一種穗花杉雙黃酮的製備方法
2023-12-09 01:21:36 2
專利名稱：：一種穗花杉雙黃酮的製備方法
技術領域：
：本發明涉及卷柏中穗花杉雙黃酮(amentoflavone)的製備方法，其含量釆用HPL,C法檢測應在95。/。以上。屬於中藥提取分離、純化領域。
背景技術：
：中國藥典2005年版中規定卷柏為巻柏科植物卷柏Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring或墊狀卷柏Selaginellapulvinata(Hook.etGrev.)Maxim.的千燥全草。全年均可釆收，除去鬚根及泥沙，曬乾。辛，平。歸肝、心經。具有活血通經。用於經閉痛經，癥瘕痞塊，趺撲損傷。巻柏炭化瘀止血。用於吐血，崩漏，便血，脫肛。卷柏中含有多種化學成分，如黃酮類，現已發現卷柏中含有芹菜素(apigenin)、穗花杉雙黃酮(amentoflavone)、扁柏雙黃酉同(hinokiflavone)、異柳杉素(isocryptomerin)及阿曼託黃色(amentoflavone)等苯丙素類、生物鹼類、酚類、有機酸類等化合物。藥理作用顯示具有免疫及抗腫瘤作用、對血液系統的作用、抗病毒、抑菌與抗炎作用、鎮痛鎮靜等作用。本發明提供了一種方便、簡便、快速的製備高純度穗花杉雙黃酮的方法。目前現有技術中未見此穗花杉雙黃酮的提取方法。
發明內容本發明所要解決的技術問題是提供一種從中藥卷柏中提取一種含量在95。/。以上的穗花杉雙黃酮(amentoflavone)的製備方法，目的是通過簡單的工藝過程得到含量較高(含量大於95%)的穗花杉雙黃酮(amentoflavone)。本發明的技術方案是從中藥卷柏中提取一種含量在95%以上的穗花杉雙黃酮(amentoflavone)的製備方法，其具體方法步驟為a)將巻柏禾鬥植物巻柏Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring或墊狀巻柏Selaginellapulvinata(Hook.etGrev.)Maxim.的乾燥全草原料切成寸段；'b)用乙醇、甲醇、水中的一種或乙醇和甲醇中的一種與水按比例(1:10~10:1)混合和Z或與水混合的混合溶劑回流提取，加入相當於藥材重量的2-16倍溶劑，回流提取l-5次，每次0.5至6小時，合併提取液，濾過，得提取液；c)將提取液回收溶劑並濃縮至相對密度為1.05-1.40(60°C)的清膏或稠膏，放置0.5-24小時，濾過，得固體沉澱物。d)固體沉澱物用2-100倍量的石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、乙醇、甲醇中的--種或任意兩種按比例(1:1010:l)混合的混合溶劑溶解。e)將固體沉澱物的有機溶劑或混合有機溶劑加入以矽膠為吸附劑的層析柱上吸附。f)將吸附固體沉澱物的矽膠層析柱用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、4三氯甲烷一種或任意兩種按比例(1:10~10:l)混合的混合溶劑分別與乙醇或甲醇(10:1~1:l)的混合溶劑洗脫，分別以每份1/100~1/20總量洗脫劑的體積量收集洗脫液流份，以三氯甲烷甲醇(10:1-1:1)為展開劑釆用TLC檢查斑點，合併相同的黃色斑點洗脫流份。g)將合併的相同黃色斑點洗脫流份回收溶劑，得黃色固體粉末。h)將黃色固體粉末用2-100倍量的石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、乙醇、甲醇中的一種或幾種按比例(1:10~10:l)混合的混合有機溶劑溶解。i)將黃色固體粉末的有機溶劑或混合有機溶劑加入以S印hadexLH-20為吸附劑的層析柱上吸附。j)將吸附黃色固體粉末的SephadexLH-20層析柱用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷一種或任意兩種按比例(1:1010:1)混合的混合溶劑分別與乙醇或甲醇(10:1~Ll)的混合溶劑洗脫，分別以每份1/100-1/20總量洗脫劑的體積量收集SephadexLH-20層析柱的黃色色帶，直至完全。