Spa-抗體三聚體作為檢驗血液抗原的指示劑的用途

2023-05-27 20:13:36 1

Spa-抗體三聚體作為檢驗血液抗原的指示劑的用途
【專利摘要】本發明涉及SPA-抗體三聚體作為檢驗血液抗原的指示劑的用途。該三聚體由抗紅細胞抗體和SPA以及某種抗白細胞抗原或其他抗原的抗體形成。該三聚體通過自身的抗紅細胞抗體和紅細胞結合、另一種抗體和相應的白細胞抗原（或其他抗原）結合，之後通過血沉過程或其他如密度梯度離心等方法沉澱白細胞（或其他細胞、因子）和紅細胞，起到清除相應細胞等成分的目的，也可藉助SPA使紅細胞和相應抗原連接，作為檢測某些抗原的手段。
【專利說明】SPA-抗體三聚體作為檢驗血液抗原的指示劑的用途
[0001]本發明是名稱為「SPA-抗體三聚體、含有該三聚體的細胞處理試劑盒及其製備方法和用途」(申請號201010022753.4、申請日2010年01月13日)的發明專利分案申請專利。
【技術領域】
[0002]本發明涉及生物醫學【技術領域】，特別是涉及葡萄球菌A蛋白(staphylococalprotein A,以下簡稱SPA)-抗體三聚體作為檢驗血液抗原的指示劑的用途。
技術背景
[0003]SPA能與人及多種哺乳動物血清IgG分子中的Fe片段結合。結合的親和性次序依次是豬、狗、兔、人、猴、鼠、小鼠及牛。SPA除與IgG結合外，還能與血清中少量的IgM和IgA結合，SPA菌對各類免疫球蛋白的吸附率:IgG為90%?98%，IgM為2%?30%，IgA為1.5% ?20%o
[0004]出現共沉反應的SPA與IgG必須有兩個結合部位，它們分別在Fe和Fab段上，缺一雖能與SPA結合，但不出現共沉反應，這種Fab的參與並非SPA —抗體反應。現已研究表明，IgG與SPA的結合部位是CH2和CH3的交界處。
[0005]SPA應用很廣，但所有應用的原理都離不開SPA具有與IgG的Fe段的結合能力，主要應用方面如下:
[0006]1.SPA菌的協同凝集作用
[0007]用已知的標準血清，吸附到SPA菌的表面，使之成為吸附抗體的載體，再以此去診斷相應的未知抗原而產生肉眼可見的凝集顆粒，診斷的抗原可以是顆粒性的，也可以是可溶性的。此種凝集相當於反向間接血凝，但省去間接血凝中的抗體純化，紅血球鞋化等複雜手續，而只需要SPA菌體及粗製免疫血清即可。所以此法簡單、快速，特異性敏感性均較滿意。
[0008]2.作為廣譜第二抗體
[0009]用SPA代替抗體IgG的第二抗體，有如下優點:①SPA製備容易，性質穩定，易純化，對人和多種哺乳動物的IgG都能應用，不受種屬限制。②SPA的結合力強，相當於游離抗體與抗原的結合力，對人和兔的親和常數均為IO3L/克分子，結合後對IgG的活性無影響。無論在0°C、37°C、44°C及56°C幾乎均能立即結合而無需長時間的孵育，因此可以縮短試驗時間；(D SPA容易標上1251、螢光素、辣根過氧化物酶、鐵蛋白等，因此可與多種技術相結合SPA分子高度均一，它不是免疫球蛋白，不受Fe受體影響，所以有較高的抗IgG特異性。
[0010]3.用於提取純化IgG利用SPA與IgG的結合特性提取IgG，比常規採用硫酸銨、Sephadex柱，DEAE柱或免疫梯度離心等法要簡便得多，而且純度好。
[0011]4.檢測和提純IgM IgM在病毒的早期診斷中具有重要意義，為了檢測特異性IgM抗體，必須首先在血清中除去IgG。採用SPA菌吸附IgG是目前快速而又理想的辦法，利用此法也為IgM的提純開闢了道路。
[0012]5.其它方面用於免疫複合物的檢測、體外激活補體功能試驗、細胞表面標記以及腫瘤表面抗原的檢測等。
[0013]幹細胞(stem cell)是指具有無限或較長期的自我更新能力，並能分化出至少一種高度分化子代細胞的細胞。根據細胞來源將幹細胞分成胚胎性幹細胞和成體幹細胞，而成體幹細胞包括自體幹細胞和異體幹細胞。
[0014]目前國內外的最新進展促使「骨髓幹細胞」移植血管新生的作用機理、機體內環境對幹細胞療效的影響以及轉基因骨髓源幹細胞的作用進行進一步的研究，以提高幹細胞的治療效果。
