來自白介素-6家族的細胞因子在用於與幹擾素-α組合施用的組合物的製備中的用途的製作方法
2023-10-17 23:20:39 2
專利名稱：：來自白介素-6家族的細胞因子在用於與幹擾素-α組合施用的組合物的製備中的用途的製作方法來自白介素-6家族的細胞因子在用於與幹擾素-a組合施用的組合物的製備中的用途本發明涉及與細胞因子與幹擾素組合用於製備設計用於病毒疾病治療的組合物的用途。現有技術千擾素(IFN)系統是哺乳動物中針對病毒疾病的防禦的第一線。I型幹擾素(其包括一些IFN-a和IFN-P亞型)是具有抗病毒活性的分子，其響應於病毒感染在哺乳動物細胞中誘導。IFN-a的作用由與表面細胞受體多亞基的相互作用介導，所述多亞基由兩種受體亞基，INF-ot受體1(IFNAR1)和IFNAR2組成。僅鑑定了一種IFNAR鏈形式；識別了三種IFNAR2亞基的變體一種是全長的，IFRNAR2c，以及兩種截短的同種型，IFNAR2b和IFNAR2a。IFNAR2c變體涉及與配體的結合和信號的轉導，而兩種截短的形式，不具有細胞內結構域的IFNAR2b和IFNAR2a通過與IFNAR2c竟爭結合IFN-a來抑制INF-a信號當IFN-a與受體結合時，IFN-ot信號級聯被啟動。INF-ot與受體的結合引起與IFNAR相關的酪氨酸激酶的活化(Janus激酶1(Jakl)和酪氨酸激酶2(Tyk2)),其使兩種亞基IFNAR1和IFNAR2磷酸化。當被Tyk2或Jakl磷酸化時，磷酸化的IFNAR1提供了信號轉導的結合點以及轉錄2的激活物(STAT2)，所述轉錄2的激活物含有與Src的同源-2結構域其他的STAT，包括STAT1、STAT3和STAT5，被連續地徵募到受體來磷酸化和活化。活化的單體STAT1和STAT2然後被再次釋放到細胞質中，在此它們形成雜二聚體並與幹擾素調節因子9/蛋白P48結合，來形成稱為千擾素-刺激的基因因子3(ISGF3)的活性轉錄因子複合物。該複合物被轉位到核中並結合IFN刺激應答元件(ISRE)以啟動目標基因的轉錄，包括某些抗病毒和免疫調節蛋白質。IFN-a還誘導其他STAT複合物的形成，包括STAT1/STAT1、STAT1/STAT3和STAT3/STAT3,其與敏感基因的啟動子區域中活化的Y序列結合。在原代人類肝細胞中，IFN-oc激活STAT1、STAT2、STAT3和STAT5,隨後誘導廣泛的抗病毒和促凋亡基因，這些基因可能促進IFN-a在人類肝臟中的抗肺瘤和抗病毒活'法》與IFN-oc相反，在激活STAT1、STAT2和STAT3的II型IFN(IFN-Y)的情況下，與受體的結合導致STAT1被Jakl和Jak2專門地磷酸化，這跟隨著STAT1的同二聚化和同二聚體的核轉位。病毒感染在全世界是很大的健康難題。在引起慢性感染的病毒中，導致B型肝炎(HBV)和C型肝炎(HCV)的病毒作為慢性病毒肝炎和肝硬化的致病因素是重要的；這些失調影響了全世界超過5億人(約3億被HBV感染，2億被HCV感染)。HBV主要在垂直傳播和免疫抑制個體中引起慢性感染。另一方面，HCV感染由於它在大多數情況下發展為慢性的傾向是值得注意的，這表明這種病毒具有發展的特別有效的機制來逃避幹擾素系統。患有慢性HCV感染的患者，以及患有慢性B型肝炎的患者，不能響應幹擾素治療。在慢性B型肝炎中，在低於40%的病例中發生持續的抗病毒響應[1]。在慢性C型肝炎中，雖然被基因型HCV2或3感染的大多數患者在使用聚乙二醇化的INF-a和病毒唑的組合治療24或28周之後展現了持續的病毒學響應(SVR)[2]，被基因型1感染的那些患者的僅50%使用這種治療方式實現了SVR[2]。由於在西方世界和亞洲-故HCV感染的患者的超過80°/。相應於基因型1,急迫地需要更有效的手段來提高IFN-a的抗病毒效果。在HCV和其他慢性病毒疾病中觀察到的IFN-oc抗性的根本機制仍然了解很少，非常需要找到在這些疾病中克服了對IFN-a治療的抗性的治療策略。受病毒感染的細胞對幹擾素-oc的反應取決於幾個決定因素，包括與病毒相關的那些以及與宿主相關的那特定幾個。以及顯示了各種HCV基因產物調節宿主對IFN治療的反應並影響病毒疾病的嚴重度，特別是在肝炎疾病的情況中。注意到，HCV的非結構蛋白(NS5A)和結構蛋白(E2)與PKR相互作用，PKR是涉及響應於IFN的抗病毒狀況發展的關鍵分子[3，4]。這可能阻斷PKR，引起在HCV感染的細胞中IFN活性的抑制。另一方面，一些研究顯示，IFN-oc誘導的STAT1信號在具有HCV的轉基因小鼠中和在患有慢性HCV的患者的肝活檢中都受到影響[5，6]。在HCV感染的肝臟樣品中以及在攜帶基因組HCV複製子(全長)的肝細胞中觀察到，在IFNAR2和STAT3mRNA數量上的顯著降低。相關的發現是，在含有全長HCV複製子的肝細胞中IFN-oc對STAT1、STAT2和STAT3的激活被阻斷，這表明在感染的細胞中HCV複製可以阻斷IFN-ot信號轉導。還令人感興趣的是，當與前炎症性分子IFN-Y孵育時，這些細胞中的STAT1活化不受影響，這表明HCV產生的STAT1活化阻斷特異於I型IFN信號轉導級聯，並且不影響II型IFN信號轉導途徑。存在著激活Jak-STAT信號轉導途徑的其他細胞因子，特別是IL-6家族的成員，其包括IL-6、IL-U、白血病抑制因子(L1F)、制瘤素(OSM)、心肌營養蛋白-1(CT-)、纖毛神經營養因子(CNTG)和心肌營養蛋白樣細胞因子(CLC)[7]。這些細胞因子與細胞質膜的受體複合物結合，所述受體複合物包含共同的gpl30傳導信號受體鏈[7]。信號的傳導需要Jak酪氨酸激酶家族成員的活化，引起轉錄因子STAT1和STAT3的活化。這些細胞因子通過共同的gpl30受體亞基潛在地活化STAT3,並且以教少的程度活化STAT1。然而，雖然顯示了IL-6誘導某些抗病毒效果[8],這種細胞因子的抗病毒活性比幹擾素-a的低得多。本發明涉及IL-6家族白介素，優選的心肌營養蛋白-1(CT-1)或制瘤素M(OSM)的用途(1)來增強千擾素-aUFN-ot)的抗病毒活性；(2)來克服在不響應IFN-oc治療的、患有慢性病毒感染的患者中觀察到的對幹擾素的抗性(本身或與其他抗病毒成分相關)；(3)來實現IL-6家族白介素，優選的CT-1或OSM加上IFN-oc的組合治療，作為用於任何類型的病毒感染、優選的C型肝炎病毒(HCV)感染的改進的抗病毒治療，其中優選的組合CT-l-IFN-a或OSM-IFN-a被證明在抑制HCV複製中特別有效。