超分子膠囊的製作方法

2023-10-17 05:56:24

超分子膠囊的製作方法
【專利摘要】本發明提供了一種膠囊，其具有為超分子交聯網絡的材料外殼。所述網絡由葫蘆脲(主體)和包含適當客體官能團的一個或多個結構單元的主體-客體絡合作用形成。絡合物非共價交聯結構單元和/或非共價連接結構單元與其他結構單元，從而形成超分子交聯網絡。通過包含葫蘆脲的組合物和具有適當葫蘆脲客體官能團的一種或多種結構單元的絡合作用來獲得或可以獲得膠囊，從而形成超分子交聯網絡。
【專利說明】超分子膠囊
[0001]優先權
[0002]本申請要求於2011年7月26日提交的GB1112893.1和2012年2月8日提交的GB1202127.5的優先權，兩者的全部內容以引用方式結合於本文。
【技術領域】
[0003]本發明涉及基於葫蘆脲交聯網絡的膠囊，尤其是微膠囊，以及用於製備所述膠囊的方法，以及它們在遞送封裝組分的方法中的應用。
【背景技術】
[0004]通過自組裝空心微球對組分進行微膠囊化是納米技術和材料科學的一個重要方面。對支承結構的形狀和組成，影響材料性能的參數進行控制對於許多應用而言是重要的，如診斷學、藥物遞送、電子顯示和催化作用(參見Ke et al.Angew.Chem.2011，123，3073 ; De Cock et al.Angew.Chem.1nt.Ed.2010, 49, 6954;Yang etal.Angew.Chem.2011, 123, 497;Comiskey et al.Naturel998, 394, 253;Peyratout etal.Angew.Chem.1nt.Ed.2004, 43，3762)。常規聚合物微膠囊的製備是通過層-層(L-b-L)方案進行的，其中通過依次添加一系列的相反電荷的聚電解質層來塗覆固相載體(參見 Caruso et al.Sciencel998, 282, 1111;Donath et al.Angew.Chem.1nt.Ed.1998，37，2201)。這種策略提供了均勻的材料，但遭受降低的封裝效率(由於固體模板造成)。一種可替代的方法採用膠體乳液模板，其中液-液界面驅動外殼組分的自組裝(參見Cui et al.Adv.Funct.Mater.2010，20，1625)。然而，難以控制產生的微膠囊的單分散性和材料多樣性，從而限制其在藥物遞送和感測應用中的功能。
[0005]相比之下，微流體小滴，膠體乳液的子集，已顯示出用於微膠囊製造的巨大潛力(參見 Gunther et al.Lab Chip2006, 6, 1487;Huebner et al.LabChip2008, 8, 1244; Theberge e`t al.Angew.Chem.1nt.Ed.2010, 49, 5846)。藉助於試劑的經濟使用，能夠以非常高的頻率產生具有較窄粒徑分布(多分散指數〈2%)的這些小滴(參見Xu et al.AIChE Journal2006，52，3005)。基於微滴輔助製造來製備膠囊的最初的努力集中於利用雙乳液和液晶芯模板進行相分離(參見Utada et al.Science2005, 308, 537;Priestet al.Lab Chip2008，8，2182)。還以一種方式描述了聚合物膠囊壁的形成，所述方式涉及微流體裝置表面處理和快速聚合技術(參見Zhou et al.Electrophoresis2009, 31, 2; Abraham et al.Advanced Materials2008, 20，2177)。當溶劑由形成的有機溶劑小滴蒸發時，形成壁。最近也已報導了金屬-有機架構膠囊(參見Ameloot et al.Nat.Chem.2011，3，382)。然而，藉助於目前的離子或共價交聯策略，在膠囊製造中的主要挑戰在於同時生產具有高運載物裝載效率的均勻膠囊以及將多種官能團容易地加入膠囊外殼。
[0006]現在本發明人已經建立了這樣的膠囊，其基於葫蘆脲類的主體-客體網絡。利用多價和通過分子識別的協同效應來設計微結構提供了藉助於可調節的相互作用和功能來製備微膠囊的無可比擬的機會。然而，利用超分子主體-客體方法(如本文所描述的)來製備微膠囊的努力是很少的(參見 De Cock et al.Angew.Chem.1nt.Ed.2010，49，6954)。
[0007]先前披露的內容包括包含環糊精和經由乳液模板製備的改性金納米顆粒(AuNP)的膠體微膠囊(Patra et al., Langmuir2009, 25, 13852),以及包含用 L_b_L合成製備的環糊精和二茂鐵官能化的聚合物的微膠囊(Wang et al., Chemistry ofMaterials2008, 20, 4194)。

【發明內容】

[0008]本發明總體上提供了膠囊，其具有作為超分子交聯網絡的材料外殼。網絡由葫蘆脲(主體)和一個或多個結構單元(包含適合的客體官能團)的主體-客體絡合作用形成。絡合物非共價交聯結構單元和/或將結構單元非共價連接至另一結構單元，從而形成網絡。
[0009]在一般性方面，本發明提供了膠囊，該膠囊具有可獲自葫蘆脲與適合的客體分子的絡合作用的外殼。
[0010]在本發明的第一方面，提供了具有外殼的膠囊，其中外殼可獲自包含葫蘆脲的組合物和具有適合的葫蘆脲客體官能團的一個或多個結構單元的絡合作用，從而形成超分子交聯網絡。
[0011]在一種實施方式中，外殼可獲自(a)包含葫蘆脲的組合物和(I)或(2);或(b)包含多個共價連接的葫蘆脲的組合物和(I)、(2)或(3)的絡合作用。
[0012]在一種實施方式中，外殼可獲自包含葫蘆脲的組合物和(I)或(2)的絡合作用。
