一種用於治療異位性皮炎的中藥提取物及其顆粒劑的製作方法

2023-12-03 10:00:16

專利名稱：：一種用於治療異位性皮炎的中藥提取物及其顆粒劑的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種用於治療異位性皮炎的中藥提取物及其顆粒劑。(二)
背景技術：
：異位性皮炎(atopicdermatitis.AD)，具有產生高免疫球蛋白(IgE)傾向，易伴發哞喘、過敏性鼻炎的一種變態性、炎症性皮膚病。具有病程長，反覆發作，冬重夏輕，瘙癢顯著等特點。隨著工業化進程的迅猛發展，AD在各個國家的患病率正呈現逐漸上升的趨勢，尤其是在發達的國家。現代醫學研究表明AD的發病機理與I型和IV型變態反應有關。從免疫細胞生物學的角度研究表明，AD患者皮膚T輔助1型細胞(Thl)與T輔助2型細胞(Th2)平衡失調，Th2細胞佔優勢，表皮內細胞因子IL-4、IL-5、IL-13等增多，而IL-2、IFN-y等減少，血清總IgE升高，導致I型超敏反應發生，同時接觸的外界過敏原與表皮內的朗格漢斯細胞結合又可激發Th2細胞主導的IV型遲髮型超敏反應，從而產生臨床症狀。而皮膚表面寄生的金葡菌、糠秕孢子菌、白色念珠菌等以分泌超抗原的方式加劇病情。在治療上常是內服抗組胺類藥物、皮質類固醇激素等藥，外用含皮質激素類軟膏。但長期使用抗組胺類藥、皮質激素會引發一些副作用。目前臨床治療AD主要採用的是綜合治療。以抗組胺藥為主，加外用皮質激素或糠餾油、煤焦油等，以鎮靜抗炎止癢。但效果並不滿意，雖然一時能控制和緩解病情，但不能根治，停藥後復發率極高。而且抗組胺藥的反覆使用會出現耐藥性，皮質激素的長期使用會引起皮膚變薄，毛細血管擴張，多毛，色素沉著等一系列的不良反應。且現有免疫調節劑療效尚難以肯定。中醫中藥以其療效確切，副作用小，強調整體調節，辨證論治，在AD的治療方面顯示出一定的優勢。但目前還是處在複方煎劑辨證治療上，有報導採用雷公藤糖漿和"787"膠嚢(主要成分含蛇毒)對AD有一定的療效，但缺乏促使AD痊癒的作用。綜上所述，中醫藥強調整體調節、辨證論治，在治療AD方面顯示出一定的優勢。因此開發治療AD中藥具有廣泛的前景。(三)
發明內容本發明目的是提供一種用於治療異位性皮炎的中藥提取物及其顆粒劑。本發明採用的技術方案是一種用於治療異位性皮炎的中藥提取物，由質量配比如下的原料提取得到當歸10~30份蒼朮10~304分黃茶2050份防己1030份柴胡1030份；所述的中藥提取物包括揮髮油提:取物和水提取物，所述的分別按如下方法製備(1)揮髮油提取物稱取配方量的當歸和蒼朮，加入5~10倍質量的水浸漬後，於揮髮油提取器中回流提取610小時，過濾，當歸、蒼朮殘渣備用，揮髮油提取液冷卻用乙醚萃取13次，得到乙醚萃取液，除去萃取液中的乙醚和水，得到揮髮油；當歸、蒼朮為本方的君藥，兩者揮髮油含量極高，是其重要的藥理活性成分。為了充分發揮兩者揮髮油的效用，將兩者揮髮油共同提取。(2)水提取物將當歸、蒼朮殘渣與黃芩、防己和柴胡混合，加入水浸沒，浸漬後，回流提取13次，每次12小時，得到水提取液過濾去除濾渣，濾液濃縮至相對密度為1.05~1.10,加入95%乙醇至乙醇體積含量為40~60%,靜置1224小時，過濾去除雜質，濃縮，得到浸膏乾燥，得到浸膏粉末。本處方主要由蒼朮、當歸、黃芩、柴胡、防己等組成。方中蒼朮性溫，味辛、苦，有健脾燥溼，祛風溼的作用，"治痰溼留飲……及脾溼下流，濁瀝帶下，滑瀉腸風，，(《本草綱目》)。蒼朮、當歸為主藥，以健脾養血兼祛風，輔以黃茶、柴胡、防己以清熱利溼祛風止癢，蒼朮與柴胡合用達到既疏肝解鬱理脾，又健脾除溼去風的作用。當歸與蒼朮合用起到疏達氣機，和血理血作用。柴胡配黃芩為透達半表之邪，清洩半裡之熱；配當歸則疏肝解鬱，活血和血，使氣機條達，鬱滯漸消。以上諸藥合用達到既健脾補血補其本，又清熱利溼活血瀉其實，祛風止癢治其標。所謂"治溼先健脾，，，"治風先治血，血行風自滅"。諸藥合用共奏健脾養血，清熱化溼，祛風止癢之功，達到補虛瀉實，標本兼治的目的。經臨床研究表明，治療AD療效顯著。中醫理論認為，AD屬於"頑溼"範疇，是先天稟賦不足，脾胃虛弱，又飲食失調，食入腥膩動風之品，蘊溼化熱動風所致。溼熱侵襲肌膚則起紅斑、丘滲、滲出，風盛則癢。溼熱之邪留戀不清，日久傷陰耗血，致血虛風燥或久病必瘀，肌膚失養，形成粗糙肥厚皮損。故AD有溼熱內盛和脾虛血燥之分。而兒童成人型AD既有溼熱內蘊又有脾虛血燥，而以脾虛血燥為主。皮炎淨顆粒具有深厚的臨床積澱，主要由蒼朮、當歸、黃芩、柴胡、防己等組成，方中蒼朮、當歸為主藥，以健脾養血兼祛風，輔以黃芩、柴胡、防己以清熱利溼祛風止癢，蒼朮與柴胡合用達到既疏肝解鬱理脾，又健脾除溼去風的作用。當歸與蒼朮合用起到疏達氣機，和血理血作用。柴胡配黃芩為透達半表之邪，清洩半裡之熱；配當歸則疏肝解鬱，活血和血，使氣機條達，鬱滯漸消。以上諸藥合用達到既健脾補血補其本，又清熱利溼活血瀉其實，祛風止癢治其標。所謂"治溼先健脾，，，"治風先治血，血行風自滅"。諸藥合用共奏健脾養血，清熱化溼，祛風止癢之功，達到補虛瀉實，標本兼治的目的。現代研究發現當歸含有阿魏酸和多種中性油、酚性油、酸性油成Y分，並含有較豐富的VitB12和VitA。其中阿魏酸有很強的抗氧化和清除自由基作用，從而降低PG環氧化酶而減弱PG合成。阿魏酸可抑制花生四烯酸生成TXB2並抑制磷二酯酶，升高血小板cAMP水平，從而起到抗炎活血作用。當歸水煎液對急慢性炎症，均有顯著抑制作用。蒼朮含有揮髮油1.5%。含較多的蒼朮素、B-桉油醇、茅術醇，含少量蒼朮酮、B-芽油烯、欖香油、芽烷二烯(Selina-4(14).7(ll)-di-ene國8隱one)。其中二烯酮、蒼朮烯酮內酯(Atractylenolide)I、II、III有較強抗炎作用。蒼朮水溶液在抗炎方面和揮髮油作用相近，且對結核桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯葉桿菌和綠膿桿菌有明顯滅菌作用。黃茶含有黃茶苷、黃芩苷元、漢黃芩苷元等成分，具有很強而廣泛的抗變態反應和抗炎作用。其機理(l)能抑制抗原與IgE結合；(2)能升高cAMP水平，從而抑制肥大細胞脫顆粒釋放組胺；(3)通過抑制花生四烯酸環化加氧的連鎖反應，而抑制白三烯生成；(4)通過提高cAMP水平而抑制前列腺素的合成。所以黃茶同時具有抗I型和IV型變態反應的作用。此外，黃茶具廣譜的抗菌作用和利尿作用。柴胡中的柴胡粗皂甙具有抗滲出，降低毛細血管通透性，抑制炎症介質的釋放、白細胞遊走和結締組織增生等許多炎症過程。柴胡皂甙的抗炎作用與強的松龍相似。防己中的粉防己鹼，具有較強的抗炎與抗過敏作用，既是過敏介質的拮抗劑，又是過敏介質的阻釋劑。優選的，製備所述中藥提取物的原料質量配比如下當歸20份蒼朮20份黃茶31.4份防己20份柴胡20份。本處方用藥量較大，試驗表明一個處方量(當歸20g,蒼朮20g,黃芩31.4g,防己20g,柴胡20g)的提取浸膏為27g。若採用膠嚢劑、片劑、丸劑，則製劑體積較大，給包裝、攜帶和服用帶來不便，顆粒劑既保持了湯劑吸收快、顯效迅速的特點，又克服了湯劑服用前臨時煎煮、久置易黴敗變質、不便攜帶的缺點。而且顆粒劑易溶解、易吸收，生物利用度優於片劑，且製備工藝比片劑、膠嚢劑簡單，工藝成本^1低，所以本處方優選劑型為顆粒劑。8本發明還涉及一種用於治療異位性皮炎的顆粒劑(即下文所稱皮炎淨顆粒)，製備所述顆粒劑的中藥原料質量配比如下當歸10~30份，蒼朮10~30份，黃茶2050份，防己1030份，柴胡1030份，製備所述顆粒劑的方法包括(1)揮髮油提取物稱取配方量的當歸和蒼朮，加入510倍質量的水浸漬後，於揮髮油提取器中回流提取610小時，過濾，當歸、蒼朮殘渣備用，揮髮油提取液冷卻用乙醚萃取1~3次，得到乙醚萃取液，除去萃取液中的乙醚和水，得到純揮髮油；(2)水提取物將當歸、蒼朮殘渣與黃芩、防己和柴胡混合，加入水浸沒，浸漬後，回流提取13次，每次12小時，得到水提取液過濾去除濾渣，濾液濃縮至相對密度為1.051.10,加入80%~98%乙醇至乙醇體積含量為4060%,靜置12~24小時，上清液過濾去除雜質，濃縮，得到浸膏乾燥，得到浸膏粉末。