本發明實現了以下目標(1)顯示了與單獨的細胞因子(IFN或IL-6家族細胞因子)所誘導的相比，IFN-oc與IL-6家族白介素，優逸的與CT-1和OSM的組合產生了更強力的抗病毒效果；以及(2)顯示了與1L-6家族細胞因子，特別是CT-1或制瘤素M相關聯的IFN-a能夠克服IFN-a信號轉導級聯的阻斷(並且因而，克服了當病毒、優選的HCV在受感染細胞中複製時產生的IFN-a效果的弱化)。發明的描述首先，本發明涉及至少一種IL-6家族細胞因子一gp130家族一或編碼它的DNA序列在製備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用於在病毒疾病的治療中與至少一種IFN-a或編碼它的DNA序列組合施用，所述細胞因子選自心肌營養蛋白-1、IL-H、白血病抑制因子、制瘤素M、纖毛神經營養因子、心肌營養蛋白樣細胞因子、以及其組合；以及，再更優選的，所迷細胞因子是心肌營養蛋白-1或制瘤素M。如本發明中使用的，"IL-6家族"細胞因子，例如，CT-1，涉及-所述細胞因子的完整的天然形式；-所述細胞因子的任何活性片段，其是維持了本發明中要求的完整細胞因子的生理學效果的所述細胞因子的任何部分多肽序列；以及-所述細胞因子的任何多肽衍生物，其是與所述天然細胞因子具有大於80%的同源性、並且維持了本發明中要求的完整細胞因子的生理學效果的任何多肽序列。IL-6家族細胞因子(無論是完整的、活性片段還是多肽衍生物)可以來自天然形式以及任何形式的重組細胞因子，從編碼完整細胞因子、活性片段或多肽衍生物的任何多核苷酸形式開始。此外，在IL-6家族的蛋白質中，被認為完整的或作為活性片段，或在重組細胞因子之內，一個或幾個胺基酸可以通過任何提及的方法被刪除、替換或添加到蛋白質，只要維持了它在本發明上預期的活性。另一方面，根據本發明，本發明的IFN-a是任何類型的IFN-ou在特定的實施方式中，所迷IFN-a選自IFN-ot-2a、IFN-a-2b、IFN-a-5、共有序列幹擾素、純化的IFN-a、聚乙二醇化的IFN-a以及其組合。在另一個特定的實施方式中，IFN-a選自聚乙二醇化的IFN-a-b、聚乙二醇化的IFN-a-2a、聚乙二醇化的IFN-a-5以及其組合。IFN-oc和IL-6家族細胞因子的組合使用被設計用於優選的病毒疾病的治療。作為可以通過幹擾素和IL-6家族細胞因子的組合使用來治療的病毒疾病的實例，在其餘的之中可以提及以下的由腦心肌炎病毒、肝炎B和C、HIV引起的疾病、皮膚病毒感染(小雞痘、皰療、measles)、呼吸病毒感染、中樞神經系統的病毒感染、肝病毒感染、唾液腺的病毒感染、傳染性單核細胞增多症和生殖器疣優選的，所述病毒疾病是C型肝炎。此外，根據本發明，IL-6家族細胞因子一或細胞因子一和IFN-a可以單獨地施用，存在於不同的藥物組合物中；或它們可以共同地施用，存在於同一藥物組合物中。因而，本發明的其他目標是一種藥物組合物，其包含藥學上可接受量的至少一種IL-6家族細胞因子一gpl30家族一，或編碼它的DNA序列，以及藥學上可接受量的至少一種IFN-a，或編碼它的DNA序列。在包含至少一種IFN-oc或編碼它的DNA序列，以及至少一種IL-6家族細胞因子或編碼它的DNA序列的所述藥物組合物中，IL-6家族細胞因子優選的選自IL-6、IL-ll、白血病抑制因子、制瘤素M、心肌營養蛋白-1、纖毛神經營養因子、心肌營養蛋白樣細胞因子以及其組合；再更優選的，所迷IL-6家族細胞因子是心肌營養蛋白-1或制瘤素M。在本發明的藥物組合物中，所述IFN-a是任何類型的IFN-oc。在優選的實施方式中，所述IFN-a選自IFN-oc-2a、IFN-ot-2b、IFN-ot-5、共有序列幹擾素、純化的IFN-a、聚乙二醇化的IFN-a以及其組合。在另一個其他優選的實施方式中，所迷IFN-a選自聚乙二醇化的IFN-a-b、聚乙二醇化的IFN-a-2a、聚乙二醇化的IFN-a-5以及其組合。在特定的實施方式中，編碼1L-6家族細胞因子(無論它是完整的、活性片段還是多肽衍生物)或IFN-oc的DNA序列被摻入到表達栽體中，例如，質粒或病毒栽體，其優選的與調節所迷細胞因子或IFN-a表達的控制序列可操作地連接。使用所迷DNA序列構建所述表達栽體可以通過在操作手冊中包含的常規重組技術來進行，所述操作手冊例如"MolecularClong:ALaboratoryManual",by丄Sambrook，D.W.RusselEds,2001,3rded.ColdSpringHarbor,NewYork。這些藥物組合物實施方式是利用基因轉移的治療(基因治療)感興趣的。本發明的藥物組合物可以進一步包含至少一種賦形劑，其與IL-6家族細胞因子或編碼它的DNA序列是藥學上相容的，以及與IFN-a或編碼它的DNA序列是藥學上相容的。此外，在所迷藥物組合物中，IL-6家族細胞因子或編碼它的DNA序列以及IFN-a或編碼它的DNA序列可以在各自的栽體試劑中攜帶。(例如，片劑、膠囊、顆粒劑，等等)或液體組合物(例如，溶液、懸浮液、乳劑，等等)用於通過任何適合的施用途徑，例如，口服、鼻部、胃腸外、體表、透皮、直腸的途徑等等。在特定的實施方式中，所述藥物組合物可以是口服施用藥物形式，固體或液體的。口服施用藥物形式的示範性實例包括片劑、膠囊、顆粒劑、溶液、懸浮液等等，可以含有常規的賦形劑，例如粘結劑、稀釋劑、崩解劑、潤滑劑、溼潤劑等等，並且可以通過常規方法來製備。所迷藥物組合物也可以適合於胃腸外施用，以例如滅菌溶液、懸浮液或凍幹的產物的形式，處於適合的給藥形式中；在這種情況下，所述藥物組合物應包括足夠的賦形劑，例如緩沖劑、表面活性賦形劑等等。在任何情況下，應當根椐選定的施用藥物形式來選擇賦形劑。對於這些和其他潛在的可選擇途徑，用於藥物施用的不同藥物形式和它們的製備的綜述可以在例如書本"Tecnologiafarmaceutica，，["PharmaceuticalTechnology"]'by丄L.VilaJato，997Vols.IandII,Ed.Sintesis，Madrid中或"HandbookofPharmaceuticalManufacturingFormulations",byS.K.Niazi,2004Vols.ItoVI，CRCPress,BocaRaton中找到。在特定的實施方式中，所述藥物組合物被設計用於胃腸外施用，優選的，皮下的、靜脈內的、肌肉內的或腹膜內的施用。在本發明的特定實施方式中，所述IFN-oc是聚乙二醇化的形式。聚乙二醇化形式的組合物製備的一些實例可以在US5,762,923、US5,766，582中找到。還可能商業上地購買這些聚乙二醇化形式的某一些，例如，ScheringCorporation(Kenilworth,N丄，U.S.A.)