添加火麻仁培養蟲草菌絲體的方法

2023-12-08 18:10:01 1

專利名稱：添加火麻仁培養蟲草菌絲體的方法
技術領域：
本發明屬微生物技術領域，涉及一種添加火麻仁培養蟲草菌絲體的方法。
背景技術：
蟲草是由蟲草真菌寄生在昆蟲體內之後形成的複合體。目前，已知多種蟲草有重要的藥用價值。《本草綱目》中記載了冬蟲夏草、蟬花和蛹蟲草的藥用功效。隨著國內外學者對蟲草研究的不斷深入，表明蟲草屬真菌的代謝產物主要含有核苷類、胺基酸、多肽、多糖、 糖醇、留醇、脂肪酸、酯、烷烴、多胺類、維生素及微量元素等成分。藥理實驗表明，蟲草屬真菌的代謝產物具有免疫調節、治療腎衰、抗腫瘤、抗炎症、調節內分泌、抗心律失常、降血糖、 鎮靜、鎮痛、延長睡眠時間、延緩衰老、耐缺氧等方面的作用。火麻仁又名大麻仁、麻子仁,為桑科Moraceae植物大麻Cannabis sativa L.成熟果實。全國各地均有栽培。秋季果實成熟時採收，除去雜質，曬乾即可。富含飽和脂肪酸、 油酸、亞油酸、亞麻酸、蛋白質、纖維、維生素BI、維生素B2、留醇、膽鹼和葡萄糖醛酸等。《神龍本草經》中雲其「味甘、平，主補中益氣，肥健不老」。有潤燥滑腸通便的功效，常用於治療老年人虛性便秘，並有降脂及抗動脈粥樣硬化作用。利用微生物發酵轉化中草藥的活性成分，可使培養物兼有微生物和中藥的功效成分，提高治療和保健功效，該領域具有廣闊的開發前景。林金鶯等用米麴黴對火麻仁柏進行液體發酵，分解火麻仁蛋白質為多肽(林金鶯，曾慶孝，董曄，中國調味品，2009，3 (34) 39-42)，為火麻仁柏的綜合利用開闢了新的思路。本發明利用火麻仁粗粉中豐富的營養成分為培養基，培養蟲草菌絲體，生產具有獨特功效成分的蟲草培養物。