(3)揮髮油包合提取稱取P-環糊精，加入水，(3-環糊精與水的用量比例為6~10g:lOOmL,加熱至完全溶解，降溫，攪拌得到P-環糊精水溶液；取取步驟(1)所得的揮髮油，用等體積無水乙醇稀釋，得到揮髮油的乙醇溶液；將揮髮油的乙醇溶液於305(TC攪拌下滴入(3-環糊精水溶液中，使揮髮油、(3-環糊精與水的用量比例為lmL:610g:100mL，滴加完畢後攪拌13小時，冷藏1824小時，過濾、乾燥，得(3-環糊精包合物；(4)取步驟(2)所得的浸膏粉末加入步驟(3)所得的P-環糊精包合物，攪拌均勻，制粒，乾燥，得到所述治療異位性皮炎的顆粒劑。優選的，所述的揮髮油提取物按如下方法製備稱取配方量的當歸和蒼朮，加入510倍質量的水浸漬0.52小時，於揮髮油提取器中回流提取610小時，過濾，當歸、蒼朮殘渣備用，提取液冷卻後，用乙醚萃取13次，得到乙醚萃取液，萃取液加無水硫酸鈉脫水，過濾取濾液水浴揮幹乙醚，得到揮髮油。優選的，所述的水提取物按如下方法製備將提取揮髮油後的當歸、蒼朮殘渣與黃茶、防己和柴胡混合，加入1015倍質量的水，浸漬0.52小時後，回流提取13次，每次12小時，得到水提取液過濾去除濾渣，濾液濃縮至相對密度為1.051.10，加入95%乙醇至乙醇體積含量為4060%,靜置12~24小時，上清液過濾去除雜質，濃縮，得到浸膏乾燥，得到水提取物浸膏粉末。優選的，製備所述顆粒劑的中藥原料質量配比如下當歸20份，蒼朮20份，黃茶31.4份，防己20份，柴胡20份；製備所述顆粒劑的方法如下(1)當歸、蒼朮揮髮油提取稱取配方量的當歸和蒼朮，加入8倍質量的水浸漬0.5小時，於揮髮油提取器中回流提取8小時，提取液冷卻後，用乙醚萃取3次，合併得到乙醚萃取液，萃取液加無水硫酸鈉脫水，過濾取濾液水浴揮幹乙醚，得到揮髮油；(2)當歸、蒼朮的揮髮油包合稱取P-環糊精，加入水，P-環糊精與水的用量比例為6g:100mL，加熱至完全溶解，降溫至40。C，得到P-環糊精水溶液；取揮髮油，用等體積無水乙醇稀釋，得到揮髮油的乙醇溶液；將揮髮油的乙醇溶液於40°C攪拌下滴入p-環糊精水溶液中，使揮髮油、卩-環糊精與水的用量比例為1mL:6~10g:lOOmL,滴加完畢後攪拌3小時，冷藏24小時，過濾、乾燥，得粉狀P-環糊精包合物；(3)水提取物的提取將步驟(1)提取揮髮油後的當歸、蒼朮殘渣與防己、柴胡和水燁過的黃茶混合，加入12倍質量的水，浸漬0.5小時後，回流提if又2次，每次1小時，得到水糹是耳又液過濾去除濾渣，濾液濃縮至相對密度為1.10,加入95%乙醇至乙醇體積含量為50%,靜置12小時，取上清液過濾去除雜質，濃縮，得到浸膏乾燥，得到水提取物浸膏粉末；(4)取步驟(3)得到的浸膏粉末加入步驟(2)製得的P-環糊精包合物，攪拌均勻，噴85%乙醇制軟材，制粒機制粒，乾燥，得到所述治療異位性皮炎的顆粒劑。經藥理學試驗驗證，皮炎淨顆粒對小鼠中樞神經系統無興奮或抑制作用，對家貓心血管系統無明顯的興奮或抑制作用，對家貓呼吸提供業無明顯的呼吸興奮或抑制作用，證實該製劑是安全可靠的。經半數致死量(LD5Q)測定的預試驗結果表明，各劑量組經灌胃給藥後，均未引起小鼠死亡，未能測出半數致死量(LD50);最大給藥量試驗以皮炎淨顆粒最大濃度(0.70g/ml)，小鼠最大灌胃體積(0.4ml/10g),1天3次，灌胃給藥，測得小鼠最大給藥量為84g/kg(生藥量116.76g/kg),相當於臨床成人日用劑量的365倍。按體重計算，小鼠Id最大給藥量相當於成人臨床日用劑量的100倍以上則上較為安全，表明皮炎淨顆粒毒性低。灌胃給藥後小鼠在活動、毛髮、飲水、糞便及精神狀態等方面正常；隔天稱取體重發現有不同程度增長，給藥組與對照組比較無顯著性差異；觀察期內無一例死亡，處死後解剖觀察腦、心、肝、脾、肺、腎等臟器未發現異常。因此皮炎淨顆粒無明顯藥理和毒理反應，通過灌胃給藥無法測出LD50，故該製劑安全可靠，在臨床用藥上有一定的安全性。本發明的有益效果主要體現在本發明中藥提取物選擇臨床有效方劑，全方是以補血養血、健脾祛風中藥為主藥，輔以疏肝解鬱，清熱利溼，祛風止癢之中藥經科學加工而成，經臨床研究表明，治療AD療效顯著；皮炎淨顆粒毒性很低，臨床擬用劑量安全，對實驗動物的中樞神經系統、呼吸系統和心血管系統等方面均無明顯的興奮和抑制作用，是一種安全、穩定的純中藥複方製劑，並有望開發成為安全有效的治療AD的新藥；且該製劑工藝穩定，參數規範合理，適於工業化大生產。圖1為不同輔料制粒的時間-吸溼率曲線圖2為不同糊精用量制粒的時間-吸溼率曲線圖3為顆粒劑製備工藝流程10圖4為實施例6實—瞼流程圖5為各組SD大鼠血清的IgE含量；圖6為各組SD大鼠血清IFN-Y含量；圖7為各組SD大鼠血清IL-4含量；圖8為各組SD大鼠血清IFN-Y/IL-4值。具體實施例方式下面結合具體實施例對本發明進行進一步描述，但本發明的保護範圍並不Y又限於此實施例1:提取工藝研究(1)當歸、蒼朮的揮髮油提取及包合工藝的研究試劑與藥材曱醇無水乙醇乙醚正丁醇卩-環糊精黃芩苷對照品當歸(產地甘肅)蒼朮(產地遼寧)柴胡(產地河北)黃芩(產地內蒙古)防己(產地浙江)儀器電子天平超聲波清洗器電子恆溫水浴鍋臺式乾燥箱恆溫加熱磁力攪拌器分析電子天平超導熱風乾燥箱揮髮油測定器旋轉蒸發儀電子天平杭州化學試劑有限公司上海化學試劑公司杭州化學試劑有限公司杭州高晶精細化工有限公上海伯奧生物科技有限^^司中國藥品生物製品才企定所浙江中醫藥大學中藥飲片廠浙江中醫藥大學中藥々欠片廠浙江中醫藥大學中藥々欠片廠浙江中醫藥大學中藥^t片廠浙江中醫藥大學中藥々大片廠奧豪斯國際貿易(上海)有限^^司上海超聲波儀器廠上海東星建材試驗設備有限公司重慶試驗設備廠鞏義市英峪予華儀器廠上海天平^f義器廠杭州華迪機械有限公司上海玻璃儀器廠瑞士BUCHI^公司曰本島津批號20060214批號20060117批號20031105批號20060223糸匕號060123批號110715-200514批號070116批號061202批號061206批號061213批號061208型號AR2130型號CQ-50型號DZKW-4型號DGB/20-002A型號DF-101S型號DHS20-1型號CD-100L型號5ml型號R-200型號AEG-220Waters-510高效液相色譜儀Waters-484紫外檢測器；GS型色譜工作站1.當歸、蒼朮的揮髮油提取工藝的研究1.1考察指標的選擇當歸、蒼朮為本方的君藥，兩者揮髮油含量極高，是其重要的藥理活性成分。為了充分發揮兩者揮髮油的效用，將兩者揮髮油共同提取。一般以揮髮油總重量為考察指標，故將其作為揮髮油提取工藝的評價指標。1.2正交因素水平的確定因當歸、蒼朮所含揮髮油易被水蒸汽蒸餾，且密度均小於1.0，故採用水蒸汽蒸餾法。為了確定最佳的糹是^l工藝，對加水量(A)、浸泡時間(B)、回流時間(C)等分別進行考察研究，並以揮髮油總重量為考察指標進行工藝優選。根據文獻報導及預試驗的結果，揮髮油提取工藝的因素水平設置見表2。對回流時間因素的水平設置，本研究作了回流8h和回流9h的單因素考察，以確定回流時間因素的最高水平。回流時間的單因素考察稱取4個處方量的藥材(當歸80g,蒼朮80g)，共六份，粉碎，過2號篩，加相當於藥材重量8倍的水浸泡1.5h，前三份用揮髮油提取器連續回流提取8h，後三份用揮髮油提取器連續回流提取9h，提取液冷卻後，用2mL乙醚萃取3次，合併乙醚萃取液，40。