[0015]臨床上的治療過程中主要採集骨髓或外周血來源的單個核細胞進行移植，並認為其中的⑶34+或⑶133 + /VEGF-R2+細胞為血管新生的幹/祖細胞，但這類細胞的增殖分化功能、他們的歸巢到血管損傷部位的能力以及達到治療效果的有效數量等都是尚未充分了解的內容。
[0016]表面抗原(Lineage surface antigen)是當幹細胞分化為各系的祖細胞和成熟細胞時，會出現各系的專一性標誌，如淋巴系⑶19\^7\粒細胞系⑶13、⑶11、⑶15、⑶16，紅細胞系的 CD47、CD51、CD71，巨核細胞系的 CD31\CD41\CD42\CD61\CD63\CD107，T\NK 系的⑶2\OT25\ra7，這些在特定類型的血細胞表面出現的抗原通稱為系表面抗原，Lin抗原陽性就可以確定為祖細胞和成 熟細胞，還有許多Lin抗原陰性的細胞稱之為原始幹細胞，如⑶34\rai33\SCA-l\ra38等等。我們可以根據各科室不同要求去除相關的成熟細胞系。
[0017]幹細胞能有效治療各種細胞損傷性疾病，這已是全世界主流醫學界公認的事實。但是如何得到幹細胞，如何分離、純化取得存活的、很理想的幹細胞是全世界科學家共同研究的課題。目前從骨髓、臍帶血中分離提取幹細胞的技術有很多，如:免疫磁珠法和流式細胞儀法等。這些方法所存在的共同問題是:第一不能有效保留所有類型的幹細胞，第二造價貴，技術條件要求較高。在臨床推廣應用上有一定的難度。

【發明內容】
:
[0018]本發明涉及一種葡萄球菌A蛋白(staphylococalprotein A,以下簡稱SPA)-抗體三聚體作為檢驗血液抗原的指示劑的用途。
[0019]本發明提供了一種將血液中紅細胞和其他細胞/因子結合的中介物:spa_抗體三聚體，通過該三聚體可以將紅細胞和所需要的白細胞或其他細胞/因子結合，通過血沉或梯度離心等方法可以將血液中的特定細胞/因子去除。
[0020]本發明的技術方案為:
[0021]1.Spa-抗體三聚體及其製備方法:
[0022]材料:重組SPA ；A抗體:抗紅細胞單克隆或多克隆抗體；B抗體:可根據臨床和實驗需要選用不同的單克隆或多克隆抗體，如:特異性淋巴細胞抗體(抗cd2抗體、抗cd3抗體、抗cd4抗體、抗cdll抗體、抗cdl5抗體、抗cdl6抗體、抗cd8抗體、抗cdl9抗體、抗cd5抗體、抗cd7抗體、抗cdl3抗體、抗cd33抗體、抗cdlO抗體、抗cd21抗體、抗cd22抗體、抗cd23抗體、抗cd32抗體、抗cd35抗體、抗40cd抗體、抗cd45抗體、抗cd54抗體、抗cd56抗體、抗cd64抗體、抗cdl33抗體、抗cdll7抗體、抗cd90抗體)、抗馬立克氏病毒抗體、抗HBS抗體、抗豬瘟病毒抗體、抗副溶血性弧菌抗體、抗傷寒抗體等。
[0023]Spa以無菌PBS液稀釋，將A抗體(抗紅細胞單克隆抗體或多克隆抗體)和B抗體以抗體稀釋液稀釋，各種稀釋濃度均可(推薦spa為0.lmg/ml,抗體濃度:0.lmg/ml稀釋)。
[0024]原料質量配比為:SPA:A抗:B抗為1.5:1:1 ;如:SPA為1.5ml，A抗為lml，B抗為Imlo (濃度均為 0.lmg/ml)
[0025]反應溫度OC?40°C等均可，推薦37°C溫育(水浴或溫箱均可)。
[0026]反應時間:20分鐘-2小時，推薦37°C溫育30分鐘。
[0027]產物濃度:0.lmg/ml。
[0028]貯存條件:4°C貯存。
[0029]該三聚體可以用於從人類骨髓和臍帶血中分離有核細胞的體外分離試劑盒等，該技術具有方法簡單，造價低廉，可以工業化生產，易於推廣的特點。該技術有效的去除了血漿、紅細胞、血小板、血漿蛋白、離子，以及其他所需要去除德成熟的單核細胞、淋巴細胞、多核細胞，而保留了所有的幹細胞、祖細胞、間充質幹細胞等。這是一種可以直接用於臨床分離、提取幹細胞的骨髓/臍帶/外周血幹細胞體外分離試劑盒的應用方法。
