蟾酥在製備用於抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的應用的製作方法
2023-12-09 20:06:06 4
專利名稱：蟾酥在製備用於抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於中醫中藥領域，具體涉及蟾酥在製備用於抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的應用。
背景技術：
化學基因組學(Chemical Genomics或Chemogenomics)作為後基因組學時代的新技術，是基因組學與藥物發現之間的橋梁和紐帶，將成為功能基因組學研究的有力工具。化學基因組學技術整合了組合化學、基因組學、蛋白質組學、分子生物學、藥物學等領域的相關技術，採用具有生物活性的化學小分子配體作為探針，研究與人類疾病密切相關的基因、 蛋白質的生物功能，同時為新藥開發提供具有高親和性的藥物先導化合物，是後基因組學時代藥物發現的新模式，將極大加快製藥工業的發展。化學基因組學藥物發現模式的一般程序包括靶點發現、高通量篩選、組合化學合成、生物學功能測試等。代謝物組學(metabonomics)作為繼基因組學後新發展起來的一門系統科學。主要研究生物體受外界刺激或擾動後，所有低分子量的代謝產物隨時空變化的情況，從而探明生物體系代謝途徑的一種研究方法。代謝物組學近年來發展十分迅速，在植物學、毒理學、臨床診斷、藥物開發、營養科學等研究領域都已有出色的成果取得。代謝物組學作為一種新的組學研究技術，大大豐富了系統生物學的研究內容，成為生命科學研究的一種具有最前景的方法之一基於複雜疾病對於用藥的要求，複方藥物則顯得具有較大的優勢。複方藥物長期以來以其多成分、多靶點以及副作用小的作用特點受到了越來越多的重視。但是由於複方成分複雜，其藥效組分及作用靶點一直是複方藥物走向世界市場的瓶頸。麝香保心丸是在宋代著名方書《太平惠明和劑局方》蘇合香丸的基礎上研製開發的，是中國醫藥傳統的精髓與現代科學技術相結合的結晶。從方劑組成看，它由麝香、冰片、 蘇合香、人參、蟾酥、肉桂、牛黃7味藥組成。麝香保心丸遵循了君臣佐使的組方原則，特點為寒溫並用，以溫為主；通補兼施，以補為輔；不僅能芳香溫通快速緩解胸悶胸痛心絞痛症狀，同時增加人參扶正，益氣強心，避免了活血化淤藥久服破氣的弊端，適合長期服用。麝香保心丸中的蟾酥，含有幾十種脂溶性活性和毒性成分(統稱蟾蜍毒素)，蟾蜍毒素既是蟾酥的有效成分又是毒性成分，過量用藥將會表現出急性的毒性，損害心臟組織。目前，對麝香保心丸毒副作用的研究甚少。為了使該中藥複方能夠更好的在臨床上應用，對它的毒副作用進行科學研究，闡明複方配伍減毒的必要性和科學性等等，顯得十分重要。麝香保心丸(國藥準字D1020068)主要含麝香、人參提取物、人工牛黃、肉桂、蘇合香、蟾酥、冰片。麝香保心丸是芳香溫通類治療胸痺(冠心病、心絞痛)的代表複方中藥藥物，因其療效確切、安全方便、價格經濟，而成為治療冠心病、心絞痛的常用藥物之一。據統計，麝香保心丸在芳香溫通類治療胸痺的中藥中穩居第一，是唯一在全國擁有較高知名度的獨家傳統中藥大品種。
發明內容
本發明的目的是研究蟾酥的毒副作用，通過該研究可以合理調節麝香保心丸中蟾酥的量，從而可以很好地治療或預防心臟疾病。本發明提供了蟾酥在製備用於抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的應用。本發明通過蟾酥抑制油酸和亞油酸的生物合成，可以合理調節藥物中蟾酥的含量，從而更好地治療或預防心臟疾病。優選地，所述蟾酥的含量以華蟾酥毒基(C26H34O6)和脂蟾毒配基(C24H32O4)的總量計為 18-56 μ g。優選地，所述藥物為口服劑型或注射劑型。優選地，所述口服劑型為片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑或口服液；所述注射劑型為水針劑或粉針劑。心臟的生理功能活動需要持續的能量供給，心肌的能源來自血液中的營養物質， 通過氧化磷酸化產生高能磷酸鍵，心肌高能磷酸化合物(ATP)是心肌細胞進行生命活動的直接能源供給者，心臟能量的產生、儲存或利用一旦發生障礙，其收縮與舒張功能必將受損。