C以下回收乙醚，加無水硫酸鈉2g脫水，過濾，轉移至稱量瓶中，60。C水浴揮幹乙醚得純揮髮油，稱重。結果見表l。表l回流時間單因素考察結果結回流時間果8h8h8h9h9h9h揮髮油總重量(g)1.391.421.411.411.421.43平均含量(g)1.411.42通過對表1試驗結果分析，前三份提取的揮髮油含量平均值為1.41g，後三份提取的揮髮油含量平均值為1.42g，回流9h與回流8h比較，揮髮油的提取率提高了1.00%,從節約能源考慮，回流時間因素最高水平設置為回流8h,最終因素水平表確定見表2。表2:揮髮油提取因素水平表因素水平ABCD加水量(倍)浸泡時間(h)回流時間(h)空白161.041281.5623102.0831.3揮髮油提取方法的確定12本實驗根據單因數考察、文獻及聯繫生產實際，確定加水量(A)、浸泡時間(B)、回流時間(C)三個因素為3個考察因素，每個因素設置3個水平，以揮髮油總重量為考察指標，用L9(3"正交表進行實驗設計優選。具體實驗方法稱取4個處方量的藥材(當歸80g,蒼朮80g),共9份，粉碎，過2號篩，按L9(3"正交設計試驗表安排試驗，見表3,以不同倍數加水量，不同浸泡時間，不同回流提取時間分別對揮髮油進行提取，提取液冷卻後，用2mL乙醚萃取3次，合併乙醚萃取液，40。C以下回收乙醚，加無水硫酸鈉2g脫水，過濾，轉移至稱量瓶中，60。C水浴揮幹乙醚得純揮髮油，稱重。試驗結果見表3，方差分析見表4。1.4結果與數據處理表3:揮髮油提取正交試驗表tableseeoriginaldocumentpage13表4:揮髮油提取方差分析表tableseeoriginaldocumentpage13由直觀分析可知(見表3),A取A2,B取Bl5C取C3，最佳提取工藝為A2BiQ。由方差分析結果可知(見表4):C因素對提^^率有顯著性差異，A、B兩因素對提取率無顯著性差異。主次順序為OB〉A。C因素中，CpCpd,選擇C3，結合直觀分析(見表3),A、B因素對提取率無顯著性差異，A取A2，B取BP故結合生產實際確定最優提取工藝條件為:藥材浸泡lh，加8倍量水，加熱回流糹是耳又8h。1.5驗證試驗按最佳提取工藝A2BiC3驗證試驗，重複5次，所得數據結果見表5。結果12345揮髮油總重量(g)1.461.491.481.471.48平均值(g)1.48RSD(0/(01.02(2)當歸、蒼朮的揮髮油包合工藝的研究2.1考察指標的選4奪為了充分發揮當歸、蒼朮兩味揮髮油的效用，增加揮髮油在製劑中的穩定性，減少不良氣味，實驗中將兩味揮髮油共同提取，進行(3-環糊精包合，以包合物收得率、揮髮油包合率、綜合評分作為指標來客觀評價包合工藝的優劣。2.2正交因素水平的確定為了確定當歸、蒼朮的，我們對影響環糊精包合較明顯的工藝條件揮髮油(ml)與p-環糊精(g)的投料配比(A)、包合溫度(B)、包合時間(C)三個因素進行考察研究，每個因素設置3個水平，對包合物收得率、揮髮油包合率進行綜合評分優選揮髮油的包合工藝。根據文獻報導及預試驗的結果，包合工藝的因素水平設置見表6。表6:揮髮油包合因素水平表因素水平A揮髮油p-環糊精才殳料配比(ml/g)B包合溫度rc)C包合時間(h)D空白123i:6i:8i:io304050123122.3揮髮油包合方法的確定本實驗確定揮髮油(ml)與p-環糊精(g)的投料配比(A)、包合溫度(B)、包合時間(C)三個因素為考察因素，每個因素設置3個水平，採用L9(3,正交表實施實驗；對包合物收得率、揮髮油包合率進行綜合評分，優選揮髮油的包合工藝。具體實驗方法稱取20個處方量的藥材(當歸400g,蒼朮400g),按揮髮油最佳提取工藝提取。所得揮髮油包合採用飽和水溶液法，平行取9份，按"(34)正交設計試驗表安排試驗，試驗結果見表7，方差分析見表8。2.3.1飽和水溶液法稱取一定量的P-環糊精，置具塞錐形瓶中，加入蒸鎦水100ml,加熱使之完全溶解，降至規定溫度下，用恆溫磁力攪拌器攪拌。精密移取揮髮油lml於試管中，用無水乙醇稀釋，使揮髮油無水乙醇體積比為1:1。將揮髮油的醇溶液緩慢滴入錐形瓶中，邊滴加邊攪拌，攪拌至規定時間，冷藏24h,取出，濾過，乾燥6h(50'C以下)，得粉狀包合物，稱重，即得包合物實際量。14包合率、綜合評分的確定包合物收得率、包合率、綜合評分的測定包合物收得率=包合物實際重量/[p-環糊精量(g)+揮髮油加入量(g)]x100%揮髮油包合率=[包合物中實際揮髮油量(g)/揮髮油加入量(g)]xl00%包合物收得率評分=包合物收得率x30揮髮油包合率評分=揮髮油包合率評分x70綜合評分=包合物收得率評分+揮髮油包合率評分揮髮油包合率權重係數定為0.7,包合物收得率作為次要篩選指標，權重係數定為0.3。按上述公式計算綜合評分。測定包合物中含揮髮油重量按揮髮油提取方法及條件提取包合物內的揮髮油至揮髮油提取完全，同法分離，稱重。2.4結果與數據處理表7:正交試驗方案與結果tableseeoriginaldocumentpage15由直觀分析可知(見表7)，A取A"B取B2，C取C3,最佳包合工藝為A2B!C3。由方差分析結果可知(見表8),包合時間、包合溫度對包合率有顯著性差異，p-環糊精與油的配比對包合率無顯著性差異。主次順序為B〉OA。B因素中，BpB一Bb選擇B3;C因素中，C^C^Cp選擇C3。結合直觀分析(見表7),A因素對包合率無顯著性差異，A選擇Ap故結合生產實際確定最優提取工藝條件為A^2C3，即揮髮油與(3-環糊精配比為1:6，包合溫度為40°C,磁力攪拌時間為3h。2.5驗證試驗按最佳提取工藝AiB2C3驗證試驗，重複5次，所得數據結果見表9表9:驗證試驗結果(n二5)結果12345綜合評分(g)83.3583.3883.3483.3683.37平均值(g)83.36RSD(%)1.413.小結與討論3.1本實驗採用正交試驗法對當歸、蒼朮揮髮油的提取及(3-環糊精包合工藝進行了研究，並分別按最佳工藝進行了3批驗證試驗，結果揮髮油重量平均值為1.48,RSD=1.02%;綜合評分平均值為83.36%,RSD二1.410/。。以上數據與正交試驗結果一致，說明該工藝穩定可行。包合物製備時，考察了冷藏時間對p-環糊精包合效果的影響。結果表明，冷藏24h包合率及包合物收得率均較冷藏12h明顯增加，而24h以後趨於穩定，故冷藏時間確定為24h。3.2本試驗曾對方中含揮髮油的藥材當歸、蒼朮、柴胡進行揮髮油提取，加水適量浸泡lh後，提取8h。結果顯示，柴胡含揮髮油比例較低，當歸、蒼朮含揮髮油比例較高。且據文獻報導柴胡揮髮油抗炎作用不明顯，提取意義不大，故放棄柴胡揮髮油提取，僅對當歸、蒼朮揮髮油進行合提。3.3含揮髮油的中藥製劑中，過去將揮髮油噴灑到顆粒上，但長期放置後，會因製劑表面的揮髮油不斷揮發含量降低而影響藥效。而採用包合技術，使揮髮油包裹到P-環糊精形成的空腔結構中避免了揮髮油在貯藏時揮發，保證藥效穩定。3.4本試驗中，皮炎淨顆粒中揮髮油包合最佳工藝為A!B2C3。在包合過程中，揮髮油包合率、包合物收得率是衡量包合效果的主要指標。揮髮油包合率越高，其包合效果越好，可作為工藝主要篩選指標，但收得率在大生產中也有很重要的意義，在p-環糊精量和揮髮油投入量一定的情況下，得率可作為次要篩選指標。故綜合考慮，揮髮油包合率權重係數定為0.7,包合物收得率權重係數定16為0.3。在本實驗中同時考慮了(3-環糊精量和揮髮油投料量，得出該最佳工藝條件適合於大生產。(3)當歸、黃茶、蒼朮、防己、柴胡藥材的水提工藝研究1.考察指標的選擇當歸為本方的君藥，其中含的阿魏酸可作為評價指標，但文獻報導，阿魏酸含量較低，且經多次預試驗發現其靈敏度低、重現性差。