以三氯甲烷甲醇(10:1)為展開劑採用TLC跟蹤檢查斑點，合併相同的黃色斑點洗脫流份。k)將合併的相同黃色斑點洗脫流份回收溶劑，得黃色固體粉末，即穗花杉雙黃酮(amentoflavone)精製品，其含量採用HPLC法檢測應在95%以上。formulaseeoriginaldocumentpage5黃色粉末，FeCL3反應，鹽酸-鎂粉反應均呈陽性，提示其可能為黃酮類化合物。'HNMR(300MHz,DMSO-A)譜與單一黃酮氫譜圖比較發現56.78(1H,s,H-113),6.82(1H,s,H-I3)為雙黃酮兩個3位質子信號；並且在氫譜低場區有6個羥基質子信號分別為^3.09(1H，s,H-I5),12.%UH,s,H-II5)為兩個黃酮的5-羥基;狐55(2H,brs,4"-0H和H-4〃'-0H);10.82(1H,s,7-OH)，10.28(1H，s,7"-OH)，結合130麗11(75MHz,DMSO-^)譜中給出的30個碳信號，進一步提示該化合物可能為雙黃酮。氫譜中56.45(1H，d,J二2.0Hz,H-8),6.18UH,d,J=2.0Hz,H-6)提示為黃酮A環間位偶合質子，說明某一個黃酮A環為5，7-二羥基取代；氫譜中唯一剩下的一個尖銳單峰信號為廉.39(1H，s)，推測可能為另一個黃酮的6位或8位質子，說明該雙黃酮化合物是由一個黃酮結構單元A環上的6位或8位與另一個黃酮B環的某個質子相連。J7.58(2H，d，/=8.7Hz，H-2〃'，6"')，56.72(2H,d,/=8.7Hz,H畫3"'，5'〃)提示為其中一個黃酮B環對位取代時形成的AA'BB'偶合系統。此時氫譜中還剩下3個氫信號，根據峰型和偶合常數，推測其中一個黃酮B環為ABX偶合系統，同時也進一步說明這兩個黃酮通過其中一個B環的3'或5'位與另一個黃酮的6位或8位質子相連，具體歸屬如下^7.15(1H,d，J=9.3Hz),況.01(1H,d,J=2.0Hz,6.9Hz),J7.99(1H,d,^2.0Hz)(以上構成ABX系統)。通過與單黃酮的13CNMR相比較，其中一個黃酮的C-8移向低場區，化學位移值增大約6ppm,表明確實有其它基團相連，結合氫譜中黃酮B環存在的ABX偶合系統，進一步推斷兩個單黃酮確實以3'-8〃連接。根據以上質子分布情況，故推測該化合物為amentoflavone。結構如Figure.tableseeoriginaldocumentpage65'116.37.15(lH，d,J=9.3Hz)5'"6'131.58.01(lH,d，J=2.0Hz,6'〃6.9Hz)5-OH13.095'〃-OH7陽OH10.827'"-OH4'-OH10.554'"-OH115.96.72(2H，d，_/=8.7)128.37.58(2H,d，./=8.7)12.9610.2810.55本發明的優點是(1)工藝操作簡單、重複性好，產率高，適合於工業化生產。(2)本產品的純度較高，其含量採用HPLC法檢測在95。/。以上。德花杉雙黃酉同(amentoflavone)的應用(1)本發明的穗花杉雙黃酮(amentoflavone)適合於製備臨床上使用的1類新藥製劑。(2)本發明的穗花杉雙黃酮(amentoflavone)也可以與其它化合物或藥,物聯合使用，製備臨床上使用的新藥製劑。(3)本發明的穗花杉雙黃酮(amentoflavone)可以製成各種臨床上使用的藥物劑型。(3)本發明的穗花杉雙黃酮(amentoflavone)也可以做為對照品使用。(4)本發明的穗花杉雙黃酮(amentoflavone)也可以製成各種臨床上使用的保健食品以及功能'性化妝品。具體實施例方式下面結合實施例來更詳細的說明本發明，但本發明並不受這些實施例的限制。實施例1:將乾燥巻柏全草100g，切成寸段，加30%乙醇回流提取三次，每次加入ll倍量，每次2小時，合併提取液，濾過，得提取液。將提取液回收乙醇並濃縮至相對密度為1.30(60°C)的清膏，放置12小時，濾過，得固體沉澱物。