一種具抗腫瘤活性的不對稱雙7‑N雜靛紅席夫鹼類化合物的合成方法與流程

2023-12-02 09:59:36 1

本發明涉及醫藥化學領域，具體涉及一種具抗腫瘤活性的不對稱雙7-N雜靛紅席夫鹼類化合物的合成方法。

背景技術：

席夫鹼化合物因其獨特的結構特徵，即核心基團含有帶孤對電子的N原子，從而具有很好的配對能力，而該基團兩邊均可與各種類型的基團反應從而得到性質不一的衍生物，這使得其在實際應用上極具特色，尤其在化學、生物學方面應用廣泛。不對稱雙席夫鹼，由於其結構的不對稱性，使得擁有很多特殊的用途，如可用作載氧載體、催化劑、殺蟲劑、抑菌劑、生物模擬過程的模擬分子等，近年來此類化合物的合成和性質研究也成為化學領域中一個十分活躍的課題。

靛紅及其衍生物(含N雜靛紅)具有獨特的電子特性和優越的生物活性，在抗腫瘤、抗病毒、神經保護等方面的活性有重要意義。靛紅目前可以作為工業品大量合成，是相對較便宜的原料，其1、2、3位及苯環上可以發生多種類型的化學反應，為其衍生物的合成提供了廣闊的空間，因此目前對靛紅及其衍生物的合成和活性的研究非常活躍。

含O、S、N的席夫鹼及其金屬配合物,以其良好的抑菌、抗癌和抗病毒的生物活性一直受到人們的重視。靛紅類化合物(含N雜靛紅)具有較好的抑菌、抗病毒、神經保護活性。因此，筆者利用7-N雜靛紅及其衍生物和水合肼為原料，設計合成了一類結構新穎的不對稱雙7-N雜靛紅席夫鹼類化合物。

技術實現要素：

為了克服上述現有技術的不足，本發明的目的是提供一種具抗腫瘤活性的不對稱雙7-N雜靛紅席夫鹼類化合物的合成方法，具有原料環保，生產成本低，操作安全性高，反應條件溫和，反應原料利用充分的特點。

一種具有抗腫瘤活性的不對稱雙7-N雜靛紅席夫鹼類化合物，其結構式(Ⅰ)：

其中：

R1、R2、R3、R4可以為氫、硝基、烷氧基、滷素，取代或未取代的苯基，取代或未取代的低級烷基或環烷基、低級烷基-環烷基、環烷基-低級烷基；

優選R1表示下列基團：氫、甲氧基、硝基、滷素，取代或未取代的低級烷基或環烷基；

優選R2表示下列基團：氫、硝基、滷素，取代或未取代的低級烷基或環烷基；

優選R3表示下列基團：氫、甲氧基、硝基、甲基、滷素，取代或未取代的苯基，取代或未取代的低級烷基或環烷基；

優選R4表示下列基團：氫、硝基、甲基、滷素，取代或未取代的苯基，取代或未取代的低級烷基或環烷基。

一種具有抗腫瘤活性的不對稱雙7-N雜靛紅席夫鹼類化合物的合成方法，由7-N雜靛紅及其衍生物和水合肼為原料，在乙醇作為反應溶劑的條件下的合成路線如下：

以下為詳細製備過程：

1)將適量7-N雜靛紅或其衍生物用有機溶劑溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到水合肼的有機溶劑中，加熱到60℃～100℃，反應4～9小時；

2)薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體；

3)將步驟2)所述的中間體與另一不同取代基的7-N雜靛紅或其衍生物按摩爾比1:1～1:2置於反應器中，加入適量有機溶劑繼續加熱、攪拌，60℃～100℃下回流反應2～6小時；

4)TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，然後冷卻至室溫過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱雙7-N雜靛紅席夫鹼粗品；