黃芩中的黃芩苷具有很強而廣泛的抗變態反應和抗炎作用，且含量較高，重現性好，可作為水提工藝的評價指標。故最終選取黃芩苷含量、藥液的浸膏得率、綜合評分作為水提工藝的評價指標。2.正交因素水平的確定當歸、黃蒼、蒼朮等各味藥的主要有效成分為水溶性成分，宜採用水提法，為了確定最佳的提取工藝，我們對加水量(A)、提取時間(B)、提取次數(C)進行了考察，並對黃芩苷含量、藥液的浸膏得率進行綜合評分優選水提工藝。水提工藝的因素水平設置見表ll。對於C因素的水平設置，本研究作了提取3次和提取4次的單因素考察，以確定C因素的最高水平。提取次數的單因素考察稱取1份處方量的藥材(當歸20g,蒼朮20g，黃茶31.4g,防己20g，柴胡20g)，共六份，加相當於藥材重量8倍的水浸泡0.5h，回流提取1.5h，前三份對藥材提取3次，後三份對藥材提取4次，合併提取液，過濾，濃縮至500mL,精密移取lmL,轉移至50mL棕色量瓶中，加蒸餾水至刻度，0.45pm微孔濾膜過濾，分別測定其中黃茶苷的含量，結果見表10。表10:提取次數單因素考察結果tableseeoriginaldocumentpage17通過對表IO試驗結果分析，前三份黃茶苷的含量平均值為14.63mg/g,後三份黃芩苷的含量平均值為15.06mg/g,提取4次與提取3次比較，黃芩苷的含量提高了2.9%,從節約能源考慮，提取次數因素最高水平設置為提取3次，最終因素水平表確定見表ll。表ll:試驗因素水平表tableseeoriginaldocumentpage17181.0112101.5223122.0333.水提方法的確定本實驗根據單因數考察、文獻及聯繫生產實際，確定加水量(A)、提取時間(B)、提取次數(C)三個因素為3個考察因素，每個因素設置3個水平，採用L"3"正交表實施實驗；對黃芩苷含量、藥液的浸膏得率進行綜合評分優選水提工藝。具體實驗方法準確稱取一個處方量的五味藥材(當歸20g，蒼朮20g,黃茶31.4g,防己20g，柴胡20g)，共9份，當歸、蒼朮兩味藥材揮髮油提取後藥渣與其他三味藥材混合(黃茶先用水燁)，按照L9(34)正交表安排試驗，見表12,浸泡0.5h，以不同倍數加水量，不同回流提取時間，不同提取次數，分別進行提取，合併提取液，過濾，濃縮至500mL，精密移取lmL,轉移至50mL棕色量瓶中，加蒸餾水至刻度，0.45iinU鼓孔濾膜過濾，分別測定，試驗結果見表12,方差分析見表13。3.1黃茶苦含量的測定3.1.1供試液的製備精密移取各試驗號下的濃縮液lmL,並轉移至50mL棕色量瓶中，加蒸餾水至刻度。0.45pm微孔濾膜過濾，即得供試液。3丄2對照品的製備精密稱取黃芩苷標準品4.5mg,溶解，用50%甲醇溶液定容至50ml容量瓶中，製成每lml含0.09mg的溶液，作為對照品儲備液。精密量取對照品儲備液l、2、4、6、8ml各置10ml棕色容量瓶中，加50%甲醇溶液定容，搖勻，製成系列濃度的標準溶液。另取黃芩苷標準品2mg,力。50%甲醇溶液，作為定位用對照品溶液。3丄3陰性對照品的製備準確稱取一份處方量的藥材不含黃茶(當歸20g,蒼朮20g，防己20g，柴胡20g)，按樣品溶液製備方法(表12試驗號1)製備，精密移取濃縮液lmL,並轉移至50mL棕色量瓶中，加蒸鎦水至刻度。0.45iim微孔濾膜過濾，即得陰性對照品溶液。3.1.4色語條件Waters-510高效液相色譜儀；Waters-484紫外檢測器；GS型色譜工作站；25(il微量進樣器。色譜柱為大連伊利特HypersilBDSC18色譜柱(250mmx4.6mm),流動相為曱醇水磷酸(47:53:2d)，柱溫為25。C,流速:1.0mL/min。紫外檢測波長280nm,理論板數不低於2500。3.1.5檢測方法精密吸取供試品溶液15nL注入高效液相色譜儀，記錄峰面積，吸取0.09g/ml黃茶苦對照品溶液10|iL、20注入色譜儀，記錄峰面積，以進樣量的對數與峰面積的對悽t作外標兩點法標準曲線，通過標準曲線計算樣品中黃芩苷含量。3.2浸膏得率測定精密量取各試驗號下的濃縮液25mL,置恆重蒸發皿中水浴蒸乾(蒸千水分),105。C烘3h,移至乾燥器中冷卻30min,迅速精密稱重，計算浸膏得率，稱量,計算,即得。計算公式如下浸膏得率(。/。戶煎液總體積(mL)x幹浸膏重(g)/藥材量(g)x取樣體積(mL)x100%。3.3綜合評分的確定黃芩苷含量評分、浸膏得率評分、綜合評分的測定黃芩苷含量評分=黃茶苷含量/最大黃芩苷含量x0.5x100浸膏得率評分-浸膏得率/最大浸膏得率x0.5x100綜合評分=黃茶苷含量評分+浸膏得率評分黃芩苷含量、浸膏得率是水提正交試驗兩個評價指標，釆用綜合評分法進行數據分析，黃茶苷含量、浸膏得率權重係數均為0.5。按上述公式計算綜合評分。4.結果與數據處理表12:正交試驗方案與結果試驗號ABCD浸膏得率(%)黃茶香(mg/g)綜合評分1111134.719.1681.522122226.022.7378.003133333.3314.4870.414212326.8818.6670.94223126.4216.8168.546231238.9016.0080.367313236.0820.0284.678321340.3924.84100.009332135.6318.0284.43&76.6479.0187.2978.1619k273.2582.1877.7681.01k389.7078.4074.5480.41R16.453.7812.762.85優水平A3B2表13:方差分析表方差來源偏差平方和自由度F比F(0.05)值顯著性A452.61233.449<0.05B24.7721.839C263.99219.509提取時間(B)。直觀分析顯示(見表12),A因素對提取效率的影響，3水平比1水平、2水平高出較多，因此，A因素選擇3水平為最佳條件；B因素對提取效率影響不大，應選擇最低水平，即提取l小時；C因素對提取效率的影響隨著水平的提高而顯著增加，結合節約能源考慮，應選擇2水平。因此，水提工藝的最佳條件應為A3B^2,即加12倍量的水提2次，每次1小時。5.驗證試驗準確稱取一份處方量的五味藥材(當歸20g，蒼朮20g，黃茶31.4g，防己20g,柴胡20g)，按正交最佳工藝提取，平行提取三份，提取液過濾，濃縮成500mL的浸膏，按正交樣品的前處理方法處理，測定其中黃茶苷的含量，浸膏得率。結果見表14。表14:驗證試驗結果實驗號浸膏得率(％)黃芩苷(mg/g)140.4126.21240.3925.43340.4225.17平均值40.4125.60從表14試驗結果可知，黃茶苷的含量，浸膏得率三次試驗的平均值分別為25.60mg/g、40.41%,略高於9個正交試驗中的最高含量。說明所篩選的提取工藝可行。6.小結與討論206.1本製劑中當歸、黃芩、蒼朮等各味藥的主要有效成分為水溶性成分，在文獻檢索的基礎上，又以實驗證明，並最終確定了水提法。通過正交試驗法，以黃芩苷含量、藥液的浸膏得率為評價指標進行綜合評分優選水提工藝，確定了該處方的最佳提取工藝。最佳條件為A3B^2,即加12倍量的水提2次，每次lh。6.2實驗曾對藥材進行水提法與醇提法提取，以黃茶苷含量為評價指標進行比較。試驗結果表明，兩種方法提取的黃芩苷含量相差不多。故從生產成本考慮，選取水提法。6.3黃茶中的黃茶苦具有很強而廣泛的抗變態反應和抗炎作用，且含量較高，重現性好，作為水提工藝的參考指標，具有一定的科學性。優選出的最佳工藝，經三次驗證都有較好的重複性。(4)當歸、黃茶、蒼朮等藥材醇沉除雜工藝研究1.考察指標的選4奪當歸、黃茶、蒼朮等五味藥，採用水提工藝，根據初步試驗結果及文獻報導，對其有效成分的性質以及工藝的可行性研究，確定了醇沉除雜工藝，並最終選取醇沉濃度、醇沉時間、相對密度三個指標作為醇沉工藝的評價指標。