[0030]2、細胞處理試劑盒:基於上述三聚體，結合淋巴細胞分離液，抗體結合的層析板，採用密度梯度離心法、免疫層析法及免疫共沉澱法相結合的方法，製作細胞處理試劑盒。其特徵在於該試劑盒中包含有:
[0031]SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、特異性淋巴細胞抗體的三聚體。SPA和抗紅細胞單克隆抗體和各種抗淋巴細胞抗體的反應濃度均為0.1?lmg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細胞單克隆抗體為lml，抗淋巴細胞抗體為lml。37°C水浴箱內溫育30?60分鐘。調整Spa-抗體三聚體濃度為I U g/ml，體積為100ml，PH7.4。4°C保存。
[0032]淋巴細胞分離液(市售)50ml。
[0033]抗體結合的層析板:聚苯乙烯材料的層析板，消毒滅菌後加入抗特異性淋巴細胞抗體0.1?lmg/ml，鋪滿表面即可，37°C反應30?60分鐘，4°C保存。
[0034]上述各試劑溶液分開存放。
[0035]本發明採用密度梯度離心法、免疫層析法及免疫沉澱法相結合的方法，所收集提取的幹細胞/祖細胞無任何外來的標記物。可以根據不同的要求去除了不同的成熟淋巴細胞系，方便簡單，可直接用於臨床、實驗室分離、提取幹細胞/祖細胞。
[0036]3、Spa-抗體的應用範圍:
[0037]用於臨床診斷作為指示劑，當某種疾病患者血液中出現特殊抗原或外來抗原，將該抗原的特異性抗體連接在Spa-抗體三聚體上，使紅細胞作為指示劑，凝聚形成「紅細胞一抗紅細胞抗體一Spa—特異性抗體一特異性抗原」複合物，類似花環樣結構，可以肉眼觀察到凝聚物或顯微鏡觀察到花環結構，作為臨床或實驗室診斷使用。
[0038]可通過Spa-抗體和特異性抗體結合，形成「紅細胞一抗紅細胞抗體一Spa—特異性抗體」複合物，通過離心等方法使特異性抗體和紅細胞結合後去除。可去除患者或實驗用血液中特異抗體。
[0039]可用於臨床幹細胞/祖細胞的提取和純化試劑盒中，用以提純幹細胞/祖細胞，增加幹細胞/祖細胞濃度，提高療效。具體步驟:將特異性的成熟細胞系的抗體連接到Spa-抗體上,形成「紅細胞一抗紅細胞抗體一 Spa—淋巴細胞抗體一成熟淋巴細胞」，通過離心等方法去除成熟淋巴細胞系等，使幹細胞/祖細胞得到純化，提高濃度，可用於相應的幹細胞/祖細胞的臨床治療和實驗研究中。
[0040]4、細胞處理試劑盒的應用範圍:
[0041]細胞處理試劑盒可用於骨髓血/臍帶血/外周血的幹細胞/祖細胞的提取和純化，具體應用方法為:首先將外周血、骨髓或臍帶血加入放有層析板的試劑瓶中，再將SPA-抗體三聚體液倒入其中，靜置20分鐘後收取上清液，將上清液小心的加入到淋巴細胞分離液上面，後離心20?30分鐘，收取細胞層，用注射用葡萄糖鹽水稀釋即可使用。
[0042]該細胞處理試劑盒也可用於臨床幹細胞治療，自體骨髓血回輸等治療；也可用於實驗中，操作簡單，費用低，並可通過去除相應的血液成分，用於研究不同成熟細胞系及其他細胞/細胞因子等成分對幹細胞/祖細胞的生長和分化的影響。
【具體實施方式】:
[0043]下述實施例將有助於進一步理解本發明，但不能限制本發明的內容。
[0044]實施例1:細胞處理試劑盒
[0045]1、SPA(葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、特異性淋巴細胞抗體的三聚體。該三聚體製備過程:SPA和抗紅細胞單克隆抗體和抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體的反應濃度均為0.lmg/mlo SPA為1.5ml,抗紅細胞單克隆抗體為lml,抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體各為0.25ml。37°C水浴箱內溫育30分鐘。加入PBS液，調整Spa-抗體三聚體濃度為I u g/ml，體積為100ml, PH7.4。4°C保存。
[0046]2、人淋巴細胞分離液(市售)100ml，離心密度為1.077g/ml。
