葡膦醯胺結晶及其製備方法與應用的製作方法

2023-10-11 20:37:44

專利名稱：葡膦醯胺結晶及其製備方法與應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種葡膦醯胺的結晶，本發明也涉及所述結晶的製備方法及其應用。
背景技術：
葡膦醯胺(Glufosfamide)，化學命名N，N′-雙(2-氯乙基)磷醯二胺酸-β-D-吡喃葡萄糖酯(N，N′-bis(2-chloroethyl)phosphorodiamidate acid β-D-Glucopyranosyl ester)，為一種新型烷化劑，屬於磷醯胺氮芥類衍生物，是由烷基化物的活性部分和一個葡萄糖分子連接而得。其作用機制符合烷化劑的特點，為誘導DNA發生不可逆的鏈間交連，導致了DNA雙鏈的斷裂，進而引起細胞凋亡，起到抑制腫瘤細胞生長的作用。
體內實驗表明，葡膦醯胺對鼠L-1210、人KB腫瘤細胞、兒童白血病抑制活性與異環磷醯胺氮芥相當。體外實驗表明，抗鼠P388細胞、大鼠L5222細胞和AH13r肝瘤、抗鼠Ehrlich腹水瘤、鼠黑色素瘤B16以及在人類腫瘤異種移植的裸鼠上進行的抗腫瘤作用試驗中均顯示出較高的活性，特別對人類乳腺、肺部腫瘤和黑色素瘤有顯著抗瘤作用。
葡膦醯胺是由美國百特(Baxter)醫療公司開發的新型烷化劑，現由美國Threshold製藥公司進行臨床研究。主要用於手術不能治療的晚期胰腺癌，而且對多種實體瘤均具有抑瘤活性。2004年11月15日製藥公司宣布FDA已經指定其開發的候選藥物葡膦醯胺(Glufosfamide)注射劑為快通道產品。該產品目前正在進行單一用藥一線治療晚期胰腺癌的III期臨床試驗，並計劃進行與吉西他濱聯合用藥治療晚期胰腺癌的II期臨床試驗。目前，本品在國內外尚未上市，國外正針對不同適應症進行II、III期臨床研究。
德國專利DE 3835772和US 5,622,936等揭示了葡膦醯胺的製備方法，其所製備的都為無定形形式，其物理性能不利於產品的穩定，大規模製備及後續應用。

發明內容
本發明針對現有技術的不足，提供一種葡膦醯胺結晶及其製備方法與應用。
一種葡膦醯胺結晶，包括使用CuKα輻射、以2θ角度和晶面間距(d值)表示的粉末X射線衍射基本上在下列各處有特徵峰的N，N′-雙(2-氯乙基)磷醯二胺酸-β-D-吡喃葡萄糖酯2θ角度 晶面間距(d值)4.82 18.319.70 9.1117.525.0620.444.3421.744.0824.103.69
25.86 3.4434.58 2.59。
有關上述特徵峰的測定需要說明的是，當在一定的位置(2θ值)鑑定出一個獨立的XRD尖峰時，意味著該峰為該2θ值±0.1，當在一定的位置(2θ值)鑑定出一個XRD寬峰時，這意味著該峰為該2θ值±0.3。由化合物結晶得到的衍射圖對一給定的結晶形態是特徵性的，雖然一些弱的或很弱的衍射峰在不同批次的結晶得到的衍射圖中可能並不總是出現。譜帶(尤其是在低角度X射線入射值(低2θ))的相對強度可能會由測定條件的差異、結晶習性等因素而變化，因此，衍射峰的相對強度對所針對的結晶形態並非是特徵性的，相反更應注意的是峰的相對位置而不是它們的相對強度，以決定該結晶的形態。
本發明的葡膦醯胺結晶，其空間群為P1，晶胞參數a＝5.841(1)，b＝7.813(1)，c＝18.271(2)，α＝95.795(1)，β＝93.442(1)，γ＝89.925(1)°。晶胞體積V＝828.0(2)3，晶胞內分子數z＝1。
