新的聚胺螢光衍生物、其製備方法及其在癌腫瘤治療方面作為診斷工具的應用的製作方法

2023-11-10 16:59:02 2

專利名稱：：新的聚胺螢光衍生物、其製備方法及其在癌腫瘤治療方面作為診斷工具的應用的製作方法新的聚胺螢光衍生物、其製備方法及其在癌腫瘤治療方面作為診斷工具的應用生物分子的標記和生物現象的追蹤需要螢光探針的設計，所述螢光探針對生物介質的結構性和功能性研究已經成為不可缺少的工具。螢光探針為由螢光團或螢光染料基團組成的共軛分子，該螢光團或螢光染料基團是共價地被鍵合至與適當的生物環境具有特定的相互作用的基團。此螢光探針具有吸收在清晰的波長所接收到的光能量的性質，由此形成激發相位，然後恢復被稱為發射相位的螢光形式的能量。因此，在激發之後，一旦光子的能量已經被吸收，分子處在電子激態且通過發射光子而回到基礎的能量狀態。該螢光現象的光子發射在比激發波長稍微較大的波長發生。然後，對分子特定的螢光光譜可被記錄。然後，使用螢光顯微鏡或通過在合適的波長激發該製劑的流式細胞儀在生物介質中定位螢光探針為可能的。具有廣泛的螢光染料(例如，螢光素或若丹明的衍生物)的選擇。並不是所有的螢光染料都適合於生物追蹤。基本的特徵為用於研究可行性的激發和發射波長的值、適合於用於研究的探針濃度的消光係數、量子產率，其允許顯著的信號具無能量損失以被獲得且隨時間為穩定，即，在激態中具有相當長的半衰期。此外，理想的是選擇螢光團在其環境內在測量的期間以在化學反應中可能的最小方式參與，否則此將導致其螢光性質的損失，即，信號損失。具有苯並氧雜噁二唑骨架，也稱苯並呋喃，的衍生物具有需要的螢光性質。用於激發與發射波長的值，和在強度與穩定性中現象的品質與化合物及其取代基的結構有關。這些衍生物為已知，關於它們的取代基以及製備的螢光研究已被描述(J.Chem.Soc.PerkinTrans2,1998,2165,J.Chem.Soc,PerkinTrans2，1999，569)0用於生物性用途的苯並氧雜噁二唑螢光的衍生物已經被研究(Anal.Chim.Acta,2005,550,173,Bioorg.Med.Chem.Lett.2003,13，1717,Luminscence,2002,17，J.Med.Chem.1999，42，3101)。癌症仍為在西方社會中死亡的主因之一。克服癌症的方式，即，預防、手術、放射線治療、免疫治療和化學治療，在許多的情況下仍不能將該疾病根除。對於此失敗的原因部分地在於難以辨識腫瘤細胞且難以選擇性地將其治療而不對健康的組織造成太大的的損傷。苯並氧雜噁二唑_聚胺共軛混合分子可對此問題產生答案。為了增殖，癌細胞需要許多的基本的生物元素，所述元素包括聚胺(精胺、亞精胺、腐胺)。聚胺對任何在增殖中的細胞為不可缺少的。在正常情況下，聚胺的內源性合成足以滿足細胞，但是以癌症細胞，外源性聚胺成份通常必須藉助於活性傳遞。該活性傳遞的檢測允許癌症細胞的檢測和根據生長與分解作用的進展的追蹤。然而，目前，在人類細胞中聚胺的轉運蛋白在分子級尚未被辨識。因此，唯一用以證實其存在的方法為使用通過該轉運蛋白所識別的探針，其通過在細胞內堆積而在轉運蛋白的活性上產生信息。聚胺轉運蛋白為蛋白質複合物，其詳細的結構為未知。該轉運蛋白在天然聚胺，即，腐胺、亞精胺和精胺，的細胞內的輸入中扮演重要的角色。這些聚胺對細胞生長和發育來說是必需的。通常，細胞內代謝作用提供健康細胞的需要。該代謝作用從細胞的胺基酸形成這些聚胺。精氨酸轉變成鳥氨酸，鳥氨酸經歷脫羧反應以形成腐胺。該腐胺(C4)可通過C3鏈藉助於腺苷甲硫氨酸而被加長，再加上脫羧反應，以形成亞精胺。後者可再度通過C3鏈也藉助於另外的甲硫氨酸殘基而被加長以形成精胺。這些聚胺也可通過與聚胺氧化酶的氧化而被分解且由此轉變回到亞精胺和腐胺。如果細胞內機制被幹擾(例如，癌細胞)，細胞內代謝作用不能再滿足細胞的需要且因此其將從細胞外取得聚胺。此為聚胺轉運蛋白被涉及的所在。其相當於餵養以及調節劑。例如，在於專利申請WO2005/100363的實施例27中的化合物的情況下被移植在精胺上的「表鬼白毒素」結構上的部分並非看來改善聚胺轉運蛋白的辨別，使化合物能夠被內部化在腫瘤細胞中，其將接著扮演作為細胞毒劑的部分。類似地，具有聚胺部分的螢光探針將由聚胺轉運蛋白而被識別。在癌症學中所研究的細胞株組中，在聚胺轉運蛋白的表現中具有變化性。使用診斷探針預先(在抗腫瘤治療之前)決定何種細胞對治療將為敏感的以及那些將為不敏感的是可能的。細胞內螢光越強，研究中的細胞對使用目標的抗癌劑(例如，在專利申請WO2005/100363的實施例27中的化合物)的治療將越敏感。