的PEG-Intron(聚乙二醇化的IFN-a-2b)和HoffmannLaRoche(翻ey,N丄U.S.A.)的PEGASYS(IFN-a-2a)。對於治療中的應用，IL-6家族細胞因子和IFN-oc優選的都應處於藥學上可接受的形式或基本上純的形式，即，它們應當具有藥學上可接受的純度水平，排出藥學上可接受的賦形劑並且不包括被認為在正常劑量水平有毒的材料。lL-6家族細胞因子和1FN-ot的純度水平優選的高於50%,更優選的，高於70%，更優選的，高於90%。在優選的實施方式中，它們高於90%。一般地，要施用的IL-6家族細胞因子和IFN-a的藥學有效數量應當取決於，在其他因素之中，要治療的個體、該個體患上的疾病的嚴重度、選擇的施用形式，等等。為此，本發明中提及的刑量應當根據對本領域技術人員的指導單獨地考慮，後者應當在所述變量的基礎上調整劑量。然而，IL-6家族細胞因子和IFN-a可以每天施用一次或多次，例如，每天1、2、3或4次。作為示範性的實例，並且這不限制保護的範圍，在組合心肌營養蛋白-1和IFN-a-2a(或2b)的特定實施方式中，心肌營養蛋白-1的一般總每日數量應當在1jag/kg和10mg/kg體重之間；IFN-a-2a的一般總每日數量在1.5和10MIU每日之間，或每周40到300微克聚乙二醇化的IFN-a之間。通常，在治療的第一周期間劑量水平將會更高，在隨後的階段劑量降低。類似地，施用方案可以是每天、每周三次或每周地。另一方面，心肌營養蛋白-1和1FN-a可以根據不同的施用方案來施用(例如，不同的施用途徑或不同的頻率)。本發明的其他目標是用於病毒疾病的治療的藥盒，其至少包括-第一成分，其包含至少一種IL-6家族細胞因子一gpl30家族一(上文定義的完整的、活性片段或多肽衍生物)或編碼所述細胞因子的DNA序列；和-第二成分，其包含至少一種IFN-a或編碼所述IFN-a的DNA序列。根據本發明的藥盒優選的包含選自IL-6、IL-ll、白血病抑制因子、制瘤素M、心肌營養蛋白-1、纖毛神經營養因子、心肌營養蛋白樣細胞因子和其組合的IL-6家族細胞因子，以及更優選的，IL-6家族細胞因子是心肌營養蛋白-1或制瘤素M。根據本發明的藥盒包含任何類型的IFN-a,優選的選自IFN-a-2a、IFN-oc-2b、IFN-ot-5、共有序列幹擾素、純化的IFN-ot、聚乙二醇化的IFN-a以及其組合的一種。在另一個其他優選的實施方式中，IFN-oc選自聚乙二醇化的IFN-a-2b、聚乙二醇化的IFN-ot-2a、聚乙二醇化的IFN-a-5以及其組合。在特定的實施方式中，在所述藥盒中編碼IL-6家族細胞因子(無論是完整的、活性片段還是多肽衍生物)或IFN-a的DNA序列被摻入到表達栽體中。在本發明的藥盒中，所述第一成分和第二成分可以另外包含至少一種藥學上可接受的賦形刑，其與IL-6家族細胞因子一或編碼它的DNA序列一以及與IFN-ot—或編碼它的DNA序列是相容的。根據本發明，以上定義的藥盒可以包含在獨立的藥物組合物中的第一和第二成分；或所述第一和第二成分可以在同一藥物組合物中在藥盒中存在。這種藥盒還可以包含第三成分，其包含一種或多種賦形劑，所述賦形劑與IL-6家族細胞因子一或編碼它的DNA序列一以及與IFN-a—或編碼它的DNA序列是藥學上相容的。所述第三成分可以另外包含一種或多種栽體試劑，所述栽體試劑與IL-6家族細胞因子一或編碼它的DNA序列一以及與IFN-a—或編碼它的DNA序列是藥學上相容的。本發明的其他目的是治療病毒疾病的方法，其包括以組合的方式施用治療有效量的至少一種IL-6家族一gpl30家族一細胞因子(無論是完整的、活性片段還是多肽衍生物，它們在先前已經被定義)或編碼它的DNA序列，以及治療有效量的至少一種IFN-a或編碼它的DNA序列。在特定的實施方式中，該方法的編碼IL-6家族細胞因子或IFN-a的DNA序列被摻入到表達栽體中。在上文定義的方法中，病毒疾病可以由腦心肌炎病毒、肝炎B和C、HIV、皮膚病毒感染(小雞痘、帶狀皰滲、麻滲)、呼吸病毒感染、中樞神經系統的病毒感染、肝病毒感染、唾液腺的病毒感染、傳染性單核細胞增多症和生殖器疣產生。根據本發明的方法的優選的實施方式，所述病毒疾病是C型肝炎。根據本發明的方法，IL-6家族細胞因子優選的選自IL-6、IL-ll、白血病抑制因子、制瘤素M、心肌營養蛋白-1、纖毛神經營養因子、心肌營養蛋白樣細胞因子和其組合；再更優選的，IL-6家族細胞因子是心肌營養蛋白-1或制瘤素M在根據本發明定義的方法中，所述IFN-a是任何類型的IFN-a。在優選的實施方式中，它選自IFN-a-2a、IFN-a-2b、IFN-a-5、共有序列幹擾素、純化的IFN-a、聚乙二醇化的IFN-a以及其組合；在另一個其他優選的實施方式中，IFN-a選自聚乙二醇化的IFN-a-2b、聚乙二醇化的1FN-a-2a、聚乙二醇化的IFN-a-5以及其組合。此外，根椐本發明的方法，後者可以包括白介素家族細胞因子、優選的心肌營養蛋白-1與IFN-a的組合的以及同時的施用。在這種方法中，IL-6家族細胞因子(無論是完整的、活性片段還是多肽衍生物)和IFN-a可以存在於向患者施用的同一藥物組合物中；患者IL-6家族細胞因子和IFN-ot可以在獨立的藥物組合物中施用。本發明顯示了，當包含完整HCV複製子的肝細胞用IFN-a和IL-6家族細胞因子、特別是心肌營養蛋白-1或制瘤素M刺激時(1)當細胞與單獨的IFN-a或與單獨的IL-6家族細胞因子(例如，CT-1或OSM)孵育時發生的HCV對STAT3磷酸化的抑制效果被克服。(2)存在著同與單獨的細胞因子孵育細胞時相比幹擾素敏感性基因(ISG),例如2，-5，-寡聚腺普酸合成酶(2，-5，OAS)的更高的誘導，以及更高水平的STAT1和STAT3。(3)與單獨使用細胞因子時相比，病毒的複製被更有效地抑制。(4)IFN-a和CT-1之間，或IFN-a和OSM之間的相互作用是強烈sinergism的u附圖的簡要說明附圖1顯示了STAT、STAT2和STAT3的磷酸化的分析。Huh7細胞(Huh7)和含有完整基因組HCV複製子(Core-3，)的Huh7細胞用501U/ml的IFN-a-2(IFN-a)或用20ng/ml的心肌營養蛋白-KCT-1)、或用IFN-a-2和CT-1的組合處理15、60和120分鐘，通過Wetstern印跡的方式分析細胞提取物中存在的磷酸化的STAT1、STAT2和STAT3的數量u附圖2顯示了使用單獨(-CT)的或與20ng/mlCT-1組合的(+CT)5或50IU/ml的1FN-a-2(1FN5,IFN50);單獨(-OSM)的或與20ng/mlOSM組合的(+OSM)5或50IU/ml的1FN-a-2處理3天、含有完整HCV複製子的Huh7細胞中存在的STAT1、STAT3和2'-5，OASmRNA的定量實時RT-PCR分析。