本發明的結晶葡膦醯胺的製備方法，步驟如下(1)葡膦醯胺粗品20-50℃溶解於結晶化溶劑I中，或者溶解於結晶化溶劑I後再加入結晶化溶劑II，或者溶解於結晶化溶劑I和結晶化溶劑II的混合溶劑中，葡膦醯胺粗品與結晶化溶劑的質量體積比m∶v為1∶1-100，結晶化溶劑I和結晶化溶劑II的體積比為1∶1-100；所述的結晶化溶劑I，選自下述溶劑中的一種或多種脂肪族酮類溶劑、芳香族酮類溶劑、脂肪族醇類溶劑、芳香族醇類溶劑；所述的結晶化溶劑II，選自下述溶劑中的一種或多種脂肪烴類溶劑、芳香烴類溶劑、滷代烴類溶劑、脂肪族酯類溶劑、芳香族酯類溶劑、脂肪醚類溶劑、芳香醚類溶劑；(2)-20℃-50℃放置2-48小時，析晶；(3)抽濾、20-50℃真空乾燥，得葡膦醯胺白色結晶。
上述步驟(1)中的葡膦醯胺粗品為任一種現有公知技術製備的，對其純度沒有特別要求。
上述步驟(1)中結晶化溶劑I的脂肪族類酮溶劑選自丙酮、丁酮、戊酮，芳香族酮類溶劑選自苯甲酮、苯乙酮，脂肪族醇類溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇，芳香族醇類溶劑選自苯甲醇、苯乙醇。
上述步驟(1)中結晶化溶劑II中的脂肪烴類溶劑選自正己烷、環己烷或正庚烷，芳香烴類溶劑選自苯、甲苯或二甲苯，滷代烴類溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷；脂肪族酯類溶劑選自乙酸乙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異戊酯或丙酸乙酯，芳香族酯類溶劑選自苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯或苯甲酸異丁酯；脂肪醚類溶劑，選自乙醚、異丙醚、四氫呋喃或二氧六環，芳香醚類溶劑選自苯甲醚或苯乙醚。
本發明方法得到的葡膦醯胺結晶產品純度在98.5％以上。
本發明方法製備的結晶具有如下優點
(1)具有進行大規模工業製備的性能。例如，具有良好的熔點或流動性。葡膦醯胺結晶的熔點穩定(106℃-111℃)，流動性良好，有助於藥物製劑生產時的可操作性及大規模工業製造。
(2)具有良好的穩定性，便於生產、運輸和貯存。經試驗表明，葡膦醯胺結晶在2-8℃條件下貯存保持18個月，各項質量指標均符合該藥物的質量標準。
本發明的結晶葡膦醯胺的製藥用途，用於製備抗腫瘤藥物。
小鼠抑瘤實驗以小鼠腫瘤為荷瘤小鼠模型，葡膦醯胺腹腔注射給藥，給藥劑量50、100、150、200mg/kg，隔日1次，連續給藥5次；對小鼠S180肉瘤、Lewis肺癌、B16黑色素瘤均有顯著抗腫瘤作用(抑瘤率＞40％，P＜0.05)；當用藥至200mg/kg時，葡膦醯胺動物體重下降19％左右；重複實驗的結果基本一致。對Lewis肺癌的抑制作用最強，抑瘤率可達95％，明顯優於對照藥CPM。葡膦醯胺對小鼠實體瘤抑瘤作用強度為Lewis肺癌＞S180肉瘤＞B16黑色素瘤，且有明顯的量效關係；給藥劑量為50mg/kg時無明顯抗腫瘤作用。
一種藥物組合物，包括所述的結晶葡膦醯胺和藥用載體。可製成粉針劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、混懸劑等注射劑或口服製劑。藥物載體包括甘露醇、乳糖、環糊精、澱粉、微晶纖維素、羥丙基甲基纖維素、硬脂酸鎂、滑石粉及其他本技術領域人員所熟知的藥用輔料。


圖1葡膦醯胺結晶的結構及原子編號圖。
圖2葡膦醯胺結晶單位晶胞的堆積圖。
圖3葡膦醯胺粉末X-射線衍射圖。掃描參數3.0/80.0/0.02/0.15(秒)，Cu(40KV，150mA)；圖中的1、2、9、13、14、16、18、19、27峰是特徵峰。
具體實施例方式
下面的實施例將對本發明作進一步的解釋，但是本發明並不僅僅局限於這些實施例，這些實施例不以任何方式限制本發明的範圍。本領域的技術人員在權利要求範圍內所作出的某些改變和調整也應認為屬於本發明的範圍。
實施例1.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入丙酮50ml於20-50℃溶解，放置至-20℃-50℃析晶，24小時後，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