2.單因素考察與結果2.1對不同相對密度的考察準確稱取一份(當歸20g，蒼朮20g,黃芩31.4g，防己20g，柴胡20g)的五味藥材，按正交最佳工藝提取，平行提取五份，提取液過濾，濃縮成400mL的浸膏，合併煎液，用比重瓶測定相對密度，60。C分別測定相對密度為1.00,1.05,1.10,1.15,1.20,分別加乙醇至含醇量達60%,醇沉12h,回收乙醇，濃縮，測定黃茶苷含量。以黃芩苷、浸膏得率為指標，考察最佳相對密度。結果見表15。表15:對不同相對密度的考察tableseeoriginaldocumentpage21從表15試驗結果可知，從黃茶苷含量看，相對密度為1.15時，含量明顯降低；從浸膏得率看，各組無顯著性差異，為了便於大生產省時、省力操作，選擇水提部分濃縮相對密度為i.io。2.2對不同醇沉濃度的考察準確稱取一份處方量的五味藥材(當歸20g,蒼朮20g,黃茶31.4g,防己20g，柴胡20g)，按正交最佳工藝提取，平行提取五份，提取液過濾，濃縮成相對密度為1.10後，加入乙醇使含醇量為30、40、50、60、70%,醇沉12h，回收乙醇，濃縮，測定黃茶普含量。以黃茶苷、浸膏得率為指標，考察最佳醇沉濃度。結果見表16。表16:對不同醇沉濃度的考察醇沉濃度(％)3040506070黃茶苦(mg/g)浸膏得率(％)25.8933.4525.6932.1925.3430.4323.2328.7612.6420.57從表16試驗結果可知，從黃茶苷含量看，醇沉濃度為60%時，含量明顯降低；從浸膏得率看，各組無顯著性差異，本著醇沉轉移率高原則，結合大生產沉澱效果，綜合考慮，水提工藝的最佳醇沉濃度為50%。2.3對不同醇沉時間的考察準確稱取一份處方量的五味藥材(當歸20g,蒼朮20g，黃芩31.4g，防己20g,柴胡20g),按正交最佳工藝提取，平行提取三份，提取液過濾，濃縮成相對密度為1.10後，加入乙醇使含醇量為50%,分別醇沉6h、12h、24h,回收乙醇，濃縮，按"6.r，項測定。以黃芩苷、浸膏得率為指標，考察最佳醇沉時間。結果見表17。表17:對不同醇沉時-間的考察醇沉時間(h)61224黃茶苷(mg/g)浸膏得率(％)25.4238.2725.3430.4325.3530.38從表17試驗結果可知，從黃芩苷含量看，各組無顯著性差異；從浸膏得率看，醇沉6h得率較高，本著醇沉轉移率高，出膏率低的最佳原則，結合大生產沉澱效果，綜合考慮，水提工藝的最佳醇沉時間為12h。3.小結與討論以水為溶劑提取藥材中有效部位，經濟易得，但是許多成分如澱粉、蛋白質等同時溶出，加入乙醇使無效成分沉澱，淨化藥液，縮小體積。本試驗中，對醇沉濃度、醇沉時間、相對密度三個因素分別進行了考察，最佳條件為濃縮液相對密度為1.10,乙醇醇沉濃度50%,靜置12h。實施例2:乾燥工藝研究(一)儀器與設備電子精密天平奧豪斯國際貿易(上海)有限公司型號AR2130真空乾燥箱上海森信實驗儀器有限公司型號DZG-6050旋轉蒸發儀瑞士BUCHI公司型號R-200電子恆溫水浴鍋上海東星建材試驗設備有限公司型號DZKW-4電子天平奧豪斯國際貿易(上海)有限公司型號AR2130電子天平曰本島津型號AEG-220超聲波清洗器上海超聲波儀器廠型號CQ-50臺式乾燥箱重慶試驗設備廠型號DGB/20-002A時溫比重弁瓦安徽省鳳陽縣玻璃廠型號25ml旋轉蒸發儀上海嘉鵬科技有限^^司型號RE-52(二)實驗方法與結果1.提取與濃縮準確稱取一份處方量藥材(當歸20g,蒼朮20g,黃芩31.4g,防己20g，柴胡20g)，共三份，取其中當歸、蒼朮粉碎，過2號篩，按揮髮油最佳提取工藝提取後，藥渣與其他三味藥材混合(黃芩先用水燁)，共同提取，按水提最佳提取工藝，即加12倍量的水浸泡0.5h,提2次，每次lh。合併兩次提取的浸膏，並濃縮至相對密度為1.10的浸膏，加95%乙醇至含醇量50%(v/v)，靜置12h，過濾除雜，濃縮，備用。2.對不同乾燥工藝的考察將浸膏採用常壓蒸發乾燥、減壓蒸發乾燥(0.08Mpa)、真空蒸發乾燥法在6(TC土rC下乾燥，以乾燥物形狀、色澤以及黃芩苷含量為考察指標。結果見表22。表18:對不同乾燥方法的考察乾燥方法乾燥時間乾燥物形狀乾燥物色澤黃茶苷(mg/g)常溫乾燥48h硬深褐20.56減壓乾燥20h較疏鬆棕黃色21.76真空乾燥8h疏鬆棕黃色21.84由表18試驗結果可知，三種乾燥方法中黃芩苷含量，各組無顯著性差異,常壓蒸發乾燥速度慢，乾燥物形狀硬，色澤較深；減壓蒸發乾燥速度較快，幹23燥物形狀較疏鬆；真空蒸發乾燥最快，乾燥物形狀疏鬆，色澤較好。故最佳乾燥方法採用真空乾燥法。(三)小結與討i侖3.1本製劑浸膏得率較高，從患者最小服用量考慮，要求輔料用量少，因此提取液需進一步濃縮乾燥成粉末，以便制粒。實驗中對不同乾燥方法進行比較，並得出最佳乾燥方法為真空乾燥。3.2真空乾燥法具有乾燥溫度低，易將提取物乾燥成幹浸膏，避免氧化，有效成分損失少，適合於熱敏感性物質的乾燥，且設備簡單，乾燥費用也相對較低，故真空乾燥法將提取物乾燥成幹浸膏條件符合大生產的要求。實施例3:成型工藝研究(一)實驗儀器與材料1.儀器搖擺式制粒機江蘇泰興製藥機械二廠型號WK-3攪拌機江蘇泰興製藥機械二廠型號GB-10電熱恆溫鼓風乾燥箱上海一恆^^司型號DHG-9140AAB104-N分析電子天平上海天平儀器廠型號DHS20-1電子精密天平奧豪斯國際貿易(上海)有限公司型號AR2130賽福智能人工氣候箱寧波海曙賽福實驗儀器廠型號PRX-280A2.材料上海山浦化工有限公司批號060808上海恆信化學試劑有限公司批號991120上海恆信化學試劑有限公司批號060907湖州展望化學藥業有限公司批號061216(二)成型工藝方法與結果1.對不同制粒乙醇濃度的考察稱取一份浸膏，乾燥過的糊精(兩者質量比為1:1),分別以75%、80%、85%、90%的乙醇為潤溼劑，制粒，以軟材情況、過篩難易、顆粒合格率以及顆粒的外觀為考察指標。結果見表19。表19對不同制粒乙醇濃度的考察乳糖糊精可溶性澱粉#1甲基澱粉鈉考察指標75%80%85%卯％軟材情況輕微起團不起團不起團不起團過篩難易能過篩較易較易容易24tableseeoriginaldocumentpage25從表19試驗結果可知，當乙醇濃度達到80°/。以上顆粒過篩較易，製成的軟材不起團；但乙醇濃度為80%時，製成顆粒質地偏硬，而乙醇濃度為90%時，製成顆粒粒度不均偏細，顆粒鬆散，乙醇濃度為85%時，製成顆粒各項指標較好，質量較佳。故最佳制粒乙醇濃度為85%。2.對不同輔料制粒的考察取一份浸膏20g,各4份，分別加入乳糖、糊精、羧曱基澱粉鈉、可溶性澱粉各20g，混合均勻，噴以適量85%乙醇制粒，乾燥整粒。以輔料製得的顆粒的吸溼百分率、溶解性為指標，考察最佳輔料。結果分析見表20和圖1。顆粒吸溼百分率測定將飽和NaCl溶液置乾燥器中，並將乾燥器置25。C恆溫箱中放置24h，此時乾燥器內的溼度為75%。將制好的顆粒於105。C下乾燥至恆重，稱取適量於乾燥的稱量瓶中，平鋪成2mm厚，置乾燥器中，每隔6h、12h、24h、36h、48h稱重一次。顆粒溶解性測定按《中國藥典》一部附錄方法測定，稱取整粒乾燥好的顆粒10g,加200mL溫開水攪拌5分鐘，立即觀察。顆粒全部溶解或呈混懸狀為最佳。表20:對不同輔料制粒的考察tableseeoriginaldocumentpage25由表20試驗結果可知，四種輔料製成的顆粒溶解性全部符合要求，均在5min內溶解。圖1是根據表20作出的不同輔料制粒的時間與吸溼率曲線圖，由圖l可知，四種輔料中乳糖、糊精對顆粒吸溼性的改善最佳，結合生產成本，糊精價格較低，因此輔料選擇以糊精為好。3.