雷公藤內酯甲的含量測定方法，其特徵在於更具體的測定方法為色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以水∶乙腈＝25∶75為流動相，流速為1ml/min；檢測波長為210nm；理論板數按雷公藤內酯甲計算應不低於3000；對照品溶液的製備 取雷公藤內酯甲對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每1ml含30μg的溶液，即得；供試品溶液的製備 取相當於雷公藤多苷細粉約0.12g，精密稱定，置20ml量瓶中，加氯仿溶解，並稀釋至刻度，搖勻，精密吸取上清液5ml，加到100～200目、6g、內徑1cm、溼法裝柱、用適量氯仿預洗、含水份3％的中性氧化鋁柱上，以乙酸乙酯∶丙酮＝3∶1的溶液25ml，在38～40℃恆溫條件下洗脫，收集洗脫液，蒸乾，殘渣用甲醇溶解，轉移至2ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得；測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得；雷公藤多苷中含雷公藤內酯甲不得少於1mg/g。
全文摘要
本發明提供了一種雷公藤多苷及其製劑中雷公藤內酯甲的含量測定方法，它是以雷公藤內酯甲對照品為對照，以水∶乙腈＝10～40∶90～60為流動相的高效液相色譜法。與現有技術相比，本發明含量測定採用高效液相色譜法，其專屬性強、精密度高、回收率好，測量結果準確，可有效控制雷公藤多苷的質量，從而確保臨床用藥的有效性及安全性。
文檔編號G01N30/06GK1851453SQ20061020042
公開日2006年10月25日 申請日期2006年5月9日 優先權日2006年5月9日
發明者劉法千, 鮑立曾, 熊仕強 申請人:浙江得恩德製藥有限公司