所述的葡膦醯胺結晶，分子量為383.17，結晶密度為1.537g/cm3，呈無色透明片狀，衍射試驗用晶體大小0.02×0.40×0.50mm，屬三斜晶系，空間群為P1，晶胞參數a＝5.841(1)，b＝7.813(1)，c＝18.271(2)，α＝95.795(1)，β＝93.442(1)，γ＝89.925(1)°。晶胞體積V＝828.0(2)3，晶胞內分子數z＝1。
表1葡膦醯胺結晶的原子坐標參數及等價溫度因子



所述的葡膦醯胺結晶的結構及原子編號如圖1所示。
所述的葡膦醯胺結晶的單位晶胞的堆積圖如圖2所示。
所述的葡膦醯胺結晶的粉末X-射線衍射圖如圖3所示。
實施例2.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入乙醇50ml於20-50℃溶解，放置至-20℃-50℃析晶，2-48小時後，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
實施例3.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入丁酮50ml於20-50℃溶解，加入正己烷500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
實施例4.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入甲醇50ml於20-50℃溶解，加入環己烷500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
實施例5.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入丙酮50ml於20-50℃溶解，加入乙酸乙酯500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
實施例6.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入苯甲醇50ml於20-50℃溶解，加入乙酸丁酯500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
實施例7.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入苯甲醇50ml於20-50℃溶解，加入乙醚500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
實施例8.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入苯乙醇50ml於20-50℃溶解，加入二氯甲烷500ml放置至-20℃-50℃析晶，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
實施例9.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入丙酮∶乙酸乙酯(v∶v＝1∶8)450ml於20-50℃溶解，放置至-20℃-50℃析晶，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
實施例10.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入甲醇∶二氯甲烷(v∶v＝1∶8)450ml於20-50℃溶解，放置至-20℃-50℃析晶，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
實施例11.
