治療或改善偏頭痛的方法與流程

2023-10-09 19:32:09 2

本申請要求2014年6月23日提交的美國臨時申請號62/015,727和2015年1月29日提交的美國臨時申請號62/109,386的權益和優先權，所述申請各自特此以引用的方式整體併入。

背景

偏頭痛是與復發的致衰弱發作相關的原發性、陣發性頭痛病症，並且通常通過集中於血管引發劑的現有藥物療法不良控制。偏頭痛發作的發病通常通過由皮質擴散性抑制現象引起的閃爍暗點或偏頭痛先兆預示(SD；參見Ayata，Headache，50：725-30，2010；Eikerman-Haerter等人，Curr.Neurol.Neurosci.Rep.，10：167-73，2010；以及Sánchez-del-Rio等人，Curr.Opin.Neurol.，17(3)：289-93，2004)。SD是由細胞外鉀的局部增加和穀氨酸的釋放觸發的皮質電圖活動的緩慢傳播抑制，其產生跨大皮質區域的緩慢去極化的自傳播波。大約15％-30％的偏頭痛患者經歷具有先兆的偏頭痛。

哺乳動物的中樞神經系統(CNS)採用許多神經活性肽以實現腦和脊髓內的特化信號傳導，包括神經活性肽生長抑素、縮膽囊素、VIP、P物質、腦啡肽、神經肽Y(NPY)、神經降壓素、TRH、CCK和強啡肽。(通常參見The Biochemical Basis of Neuropharmacology，Cooper，Bloom and Roth，第5版，Oxford University Press，New York，1986)。對在CNS中起作用的複雜信號傳導途徑的仔細闡明已導致鑑別由這些神經活性肽調節的特異性受體，所述神經活性肽為與CNS相關的各種病症提供重要的治療靶標。

N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受體(NMDAR)是牽涉在神經退行性病症(包括中風相關的腦細胞死亡、驚厥性病症)以及學習和記憶中的這樣一種受體。NMDAR還在調節中樞神經系統中的正常突觸傳遞、突觸可塑性和興奮毒性中起中心作用。NMDAR進一步參與長時程增強(LTP)。LTP是為學習和記憶的基礎的神經元連接的持續加強(參見Bliss和Collingridge，1993，Nature 361：31-39)。

已經在中樞神經系統(CNS)中表徵了穀氨酸受體的兩種一般類別。它們是代謝型穀氨酸受體(其屬於信號傳導蛋白的G-蛋白偶聯受體家族)和離子移變的穀氨酸受體(Muir和Lees，Stroke，1995，26，503-513)。離子移變類別通過激活它們的選擇性配體進一步細分為AMPA、紅藻氨酸和NMDA受體亞型。

已經針對潛在治療用途開發了NMDA-調節小分子激動劑和拮抗劑化合物。然而，這些中的許多與非常窄的治療指數和不期望的副作用相關，所述副作用包括幻覺、共濟失調、非理性行為和顯著毒性，所有這些限制了它們的有效性和/或安全性。

因此，仍然需要使用提供增加的功效和減少的不良副作用的化合物進行的偏頭痛和其他相關疾病的改善治療。

概述

在某些實施方案中，本公開涉及一種治療偏頭痛的方法，所述方法包括向有需要的患者施用藥學有效量的GLYX肽。在某些實施方案中，所述偏頭痛可以是陣發性偏頭痛、慢性偏頭痛、視網膜性偏頭痛、眼肌麻痺性偏頭痛、非頭痛性偏頭痛、偏頭痛性病症、月經性偏頭痛、腹型偏頭痛、兒童期周期性症候群和/或叢集性頭痛。在某些實施方案中，所述偏頭痛是無先兆的偏頭痛(普通偏頭痛)。在某些實施方案中，所述偏頭痛是有先兆的偏頭痛(典型偏頭痛)。在某些實施方案中，所述偏頭痛伴隨異常性疼痛。

例如，所公開的化合物可與NMDAR的甘氨酸位點在功能上相互作用或調節NMDAR的甘氨酸位點的作用以用於治療偏頭痛(例如，陣發性偏頭痛、慢性偏頭痛、視網膜性偏頭痛、眼肌麻痺性偏頭痛、非頭痛性偏頭痛、偏頭痛性病症、月經性偏頭痛、腹型偏頭痛、兒童期周期性綜合症或叢集性頭痛)。

在某些實施方案中，本公開涉及一種治療、抑制和/或預防皮層擴散性抑制(SD)的方法，所述方法包括向有需要的患者施用藥學有效量的GLYX肽。在某些實施方案中，本公開涉及治療或改善有需要的患者的長期偏頭痛後後遺症，其包括向所述患者施用藥學有效量的GLYX肽。在某些實施方案中，所述GLYX肽具有以下結構：

或其藥學上可接受的鹽，或其具有NMDAR部分激動劑活性的衍生物。一方面，本發明涉及一種治療有需要的患者的偏頭痛的方法，所述方法包括向所述患者施用藥學有效量的由下式表示的化合物：

或其藥學上可接受的鹽。另一方面，本發明涉及一種治療、抑制和/或預防有需要的患者的皮層擴散性抑制的方法，所述方法包括向所述患者施用藥學有效量的由下式表示的化合物：

或其藥學上可接受的鹽。另一方面，本發明涉及一種治療或改善有需要的患者的長期偏頭痛後後遺症的方法，所述方法包括向所述患者施用藥學有效量的由下式表示的化合物：

或其藥學上可接受的鹽。

如下文更詳細地描述，當在先兆施用時有效的藥物將是對患者有效的，例如通過允許在偏頭痛的早期階段時幹預。預期本文描述的方法適用於治療有先兆的偏頭痛，所述治療包括在先兆時施用GLYX肽。

附圖簡要說明

圖1示出海馬切片的CA1場中的局灶性高[K+]誘導的擴散性抑制(SD)，從而導致反映神經元和神經膠質的大規模去極化的擴散波的亮度變化。

圖2示出在腦切片中引發的SD的數據；在起始位點處SD的個別連續事件的基線面積之間不存在顯著差異(Bonferroni多重比較檢驗，P＞0.20)，從而指示GLYX-13不會改變SD的起始。

圖3示出證明GLYX-13增加SD起始的不應期的數據。SD能夠在對照切片中的前一SD之後五分鐘成功誘發(對照)，但不能在用GLYX-13處理的切片中引發(GLYX-13 30』)。

圖4A示出亮度增加的SD「先兆」從起始移液管擴散並且在切片上傳播，並且可用於計算SD傳導速度(圖4B)。

圖5示出用於分析6個隨後SD的使用重複測量值的單向方差分析(ANOVA)以便測試SD的重複事件是否維持穩定速度並且GLYX-13是否影響SD傳導速度。

圖6A示出在對照錐體神經元中響應於SD的兩個事件的棘收縮，而圖6B例示在10μM GLYX-13存在下的相同過程；圖6C指示GLYX-13拯救SD後棘大小的恢復。

圖7A示出(在雌激素處理的和非油處理的)大鼠中擴散性抑制的擴散距離，並且圖7B示出(在雌激素處理的和非油處理的)大鼠中擴散性抑制的擴散速度，從而指示與油處理的大鼠相比擴散速度更快。

圖8示出來自雌激素處理的大鼠的切片中的SD比油處理的大鼠行進更長。

圖9A示出在GLYX-13存在下，與大鼠實驗中的SD相關的亮度變化被延遲；圖9B指示在GLYX-13存在下誘發SD。

圖10示出在施加GLYX-13(F(1，8)＝3.1；p＜0.05)之前和之後GLYX-13對來自雌激素處理的大鼠的SD傳播速度的影響；以及兩組之間GLYX-13的預暴露(F(1，8)＝4.2；p＜0.05)。

圖11A-11B示出爆炸後24小時在PEL測試中通過rapastinel(3mg/kg IV；爆炸後1小時)拯救爆炸誘導的學習缺陷。圖11A示出爆炸恢復時間(正常走動的潛伏期)數據。圖11B示出使用受試者間設計在爆炸後24小時進行的單次3分鐘積極情緒學習(PEL)試驗階段的結果。N＝4-6/組。*P＜0.05(圖11A)ANOVA，或(圖11B)fisher PLSD事後檢驗，rapastinel+TBI對比媒介物+TBI。

詳述

偏頭痛分類

偏頭痛在1988年首次全面分類。國際頭痛學會最近更新了其2004年的頭痛分類。根據這種分類，偏頭痛主要是頭痛連同緊張型頭痛和叢集性頭痛等。

偏頭痛被分成七個亞類(其中一些包括進一步細分)：

無先兆的偏頭痛或「普通偏頭痛」涉及不伴隨先兆的偏頭痛。

有先兆的偏頭痛或「典型偏頭痛」通常涉及伴隨先兆的偏頭痛。較不常見的是，先兆可在沒有頭痛或在非偏頭痛性頭痛的情況下發生。兩種另外種類是家族性偏癱性偏頭痛和散發性偏癱性偏頭痛，其中人患有有先兆的偏頭痛並伴有運動無力。如果近親屬患有相同病狀，則它被稱為「家族性的」，否則它被稱為「散發性的」。另一種類是基底型偏頭痛，其中頭痛和先兆伴隨說話困難、世界旋轉、耳鳴或許多其他腦幹相關症狀，但不伴隨運動無力。這種類型最初被認為是由於基底動脈(供應腦幹的動脈)的痙攣。有先兆的偏頭痛的診斷指南例如在Eriksen等人，European Journal of Neurology 11：583-591，2004和International Classification of Headache Disorders，第二版(ICHD-II)中找到。有先兆的偏頭痛的亞型包括在ICHD-II中列出的那些，如伴有偏頭痛性頭痛的典型先兆(IHS 1.2.1)、伴有非偏頭痛性頭痛的典型先兆(IHS 1.2.2)、無頭痛的典型先兆(IHS 1.2.3)、家族性偏癱性偏頭痛(IHS 1.2.4)、散發性偏癱性偏頭痛(IHS 1.2.5)以及基底型偏頭痛(IHS 1.2.6)。

