一種快速製備羥基酪醇的新方法
2023-10-07 00:03:09 1
專利名稱：一種快速製備羥基酪醇的新方法
技術領域：
本發明涉及天然產物化學有效成分提取純化技術領域，涉及的是一種製備高純度的羥基酪醇的工藝方法。
背景技術：
輕基酪醇,又名3，4-二輕基苯乙醇,英文為Hydroxytyrosol,是一種天然小分子多酚化合物。它於1950年在狹葉松果菊中醫松果菊苷的形式被發現。油橄欖葉中也存在羥基酪醇但含量甚微，約在0.2%-0.7%之間。由於表現出諸多的生物活性如抗氧化、抗炎、抗癌(前列腺癌和乳腺癌等)、保護心血管疾病、降血糖、修復軟骨損傷或抑制肥胖等。尤其是其抗氧化性，羥基酪醇被認為是最具有清除自由基的天然抗氧化劑之一，其對細胞損害的自由基清除率是槲皮素的2倍，表兒茶酸的3倍之多，因其非常有效的生物活性，可以廣泛用於食品、藥品和化妝品領域，並且廣受市場的歡迎。由於天然植物中存在的羥基酪醇含量較低，從大多數文獻的報導發現有關羥基酪醇的製備主要是通過橄欖苦苷的水解得到。此夕卜，從國內外研究報導中發現，從油橄欖葉或油橄欖葉提取物水解製備羥基酪醇，主要是通過鹽酸和β_葡萄糖苷酶作用製備羥基酪醇，而使用鹼液水解尚未報導。而本專利，正是通過強鹼水解橄欖苦苷製備羥基酪醇，再中和，乙酸乙酯萃取，萃取液旋蒸濃縮後加適量的水稀釋，再通過大孔樹脂和葡聚糖凝膠色譜，可得到HPLC純度大於90%的羥基酪醇。由於前面水解的時間縮短，其效率得到提聞，提聞企業的生廣效率，減少了其生廣成本。首先，從國內專利看，專利CN101662956A是通過ρΗ=1 3的鹽酸水解，反應時間多則7至8h，且最後的羥基酪醇的收率僅約為80%，前期水解的時間過長，不利於企業的生產周期的縮短。專利CN1665764A也是通過酸加入植物液，使橄欖苦苷轉化羥基酪醇，其轉化時間至少2個月，導致生產周期變長。專利CN101624607A通過多酚氧化酶將酪醇轉化成羥基酪醇，所需轉化的時間超過 lh。專利CN101973853A油橄欖葉水提液加入濃鹽酸pH=l，煮沸時間也達3h。
發明內容
本發明的目的在於解決高純度羥基酪醇的生產工藝時間長、效率低的問題，縮短生產周期。本發明所採取的技術方案包括如下:
(I)鹼水解:稱取適量的油橄欖葉提取物，加入適量鹼濃度，固液比為l:l(Tl:45(w/V),水解溫度為25"120°C,水解時間為1(T90 mins,進行水解反應,反應後冷卻至室溫,再加入適量的酸液中和，所述的鹼溶液為NaOH和去離子水的混合液，酸液為HCl或者稀H2S04。(2)離心:將上述(I)的酸鹼中和後的收集液在300(T6000r/min，5 20mins，進行離心。(3)分離純化:將(2)離心後分離收集液加入萃取劑收集液體積的1/3，萃取3飛次，旋蒸回收乙酸乙酯，再加入適量的去離子水溶解稀釋，先經過大孔樹脂吸附，再用5%-95%乙醇-水溶液洗脫，旋蒸回收乙醇，收集的含羥基酪醇的水溶液最後再通過葡聚糖凝膠，再用1-8倍柱體積的1%飛0%乙醇-水溶液洗脫，旋蒸回收乙醇，得到含高純度的羥基酪醇的水溶液。(4)乾燥:將(3)最後收集到的含高純度的羥基酪醇水溶液，進行真空冷凍乾燥或者噴霧冷凍乾燥，可得到含羥基酪醇90%以上的浸膏。步驟(I)中所述的鹼濃度為0.05飛mol/L的NaOH水溶液。步驟(3)中所述的萃取劑為乙醚、氯仿、正丁醇、乙酸乙酯、正己烷或石油醚中的