對不同輔料用量制粒的考察稱取一份幹浸膏20g,分別加入3g、6g、9g、12g、15g、18g、21g、24g糊精，噴以適量85%乙醇制粒，以顆粒的成型率、吸溼率為指標，選>#最佳的敷料用量。結果分析見表21,圖2。表21:對不同糊精用量制粒的考察糊精成型率顆粒吸溼百分率(％)用量(%)6h12h24h36h48h60h72h6d3g90.13.355.6310.8314.1614.3515.8616.2416.846g90.63.215.4610.5913.9814.2115.1215.2715.869g90.92.825.289.2311.2311.5812.2613.2715.4712g91.22.915.138.769.7310.8911.8212.5613.8615g91.63.254.898.269.6410.4611.1312.3413.2418g92.32.674.068.069.2110.2411.1212.1812.9821g93.12.523.988.219.5410.2911.0911.5612.3424g95.42.043.837.268.369.6510.3410.9612.08由表21試驗結果可知，糊精用量從18g增至24g時，顆粒成型率達到92%以上，成型率較高；圖2是根據表21作出的不同糊精用量制粒的時間與吸溼率曲線圖，由圖2可知，糊精的用量從18g增至24g時，顆粒吸溼率的改變不大，因此，從輔料的加入量最小原則考慮，糊精用量以18g為最佳。4.制粒、乾燥及整粒真空乾燥所得的浸膏粉末，加入浸膏重90%的糊精，充分攪拌均勻，噴以適量的85%乙醇，制軟材，以搖擺式制粒機制粒。乾燥，將所制的顆粒放入供箱中，在40。C下乾燥lh,然後升溫至65。C,保持2h,即可。整粒，將烘好的顆粒強行過一號篩後，以五號篩篩去過細部分。(三)小結與討論3.1選擇合適的輔料是應用制粒技術製得高質量顆粒的關鍵。選擇輔料時應考慮輔料對製劑的影響，包括成型性、穩定性以及生物效性等，故輔料應以最小用量和無不良影響為原則，也要考慮到成本，在充分滿足製劑工藝要求、保證產品質量的前提下，通過預試，使輔料的用量減到最低限度。本研究中，由於本顆粒劑為水溶性顆粒劑，故不能用澱粉(不溶於水)。處方提取物吸溼性較大，需加入一定量的吸收劑才能制粒，經比較，乳糖、糊精降低顆粒吸溼性的效果較好，而且乳糖在熱水中溶解性好，但價格太高，糊精價格較其它輔料便宜，製成的顆粒外觀、溶解性、吸溼性都較其它輔料好，因此輔料選擇以糊精為好。3.2通過考察不同糊精用量對顆粒的吸溼性和成型率的影響，試驗確定了糊精的最佳用量，以保證藥效。3.3乙醇濃度的選擇對制粒過程至關重要，直接關係到成品的質量好壞，濃度過高則所制的顆粒質地鬆散，在包裝儲存過程中容易破碎成粉末，濃度過低更不利於制粒，首先，濃度偏低則乙醇的用量不好控制，少了起不到粘合作用，多了制粒過程中易起團結塊，不能制粒，其次，所制顆粒質地偏硬，有硬心，26在水中不易溶解。本實驗中選擇85%乙醇制粒，結果表明所制的顆粒質量較好，且成型率較高。3.4制好的顆粒宜用程序升溫法烘乾。實驗中發現加熱溫度直接升到65°C，易使顆粒結塊。此外烘箱必需具備排氣扇，以免烘箱內乙醇蒸汽濃度過高，引起爆炸。實施例4:顆粒劑製備處方當歸200g,蒼朮200g，黃茶628g,防己200g，柴胡200g處方中當歸、蒼朮粉碎，過2號篩，加8倍量的水，浸泡1.0h，水蒸氣蒸餾提取8h,所得揮髮油用P-環糊精包合，揮髮油與(3-環糊精配比為1:6，包合溫度為40。C,磁力攪拌時間為3h。冷藏24h,取出，用乙醚洗至淡黃色，濾過，乾燥6h(50。C以下)，得粉狀包合物。當歸、蒼朮藥渣與其他三味藥材混合(黃芩先用水燁)得到混合物，共同提取，加質量為混合物質量12倍的水浸泡0.5h，提取2次，每次lh,合併兩次提取的浸膏，並濃縮至相對密度為1.10的浸膏，加95%乙醇至含醇量50%,靜置12h，過濾除雜，濃縮，真空乾燥得幹浸膏粉，加入浸膏乾粉重90%的糊精，充分混勻，噴以適量85%的乙醇，制粒，乾燥，整粒，分裝，每袋7g。顆粒劑含量質量標準阿魏酸含量不得低於0.07mg/g，粉防己鹼、防己諾林鹼的總量不得低於0.25mg/g,黃芩苷含量不得低於10mg/g。經檢測，前述製得顆粒劑符合上述標準。實施例5:皮炎淨顆粒劑穩定性檢查根據國家藥品監督管理局《新藥審批辦法》有關的穩定性試驗資料的要求，取按實施例4方法製備的三批供試品(批號070210、070320、070401),放入底部盛有NaCl飽和溶液(相對溼度75±5%)的乾燥器置隔水式恆溫培養箱(溫度37士2。C)中三個月。在試驗期間每一個月取樣一次，考核指標為製劑通則檢查、一般雜質檢查及含量測定等項目，各檢查與O月數據作比，均符合。第0月、第3月檢測結果見表22、23。表22:O個月皮炎淨顆粒初步穩定性檢測結果27才全測項目名稱標準值批號070210批號070320批號070401測定值判定測定值判定測定值判定粒度(％)3.64符合3.72符合3.91符合水分(％)3.82符合3.95符合3.86符合溶化性(min)《溶解符合溶解符合溶解符合菌落總數(cfu/g)￡30000<10符合<10符合<10符合大腸菌群，符合符合—符合黴菌(cfu/g)l('符合<10符合<10符合酵母菌(cfu/g)￡25<10符合<10符合<10符合沙門氏菌不得檢出—符合—符合_符合重金屬(ppm)￡10<10符合<10符合<10符合砷(ppm)<2<2符合<2符合0.250,401符合0.510符合0.670符合黃芩苷(mg/g)210.0014.89符合18.60符合20.10符合-表示未檢出表23:3個月皮炎淨顆粒初步穩定性檢測結果才全測項目名稱標準值批號070210批號070320批號070401測定值判定測定值判定測定值判定粒度(％)3.68符合3.83符合3.97符合水分(％)3.79符合3.93符合3.81符合溶化性Cmin)55溶解符合溶解符合溶解符合菌落總數/cfu/g，000<10符合<10符合<10符合大腸菌群590_符合—符合—符合黴菌(cfu/g)^25<10符合<10符合<10符合酵母菌(cfu/g)25<10符合<10符合<10符合沙門氏菌不得檢出一符合一符合_符合重金屬(ppm)510<10符合<10符合<10符合砷(ppm)<2<2符合<2符合<2符合tableseeoriginaldocumentpage29注-表示未檢出本品三個批號的樣品經連續三個月的留樣觀察，各項檢測指標均符合藥典標準及企標標準，樣品放置三個月與0個月相比，各項檢測指標未見明顯變化，-說明本品質量基本穩定。實施例6:皮炎淨顆粒對SD大鼠血清IgE、IFN-y和IL-4的影響涉及英文縮略詞tableseeoriginaldocumentpage291實驗材料Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠)，60隻，均為雄性，30隻雌，34隻雄，體重180220克，浙江中醫藥大學實驗動物中心提供，合格證號SCXK(滬)2007-0005。皮炎淨顆粒，為黃褐色顆粒，按實施例4方法製備，批號用070320。卵白蛋白(OVA)，sigma公司，GradeV,Batch#:126k7009EG232-692-7大鼠免疫球蛋白E(IgE)酶聯檢測試劑盒(進口分裝，96孔)，浙大公司，批號0801021大鼠白細胞介素-4(IL-4)酶聯檢測試劑盒(進口分裝,96孔)，浙大公司，批號0801022大鼠幹擾素-y(IFN-y)酶聯檢測試劑盒(進口分裝慰康,96孔)，浙大公司，批號0801022三氯化鋁(A1C13),上海美興化工有限公司，分析純，批號070601氳氧化鈉(NaOH)，枝江中星化工試劑有限公司，分析純，批號20070321生理鹽水，回音必集團(江西)東亞製藥有限^^司，批號2007063018醋酸地塞米+>片(Dexamethasone,DXM)，浙江仙琚制業股份有限/>司，批號20070524戊巴比妥鈉，國營張家港市製藥廠，批號06122801其它試劑均為國產分析純。