[0047]3、細胞層析板:聚苯乙烯材料的層析板,消毒滅菌後加入濃度為0.lmg/ml抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體，鋪滿表面即可，37°C反應30分鐘後室溫下過夜，置在500ml試劑瓶內。4°C保存。
[0048]所用材料通過過濾除菌，材料經過120攝氏度，30分鐘高溫高壓滅菌，試劑經過濾除圃，無圃操作製備後，分別存放在試劑盒中。
[0049]細胞處理試劑盒應用方法:取外周血、骨髓或臍帶血200ml，加入到放有層析板的試劑瓶中，再加50mlSPA-抗體三聚體混勻後37度靜置30分鐘，該三聚體分別和白細胞、紅細胞結合，形成細胞團，沉澱到試管底部。部分未結合的成熟的細胞系和層析板上的抗體結合形成抗原抗體複合物。收集上清液。將淋巴細胞分離液加到離心管中，再把上面收集的上清液小心加到淋巴細胞分離液上面，700g離心20分鐘，將殘存的紅細胞、血小板、血漿以及未沉澱的白細胞紅細胞聚合體利用密度梯度離心法除去，收取細胞層，用磷酸緩衝液(PBS)清洗2-3次，然後用注射用生理鹽水/葡萄糖鹽水稀釋備用。
[0050]所製備的細胞可用於臨床自身骨髓血幹細胞治療，將經上述過程提取的幹細胞/祖細胞稀釋後經血管介入注射到肝硬化病人的肝臟內治療肝硬化。可將提取後的自身骨髓血幹細胞或臍帶血幹細胞注射到糖尿病足患者的下肢血管周圍以及注射到狹窄或閉塞動脈的遠端，治療糖尿病足。也可將提取純化後的自身骨髓血幹細胞或臍帶血幹細胞注射到急性脊髓損傷患者的脊髓斷傷處，治療急性脊髓橫斷。也可用於其它細胞損傷性疾病。
[0051]實施例2:細胞處理試劑盒[0052]1、SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、特異性淋巴細胞抗體的三聚體。該三聚體製備過程:SPA和抗紅細胞單克隆抗體和抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體的反應濃度均為0.lmg/mlo SPA為1.5ml,抗紅細胞單克隆抗體為lml,抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體為0.25ml。37°C水浴箱內溫育30分鐘。加入PBS液，使Spa-抗體三聚體濃度為I u g/ml，體積為100ml, PH7.4。4°C保存。
[0053]2、淋巴細胞分離液100ml:0.3%的泛影酸鈉和8%的聚蔗糖400#組成的水溶液，密度為 1.077g/ml。
[0054]3、抗體結合物:將抗cd3抗體、cdl4抗體、cdl9抗體、cd56抗體和聚苯乙烯材料的納米顆粒混合。抗體濃度為0.lmg/ml,體積為lml,聚苯乙烯顆粒為10mg。37°C水浴箱內溫育I小時後室溫過夜。4°C保存。
[0055]所用材料通過過濾除菌，材料經過120攝氏度，30分鐘高溫高壓滅菌，試劑經過濾除圃，無圃操作製備後，分別存放在試劑盒中。
[0056]細胞處理試劑盒應用方法:取骨髓或臍帶血200ml加入含抗體結合物的試劑瓶中，再加50mlSPA-抗體三聚體混勻後37°C靜置30分鐘，該三聚體分別和白細胞、紅細胞結合，形成細胞團，沉澱到試管底部。部分未結合的成熟白細胞和抗體結合物上的抗體結合形成小顆粒懸浮。收集上清液。將淋巴細胞分離液加到離心管中，再把上面收集的細胞懸浮液小心加到淋巴細胞分離液上面，2000轉/分離心20分鐘，將殘存的紅細胞、血小板、血漿和抗體結合物利用密度梯度離心法除去，收取細胞層，用磷酸緩衝液(PBS)清洗2-3次，然後用注射用生理鹽水/葡萄糖鹽水稀釋後備用。
[0057]使用本試劑盒製備的細胞可用於臨床自身骨髓血幹細胞治療，將經上述過程提取的幹細胞/祖細胞稀釋後經血管介入注射到肝硬化病人的肝臟內治療肝硬化。可將提取後的自身骨髓血幹細胞或臍帶血幹細胞注射到糖尿病足患者的下肢血管周圍以及注射到狹窄或閉塞動脈的遠端，治療糖尿病足。也可將提取純化後的自身骨髓血幹細胞或臍帶血幹細胞注射到急性脊髓損傷患者的脊髓斷傷處，治療急性脊髓橫斷。也可用於其它細胞損傷性疾病。