任意一種。步驟(3)中所述的收集液在30°C 50°C進行旋轉蒸發回收溶劑，使用大孔樹脂洗脫液物3飛倍柱體積的，乙醇-水溶液為10%飛5%。葡聚糖凝膠的洗脫液為5%-45%的乙醇水溶液；其中，大孔樹脂的類型是DM-8、DM130、AB_8、HPD450、HPD100, HPD722和X-5中的一種，葡聚糖凝膠的類型是LH-20或Sephadex G_25中的一種。步驟(4)中所述的真空冷凍乾燥的時間為fllh，或噴霧冷凍乾燥的時間為f 2h。乾燥的溫度最大不超過25 45°C。與現有技術相比，本發明的有益效果:1、本發明採用鹼性條件作用先水解，再用酸中和，使pH=7，在強鹼作用下，橄欖苦苷快速分解，提高了羥基酪醇得率。同時縮短產品的生產周期，提高企業的生產效率。2、對羥基酪醇的純化採用，大孔樹脂和葡聚糖凝膠雙重樹脂純化，使羥基酪醇的含量進一步得到提高。3、本發明工藝穩定，產品收率高且重現性好，產品品質好，易於工業化生產。
圖1本發明提供的工藝流程圖
圖2大孔樹脂純化後的羥基酪醇HPLC圖 圖3葡聚糖凝集色譜純化後的羥基酪醇HPLC圖 圖4羥基酪醇的質譜圖
具體實施例方式實施例1
稱取50g粗橄欖苦苷的提取物(含橄欖苦苷38.3%)，加入IOOOmL的0.3mol/L NaOH，攪拌下反應30mins，再加入鹽酸中和使溶液的pH=7，再加入300mL乙酸乙酯，重複萃取3次，旋蒸去除乙酸乙酯，加入50mL水稀釋溶解，再通過AB-8大孔樹脂，充分吸附後，再用40%的乙醇水溶液進行洗脫，收集3-5BV的溶液，再通過葡聚糖凝膠樹脂LH-20，用60%乙醇水溶液進行洗脫，收集4-6BV的溶液，最後旋蒸回收乙醇，濃縮液通過真空冷凍乾燥，獲得固體含量7.36g，其中羥基酪醇的HPLC的含量達93.12%。
實施例2
稱取30g粗橄欖苦苷的提取物(含橄欖苦苷27.93%)，加入800mL的0.2mol/L NaOH，攪拌下反應45mins，再加入鹽酸中和使溶液的pH=7，再加入150mL乙酸乙酯，重複萃取3次，旋蒸去除乙酸乙酯，加入35mL水稀釋溶解，再通過AB-8大孔樹脂，充分吸附後，再用55%的乙醇水溶液進行洗脫，收集2-4BV的溶液，再通過葡聚糖凝膠樹脂LH-20，用50%乙醇水溶液進行洗脫，收集3-4BV的溶液，最後旋蒸回收乙醇，濃縮液通過真空乾燥，獲得固體含量
3.87g，其中羥基酪醇的HPLC的含量達89.58%。
實施例3
稱取80g乾燥的油橄欖葉(含橄欖苦苷8.21%)，粉碎至40-60目，加入2400mL的.0.3mol/L NaOH,攪拌下反應40mins,再加入稀硫酸中和使溶液的pH=7,再加入500mL乙酸乙酯，重複萃取3次，旋蒸去除乙酸乙酯，加入150mL水稀釋溶解，再通過HPD-450大孔樹月旨，充分吸附後，再用55%的乙醇水溶液進行洗脫，收集3-5BV的溶液，再通過葡聚糖凝膠樹脂LH-20，用65%乙醇水溶液進行洗脫，收集3-5BV的溶液，最後旋蒸回收乙醇，濃縮液通過真空冷凍乾燥，獲得固體含量5.35g，其中羥基酪醇的HPLC的含量達85.12%。
權利要求