[0013]在一種實施方式中，外殼可獲自包含葫蘆脲的組合物和(I)的絡合作用。
[0014](I)包含共價連接於多個第一葫蘆脲客體分子的第一結構單元和共價連接於多個第二葫蘆脲客體分子的第二結構單元，其中第一客體分子和第二客體分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物。
[0015](2)包含共價連接於多個第一葫蘆脲客體分子和多個第二葫蘆脲客體分子的第一結構單元，其中第一和第二客體分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物。可選地所述組合物進一步包含共價連接於一個或多個第三葫蘆脲客體分子、一個或多個第四葫蘆脲客體分子或兩者的第二結構單元，其中第三和第四分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物，和/或第一和第四分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物，和/或第二和第三個分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物。
[0016](3)包含共價連接於多個第一葫蘆脲客體分子的第一結構單元，其中第一客體分子連同葫蘆脲一起適合於形成二元客體-主體絡合物。可選地所述組合物進一步包含共價連接於一個或多個第二葫蘆脲客體分子的第二結構單元，其中第二客體分子連同葫蘆脲一起適合於形成二元客體-主體絡合物。
[0017]在一種實施方式中，葫蘆脲選自CB[8]以及其變體和衍生物。
[0018]在一種實施方式中，葫蘆脲和適合的客體分子，例如和第一和第二客體分子一起，形成三元絡合物。
`[0019]在一種實施方式中，膠囊是微膠囊。
[0020]在一種實施方式中，膠囊封裝組分。
[0021]在本發明的第二方面，提供了用於製備具有外殼的膠囊的方法，如本發明的第一方面的膠囊，所述方法包括以下步驟:
[0022](i)在通道中使第一相的流和第二相的流接觸，從而在通道中產生第二相在第一相中的離散區域的分散體，優選小滴，其中第二相包含葫蘆脲和具有適合的葫蘆脲客體官能團(適合於形成超分子交聯網絡)的一種或多種結構單元，從而在離散區域內形成膠囊外殼，其中第一和第二相是不混溶的。
[0023]在一種實施方式中，第二相包含(a)葫蘆脲和(I)或(2);或(b)多個共價連接的葫蘆脲和⑴、⑵或⑶。
[0024]在一種實施方式中，第一和第二相中的一種是水相而另一個相是水不混溶相。
[0025]在一種實施方式中，第二相是水相。第一相是水不混溶相，例如油相。
[0026]在一種實施方式中，第一相是水相。第二相是水不混溶相，例如油相。
[0027]在一種實施方式中，所述方法進一步包括步驟(ii):從通道收集流出物，從而獲得小滴，其包含膠囊。
[0028]在一種實施方式中，所述方法包括以上步驟(ii)以及(iii)可選地乾燥在步驟(?)中獲得的膠囊。
[0029]在一種實施方式中，通道是微流體通道。
[0030]在一種實施方式中，基本上垂直於第一相地使第二相的流與第一相的流接觸。在這種實施方式中，通道結構可以是T型連接幾何形狀。
[0031]在一種實施方式中，第二相的流進一步包含用於封裝的組分，以及步驟(i)提供膠囊，其具有封裝組分的外 殼。
[0032]在本發明的第三方面，提供了通過本發明第二方面的方法獲得或可獲得的膠囊。
[0033]在本發明的第四方面，提供了用於將組分遞送到某個位置的方法，該方法包括以下步驟:
[0034](i)提供膠囊，其具有封裝組分的外殼；
[0035](ii)將膠囊遞送到目標位置；
[0036](iii)由外殼釋放組分。
[0037]在本發明的一個替代方面，提供了具有外殼的膠囊，其中外殼可獲自包含主體的組合物和一個或多個具有適合的主體-客體官能團的結構單元的絡合作用，從而形成超分子交聯網絡。
[0038]在一種實施方式中，主體選自環糊精、杯[η]芳烴、冠醚和葫蘆脲，以及具有適合於環糊精、杯[η]芳烴、冠醚或葫蘆脲主體的主體-客體官能團的一個或多個結構單元。在一種實施方式中，在以上第一至第四方面中提及葫蘆脲和葫蘆脲客體可解釋為提及替代主體和適合所述主體的客體。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0039]圖1(a)是微滴生成過程的示意圖，其中利用微流體流聚焦裝置，所述裝置由以下構成:連續油相，該連續油相垂直於CB[8] 1、MV2+-AuNP2、和Np-pol3 (作為分散相)的水溶液的組合。(b)流聚焦區的顯微圖像和示意圖，其中下遊混合通道允許在線充分混合試劑。(c)通過微流體小滴的較窄尺寸分布表明它的較高單分散性。
[0040]圖2(a)是當水蒸發時，膠囊形成過程的後期的明場圖像，這導致坍塌微膠囊。標尺=5μπι。(b)展開膠囊的光顯微鏡圖像，其示出膠囊外殼的殘餘物。標尺=10 μ m。(C)乾燥和至少部分坍塌膠囊的SEM圖像。標尺=2 μ m。(d)微膠囊外殼的TEM圖像，其示出5nmAuNP分散在聚合物網中。標尺=10nm。(e)提出的從最初的小滴(具有直徑d)到脫水的穩定的膠囊(具有直徑d』)的微膠囊形成過程的示意圖。還提出了用於膠囊材料的I和2的交聯結構。
[0041]圖3(a)是NP-RD_pol4的化學結構和示意圖。(b)小滴的LSCM圖像，其中所述小滴包含Np-RD-pol、CB [8]和MV-AuNP的水溶液，以及螢光強度曲線。標尺=40 μ m。(c)小滴(46 μ m直徑)的LSCM圖像，其中所述小滴包含Np-RD-pol、CB [8]、MV-AuNP和FITC-葡聚糖的水溶液，以及相應的螢光強度曲線。標尺=7.5 μ m。(d)小滴(23 μ m直徑)的LSCM圖像，其中所述小滴包含Np-Rd-pol、CB [8] ,MV-AuNP和FITC-葡聚糖的水溶液，以及相應的螢光強度曲線。標尺=10 μ m。