[0058]實施例3: Spa-抗體
[0059]雞馬立克氏病(MD)是由馬立克氏病毒引起的一種高度接觸傳染的淋巴細胞增生性疾病。其主要特徵是:周圍神經、各種臟器、虹膜和皮膚等發生淋巴細胞浸潤和形成腫病。馬立克氏病主要發生於雞，也有發生於火雞、野雞、鴨、鵪鶉、天鵝等禽類的報導。該病傳染性強，傳播速度快，潛伏期長。急性發病雞淘汰及死亡率達10%?80%。迄今為止，在馬立克氏病的診斷上，除AGPT外，尚沒有一種能在基層便於應用的實用技術。
[0060]SPA(葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、抗馬立克氏病毒抗體的三聚體。該三聚體製備過程:SPA和抗紅細胞單克隆抗體和抗馬立克氏病毒抗體的反應濃度均為0.lmg/ml o SPA為1.5ml，抗紅細胞單克隆抗體為1ml，抗馬立克氏病毒抗體lml。37°C水浴箱內溫育60分鐘。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0061]使用時，該三聚體稀釋到1:1000工作濃度，即0.1 ii g/ml，取血樣，加入三聚體後37°C水浴箱內溫育I小時，取樣本在顯微鏡下觀察，以生理鹽水作為對照，有聚集現象者為陽性，即感染了馬立克氏病毒。
[0062]實施例4: Spa-抗體[0063]豬瘟(SwnieFever，SF)是豬的一種高度接觸性傳染病。是由豬瘟病毒(ClassiealffSnieFeverviurs, CSFV)引起的豬的一種急性、亞急性、慢性及典型、非典型的疾病過程，是危害養豬業的主要傳染病之一。
[0064]SPA(葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、抗豬瘟病毒抗體的三聚體。該三聚體製備過程:SPA和抗紅細胞單克隆抗體和抗豬瘟病毒抗體的反應濃度均為0.lmg/mKSPA為1.5ml,抗紅細胞單克隆抗體為lml，抗豬瘟病毒抗體lml。40°C水浴箱內溫育60分鐘。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0065]使用時，該三聚體稀釋到0.1 U g/ml，取血樣，加入三聚體後37°C水浴箱內溫育I小時，取樣本在顯微鏡下觀察，以生理鹽水作為對照，有聚集現象者為陽性，即該血樣感染了豬瘟病毒。
[0066]實施例5: Spa-抗體
[0067]副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus, VP)是海洋和鹽湖中分布廣泛的一種嗜鹽性病原菌。廣泛分布在近海岸的海水、海底沉積物、魚類、貝類中，適應於高濃度(6%)食鹽的環境中生長，在不含食鹽的培養基中不能生長。該菌是亞於霍亂弧菌的一種常見腸道致病菌，其汙染會給海水養殖業帶來嚴重損失，還會引起人類腹瀉等腸道疾病及食物中毒，出現腹瀉呈水樣或血樣便、腹部痙攣、噁心、嘔吐和頭痛等症狀。自2001年以來，副溶血性弧菌性食物中毒爆發已經成為中國最常見的食源性疾患，副溶血性弧菌性食物中毒的起數和人數一直處於第一位。
[0068]SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、抗副溶血性弧菌多克隆抗體的三聚體。該三聚體製備過程=SPA和抗紅細胞單克隆抗體和抗副溶血性弧菌多克隆抗體的反應濃度均為0.lmg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細胞單克隆抗體為1ml，抗副溶血性弧菌多克隆抗體lml。12°C水浴箱內溫育6小時。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0069]使用時，該三聚體稀釋0.1 U g/ml，取待測血樣，加入三聚體後37°C水浴箱內溫育I小時，取樣本在顯微鏡下觀察，以生理鹽水作為對照，有聚集現象者為陽性，即該血樣感染了副溶血性弧菌。