因此本發明涉及由聚胺部分組成的化合物，該聚胺部分是被鍵合到帶有可被用作所述探針的螢光的經取代的苯並氧雜噁二唑部分。在這些分子的聚胺部分將有效地為聚胺傳遞系統所識別且分子將被內部化在癌症細胞內的同時，帶有螢光的部分將由常規分析系統所檢測出，由此允許以選擇表現聚胺傳遞系統的腫瘤。因此，該聚胺傳遞系統在細胞上的檢測允許選擇帶有腫瘤的患者，該患者能夠為抗腫瘤化合物所治療，該抗腫瘤化合物時通過與其作用機制無關的聚胺傳遞系統而被引導。因此，從住院患者通過活體檢視所取的腫瘤中或通過穿刺所取的白血病細胞中，檢測與聚胺轉運蛋白的表現成正比的螢光將為可能的。然後，選擇帶有這些腫瘤的患者，以便他們可優選地以朝著聚胺傳遞系統而被引導的抗癌化合物而被治療，而確保更好的治療反應機會。美國專利第6，172，261號和Anal.Chim.Acta,1983，149，305描述被鍵合到螢光團基團的聚胺。更特別地，B.R.Ware在Langmuir(1988，4，458)中描述了具有苯並氧雜噁二唑基團的精胺衍生物，其化學式如下所示，且在研究中在其與寡核苷酸的相互作用上作為螢光聚胺衍生物的用途。formulaseeoriginaldocumentpage6類似地，Ohba在Tetrahedron(2007，63，37-54)中描述了具有苯並氧雜噁二唑基團的腐胺衍生物，其化學式如下所示formulaseeoriginaldocumentpage6然而，在這些刊物中沒有一個提到聚胺-苯並氧雜噁二唑的衍生物用途以證明表現聚胺傳遞系統的腫瘤細胞。本發明涉及新的由聚胺部分組成的螢光衍生物，帶有螢光部分是被鍵合在該聚胺部分上，即，經取代的苯並氧雜噁二唑、其製備方法及其在檢測在細胞內聚胺傳遞系統的用途。本發明還涉及其在選擇表現聚胺傳遞系統的腫瘤上的用途和在選擇帶有所述腫瘤的患者上的用途。這些衍生物對應於下列的化學式1formulaseeoriginaldocumentpage6或其藥學上可接受的鹽類，其中R1代表在位置4禾Π/或6的一或兩個NO2基團、或S02Ph、S02^e2、SO2NH2,SO3H基團；聚胺鏈可在位置5、6或7；R2為氫、C^6烷基、苄基、全氟烷基基團；a、b、c的值與彼此無關可為2至5，且代表分開所述氨基基團的亞烷基鏈；d和e的值可獨立地為O或1，但不能同時代表O的值；如果當e=O之時，那麼R2不能為氫；和除了R1=4_N02、R2=H、a=3、b=4、c=3*d=e=l的化合物以外。本發明的化合物可取無機或有機加成鹽形態。在本發明中，術語「藥學上可接受的」是指其可用來製備藥學組合物，該藥學組合物通常為安全、無毒且沒有生物學上或其他不良性且適用於獸醫用途以及於人類藥學用途。在本發明中，化合物的「藥學上可接受的鹽類」是指為鹽類，所述的鹽類為如本文所定義的藥學上可接受的且具有母化合物所需藥學活性。術語「加成鹽」，在本發明的含義中，特別是指為無機的或有機酸的加成鹽。可被提及和下列所形成的酸加成鹽類作為實施例無機酸(例如，氫氯酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸以及類似物)；或有機酸(例如，乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙烷_磺酸、反式丁烯二酸、葡庚糖酸、葡糖酸、穀氨酸、乙醇酸、羥基萘甲酸、2-羥乙基磺酸、乳酸、順式丁烯二酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘康酸、2-萘磺酸、丙酸、水楊酸、丁二酸、二苯甲醯-L-酒石酸、酒石酸、對甲苯磺酸、三甲基乙酸、三氟乙酸以及類似物)。術語「4-N02」，在本發明中是指為在位置4的NO2(硝基)基團。術語「烷基」，在本發明中是指為包含1至6個碳原子的飽和、直或分枝烴鏈。尤其是，其可為甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基、異丁基、戊基或己基基團。術語「全氟烴基」，在本發明中是指如上所定義的烷基基團，其中所有氫原子已經用氟來代替。有益地，R1代表在位置4和/或6的一或兩個NO2基團且更特別地為在位置4的NO2基團。更特別地，本發明涉及化合物，其中-R1=4-N02、R2=C1-J5烷基、a=3、b=4、c=3、d=e=1，-R1=4-N02、R2=H或C1^6烷基、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1，-R1=4-N02、R2=H或CV6烷基、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1，或-R1=4-N02、R2=C1-J5烷基、a=4、b=0、c=0、d=1、e=0。