5)將不對稱雙7-N雜靛紅席夫鹼粗品加入到反應器中，加入有機溶劑進行重結晶，過濾，乾燥得到不對稱雙7-N雜靛紅席夫鹼類化合物目標產物。

所述的步驟1)、的步驟3)、的步驟5)中的有機溶劑優選甲醇、乙醇或異丙醇，進一步優選為乙醇。

所述的步驟1)中7-N雜靛紅或其衍生物與水合肼的摩爾比為1:1～1:2.5，進一步優選為1:1.5～1:2。

所述的步驟1)中的反應時間優選為5～6小時。

所述的上驟1)、上驟3)中的溫度為75℃～85℃。

所述的步驟3)中的中間體與另一不同取代基的7-N雜靛紅或其衍生物按摩爾比為1:1～1:1.5。

所述的步驟(3)中的反應時間為3～4小時。

結構式(I)部分優選實施方案中的化合物結構式如下所示：

本發明的有益效果是：

本合成路線的優點在於：原料環保，生產成本低，操作安全性高，反應條件溫和，反應原料利用充分，適用於工業化生產。

具體實施方式：

下面結合具體實施例對本發明作進一步敘述，但本發明不局限與以下實施例。

實施例1

化合物(1)

(Z)-6-chloro-3-((Z)-(5-methyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1H-p yrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量1.82g(10mmol)5-氯-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.62g(10mmol)5-甲基-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱5-氯-5』-甲基-雙7-N雜靛紅席夫鹼(1)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到淡黃色結晶性粉末(1.52克)，總收率44.6％。

淡黃色結晶粉末，M.P.174.5℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.13(1H,s,J＝1.5Hz),8.1(1H,s,J＝0.4Hz),2.33(3H,s,J＝0.4Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSOd6)δ(ppm):167.2,161.0,159.5,158.8,146.4,140.9,139.4,138.2,137.5,136.6,119.3,118.6,110.9,18.1；HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:340.0475,found:340.0479.

實施例2

化合物(2)

(Z)-3-((Z)-(5-bromo-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-6-chloro-1H-p yrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量1.82g(10mmol)5-氯-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與2.26g(10mmol)5-溴-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對5-氯-5』-溴-雙7-N雜靛紅席夫鹼(2)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到黃棕色色結晶性粉末(3.11克)，總收率76.9％。

黃棕色結晶粉末，M.P.199.5℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.53(1H,s,J＝1.5Hz),8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.10(1H,s,J＝1.5Hz),8.06(2H,s),7.76(1H,s,J＝1.5Hz)；13C-NMR(75MHz,DMS O-d6)δ(ppm):167.2,160.9,160.8,155.4,146.5,141.3,141.0,139.4,138.1,137.5,118.6,112.9,104.8；HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:403.9426,found:403.94249.

實施例3

化合物(3)

(Z)-3-((Z)-(5-bromo-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-6-methyl-1H-p yrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量1.62(10mmol)5-甲基-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與2.26g(10mmol)5-溴-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱5-甲基-5』-溴-雙7-N雜靛紅席夫鹼(3)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到紅褐色結晶性粉末(2.75克)，總收率71.6％。

紅褐色結晶粉末，M.P.210.6℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.53(1H,s,J＝1.5Hz),8.23(1H,s,J＝1.5Hz),8.10(1H,s,J＝1.5Hz),8.02(2H,s),7.46(1H,s,J＝1.5Hz),2.33(3H,s,J＝1.5Hz)；13C-N MR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):167.2,161.0,155.4,144.9,141.6,141.1,139.3,138.5,138.2,116.8,112.9,104.7,18.2；HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:383.9971,found:383.9974.