將固體沉澱物用40倍量的甲醇溶解後加入以矽膠為吸附劑的層析柱上吸附。矽膠層析柱用,三氯甲烷與甲醇(10:1:、1:l)的混合溶劑梯査斑點(以三氯甲烷、甲醇3:、為展開劑)，合併相同的黃色斑點洗脫流份。將合併的相同黃色斑點洗脫流份回收溶劑，得黃色固體粉末。將黃色固體粉末用30倍量的丙酮溶解後，加入以ScphadexLH-20為吸附劑的層析柱上吸附。將SephadexLH-20層析柱用三氯甲烷與甲醇(3:1)的混合溶劑洗脫，分別以每份1/30總量洗脫劑的體積量收集SephadexLH-20層析柱的黃色色帶，直至完全。採用TLC跟蹤檢査斑點(以三氯甲烷甲醇4:l為展開劑)，合併相同的黃色斑點洗脫流份。將合併的相同黃色斑點洗脫流份回收溶劑，得黃色固體粉末，即穗花杉雙黃酮(amentoflavone)精製品，其含量採用HPLC法檢測為98.1%上。實施例2:將乾燥卷柏全草2kg,切成寸段，加75%乙醇回流提取三次，每次加入10倍量，每次1.5小時，合併提取液，濾過，得提取液。將提取液回收乙醇並濃縮至相對密度為1.10(60°C)的清膏，放置8小時，濾過，得固體沉澱物。將固體沉澱物用30倍量的乙酸乙酯溶解後加入以矽膠為吸附劑的層析柱上吸附。矽膠層析柱用三氯甲烷與甲醇(10:1~1:l)的混合溶劑梯度洗脫，以每份1/30總量洗脫劑的體積量收集洗脫液流份，釆用TLC檢查斑點(以三氯甲烷甲醇2:1為展開劑)，合併相同的黃色斑點洗脫流份。將合併的相同黃色斑點洗脫流份回收溶劑，得黃色固體粉末。將黃色固體粉末用20倍量的丙酮溶解後，加入以SephadexLH-20為吸附劑的層析柱上吸附。將SephadexLH-20層析柱用三氯甲烷與甲醇(4:1)的混合溶劑洗脫，分別以每份1/20總量洗脫劑的體積量收集SephadexLH-20層析柱的黃色色帶，直至完全。採用TLC跟蹤檢查斑點(以三氯甲烷甲醇2:l為展開劑)，合併相同的黃色斑點洗脫流份。將合併的相同黃色斑點洗脫流份回收溶劑，得黃色固體粉末，即穗花杉雙黃酮(amentoflavone)精製品，其含量釆用HPLC法檢測為96.6%。實施例3:將乾燥卷柏全草30kg,切成寸段，加50%乙醇回流提取三次，每次加入9倍量，每次1.5小時，合併提取液，濾過，得提取液。將提取液回收乙醇並濃縮至相對密度為1.25(60°C)的清膏，放置6小時，離心，得固體沉澱物。將固體沉澱物用20倍量的丙酮溶解後加入以矽膠為吸附劑的層析柱上吸附；,膠層析JJ]三氯甲烷與甲y(10:1、；k、、)的j昆合溶劑檢査斑點(以三氯甲烷;醇3:l為展^劑)，合併相同的^色斑點洗脫流份。將合併的相同黃色斑點洗脫流份回收溶劑，得黃色固體粉末。將黃色固體粉末用IO倍量的丙酮溶解後，加入以SephadexLH-20為吸附劑的層析柱上吸附。將SephadexLH-20層析柱用三氯甲烷與甲醇(3:1)的混合溶劑洗脫，分別以每份1/30總量洗脫劑的體積量收集SephadexLH-20層析柱的黃色色帶，直至完全。採用TLC跟蹤檢查斑點(以三氯甲烷甲醇3:l為展開劑)，合併相同的黃色斑點洗脫流份。將合併的相同黃色斑點洗脫流份回收溶劑，得黃色固體粉末，即穗花杉雙黃酮(amentoflavone)精製品，其含量釆用HPLC法檢測為95.3%。權利要求1、一種穗花杉雙黃酮，具有如下式(I)的結構其特徵在於其含量在95％以上。2、根據權利要求1所述的穗花杉雙黃酮，其特徵在於所述穗花杉雙黃酮的英文名為amentoflavone;分子式為C3oH1801;分子量為538.47。3、一種如權利要求1所述的穗花杉雙黃酮的製備方法，其特徵在於該方法採用中藥卷柏為原料，用有機溶劑和/或水進行提取或釆用柱層析進行分離4、J艮據權利要求3所述的穗花杉雙黃酮的製備方法，其特徵在於所述的中藥卷柏為巻柏禾年植物卷柏Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring或墊狀巻柏Selaginellapulvinata(Hook.etGrev.)Maxim.的乾燥全草原料。