更加特別地，本發明涉及下列化合物4-(3-氨丙基)4』-{3_[甲基-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑_4_基)-氨基]-丙基}_丁烷-1，4-二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=甲基、a=3、b=4、c=3、d=e=1,·N-(3-氨丙基)-N』-甲基-N』-(7-硝基苯並[1,2,5]噁二唑_4_基)-丁烷_1，4-二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=甲基、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1，·Ν_(3-氨丙基)-N』-(7-硝基苯並[1,2,5]噁二唑_4_基)-丁烷-1，4_二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=H、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1，·Ν*1*-{3_[甲基-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑_4_基)-氨基]-丙基}-丁烷-1，4-二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=甲基、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1，·N*l*-[3_(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑_4_基-氨基)-丙基]-丁烷_1，4_二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=H、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1，和·N*l*_甲基-N*l*_(7-硝基苯並[1,2,5]噁二唑_4_基)-丁烷-1，4_二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=甲基、a=4、b=0、c=0、d=l、e=0。本發明還涉及一種合成化學式1的化合物的方法，其特徵在於，該方法包含下列步驟a)、b)和c)a)將化學式2的苯並氧雜噁二唑的衍生物與化學式6的聚胺偶合，formulaseeoriginaldocumentpage8化學式2其中，R1代表在位置4禾Π/或6的一或兩個NO2基團、或S02Ph、S02^e2、SO2NH2,SO3H基團；且有益地，為在位置4的NO2基團；R3為滷素取代基，在基團R1的鄰位或對位移動，該化學式6的聚胺在位置5、6或7，即，在基團R1的鄰位或對位，其中，P為胺官能團的保護基且，其中，a、b、c、d和e具有如前所述的相同含義。formulaseeoriginaldocumentpage8化學式6保護基P可為在酸性介質(HCl或三氟乙酸(TFA))中可切除的BOC基團(叔丁氧羰基)，如果R1基團=N02。如果苯並氧雜噁二唑具有磺醯基或磺醯氨基基團，那麼P可為可通過氫解切除的苄氧羰基類型的保護基。在此偶合反應的期間，聚胺與苯並氧雜噁二唑通過在惰性溶劑中經鹼處理的滷素的取代起反應。更特別地，化學式2的化合物為4-硝基-7-氯代苯並氧雜噁二唑。更加特別地，惰性溶劑為乙腈且鹼為碳酸銫。不同的苯並氧雜噁二唑被描述於下列刊物中J.Chem.Soc.PerkinTrans2，1998，2165，J.Chem.Soc，PerkinTrans2，1999，569。聚胺衍生物(由3苄氧羰基或叔丁氧羰基基團所保護的精胺衍生物)的實施例被描述於下列刊物中(Tet.Let.1998，39，439)。b)由偶合反應a)而來的化合物是由烷基滷化物在惰性溶劑中在鹼存在下被烷基化。優選地，THF(四氫呋喃)作為溶劑而被使用。優選地，氫化鈉或鹼金屬碳酸鹽作為鹼而被使用。還優選地，THF作為溶劑而被使用。c)然後，由步驟b)而來的化合物在酸性介質中在室溫被去保護以獲得化學式1的化合物。優選地，此去保護步驟是在氫氯酸中或在三氟乙酸中被進行。