通常為偏頭痛前兆的兒童期周期性症候群包括周期性嘔吐(偶爾的強烈嘔吐期)、腹型偏頭痛(腹痛，通常伴有噁心)和兒童良性陣發性眩暈(偶發眩暈發作)。

視網膜性偏頭痛涉及伴隨視覺障礙或甚至一隻眼睛暫時失明的偏頭痛。

偏頭痛的併發症描述異常長或異常頻繁的或與癲癇或腦損傷相關的偏頭痛和/或先兆。

可能的偏頭痛描述具有偏頭痛的一些特徵的病狀，但是其中不存在足夠證據來將其肯定地診斷為偏頭痛(在存在並發藥物過度使用的情況下)。

慢性偏頭痛是偏頭痛的併發症，並且是滿足偏頭痛的診斷標準的頭痛且發生持續更大時間間隔。具體地說，大於或等於15天/月持續超過3個月。

存在偏頭痛的四個可能的階段，但是並非所有階段都必須經歷：(1)前驅期，其在頭痛發作前數小時和數天發生；(2)先兆期，其在頭痛即將發作前出現；(3)疼痛期，也稱為頭痛期；和(4)頭痛後期，在偏頭痛發作結束之後經歷的效應。

前驅或前兆症狀在約60％的患有偏頭痛的患者中發生，在疼痛或先兆開始之前兩小時至兩天發病。這些症狀可包括各種各樣的現象，包括：情緒變化、易怒、抑鬱或欣快、疲勞、對某些食物的渴望、肌肉僵硬(特別是在頸部)、便秘或腹瀉以及對氣味或噪聲的敏感性。這可在患有有先兆的偏頭痛或無先兆的偏頭痛的患者中發生。

先兆是在頭痛之前或期間發生的短暫局灶性神經學現象。它們在幾分鐘內逐漸出現，並且通常持續不到60分鐘。症狀在本質上可以是視覺、感覺或運動的，並且許多人經歷多於一種。視覺效應最常發生；它們在達99％的病例中發生並且在超過50％的病例中不伴有感覺或運動效應。視覺障礙通常包括閃爍暗點(在視野中部分改變的區域，所述區域閃爍並且可幹擾人閱讀或駕駛的能力。)這些通常在視覺中心附近開始，並且然後向外擴散至具有鋸齒形線的側部，所述側部被描述為看起來像城堡的防禦工事或牆壁。通常所述線是呈黑色和白色，但一些人也看到彩色線。一些人失去其視野的一部分(稱為偏盲)，而其他人經歷模糊。

感覺先兆是第二最常見類型；它們在30％-40％的有先兆的人中發生。通常，發麻的感覺從手和手臂的一側上開始，並且擴散至同一側的鼻-口區域。麻木通常在麻刺感已經過去而位置感覺喪失之後發生。先兆期的其他症狀可包括：言語或語言障礙、世界旋轉以及不太常見的運動問題。運動症狀指示這是偏癱性偏頭痛，並且與其他先兆不同，無力通常持續超過一小時。

先兆也可在無隨後頭痛的情況下發生。非頭痛性偏頭痛(也稱為沉默性偏頭痛)相對罕見，並且包括先兆和其他症狀但無隨後頭痛(即，無疼痛期)。

在疼痛期期間，頭痛通常是單側、悸動和中度至重度強度的。它通常逐漸發生，並且通過身體活動加重。然而在超過40％的病例中，疼痛可以是雙側的，並且頸部疼痛通常是相關聯的。雙側疼痛在患有無先兆的偏頭痛患者中特別常見。較不常見的疼痛可主要發生在頭部的後部或頂部。疼痛通常在成人中持續4至72小時，然而在幼兒中通常持續不到1小時。發作的頻率是可變的，從一生幾次至一周若干次，平均為約一月一次。

疼痛通常伴隨噁心、嘔吐、對光的敏感性、對聲音的敏感性、對氣味的敏感性、疲勞以及易怒。在基底型偏頭痛(具有與腦幹相關的神經學症狀或具有身體兩側的神經學症狀的偏頭痛)中，常見效應包括：世界旋轉、輕度頭痛和混亂的感覺。噁心在幾乎90％的人中發生，並且嘔吐在約三分之一中發生。其他症狀可包括：視力模糊、鼻塞、腹瀉、尿頻、蒼白或出汗。頭皮腫脹或壓痛可能發生，頸部僵硬也可能發生。

偏頭痛的效應可在主要頭痛已經結束之後持續數天；這被稱為偏頭痛後期。許多人報告在偏頭痛區域中的疼痛感覺，並且一些人報告在頭痛已經過去後思維受損持續數天。患者可能感到疲倦並且具有頭痛、認知障礙、胃腸道症狀、情緒變化和乏力。

GLYX肽

GLYX-13是新近研發的速效、持久性抗抑鬱劑，其對N-甲基-D-天冬氨酸穀氨酸受體(NMDAR)的活化具有前所未有的調節作用。這種試劑(其在NMDA受體上其活化所需的專性協同激動劑甘氨酸位點處起作用)使所述關鍵受體的活化標準化，從而在其太低時使其增加，並且在其太高時抑制它。通過這種作用，GLYX-13能夠增強長時程增強(LTP)的誘導，同時抑制突觸強度的LTD，並且恢復來自衰老動物的海馬切片中的正常LTP。

如本文所用，術語「GLYX肽」是指具有NMDAR甘氨酸位點部分激動劑/拮抗劑活性的肽。GLYX肽可通過熟知的重組或合成方法獲得，如在美國專利5,763,393和4,086,196中描述的方法，所述專利以引用的方式併入本文。在一些實施方案中，GLYX是指具有胺基酸序列Thr-Pro-Pro-Thr或L-蘇氨醯基-L-脯氨醯基-L-脯氨醯基-L-蘇氨酸醯胺的四肽。

例如，GLYX-13是指被描述為下式的化合物：

還涵蓋GLYX-13的多晶型物、同源物、水合物、溶劑化物、游離鹼和/或適合的鹽形式，如但不限於乙酸鹽。肽可以是環化或非環化形式，如US 5,763,393中所進一步描述。在一些實施方案中，GLYX-13類似物可包括在Thr或Pro基團中的一個或多個上的部分的插入或缺失，如CH2、OH或NH2部分的缺失。在其他實施方案中，GLYX-13可任選地被一個或多個滷素、C1-C3烷基(任選地被滷素或氨基取代)、羥基和/或氨基取代。NMDAR的甘氨酸位點部分激動劑公開於US 5,763,393、US 6,107,271和Wood等人，NeuroReport，19，1059-1061，2008中，其全部內容以引用的方式併入本文。

可以理解，在此公開的肽可包括天然和非天然胺基酸，例如所有天然胺基酸(或其衍生物)、所有非天然胺基酸(或其衍生物)、或天然和非天然胺基酸的混合物。例如，GLYX-13中的一個、兩個、三個或更多個胺基酸可各自獨立地具有D-或L-構型。

GLYX-13可主要在含NR2B的NMDAR處起作用，並且可能不展現已知NMDAR調節劑如CPC-101，606和氯胺酮的典型副作用。在某些實施方案中，當以治療有效量施用至受試者時，GLYX-13可產生基本上無鎮靜的抗偏頭痛或其他治療作用。在其他實施方案中，GLYX-13可能不具有濫用潛力(例如，可能不是易成癮的)。

在一些實施方案中，GLYX-13可增加AMPA GluR1絲氨酸-845磷酸化。在某些實施方案中，糖原合酶激酶3β(GSK-3β)可被GLYX-13活化。在一些情況下，β-連環蛋白的水平可在施用GLYX-13後改變。

在一些實施方案中，GLYX-13或包含GLYX-13的組合物可相對於血漿水平提供更好的靜脈內體內效力和/或腦水平濃度。

另外，與甘氨酸位點拮抗劑如L-701，324或具有窄治療指數的產生治療作用與共濟失調之間非常窄的劑量範圍的其他甘氨酸位點拮抗劑相比，GLYX-13可具有寬治療指數。例如，L-701，324在產生共濟失調的劑量下具有抗驚厥作用(Bristow等人，JPET 279：492-501，1996)。類似地，一系列Merz化合物在產生共濟失調的劑量下具有抗驚厥作用(Parsons等人，JPET283：1264-1275，1997)。

方法

一方面，本發明涉及一種治療有需要的患者的偏頭痛的方法，所述方法包括向所述患者施用藥學有效量的由下式表示的化合物：

或其藥學上可接受的鹽。

在某些實施方案中，所述化合物以約0.01mg/kg至約1000mg/kg或約1mg/kg至約500mg/kg所述化合物的劑量施用至所述患者。

在某些實施方案中，所述偏頭痛是陣發性偏頭痛、慢性偏頭痛、視網膜性偏頭痛、眼肌麻痺性偏頭痛、非頭痛性偏頭痛、偏頭痛性病症、月經性偏頭痛、腹型偏頭痛、兒童期周期性症候群或叢集性頭痛。

