一種霍亂弧菌的檢測方法

2023-10-17 10:39:09

一種霍亂弧菌的檢測方法
【專利摘要】本發明公開一種霍亂弧菌的檢測方法，包括採集和處理待測標本，對待測樣本進行加樣；對加樣後的待測樣本進行分子信標實時定量PCR檢測，然後記錄各樣本的CT值，並根據陰性對照和陽性對照的CT值以及檢測樣本CT值來判斷檢測樣本為陽性還是陰性。該霍亂弧菌的檢測方法具有閉管操作，準確性高，步驟簡單，檢測時間短的優點。
【專利說明】一種霍亂弧菌的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種霍亂弧菌的檢測方法。
【背景技術】
[0002]霍亂弧菌是人類霍亂的病原體，霍亂是一種古老且流行廣泛的烈性傳染病之一。曾在世界上引起多次大流行，主要表現為劇烈的嘔吐，腹瀉，失水，死亡率甚高。屬於國際檢疫傳染病。由於霍亂流行迅速，且在流行期間發病率及死亡率均高，危害極大，因此早期迅速和正確的診斷，對治療和預防本病的蔓延有重大意義。目前霍亂弧菌的檢測方法主要有以下幾種。直接鏡檢:採取病人「米泔水樣」大便或嘔吐物。鏡檢(塗片染色及懸滴法檢查)觀察細菌形態，動力特徵。此種方法的準確性不高；細菌分離培養:可將材料接種至鹼性蛋白腖水37°C培養6~8小時後，取生長物作形態觀察，並轉種於鹼性平板作分離培養，取可疑菌落作玻片凝集，陽性者再作生化反應及生物型別鑑定試驗。此種方法檢測時間長；特異性制動試驗:取檢材或新鮮鹼性蛋白腖水培養物一滴，置於載玻片上，再加霍亂弧菌多價診斷血清，加蓋玻片，用暗視野鏡觀察，3分鐘內運動被抑制的即為陽性。此種方法必須有數量較多的弧菌才檢出。

【發明內容】

[0003]本發明要解決的技術問題是提供一種具有閉管操作，準確性高，步驟簡單，檢測時間短的霍亂弧菌的檢測方法。 [0004]為解決上述技術問題，本發明採用如下技術方案:包括以下步驟:
[0005]I)用直接塗片的方式採集樣本，待測；
[0006]2)處理待測樣本，對待測樣本進行加樣，通過衍生化反應得到待測樣本的轉化物，備用;
[0007]3)取步驟2)中所得轉化物，對該轉化物進行分子信標實時定量PCR檢測，並記錄各樣本的CT值；
[0008]4)將步驟3)中記錄的CT值與陰性對照和陽性對照的CT值對照，判斷檢測樣本為陽性還是陰性。
[0009]本發明的一種霍亂弧菌的檢測方法及其製備方法的有益效果是:具有閉管操作，準確性高，步驟簡單，檢測時間短。
【具體實施方式】
[0010]為能進一步了解本發明的特徵、技術手段及所達到的具體功能，下面以【具體實施方式】對本發明做詳細描述。
[0011]實施例:
[0012]一種霍亂弧菌的檢測方法，
[0013]所述霍亂弧菌的檢測方法的製備方法過程如下:[0014]I)用直接塗片的方式採集樣本，待測；
[0015]2)處理待測樣本，對待測樣本進行加樣，通過衍生化反應得到待測樣本的轉化物，備用;
[0016]3)取步驟2)中所得轉化物，對該轉化物進行分子信標實時定量PCR檢測，並記錄各樣本的CT值；
[0017]4)將步驟3)中記錄的CT值與陰性對照和陽性對照的CT值對照，判斷檢測樣本為陽性還是陰性。
[0018]實驗例:
[0019]實驗對象:200名感染霍亂弧菌程度不同的患者。
[0020]實驗方法:200名患者全部用本發明的霍亂弧菌的檢測方法檢測。
[0021]實驗結果:通過本發明的霍亂弧菌的檢測方法檢測，所有患者都成功地檢測出來丙型霍亂弧菌。
[0022]由實驗結果可知，使用本霍亂弧菌的檢測方法閉管操作，準確性高，步驟簡單，檢測時間短。
[0023]以上已將本發明做一詳細說明，以上所述，僅為本發明之較佳實施例而已，當不能限定本發明實施範圍 ，即凡依本申請範圍所作均等變化與修飾，皆應仍屬本發明涵蓋範圍內。
【權利要求】
1.一種霍亂弧菌的檢測方法，其特徵在於:包括以下步驟: 1)用直接塗片的方式採集樣本，待測； 2)處理待測樣本，對待測樣本進行加樣，通過衍生化反應得到待測樣本的轉化物，備用； 3)取步驟2)中所得轉化物，對該轉化物進行分子信標實時定量PCR檢測，並記錄各樣本的CT值； 4)將步驟3)中記錄的CT值與陰性對照和陽性對照的CT值對照，判斷檢測樣本為陽性還是陰性 。
【文檔編號】C12Q1/68GK104032009SQ201410261852
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年6月12日 優先權日:2014年6月12日
【發明者】江崇才, 李作臻, 仇彩霞 申請人:江崇才