黑線倉鼠dna序列的製作方法
2023-09-19 04:48:20 2
黑線倉鼠dna序列的製作方法
【專利摘要】本發明公開了黑線倉鼠的DNA序列。本發明為了提供一種快速鑑定黑線倉鼠的方法，通過形態特徵的鑑定方法對該鼠種進行了鑑定，並獲取了該種的COI基因序列。本發明還提供一種用於檢測黑線倉鼠的DNA標準基因、其引物及其試劑盒。本發明採用傳統的形態學鑑定與分子分類方法相結合，對所述黑線倉鼠進行鑑定，可確保物種鑑定的準確性和可靠性。
【專利說明】黑線倉鼠DNA序列
【技術領域】
[0001]本發明涉及黑線倉鼠，具體涉及黑線倉鼠的DNA序列。
【背景技術】
[0002]黑線倉鼠(Cricetulus Barabensis)隸屬於倉鼠科(Cricetidae),倉鼠亞科，倉鼠屬(Cricetulus)。黑線倉鼠又名搬倉、小倉鼠、腮鼠、紋背倉鼠。國外主要分布於蒙古、俄羅斯；國內主要分布於河北、山西、內蒙古、黑龍江、吉林、遼寧、山東、江蘇、安徽、河南、湖南、湖北、陝西、寧夏、甘肅等地。黑線倉鼠可以傳播鼠疫、鉤端螺旋體病和蜱傳斑疹傷寒等疾病。同時黑線倉鼠也已在細胞遺傳學、輻射遺傳學、實驗腫瘤和分子生物學等許多領域廣泛使用。
[0003]長期以來，對鼠類的鑑定主要依靠形態學特徵來實現，但近幾年，隨著DNA測序等技術的進步，人們陸續採用分子生物學方法對鼠類的DNA進行研究，以期建立新的分類方法，與傳統分類方法相互作證。
[0004]線粒體COI基因是鼠類鑑定研究中應用最為廣泛的分子標記，就目前而言，鼠類分子鑑定研究在國內研究較少，本發明意在提供一種快速鑑定黑線倉鼠的科學依據。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在於提供黑線倉鼠的DNA序列。其DNA序列的獲得，可為該種的快速鑑定提供科學依據。
[0006]為實現上述目的，本發明通過如下技術方案實現:
[0007]對黑河地區的黑線倉鼠分別用試劑盒提取其DNA序列，然後由合成的引物擴增其黑線倉鼠的COI基因，PCR產物序列送由專業生物公司測定。測序結果通過手工校對，並用Mega4.0軟體進行相似性分析，確保所得序列為目標序列。所述黑線倉鼠的COI基因序列如SEQ ID No:1 所示。
[0008]本發明提供一種用於檢測黑線倉鼠的DNA標準基因，其特徵在於該基因為COI基因，具有如SEQ ID NO:1所不的基因序列。
[0009]本發明還提供一種檢測黑線倉鼠的DNA標準基因的引物，其特徵在於該引物序列為:
[0010]正向引物5 』 ACTTCTGGGTGTCCAAAGAATCA3 』 ；
[0011]反向引物5 』 CCTACTCRGCCATTTTACCTATG3 』。
[0012]本發明還提供一種用於檢測黑線倉鼠的試劑盒，其特徵在於包括上述的引物。
[0013]本發明還提供一種黑線倉鼠的分子鑑定方法，包括:
[0014]I)從待測的鼠類肝臟中分離提取DNA ；
[0015]2)以該DNA為模板，採用上述引物進行擴增；
[0016]3)鑑定擴增所得序列，如果該序列與SEQ ID NO:1的同源性在98%以上，即可判斷所測田鼠為黑線倉鼠。[0017]本發明還提供一種黑線倉鼠的分子鑑定方法，其中步驟2)中:
[0018]採用聚合酶鏈式反應擴增模板。
[0019]本發明還提供一種黑線倉鼠的分子鑑定方法，其中步驟3)中:
[0020]所述鑑定包括取適量步驟2)擴增出的產物用瓊脂糖電泳分離，經染色劑Goldview染色後於凝膠成像系統檢測，根據擴增產物的大小判定結果，如果能特異性擴增出750bp左右的條帶，則進行測序分析。
[0021]本發明還提供一種黑線倉鼠的分子鑑定方法，其中擴增體系為:
[0022]
【權利要求】
1.一種用於檢測黑線倉鼠的DNA標準基因，其特徵在於該基因為COI基因，具有如SEQID NO:1所不的基因序列。
2.一種檢測權利要求1所述基因的引物，其特徵在於該引物序列為: 正向引物 5』 ACTTCTGGGTGTCCAAAGAATCA3』 ； 反向引物 5』 CCTACTCRGCCATTTTACCTATG3』。
3.一種用於檢測黑線倉鼠的試劑盒，其特徵在於包括權利要求2所述的引物。
4.黑線倉鼠的分子鑑定方法，包括: O從待測的鼠類肝臟中分離提取DNA ； 2)以該DNA為模板，採用權利要求2所述引物進行擴增； 3)鑑定擴增所得序列，如果該序列與SEQID NO:1的同源性在98%以上，即可判斷所測田鼠為黑線倉鼠。
5.權利要求4所述的分子鑑定方法，其中步驟2)中: 採用聚合酶鏈式反應擴增模板。
6.權利要求4或5所述的分子鑑定方法，其中步驟3)中: 所述鑑定包括取適量步驟2)擴增出的產物用瓊脂糖電泳分離，經染色劑Goldview染色後於凝膠成像系統檢測，根據擴增產物的大小判定結果，如果能特異性擴增出750bp左右的條帶，則進行測序分析。`
7.權利要求4或5所述的分子鑑定方法，其中擴增體系為:
8.權利要求4或5所述的分子鑑定方法，其中擴增反應程序為: 預變性94°C 5min，35個循環，其中變性94°C 30s、退火55°C 40s、延伸72°C 60s，最後延伸 72°C IOmin0
9.權利要求5所述的分子鑑定方法，其中: 取5μ L PCR擴增產物，用1%瓊脂糖凝膠電泳，130V電壓，電泳35min，染色劑Goldview染色，凝膠成像系統檢測。
10.一種快速鑑定黑線倉鼠的方法，其特徵在於: 採用傳統的形態學鑑定與權利要求4-9任一項所述的分子鑑定方法相結合。
【文檔編號】C12N15/12GK103695547SQ201310701607
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月18日 優先權日:2013年12月18日
【發明者】張曉龍, 曹曉梅, 張玲, 王靜, 李明, 喬舜, 王海玲, 劉潤吉 申請人:中國檢驗檢疫科學研究院