在某些實施方案中，所述偏頭痛是陣發性偏頭痛、慢性偏頭痛、視網膜性偏頭痛、眼肌麻痺性偏頭痛、非頭痛性偏頭痛或叢集性頭痛。

在某些實施方案中，所述偏頭痛是有先兆的偏頭痛(典型偏頭痛)。

在某些實施方案中，所述偏頭痛是無先兆的偏頭痛(普通偏頭痛)。

在某些實施方案中，所述偏頭痛伴隨異常性疼痛。

在某些實施方案中，所述方法包括施用約1至10mg/kg、約10mg/kg至約250mg/kg、約20mg/kg至約150mg/kg、約30mg/kg至約125mg/kg、約40mg/kg至約110mg/kg、約50mg/kg至約100mg/kg、約60mg/kg至約90mg/kg或約70mg/kg至約90mg/kg所述化合物。

在某些實施方案中，所述方法包括施用約1mg/kg、約2.5mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg、約15mg/kg、約20mg/kg、約25mg/kg、約30mg/kg、約50mg/kg、約70mg/kg或約100mg/kg所述化合物。

在某些實施方案中，所述方法包括約一天兩次、約每天、每2天、每3天、每4天、每5天、約一周一次、約每兩周或約每四周施用所述化合物。

另一方面，本發明涉及一種治療、抑制或預防有需要的患者的皮層擴散性抑制或由皮層擴散性抑制引起的疾病或病狀的方法，所述方法包括向所述患者施用藥學有效量的由下式表示的化合物：

或其藥學上可接受的鹽。

另一方面，本發明涉及一種治療或改善有需要的患者的長期偏頭痛後後遺症的方法，所述方法包括向所述患者施用藥學有效量的由下式表示的化合物：

或其藥學上可接受的鹽。

在某些實施方案中，所述化合物以約0.01mg/kg至約1000mg/kg所述化合物的劑量施用至所述患者。在某些實施方案中，所述化合物以約1mg/kg至約500mg/kg所述化合物的劑量施用至所述患者。

在某些實施方案中，所述方法包括施用約1mg/kg至10mg/kg、約1mg/kg至20mg/kg、約10mg/kg至約250mg/kg、約20mg/kg至約150mg/kg、約30mg/kg至約125mg/kg、約40mg/kg至約110mg/kg、約50mg/kg至約100mg/kg、約60mg/kg至約90mg/kg或約70mg/kg至約90mg/kg所述化合物。

在某些實施方案中，所述方法包括施用約20mg/kg、約25mg/kg、約30mg/kg、約50mg/kg、約70mg/kg、1mg/kg、5mg/kg、10mg/kg、15mg/kg、20mg/kg或約100mg/kg所述化合物。

在某些實施方案中，所述方法包括約一天兩次、約每天、每2天、每3天、每4天、每5天、約一周一次或約每兩周或例如每月施用所述化合物。

在某些實施方案中，所述方法還包括與阿片樣物質、抗抑鬱劑、抗癲癇劑、非類固醇抗炎藥(NSAID)、血清素5HT1B/1D激動劑、N-甲基-D-天冬氨酸拮抗劑或抗炎化合物共同施用。

在許多實驗情況下，NMDAR活化可促進SD或甚至是SD現象必不可少的。因此，防止NMDAR過度活化的化合物可以是用於減輕且甚至預防偏頭痛發作的發病的重要新療法。例如，下文論述的GLYX-13抑制體外海馬切片中SD的產生和傳播。在某些實驗中，GLYX-13可通過細胞外鉀濃度的局部增加來完全阻止SD的誘導，和/或如果不完全阻斷SD則可減慢SD傳播的速率。此外，GLYX-13可在SD後改進樹突棘返回至其原始大小。例如，本文提供預防性地和/或急性治療患者的偏頭痛的方法。這種施用可改善患者的偏頭痛發作的嚴重性(或在一些實施方案中，中止)。

在某些實施方案中，患者是人。所涵蓋的患者包括女性患者和/或青少年患者。

本文還提供治療治療-耐藥的患者的偏頭痛(例如，陣發性偏頭痛、慢性偏頭痛、視網膜性偏頭痛、眼肌麻痺性偏頭痛、非頭痛性偏頭痛、偏頭痛性病症、月經性偏頭痛、腹型偏頭痛、兒童期周期性綜合症或叢集性頭痛)或治療難治性偏頭痛(例如患有對至少一種或至少兩種其他化合物或治療劑的適當療程沒有反應和/或尚未反應的偏頭痛的患者)的方法。例如，本文提供一種治療治療耐受的患者的偏頭痛(例如，陣發性偏頭痛、慢性偏頭痛、視網膜性偏頭痛、眼肌麻痺性偏頭痛、非頭痛性偏頭痛、偏頭痛性病症、月經性偏頭痛、腹型偏頭痛、兒童期周期性綜合症或叢集性頭痛)的方法，所述方法包括a)任選地將所述患者鑑別為治療耐藥的，以及b)向所述患者施用有效劑量的GLYX-13。在某些實施方案中，所述偏頭痛是有先兆的偏頭痛。

在一個實施方案中，本文提供急性治療有需要的患者的偏頭痛(例如，陣發性偏頭痛、慢性偏頭痛、視網膜性偏頭痛、眼肌麻痺性偏頭痛、非頭痛性偏頭痛、偏頭痛性病症、月經性偏頭痛、腹型偏頭痛、兒童期周期性綜合症或叢集性頭痛)的方法，所述方法包括例如以單個單位劑量施用有效量的GLYX肽。例如，在一個實施方案中，本文涵蓋一種在偏頭痛發作發病時治療有需要的患者的偏頭痛的方法，所述方法包括急性施用(例如，單劑量)有效量的GLYX-13。此類方法可在所述施用之後緩解患者的至少一種偏頭痛症狀持續約2周或更短、1周或更短、1天或更短或1小時或更短(例如15分鐘或更短、半小時或更短)。在一些實施方案中，此類方法可在所述施用後緩解患者的至少一種偏頭痛症狀持續約1天或更長、1周或更長或2周或更長。例如，本文提供一種方法，所述方法包括向患有偏頭痛的患者施用有效量的GLYX肽，其中相較於施用用於治療偏頭痛的另一種藥劑的同一患者，所述患者在第一次施用GLYX肽後基本上更早地基本上緩解至少一種偏頭痛症狀。本領域的技術人員將了解，此類急性施用方法在醫院或門診環境中可能是有利的。本文所述的方法還可適用於治療在有先兆的偏頭痛期間發生的異常性疼痛。

本發明的方法還可用於治療患有抑鬱症、患有創傷性腦損傷、癲癇或處於中風風險的患者。例如，在一個實施方案中，本文提供一種治療創傷性腦損傷的方法，所述方法包括施用有效量的GLYX肽，例如GLYX-13。在另一個實施方案中，提供一種治療癲癇的方法，所述方法包括施用有效量的GLYX肽，例如GLYX-13。

除了心血管病狀外，有先兆的偏頭痛患者可能處於其他神經學和/或心理學病狀和病症的增加的風險。已經顯示，例如，有先兆的偏頭痛與重性抑鬱症或自殺企圖的共現增加了發展無端癲癇發作的風險(Hesdorffer等人，Epilepsy Res.75(2-3)：220-223，2007)。與有先兆的偏頭痛相關的其他病狀包括顯著更高的NO活性標誌物、增加的抑鬱症發病率以及中風的遺傳生物標誌物相關性顯著大於一般人群(Etminan等人，#MJ330(7482)：63，2005)。患有這些病狀中的任一種或處於這些病狀中的任一種的風險的偏頭痛患者可服用藥物來治療或控制這些疾病，並且這些藥物可能與當前使用的用於治療有先兆的偏頭痛的藥物不利地相互作用。如本文所示，這些病狀中的一些是曲坦療法的的禁忌症(例如，中風和舒馬曲坦療法)。此外，FDA在2006年發布了關於血清素症候群的公共健康忠告，血清素症候群是當曲坦與為血清素再攝取抑制劑(SSRI)或選擇性血清素/去甲腎上腺素再攝取抑制劑(SNRI)的某些抗抑鬱劑一起使用時可能發生的一種威脅生命的病狀。因此，本文所述的方法可適用於治療患有抑鬱症的患者或已經患有中風或處於中風風險的患者。

劑量

本公開的任何組合物的劑量將取決於患者的症狀、年齡和體重、待治療或預防的病症的性質和嚴重程度、施用途徑以及主題組合物的形式而變化。任何主題製劑可以單劑量或以分次劑量施用。用於本公開的組合物的劑量可通過本領域的技術人員已知或如本文教導的技術容易地確定。一般來說，當化合物以例如介於0.05mg與3000mg之間(作為固體形式測量的)，例如約10mg至約500mg或例如約1至約200mg/kg的每日劑量施用至人時可獲得令人滿意的結果。劑量範圍包括，例如介於10-1000mg(例如，50-800mg)之間。在一些實施方案中，施用50、100、150、200、225、250、300、350、400、450、500、550、600、650、700、750、800、850、900、950或1000mg所述化合物。或者，可使用患者的體重來計算劑量的量。例如，施用至患者的化合物或其藥物組合物的劑量可在1-500mg/kg(例如，5-250mg/kg)的範圍內。在示例性非限制性實施方案中，劑量可在5-200mg/kg(例如，1、2、2.5、5、10、15、20、25、30、35、40、45或50mg/kg)或15-100mg/kg(例如，55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190或200mg/kg)的範圍內。在示例性非限制性實施方案中，劑量可在1-15mg/kg、50-100mg/kg、60-90mg/kg或70-80mg/kg的範圍內。

GLYX-13可提供高治療指數。例如，GLYX-13在約1至約10mg/kg、約10至約200mg/kg，例如約30mg/kg、約75mg/kg或約100mg/kg的靜脈內或皮下劑量範圍的情況下可以是治療有效的。在一些實施方案中，在例如500mg/kg靜脈內的劑量下不發生共濟失調。