[0042]圖4是在再水化前後，乾燥微膠囊的明場和螢光圖像，其中所述乾燥微膠囊包含FITC-葡聚糖，其示出(a)微膠囊壁的膨脹，伴隨著FITC-葡聚糖(IOkDa)的滲漏，(b)FITC-葡聚糖(500kDa)的保留，以及(c)對於包含兩次濃縮CB[8]交聯劑的微膠囊，FITC-葡聚糖(70kDa)的部分可滲透性。標尺=20 μ m。
[0043]圖5(a)是示意圖，其示出提出了 MV2+的減少對三元絡合物
CB[8]:MV2+-AuNP:Np-poI,以及導致的2:l(MV'AuNP:)2cCB [8]絡合物形成的影響。
(b)在N2環境和25°C下，在Na2S2O4的水溶液中以及在H2O中12小時以上，微膠囊壁材料分解過程的螢光圖像。標尺=5μπι。
[0044]圖6 (a)具有和沒有MV2+-AuNP的微膠囊(5nm和20nm)的示意圖。對於陰性對照，使用 MV2+-pol5 替代 AuNP。(b)由 MV2+-pol、5nmMV2+-AuNP、和 20nm MV2+-AuNP 組成的空微膠囊的SERS譜，其示出CB [8]和MV2+的特徵峰(用箭頭表示)。(c)由MV2+-pol和20nmMV2+-AuNP組成的FITC-葡聚糖封裝微膠囊的SERS譜，示出除膠囊外殼材料以外，FITC的特徵峰(用箭頭表示)。利用633nm激發雷射線來獲得所有譜。(d)微膠囊的SERS圖譜，其示出針對CB [8]和MV2+的SERS信號的定位。
[0045]圖7是Np-RD-pol的激發譜以及在514nm和544nm處激發的發射譜。
[0046]圖8示出作為QtjilAiatl的比率的函數，利用T型連接以及寬度為40μηι的通道Qaq=80 μ L/h、100 μ L/h、120 μ L/h的各種含水流(實線)，和利用T型連接以及寬度為20 μ m的通道Qaq=40 μ L/h,60 μ L/h,80 μ L/h的各種含水流(虛線)的小滴平均直徑的變化。
[0047]圖9示出作為油和水流比率的函數，以及作為單獨水流流率比率的函數，小滴平均直徑的變化。
[0048]圖10是小滴的LSCM圖像，其中小滴包含Np-RD-pol、CB[8]、MV-AuNP和表達GFP的大腸桿菌細胞的水溶液，以及相應的螢光強度曲線。
【具體實施方式】
[0049]本發明人已經建立了，可以製備具有外殼的膠囊，其中所述外殼可獲自葫蘆脲與共價連接於適當葫蘆脲客體分子的結構單元的超分子絡合作用。
[0050]除其他技術外，還利用流體小滴生成技術來形成膠囊。鑑於先前報導這類材料的行為，葫蘆脲和結構單元形成外殼的能力是令人驚訝的。[0051]來自本發明人之一的早期工作已發現，通過主體-客體絡合作用，葫蘆脲可以用來形成超分子交聯網絡(參見Appel et al.J.Am.Chem.Soc.2010，132，14251)。所述網絡是基於CB [8]連同甲基紫精官能化(MV)聚合物和萘酚官能化(Np)聚合物一起的三元絡合物的超分子組裝。然而，其中描述的網絡為超分子水凝膠形式。並沒有描述或建議膠囊。
[0052]通過對MV-官能化聚合物連同CB[8] —起進行聲處理，接著添加Np官能化聚合物，並藉助於隨後的短期混合步驟，來製備水凝膠。
[0053]因此，本發明人發現的葫蘆脲可以和連接於適當客體分子的結構單元混合在一起從而產生材料外殼，是意想不到的。可以通過使用流體小滴製備技術和本體小滴生成技術來獲得膠囊。前者是特別有利的，因為它產生具有非常低尺寸分布的小滴，這導致具有非常低尺寸分布的膠囊。此外，本發明的方法允許嚴密控制產品膠囊的形成。在流體小滴製備技術中的簡單變化，如流率變化，可以用來控制所獲得膠囊的尺寸、外殼中孔的尺寸、以及外殼的厚度等。
[0054]本發明的膠囊顯示出是強勁的，並且能夠承受至少100°C的溫度。在減壓下，膠囊還保持它們的完整性。
[0055]本發明的膠囊適用於封裝組分。利用本文描述的流體小滴製備技術，可以在有待封裝組分存在的條件下構造膠囊外殼。因此，在一種程序中，可以形成外殼並封裝組分。因此，有利地，可以構造膠囊，而無需在膠囊建造以後進行後期被動擴散步驟。此外，封裝的方法允許將材料高比率加入膠囊，因此將材料浪費降至最低。
[0056]現參照本發明的每個特點來更詳細地描述本發明。
[0057]膠囊
[0058]本發明的膠囊包含材料外殼。該材料是超分子絡合物，其由葫蘆脲和共價連接於適當的葫蘆脲客體分子的結構單元的絡合作用形成。外殼限定內部空間，該內部空間可以稱為中空空間，其適合於保持組分。因此，`在一種實施方式中，本發明的膠囊擴大到在外殼內封裝組分的那些膠囊。外殼可以形成阻擋層，其限制或阻止封裝在其內的材料進行釋放。
[0059]通過在外殼中存在的孔，組分可以由膠囊釋放。在一些實施方式中，孔是足夠小以防止組分被釋放。因此，構成外殼的網絡可以被至少部分地解體，從而允許從外殼內釋放材料。另外，可以通過對外殼施加外部刺激來產生孔。在這種情況下，可以通過破壞葫蘆脲客體絡合物來產生孔。因而，這樣的解絡合作用產生孔，通過這些孔，封裝組分可以由外殼內釋放。在本發明的一些實施方式中，可以隨後通過外殼組分的重新組裝來重新形成外殼材料。
[0060]在一種實施方式中，膠囊在外殼內保存水。水可以是包含一種或多種試劑的水溶液，其中這些試劑用於製備超分子外殼，即未反應的試劑。在一種實施方式中，水溶液包含葫蘆脲和/或(I)或(2)，或(b)多種共價連接的葫蘆脲和/或(I)、(2)或(3)。在外殼內，還可以存在網絡，其由用來產生外殼的試劑的絡合作用形成。