對照未處理的細胞。附圖3顯示了用5或50IU/ml的IFN-a-2或IFN-a-5，以及20ng/ml的CT-1或OSM或IL-6處理3天、含有完整HCV複製子的Huh7細胞中存在的HCVRNA的定量實時RT-PCR分析。附圖4顯示了通過用細胞因子處理3天、含有完整HCV複製子的Huh7細胞中存在的HCVRNA的實時的RT-PCR,組合IFN-a-2或IFN-a-5(5U/ml)加上CT-l或OSM或IL-6(20ng/ml)的抗病毒比較效果。附圖5顯示了對抗腦心肌炎病毒感染保護的Huh7細胞的百分比。Huh7細胞用5ng/ml或50ng/ml的CT-l以及不同數量的IFN-a-2預處理24小時，並用105PFU的腦心肌炎病毒(EMCV)感染，在24小時後，使用結晶紫染料染色細胞來測量存活細胞的數量。發明實施方式實驗1々C'7W^逸會^舉#7〃。7^*子^^應尹^/,子#爭焱農^教詢的研宏f,^/人在未轉染的Huh7細胞中(肝細胞瘤細胞系)，添加50IU/ml的IFN-a-2(IFN-a-2)誘導STAT1、STAT2和STAT3的磷酸化，在1小時和2小時STAT1和STAT2的最大活化，在1小時STAT3最大活化(參見附圖1A)。然而，在用全長HCV複製子轉染的Huh7細胞中，與IFN-oc-2孵育後觀察到STAT1、STAT2和STAT3磷酸化的顯著抑制。因而，存在著激活的STAT3和STAT1的完全缺乏以及STAT2活化的顯著抑制(參見附圖1A)u另一方面，在未轉染的Huh7細胞中，發現添加20ng/mlCT-1引起STAT3和STAT1兩者的活化(在STAT3的情況下更強烈)，在15分鐘和1小時有最大值，在2小時充分降低(附圖1B)。如預期的，CT-1不誘導任何STAT2活化。在用完整HCV複製子轉染的Huh7細胞中，CT-對STAT3的活化被相當大地降低，而STAT1的磷酸化僅輕微受影響(附圖1B)。當用50IU/ml的IFN-a-2和20ng/ml的CT-1的混合物孵育未轉染的Huh7細胞時，與用每種單獨的細胞因子孵育細胞時相比，檢測到更強烈和持久的STAT3與STAT1的磷酸化。STAT2的活化類似於使用單獨的IFN-a-2所發現的。明顯的是，當用IFN-a-2(50IU/ml)力dCT-1(20ng/ml)混合物孵育完整HCV複製子轉染的Huh7細胞時，沒有任何損害地發生STAT3磷酸化，與使用單獨的IFN-a-2孵育未轉染的細胞時相比，STAT3的活化不僅更強烈，而且更持久(附圖1C)。這個事實是值得注意的，因為，如已經提及的(如附圖1A和1B所示)，在Huh7細胞中HCV複製嚴重地降低通過單獨的IFN-ot-l和CT-1的STA丁3活化，因而令人驚訝的是通過共同使用兩種細胞因子孵育細胞這種阻斷消失了；這為病毒治療中有前景的測量打開了新的期望。還必需注意的是，當組合IFN-a-2和CT-1來治療具有HCV複製的細胞時，不僅產生了強力的、持續的STAT3活化，STAT1活化類似於用單獨的CT-1孵育未轉染細胞時所發現的，並且比用單獨的IFN-a-2孵育未轉染細胞時的更強烈(比較附圖1A和1B)。重要的是注意到，在具有持續的HCV複製的細胞中IFN-a-2不能激活STAT1，而CT-1加IFN-a-2的組合能夠在具有HCV複製的細胞中非常有效地激活這種重要的抗病毒因子。這清楚地顯示了，組合IFN-a-2和CT-1引起了抗病毒活性的改進、容許STAT2磷酸化，雖然在水平上明顯低於使用沒有HCV複製的細胞時的(參見附圖1C)。總之，當以獨立的方式用IFN-a-2處理具有持續HCV複製的細胞時，沒有STAT1和STAT3活化，僅觀察到低水平的STAT2。細胞抗病毒狀態的兩種重要誘導物活化的STAT1和STAT3的缺乏可能阻止STAT1-STAT2異二聚體、STAT1-STAT3異二聚體、以及STAT1和STAT3同二聚體的形成，因而破壞細胞的抗病毒防禦。與IFN-a-2組合使用CT-1容許形成高水平的活化的STAT1和STAT3,因而恢復了細胞的病毒才氐抗才幾制。在附圖1所示的實驗中，人們可以看到HCV感染不僅引起缺血性STAT1活化，還引起STAT3和STAT2蛋白水平的降低。附圖1中呈現的研究顯示了使用IFN-a-2或CT-1、或兩者的組合賻育的短期效果。以下描述的實驗顯示了，孵育72小時，人們可以觀察到使用CT-1與IFN-a-2、或OSM與IFN-a-2的組合處理產生STAT3的提高的表達，因而對抗了感染的細胞中HCV的影響(參見附圖2)。實驗方法1孩夢f#〃CK《^/^^//w/77勿^《的建ji。如已經描述的[9],建立了表達全長HCV複製子的Huh7細胞。總言之，pI389/Core3，/5,l使用Seal(NewEnglandBiolabs,USA)線性化，用作模板用於使用T7RAN聚合酶(Promega,USA)進行RNA合成。使用20ng合成的RNA來電泳107個Huh7細胞，24小時後，添加500jug/mlG418(Gibco，USA)。一周兩次，用G418替換補充的培養基，轉染後4周，收集對G418抗性的混合的克隆，用於隨後的分析。伊逸為、^f,'表達全長HCV複製子或不表達的Huh7細胞以200,000個/孔播種到6孔平板中具有10%FCS(Gibco)的D-MEN(Gibco)中。添加501U/ml的IFN-a-2(IntronA,Schering-Plough)或20ng/ml的CT-1(R&DSystems,UK)、或IFN-oc-2(50IU/ml)加CT-1(20ng/ml)的組合持續不同的時間15分鐘、l小時和2小時。隨後在裂解緩沖液(60mMTris-HCIpH6.8，2%SDS，2.5%甘油，0.7M2-巰基乙醇和0.02%溴酚藍)中裂解Huh7細胞。樣品在還原條件下在7.5%的SDS-聚丙烯醯胺凝結(Bio-RadLaboratories,CA)中分辨。在電泳之後，將它們轉移到硝酸纖維素膜(Bio-RadLaboratories)上，用Ponceau紅溶液(Sigma-Aldrich,Germany)染色，來驗證有等量的蛋白加栽。在具有5%脫水牛奶的TBS-T(50mMTris-HCI(pH7.6)，200mMNaCl和0.1%Tween-20)中孵育所迷膜。通過在TBS-T中用特異性初級抗體孵育1小時來檢測蛋白。隨後在TBS-T中洗滌膜，添加結合了過氧化物酶的二級抗體1小時。