用於療法中所需的GLYX肽的治療有效量隨所治療的病狀的形式、所需的治療時間長度、患者的年齡和狀況而變化，並且最終由主治醫師確定。所需劑量可方便地以持續兩周、一周、6、5、4、3、2或1天有效的單個劑量施用，或作為以適當時間間隔施用的多個劑量，例如作為每天兩個、三個、四個或更多個亞劑量施用。

有效劑量或量以及對製劑的施用時間的任何可能的作用可能需要針對本公開的任何具體組合物加以鑑別。這可通過如本文所述的常規實驗，使用一組或多組動物(優選每組至少5隻動物)或(在適當的情況下)在人試驗中完成。任何主題組合物以及治療或預防方法的有效性可通過施用所述組合物且通過測量一個或多個適用指數評估所述施用的作用，並且將這些指數的治療後值與在治療之前相同指數的值進行比較來評估。

在給定患者中將產生最有效治療的任何特定主題組合物的準確給藥時間和量將取決於主題組合物的活性、藥代動力學和生物利用度、患者的生理狀況(包括年齡、性別、疾病類型和階段、一般身體狀況、對給定藥物劑量和類型的反應性)、施用途徑等。本文提供的指南可用於優化治療，例如確定最佳給藥時間和/或量，其將僅需要包括監測受試者和調節劑量和/或時間的常規實驗。

在治療受試者時，可通過在治療時期期間的預定時間測量一個或多個相關指數來監測患者的健康。可根據這種監測的結果優化治療(包括施用的組合物、量、次數和製劑)。可周期性地重新評價患者以通過測量相同的參數來確定改善的程度。可基於這些重新評價來進行對所施用的主題組合物的量的調整以及可能對施用時間的調整。

治療可以低於化合物的最佳劑量的較小劑量開始。此後，劑量可以較小增量增加，直到達到最佳治療作用。

主題組合物的使用可降低所述組合物中包含的任何單獨藥劑的所需劑量，因為不同藥劑的起效和作用持續時間可以是互補的。

主題組合物的毒性和治療功效可通過細胞培養物或實驗動物中的標準藥學程序來確定，例如以用於測定LD50和ED50。

可在配製用於人的劑量範圍中使用由細胞培養試驗和動物研究獲得的數據。任何主題組合物的劑量優選處於包括ED50同時具有極小或無毒性的循環濃度的範圍內。劑量可取決於所採用的劑型和所利用的施用途徑而在這個範圍內變化。對於本公開的組合物，可從細胞培養測定初步估計治療有效劑量。

在某些實施方案中，GLYX肽作為預防性措施(即，在前驅期之前)施用。在某些實施方案中，GLYX肽在前驅期期間施用。在某些實施方案中，GLYX肽在先兆時施用。「在先兆時」意指在先兆發作之後且在偏頭痛發作之前的任何時間。在某些實施方案中，GLYX肽在偏頭痛發作之後施用。在某些實施方案中，GLYX肽在頭痛後期期間施用，例如以減輕其症狀。

如本文所用的術語「預防」是指預防本文所述的疾病、病症或病狀的一種或多種症狀或病狀(例如，疼痛或有先兆的偏頭痛以及伴有或不伴有異常性疼痛的偏頭痛)的預防性治療或治療。預防性治療可例如在所述疾病、病症或病狀發作之前的事件(例如，在偏頭痛先兆)之前(「暴露前預防」)或之後(「暴露後預防」)開始。包括施用本文所述的GLYX肽或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物或其藥物組合物的預防性治療可以是急性、短期或慢性的。所施用的劑量可在預防性治療過程期間變化。還參見：Kaniecki等人，「Treatment of Primary Headache：Preventive Treatment of Migraine.」In：Standards of Care for Headache Diagnosis and Treatment.Chicago(IL)：National Headache Foundation；2004，第40-52頁。

製劑

本公開的GLYX肽可取決於其預期用途通過各種方式施用，如本領域中所熟知。例如，如果本公開的組合物有待口服施用，則它們可被配製為片劑、膠囊、顆粒劑、粉末或糖漿劑。或者，本公開的製劑可作為注射劑(靜脈內、肌內或皮下)、滴劑輸注製劑或栓劑胃腸外施用。對於通過眼黏膜途徑施加，本公開的組合物可被配製為滴眼劑或眼用軟膏。這些製劑可通過常規方式來製備，並且(如果需要)可將組合物與任何常規添加劑如賦形劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑、矯味劑、增溶劑、懸浮助劑、乳化劑或包衣劑混合。

還可使用任何已知的施用方法施用併入表達載體中的編碼GLYX肽的DNA以在體內表達GLYX肽。

在本發明的製劑中，潤溼劑、乳化劑和潤滑劑如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂、以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、調味劑和芳香劑、防腐劑以及抗氧化劑可存在於所配製的藥劑中。

主題組合物可適合於口服、局部(包括經頰和舌下)、直腸、陰道、氣霧劑和/或胃腸外施用。製劑可方便地以單位劑型存在並且可通過藥學領域中熟知的任何方法來製備。可與載體物質組合以產生單個劑量的組合物的量取決於所治療的受試者和特定施用模式而變化。

製備這些製劑的方法包括使本公開的組合物與載體以及任選地一種或多種輔助成分締合的步驟。一般來說，製劑是通過使藥劑與液體載體或細碎固體載體或兩者均一且精細締合，並且接著必要時使產物成形來製備。

適合於口服施用的製劑可為如下形式：膠囊、扁囊劑、丸劑、片劑、錠劑(使用經調味的基質，通常為蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠)、粉末、顆粒劑或為水性或非水性液體中的溶液或懸浮液、或為水包油或油包水乳劑、或為酏劑或糖漿劑、或為軟錠劑(pastille)(使用惰性基質，如明膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯膠)，其各自含有預定量的作為活性成分的其主題組合物。本公開的組合物還可作為大丸劑、藥糖劑或糊劑施用。

在用於口服施用的固體劑型(膠囊、片劑、丸劑、糖錠劑、粉末、顆粒劑等)中，將主題組合物與一種或兩種藥學上可接受的載體(如檸檬酸鈉或磷酸二鈣)和/或以下中的任一種進行混合：(1)填充劑或增充劑，如澱粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或矽酸；(2)粘合劑，例如像羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和/或阿拉伯膠；(3)溼潤劑，如甘油；(4)崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣、馬鈴薯或木薯澱粉、藻酸、某些矽酸鹽以及碳酸鈉；(5)溶解延遲劑，如石蠟；(6)吸收加速劑，如季銨化合物；(7)潤溼劑，例如像乙醯醇和單硬脂酸甘油酯；(8)吸收劑，如高嶺土和膨潤土；(9)潤滑劑，如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉及其混合物；以及(10)著色劑。在膠囊、片劑和丸劑的情況下，所述組合物還可包含緩衝劑。在使用此類賦形劑如乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的軟填充和硬填充的明膠膠囊中還可採用類似類型的固體組合物作為填充劑。

可通過壓制或模製、任選使用一種或多種輔助成分來製成片劑。可使用粘合劑(例如，明膠或羥丙基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如，澱粉乙醇酸鈉或交聯羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑來製備壓製片劑。可通過在適合的機械中模製用惰性液體稀釋劑潤溼的主題組合物的混合物來製備模製片劑。可任選地使片劑和其他固體劑型如糖錠劑、膠囊、丸劑和顆粒劑具有刻痕或用包衣材料和膠囊殼(如製藥領域中熟知的腸溶衣和其他包衣)來製備它們。

用於口服施用的液體劑型包括藥學上可接受的乳劑、微乳劑、溶液、懸浮液、糖漿劑和酏劑。除主題組合物之外，所述液體劑型可包含本領域中常用的惰性稀釋劑，例如像，水或其他溶劑、增溶劑和乳化劑，如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油(具體地說，棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油以及芝麻油)、甘油、四氫呋喃醇、聚乙二醇以及脫水山梨醇的脂肪酸酯、環糊精及其混合物。

除主題組合物之外，懸浮液還可包含懸浮助劑，例如像乙氧基化異十八醇、聚氧乙烯山梨糖醇和脫水山梨糖醇酯、微晶纖維素、偏氫氧化鋁、膨潤土、瓊脂以及黃芪膠、及其混合物。

用於直腸或陰道施用的製劑可作為栓劑呈現，可通過將主題組合物與一種或多種適合的無刺激性賦形劑或載體(包括，例如，可可脂、聚乙二醇、栓劑蠟或水楊酸酯)混合來製備所述栓劑，並且所述栓劑在室溫下為固體，但在體溫下為液體並且因此在體腔中將會熔化且釋放活性劑。適合於陰道施用的製劑還包括含有本領域中已知的適合的此類載體的陰道栓劑、止血栓、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧製劑。

用於經皮施用主題組合物的劑型包括粉末、噴霧劑、軟膏、糊劑、乳膏劑、洗劑、凝膠劑、溶液以及貼劑。

對於局部眼部施用，本發明的組合物可採取溶液、凝膠劑、軟膏、懸浮液或固體插入物的形式，其被配製成使得單位劑量包含治療有效量的活性成分或在組合療法的情況下其一些多重活性成分。

適合於胃腸外施用的本發明的藥物組合物包含主題組合物與以下中的一種或多種的組合：藥學上可接受的無菌等滲水溶液或非水溶液、分散液、懸浮液或乳劑、在臨用之前可被重構成無菌可注射溶液或分散液的無菌粉末，它們可包含抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑、使所述製劑與預期的接受者的血液等滲的溶質，或助懸劑或增稠劑。