發明內容
本發明提供了一種添加火麻仁培養蟲草菌絲體的方法。該方法的操作步驟如下(I)生產菌株為中國被毛抱 Hirsutella sinensis Liu, Guo, Yu & Zeng 菌株 CSIN-32,保藏號 YBCCS NO. 411 ;蛹草擬青黴 Paecilomyces militaris Liang 菌株 PMIL-02,保藏號 YBCPM NO. 452 ;蝙幅蛾擬青黴 Paecilomyces hepiali Chen & Dai 菌株 PHEP-01，保藏號YBCPHN0. 551 ;於2008年6月16日保存於雲南雲百草實驗室；(2)菌種製備將步驟⑴所述菌株CSIN-32，PMIL-02和PHEP-01分別接種到PDA 斜面培養基，於10-30°C恆溫培養5-30d，用無菌水洗下孢子，稀釋調整使孢子終濃度達到 5X107個/毫升；(3)發酵培養基的製備30-50%火麻仁粗粉，35%麩皮，5-10%谷糠，5-15%玉米粉，水料比為I. 2 1，按20%的裝量裝入IOOOml三角瓶中，121°C滅菌60min ;(4)發酵培養將步驟(2)中製備好的菌種分別按2ml/瓶的量接入步驟(3)三角瓶培養基中，於10-30°C，靜置培養，直到菌絲長滿即成發酵物；(5)發酵物後處理將步驟(4)中培養好的發酵物取出，50°C恆溫乾燥至恆重，然後粉碎至80目粉末，採用HPLC法測定蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素的含量。本發明的關鍵點在於發酵培養基中主要原料為火麻仁粗粉，結合蟲草菌株的生長特性，調整培養基各原料的比例等培養條件。以上關鍵點如能把握好，可以顯著高產蟲草發酵培養物的功效成分。本發明操作簡便，效果良好，可應用到大規模蟲草發酵生產蟲草菌絲體的實際生產過程中。
具體實施例方式以下實施例用於說明本發明，但不是對本發明的限制。實施例I :添加火麻仁粗粉培養中國被毛孢菌產功效成分的效果(I)菌種製備將中國被毛孢菌株CSIN-32接種到PDA斜面培養基，於15°C恆溫培養25d，用無菌水洗下孢子，稀釋調整使孢子終濃度達到5 X IO7個/毫升；(2)發酵培養基的製備40%火麻仁粗粉，35%麩皮，10%谷糠，15%玉米粉，水料比為I. 2 1，按20%的裝量裝入IOOOml三角瓶中，121°C滅菌60min ;(3)發酵培養將製備好的菌種分別按2ml/瓶的量接入三角瓶培養基中，於15°C， 靜置培養60天，直到菌絲長滿即成發酵物；(4)發酵物後處理將培養好的發酵物取出，50°C恆溫乾燥至恆重，然後粉碎至80 目粉末，採用HPLC法測定蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素的含量，其結果見表I。表I添加火麻仁粗粉培養中國被毛孢菌產功效成分的效果
1# 蟲草爹—(ug/；g) ...(^/g> ~蟲草甘露醇含量(ug/g) 中國被毛孢_6 X IO4_80__700__5 X IO4_實施例2 :添加火麻仁粗粉培養蛹草擬青黴菌產功效成分的效果(I)菌種製備將蛹草擬青黴菌株PMIL-02接種到PDA斜面培養基，於25°C恆溫培養10d，用無菌水洗下孢子，稀釋調整使孢子終濃度達到5 X IO7個/毫升；(2)發酵培養基的製備50%火麻仁粗粉，35%麩皮，5%谷糠，10%玉米粉，水料比為I. 2 1，按20%的裝量裝入IOOOml三角瓶中，121°C滅菌60min ;(3)發酵培養將製備好的菌種分別按2ml/瓶的量接入三角瓶培養基中，於25°C， 靜置培養30天，直到菌絲長滿即成發酵物；(4)發酵物後處理將培養好的發酵物取出，50°C恆溫乾燥至恆重，然後粉碎至80 目粉末，採用HPLC法測定蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素的含量，其結果見表2。表2添加火麻仁粗粉培養蛹草擬青黴菌產功效成分的效果
蟲草多糖含量(ug/g)~~ 量(ug/g) (ug/g)蟲草甘露醇含(ug/g)" 蛹草擬青黴 』3 X IO4_5 X IO3400_3 X IO4_實施例3 :添加火麻仁粗粉培養蝙蝠蛾擬青黴菌產功效成分的效果(I)菌種製備將蝙蝠蛾擬青黴菌株PHEP-Ol接種到PDA斜面培養基，於24°C恆溫培養7d，用無菌水洗下孢子，稀釋調整使孢子終濃度達到5 X IO7個/毫升；(2)發酵培養基的製備45%火麻仁粗粉，35%麩皮，5%谷糠，15%玉米粉，水料比為I. 2 1，按20%的裝量裝入IOOOml三角瓶中，121°C滅菌60min ;(3)發酵培養將製備好的菌種分別按2ml/瓶的量接入三角瓶培養基中，於25°C， 靜置培養30天，直到菌絲長滿即成發酵物；(4)發酵物後處理將培養好的發酵物取出，50°C恆溫乾燥至恆重，然後粉碎至80 目粉末，採用HPLC法測定蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素的含量，其結果見表3。表3添加火麻仁粗粉培養蝙蝠蛾擬青黴菌產功效成分的效果
權利要求
1.一種添加火麻仁培養蟲草菌絲體的方法，其特徵在於該方法的操作步驟包括(1)菌種製備將菌株CSIN-32，PMIL-02和PHEP-Ol分別接種到PDA斜面培養基，於 10-30°C恆溫培養5-30d，用無菌水洗下孢子，稀釋調整使孢子終濃度達到5 X IO7個/毫升；(2)發酵培養基的製備30-50%火麻仁粗粉，35%麩皮，5-10%谷糠，5-15%玉米粉， 水料比為I. 2 1，按20%的裝量裝入IOOOml三角瓶中，121°C滅菌60min;(3)發酵培養將製備好的蟲草菌種分別按2ml/瓶的量接入三角瓶培養基中，於 10-30°C，靜置培養，直到菌絲長滿即成發酵物；(5)發酵物後處理將培養好的發酵物取出，50°C恆溫乾燥至恆重，然後粉碎至80目粉末，採用HPLC法測定蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素的含量。
全文摘要
本發明涉及一種添加火麻仁培養蟲草菌絲體的方法。其操作步驟主要包括(1)蟲草菌種的製備；(2)蟲草菌發酵培養基的製備；(3)蟲草菌發酵培養；(4)蟲草菌發酵培養物後處理。使用本發明所提出的添加火麻仁培養蟲草菌絲體的方法，促進蟲草菌高產蟲草多糖、蟲草腺苷、蟲草甘露醇和蟲草素。本發明操作簡便，效果良好，可進行大規模推廣應用。
文檔編號A01G1/04GK102599004SQ20111002263
公開日2012年7月25日 申請日期2011年1月20日 優先權日2011年1月20日
發明者曾文波, 楊鍾林, 虞泓, 陳自宏 申請人:雲南雲百草實驗室有限公司