本發明還涉及下列化學式1的化合物或其藥學上可接受的鹽類作為螢光診斷探針以檢測表現聚胺傳遞系統的腫瘤的用途formulaseeoriginaldocumentpage9其中R1代表在位置4和/或6的一或兩個NO2基團、或S02Ph、SO2^e2、SO2NH2或SO3H基團；聚胺鏈可在位置5、6或7；R2為氫、Cp6烷基、苄基、全氟烷基基團；a、b、c的值與彼此無關可為2至5，且代表分開所述氨基基團的亞烷基鏈；d和e的值可獨立地為0或1，但不能同時代表0的值。本發明的化合物可取無機或有機加成鹽形態。有益地，當e=0之時，&不為氫。有益地，R1代表在位置4和/或6的一或兩個NO2基團，且更特別地為在位置4的NO2基團。更特別地，可被用作螢光診斷探針的化學式1的化合物涉及下列化合物，其中-R1=4-N02、R2=C1-J5烷基、a=3、b=4、c=3、d=e=l，-R1=4-N02、R2=H或C1^6烷基、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1，-R1=4_N02、R2=H或CV6烷基、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1，或-R1=4-N02、R2=C1-J5烷基、a=4、b=0、c=0、d=1、e=0。更加特別地，化學式1的化合物涉及下列化合物4-(3-氨丙基)4』-{3_[甲基-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑_4_基)-氨基]-丙基}_丁烷-1，4-二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=甲基、a=3、b=4、c=3、d=e=1,·N-(3-氨丙基)-N』-甲基-N』-(7-硝基苯並[1,2,5]噁二唑_4_基)-丁烷_1，4-二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=甲基、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1，·Ν_(3-氨丙基)-N』-(7-硝基苯並[1,2,5]噁二唑_4_基)-丁烷-1，4_二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=H、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1，·Ν*1*-{3_[甲基-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑_4_基)-氨基]-丙基}-丁烷-1，4-二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=甲基、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1，·N*l*-[3_(7-硝基苯並[1,2,5]噁二唑_4_基-氨基)-丙基]-丁烷_1，4_二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=H、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1，和·N*l*_甲基-N*l*_(7-硝基苯並[1,2,5]噁二唑_4_基)-丁烷-1，4_二胺，相對應於化學式1的化合物，其中R1=4-N02、R2=甲基、a=4、b=0、c=0、d=l、e=0。下列實施例描述以製備本發明化合物的不同步驟且沒有限制。實施例1:N-(3-氨丙基)-N』-{3-[甲基-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑_4_基)-氨基]-丙基}_丁烷-1，4-二胺的合成。formulaseeoriginaldocumentpage10依據下面所給定的方案進行化學式1化合物的合成formulaseeoriginaldocumentpage10方案1階段1化學式3的三BOC精胺的製備(Bioorg.Med.Chem.2002，10，2397)。formulaseeoriginaldocumentpage10化學式3將40g精胺置於在300mLCH2Cl2的溶液中且冷卻至0°C。滴加入在50mLCH2Cl2的溶液中的23.SmL的三氟乙酸乙酯。將溶液在室溫置於攪拌下歷經1小時。將所獲得的殘留物溶解在600mLTHF中且加入140.28g三乙胺。