膜在TBS-T中經歷廣泛的洗滌，根椐廠家的指導使用"WesternLightingChemiluminescenceReagentPlus"化學焚光檢測系統(PerkinElmer,USA)檢視特異性蛋白條帶。隨後，膜進行自動放射成像，通過MolecularAnalyst/PC程序(Bio-RadLaboratories)的方式進行的光密度分析方式來對條帶定量。戎#,抗-磷酸-STATlty，和抗-磷酸-STAT3ty「，抗體和與HRP結合的抗兔1gG抗體購自CellSignalingTechnology(USA)。抗-STAT3、抗-磷酸-STATr'「727、抗STAT2和抗-磷酸-STAT2一'89抗體從UpstateBiotechnology(USA)獲得。抗STATl抗體來自SantaCruzBiotechnology(SantaCruz,CA)。抗肌動蛋白抗體來自Sigma-Aldrich(Germany)。為了確定1L-6家族細胞因子與IFN-a的組合是否引起細胞中更強的抗病毒狀態，我們進行了其他實驗，設計以a)評估IFN-oc加IL-6家族細胞因子的組合治療是否比任何細胞因子本身更強烈地提高千擾素敏感基因的表達；b)確定IFN-a加IL-6家族細胞因子的組合治療是否比每種單獨的細胞因子更強力地抑制HCV複製；c)評估IFN-a-2加CT-1的組合治療是否在使細胞防禦HCV非相關病毒的細胞病變效果中更加有效，以及；d)確定IFN-a和IL-6家族細胞因子之間相互作用的種類。實驗2./FyV-ot-2》。(T-/,減/FA^-oc-2》aOSMW遂會治^,力:ff挽,敏^嫂it^as、G卩^謬早效果的申估r餘厲2J在與IFN-ot-2(5或50IU/ml)或CT-1(20ng/ml)、或OSM(20ng/ml)、或組合的IFN-ot-2+OSM孵育72小時後在攜帶HCV複製子的Huh7細胞上研究ISG2，-5，OAS、STAT1和STAT3的表達(參見附圖2A-2F)。我們觀察到，雖然CT-1或OSM本身不能提高或微弱地提高這些ISG的表達，添加CT-1或OSM到低劑量或高劑量的IFN-ot-2中引起ISG表達的顯著提高，其表明CT-1或OSM可以顯著地增強IFN-ot-2在支持病毒複製的細胞中提高性調節抗病毒基因的能力。雖然在此分析的三種1SG具有顯著的抗病毒效果，通過組合CT-1或OSM與IFN-ot-2在STAT3表達方面的提高是特別相關的，因為這種因子不僅具有抗病毒性質，而且展現了強力的細胞保護和抗驗證性質。實驗方法21SG的mRNA表達的實時RT-PCR分析。表達全長HCV複製子的Huh7細胞以100,000個/孔播種到6孔平板中具有10%FCS(Gibco)的D-MEN(Gibco)中。添加50或5IU/ml的IFN-oc-2本身、或與20ng/ml的CT-1、或與20ng/ml的OSM組合。細胞培養維持3天。用所述細胞因子每天替換補充的培養基。根據"UltraspecRNAIsolationSystem"方案(Biotech,USA)獲得總RNA，其是基於Cho薦ynski和Sacc即0]描述的方法。用DNAase(Gicbo-BRL,UK)處理兩微克的總RNA，之後在存在RNaseOUT(Gibco-BRL)的情況下用M-MLVReverseTranscriptase(GiboBRL)逆轉錄。STAT、2-50AS和卩-肌動蛋白的表達通過使用Icycler和IQSYBRGreenSupermic(Bio-RadLaboratories,CA)的實時RT-PCR的方式測量。2)u1等分量的cDNA庫用於每個PCR，其在最終20)al的體積中含有針對每個基因的特異性正向和反向引物(表l)。為了確定獲得的PCR產物的特異性，分析它們的解離溫度。在相同樣品中P-肌動蛋白的量的基礎上將結果標準化。每個轉錄產物的數量通過式2"'^^自"t"^來表示，ct是在背景螢光上螢光信號顯著提高的點。4/.這，研兌f《^W^7錄基因正向5I物(5'-r)反向？l物(5'-3')2'-5'OASSEQ.ID.NO:1TTAAGAGGCAACTCCGATGGSEQ.ID.NO:2AGCAGACTGCAAACTCACCASTAT1SEQ.ID.NO;3GCTATTCACAACCACTCATTCASEQ,ID,NO;4ACAAGATACAGCCACATAGACASTAT3aSEQ.ID.NO:5GTCCGTGGAACCATACACAASEQ，ID,NO:6CAATGGTATTGCTGCAGGTGP-肌動蛋白SEQ.ID,NO:7AGCCTCGCCTTTGCCGASEQ.ID.NO:8CTGGTGCCTC;GGGCGHCVSEQ.ID,NO:9CCTGTGAGGAACTACTGTCTSEG,ID.NO;10CTATCAGGCAGTACCACAAG實驗3.,族^應^子^逆合#力全#//^^《#f橫^WZ/w/7細應*//(^《^^恭^^研^:f餘^3乂由於在組合IFN-ot-2加CT-1或OSM時觀察到的更強ISG誘導，期望的是分析這種組合在具有全長HCV的細胞中病毒加栽的降低方面是否優於IFN-a-2本身，或優於IL-6家族細胞因子本身。因而，攜帶HCV複製子的Huh7細胞與IFN-a(IFN-a-2或IFN-a-5，5或50IU/ml)加上或減去1L-6家族細胞因子(IL-6、CT-1、OSM;20ng/ml);或與IL-6家族細胞因子本身孵育。在培養72小時後測量HCVRNA的數量(附圖3\3B、3C)。在附圖3中，人們可以看到IL-6家族細胞因子IL-6、CT-1和OSM本身具有中度的抗病毒效果。然而，CT-l和OSM連同IFN-a-2以及IFN-a-5在這些細胞因子低劑量(5IU/ml)或高劑量(501U/ml)使用時強烈地增強抗病毒效果(附圖3A和3B)。IL-6連同IFN-a-2或IFN-a-5以較弱的方式增強抗病毒效果(附圖3C)。因而IFN-a-2或IFN-a-5加上CT-1或OSM的組合治療分別提高了IFN-a的抗病毒效果大約5和10的因數。進一步的，IFN-a-2或IFN-a-5加上1L-6的組合治療提高了大約2的因數。在附圖4中，比較性地呈現了IL-6、C丁-l和OSM(20ng/ml)對IFN-a-2(5U/mL)(附圖4A)或IFN-a-5(附圖4B)的抗病毒作用的增強效果。清楚的觀察到組合IFN-a/CT-l和IFN-a/OSM相對於組合IFN-a/IL-6的更高的增強抗病毒效果u實-瞼方法3//CK尺M4為V,。表達全長HCV複製子的Huh7細胞以100,000個/孔播種到6孔平板中具有10°/qFCS(Gibco)的D-MEN(Gibco)中。添加50或5IU/ml的IFN-a-2或IFN-a-5本身、或與20ng/ml的CT-1或OSM或IL-6組合。