[0061]在外殼內，可以提供除水和用於外殼的超分子組裝的試劑以外的封裝材料。
[0062]在膠囊被說成封裝組分的情況下，可以理解的是，這種封裝組分可以存在於由外殼限定的內部空間內。在一種實施方式中，還存在封裝劑，至少部分地在外殼的孔內。
[0063]可以利用能夠區別外殼材料和封裝劑的適合的分析技術，來確定在外殼內和/或在外殼的孔內組分的存在。例如，每種外殼材料和組分可以具有可檢測標記或適合的官能團，它們相對於其他外殼材料和組分的標記或官能團是獨立可檢測的(正交的)。在一種實施方式中，每種外殼和組分具有正交螢光標記。例如，一種具有羅丹明標記而另一種則具有螢光素標記。雷射掃描共聚焦顯微技術可以用來獨立地檢測每種標記的螢光，從而定位每種外殼和封裝劑。在組分信號被定位在和來自外殼的信號相同點的情況下，可以理解的是，組分存在於外殼的孔內。
[0064]並未特別限制外殼的總體形狀，因而並未特別限制膠囊的形狀。然而，在實踐中，可以通過它的製備方法來決定膠囊的形狀。在本文描述的製備方法中，可以利用流體小滴形成技術來製備膠囊外殼。通常，在連續相中的分散(或不連續)相的邊界處形成外殼材料。例如，一個相可以是水相，而另一個相可以是水不混溶相。離散區域可以是具有基本上球形形狀的小滴。因而，形成的外殼也基本上是球形。
[0065]在某些實施方式中，當外殼具有基本上球形形狀時可以獲得膠囊。此膠囊可以經受乾燥步驟，其減少在膠囊中和在膠囊周圍的溶劑(例如，水)量。作為此步驟的結果，膠囊的尺寸會收縮。起初，外殼保持基本上球形形狀。在進一步乾燥以後，膠囊球體可以部分地或完全地坍塌於本身上。膠囊的結構完整性被保持並且外殼簡單地變形以適應內部體積的變化。因此，本發明的膠囊包括那些膠囊，其中外殼是至少部分坍塌球體。
[0066]鑑於在離散區域(例如，小滴)的邊界處形成膠囊外殼，所以提及小滴的尺寸也可以視為提及膠囊的尺寸。膠囊外殼可以在乾燥步驟以前形成。
[0067]本發明人已經建立了，可以將已收縮的膠囊(例如通過去溶劑化)，隨後返回到它們原始的基本上球形形狀(例如通過將膠囊再溶劑化)。
[0068]可以通過簡單觀察所形成的膠囊，其中利用顯微術，如明場顯微術、掃描電子顯微術或透射電子顯微術，來確定膠囊的形狀。在外殼材料包含標記的情況下，檢測通過外殼的標記將揭示膠囊形狀。例如，在標記是螢光標記的情況下，雷射掃描共聚焦顯微術可以用來定位外殼材料和它的形狀。`
[0069]並不特別限制膠囊的尺寸。在一種實施方式中，膠囊是微膠囊和/或納米膠囊。
[0070]在一種實施方式中，每個膠囊具有至少0.1,0.2,0.5,0.7、1、5、10、20、30、40、50、100或200 μ m的平均尺寸(直徑)。
[0071]在一種實施方式中，每個膠囊具有至多400、200、100、75或50μπι的平均尺寸(直徑)。
[0072]在一種實施方式中，膠囊尺寸是在一定範圍內，其中最小和最大直徑選自所述實施方式。例如，膠囊尺寸為10至IOOym (直徑)。
[0073]平均尺寸是指膠囊樣品的測得直徑的數值平均值。通常，測量樣品中的至少5個膠囊。從外殼的最外邊緣，進行橫截面測量。
[0074]可以利用對形成膠囊的簡單的顯微分析來確定膠囊的橫截面。例如，可以將形成的膠囊放置在顯微鏡載物片上並分析膠囊。可替換地，可以在製備過程中測量膠囊尺寸，例如當在流體裝置的通道(即管線)中形成膠囊時。
[0075]還可以利用關於在外殼材料內檢測存在的可檢測標記或官能團的技術來測量橫截面。如以上關於封裝組分的檢測和定位所述的，外殼材料可以包含螢光標記，其可以通過雷射掃描共聚焦顯微技術加以檢測。在膠囊外殼內和周圍存在多種標記允許確定橫截面形狀，以及測量最大橫截面。[0076]在本文描述的製備方法中，利用流體小滴生成技術來製備膠囊。在小滴中形成膠囊外殼，其中所述小滴在流體小滴生成裝置的通道中，在小滴的水相與連續相的邊界處產生。因此，膠囊的尺寸基本上相同於小滴的尺寸。
[0077]本發明人已經建立了，可以製備具有低尺寸分布的本發明的膠囊。這是特別有利的，因為可以製備各自具有可預測的物理和化學特性的大量的膠囊。
[0078]在一種實施方式中，膠囊直徑具有至多0.5%、至多1%、至多1.5%、至多2%、至多4%、至多5%、至多7%、或至多10%的相對標準偏差(RSD)。
[0079]相對標準偏差計算由以下計算:標準偏差除以數值平均值並乘以100。膠囊的尺寸是指膠囊的最大橫截面(在任何截面中)。基本上球形膠囊的橫截面是直徑。
[0080]外殼限定內腔，其適合於封裝組分。內部空間的尺寸將總體上對應於膠囊本身的尺寸。因此，內部空間的尺寸，例如直徑，可以選自上文針對外殼本身給出的直徑值中的任何一種。
[0081]在測量膠囊尺寸的情況下，直徑是指在兩個相對點處外殼材料的最外邊緣到最外邊緣的距離(如上所述)。在測量內部空間尺寸的情況下，直徑是指在兩個相對點處外殼材料的最內邊緣到最內邊緣的距離。
[0082]本發明人已經建立了這樣的技術，其允許確定外殼外邊緣和內邊緣。例如，在外殼材料內存在可檢測標記允許確定外殼的最外邊緣和最內邊緣。如果可以檢測這些邊緣，則可以確定外殼的厚度。
[0083]通常，如從最外邊緣到最外邊緣測量的直徑並不顯著不同於如從最內邊緣到最內邊緣測量的直徑。差異是在兩個相對點處外殼的厚度。
[0084]在一種實施方式 中，外殼具有至少0.02、至少0.05、至少0.1、至少0.5、至少1.0、至少2.0或至少5.0 μ m的厚度。
