一種熟附子多糖的提取方法及其新用途

2023-10-18 10:21:34 2

一種熟附子多糖的提取方法及其新用途
【專利摘要】本發明公開了一種熟附子多糖的提取方法，包括以下步驟：（1）預處理，得到濾液與濾渣；（2）濾渣加入超純水繼續煎煮小時後，與步驟（1）中收集的濾液合併；（3）將合併後溶液於蒸發至溶液剩餘10%～20%，轉移至燒杯，冷卻至室溫；（4）加入95%的乙醇，邊加邊攪拌；（5）將步驟（4）的溶液靜置沉澱，抽濾，棄去濾液，收集濾渣。濾渣再分別用乙醇和丙酮各洗滌一次，將剩餘濾渣在烘乾，得到熟附子多糖粉末；所述熟附子多糖具備良好的抗腫瘤作用，並且低毒，用於製備抗腫瘤藥物；本發明的熟附子多糖的提取方法，該提取方法的預處理方法在傳統的水浸沸煮的基礎上進行了優化，大大提高提取效率。
【專利說明】一種熟附子多糖的提取方法及其新用途

【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種多糖的提取方法及其新用途，尤其涉及一種熟附子多糖的提取方 法及其用於製備抗腫瘤藥物的新用途，屬於天然藥物【技術領域】。

【背景技術】
[0002] 以四川江油為道地基點縣，除四川江油縣(現為市）等為附子的傳統產區外，全國 共有四川、陝西、貴州、湖南、湖北、甘肅、雲南、廣西、江西、安徽等10個省區的336個縣市為 附子適宜產區，適宜產區面積總和為294057. 69km2。運用《中藥材產地適宜性分析地理信 息系統》（TCMGIS-I)，分析了附子的全國適宜產地。結果表明按附子藥材生長所需要的氣 候、土壤條件分析。四川涼山州布拖縣由於地處高原，氣候較為寒冷，植株生產周期更長，有 效成分的含量更高。現布拖附子的產量已佔全國65%以上，2008年，布拖附子也被增加為道 地藥材。
[0003] 近年來，腫瘤已經成為威脅人類健康的第一大疾病，對於腫瘤的治療仍然以傳統 的細胞毒類藥物為主，中藥具備毒副反應低的特點已被逐步重視。近年來，國家日益重視中 藥現代化的投入，在傳統的重要煎熬等治療手段的背景下，結合現代分離提取工藝，獲得有 效成分。藥用多糖的研究始於20世紀50年代末對微生物多糖抗癌效果的發現。科學家 們從大量的藥理和臨床研究發現從天然產物中分離出來的多糖往往是一種免疫調節劑，它 能激活免疫細胞而對正常細胞沒有毒副作用。多糖作為免疫治療藥物正越來越受到重視， 這已成為新藥研究的熱點之一。
[0004] 本發明通過優化的熟附子多糖提取方法，將獲得的熟附子多糖產物進行一系列鑑 定，並通過藥理實驗對熟附子多糖的毒性作用和抗腫瘤作用進行研究，證明其可以用於制 備抗腫瘤藥物。