細胞培養維持3天。用所述細胞因子每天替換補充的培養基u根椐"UltraspecRNAIsolationSystem"方案(Biotech,USA)獲得總RNA，其是基於Chomczynski和Sacchi[10]描迷的方法。用DNAase(Gicbo-BRL，UK)處理兩微克的總RNA，之後在存在RNaseOUT(Gibco-BRL)的情況下用M-MLVReverseTranscriptase(GiboBRL)逆轉錄。HCVRNA和P-肌動蛋白mRNA的表達通過使用Icycler和IQSYBRGreenSupermic(Bio-RadLaboratories,CA)的實時RT-PCR的方式測量。2m1等分量的cDNA庫用於每個PCR,其在最終20jul的體積中含有針對HCV或P-肌動蛋白基因的5非翻譯區的特異性正向和反向引物(表l)。為了確定獲得的PCR產物的特異性，分析它們的解離溫度。在相同樣品中P-肌動蛋白的量的基礎上將結果標準化。HCVRNA的數量通過式2"(一"'-"(hc:v'來表示，"是在背景螢光上螢光信號顯著提高的點。實驗4./F;V-a-2加CT-/在好^"腐心,義病4(^"MCKJW勿應4^歡應的銀命#W研^Y^7"。為了確定在不同於HCV的其他病毒感染中是否也產生組合治療的協同效果，我們分析了在Huh7細胞中使用這種處理對抗EMCV的細胞病變效應獲得的保護。在存在或缺乏低劑量(5ng/ml)或高刑量(50ng/ml)的CT-1的情況下用從250到1IU/ml的降低劑量的IFN-oc-2孵育Huh7細胞，24小時後用EMCV感染。我們觀察到，CT-本身(在低劑量或高劑量)對EMCV感染的細胞具有很少的細胞保護效果，因為在非常低劑量的IFN-ot-2下添加這種細胞因子沒有改善細胞存活。然而，在低劑量和高劑量下CT-1都顯著提高了IFN-oc-2誘導的針對EMCV細胞病變效應的保護。在使用250到28IU/ml之間的IFN-ot-2刑量時觀察到這種協同作用，在83和28IU/ml的IFN-a-2劑量下協同作用最為顯著。這些數據顯示，IFN-a-2和CT-1的抗病毒協同作用不限於HCV,而適合於廣泛的病毒疾病。實驗方法4//W-ot-2^C7W在//w/7一細應詐乂力^EMCK的細應/^^為、浙。通過測量這些細胞因子保護Huh7細胞對抗腦心肌炎病毒的細胞病變效應的能力來測定IFN-oc-2和CT-1的細胞保護活性。在96孔微滴定板上進行分析。首先，將2x104個細胞/孔播種到150)ul的培養基中，所述培養基含有IFN-a-2本身的系列稀釋(250到1IU/ml)或IFN-a-2的這些系列稀釋加50或5ng/mlCT-l,將它們孵育24小時。105PFU的EMC病毒添加到每個孔中，在24小時如下測量細胞病變效應在清除了培養基之後，用PBS洗塗反應孔兩次，用晶體紫染色溶液(在曱醇—水1:4v/v中0,5%)染色。讀取540nm處的光密度。結果表示為對抗EMCV細胞病變效應保護了的細胞的百分比。實驗5.〃W-a^吝神^介;^6,^勿/超欲"f之/Wf^//CF掙^W//^7細應詐復賴W彩詢W研宏。由於IFN-a和IL-6家族細胞因子的組合所顯示的增強的抗病毒效果，期望的是確定在IFN-a-2或IFN-a-5與IL-6家族細胞因子IL-6、OSM和CT-1的組合中建立的相互作用的類型。組合固定濃度的IFN-a-2和IFN-a-5(5或50Ul/ml)、有或沒有IL-6、OSM和CT-1(20ng/ml)在全長HCV複製子轉染的Huh7細胞中進行幾項抗病毒測試。根據T.C.Chou(11)描述的方法通過多變量分析對IFN-a和1L-6家族細胞因子之間建立的相互作用類型進行數學分析。通過稱為相互作用指數'T，的因子來測量兩種物質之間的相互作用類型，其中I=dl/Dl+d2/D2;dl、d2是組合的抑制物速率，Dl、D2是將與該組合產生相同效果的每個抑制物的速率。從而，'T，等於1意味著兩種物質在它們之間不反應(疊加效果)；'T，低於1意味著該組合是協同性的；大於1的"I"值意味著該組合是拮抗性的。表2顯示了對於"I"值的標準協同速率。表2tableseeoriginaldocumentpage22IFN-a和先前描迷的IL-6家族細胞因子的不同組合獲得的相互作用指數在所有情況下低於1,因而IFN-ot(2或5)和這些細胞因子IL-6、0SM和CT-1的組合是協同性的(表3)。此外，獲得的數據顯示，在組合a/OSM和IFN-a/CT-l(1<0.3強協同作用)下協同效果總是顯著高於組合IFN-a/IL-6UO,7協同作用)的情況。表3tableseeoriginaldocumentpage22tableseeoriginaldocumentpage23實驗方法5//CKAM4W;tf-^屍C/為、浙。表達全長HCV複製子的Huh7細胞以20,000個/孔播種到24孔平板中具有10%FCS的D-MEN中。進行不同的實驗；添加50或5IU/ml的IFN-a-2或IFN-a-5、有或沒有20ng/ml的CT-1、OSM或IL-6(R&DSystems,UK)。細胞培養維持3天。用所述細胞因子每天替換補充的培養基。使用KitNucleicAcidPurificationLysisSolution(AppliedBioSystems,FosterCity,CA)和半自動化系統ABIPRISM600NucleicAcidPrepStation(AppliedBioSystems)獲得用全長HCV複製子轉染的Huh7細胞的總RNA。用DNAase(Gicbo-BRL，UK)處理兩微克的總RNA，之後在存在RNaseOUT(Gibco-BRL)的情況下用M-MLVReverseTranscriptase(GiboBRL)逆轉錄。HCVRNA和P-肌動蛋白mRNA的表達通過4吏用Icycler和IQSYBRGreenSupermic(Bio-RadLaboratories)的定量實時RT-PCR測量。2m1等分量的cDNA庫用於每個PCR，其在最終20y1的體積中含有針對HCV或|3-肌動蛋白基因的5非翻譯區的特異性正向和反向引物(表1)。為了確定獲得的PCR產物的特異性，分析它們的解離溫度。在相同樣品中P-肌動蛋白的量的基礎上將結果標準化。HCVRNA的數量通過式2。t(^^^)-。t(Hcv)來表示，ct是在背景螢光上螢光信號顯著提高的點。