[0085]如上所述，外殼具有孔。在一種實施方式中，孔具有一定尺寸以允許材料從其中通過。例如，封裝在膠囊內的組分可以通過外殼的孔以由膠囊釋放。相反地，孔可以具有足夠的尺寸以允許組分進入外殼內部空間並從而被封裝。這些可以稱為被動擴散封裝步驟。這樣的技術可以用來提供在其內部具有封裝劑的膠囊。如本文所描述的，本發明的發明人已提供了在外殼製備步驟中用於封裝材料的替代方法。這樣的方法允許對膠囊更有效加載材料，當材料被完全封裝在外殼內時。
[0086]在一種實施方式中，孔可以具有一定的尺寸，其太小以致不允許材料從其通過。例如，封裝在膠囊內的組分可以被阻止通過外殼的孔，因而不能由膠囊釋放。可以通過，例如，破壞將外殼保持在一起的葫蘆脲絡合物，從膠囊釋放這樣的材料。以這種方式，外殼的破壞產生材料可以從其中通過的較大的孔。
[0087]認為，在先前去溶劑化膠囊的溶劑化以後，可以增加孔徑。當膠囊收縮時，隨著外殼材料摺疊起來，膠囊的孔隙率可以降低，從而至少部分地封閉一些孔。
[0088]利用一系列封裝組分，各自具有不同的橫截面，如不同直徑，可以通過實驗測量孔的尺寸。橫截面可以是已知的或可以基於對組分的可能構型的了解加以預測。可以基於何種組分由膠囊釋放以及何種組分並未由膠囊釋放來確定孔徑。
[0089]可以基於每種封裝組分的計算的迴轉半徑來預測組分的橫截面，通常為直徑。所述計算最適合於確定小球狀顆粒的尺寸，並且可以用於聚合物系統，如多肽、多核苷酸和多糖。用於計算迴轉半徑的方法描述於Andrieux et al.AnalyticalChemistry2002, 74，5217，其以引用方式於本文。
[0090]可以利用本文描述的方法來製備包含封裝組分的膠囊。在製備膠囊(具有封裝劑)以後，可以針對材料從外殼內喪失到外部水相來分析膠囊和它的水環境。封裝的組分可以具有分析標記以幫助檢測。適合的標記包括螢光標記，其是利用標準螢光顯微技術可檢測的。
[0091]在一種實施方式中，不同分子量的葡聚糖化合物可以用作測試化合物來確定形成的膠囊的孔徑。葡聚糖可以被標記，並且優選用螢光標記加以標記。
[0092]不同分子量的葡聚糖化合物容易獲自商業來源,包括,例如,Sigma Aldrich。可獲得平均分子量為1，000至500，000的葡聚糖。分子量為70kDa的葡聚糖具有約8nm的迴轉半徑，而分子量為150kDa的葡聚糖則具有約Ilnm的迴轉半徑(參見Granath Journal ofColloid Sciencel958, 13，308)。具有突光標記,如異硫氰酸突光素，的葡聚糖化合物也可獲自商業來源，再次包括Sigma Aldrich。
[0093]在一種實施方式中，孔徑是至多20、至多15、至多10、至多5、至多I或至多0.5 μ m0
[0094]在一種實施方式中，孔徑是至多500、至多200、至多100、至多50、或至多20nm。
[0095]在一種實施方式中，孔徑是至少0.5、至少1、或至少5nm。
[0096]在一種實施方式中，孔徑是在一定範圍內，其中最小和最大孔徑選自所述實施方式。例如，孔徑為I至20nm。
[0097]作為對葡聚糖的替代，可以替代使用蛋白質標準品。作為對以上描述的標記化合物的替代，還可以利用質譜法、或蛋白`質凝膠電泳(用於蛋白質標準品)，來檢測由膠囊釋放的化合物。
[0098]利用BET氣體吸收技術，還可以通過實驗確定表面積、孔隙率和孔徑。
[0099]如預期的，通過在從其可以製備膠囊的可絡合組合物中存在的葫蘆脲的量來影響外殼孔徑。增加在可絡合組合物中葫蘆脲的存在量被認為會增加與網絡的交聯量，從而減小在所形成的外殼材料中孔的尺寸。
[0100]膠囊外殼可以包含一層或多層材料。可以連接材料層，例如通過葫蘆脲與存在於一層中的第一客體分子和存在於第二層中的第二客體分子的三元超分子絡合物。另外，或可替換地，可以通過具有多個客體分子的第一結構單元來連接材料層，其中一個客體分子與葫蘆脲和存在於第一層中的另一客體分子形成三元絡合物，而另一客體分子與葫蘆脲和存在於第二層中的另一客體分子形成三元絡合物。在這些實施方式中，外殼可以看作三維延伸的網。雖然，外殼可以具有材料深度，如本文描述的厚度，但可以理解的是，外殼的形成將仍然提供其中組分可以駐留的內部空間。因此，本發明並不旨在涵蓋沒有內部空間的顆粒。
[0101]可替換地，膠囊外殼可以包含網絡材料的多個同心層，其並不是互相連接的。在任何這種實施方式中，提及膠囊尺寸是指最外部外殼的橫截面。
[0102]如上文所討論的，外殼材料可以包括可檢測標記或可檢測官能團。
[0103]可檢測官能團是膠囊外殼組分的官能團，所述膠囊外殼組分具有這樣的特性，其可檢測超過及高於存在於膠囊的其他組分的特性，或甚至相同組分的其他官能團。可檢測官能團可以是指特定化學基團，其在，例如，IR、UV-VIS、NMR或拉曼分析中會產生獨特的信號。官能團可以是放射性元素。
[0104]通常，外殼材料的一部分或封裝劑配備有可檢測標記，因為所選標記的引入允許使用這樣的技術，其最適合於待測量的性能。本文描述的是具有螢光可檢測標記的結構單元。另外，本文描述的是這樣的結構單元，其能夠提供表面增強共振效應。
[0105]外殼可以在它的內表面和/或外表面上具有另外的官能團。本文描述的是這樣的結構單元，其具有用來改善溶解性、幫助檢測的官能團；用於後期細化外殼的反應性官能團；以及催化劑等。
[0106]本發明的膠囊外殼是穩定的並且可以加以儲存而沒有丟失外殼結構。因此，外殼的完整性允許膠囊用作封裝劑的貯存容器。本發明的膠囊是熱穩定的並且已知外殼保持它的完整性至少高達100°C。本發明的膠囊在減壓下(即在低於環境壓力下)也是穩定的。已知外殼保持它的完整性下至至少20Pa。
[0107]本發明的膠囊具有較長保質期。本發明人已經證實，保持結構完整性持續至少10個月。
[0108]外殼的結構完整性部分地是由於葫蘆脲客體-主體絡合物的強度,其更詳細地描述於下文。
[0109]另外或替代的膠囊特點