實施例4

化合物(4)

(Z)-3-((Z)-(1-benzyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-p yrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量1.62g(10mmol)1-甲基-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與2.38g(10mmol)1-苄基-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱1-甲基-1』-苄基-雙7-N雜靛紅席夫鹼(4)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到灰褐色結晶性粉末(2.51克)，總收率63.5％。

灰褐色結晶性粉末，M.P.214.3℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.33,8.31(2H,t,J＝1.5Hz,7.5Hz),7.96(1H,d,J＝7.5Hz),7.32-7.22(6H,m,J＝1.5Hz,7.5Hz),6.88(1H,t,J＝1.5Hz),4.79(2H,s,J＝7.5Hz),3.42(3H,s,J＝1.5Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,161.5,160.9,153.3,145.8,140.8,138.7,138.5,138.2,136.3,128.7,127.1,126.9,120.7,113.6,111.8,49.6,30.3；HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:396.1336,found:396.1339.

實施例5

化合物(5)

(Z)-3-((Z)-(1-ethyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-py rrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量1.62g(10mmol)1-甲基-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.76g(10mmol)1-乙基-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱1-甲基-1』-乙基-雙7-N雜靛紅席夫鹼(5)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到白色結晶性粉末(1.18克)，總收率35.2％。

白色結晶粉末，M.P.195.6℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.33,8.31(2H,t,J＝7.5Hz),7.96(1H,d,J＝7.5Hz),7.68(1H,t,J＝7.5Hz),7.36(1H,d,J＝7.5Hz),6.88(1H,t,J＝7.5Hz),4.30(2H,q,J＝7.5Hz),3.42(3H,s,J＝8.0Hz),1.39(3Ht,J＝8.0Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,163.4,161.8,161.0,153.3,145.8,140.7,138.7,138.5,138.2,127.3,120.7,113.6,111.8,48.9,30.3,13.9；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:334.1176,found:334.11179.

實施例6

化合物(6)

(Z)-1-ethyl-3-((Z)-(1-isopropyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量1.76g(10mmol)1-乙基-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.90g(10mmol)1-異丙基-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱1-乙基-1』-異丙基-雙7-N雜靛紅席夫鹼(6)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到紅色結晶性粉末(2.49克)，總收率68.7％。

紅色結晶粉末，M.P.191.9℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.33,8.31(2H,t,J＝7.5Hz),7.96(1H,d,J＝7.5Hz),7.68(1H,t,J＝1.5Hz),7.36(1H,d,J＝1.5Hz),6.88(1H,d,J＝7.5Hz),4.30(2H,q,J＝6.8Hz),3.96(1H,m,J＝6.8Hz),1.40(3H,t,J＝6.8Hz),1.29(6H,d,J＝6.8Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.4,161.8,160.9,153.3,145.7,140.8,138.5,138.2,127.4,120.7,113.6,111.8,58.6,42.4,20.8,13.9；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:362.1494,found:362.1497.

實施例7

化合物(7)

(Z)-3-((Z)-(1-isopropyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量1.62g(10mmol)1-甲基-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.90g(10mmol)1-異丙基-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱1-甲基-1』-異丙基-雙7-N雜靛紅席夫鹼(7)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到紅色結晶性粉末(1.90克)，總收率54.5％。

紅色粉末，M.P.182.5℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.33,8.31(2H,t,J＝7.5Hz),7.96(1H,d,J＝7.5Hz),7.68(1H,t,J＝1.5Hz),7.36(1H,d,J＝1.5Hz),6.88(1H,t,J＝7.5Hz),3.96(1H,m,J＝7.5Hz),3.42(1H,s,J＝6.8Hz),1.29(6Hd,J＝6.8Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,163.1,161.8,161.0,1583.3,145.8,140.7,138.6,138.5,127.3,120.6,113.5,111.7,58.6,30.2,20.8；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:348.1336,found:348.1339.

實施例8

化合物(8)

(Z)-6-chloro-3-((Z)-(5-chloro-1-methyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-ethyl-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量2.10g(10mmol)1-乙基-5-氯-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.96g(10mmol)1-甲基-5-氯-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱1-乙基-1』-甲基-5,5』-二氯雙7-N雜靛紅席夫鹼(8)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到黃色結晶性粉末(3.07克)，總收率76.4％。

黃色結晶粉末，M.P.186.9℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm)8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.34,8.30(2H,d,J＝1.5Hz),7.76(1H,s,J＝1.5Hz),4.30(2H,q,J＝8.0Hz),3.42(3H,s,J＝7.5Hz),1.40(3H,t,J＝8.0Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,163.4,160.9,160.4,153.1,146.5,141.0,139.4,138.5,138.2,137.4,123.7,118.6,112.5,42.4,31.3,13.9；HRMS(ESI)for(M+H)+:calcd:402.0398,found:402.0401.