對於相互作用指數的計算，以下等式是可用的I=dl/Dl+d2/D2參考文獻1.HoofangleJH，PetersM，MullenKD,JonesDB,RustgiV,DiBisceglieA,HallahanC，ParkY,MeschievitzC,JonesEA.Randomized,ControlledTrialofRecombinantHumanAlpha-InterferoninPatientswithChronicHepatitisB,Gastroenteiiogy1988;95:1318-1325.2.MannsMP,McHutchisonJG,GordonSC，RustgiVK,ShifftnanM，ReindollarR，GoodmanZD,KouryK'LingM，AlbrecthJK.PeginterferonAlfa-2bphisRibavirinComparedwithInterferonAlfa-2bplusRibavirinforInitialTreatmentofChronicHepatitisC:ARandomizedTrial,Lancet2001;358:958-965.3.GaleMJ,Jr.,KorthMJ,TangNM,TanSL,HopkinsDA,DeverTE,PolyakSJ,GretchDR,KatzeMG,EvidencethatHepatitisCVirusResistancetoInterferonIsMediatedthroughRepressionofthePKRProteinKinasebytheNonstructural5AProtein.Virology1997;230:217-227.4.TaylorDR,ShiST,RomanoPR,BarberGN,LaiMM,InhibitionoftheInterferon-InducibleProteinKinasePKRbyHCVE2Protein.Science1999;285:107-110,5.BlindenbacherA,DuongFH,HimzikerL,StutvoetST,WangX，TerraccianoL，MoradpourD,BlumHE,AlonziT，TripodiM,LaMonicaN，HeimMH,ExpressionofHepatitisCVirusProteinInhibitsInterferonAlphaSignallingintheLiverofTransgenicMice,Gastroenterology2003;124:1465-1475.6.DuongFH,FilipowiczM，TripodiM,LaMonicaN，HeimMH.HepatitisCVirusInhibitsInterferonSignalingthroughUp-RegulationofProteinPhosphatase2A.Gastroenterology2004;126:263-277.7.HeinrichPC,Behrm咖I，Muller-NewenG,SchaperF,GraeveL.IL-6-TypeCytokineSignallingthroughthegpl30/Jak/STATPathway.BiochemJ1998;334:297-314,8.ZhuH'ShangX,TeradaN，LiuC.STAT3InducesAnti-HepatitisCViralActivityinLiverCells,BiochemBiophysResCommun2004;324:518-528.9.PietschmannT,Lohm咖V,KaulA,KriegerN，RinckG,RutterG'StrandD,BartenschlagerR.PersistentandTransientReplicationofFull-LengthHepatitisCVirusGenomesinCellCulture.JVirol2002;76:4008-4021,10.ChomczynskiP,SacchiN.Single-StepMethodofRNAIsolationbyAcidGuanidiumThiocyanate-Phenol-Chlorofo加Extraction.AnalBiochem1987;162:156-159.11.ChouTC,SynergismandAntagonisminchemotherapy1991;61-102.AcademicPress,權利要求1.至少一種IL-6家族細胞因子-gp130家族-或編碼它的DNA序列在製備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物設計用於在病毒疾病的治療中與至少一種IFN-α或編碼它的DNA序列組合施用，所述細胞因子選自IL-11、白血病抑制因子、制瘤素M、心肌營養蛋白-1、纖毛神經營養因子、心肌營養蛋白樣細胞因子以及其組合。2.根據權利要求1的用途，特徵在於所述細胞因子是心肌營養蛋白-1或制瘤素M。3.根據權利要求1的用途，特徵在於所述IFN-a選自IFN-a-2a、IFN-ot-2b、IFN-a-5、共有序列幹擾素、純化的IFN-ot、聚乙二醇化的IFN-oc以及其組合。4.根據權利要求1或2的用途，特徵在於所迷IFN-a選自聚乙二醇化的IFN-a-2b、聚乙二醇化的IFN-a-2a、聚乙二醇化的IFN-a-5以及其組合。5.根據權利要求1或2的方法，特徵在於所述IL-6家族細胞因子選自完整天然蛋白、維持了所述完整細胞因子的生理學效果的所述細胞因子的部分多肽序列、以及與所述天然細胞因子具有大於80%的同源性並且維持了所述完整細胞因子的生理學效果的多肽序列。6.根據權利要求5的用途，特徵在於所述多肽序列與所述天然細胞因子具有大於90%的同源性7.根椐權利要求5的用途，特徵在於所述多肽序列與所迷天然細胞因子具有大於95%的同源性。8.根據權利要求1的用途，特徵在於所迷病毒疾病是C型肝炎。9.根據前述任何一項權利要求的用途，特徵在於所述IL-6家族細胞因子和IFN-a在不同的藥物組合物中分別施用。10.根椐前迷任何一項權利要求的用途，特徵在於所述IL-6家族細胞因子和1FN-a在同一藥物組合物中共同施用。11.一種藥物組合物，特徵在於它包含藥學上可接受量的至少一種1L-6家族細胞因子一gp130家族一或編碼它的DNA序列，以及藥學上可接受量的至少一種IFN-a或編碼它的DNA序列，其中所迷細胞因子選自IL-1、白血病抑制因子、制瘤素M、心肌營養蛋白-1、纖毛神經營養因子、心肌營養蛋白樣細胞因子以及其組合。12.根據權利要求11的藥物組合物，特徵在於所迷IL-6家族細胞因子是心肌營養蛋白-1或制瘤素M。13.