[0110]膠囊外殼具有孔。可以通過適當改變用來形成膠囊的試劑的化學計量來調節孔隙率。增加結構單元之間的交聯將降低膠囊中孔的尺寸。可替換地，可以選擇結構單元，以提供具有增加或減少孔隙率的外殼材料。在封裝劑或相對較小尺寸被封裝的情況下，製備具有相對較小直徑孔的膠囊，從而限制或防止封裝劑丟失到外殼外面。在相對較大封裝劑被封裝的情況下，孔徑可以較大。
[0111]如上所述，外殼在它內表面和/或外表面上可以具有另外的官能團。在一些實施方式中，提供官能團，用於膠囊外殼的後期化學官能化，例如作為用於連結至具有特別期望的反應性的化合物的反應位點。
[0112]在一種實施方式中，外殼具有化學官能團，其可用於在膠囊的外表面和/或內表面上反應。化學官能團選自由羥基、胺(優選伯胺和仲胺)、羧基、巰基、酯、硫酯、碳酸酯、聚氨酯、和硫脲組成的組。
[0113]在一種實施方式中，將外殼連接於官能化合物。
[0114]在一種實施方式中，官能化合物是分析標記，以幫助檢測和量化膠囊。這些在以上部分中已經描述過。
[0115]官能化合物可以是催化的(包括酶促)、抗真菌的、除草的、或抗原性的。
[0116]官能化合物可以具有表面粘附性能。所述官能團可以用來將膠囊共價或非共價地連接於表面。
[0117]官能化合物能夠結合於(或螯合)化合物或離子。這樣的官能團可以有助於純化如過濾，以及用於捕獲有毒和無毒的元素和化合物。
[0118]在一種實施方式中，官能化合物是生物分子。
[0119]在一種實施方式中，官能化合物是多肽、多糖、多核苷酸、或脂質。
[0120]多肽的實例包括酶、抗體、激素和受體。[0121]通過適當選擇結構單元材料，可以將官能團引入外殼。因此，在結構單元是聚合物的情況下，可以將適合的官能團加入聚合物的單體，所述單體可以存在於聚合物主鏈內，或存在於側鏈上。在結構單元是顆粒的情況下，可以將顆粒表面適當地官能化。
[0122]在官能分子存在於外殼表面上的情況下，可以在形成膠囊以後加入此分子。可以利用為此目的已引入的化學官能團來將官能分子連接於外殼。
[0123]原則上，葫蘆脲可以具有可用於反應的官能團。然而，這是較少優選的。
[0124]在需要時，在膠囊製備過程中，適當的保護基團可以用來保護官能團。後期可以除去保護基團(根據需要以及在需要時)。
[0125]絡合物
[0126]膠囊外殼包含網絡,所述網絡通過超分子束縛(supramolecular handcuff)保持在一起。形成這種超分子束縛的絡合物是基於葫蘆脲，其結合一個客體(二元絡合物)或兩個客體(三元絡合物)。葫蘆脲形成與每個客體的非共價鍵。本發明人已經建立了，葫蘆脲的絡合物可以容易地形成並提供在結構單元之間強勁的非共價鍵。絡合物的形成允許在結構單元內的許多官能團。本發明人之一已表明，可以利用葫蘆脲束縛來製備聚合物網絡。然而，到目前為止，還未描述利用葫蘆脲來形成如膠囊的精確的聚合物結構。
[0127]在一種實施方式中，外殼是具有多種絡合物的網絡，其中每種絡合物包含葫蘆脲，其結合第一客體分子和第二客體分子。第一和第二客體分子共價連接於第一結構單元，或連接於第一結構單元和第二結構單元。
[0128]在絡合物在葫蘆脲腔內包含兩個客體的情況下，絡合物的結合常數，Ka，是至少IO3M'至少IO4M'至少IO`5M'至少IO6M'至少IO7M'至少IO8M'至少IO9M'至少IO10M'至少IO11M'或至少IO12M'
[0129]在葫蘆脲結合兩個客體分子的情況下，客體分子可以是相同的或它們可以是不同的。能夠結合兩個客體分子的葫蘆脲還能夠與單個客體形成穩定的二元絡合物。三元客體-主體絡合物的形成被認為是藉助於中間體二元絡合物來進行。在外殼內，可以存在客體分子和葫蘆脲之間形成的二元絡合物。二元絡合物可視為部分形成的三元絡合物，其還未與另一客體分子形成非共價鍵。
[0130]在一種實施方式中，外殼是具有多種絡合物的網絡，其中每種絡合物包含葫蘆脲，其結合一個客體分子，並且每個葫蘆脲共價連接於至少另一個葫蘆脲。客體分子共價連接於第一結構單元，或共價連接於第一結構單元和第二結構單元。
[0131]在絡合物在葫蘆脲腔內包含一個客體的情況下，絡合物的結合常數，Ka，是至少IO3M'至少IO4M'至少IO5M'至少IO6M'至少IO7M'至少IO8M'至少IO9M'至少IO10M'至少IO11M'或至少IO12M'
[0132]在一種實施方式中，客體是一種化合物，該化合物能夠形成絡合物，所述絡合物具有IO4至ΙΟΙ1的結合常數。
[0133]在一種實施方式中，絡合物的形成是可逆的。響應於外部刺激，包括，例如，競爭劑客體化合物，可以發生絡合物的解絡合作用以分開一個或多個客體。可以誘導所述解絡合作用以在膠囊中提供另外的或較大的孔，封裝材料可以通過這些孔。
[0134]如上所述，相對於膠囊外殼，葫蘆脲與一個或兩個客體的絡合物是非共價連接，其連接和/或互連結構單元以形成材料的超分子網絡。絡合物是熱穩定的並且在減壓下並不分開，如針對外殼所解釋的。
[0135]網絡
[0136]形成超分子絡合物用來連接和/或互連結構單元，從而形成材料的網絡。這是膠
囊外殼。
[0137]提供了兩種類型的網絡。第一類型是基於形成多個三元絡合物，其中每個絡合物包含葫蘆脲主體與第一客體分子和第二客體分子。第二類型是基於形成多個二元絡合物，其中每個絡合物包含葫蘆脲主體與第一客體分子。在此第二類型中，每個葫蘆脲共價連接於至少另一個葫蘆脲。這些類型的網絡可以結合於外殼。
[0138]在結構單元提供有多個客體分子的情況下，所有的客體分子不必都參加與葫蘆脲的絡合物。在網絡是基於在三元結構之間的連接的情況下，結構單元的客體分子可以是在與葫蘆脲的二元絡合物中。二元絡合物可視為部分形成的三元絡合物，其還未與另外的客體分子結合以產生三元形式。