WH-861型渦旋混合器，太倉市科教器材廠HR-235BH冰箱，杭州華日電冰箱有限公司MDF-U32V超低溫冰箱，日本三洋(sanyo)980-A型超聲霧化器，上海醫械專機廠(有限公司)ZHZ5-2型水平離心機，北京醫用離心機廠SPX-150B-Z型生化培養箱，上海博迅實業有限公司醫療設備廠680型酶標4義，美國BIO-RAD/^司手術器械等。2實驗方法2.1分組將SD大鼠隨機分成6組，分別為模型組、正常對照組、皮炎淨顆粒低、中、高劑量組、陽性對照組(地塞米松)，每組各10隻。各組SD大鼠均在相同條件下自由飲水、攝食。2.2致敏參照Santing等的方法,將卯白蛋白(OVA)2mg和氫氧化鋁100mg溶於生理鹽水lmL製成2mg/ml的凝膠。於實驗的第l天，在每隻大鼠兩後足掌、腹股溝、腰、背、頸、腋窩共10點，每點0.05ml，皮下注射，同時腹腔注射0.5ml，共lml;正常對照組僅用不含卯白蛋白(OVA)10%氫氧化鋁凝膠lml，注射容積和方法同上。第14天，各組以0.2Q/。OVA0.5ml腹腔注射，加強致敏；正常對照組以0.2。/。的生理鹽水0.5ml代替。2.3劑量設計及給藥方法實驗第2天，各組開始按0.2ml/10g藥量(體積/體重)灌胃給藥。模型組與正常對照組灌胃給予生理鹽水；皮炎淨顆粒低、中、高劑量組分別用1.8g/kg、3.6g/kg、7.2g/kg的劑量灌胃給藥，每天l次，共28天；陽性對照組於第21、23、25、27、29天灌胃給予地塞米松(0.5mg.kg")，共5次。2.4激發實驗第21d,給藥後1小時，模型組、陽性對照組、皮炎淨顆粒各組動物分批置於20cmx30cmx50cm的密閉玻璃質容器中,用1%0VA氣霧吸入進行攻擊，每次30分鐘，以激發嗜喘；正常對照組用生理鹽水代替進行攻擊。每30天一次，直至第29天，共9次，以大鼠出現煩躁不安、呼吸急促、打噴噢、口周發紺、腹肌抽搐、反應遲鈍等表現，認為動物模型造模成功。2.5取血實驗第30天，腹腔內注射戊巴比妥鈉(30mg'kg")麻醉，經腹腔主靜脈取血。以3500r.min"速度，離心10分鐘，分離血清，-80"冰箱保存。2.64全測血清IgE、IL-4、IFN-y含量測定均採用ELISA法，具體操作方法按試劑盒說明進行。2.7統計結果以均數土標準差(x士5D)表示，統計方法採用單因素方差分析進行組間比較，以最小顯著差異法(LSD法)進行不同組別之間的兩兩比較(所用統計軟體為SPSS11.0),以屍<0.05作為顯著界限，屍<0.01作為極顯著界限。實驗流程圖參見圖4。3實驗結果3.1皮炎淨顆粒對異位性皮炎大鼠血清IgE含量的影響皮炎淨顆粒對異位性皮炎大鼠血清IgE含量的影響，結果見表24、圖5。表24:各組異位性皮炎大鼠血清IgE值比較(x士SD,w=10)組另'J動物數(只)劑量(g'kg—1)IgE(IU-mi;1)正常組10-0.34土0.06模型組100.43土0.09A陽性組10DXM5.0mg-kg-10.25±0.04**低劑量組101.80.30士0.03**中劑量組103.60.28±0.05**高劑量組107.20.32±0,08*注A代表模型組與正常組比較，P〈0.05;*代表高劑量組與模型組比較，P〈0.05;**代表陽性組、低、中劑量組與模型組比較，戶;？<0.01。從表24和圖5可以看出模型組SD大鼠的血清IgE含量高於正常組，差異具有統計學意義(屍<0.05),說明造模方法比較成功；陽性組(DXM,5.0mg.kg")、皮炎淨顆粒低劑量組(1.8g'kg")與中劑量組(3.6g.kg")SD大鼠的血清IgE含量極顯著低於模型組，差異具有統計學意義(F<0.01);皮炎淨顆粒高劑量組(7.2g.kg")SD大鼠的血清IgE含量低於模型組，差異具有統計學意義(屍<0.05)。提示皮炎淨顆粒低、中、高劑量對治療異位性皮炎具顯著性療效，能降低大鼠血清中IgE含量。3.2皮炎淨顆粒對異位性皮炎大鼠血清IFN-Y含量的影響皮炎淨顆粒對異位性皮炎大鼠血清IFN-Y含量的影響，結果見表25、圖6。表25:各組異位性皮炎大鼠血清IFN-y值比較(x士SD，w=10)~~"組另'jI動物數(只)I劑量(g'kg")IIFN-y(pg'mL-1)31正常組10—47.64±6.86模型組1039.31±3.91AA陽性組10DXM5.0mg.kg-148.71±11.12*低劑量組101.843.07±4.48中劑量組103.649.63±11.52*高劑量組107.256.34±13.03**注A厶代表模型組與正常組比較，IFN-y含量降低，p〈0.01;*代表陽性組、中劑量組與模型組比較，IFN-y含量升高，p〈0.05;**代表高劑量組與模型組比較，IFN-y含量升高，p0.05);中劑量組(3.6g'kg—M和陽性組的IFN-y含量均高於模型組(PO.05);而高劑量組(7.2g.kg")與模型組比較具極顯著差異(屍O.Ol)。皮炎淨顆粒低、中、高劑量各組的血清IFN-Y含量升高程度與藥物的濃度有一定的量效關係。結合表24,提示在異位性皮炎大鼠血清中，IFN-y與IgE均呈顯著負相關，說明IFN-y為負向調控IgE合成的重要因素之一。3.3皮炎淨顆粒對異位性皮炎大鼠血清IL-4含量的影響皮炎淨顆粒對異位性皮炎大鼠血清IL-4含量的影響，結果見表26、圖7。表26:各組異位性皮炎大鼠血清IL-4值比較(x±SD,"=10)組另'J動物數(只)劑量(g'kg—1)IL-4(pg-mL")正常組10-61.01±5.24模型組10-74.76土15.60A陽性組10DXM5.0mg'kg''61.64±8.33*低劑量組101.857.28±6.36*中劑量組103.657.63±7.03*高劑量組107.266.22±6.90注A代表模型組與正常組比較，P〈0.05;*代表陽性組、低、中劑量組與模型組比較，屍<0.05。表3和圖3結果表明，與正常組比較，異位性皮炎模型組血清中IL-4含量明顯增高(屍0.05);低、中劑量組和陽性組的IL-4含量均低於模型組(屍<0.05)。IL-4是最具代表性的Th2類細胞因子之一，在體內參與IgE的合成。結合表l,提示在異位性皮炎大鼠血清中，IL-4與IgE均呈顯著正相關。實驗結杲與相關文獻報導相一致，說明IL-4為正相調控IgE合32成的重要因素之一。3.4皮炎淨顆粒對異位性皮炎大鼠血清IFN-Y/IL-4平衡的影響皮炎淨顆粒對異位性皮炎大鼠血清IFN-y/IL-4平衡的影響，結果見表27、圖8。表27:各組異位性皮炎大鼠血清IFN-y/IL—4值比較(x士SZ),n=10)組另'J動物數(只)劑量(g'kg—1)IFN-丫/IL-4正常組10-0.78±0.13模型組10-0.55士0.12AA陽性組10DXM5.0mg.kg-10豫0.18**低劑量組101.80.76±0.11"中劑量組103.60.87±0.20**高劑量組107.20.85±0.20**注AA代表模型組與正常組比較，屍〈0.01;**代表陽性組、低劑量組、中劑量組、高劑量組與模型組比較，P<0.01。IFN-y與IL-4分別為Thl和Th2類細胞分泌的具有代表性的細胞因子，在IgE異常生成而導致異位性皮炎發作的因素中均起著相反的作用，二者相互制約，達到一種平衡狀態。表27和圖8結果表明，模型組的IFN-y/IL-4比值比正常組低(屍O.Ol),並且可以看出IFN-y/IL-4的比值與IgE相關程度很高，更說明了由於Th2類細胞因子佔優勢而導致的IFN-y/IL-4的失衡狀態對IgE生成具有重要意義。