【發明內容】

[0005] 針對上述存在的技術問題，本發明的目的是：提出了一種提取效率高的熟附子多 糖的提取方法及其用於製備抗腫瘤藥物的新用途。
[0006] 本發明的技術解決方案是這樣實現的：一種熟附子多糖的提取方法，包括以下步 驟： (1)將熟附子原料l〇〇g，使用藥用機械粉碎機進行高速粉碎，將粉碎後的粉末加入超純 水1800mL?2200mL進行高溫超聲處理25?35分鐘，收集濾液。
[0007] (2)濾渣加入超純水1800mL?2200mL繼續煎煮1. 5?2. 5小時後，與步驟（1) 中收集的濾液合併。
[0008](3)將合併後溶液於75°C?85°C蒸發至溶液剩餘10%?20%，轉移至燒杯，冷卻至 室溫。
[0009] (4)加入95%的乙醇，邊加邊攪拌，直至溶液中最終乙醇含量約為80%?90%。
[0010] (5)將步驟（4)的溶液靜置沉澱22?24小時後，抽濾，棄去濾液，收集濾渣。濾渣 再分別用乙醇和丙酮各洗滌一次，將剩餘濾渣在60°C?70°C烘乾，得到熟附子多糖粉末。
[0011] 一種熟附子多糖用於製備抗腫瘤藥物的新用途，所述熟附子多糖具備良好的抗腫 瘤作用，並且低毒，用於製備抗腫瘤藥物。
[0012] 優選的，通過動物實驗得出：熟附子多糖給藥組的KM小鼠在同一時間點體重與正 常對照組無差異（P>〇. 05)。
[0013] 優選的，通過動物實驗得出：熟附子多糖給藥組的KM小鼠在解剖後的動物肝臟系 數和脾臟係數與正常對照組無差異（P>〇. 05)。
[0014] 優選的，通過動物實驗得出：熟附子多糖給藥組的平均瘤重較模型組有顯著降低 (P〈0. 001)。
[0015] 由於上述技術方案的運用，本發明與現有技術相比具有下列優點： 本發明的熟附子多糖的提取方法，該提取方法的預處理方法在傳統的水浸沸煮的基礎 上進行了優化，將原料進行高速粉碎得到粉末後，再結合高溫超聲處理，有助於藥材中的有 效成分分離，大大提高提取效率。熟附子多糖具備良好的抗腫瘤作用，並且低毒，因此可以 用於製備抗腫瘤藥物。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0016] 下面結合附圖對本發明技術方案作進一步說明： 附圖1為熟附子多糖的紅外光譜鑑定圖； 附圖2為熟附子多糖對正常小鼠體重的影響的實驗統計圖； 附圖3為熟附子多糖對正常小鼠臟器係數的影響的實驗統計圖； 附圖4為熟附子多糖對荷瘤小鼠體重的影響的實驗統計圖； 附圖5為熟附子多糖抗腫瘤作用效果的實驗統計圖。

【具體實施方式】
[0017] 下面結合說明書附圖和實施例對本發明作進一步說明。
[0018] 1、熟附子多糖的提取方法 實施例1: 一種熟附子多糖的提取方法，包括以下步驟： (1)將熟附子原料l〇〇g，使用藥用機械粉碎機進行高速粉碎，將粉碎後的粉末加入超純 水1800mL進行高溫超聲處理25分鐘，收集濾液。
[0019] (2)濾渣加入超純水1800mL繼續煎煮1. 5小時後，與步驟（1)中收集的濾液合併。
[0020] (3)將合併後溶液於75°C蒸發至溶液剩餘10%，轉移至燒杯，冷卻至室溫。
[0021] (4)加入95%的乙醇，邊加邊攪拌，直至溶液中最終乙醇含量約為80%。
[0022] (5)將步驟（4)的溶液靜置沉澱22小時後，抽濾，棄去濾液，收集濾渣。濾渣再分 別用乙醇和丙酮各洗滌一次，將剩餘濾渣在60°C烘乾，得到熟附子多糖粉末。
[0023] 實施例2 :-種熟附子多糖的提取方法，包括以下步驟： (1)將熟附子原料l〇〇g，使用藥用機械粉碎機進行高速粉碎，將粉碎後的粉末加入超純 水2000mL進行高溫超聲處理30分鐘，收集濾液。
[0024] (2)濾渣加入超純水2000mL繼續煎煮2小時後，與步驟（1)中收集的濾液合併。
[0025] (3)將合併後溶液於80°C蒸發至溶液剩餘15%，轉移至燒杯，冷卻至室溫。
[0026] (4)加入95%的乙醇，邊加邊攪拌，直至溶液中最終乙醇含量約為85%。
[0027] (5)將步驟（4)的溶液靜置沉澱23小時後，抽濾，棄去濾液，收集濾渣。濾渣再分 別用乙醇和丙酮各洗滌一次，將剩餘濾渣在65°C烘乾，得到熟附子多糖粉末。
[0028] 實施例3:-種熟附子多糖的提取方法，包括以下步驟： (1)將熟附子原料l〇〇g，使用藥用機械粉碎機進行高速粉碎，將粉碎後的粉末加入超純 水2200mL進行高溫超聲處理35分鐘，收集濾液。
[0029] (2)濾渣加入超純水2200mL繼續煎煮2. 5小時後，與步驟（1)中收集的濾液合 並。
[0030] (3)將合併後溶液於85°C蒸發至溶液剩餘20%，轉移至燒杯，冷卻至室溫。
[0031] (4)加入95%的乙醇，邊加邊攪拌，直至溶液中最終乙醇含量約為90%。
[0032] (5)將步驟（4)的溶液靜置沉澱24小時後，抽濾，棄去濾液，收集濾渣。濾渣再分 別用乙醇和丙酮各洗滌一次，將剩餘濾渣在70°C烘乾，得到熟附子多糖粉末。
[0033] 上述提取方法的實施例，預處理方法在傳統的水浸沸煮的基礎上進行了優化，將 原料進行高速粉碎得到粉末後，再結合高溫超聲處理，有助於藥材中的有效成分分離，大大 提_提取效率。
[0034] 2、熟附子多糖總含量的測定 首先進行5%苯酚的配製，方法為稱取12. 5g苯酚用超純水定容至250mL。然後進行 標準溶液的配製，方法為準確稱取100mg葡萄糖，定容至100mL，得到葡萄糖濃度為1000 mg/L的儲備液。分別精密吸取儲備液0. 10、0. 20、0. 40、0. 60、0. 80、1. 00mL於10mL容量 瓶中，得到濃度為 10mg/L、20mg/L、40mg/L、60mg/L、80mg/L、100mg/L的系列標準溶 液。準備樣品，方法為準確稱取提取的熟附子多糖粉末10mg，用超純水定容至100mL，80°C 水浴溶解。進行樣品含量測定，分別取系列標準溶液、樣品溶液及空白（以超純水作空白）1 mL，於具塞比色管中，加入1mL5%的苯酚，搖勻，垂直迅速加入3mL濃硫酸，搖勻，沸水浴 15分鐘。取出後迅速冷卻。在490nm波長下進行測定。以吸光度A對濃度C回歸得方程： A= 0.00794C+ 0.01559,r= 0.99。測得提取粉末總糖含量為89.6%。熟附子多糖得率 為 13. 4%。
[0035] 3、熟附子多糖的鑑定 藉助紅外光譜和紫外光譜測定技術，對熟附子多糖成分進行鑑定。紅外光譜鑑定藉助ThermoNICOLETislOFTIR進行。方法為取乾燥後的粉末約1mg與100mgKBr固體粉 末在瑪瑙研缽中研磨均勻，壓片後在400?4000cm-l區波數範圍內進行紅外光譜掃描。為 了判斷多糖中核酸和蛋白質雜質的成分，利用紫外光譜進行多糖的鑑定，藉助貝克曼DU800 紫外分光光度計對多糖樣本進行檢測。結果如圖1和下表所示：