接下來，在200mLTHF中，加入174.48gBOC2O的溶液，將溫度維持在20°C。在室溫攪拌持續三個小時，且然後將反應介質倒入水中且用異丙醚萃取。在傾析後，用硫酸鈉乾燥、過濾和蒸發，蒸去有機溶液。然後，將所獲得的殘留物溶解在900mL的Me0H/H208/2混合物中。加入192.6g碳酸銫且將整個反應體置於回流下歷經三個小時。在甲醇的真空蒸發之後，加入水且用異丙醚進行萃取。有機相被傾析且將0.5N氫氯酸加到此有機相中。沉澱反應體系。形成三種相。油形態的中間相含有氫氯化物形態的預期產物。將該相傾析、溶解入CH2Cl2且用硫酸鈉乾燥。在過濾和蒸發後，獲得54g三BOC精胺氫氯化物，為無色油形式，該無色油直接用於下列步驟中(產率=50%)οTLCSiO2=CH2Cl2-MeOH-NH4OH(90-10-10)Rf=0.5。階段2:以螢光團的縮合反應。將在階段1所獲得的5.39g油在攪拌下置於在IOOmL乙腈、6.42g碳酸銫和2g4-氯-7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑的溶液中。將混合物回流歷經一個小時。將反應介質固定在二氧化矽上且蒸去溶劑。將固態殘留物置於快速層析柱的頂部且用從純庚烷至庚烷-AcOEt混合物(50-50)的梯度衝洗。此產生4.4g(66%)紅油。TLC=SiO2庚烷-AcOEt(50-50)Rf=0.3。APCI-MSm/z=666.3(ΜΗ+)；1H匪R(CDCl3)8.47(d,1H,J=8Hz,H5)、7·96(m,1H,NH)、6·17(d,1H,J=8Hz,H6)、3·53(m,2H,NHCH2)、3·38(m,2Η,CH2NH)、3.10-3.21(m,8Η,NCH2)、1.92(m,2Η,CH2)、1.66(m,2Η,CH2)、1.43-1.51(m,31Η,CH2,t_Bu)。Mj氓烷化反應。化學式5的(3_{叔丁氧羰基-[4_(叔丁氧羰基-{3-[甲基-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基)-氨基]-丙基}-氨基)-丁基]-氨基}-丙基)「氨基甲酸的叔丁酯的製備。將上述的階段所獲得的化合物(4.4g)溶解在有4g碳酸銫和2.05mL甲基碘存在下的150mL乙腈中。在常溫攪拌反應介質歷經四個小時。通過溶劑的蒸發將介質固定在二氧化矽上，然後，在直徑50mm的快速柱上進行層析。用從純庚烷至庚烷-AcOEt混合物(50-50)的梯度衝洗，獲得4.2g的紅油(產率=93%)0TLC庚烷-AcOEt(30-70)Rf=0.4。ESI-MSm/z=680.4(ΜΗ+)；1HNMR(DMSO)8.48(d,1H,J=8Hz,H5)、6.40(d,1H,J=8Hz,H6),3.47(m，2H，NHCH2)、3·33(s，3H，NCH2),3.24(m，2H，CH2HN)、3·15(m，2H，NCH2)、3.08(m,4H,NCH2)、2.88(m，2H，NCH2)U.91(m，2H，CH2)U.54(m,2H,CH2)U.36(m，31H，CH2,t_Bu)。階段4將4.2g來自上述階段的化合物溶解在在20mL的在二噁烷中的4MHCl溶液中且在常溫置於攪拌下歷經三個小時。然後，過濾氫氯化物的橘色沈澱物、以甲醇然後以乙基醚漂洗。在真空乾燥後，獲得化學式1的2.8g(92%)N-(3-氨丙基)-N』_{3_[甲基-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基)-氨基]-丙基}-丁烷-1，4-二胺的鹽類。F=260°C。ESI-MSm/z=308.2(ΜΗ+)；1HNMR(D2O):8·50(d，1Η，J=8Hz，H5)、6·41(d，1Η，J=8Ηζ，Η6)、4·27(m，2H，NHCH2)、3·54(s，3H，NCH3)、3·11-3.27(m，10H，CH2HN)、2·26(m，2H，CH2)、2.ll(m，2H，CH2)、1.82(m，4H，CH2)。同樣地，使用被雙保護的精胺依據相同的方法製備化學式1的化合物，其中d=0、e=1和b=3、c=4或者b=4、c=3。在專利申請W02005/100363中描述或在引用的刊物中指出用來製備這些化學式6(P=苄氧羰基或叔丁氧羰基)的被保護的聚胺的不同方法。實施例2:Ν-1-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑_4_基)丁烷_1，4_二胺的合成。formulaseeoriginaldocumentpage11Ohba等人的刊物中描述了該化合物(Tet.2007，63，3754)。