葡膦醯胺粗品10g加入500ml三頸瓶中，加入乙醇∶三氯甲烷(v∶v＝1∶8)450ml於20-50℃溶解，放置至-20℃-50℃析晶，抽濾、20-50℃真空乾燥，即得葡膦醯胺白色結晶。
權利要求
1.一種葡膦醯胺結晶，包括使用CuKα輻射、以2θ角度和晶面間距(d值)表示的粉末X射線衍射基本上在下列各處有特徵峰的N，N′-雙(2-氯乙基)磷醯二胺酸-β-D-吡喃葡萄糖酯2θ角度 晶面間距(d值)4.8218.319.709.1117.52 5.0620.44 4.3421.74 4.0824.10 3.6925.86 3.4434.58 2.59。
2.根據權利要求1所述的葡膦醯胺結晶，其特徵在於，其空間群為P1，晶胞參數a＝5.841(1)，b＝7.813(1)，c＝18.271(2)，α＝95.795(1)，β＝93.442(1)，γ＝89.925(1)°，晶胞體積V＝828.0(2)3，晶胞內分子數z＝1。
3.根據權利要求1所述的葡膦醯胺結晶，其特徵在於，它屬於三斜晶系。
4.根據權利要求3所述的葡膦醯胺結晶，其特徵在於，外形呈無色透明片狀，尺寸為0.02×0.40×0.50mm。
5.權利要求1所述的葡膦醯胺結晶的製備方法，步驟如下(1)葡膦醯胺粗品20-50℃溶解於結晶化溶劑I中，或者溶解於結晶化溶劑I後再加入結晶化溶劑II，或者溶解於結晶化溶劑I和結晶化溶劑II的混合溶劑中，葡膦醯胺粗品與結晶化溶劑的質量體積比m∶v為1∶1-100，結晶化溶劑I和結晶化溶劑II的體積比為1∶1-100；所述的結晶化溶劑I，選自下述溶劑中的一種或多種脂肪族酮類溶劑、芳香族酮類溶劑、脂肪族醇類溶劑、芳香族醇類溶劑；所述的結晶化溶劑II，選自下述溶劑中的一種或多種脂肪烴類溶劑、芳香烴類溶劑、滷代烴類溶劑、脂肪族酯類溶劑、芳香族酯類溶劑、脂肪醚類溶劑、芳香醚類溶劑；(2)-20℃-50℃放置放置2-48小時，析晶；(3)抽濾、20-50℃真空乾燥，得葡膦醯胺白色結晶。
6.根據權利要求5中所述的葡膦醯胺結晶的製備方法，其特徵在於，步驟(1)中葡磷醯胺粗品與結晶化溶劑的質量體積比m∶v為1∶1-50，結晶化溶劑I和結晶化溶劑II的體積比為1∶1-50。
7.根據權利要求5中所述的葡膦醯胺結晶的製備方法，其特徵在於，步驟(1)中結晶化溶劑I的脂肪族類酮溶劑選自丙酮、丁酮或戊酮，芳香族酮類溶劑選自苯甲酮或苯乙酮，脂肪族醇類溶劑選自甲醇、乙醇、異丙醇或丁醇，芳香族醇類溶劑選自苯甲醇或苯乙醇。
8.根據權利要求5中所述的葡膦醯胺結晶的製備方法，其特徵在於，步驟(1)中結晶化溶劑II中的脂肪烴類溶劑選自正己烷、環己烷或正庚烷，芳香烴類溶劑選自苯、甲苯或二甲苯，滷代烴類溶劑選自二氯甲烷、三氯甲烷或二氯乙烷；脂肪族酯類溶劑選自乙酸乙酯、乙酸異丙酯、乙酸丁酯、乙酸異戊酯或丙酸乙酯，芳香族酯類溶劑選自苯甲酸甲酯、苯甲酸乙酯或苯甲酸異丁酯；脂肪醚類溶劑，選自乙醚、異丙醚、四氫呋喃或二氧六環，芳香醚類溶劑選自苯甲醚或苯乙醚。
9.權利要求1所述的葡膦醯胺結晶的製藥用途，用於製備抗腫瘤藥物。
10.一種藥物組合物，包括權利要求1所述的葡膦醯胺結晶和藥用載體。
全文摘要
本發明涉及一種N，N′－雙(2－氯乙基)磷醯二胺酸－β－D－吡喃葡萄糖酯(葡膦醯胺)的結晶，其空間群為P1，晶胞參數a＝5.841(1)，b＝7.813(1)，c＝18.271(2)，α＝95.795(1)，β＝93.442(1)，γ＝89.925(1)°。晶胞體積V＝828.0(2)
文檔編號C07F9/24GK1827629SQ20061004225
公開日2006年9月6日 申請日期2006年2月14日 優先權日2006年2月14日
發明者王晶翼, 胡曉燕, 初樂玲, 張明會, 朱屹東, 範傳文, 冷傳新, 孫金鳳 申請人:海南天源康澤醫藥科技有限公司