【權利要求】
1. 一種熟附子多糖的提取方法，其特徵在於，包括以下步驟： (1) 將熟附子原料l〇〇g，使用藥用機械粉碎機進行高速粉碎，將粉碎後的粉末加入超純 水1800mL?2200 mL進行高溫超聲處理25?35分鐘，收集濾液； (2) 濾渣加入超純水1800mL?2200 mL繼續煎煮1. 5?2. 5小時後，與步驟（1)中收 集的濾液合併； (3) 將合併後溶液於75°C?85°C蒸發至溶液剩餘10%?20%，轉移至燒杯，冷卻至室 溫； (4) 加入95%的乙醇，邊加邊攪拌，直至溶液中最終乙醇含量約為80%?90% ; (5) 將步驟（4)的溶液靜置沉澱22?24小時後，抽濾，棄去濾液，收集濾渣。
2. 濾渣再分別用乙醇和丙酮各洗滌一次，將剩餘濾渣在60°C?70°C烘乾，得到熟附子 多糖粉末。
3. -種熟附子多糖用於製備抗腫瘤藥物的新用途，其特徵在於：所述熟附子多糖具備 良好的抗腫瘤作用，並且低毒，用於製備抗腫瘤藥物。
4. 根據權利要求2所述的熟附子多糖用於製備抗腫瘤藥物的新用途，其特徵在於： 通過動物實驗得出：熟附子多糖給藥組的KM小鼠在同一時間點體重與正常對照組無差異 (P>0. 05)。
5. 據權利要求2所述的熟附子多糖用於製備抗腫瘤藥物的新用途，其特徵在於：通過 動物實驗得出：熟附子多糖給藥組的KM小鼠在解剖後的動物肝臟係數和脾臟係數與正常 對照組無差異（P>〇. 05)。
6. 據權利要求2所述的熟附子多糖用於製備抗腫瘤藥物的新用途，其特徵在於：通過 動物實驗得出：熟附子多糖給藥組的平均瘤重較模型組有顯著降低（P〈〇. 001)。
【文檔編號】A61K31/715GK104387481SQ201410566573
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年10月22日 優先權日:2014年10月22日
【發明者】李湧健, 陳嘉璐, 高靜東, 張曉迪, 吳士良, 徐嵐, 劉春亮 申請人:蘇州市中醫院