[0070]實施例6: Spa-抗體
[0071]傷寒是由傷寒桿菌引起的經消化道傳播的急性傳染病。臨床特徵為長程發熱、全身中毒症狀、相對緩脈、肝脾腫大、玫瑰疹及白細胞減少等。主要併發症為腸出血、腸穿孔。
[0072]SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、抗傷寒抗體的三聚體。該三聚體製備過程:SPA和抗紅細胞單克隆抗體和抗傷寒抗體的反應濃度均為0.lmg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細胞單克隆抗體為lml，抗傷寒抗體lml。30°C水浴箱內溫育90分鐘。Spa-抗體三聚體濃度為 0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0073]使用時，該三聚體稀釋到0.1 U g/ml，取血樣，加入三聚體後37°C水浴箱內溫育I小時，取樣本在顯微鏡下觀察，以生理鹽水作為對照，有聚集現象者為陽性，即感染了傷寒。
[0074]實施例7: Spa-抗體
[0075]將spa和抗紅細胞單克隆/多克隆抗體以及不同的淋巴細胞抗體結合，可用來檢測血液中淋巴細胞亞群的比例，幫助判定患者的免疫功能。
[0076]SPA(葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、待測淋巴細胞亞群的抗體(如抗cd2抗體、抗cd3抗體、抗cd4抗體、抗cdll抗體、抗cdl5抗體、抗cdl6抗體、抗cd8抗體、抗cdl9抗體、抗cd5抗體、抗cd7抗體、抗cdl3抗體、抗cd33抗體、抗cdlO抗體、抗cd21抗體、抗cd22抗體、抗cd23抗體、抗cd32抗體、抗cd35抗體、抗40cd抗體、抗cd45抗體、抗cd54抗體、抗cd56抗體、抗cd64抗體、抗cdl33抗體、抗cdll7抗體、抗cd90抗體等)的三聚體。該三聚體製備過程=SPA和抗紅細胞單克隆抗體和待測淋巴細胞抗體的反應濃度均為0.1mg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細胞單克隆抗體為lml，待測淋巴細胞抗體lml。37°C水浴箱內溫育60分鐘。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0077]使用時，將該三聚體稀釋到1:1000工作濃度，即0.1μ g/ml，取血樣，加入三聚體後37°C水浴箱內溫育45分鐘，肉眼可看到凝集現象，取樣本在顯微鏡下觀察，觀測聚集顆粒即花環樣結構，三個紅細胞圍繞的為陽性，計數陽性細胞數，和標準血樣結果(陽性對照)比較。
[0078]實施例8: Spa-抗體
[0079]將spa和抗紅細胞單克隆/多克隆抗體以及待測的特殊細胞抗體結合，可用來檢測血液中待測細胞的存在與否。
[0080]SPA(葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、待測特殊細胞的抗體的三聚體。該三聚體製備過程:SPA和抗紅細胞單克隆抗體和待測特殊細胞抗體的反應濃度均為0.lmg/ml。SPA為
1.5ml，抗紅細胞單克隆抗體為1ml，待測特殊細胞抗體lml。4°C冰箱靜置12小時。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0081]使用時，將該三聚體稀釋到1:1000工作濃度，即0.1 μ g/ml，取血樣，加入三聚體後37°C水浴箱內溫育I小時，肉眼可看到凝集現象，取樣本在顯微鏡下觀察，觀測聚集顆粒即花環樣結構，三個紅細胞圍繞的為陽性，計數陽性細胞數，和標準血樣結果(陽性對照)比較。
[0082]Spa-抗體實施例9:
[0083]將spa和抗紅細胞單克隆/多克隆抗體以及待測腫瘤相關抗原的抗體結合，可用來檢測血液中待測腫瘤相關抗原的存在與否。