可在本發明的藥物組合物中採用的適合水性和非水性載體的實例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)、及其適合混合物、植物油(如橄欖油)、以及可注射的有機酯(如油酸乙酯)和環糊精。可維持適當的流動性，例如，通過使用包衣材料(如卵磷脂)、在分散液的情況下通過保持所需的顆粒大小、以及通過使用表面活性劑。

組合療法

本文所述的任何GLYX肽(例如GLYX-13)可單獨使用或與其他藥劑組合使用以治療或預防本文論述的任何疾病或病狀。例如，在一些組合治療中，當單獨施用時，一種或多種治療化合物的劑量可從標準劑量減少。

本發明的方法還包括與阿片樣物質、抗抑鬱劑、抗癲癇劑、非類固醇抗炎藥(NSAID)、血清素5HT1B/1D激動劑、N-甲基-D-天冬氨酸拮抗劑或抗炎化合物共同施用GLYX肽。

在某些實施方案中，本公開涉及單獨或與一種或多種其他抗抑鬱劑治療(如三環抗抑鬱劑、MAO-I、SSRI以及雙重和三重攝取抑制劑)和/或抗焦慮藥組合的GLYX肽用於製造用以治療偏頭痛(例如，陣發性偏頭痛、慢性偏頭痛、視網膜性偏頭痛、眼肌麻痺性偏頭痛、非頭痛性偏頭痛、偏頭痛性病症、月經性偏頭痛、腹型偏頭痛、兒童期周期性綜合症或叢集性頭痛)的藥劑的用途。可用於與GLYX肽組合的示例性藥物包括氯米帕明(Anafranil)、鹽酸多慮平(Adapin)、去甲替林(Aventyl)、鹽酸阿米替林(Elavil)、地昔帕明(Norpramin)、去甲替林(Pamelor)、鹽酸去甲丙咪嗪(Pertofrane)、多慮平(Sinequan)、曲米帕明(Surmontil)、鹽酸丙咪嗪(Tofranil)、普羅替林(Vivactil)、反苯環丙胺(Parnate)、苯乙肼(Nardil)、馬普蘭(Marplan)、西酞普蘭(Celexa)、依地普侖(Lexapro)、氟伏沙明(Luvox)、帕羅西汀(Paxil)、百憂解(Prozac)、左洛復(Zoloft)、安非他酮(Wellbutrin)、鬱復伸(Effexor)、瑞美隆(Remeron)、欣百達(Cymbalta)、曲唑酮(Desyrel)以及路滴美(Ludiomill)。

在某些實施方案中，阿片樣物質選自由以下組成的組：阿芬太尼、布託啡諾、丁丙諾啡、右馬拉胺、地佐辛、右旋丙氧芬、可待因、二氫可待因、地芬諾酯、埃託啡、芬太尼、氫可酮、氫嗎啡酮、凱託米酮、洛哌丁胺、左啡諾、左美沙酮、美普他酚、美沙酮、嗎啡、嗎啡-6-葡糖苷酸、納布啡、納洛酮、羥考酮、羥嗎啡酮、噴他佐辛、哌替啶、哌腈米特、丙氧芬、瑞芬太尼、舒芬太尼、替利定以及曲馬多。

在某些實施方案中，抗抑鬱劑選自由以下組成的組：阿地唑侖、阿拉丙酯、安咪奈丁、阿米替林/利眠寧組合、阿替美唑、阿扎米安色林(azamianserin)、巴嗪普令、苯呋拉林、二苯美侖、苯奈達林(binodaline)、比培那醇、溴法羅明、卡羅沙酮、西文氯胺、氰帕明、西莫沙酮、西酞普蘭、氯美醇、氯伏胺、氮卓尼爾、丹醇、地美替林、二苯西平、度琉平、屈昔多巴、乙非辛、艾司唑侖、依託哌酮、非莫西汀、酚加賓、非唑拉明、氟曲辛、咪唑克生、吲達品、茚洛秦、伊普吲哚、左丙替林、鋰、利託西汀、洛非帕明、美地沙明、美他帕明、美曲吲哚、米安色林、米那普侖、米氮平、孟替瑞林、奈拉西坦、奈福泮、尼亞醯胺、諾米芬辛、諾氟西汀、奧替瑞林、奧沙氟生、匹那西泮、吡吲哚、苯噻啶、利坦色林、咯利普蘭、sercloremine、司普替林、西布曲明、舒布硫胺、舒必利、替尼沙秦、託扎啉酮、促甲狀腺激素釋放素、噻奈普汀、替氟卡賓、曲唑酮、託芬那辛、託非索泮、託洛沙酮、託莫西汀、維拉必利、維洛沙秦、維喹啉、齊美利定以及氯苯吡卓(zometapine)。

在某些實施方案中，抗癲癇劑選自由以下組成的組：卡馬西平、氟吡汀、加巴噴丁、拉莫三嗪、奧卡西平、苯妥英、瑞替加濱、託吡酯以及丙戊酸鹽。

在某些實施方案中，NSAID選自由以下組成的組：阿西美辛、阿司匹林、塞來昔布、地拉考昔、雙氯芬酸、二氟尼柳、乙水楊胺、依託芬那酯、依託考昔、非諾洛芬、氟芬那酸、氟比洛芬、氯拉唑酸、氯諾昔康、布洛芬、吲哚美辛、伊索昔康、酮保泰松、酮洛芬、酮咯酸、萘普生、萘丁美酮、尼氟滅酸、舒林酸、託美汀、吡羅昔康、甲氯芬那酸、甲芬那酸、美洛昔康、安乃近、莫非保松、羥基保泰松、帕瑞考昔、菲尼酮、苯基丁氮酮、吡羅昔康、丙帕他莫、異丙安替比林、羅非昔布、水楊醯胺、舒洛芬、噻洛芬酸、替諾昔康、伐地昔布、4-(4-環己基-2-甲基噁唑-5-基)-2-氟苯磺醯胺、N-[2-(環己基氧基)-4-硝基苯基]甲磺醯胺、2-(3，4-二氟苯基)-4-(3-羥基-3-甲基丁氧基)-5-[4-(甲基磺醯基)苯基]-3(2H)-噠嗪酮以及2-(3，5-二氟苯基)-3-[4-(甲基磺醯基)苯基]-2-環戊烯-1-酮。

在某些實施方案中，血清素5HT1B/1D激動劑選自由以下組成的組：依來曲普坦、氟伐曲坦、那拉曲坦、利扎曲坦、舒馬曲坦以及佐米曲普坦。

在某些實施方案中，N-甲基-D-天冬氨酸拮抗劑選自由以下組成的組：金剛烷胺、阿替加奈、貝索普迪(besonprodil)、布地品、芋螺睡眠肽(conantokin)G、德魯西明、地塞米諾、右美沙芬、右旋丙氧芬、非氨酯、氟非氨酯、加環利定(gacyclidine)、甘氨酸、伊培沙宗、凱託塞伐林(kaitocephalin)、氯胺酮、凱託米酮、拉尼西明、利可替奈、米達福太(midafotel)、美金剛、D-美沙酮、D-嗎啡、米那普侖、奈拉美生、奧芬那君、瑞馬西胺(remacemide)、sulfazocine、FPL-12，495(racemide代謝物)、託吡酯、(αR)-α-氨基-5-氯-1-(膦醯基甲基)-1H-苯並咪唑-2-丙酸、1-氨基環戊烷-甲酸、[5-(氨基甲基)-2-[[[(5S)-9-氯-2，3，6，7-四氫-2，3-二氧代-1H-，5H-吡啶並[1，2，3-de]喹喔啉-5-基]乙醯基]氨基]苯氧基]-乙酸、α-氨基-2-(2-膦醯基乙基)-環己烷丙酸、α-氨基-4-(膦醯基甲基)-苯乙酸、(3E)-2-氨基-4-(膦醯基甲基)-3-庚烯酸、3-[(1E)-2-羧基-2-苯基乙烯基]-4，6-二氯-1H-吲哚-2-甲酸、8-氯-2，3-二氫噠嗪並[4，5-b]喹啉-1，4-二酮、與2-羥基-N，N，N-三甲基-乙銨的5-氧化物鹽、N′-[2-氯-5-(甲硫基)苯基]-N-甲基-N-[3-(甲硫基)苯基]-胍、N′-[2-氯-5-(甲硫基)苯基]-N-甲基-N-[3-[(R)-甲基亞磺醯基]苯基]-胍、6-氯-2，3，4，9-四氫-9-甲基-2，3-二氧代-1H-茚並[1，2-b]吡嗪-9-乙酸、7-氯代硫犬尿喹啉酸、(3S，4aR，6S，8aR)-十氫-6-(膦醯基甲基)-3-異喹啉甲酸、(-)6，7-二氯-1，4-二氫-5-[3-(甲氧基甲基)-5-(3-吡啶基)-4-H-1，2，4-三唑-4-基]-2，3-喹喔啉二酮、4，6-二氯-3-[(E)-(2-氧代-1-苯基-3-亞吡咯烷基)甲基]-1H-吲哚-2-甲酸、(2R，4S)-rel-5，7-二氯-1，2，3，4-四氫-4-[[(苯基氨基)羰基]氨基]-2-喹啉甲酸、(3R，4S)-rel-3，4-二氫-3-[4-羥基-4-(苯基甲基)-1-哌啶基]-2H-1-苯並吡喃-4，7-二醇、2-[(2，3-二氫-1H-茚-2-基)氨基]-乙醯胺、1，4-二氫-6-甲基-5-[(甲基氨基)甲基]-7-硝基-2，3-喹喔啉二酮、[2-(8，9-二氧代-2，6-二氮雜雙環[5.2.0]壬-1(7)-烯-2-基)乙基]-膦酸、(2R，6S)-1，2，3，4，5，6-六氫-3-[(2S)-2-甲氧基丙基]-6，11，11-三甲基-2，6-亞甲基-3-苯並吖辛因(benzazocin)-9-醇、2-羥基-5-[[(五氟苯基)甲基]氨基]-苯甲酸、1-[2-(4-羥基苯氧基)乙基]-4-[(4-甲基苯基)甲基]-4-哌啶醇、1-[4-(1H-咪唑-4-基)-3-丁炔基]-4-(苯基甲基)-哌啶、2-甲基-6-苯基乙炔基)-吡啶、3-(膦醯基甲基)-L-苯丙氨酸、以及3，6，7-四氫-2，3-二氧代-N-苯基-1H，5H-吡啶並[1，2，3-de]喹喔啉-5-乙醯胺。