根據權利要求11到12的任一項的藥物組合物，特徵在於所述IL-6家族細胞因子選自完整天然蛋白、維持了所述完整細胞因子的生理學效果的所述細胞因子的部分多肽序列、以及與所述天然細胞因子具有大於80。/。的同源性並且維持了所述完整細胞因子的生理學效果的多肽序列。14.根椐權利要求13的藥物組合物，特徵在於所述多肽序列與所述天然細胞因子具有大於卯％的同源性。15.根據權利要求13的藥物組合物，特徵在於所述多肽序列與所述天然細胞因子具有大於95%的同源性。16.根據權利要求11到15的任一項的藥物組合物，特徵在於所述IFN-a選自IFN-a-2a、IFN-a-2b、IFN-a-5、共有序列千擾素、純化的IFN-a、聚乙二醇化的1FN-ot以及其組合。17.根據權利要求11到16的任一項的藥物組合物，特徵在於所述IFN-cx選自聚乙二醇化的IFN-a-2b、聚乙二醇化的IFN-a-2a、聚乙二醇化的IFN-a-5以及其組合。18.根據權利要求11到17的任一項的藥物組合物，特徵在於它另外含有至少一種賦形劑，其與所述IL-6家族細胞因子或與編碼它的DNA序列、以及與所述IFN-a或編碼它的DNA序列是藥學上相容的。19.根據權利要求U的藥物組合物，特徵在於所述IL-6家族細胞因子和所述IFN-a在各自的栽體試劑中攜帶。20.—種用於病毒疾病的治療的藥盒，特徵在於它至少包括-第一成分，其包含至少一種IL-6家族細胞因子一gpl30家族一或編碼所述細胞因子的DNA序列；所迷細胞因子選自IL-ll、白血病抑制因子、制瘤素M、心肌營養蛋白-1、纖毛神經營養因子、心肌營養蛋白樣細胞因子以及其組合，-第二成分，其包含至少一種IFN-a或編碼所迷IFN-a的DNA序列。21.根據權利要求20的藥盒，特徵在於所迷IL-6家族細胞因子是心肌營養蛋白-1或制瘤素M。22.根據權利要求20或21的藥盒，特徵在於所述IL-6家族細胞因子選自完整天然蛋白、維持了所迷完整細胞因子的生理學效果的所述細胞因子的部分多肽序列、以及與所述天然細胞因子具有大於80%的同源性並且維持了所述完整細胞因子的生理學效果的多肽序列。23.根據權利要求22的藥盒，特徵在於所述多肽序列與所述天然細胞因子具有大於90%的同源性。24.根據權利要求22的藥盒，特徵在於所述多肽序列與所述天然細胞因子具有大於95%的同源性。25.根椐權利要求22的藥盒，特徵在於所述IFN-a選自IFN-a-2a、IFN-ot-2b、IFN-a-5、共有序列幹擾素、純化的IFN-a、聚乙二醇化的IFN-a以及其組合。26.根椐權利要求22的藥盒，特徵在於所述IFN-a選自聚乙二醇化的IFN-a-2b、聚乙二醇化的1FN-a-2a、聚乙二醇化的1FN-oc-5以及其組合。27.根據權利要求22到26的任一項的藥盒，特徵在於它另外包含第三成分，其包含一種或多種賦形劑，其與所迷IL-6家族細胞因子或編碼它的DNA序列、以及與所迷IFN-oc或編碼它的DNA序列是藥學上相容的。28.根據權利要求22到27的任一項的藥盒，特徵在於它另外包含第三成分，其包含一種或多種栽體試刑，所述栽體試劑與所迷IL-6家族細胞因子以及與所迷1FN-a是藥學上相容的。29.根據權利要求22的藥盒，特徵在於所述第一成分另外包含至少一種賦形劑，所述賦形劑是藥學上可接受的並與所述IL-6家族細胞因子或與所述IFN-a是相容的。30.根據權利要求22的藥盒，特徵在於所迷第二成分另外包含一種或多種賦形劑，所述賦形刑是藥學上可接受的並與所述IL-6家族細胞因子或與所述1FN-ot是相容的。31.根據權利要求22的藥盒，特徵在於所迷第一和第二成分存在於獨立的藥物組合物中。32.根椐權利要求18的藥盒，特徵在於所迷第一和第二成分存在於同一藥物組合物中。33.—種設計用於病毒疾病的治療的方法，其包括組合施用治療有效量的至少一種IL-6家族細胞因子一gp130家族一，以及治療有效量的至少一種IFN-a，所述IL-6家族細胞因子選自IL-ll、白血病抑制因子、制瘤素M、心肌營養蛋白-1、纖毛神經營養因子、心肌營養蛋白樣細胞因子以及其組合。34.根椐權利要求33的方法，其中所述病毒疾病是C型肝炎。35.根據權利要求33或34的方法，特徵在於所述IL-6家族細胞因子選自完整天然蛋白、維持了所述完整細胞因子的生理學效果的所迷細胞因子的部分多肽序列、以及與所述天然細胞因子具有大於80%的同源性並且維持了所述完整細胞因子的生理學效果的多肽序列。36.根據權利要求35的方法，特徵在於所述多肽序列與所迷天然細胞因子具有大於90%的同源性。37.根據權利要求35的方法，特徵在於所述多肽序列與所述天然細胞因子具有大於95%的同源性。38.根據權利要求33到37的任一項的方法，其包括心肌營養蛋白-1和IFN-a的組合施用。39.根椐權利要求30到33的任一項的方法，其包括制瘤素M和IFN-a的組合施用。40.根據權利要求30到34的任一項的方法，其包括心肌營養蛋白-1和IFN-a的組合的和同時的施用。41.根椐權利要求35的方法，其包括制瘤素M和IFN-a的組合的和同時的施用。42.根據權利要求33到41的方法，其中所述IFN-a選自IFN-a-2a、1FN-a-2b、IFN-a-5、共有序列幹擾素、純化的IFN-a、聚乙二醇化的1FN-ot以及其組合。43.根據權利要求33到42的任一項的方法，其中所迷IFN-a選自聚乙二醇化的IFN-a-2b、聚乙二醇化的1FN-a-2a、聚乙二醇化的IFN-a-5以及其組合。44.根據權利要求33到43的任一項的方法，其中所述IL-6家族細胞因子和所述IFN-a存在於向患者施用的同一藥物組合物中。45.根椐權利要求33到43的任一項的方法，其中所述IL-6家族細胞因子和所迷IFN-a在獨立的藥物組合物中施用。全文摘要本發明涉及來自IL-6家族一gp130的至少一種細胞因子，優選的選自IL-11、白血病抑制因子(LIF)、制瘤素M(OSM)、心肌營養蛋白-1、纖毛神經營養因子(CNTF)、心肌營養蛋白樣細胞因子(CLC)和其組合或編碼它們的DNA序列在藥物組合物的製備中的用途，其預期用於與至少一種幹擾素-α或編碼它的DNA序列組合施用，用於病毒疾病的治療。本發明還涉及藥物組合物，其包含藥學可接受數量的來自IL-6家族-gp130的至少一種細胞因子或編碼它的DNA序列，以及藥學可接受數量的至少一種幹擾素-α或編碼它的DNA序列，涉及使用上述細胞因子和幹擾素-α的組合施用治療病毒疾病的藥盒和方法。文檔編號C07K14/54GK101257918SQ200680029900公開日2008年9月3日申請日期2006年6月16日優先權日2005年6月16日發明者E·拉雷亞勒奧茨,J·普裡託瓦爾圖納,M·P·西弗拉穆裡洛,R·阿爾達貝阿勒吉申請人:西馬生物醫學計劃公司