[0084]SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、待測腫瘤相關抗原的抗體的三聚體。該三聚體製備過程=SPA和抗紅細胞單克隆抗體和待測腫瘤相關抗原的抗體的反應濃度均為
0.lmg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細胞單克隆抗體為1ml，待測腫瘤相關抗原的抗體lml。20°C冰箱靜置3小時。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。
[0085]使用時，將該三聚體稀釋到1:1000工作濃度，即0.1 μ g/ml，取血樣，加入三聚體後37°C水浴箱內溫育I小時，肉眼可看到凝集現象，取樣本在顯微鏡下觀察，觀測聚集顆粒即花環樣結構，三個紅細胞圍繞的為陽性，計數陽性細胞數，和標準血樣結果(陽性對照)比較。
[0086]Spa-抗體實施例10:
[0087]將spa和抗紅細胞單克隆/多克隆抗體以及待測的細胞因子抗體結合，可用來檢測血液中特殊細胞因子的存在與否。
[0088]SPA (葡萄球菌蛋白A)和紅細胞抗體、待測細胞因子的抗體的三聚體。該三聚體製備過程:SPA和抗紅細胞單克隆抗體和待測細胞因子抗體的反應濃度均為0.lmg/ml。SPA為1.5ml，抗紅細胞單克隆抗體為1ml，待細胞因子抗體lml。25°C冰箱靜置2小時。Spa-抗體三聚體濃度為0.lmg/ml, PH7.4。4°C保存。[0089]使用時，將該三聚體稀釋到1:1000工作濃度，即0.1 μ g/ml，取血樣，加入三聚體後37°C水浴箱內溫育I小時，肉眼可看到凝集現象，取樣本在顯微鏡下觀察，觀測聚集顆粒即花環樣結構，三個紅細胞圍繞的為陽性，計數陽性細胞數，和標準血樣結果(陽性對照)比較。
【權利要求】
1.一種葡萄球菌A蛋白-抗體三聚體的用途，其特徵在於:用於作為檢驗血液抗原的指示劑；所述三聚體為葡萄球菌A蛋白同抗體A、抗體B的結合,所述抗體A為抗紅細胞單克隆抗體或多克隆抗體，所述抗體B為待測單克隆抗體或多克隆抗體。
2.如權利要求1所述的用途，其特徵在於:用於作為檢驗血液抗原的指示劑時，是通過以下步驟實現:將該待測抗原的特異性抗體連接在葡萄球菌A蛋白-抗體三聚體上，使紅細胞作為指示劑，凝聚形成「紅細胞一抗紅細胞抗體一葡萄球菌A蛋白一特異性抗體一特異性抗原」複合物，肉眼觀察到凝聚物或顯微鏡觀察到花環結構。
3.如權利要求1所述的用途，其特徵在於:所述的葡萄球菌A蛋白-抗體三聚體由下述製備方法獲得:將葡萄球菌A蛋白以無菌磷酸緩衝液稀釋，將A抗體和B抗體以抗體稀釋液稀釋，在0°C或4?40°C溫度下，溫育20分鐘-12小時，得到所述葡萄球菌A蛋白-抗體三聚體，其中，所述葡萄球菌A蛋白、A抗體和B抗體的質量比為1.5:1:1 ;所述三聚體為葡萄球菌A蛋白同抗體A、抗體B的結合，所述抗體A為抗紅細胞單克隆抗體或多克隆抗體，所述抗體B為待測單克隆抗體或多克隆抗體。
4.如權利要求1或3所述的用途，其特徵在於:所述抗體B為特異性淋巴細胞抗體、抗馬立克氏病毒抗體、抗HBS抗體、抗豬瘟病毒抗體、抗副溶血性弧菌抗體、抗傷寒抗體中任一抗體。
5.如權利要求4所述的用途，其特徵在於:所述特異性淋巴細胞抗體為抗cd2抗體、抗cd3抗體、抗cd4抗體、抗cdll抗體、抗cdl5抗體、抗cdl6抗體、抗cd8抗體、抗cdl9抗體、抗cd5抗體、抗cd7抗體、抗cdl3抗體、抗cd33抗體、抗cdlO抗體、抗cd21抗體、抗cd22抗體、抗cd23抗體、抗cd32抗體、抗cd35抗體、抗40cd抗體、抗cd45抗體、抗cd54抗體、抗cd56抗體、抗cd64抗體、抗cdl33抗體、抗cdll7抗體、抗cd90抗體中的一種或多種的組合。
【文檔編號】G01N33/68GK103616516SQ201310223301
【公開日】2014年3月5日 申請日期:2010年1月13日 優先權日:2010年1月13日
【發明者】張厚亮 申請人:王信