在某些實施方案中，抗炎化合物選自由以下組成的組：阿司匹林、塞來昔布、可的松、地拉考昔、二氟尼柳、依託考昔、非諾洛芬、布洛芬、酮洛芬、萘普生、潑尼松龍、舒林酸、託美汀、吡羅昔康、甲芬那酸、美洛昔康、苯基丁氮酮、羅非昔布、舒洛芬、伐地昔布、4-(4-環己基-2-甲基噁唑-5-基)-2-氟苯磺醯胺、N-[2-(環己基氧基)-4-硝基苯基]甲磺醯胺、2-(3，4-二氟苯基)-4-(3-羥基-3-甲基丁氧基)-5-[4-(甲基磺醯基)苯基]-3(2H)-噠嗪酮以及2-(3，5-二氟苯基)-3-[4-(甲基磺醯基)苯基]-2-環戊烯-1-酮。

本公開具有多個方面，所述方面通過以下非限制性實施例說明。

實施例

實施例1

本文所述的研究利用SD傳播速率的細胞外多位點電生理學監測，以及雙光子雷射掃描顯微術用於體外海馬切片中SD誘發的樹突棘大小變化的實時成像。研究了新穎NMDAR受體功能性甘氨酸位點部分激動劑GLYX-13對SD的傳播閾值和速率的影響，以及SD對樹突棘形態的實時影響。GLYX-13通過細胞外鉀濃度的局部增加偶爾完全阻止SD的誘導，並且一致地減慢其傳播速率。SD通過海馬CA1區域產生樹突棘的快速回縮，其在神經元去極化恢復之後逆轉。GLYX-13提高了樹突棘在SD後返回至其原始大小和位置的速率和程度，從而指示所述藥物和調節NMDA受體活性的其他藥物能夠保護大腦中的突觸連接免受來自反覆偏頭痛發作的可能損害。

一般方法

藥物

所有外部和膜片移液管溶液是用去離子蒸餾水製備的(電阻＞18MΩ cm-2；Milli-Q系統)。用於製備細胞外溶液和細胞內溶液的化學品購自Sigma-Aldrich(St.Louis，MO，USA)。AlexaFluor 594購自Molecular Probes。

切片製備和細胞外記錄

實驗在來自14至21天大大鼠(Taconic Farms，Hudson，NY)的海馬切片上進行。將大鼠用異氟烷深度麻醉，殺死並且快速去除大腦且將其置於充氧(95％O2-5％CO2)的冰冷人工腦脊液(ACSF)中，所述人工腦脊液含有(以mM計)：126NaCl、2.5KCl、2.6CaCl2、1.3MgCl2、1.25NaH2PO4、26NaHCO3以及11葡萄糖。在切片期間，將所述大腦切成對半，切下額葉，並且使用氰基丙烯酸酯膠粘劑將個別大腦半球粘合至一個載物臺上，所述載物臺浸入連續充氧的冰冷ACSF中。使用振動切片機(Leica 1200s)切割含有海馬的400μm厚冠狀切片，並且將其轉移至界面保持室以用於在室溫下孵育最少一小時，之後轉移至Haas-型界面室內以用於在32℃下記錄。用在實驗開始之前用95％O2/5％CO2飽和的ACSF灌注切片(4ml/分鐘；ACSF mM：NaCl 126；KCl 3；NaH2PO4 1.25；MgCl 1.3；CaCl2 2.5；NaHC03 26；葡萄糖10)，並且浴施加所有藥物。

使用具有Clampex(v.9)的MultiClamp 700B(Axon Instruments)進行細胞外記錄，在1kHz下濾波且在3kHz下數位化。低電阻(在填充ACSF之後1-2MΩ)記錄電極由薄壁硼矽酸鹽玻璃製成，將其以與SD起始移液管大約150mm距離間隔插入CA1區域的放線層中的Schaffer側支終止場的頂部樹突區域中以監測SD的擴散。將浸沒的記錄室安裝在配備有紅外微分幹涉相差(DIC)光學器件的Zeiss Axioskop 2FS直立顯微鏡上。10倍物鏡用於對由SD引起的切片亮度變化成像。用通過PTI主系統控制的冷卻式CCD相機(CoolSNAP HQ)每100ms對亮度變化成像。用Clampfit 9對電生理數據進行分析。將成像數據數位化且用ImageJ(NIH)重建。

將雙極不鏽鋼刺激電極(FHC，Bowdoin，ME)置於CA3區域中的Schaffer側支連合纖維中，並且施加電流脈衝且調整刺激強度，以便每30秒誘發一次大約50％最大fEPSP(50至100pA；100μs持續時間)。來自ISO-Flex隔離器的電刺激通過主八脈衝發生器(AMPI，Jerusalem，Israel)進行控制並且由Multiclamp700B(Molecular Devices，Sunnyvale，CA)觸發。用Digidata1322數位化信號且使用Multiclamp 700B放大器記錄信號。通過線性插值最大負偏差的20％-80％測量fEPSP斜率，並且證實斜率在開始實驗之前至少15分鐘在10％內為穩定的。使用IBM兼容性個人計算機上的Clampfit(版本9；Axon Instrument)分析數據。記錄放線層中的頂部樹突區場中的誘發的fEPSP(最大振幅的50％，2-4mV)持續至少30分鐘的穩定基線期。

海馬擴散性抑制的誘導

將海馬的短期冠狀切片轉移至顯微鏡載物臺上的浸沒的記錄室並且用溫熱的ACSF(32℃)灌注，其中細胞外[K+]在3ml/分鐘的灌注速率下升至8mM。通過3M KCl穿過玻璃移液管的壓力注射噴出起始擴散性抑制。持續50-100ms的8-10psi的壓力脈衝由Picospritzer II(Parker Hannifin，Hollis，NH)驅動。當填充3M KCl時移液管電阻是2±0.2MΩ。

樹突棘回縮/恢復的動態成像分析

在具有Alexa Fluor 594(100μM)的海馬切片中負載CA1錐體神經元持續15分鐘之後，使用配備有60x/1.1nA水浸紅外物鏡加4倍數字變焦的定製雙光子雷射掃描Olympus BX61WI顯微鏡對三級樹突成像，如先前所描述(Zhang等人，2008)。來自聚焦層的在+/-3μm範圍內的XYZ掃描模式用於避免運動偏差，其中z步幅間隔為0.5μm，並且對於7秒的單深度剖面時間，每個圖像花費0.45秒完成。應非常小心以避免螢光飽和和來自太多激發光的對小樹突棘的光毒性的任何跡象。以5分鐘間隔重複深度剖面以減少可能的染料光漂白和光毒性。調節至810nm的Mai/Tai雷射器(固態雷射器，Mountain View，CA)用於激發，並且通過Olympus FluoviewFV300軟體(Olympus America，Melville，NY)控制圖像採集。使用具有最大打開的小孔的共焦雷射掃描頭的光電倍增管檢測螢光，並且針對超過背景的信號優化發射光譜窗。在transfluorescence途徑中，565nm分色鏡用於分離綠色和紅色螢光，並且分別穿過HQ525/50和HQ605/50發射濾光片以消除透射或反射激發光(Chroma Technology，Rockingham，VT)，並且通過兩個光電倍增管同時檢測。所述圖示出來自整個6μm Z-剖面的收縮圖像，並且這些投影用於計算作為棘體積的指數的強度。

數據分析

將記錄信號通過具有1kHz截止頻率的八電極Bessel低通濾波器濾波，並且以100μs間隔通過Clampex(V.9)採樣。在用Clampfit(V.9)計算fEPSP斜率之後，將數據用Origin 6.1(Microcal Software，MA)進一步加工並且用CorelDraw 10(Corel，Ottawa，Ontario，Canada)呈現。將所有數據使用SPSS軟體(SPSS Inc.，Chicago，IL)通過單向方差分析(ANOVA)或學生t檢驗進行分析。顯著性水平被預設為P＜0.05。數據被呈現為跨實驗的平均值±SEM。

結果

局灶性、高[K+]誘導的海馬切片的CA1場中的擴散性抑制

在人工腦脊液(ACSF)(其中[K+]o在32℃下升高至8mM)中，3M[K+]o單次局部噴出(100ms)到CA1放線層中的場上(圖1，左下)可靠地誘導SD，所述SD以9±5.4mm/分鐘(n＝16)的傳播速率在海馬的整個CA1區域內擴散。表徵為負場電位偏移的SD(圖1，右上)顯示在海馬CA1區域的放線層突觸層中-8±1.5mV(n＝30)的最大偏移，這通常持續超過45秒。