根據本發明通過下列方法合成該化合物階段1由200mg4_氯-7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑、190mg(4_氨基丁基)-氨基甲酸的叔丁酯和320mg碳酸銫組成的混合物在5mL乙腈中回流歷經30分鐘。在冷卻後，將介質倒入水中且用乙酸乙酯萃取。將其傾析且用硫酸鈉乾燥有機相。過濾且在真空中蒸發。採用二氧化矽的快速層析法分離280mg(產率80%)呈油狀的[4-(7_硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基氨基)-丁基]-氨基甲酸的叔丁酯，用從純庚烷至純乙酸乙酯的梯度衝洗該二氧化矽的快速層析30分鐘。TLC=SiO2庚烷-AcOEt(30-70)，Rf=0.5。ESI-MSm/ζ=352.1(ΜΗ+)；1HNMR(DMSO)9.55(s,1Η,NH),8.50(d,1Η,J=8Hz,H5)、6·83(m,1Η,NH)、6.42(d,1Η,J=8Hz,H6)、3·47(m,2Η,NHCH2)、2·96(m,2Η,CH2NH)、1·66(m,2Η,CH2)、1·48(m,2Η,CH2)、1·36(s，9H，t_Bu)。階段2將上述階段所獲得的280mg氨基甲酸酯置於在15mL二氯甲烷與2mL三氟乙酸的溶液中，然後，在室溫攪拌歷經15分鐘。在蒸發後，所獲得的油狀殘留物在異丙醚中進行結晶。分離到150mg(產率51%)的N-I-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基)丁燒-1，4-二胺三氟乙酸酯。TLCSiO2=CH2Cl2-MeOH-NH4OH(90-10-1),Rf=0.7。ESI-MSm/z=252.1(ΜΗ+)；1HNMR(DMSO):9·54(s，1Η，NH)、8·53(d，1Η，J=8Hz，H5)、7·70(s，2Η，NH2)、6.44(d,1Η,J=8Hz，H6)、3·50(m,2Η,NHCH2)、2·84(m,2Η,NHCH2)、1.59-1.76(m,4Η,CH2CH2)。實施例3:Ν-(3-氨丙基)-N』-[3-(7-甲基苯並[1，2，5]噁二唑_4_基氨基)-丙基]-丁烷-1，4-二胺的合成。formulaseeoriginaldocumentpage12階段1將在實施例1中階段1所獲得的250mg的三BOC精胺留下，與IOOmg4-氟苯並[1，2，5]噁二唑-4-磺酸的二甲基醯胺在IOmL乙腈中的0.17mL三乙胺存在下於常溫在攪拌下歷經30分鐘而反應。將反應介質倒入以HCl被酸化的水中且用乙酸乙酯萃取。在傾析且以NaCl飽和的水清洗有機相後，用Na2SO4乾燥該溶液、過濾和蒸發。獲得250mg的黃色油(產率=84%)。ESI-MSm/z=728.5(ΜΗ+)；1HNMR(DMSO)7.83(d,1H,J=8Hz，H5)、6.30(d,1H,J=8Hz,H6)、3·35(m,2Η,NHCH2)、2·68(s，6H，We2)、3·23(m,2Η,CH2N)、3·14(m,6Η,CH2N)、2.87(m，2H，NCH2)U.86(m,2Η,CH2)U.55(m,2Η,CH2)U.36(m，31H，CH2,t_Bu)。階段2將前所獲得的250mg被保護的化合物在2mL三氟乙酸與IOmLCH2Cl2中於室溫攪拌歷經30分鐘。在蒸發後，以260mg在具有微量丙酮的異丙醚中的N-(3-氨丙基)-N，-[3-(7-甲基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基氨基)-丙基]-丁烷-1，4-二胺的三氟乙酸酯的定量性產量進行結晶。ESI-MSm/z=428.3(ΜΗ+)；1HNMR(DMSO):7.84(d，lH，J=8Ηz，Η5)、6·37(d,1Η,J=8Ηz，Η6)、2·85-3.05(m,12Η,NHCH2)、2·70(s，6H，We2)、2·00(m,2Η,CH2)U.90(m,2Η,CH2)U.62(s,4H,CH2)。實施例4:藥理研究1、和腫瘤細胞相對的探針的詵擇件在有或沒有胰蛋白酶存在下(取決於在研究中組織的構造)機械性分離從活體檢視所取的細胞。採用用於血細胞的常規製備方法分開和分離造血細胞。一旦被分離，在相當短時間之後，以確保正被試驗的細胞的生存，在有探針(例如，在實施例1至3所合成的探針)的存在下，將細胞放置且留下在有氨基胍的存在下在所推薦的培養基中培養，該培養基用於研究中的組織。氨基胍用來避免聚胺的在體外的變性。