給藥後，皮炎淨顆粒低、中、高劑量組和陽性組與模型組比較均具極顯著差異(屍O.Ol)。提示皮炎淨顆粒可調節IL-4及IFN-y之間失衡而導致IgE異常合成，進而抑制異位性皮炎的發生。研究結果發現，異位性皮炎大鼠模型組血清IgE含量顯著高於正常對照組，說明可以通過監測AD大鼠的血清IgE水平來從側面了解其病情的變化。另一方面，給藥後，低、中劑量組和陽性組的IgE含量均低於模型組(PO.01);高劑量組與模型組比較(P《.05)。提示皮炎淨顆粒低、中、高劑量對治療異位性皮炎具顯著性療效，能有效降低大鼠血清中IgE含量，起到抗炎作用。以Th2優勢為特徵的Thl/Th2細胞亞群失衡是AD研究中的另一熱點。Thl以分泌IFN-y、Th2分泌IL-4為特徵。表25和圖6結果表明，與正常組比較，異位性皮炎大鼠模型組血清中IFN-y含量明顯降低(屍o.Ol),提示病理狀態下，Thl類細胞因子合成減少。給藥後，皮炎淨顆粒低劑量組與模型組比較變化不明顯(PX).05);中劑量組和陽性組的IFN-Y含量均高於模型組(屍O.05);而高劑量組與模型組比較具極顯著差異(屍<0.01)。說明在皮炎淨顆粒的作用下，Thl細胞分泌功能加強，所分泌的IFN-y明顯增加。表26和閨7結果表明，與正常組比較，異位性皮炎大鼠模型組血清中IL-4含量明顯增高(屍0.05);低、中劑量組和陽性組的IL-4含量均低於模33型組(屍<0.05)。說明皮炎淨顆粒還能夠抑制過高的Th2型細胞因子。從表27和圖8可以看出，給藥後，皮炎淨顆粒低、中、高劑量組和陽性組與模型組比較均具極顯著差異(屍o.01)。提示皮炎淨顆粒可調節IL-4及IFN-y之間失衡而控制IgE合成，進而抑制異位性皮炎的發生，調節AD大鼠TW/Th2的失衡狀態，這就合理的解釋了皮炎淨顆粒治療異位性皮炎的機理。由於皮炎淨顆粒沒有任何副作用，故應用於治療AD的前景令人樂觀。權利要求1.一種用於治療異位性皮炎的中藥提取物，製備所述中藥提取物的原料質量配比如下當歸10～30份蒼朮10～30份黃芩20～50份防己10～30份柴胡10～30份所述的中藥提取物包括揮髮油提取物和水提取物，所述的揮髮油提取物和水提取物分別按如下方法製備(1)揮髮油提取物稱取配方量的當歸和蒼朮，加入5～10倍質量的水浸漬後，於揮髮油提取器中回流提取6～10小時，過濾，當歸、蒼朮殘渣備用，揮髮油提取液冷卻用乙醚萃取1～3次，得到乙醚萃取液，除去萃取液中的乙醚和水，得到揮髮油；(2)水提取物將當歸、蒼朮殘渣與黃芩、防己和柴胡混合，加入水浸沒，浸漬後，回流提取1～3次，每次1～2小時，得到水提取液過濾去除濾渣，濾液濃縮至相對密度為1.05～1.10，加入95％乙醇至乙醇體積含量為40～60％，靜置12～24小時，過濾去除雜質，濃縮，得到浸膏乾燥，得到浸膏粉末。2.如權利要求1所述的中藥提取物，其特徵在於製備所述中藥提取物的原料質量配比如下當歸204分蒼朮20份黃茶31.4份防己20份柴胡20份。3.—種用於治療異位性皮炎的顆粒劑，製備所述顆粒劑的中藥原料質量配比如下當歸1030份，蒼朮1030份，黃茶2050份，防己1030份，柴胡1030份，製備所述顆粒劑的方法包括(1)揮髮油提取物稱取配方量的當歸和蒼朮，加入510倍質量的水浸漬後，於揮髮油提取器中回流提取6~10小時，過濾，當歸、蒼朮殘渣備用，揮髮油提取液冷卻用乙醚萃取1~3次，得到乙醚萃取液，除去萃取液中的乙醚和水，得到揮髮油；(2)水提取物將當歸、蒼朮殘渣與黃芩、防己和柴胡混合，加入水浸沒，浸漬後，回流提取13次，每次12小時，得到水提取液過濾去除濾渣，濾液濃縮至相對密度為1.05~1.10,加入80%~98%乙醇至乙醇體積含量為4060%，靜置1224小時，上清液過濾去除雜質，濃縮，得到浸膏乾燥，得到浸膏粉末。(3)揮髮油包合提取稱取P-環糊精，加入水，P-環糊精與水的用量比例為6~10g:100mL，加熱至完全溶解，降溫，攪拌得到P-環糊精水溶液；取步驟(l)所得的揮髮油，用等體積無水乙醇稀釋，得到揮髮油的乙醇溶液；將揮髮油的乙醇溶液於305(TC攪拌下滴入P-環糊精水溶液中，使揮髮油、p-環糊精與水的用量比例為lmL:6~10g:100mL，滴加完畢後攪拌13小時，冷藏1824小時，過濾、乾燥，得P-環糊精包合物；(4)取步驟(2)所得的浸膏粉末加入步驟(3)所得的P-環糊精包合物，攪拌均勻，制粒，乾燥，得到所述治療異位性皮炎的顆粒劑。4.如權利要求3所述的顆粒劑，其特徵在於所述的揮髮油提取物按如下方法製備稱取配方量的當歸和蒼朮，加入510倍質量的水浸漬0.5~2小時，於揮髮油提取器中回流提取610小時，過濾，當歸、蒼朮殘渣備用，提取液冷卻後，用乙醚萃取13次，得到乙醚萃取液，萃取液加無水硫酸鈉脫水，過濾取濾液水浴揮幹乙醚，得到揮髮油。5.如權利要求3所述的顆粒劑，其特徵在於所述的水提取物按如下方法製備將提取揮髮油後的當歸、蒼朮殘渣與黃芩、防己和柴胡混合，加入1015倍質量的水，浸潰0.52小時後，回流提取1~3次，每次1~2小時，得到水提^F又液過濾去除濾渣，濾液濃縮至相對密度為1.051.10,加入95%乙醇至乙醇體積含量為40~60%,靜置1224小時，上清液過濾去除雜質，濃縮，得到浸膏乾燥，得到水提取物浸膏粉末。6.如權利要求1所述的顆粒劑，其特徵在於製備所述顆粒劑的中藥原料質量配比如下當歸20份，蒼朮20份，黃茶31.4份，防己20份，柴胡20份；製備所述顆粒劑的方法如下(1)當歸、蒼朮揮髮油提取稱取配方量的當歸和蒼朮，加入8倍質量的水浸漬0.5小時，於揮髮油提取器中回流提取8小時，提取液冷卻後，用乙醚萃取3次，合併得到乙醚萃取液，萃取液加無水硫酸鈉脫水，過濾取濾液水浴揮幹乙醚，得到揮髮油；(2)當歸、蒼朮的揮髮油包合稱取(3-環糊精，加入水，P-環糊精與水的用量比例為6g:100mL,加熱至完全溶解，降溫至4(TC，得到p-環糊精水溶液；取揮髮油，用等體積無水乙醇稀釋，得到揮髮油的乙醇溶液；將揮髮油的乙醇溶液於40。C攪拌下滴入P-環糊精水溶液中，使揮髮油、P-環糊精與水的用量比例為1mL:6~10g:lOOmL,滴加完畢後攪拌3小時，冷藏24小時，過濾、乾燥，得粉狀P-環糊精包合物；(3)水提取物的提取將步驟(1)提取揮髮油後的當歸、蒼朮殘渣與防己、柴胡和水燁過的黃芩混合，加入12倍質量的水，浸漬0.5小時後，回流提取2次，每次1小時，得到水提取液過濾去除濾渣，濾液濃縮至相對密度為1.10,加入95%乙醇至乙醇體積含量為50%,靜置12小時，取上清液過濾去除雜質，濃縮，得到浸膏乾燥，得到7]c提取物浸膏粉末；(4)取步驟(3)得到的浸膏粉末加入步驟(2)製得的P-環糊精包合物，攪拌均勻，噴85%乙醇制軟材，制粒才幾制粒，乾燥，得到所述治療異位性皮炎的顆粒劑。全文摘要本發明提供了一種用於治療異位性皮炎的中藥提取物及其顆粒劑。製備所述中藥提取物的原料質量配比如下當歸10～30份，蒼朮10～30份，黃芩20～50份，防己10～30份，柴胡10～30份。本發明提取物選擇臨床有效方劑，全方是以補血養血、健脾祛風中藥為主藥，輔以疏肝解鬱，清熱利溼，祛風止癢之中藥經科學加工而成，經臨床研究表明，治療AD療效顯著；皮炎淨顆粒毒性很低，臨床擬用劑量安全，對實驗動物的中樞神經系統、呼吸系統和心血管系統等方面均無明顯的興奮和抑制作用，是一種安全、穩定的純中藥複方製劑，並有望開發成為安全有效的治療AD的新藥；且該製劑工藝穩定，參數規範合理，適於工業化大生產。文檔編號A61K36/185GK101491575SQ20081016341公開日2009年7月29日申請日期2008年12月18日優先權日2008年12月18日發明者餘土根,張春椿,毅曹,朱金土,熊耀康,陶茂燦申請人:浙江省中醫院