每10分鐘誘導SD以測試負電位偏移的面積(圖1，右上，陰影區域)(K+的細胞外空間傳導的有效量值和持續時間的量度)是否在反覆SD情況下穩定。雖然從起始電極記錄的負電位偏移的面積大於距離600μm的遠端記錄電極處(圖1，下圖)，但是在任一部位處在10分鐘間隔引發的反覆連續SD的個別事件的量值或傳播速度方面不存在顯著差異(Bonferroni多重比較檢驗，P＞0.20)。這些結果指示可在海馬的CA1場中穩定、重複地誘發可再現的SD負電位偏移，至少持續前十。

GLYX-13遏制海馬擴散性抑制的傳播且增加海馬擴散性抑制的不應期

為了測試新穎NMDA受體甘氨酸共激動劑位點部分激動劑GLYX-13能夠通過調控生理範圍內的NMDA受體活化且防止過度活化來升高SD的閾值或防止SD的假設，將GLYX-13在1、10或50μm處浴施加至海馬切片持續30分鐘，之後將高[K+](在膜片移液管中1mM)短暫噴射至CA1區域的放線層中並試圖引發SD。首先在未經處理的切片中基於高[K+]噴射的時間構建劑量反應關係，且然後在三種測試濃度(1、10或50μM)下的每種下浴施加GLYX-1330分鐘後構建劑量反應關係，同時記錄DC電位以檢測SD。

在無藥物的ACSF中初始誘發至少三次SD之後，用GLYX-13灌注切片且繼續每十分鐘引發SD。如在圖2上圖中所示，對於10μM GLYX-13，在起始位點處SD的個別連續事件的基線面積之間不存在顯著差異(Bonferroni多重比較檢驗，P＞0.20)，從而指示GLYX-13不會改變SD的起始。

接著對GLYX-13進行測試以確定在反覆SD情況下是否影響在近處(近端)和遠處(遠端)記錄位點處的SD量值的關係。將所述切片用10μM GLYX-13灌注並且繼續每10分鐘引發SD(圖2，下圖)。Bonferroni多重比較檢驗(P＞0.20)再次顯示在對照切片中SD的個別連續事件的面積之間不存在顯著差異。GLYX-13不影響在近端記錄位點處SD的負電位偏移的起始。

在起始位點處的SD量值在遠程記錄處SD的負電位偏移的面積相關(圖2，下圖)。因此，比較在GLYX-13不存在和存在下的近端/遠端面積比率。如在圖2下圖中所示，遠程位點與起始位點之間的面積比率在10μM GLYX-13存在下通過施加第六個SD(6th SD)而顯著降低。雙向ANOVA指示三種顯著作用：1)在所有觀察結果內相同切片中的時間作用反覆SD(F(1，12)＝5.17，p＜0.05)；2)來自藥物處理的作用(F(1，12)＝5.07，p＜0.05)；以及3)時間與處理之間的相互作用(F(1，12)＝30.91，p＜0.01)。這些結果指示SD的周期性負電位偏移改變遠程位點與起始位點之間的幅值比；並且這種降低通過GLYX-13顯著增強。這些發現表明GLYX-13能夠顯著抑制SD穿過腦的傳播，特別是在多個SD事件之後。

在先前研究中，證明GLYX-13能夠通過降低負場電位偏移的幅值且減慢傳導速度來限制SD的傳播(在多個SD之後最大的作用)。通過縮短每個SD起始之間的時間間隔，據發現對照切片中的每個SD對於下一個成功的SD具有3-4分鐘的絕對不應期(n＝7)。10μM GLYX-13使這種不應期延長至5-6分鐘(n＝6)。如圖3中所示，SD能夠在對照切片中的前一SD之後五分鐘成功誘發(對照)，但不能在用GLYX-13處理的切片中引發(GLYX-13 30』)。

使用由SD誘導的細胞外空間體積位移產生的光密度的固有變化測量SD傳播

當流體衝入去極化細胞中並且所述細胞溶脹時，SD引發細胞外空間體積的顯著收縮，並且這可被視為體內固有光密度的變化。這種亮度強度變化也可使用透射光DIC顯微鏡在腦切片中容易地檢測。圖4A示出亮度增加的SD「先兆」從起始移液管擴散並且在切片上傳播，並且可用於計算SD傳導速度(圖4B)。亮度增加的時程與使用電生理記錄的SD的最大負電位偏移良好相關。因此，計算亮度隨距離變化的時程提供用於測量SD傳導速度的準確且方便的方式。

為了確定重複SD是否顯示相同傳導速度，在間隔150μm的5個點上監測亮度變化，如圖4A的上圖所示。具有重複測量值的單向ANOVA指示SD在單個切片內維持從P1至P5的穩定傳輸速度(F(5，35)＝2.42，p＞0.05)。因此，可使用從P1至P5的傳輸速度來測試連續事件內的SD穩定性。SD的平均傳播速度是9.07±0.55mm/分鐘，範圍為7.54至11.14mm/分鐘(n＝16)。

為了測試SD的重複事件是否維持穩定速度並且GLYX-13是否影響SD傳導速度，使用ANOVA測試用重複測量值來分析6個隨後SD，如圖5中所示。分析揭示在對照與GLYX-13處理的切片之間的顯著差異(F(1，50)＝3.66，p＜0.01)。SD序列佔總方差的38.5％，從而指示SD傳播速度隨著SD數目的增加而顯著減慢(F(5，50)＝14.01，p＜0.01)。雖然GLYX-13對所有重複SD內的SD傳播速度的作用在雙向ANOVA中未達到顯著性，但SD的數目與GLYX-13處理之間存在顯著相互作用(F(5，50)＝2.53，P＜0.05)，從而反映GLYX-13(實心圓圈)僅通過第7個SD顯著降低SD傳播速度。

擴散性抑制引起CA1錐體神經元樹突棘在體積上可逆地收縮

腦中錐體神經元樹突的解剖微結構出人意料地是響應於多種刺激不穩定的。去極化、氧/葡萄糖剝奪和N-甲基-D-天冬氨酸都已顯示在體外海馬CA1錐體神經元中產生樹突棘的回縮。為了檢查棘對SD的反應，將單個CA1錐體神經元用螢光染料AlexaFluor-594填充，並且使用從雙光子雷射掃描顯微鏡收集的連續z-堆疊區段(0.2μm步長跨越5μm)對樹突棘形狀成像。在將AlexaFluror-594負載至CA1錐體中後三十分鐘已達到神經元內的平衡分布，通過將高[K+](在膜片移液管中1M)短暫噴射至海馬切片的CA1區域的放線層中起始SD，其中Schaffer側支軸突在CA1錐體神經元的頂端樹突上形成突觸。如圖6A和6B中所示，由SD產生的去極化確實引發實質性棘收縮，如通過塌陷的z-堆疊螢光振幅所測量，其中棘體積在第一SD之後20-30分鐘完全恢復。這證實SD誘導的去極化的後遺症之一是樹突棘形態的改變。

GLYX-13改善在擴散性抑制後的樹突棘恢復

最後，檢查GLYX-13對樹突棘對SD的動態形態響應的作用。研究GLYX-13是否能夠減輕棘響應於SD的收縮，或改善它們的恢復。圖6A示出在對照錐體神經元中響應於SD的兩個事件的棘收縮，而圖6B例示在10μM GLYX-13存在下的相同過程。重複測量值的ANOVA達到從如圖6C的上圖所示的樹突棘的樹突棘測量的螢光強度的顯著性(F(8，64)＝17.53，p＜0.001)，並且這種顯著性主要來自SD後時程(F(8，64)＝6.18，p＜0.01)，從而揭示雖然GLYX-13(實心圓圈)未改變由SD引起的收縮，但它確實拯救了SD後棘大小的恢復(F(8，64)＝2.81，p＜0.05)。

實施例2

海馬切片製備：使用14至21天大的大鼠(Taconic Farms)進行實驗。將大鼠用異氟烷深度麻醉，殺死並且快速去除大腦且將其置於充氧(95％O2-5％CO2)的冰冷人工腦脊液(ACSF)中，所述人工腦脊液含有(以mM計)：126NaCl、2.5KCl、2.6CaCl2、1.3MgCl2、1.25NaH2PO4、26NaHCO3以及11葡萄糖。在切片期間，將所述大腦切成對半，切下額葉，並且使用氰基丙烯酸酯膠粘劑將個別大腦半球粘合至一個載物臺上，所述載物臺浸入連續充氧的冰冷ACSF中。使用振動切片機(Leica 1200s)切割含有海馬的400μm厚冠狀切片，並且將其轉移至界面保持室以用於在室溫下孵育最少一小時，之後開始實驗。

海馬擴散性抑制的誘導：將海馬的短期冠狀切片轉移至顯微鏡載物臺上的浸沒的記錄室並且用溫熱的ACSF(32℃)灌注，其中細胞外[K+]在3ml/分鐘的灌注速率下升至8mM。通過3M KCl穿過玻璃移液管的壓力注射噴出起始擴散性抑制。通常持續50ms的8-10psi的壓力脈衝由picospritzer驅動。當填充3M KCl時移液管電阻是2±0.2MΩ。

電生理記錄方法：使用具有Clampex(v.9)的MultiClamp 700B(Axon Instruments)進行細胞外記錄，在1kHz下濾波且在3kHz下數位化。低電阻(在填充ACSF之後1-2MΩ)記錄電極由薄壁硼矽酸鹽玻璃製成，將其以與SD起始移液管大約150mm距離間隔插入CA1區域的放線層中的Schaffer側支終止場的頂部樹突區域中以監測SD的擴散。將浸沒的記錄室安裝在配備有紅外微分幹涉相差(DIC)光學器件的Zeiss Axioskop 2FS直立顯微鏡上。10倍物鏡用於成像由SD引起的切片亮度變化。用通過PTI主系統控制的冷卻式CCD相機(CoolSNAP HQ)每100ms對亮度變化成像。用Clampfit 9對電生理數據進行分析。將成像數據數位化且用ImageJ(NIH)重建。所有實驗在符合國家衛生研究院準則的批准方案下進行。