5、根據權利要求3所述的穗花杉雙黃酮的製備方法，其特徵在於所述的提取方法中，所述溶劑包括乙醇、甲醇、水中的一種，乙醇、甲醇中的一種與水按比例1:10~10:l混合的混合溶劑。6、根據權利要求3所述的穗花杉雙黃酮的製備方法，其特徵在於所述的柱層析分離方法中，所用柱層析吸附劑為矽膠、SephadexLH-20。7、根據權利要求3所述的穗花杉雙黃酮的製備方法，其特徵在於所述的柱層析分離方法中，所用柱層析洗脫劑為石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、乙醇、甲醇中的一種或任意兩種按比例10:1~1:IO混合的混合有機溶劑。8、根據權利要求3所述的穗花杉雙黃酮的製備方法，其特徵在於所述具Selaginellapulvinata(Hook.etGrev.)Maxim.的乾燥全草原料切b)用乙醇、甲醇、水中的一種或乙醇和甲醇中的一種與水按比例1:10~c)將提取液回收溶劑並濃縮至60。C下相對密度為1.05-1.40的清膏或d)固體沉澱物用2-100倍量(重量/體積比)的石油醚、乙醚、乙酸乙酉旨、丙酮、三氯甲烷、乙醇、甲醇中的一種或任意兩種按比例1:10~10:1混合的混合溶劑溶解；e)將固體沉澱物的有機溶劑或混合有機溶劑加入以矽膠為吸附劑的層析柱上吸附；f)將吸附固體沉澱物的矽膠層析柱用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷一種或任意兩種按比例1:10~10:l混合的混合溶劑分別與乙醇或甲醇10:1~1:1的混合溶劑洗脫，分別以每份1/100~1/20總量洗脫劑的體積量收集洗脫液流份，以三氯甲烷甲醇10:1為展開劑釆用TLC檢查斑點，合併相同的黃色斑點洗脫流份；g)將合併的相同黃色斑點洗脫流份回收溶劑，得黃色固體粉末；h)將黃色固體粉末用2-100倍量的石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、乙醇、甲醇中的一種或任意兩種按比例1:10~10:l混合的混合有機溶劑溶解；i)將黃色固體粉末的有機溶劑或混合有機溶劑加入以SephadexLH-20j)將吸附黃色固體粉末的S印hadexLH-20層析柱用石油醚、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷一種或任意兩種按比例1:10~10:1混合的混合溶劑分別與乙醇或甲醇10:1~1:1的混合溶劑洗脫，分別以每份1/100~1/20總量洗脫劑的體積量收集SephadexLH-20層析柱的黃色色帶，直至完全；以三氯甲垸甲醇10:1~]:1為展開劑釆用TLC跟蹤檢查斑點，合併相同的黃色斑點洗脫流份；k)將合併的相同黃色斑點洗脫流份回收溶劑，得黃色固體粉末，即穗花杉雙黃酮精製品，其含量釆用HPLC法檢測應在95%以上。9、根據權利要求1所述的穗花杉雙黃酮，其特徵在於所述的穗花杉雙黃酮可以和藥學上可接受的載體或賦形劑結合製備成臨床上可接受的各種製劑。10、根據權利要求8所述的穗花杉雙黃酮，其特徵在於所述的製劑包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、注射劑、滴丸。全文摘要本發明屬於醫藥
技術領域：
，提供了一種從中藥卷柏中製備含量在95％以上的穗花杉雙黃酮(amentoflavone)的製備方法。該化合物具有如下式(I)的結構。本發明中所述的穗花杉雙黃酮(amentoflavone)是採用卷柏科植物卷柏Selaginellatamariscina(Beauv.)Spring或墊狀卷柏Selaginellapulvinata(Hook.etGrev.)Maxim.的乾燥全草原料為起始原料，用有機溶劑和/或水進行提取並且採用柱層析分離法進行分離得到的。本發明具有工藝操作簡單、重複性好，產率高，適合於工業化生產的優點，且本產品的純度較高，其含量採用HPLC法檢測在95％以上。文檔編號C07D311/30GK101585825SQ20091001209公開日2009年11月25日申請日期2009年6月17日優先權日2009年6月17日發明者張國剛,宏田申請人:瀋陽藥科大學