不使用血清(在聚胺中濃度太高且因此為測量誤差的來源)。一至四個小時的培養時間為足夠的且通過選擇與螢光探針的取代基相容的激發和發射波長而允許通過免疫化學或流式細胞儀的螢光的檢測。通過流式細胞儀或組織化學採用在以下所述的研究中的標準操作法進行該分析，該標準操作法是通過用488nm源激發在實施例1中所獲得的探針(N-(3-氨丙基)-N』-{3-[甲基_(7_硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基)-氨基]-丙基}-丁烷-1，4-二胺)且測量在525nm的螢光發射。在此相同的實施例中，通過與從健康的肺臟以及於市面上可從細胞株庫買得到者產生的MRC-5細胞相比而測定從人類肺臟癌症腫瘤產生的A549細胞(非小細胞)。結果隨附的圖1產生以玻片培養的細胞的標準螢光顯微鏡所獲得的影像。其顯示在腫瘤細胞中實施例1的探針的結合(圖1A)比在來自健康的組織的細胞(圖1B)的探針的結合多得多。此差別還通過流式細胞儀所證實。這結果證實用本發明化合物作為螢光診斷探針的優點，該探針使適於採用通過聚胺轉運蛋白而被引導的抗癌化合物治療的腫瘤的選擇成為可能。2、痛遞碰碰弓陴輸敲丨予頁謝牛為了比較探針(例如以上所描述)的結合以及由此以證實對朝著聚胺傳遞系統而被引導的試劑的反應的預測性質，使用標準方法測量細胞毒性(在此，使用來自Perkin-Elmer的ATPlite試劑盒測量剩餘ATP)。使用抗癌化合物，表鬼白毒素的衍生物，該衍生物的細胞內穿透取決於聚胺轉運蛋白，例如，在專利申請WO2005/100363的實施例27中所述的化合物，且作為參考化合物的依託泊苷為非被引導的表鬼白毒素。這兩種化合物在癌細胞上具有相同作用機制他們兩者為拓樸異構酶2的抑制劑。關於對被引導的試劑(例如，在專利申請WO2005/100363的實施例27中的化合物)的敏感性且與非被引導依託泊苷相比，測定一組白血病株以確定探針結合，在此，在實施例1中所描述之一。在與在專利申請WO2005/100363的實施例27中的化合物或與依託泊苷的72小時的培養時間之後，使用ATPlite試劑盒評估細胞毒性。也在實施例1中所述的探針存在下培養來自相同株的細胞且通過流式細胞儀分析。在525nm所測量的螢光強度是從0至1小時30分鐘而被得出的且計算強度變化的斜率。結果最初，在專利申請WO2005/100363的實施例27中的化合物的細胞毒性與具有類似作用模式的依託泊苷的比較，通過測定IC5tl比例，而使白血病的辨識成為可能，對白血病，引導在化合物的效能中具有主要作用。對所有經測定的株，還測量併入螢光探針的能力，螢光探針的特點在於通過流式細胞儀測量的螢光。這些結果顯示在以下表1中表1tableseeoriginaldocumentpage13tableseeoriginaldocumentpage14*螢光的任意單位(有探針的細胞強度)_(沒有探針的細胞強度)顯然地，螢光強度在引導也是重要的細胞中為較強的。結論，通過測量探針結合，預測抗癌化合物(例如，在專利申請WO2005/100363的實施例27中的化合物)的更好的效能和更好的抗腫瘤選擇性為可能的。這些結果顯示探針的追蹤允許具有高度活性聚胺傳遞的白血病細胞的辨識，且因此能夠用通過由聚胺轉運蛋白所引導的抗癌化合物有效處理。通過流式細胞儀所獲得的差別與在組織化學所見的差別相比較。在給定的時間只通過測量螢光實施較簡單的測定是可能的。此通過在僅1小時和30分鐘的培養時間之後進行該螢光測量而被驗證。此在醫院環境中可具有優勢以提供用於反應細胞選擇的快速結通過延伸，所述測量可適用於在常規分析的期間由採集血或腰椎穿刺所取的患者血液母細胞。在所有裝備有細胞學和/或解剖病理學單位的醫院中使用常規流式細胞儀或組織細胞化學進行螢光強度的測量。權利要求化學通式1的化合物或其藥學上可接受的鹽類作為螢光診斷探針以檢測表現聚胺傳遞系統的腫瘤的用途其中R1代表在位置4和/或6的一或兩個NO2基團、或SO2Ph、SO2NMe2、SO2NH2、SO3H基團；聚胺鏈可在位置5、6或7；R2代表氫、C1-6烷基、苄基、全氟烷基基團；a、b、c的值與彼此無關可為2至5，且代表分開所述氨基基團的亞烷基鏈；d和e的值可獨立地為0或1，但不能同時代表0的值。FPA00001009125800011.tif2.