實施例9

化合物(9)

(Z)-6-bromo-3-((Z)-(5-chloro-1-ethyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量2.40g(10mmol)1-甲基-5-溴-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與2.11g(10mmol)1-乙基-5-氯-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱1-乙基-1』-甲基-5-溴-5』-氯雙7-N雜靛紅席夫鹼(9)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到紅棕色結晶性粉末(3.54克)，總收率79.3％。

紅棕色結晶粉末，M.P.205.2℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.34,8.30(2H,d,J＝1.5Hz),7.95(1H,s,J＝1.5Hz),4.31(2H,q,J＝8.0Hz),3.42(3H,s),1.30(3H,t,J＝8.0Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,161.0,160.4,153.1,147.0,143.3,139.8,138.5,138.2,123.7,118.5,118.4,112.5,48.8,30.3,13.9；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:445.9893,found:445.9897.

實施例10

化合物(10)

(Z)-3-((Z)-(1-benzyl-5-bromo-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-6-chloro-1-ethyl-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量2.10g(10mmol)1-乙基-5-氯-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與3.16g(10mmol)1-苯乙基-5-溴-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱1-乙基-5-氯-1』-苯乙基-5』-溴-雙7-N雜靛紅席夫鹼(10)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到黃棕色結晶性粉末(3.73克)，總收率71.5％。

黃棕色結晶粉末，M.P.233.8℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.53(1H,s,J＝1.5Hz),8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.10(1H,s,J＝1.5Hz),7.76(1H,s,J＝1.5Hz),7.32-7.22(5H,m,J＝7.5Hz),4.79(2H,s),4.30(2H,q,J＝8.0Hz),1.39(3Ht,J＝8.0Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,163.4,160.9,160.8,155.4,146.5,141.6,140.9,139.4,138.2,137.5,136.3,128.7,127.1,126.9,118.6,113.0,104.8,49.6,42.4,13.9；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:522.0208,found:522.0211.

實施例11

化合物(11)

(Z)-6-chloro-3-((Z)-(1-ethyl-5-methyl-2-oxo-1H-pyrrolo[2,3-b]pyridin-3(2H)-ylidene)hydrazono)-1-methyl-1H-pyrrolo[3,2-b]pyridin-2(3H)-one的製備。

將適量1.96g(10mmol)1-甲基-5-氯-7-N雜靛紅用50mL乙醇溶解，置於錐形瓶中，磁力攪拌下緩慢滴加到50mL含有0.75g(15mmol)水合肼的乙醇溶液中，加熱到80℃，反應6小時。薄層層析方法跟蹤反應至完全，將反應體系的混合液趁熱抽濾，用乙醇洗滌，濾液靜置析晶得到中間體。所得中間體與1.90g(10mmol)1-乙基-5-甲基-7-N雜靛紅置於反應器中，加入50mL乙醇，繼續加熱、攪拌，80℃下回流反應4小時。TCL跟蹤至反應完全，停止加熱，撤去冷凝裝置。將反應體系的固液混合物減壓濃縮，冷卻至室溫後過濾，濾餅用溫水洗滌，得到不對稱1-甲基-5-氯-1』-乙基-5』-甲基-雙7-N雜靛紅席夫鹼(11)粗品。將該粗品加入到反應器中，加入25mL乙醇進行重結晶，過濾，乾燥得到黃色結晶性粉末(2.67克)，總收率69.8％。