[0139]在整個描述中，提及了結構單元、第一結構單元和第二結構單元。可以理解的是，提到這些是指單個分子、顆粒、聚合物等(其是結構單元)的集合。在提及單個結構單元分子、顆粒等的情況下，術語單個用來指結構單元，例如單個第一結構單元。
[0140]以下描述的網絡是基本網絡，其可獲自描述的組合物。可以理解的是，本發明延伸到更加複雜的網絡，其可獲自包含另外結構單元的組合物。
[0141]基於葫蘆脲的 三元絡合物的網絡
[0142]此網絡可獲自第一客體分子和第二客體分子以及葫蘆脲主體的組裝。客體分子可以提供在一個或兩個(或更多)結構單元上(如下文所描述的)。
[0143]在一種實施方式中，網絡可獲自或獲自組合物的絡合作用，所述組合物包含葫蘆脲、共價連接於多個第一葫蘆脲客體分子的第一結構單元和共價連接於多個第二葫蘆脲客體分子的第二結構單元，其中第一客體分子和第二客體分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物。
[0144]三元絡合物用來非共價連接第一和第二結構單元。單個第一結構單元可以與多個第二結構單元形成多個非共價連接。類似地，單個第二結構單元可以與多個第一結構單元形成多個非共價連接。以這種方式，建立了材料的網絡。
[0145]應該注意的是，在一些實施方式中，第一和第二客體分子可以是相同的。因此，第一和第二結構單元的差異可以在於它們的組成。在一些實施方式中，第一和第二結構單元可以是相同的。在這種情況下，第一和第二客體分子是不同的。
[0146]以下示出的是在葫蘆脲、單個第一結構單元和兩個單個第二結構單元之間形成的基本網絡的示意性結構。在包括在本文中的示意圖中，客體分子被描述為長方形，其共價連接(垂直線)於結構單元(水平線)。垂直線可以描述與結構單元的直接共價鍵或接頭。結構單元可以是聚合物分子、顆粒等(如本文所描述的)。
[0147]在以下示意圖中，第一結構單元的一些第一客體分子(無陰影長方形)是在與葫蘆脲主體(桶)和第二結構單元的第二客體分子(陰影長方形)的絡合物中。
[0148]
【權利要求】
1.一種膠囊，具有外殼，所述外殼可由包含主體的組合物和具有適合的主體客體官能團的一個或多個結構單元的絡合作用獲得，從而形成超分子交聯網絡。
2.根據權利要求1所述的膠囊，其中，所述主體選自葫蘆脲、環糊精、杯[η]芳烴、和冠醚，而所述一個或多個結構單元具有適合於所述葫蘆脲、環糊精、杯[η]芳烴或冠醚主體的主體客體官能團。
3.根據權利要求2所述的膠囊，其中，所述主體是葫蘆脲且所述一個或多個結構單元具有適合的葫蘆脲客體官能團。
4.根據權利要求3所述的膠囊，其中，所述外殼可由(a)包含葫蘆脲的組合物和(I)或(2);或(b)包含多個共價連接的葫蘆脲的組合物和(I)、(2)或(3)的絡合作用獲得，其中: (1)包含共價連接於多個第一葫蘆脲客體分子的第一結構單元和共價連接於多個第二葫蘆脲客體分子的第二結構單元，其中第一客體分子和第二客體分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物； (2)包含共價連接於多個第一葫蘆脲客體分子和多個第二葫蘆脲客體分子的第一結構單元，其中第一和第二客體分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物，且可選地所述組合物進一步包含共價連接於一個或多個第三葫蘆脲客體分子、一個或多個第四葫蘆脲客體分子或兩者的第二結構單元，其中第三和第四分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物，和/或所述第一和第四分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物，和/或所述第二和第三分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物；以及 (3)包含共價連接於 多個第一葫蘆脲客體分子的第一結構單元，其中所述第一客體分子連同所述葫蘆脲一起適合於形成二元客體-主體絡合物，可選地，所述組合物進一步包含共價連接於一個或多個第二葫蘆脲客體分子的第二結構單元，其中所述第二客體分子連同所述葫蘆脲一起適合於形成二元客體-主體絡合物。
5.根據權利要求4所述的膠囊，其中，所述外殼可由包含葫蘆脲的組合物和(I)或(2)的絡合作用獲得。
6.根據權利要求5所述的膠囊，其中，所述外殼可由包含葫蘆脲的組合物和(I)的絡合作用獲得。
7.根據權利要求3至6中任一項所述的膠囊，其中，所述葫蘆脲選自CB[8]及其變體和衍生物。
8.根據權利要求7所述的膠囊，其中，所述葫蘆脲是CB[8]。
9.根據權利要求7或權利要求8所述的膠囊，其中，所述葫蘆脲與第一客體分子和第二客體分子形成三元絡合物，並且所述第一和第二客體分子選自以下的對: 紫精和萘酚； 紫精和~二羥基苯； 紫精和四硫富瓦烯； 紫精和Π引噪； 甲基紫精和萘酚； 甲基紫精和~二羥基苯； 甲基紫精和四硫富瓦烯；甲基紫精和H引噪； N，N』 -二甲基二吡啶鎗基乙烯和萘酚； N，N』 - 二甲基二吡啶鎗基乙烯和二羥基苯； N, N』 - 二甲基二吡澱鐵基乙稀和四硫富瓦稀； N, N』 - 二甲基二吡澱鐵基乙稀和吲噪； .2，7- 二甲基二氮雜芘鎗和萘酚； .2，7- 二甲基二氮雜芘鎗和二羥基苯； .2，7-二甲基二氮雜芘鎗和四硫富瓦烯；以及 .2，7- 二甲基二氮雜芘鎗和吲哚。
10.根據權利要求1至9中任一項所述的膠囊，其中，所述第一結構單元是聚合物分子。
11.根據權利要求10所述的膠囊，其中，所述聚合物分子是或包含聚(甲基)丙烯酸酯聚合物、聚苯乙烯聚合物和/或聚(甲基)丙烯醯胺聚合物。