通過對這些潛在生物標誌物的生理意義和代謝途徑進行分析，我們推斷有兩種可能的機制是造成心肌磷脂含量降低和花生四烯酸(AA)升高的原因。自由脂肪酸(FFA)再醯化障礙磷脂代謝存在脫醯化和再醯化過程，即在磷脂酶的作用下，磷脂水解成FFA與溶血磷脂，經過醯基輔酶A合成酶(CoAQ的作用，在FFA再醯化， 與溶血磷脂再合成磷脂。此循環的任一環節都可導致磷脂代謝紊亂。研究者發現，新生鼠離體心肌細胞釋放花生四烯酸(AA)的量與培養液中高能磷酸化合物(ATP)減少的程度有關，當ATP減少75%以上時，AA釋放明顯增加，他們認為AA釋放增加是繼發於ATP減少的結果。蟾酥中的毒性成分可引起各器官組織的微小血管劇烈收縮，導致組織缺血缺氧，因而推測心肌缺血時ATP嚴重減少導致CoAS活性降低，使FFA再醯化受阻，這可能是磷脂含量減少的重要原因。蛋白激酶(Protein kinase C，PKC)通路的活化PKC廣泛存在於人體的各種組織細胞中，是細胞內一組重要的蛋白激酶。研究發現，PKC通路的活化能引起磷脂酶A2(PLA2) 活性的增強，PLA2是體內重要的磷脂酶，它能催化磷脂裂解，產生游離的AA。在正常情況下，體內的AA主要是以脂肪醯基的形式儲存在質膜磷脂中，尤其是在磷脂醯膽鹼(PC)中， 而細胞中游離的AA濃度幾乎為零；當PKC通路被激活後，進一步活化了 PLA2，使得質膜磷脂的水解加快，磷脂含量降低，另一方面釋放產生的游離AA水平升高。此外，脂肪酸是心臟能量來源的主要物質，在本研究中，脂肪酸的代謝異常說明心肌的能量代謝發生了紊亂。通過對這些脂肪酸的生理意義和代謝途徑進行分析後發現，AA 和亞油酸(LA)是同屬於AA生物合成中的兩個代謝物，其中LA是AA生物合成的前體物質。 給藥後體內游離M的增多，可能會抑制作為其前體的LA的生成，致使其水平出現一定程度的下調。在本研究的蟾酥給藥組動物中，AA的代謝水平上調，而LA和OA的代謝水平都發生下調，說明蟾酥的毒副作用會抑制LA和油酸(OA)的生物合成。AA的代謝異常對心臟的正常功能有極大的影響，可致使心臟的收縮力下降，心輸出量減少，甚至可誘發或加重心肌梗塞和心絞痛。因此，可以通過改變蟾酥的量，來改變LA和OA的代謝水平，從而使AA代謝水平達到正常水平。本研究還發現麝香保心丸給藥組中，雖然各化合物的含量與正常組相比有所偏移，但與含等量蟾酥的蟾酥組相比，更接近正常對照組，這提示麝香保心丸中的某些成分，可通過增強機體抗脂質過氧化的能力，從而降低心肌損傷。研究表明，在心肌缺血(梗塞)狀態下，血清中FFA的含量升高，缺血時線粒體中高濃度的FFA也可直接或間接抑制丙酮酸的氧化，以高耗氧的方式為心肌提供能量，在某種程度上也加重了心肌缺氧。當血流完全阻斷時，氧化磷酸化合成ATP的過程停止，糖原酵解成為心肌細胞惟一的能量來源。在缺氧情況下仍以脂肪酸作為主要能量來源會對心肌產生不利的影響以高耗氧的方式供能會加重心肌缺氧；通過抑制抑制葡萄糖有氧氧化，降低ATP產生的效率，使細胞內乳酸和氫離子含量增加，pH值下降，抑制心肌收縮功能；脂肪酸中間代謝產物的蓄積影響細胞膜的屏障和轉運功能，導致生理性功能損害。改善心肌代謝要以促進糖代謝和抑制脂肪酸代謝為主。因此，通過給於適量蟾酥來抑制油酸和亞油酸的生成，可改善心肌細胞的缺氧狀態，從而起到治療心臟疾病的作用。
以下，結合附圖來詳細說明本發明的實施方案，其中圖1是蟾酥給藥不同劑量組和麝香保心丸組在0. 5,1. 0,1. 5,2. 0小時的心率變化
曲線；圖2是大鼠血清UPLC/T0F-MS代謝指紋譜圖；圖3蟾酥不同劑量給藥組與對照組的PLS-DA分析圖；圖4蟾酥低劑量組、麝香保心丸組與對照組的PLS-DA分析圖；圖5差異表達情況聚類圖，其中圖數字(1，2，；3)代表了三次生物學重複；灰色為與對照相比上調表達基因，白色代表與C Group相比下調表達基因；以及圖6差異表達基因涉及的生理過程；其中各數字代表含義如下
1 有機物質應答 Response to organic substance
2 免疫應答 Immune response
3 內源性刺激應答 Response to endogenous stimulus
4 離子穩態 Ion homeostasis
5 激素應激 Response to hormone stimulus