研究了與婦女和青少年患者相關的實施例1的發現。所述實驗方案用於在體外海馬腦中切片的CA1區域中引發擴散性去極化(SD)。為了更好地視覺觀察擴散性抑制與起始位點的距離和在更長範圍上的SD傳播速度，用4倍物鏡替換實施例1的10倍物鏡以將視域擴大至1.6mm。對記錄室進行修改以從兩側灌注切片，更有效的灌注不僅向腦切片提供足夠的氧，而且有助於維持穩定的細胞外環境，因為擴散性抑制的每次事件引起細胞外和細胞內的顯著離子組成變化。

兩組2月齡卵巢切除的雌性大鼠包括於當前組研究中。一組卵巢切除的大鼠自手術後第7天開始每天注射雌激素持續7天，而另一組僅在進行實驗之前注射作為對照的油媒介物持續7天。

在3M鉀噴出之後將亮度變化視覺分類為失敗(＜100mm)、局部擴散(＞100mm；＜800mm)或完全擴散(＞800mm)。在來自8隻油處理的大鼠的39個切片中和來自7隻雌激素處理的大鼠的35個切片中嘗試SD誘導。表1總結在兩組中通過相同方法誘發的SD的發生頻率。在油處理組中，失敗率顯著高於雌激素處理組(卡方檢驗，P＝0.014)，從而指示雌激素本身增強腦組織在局灶性去極化時展示SD的傾向。

表1

使用亮度變化來估計擴散性抑制的傳輸速度，如以下圖7中所示。通過將觀察位點之間的SD距離除以SD在這些觀察位點之間行進所花費的時間來從通過局灶性3M鉀噴出誘導的局部和完全SD計算傳播速度。如圖7中所示，來自雌激素處理的大鼠的切片中的平均擴散速度是0.121±0.013mm/s，顯著快於來自油處理的對照大鼠的切片中的傳播速度(0.083±0.005mm/s，P＜0.05，學生t檢驗)。這些數據表明，雌激素在增強海馬中以及可能新皮層中SD的傾向和速度中起重要作用。

通過測量SD遠離起始位點的最大傳播距離來測試雌激素如何影響SD的嚴重程度。如圖8中所示，通過將顯示從起始位點的最小可檢測的亮度變化(從基線＞5％變化)的觀察位點的距離與展示不可檢測的亮度變化的緊鄰觀察位點的距離平均化並且測量與起始位點的這一距離來估計沿Schaffer側支途徑的擴散終點。如圖8中所示，來自雌激素處理的大鼠的切片中的SD(0.594±0.071mm；n＝18)比來自油處理的大鼠的切片中的SD(0.394±0.051mm；n＝16，P＜0.05，學生t檢驗)行進顯著更長距離。因此，雌激素處理的大鼠中的SD不僅更容易引發，而且傳播更長距離。

然後在相距10分鐘誘導2次Sd後，將10μM GLYX-13添加至灌注液，並且每10分鐘繼續誘導SD以確定SD的速度和規模是否受到影響。圖9示出在施加GLYX-13之前和在暴露於10μM浴施加的GLYX-13 50分鐘之後，來自雌激素處理的大鼠的切片中誘發SD的典型差異。測量在10個觀察點處的亮度變化以評價GLYX-13對SD的作用。雖然SD仍然容易誘發，如圖9B中所示，但圖9A清楚地示出在GLYX-13存在下與SD相關的亮度變化被延遲。配對的t檢驗顯示GLYX-13使平均SD傳輸速度從6.56±0.57mm/分鐘顯著降低至4.96±0.28mm/分鐘(n＝5，P＜0.01，配對t檢驗)。進行來自油處理的大鼠的海馬切片中的相同實驗。雖然GLYX-13使平均SD傳輸速度從5.09±0.61mm/分鐘降低至4.50±0.39mm/分鐘(n＝5)，但是這種降低未達到統計顯著性。

還進行了雙向重複ANOVA以探究GLYX-13對跨兩組的SD傳播速度的影響。如圖10所示，第一顯著性來自在施加GLYX-13(F(1，8)＝3.1；p＜0.05)之前和之後的雌激素處理的大鼠；並且第二顯著性來自兩組之間的GLYX-13的預暴露(F(1，8)＝4.2；p＜0.05)。這些結果表明GLYX-13在雌激素處理的大鼠中具有更強的作用，從而將SD的傳輸速度顯著減慢至油處理的大鼠的水平。

實施例3

方法

動物

成年雄性(2-3月齡)(SD)大鼠購自Harlan(USA)。將大鼠圈養在具有楊木片底層的Lucite籠中，維持在12小時：12小時光照：黑暗循環(在5AM光照)，並且在整個研究中給予隨意獲取大鼠食物(USA)和自來水。

創傷性腦損傷誘導

根據Goldstein等人(Goldstein，L.E.，等人(2012)「Chronic traumatic encephalopathy in blast-exposed military veterans and a blast neurotrauma mouse model，」Science Translational Medicine 4：134ra160)的方案進行修改用於在大鼠中使用，誘導單次爆炸誘導的創傷性腦損傷。通過異氟烷麻醉成年雄性大鼠，將耳塞插入大鼠的兩隻耳朵中，並且大鼠接受通過刺穿0.014英寸聚酯膜產生的單次約42PSI氦氣爆炸。假對照被放置在爆炸半徑之外。如下在爆炸後1小時向動物給予rapastinel(3mg/kg IV)或0.9％無菌鹽水媒介物(1ml/kg IV)。使用3.5％-4％異氟烷將大鼠第一次麻醉，然後用1.5x 1.5mm泡沫塞(Pura-Fit耳塞，Moldex-Metric INC，Culver City，California)保護它們的耳朵。將大鼠置於頭部可及齧齒動物胸部限制器(Stoelting，USA)中以保護其身體同時允許頭部自由移動，其中頭部距離鋁激波管的端部10em(183x61cm；L-3Applied Technologies，USA)。大鼠接受通過刺穿0.014英寸的聚酯膜產生的單次約42PSI氦氣爆炸。假對照被放置在爆炸半徑之外。在爆炸後1小時向動物給予rapastinel(3mg/kg IV)或0.9％無菌鹽水媒介物(1ml/kg IV)。記錄從麻醉中恢復的潛伏期(圖11A)。恢復被定義為展現眼瞼和翻正反射以及正常走動(正常節律門，非圓形門，完全支撐的體重，一些嗅探和探索行為的證據)。在爆炸後1小時向動物給予GLYX-13(3mg/kg IV)或0.9％無菌鹽水媒介物(1ml/kg IV)。N＝4-6/組；*P＜0.05(圖11A)ANOVA。

積極情緒學習(PEL)圖11B示出使用受試者間設計在爆炸後24小時進行的單次3分鐘積極情緒學習(PEL)試驗階段的結果。N＝4-6/組。使用Fisher PLSD事後檢驗來評價結果(rapastinel+TBI對比媒介物+TBI)。

如先前所述(Burgdorf，J.，等人(2011)「Positive emotional learning is regulated in the medial prefrontal cortex by GluN2B-containing NMDA receptors，」Neuroscience 192：515-523)進行異種特異性打鬧(rough-and-tumble)遊戲，並且在給藥後3小時和2周進行測試。通過實驗者的右手施用異種特異性打鬧遊戲刺激。動物接受3分鐘的異種特異性打鬧遊戲，所述遊戲包括交替的15秒異種特異性遊戲模塊和15秒非刺激。記錄高頻超聲波發聲(USV)並且如先前所述(相同的)用Avasoft SASlab Pro(德國)通過聲波圖進行分析。對在每個非刺激周期期間發生的調頻50-kHz USV進行量化以測量PEL。動物不習慣在測試前進行刺激。

結果

如圖11A中所示，與假對照動物相比，接受TBI的動物顯示從麻醉的更長恢復時間[F(1，13)＝41.7，P＜0.05]。如圖11B中所示，rapastinel(3mg/kg IV)挽救TBI誘導的積極情緒學習的抑制[F(2，12)＝10.0，P＜.05；Fisher PLSD事後檢驗rapastinel+TBI對比媒介物+TBI，假對比媒介物+TBI對比，P＜0.05]。此外，麻醉恢復時間與PEL的發生率不顯著相關[r(15)＝-0.14，P＞.05]。在積極情緒學習測試中，單劑量的rapastinel(3mg/kg IV)完全拯救由TBI誘導的學習和情緒的不足。因此，在這種臨床前模型中，rapastinel有效治療TBI的核心認知和情感症狀，並且rapastinel似乎具有治療PTSD的治療潛力。

等效方案

雖然已經討論了本公開的特定實施方案，但以上說明書是示例性而非限制性的。在查閱本說明書之後，本領域的技術人員將顯而易見本公開的許多變化方案。本公開的整個範圍應通過參考權利要求書與其等效物的整個範圍以及說明書與這類變化來確定。

除非另外指明，否則本說明書和權利要求書中所用的表示成分的量、反應條件、參數、描述性特徵等的所有數字應理解為在所有情況下都由術語「約」來修飾。因此，除非相反指明，否則本說明書和所附權利要求書中提出的數值參數是近似值，所述近似值可根據試圖通過本公開得到的所希望的性質而變化。

本文提及的所有出版物和專利(包括以下列出的那些項)特此以引用的方式整體併入，就如同每個單獨出版物或專利具體地和單獨地以引用的方式併入。在衝突的情況下，將以本申請(包括本文的任何定義)為準。