1.一種快速製備羥基酪醇的新方法，其特徵在於該方面包括以下步驟: (I)鹼水解:稱取適量的油橄欖葉提取物，加入適量鹼濃度，固液比為l:l(Tl:45(w/V),水解溫度為25"120°C,水解時間為1(T90 mins,進行水解反應,反應後冷卻至室溫,再加入適量的酸液中和，所述的鹼溶液為NaOH的去離子水溶液，酸液為HCl或者稀H2S04。
2.(2)離心:將上述(I)的水解液經過酸或鹼中和後的溶液進行收集，並在3000 6000r/min, 5 20mins的條件下使用離心機進行離心。
3.(3)分離純化:將(2)離心分離後的收集液轉移至分液漏鬥中，加入萃取劑，其體積約為收集液的1/3，震蕩搖勻，萃取3飛次，靜置分層，收集下層液體進行旋蒸並回收乙酸乙酯，再加入適量的去離子水溶解稀釋，稀釋液先經過大孔樹脂吸附，再用5%-95%乙醇-水溶液進行梯度洗脫，收集目標產物溶液，再對收集的溶液旋蒸，同時回收乙醇；收集的溶液最後再通過葡聚糖凝膠，再用1-8倍柱體積的19Γ60%乙醇-水溶液梯度洗脫，其收集液進行旋蒸並回收乙醇，最後得到含高純度的羥基酪醇的水溶液。
4.(4)乾燥:將(3)最後收集到的含高純度的羥基酪醇水溶液，進行真空冷凍乾燥或者噴霧冷凍乾燥，可得到的羥基酪醇含量達90%以上。
5.根據權利要求1所述的製備羥基酪醇的方法，其特徵在於步驟(I)中所述的鹼濃度為0.05 5mol/L的NaOH水溶液。
6.根據權利要求1所述的製備羥基酪醇的方法，其特徵在於步驟(3)中所述的萃取劑為乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正己烷或石油醚中的任意一種。
7.根據權利要求1所述的製備羥基酪醇的方法，其特徵在於步驟(3)中所述的收集液在30°C 50°C進行旋轉蒸發回收溶劑，使用大孔樹脂洗脫液物3飛倍柱體積的，乙醇-水溶液為10% 65%。
8.葡聚糖凝膠的洗脫液為5%-45%的乙醇水溶液；其中，大孔樹脂的類型是DM-8、DM130、AB-8、HPD450、HPD100、HPD722和X_5中的任意一種，葡聚糖凝膠的類型是LH-20或Sephadex G-25中的任意一種。
9.根據權利要求1所述的製備羥基酪醇的方法，其特徵在於步驟(4)中所述的真空冷凍乾燥的時間為8 llh，或噴霧冷凍乾燥的時間為Γ21ι。
10.乾燥的溫度最大不超過25 45°C。
全文摘要
本發明公開了一種快速製備羥基酪醇的新方法，屬於天然產物有效成分提取分離技術領域。本發明是以含橄欖苦苷的油橄欖葉提取物為原料，在鹼性條件下快速水解製備羥基酪醇的新方法，該方法包括如下步驟稱取一定量的油橄欖葉提取物與鹼溶液混合，在一定的溫度和時間下反應，冷卻至是室溫，再加入少量酸中和至pH=7，離心，收集上清液，加入適量的乙酸乙酯萃取，旋蒸去除乙酸乙酯，獲得的濃縮液再依次通過大孔樹脂和葡聚糖凝膠樹脂，最後通過噴霧冷凍乾燥或者真空冷凍乾燥獲得高純度的羥基酪醇，其純度最高可達90%以上。本發明操作簡單、時間短、效率高、品質高，適合產業化等特點。
文檔編號C07C39/11GK103113195SQ20131007005
公開日2013年5月22日 申請日期2013年3月6日 優先權日2013年3月6日
發明者黃立新, 謝普軍, 張彩虹, 遊鳳, 張耀雷 申請人:中國林業科學研究院林產化學工業研究所