6 防禦反應 Defense response
7 陽離子穩態 Cation homeostasis
8 肌動蛋白構建Actin organization
9 蛋白核轉運，易 1 立 Protein import into nucleus, translocation
10血管發育 Blood vessel development
11:1 Hi.^rF^1 Collagen fibril organization
12 細胞凋亡和程序性死亡 Apoptosis and programmed cell death
13穩態進禾呈 Homeostatic process
14氧化還原 Oxidation reduction
15無機物應激 Response to inorganic substance
16糖代謝進禾呈 Glucose metabolic process
17 氧化應激 Response to oxidation stress18 鐵離子穩態 Iron ion homeostasis19 磷酸化作用 Phosphorylation20 -MfkWMM^ Regulation of cell proliferation21 :酶聯受體信號轉導通路 Enzyme linked receptor protein signaling pathway22 :細胞粘附調節 Regulation of cell adhesion23 :醇代謝進程 Alcohol catabolic process24 :細胞夕卜基質構建 Extracellular matrix organization25 抗凋亡調節 Regulation of anti-apoptosis26 IfiS^iIiill Regulation of cellular ketone metabolic process27 :胰島素樣生長受體信號轉導通路hsulin-like growth factor receptorsignaling pathway28 :細胞夕卜結構構建 Extracellular structure organization29 :細胞夕卜基質構建 Extracellular matrix organization30 血壓調節 Regulation of blood pressure31禾呈 Collagen biosynthetic process32 表皮發育 Skin morphogenesis33 :軟骨成骨作用 Endochondral ossification
具體實施例方式下面結合具體實施方式
對本發明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發明，而不是為了限制本發明的範圍。實施例11.動物實驗設計表1動物分組及給藥劑量
權利要求
1.蟾酥在製備用於抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的用途。
2.根據權利要求1所述的用途，其特徵在於，所述蟾酥的含量以華蟾酥毒基(C26H34O6) 和脂蟾毒配基(C24H32O4)的總量計為18-56 μ g。
3.根據權利要求1或2所述的用途，其特徵在於，所述藥物為口服劑型或注射劑型。
4.根據權利要求3所述的用途，其特徵在於，所述口服劑型為片劑、丸劑、膠囊、顆粒劑或口服液；所述注射劑型為水針劑或粉針劑。
全文摘要
本發明提供蟾酥在製備用於抑制油酸和亞油酸的生物合成的藥物中的應用。在本發明的蟾酥給藥組動物中，AA的代謝水平上調，而LA和OA的代謝水平都發生下調，說明蟾酥的毒副作用會抑制LA和OA的生物合成。AA的代謝異常對心臟的正常功能有極大的影響，可致使心臟的收縮力下降，心輸出量減少，甚至可誘發或加重心肌梗塞和心絞痛。本發明的通過蟾酥抑制油酸和亞油酸的生物合成，可以合理調節藥物中蟾酥的含量，從而更好地治療或預防心臟疾病。
文檔編號A61P9/00GK102552327SQ20101060879
公開日2012年7月11日 申請日期2010年12月28日 優先權日2010年12月28日
發明者王義明, 羅國安, 詹常森, 陳忠樑, 黃昕明 申請人:上海和黃藥業有限公司