化學通式1的化合物或其藥學上可接受的鹽類formulaseeoriginaldocumentpage2其中Ri代表在位置4和/或6的一或兩個N02基團、或S02Ph、S02NMe2、S02NH2、S03H基團；聚胺鏈可在位置5、6或7;R2代表氫、(V6烷基、苄基、全氟烷基基團；а、b、c的值與彼此無關可為2至5，且代表分開所述氨基基團的亞烷基鏈；d和e的值可獨立地為0或1，但不能同時代表0的值；只要當e=0之時，那麼R2不能為氫；和除了其中隊=4-N02、R2=H、a=3、b=4、c=3*d=e=l的化合物以外。3.根據權利要求2所述的化合物，其中隊=4-N02、R2=C^e烷基、a=3、b=4、c=3、d=e=1。4.根據權利要求2所述的化合物，其中隊=4-N02、R2=H或Cm烷基、a=0、b=4、c=3、d=0、e=lo5.根據權利要求2所述的化合物，其中隊=4-N02、R2=H或Cm烷基、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1。6.根據權利要求2所述的化合物，其中隊=4-N02、R2=C^e烷基、a=4、b=0、c=0、d=l、e=0。7.根據權利要求2所述的化合物，N-(3-氨丙基)-N』-{3-[甲基-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基)-氨基]-丙基}-丁烷-1，4-二胺，其中氓=4-N02、R2=甲基、a=3、b=4、c=3、d=e=1。8.根據權利要求2所述的化合物，N-(3-氨丙基)-N』-甲基-N』-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基)-丁烷-1，4-二胺，其中禮=4-N02、R2=甲基、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1。9.根據權利要求2所述的化合物，N-(3-氨丙基)-N』-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基)-丁烷-1，4-二胺，其中禮=4-N02、R2=H、a=0、b=4、c=3、d=0、e=1。10.根據權利要求2所述的化合物，N*l*-{3-[甲基-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基)-氨基]-丙基}-丁烷-1，4-二胺，其中氓=4-N02、R2=甲基、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1。11.根據權利要求2所述的化合物，NY-[3-(7-硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基-氨基)_丙基]-丁烷-1，4-二胺，其中禮=4-N02、R2=H、a=0、b=3、c=4、d=0、e=1。12.根據權利要求2所述的化合物，N*l*-甲基硝基苯並[1，2，5]噁二唑-4-基)-丁烷-1，4-二胺，其中禮=4-N02、R2=甲基、a=4、b=0、c=0、d=1、e=0。13.一種合成化學式1的化合物的方法，其特徵在於該方法包含下列步驟a)將化學式2的苯並氧雜噁二唑的衍生物與化學式6的聚胺偶合formulaseeoriginaldocumentpage3化字式2其中禮代表在位置4和/或6的一或兩個硝基基團、或S02Ph、S02NMe2、S02NH2、S03H基團；R3為在位置7移動的滷素取代基，該化學式6的聚胺，其中P為胺官能團的保護基且，其中，a、b、c與彼此無關位在2與5之間，且其中d和e可獨立地為0或1；formulaseeoriginaldocumentpage3化學式6b)烷基化由偶合反應a)而來的化合物，該化合物與烷基滷化物在惰性溶劑中在鹼存在下被烷基化；和c)由步驟b)而來的化合物在酸性介質中在室溫被去保護以獲得化學式1的化合物。全文摘要本發明涉及新的具有苯並氧雜噁二唑基團的聚胺螢光衍生物、其製備方法以及其作為診斷工具用於加強在癌細胞中的聚胺傳遞從而適於其治療，且因此用於選擇帶有該腫瘤的患者從而適於其治療的用途。這些衍生物對應於化學式1或其藥學上可接受的鹽類，其中R1為在位置4和/或6的一或兩個NO2基團、或SO2Ph、SO2NMe2、SO2NH2或SO3H基團；R2為氫、C1-6烷基、苄基、全氟烷基基團；a、b、c的值與彼此無關可為2至5且代表分開所述氨基基團的亞烷基鏈，以及d和e的值可獨立地為0或1。文檔編號G01N33/574GK101809007SQ200880100262公開日2010年8月18日申請日期2008年7月28日優先權日2007年7月26日發明者J-M·巴雷特,J-P·阿內羅,T·安貝爾,Y·加敏斯基申請人:皮埃爾法布雷醫藥公司