黃色結晶粉末，M.P.189.2℃。1H-NMR(300MHz,DMSO-d6)δ(ppm):8.42(1H,s,J＝1.5Hz),8.12,8.11(2H,s,J＝1.5Hz),7.76(1H,s,J＝1.5Hz),4.30(2H,q,J＝8.0Hz),3.42(3H,s,J＝7.5Hz),2.33(3H,s,J＝7.5Hz),1.40(3H,t,J＝8.0Hz)；13C-NMR(75MHz,DMSO-d6)δ(ppm):163.7,162.5,160.9,159.5,155.3,146.5,140.9,139.4,138.2,137.5,136.6,119.3,118.6,111.0,48.9,30.3,18.2,13.9；HRMS(ESI)for(M+Na)+:calcd:382.0943,found:382.0947.

實施例12

本發明化合物的抗腫瘤活性測試

對本發明的化合物進行了腫瘤細胞增殖抑制試驗，試驗方法採用常規的MTT法。

細胞株選用：人肝癌細胞(HepG2)，人肺癌細胞(A-549)，人胃癌細胞(SGC-7901)。培養液為DMEM+15％NBS+雙抗。

樣品液的配製：用DMSO(Merck)溶解後，加入PBS(-)配成的100μmol/L的溶液或者均勻的混懸液，然後用DMSO的PBS(-)稀釋，最終濃度分別為0.1，1，10，20，40，60，80，100μmol/L。

將上市的抗腫瘤藥物阿糖胞苷(Ara-C)以同樣的條件配成對照品溶液。

細胞培養：貼壁生長腫瘤細胞細胞培養於含10％滅活新生牛血清和青黴素、鏈黴素(各100萬U/L)的1640培養液中，置於37℃，5％CO2，飽和溼度的二氧化碳培養箱中培養。細胞貼壁生長，每2～3天傳代1次，傳代時首先倒出培養液，PBS洗2次，胰酶消化後，加入新鮮的培養液吹打均勻，調整細胞至適當濃度移入新的培養瓶中，添加培養液至適量。取對數生長期細胞用於實驗。

MTT法檢測細胞活性及IC50的測定：

實驗原理：活細胞線粒體中脫氫酶能將黃色的MTT還原成不溶於水的藍紫色產物甲臢(MTT formazan)，並沉積在細胞中，生成的量與活細胞數目成正比，而死細胞沒有這種功能。DMSO能溶解藍紫色結晶物，顏色深淺與所含的量成正比，因此用酶標儀測定的光吸收值可反映細胞存活率。

實驗方法：取對數生長期細胞，消化、計數，以2×104/mL的密度接種於96孔培養板中，每孔100μl。培養24小時後，將待測化合物以0.1，1，10，20，40，60，80，100μmol/L濃度處理細胞。實驗組每個濃度設5個復孔，以含0.4％DMSO的培養液作對照。藥物作用48小時後，去上清，每孔加入100μl MTT(2-(4，5-二甲基-2-噻唑基)-3，5-二苯基-2H-四唑氫溴酸鹽)(1mg/mL)，繼續培養4小時，棄上清，每孔加入100μl DMSO，振蕩混勻，用酶標儀在570nm處測定吸光度值，採用IC50計算軟體求出半數抑制濃度(IC50)。

試驗結果詳見表1，其中，樣品是指相應實施例中製備的不對稱雙7-N雜靛紅席夫鹼類化合物，樣品編號對應製備實施例中所得到的化合物的具體編號。

表1化合物對不同腫瘤細胞的半數抑制濃度IC50(單位：μmol/L)

化合物2在所測試的3種細胞株中均表現出了良好的抗腫瘤活性，化合物10和9次之，在不同的細胞株中也表現出了良好的抗腫瘤活性。以上實驗結果表明，本發明的化合物具有良好的抗腫瘤活性，特別是部分不對稱雙7-N雜靛紅席夫鹼類化合物的活性在特定細胞株中抗腫瘤活性優於或等同於阿糖胞苷，可用於抗腫瘤藥物的研究與開發。