12.根據權利要求10或權利要求11所述的膠囊，其中，所述聚合物分子包含可檢測標記。
13.根據權利要求1至12中任一項所述的膠囊，其中，所述第二結構單元如果存在的話是顆粒。
14.根據權利要求13所述的膠囊，其中，所述顆粒是或包含金或銀或它們的混合物。
15.根據權利要求1至14中任一項所述的膠囊，其中，所述膠囊尺寸是直徑在10至.100 μ m的範圍內。
16.根據權利要求1至15中任一項所述的膠囊，其中，所述膠囊直徑具有至多10%的相對標準偏差(RSD)。
17.根據權利要求1至16中任一項所述的膠囊，其中，所述外殼孔徑在I至20nm的範圍內。
18.根據權利要求1至17中任一項所述的膠囊，其中，所述膠囊封裝組分。
19.根據權利要求18所述的膠囊，其中，所述組分是生物分子。
20.一種用於製備具有外殼的膠囊的方法，所述方法包括以下步驟: (i)在通道中使第一相的流和第二相的流接觸，從而在所述通道中產生處於所述第一相中的所述第二相的離散區域的分散體，優選小滴，其中所述第二相包含葫蘆脲和具有適合於形成超分子交聯網絡的適合的葫蘆脲客體官能團的一個或多個結構單元，從而在所述離散區域內形成膠囊外殼，其中所述第一和第二相是不混溶的。
21.根據權利要求20所述的方法，其中，所述第二相是(a)葫蘆脲和(I)或(2);或(b)多個共價連接的葫蘆脲和(I)、(2)或(3)，其中: (1)包含共價連接於多個第一葫蘆脲客體分子的第一結構單元和共價連接於多個第二葫蘆脲客體分子的第二結構單元，其中第一客體分子和第二客體分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物； (2)包含共價連接於多個第一葫蘆脲客體分子和多個第二葫蘆脲客體分子的第一結構單元，其中第一和第二客體分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物，並且可選地所述組合物進一步包含共價連接於一個或多個第三葫蘆脲客體分子、一個或多個第四葫蘆脲客體分子或兩者的第二結構單元，其中第三和第四分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物，和/或所述第一和第四分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物，和/或所述第二和第三個分子連同葫蘆脲一起適合於形成三元客體-主體絡合物；以及 (3)包含共價連接於多個第一葫蘆脲客體分子的第一結構單元，其中所述第一客體分子連同所述葫蘆脲一起適合於形成二元客體-主體絡合物。可選地，所述組合物進一步包含共價連接於一個或多個第二葫蘆脲客體分子的第二結構單元，其中所述第二客體分子連同所述葫蘆脲一起適合於形成二元客體-主體絡合物。
22.根據權利要求21所述的方法，其中，所述第二相包含葫蘆脲和(I)或(2)。
23.根據權利要求22所述的方法，其中，所述第二相包含葫蘆脲和(I)。
24.根據權利要求20至23中任一項所述的方法，其中，所述葫蘆脲選自CB[8]及其變體和衍生物。
25.根據權利要求24所述的方法，其中，所述葫蘆脲是CB[8]。
26.根據權利要求24或25所述的方法，其中，所述葫蘆脲與第一客體分子和第二客體分子形成三元絡合物，並且所述第一和第二客體分子選自以下的對: 紫精和萘酚； 紫精和~ 羥基苯； 紫精和四硫富瓦烯； 紫精和Π引噪； 甲基紫精和萘酚； 甲基紫精和 羥基苯； 甲基紫精和四硫富瓦烯； 甲基紫精和H引噪； N，N』 -二甲基二吡啶鎗基乙烯和萘酚； N，N』 - 二甲基二吡啶鎗基乙烯和二羥基苯； N, N』 - 二甲基二吡澱鐵基乙稀和四硫富瓦稀； N, N』 - 二甲基二吡澱鐵基乙稀和吲噪； 2，7- 二甲基二氮雜芘鎗和萘酚； 2，7- 二甲基二氮雜芘鎗和二羥基苯； 2，7-二甲基二氮雜芘鎗和四硫富瓦烯；以及 2，7- 二甲基二氮雜芘鎗和吲哚。
27.根據權利要求20至26中任一項所述的方法，其中，所述第一結構單元是聚合物分子。
28.根據權利要求7所述的方法，其中，所述聚合物分子是或包含聚(甲基)丙烯酸酯聚合物、聚苯乙烯聚合物和/或聚(甲基)丙烯醯胺聚合物。
29.根據權利要求27或權利要求28所述的方法，其中，所述聚合物分子包含可檢測標記。
30.根據權利要求20至29中任一項所述的方法，其中，所述第二結構單元如果存在的話是顆粒。
31.根據權利要求30所述的方法，其中，所述顆粒是或包含金或銀或它們的混合物。
32.根據權利要求20至31中任一項所述的方法，其中，所述第二相是水相而所述第一相是水不混溶相。
33.根據權利要求20至32中任一項所述的方法，其中，所述第二相進一步包含用於封裝的組分，且步驟(i)提供具有封裝所述組分的外殼的膠囊。
34.根據權利要求20至33中任一項所述的方法，其中，所述方法進一步包括步驟(ii):收集來自所述通道的流出物，從而獲得小滴，所述小滴包含膠囊。
35.根據權利要求34所述的方法，進一步包括以下步驟:乾燥在步驟(ii)中獲得的膠囊。
36.一種用於將組分遞送到位置的方法，所述方法包括以下步驟: (i)提供如在權利要求18或權利要求19中所限定的具有封裝組分的外殼的膠囊； (ii)將所述膠囊遞送到目標位置； (iii)從所述外殼釋放所述組分。
【文檔編號】C08G85/00GK103827178SQ201280047030
【公開日】2014年5月28日 申請日期:2012年7月25日 優先權日:2011年7月26日
【發明者】奧倫·亞歷山大·謝爾曼, 羅傑·庫爾斯頓, 克里斯多福·埃布爾, 張婧 申請人:劍橋實業有限公司