一種檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法
2023-12-09 04:36:36
專利名稱：一種檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法
技術領域：
本發明屬唾液中檢測酒精領域，特別是涉及一種檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法。
背景技術：
酒精檢測的社會應用已很廣泛，而近年來，酒後引起的刑事案例和酒後駕車引起的交 通事故案例不斷上升。許多國家都制定了血液中酒精濃度與交通事故責任認定的關係，建 立了多種能夠檢測血液中酒精含量的方法。但在實際中，取血樣檢測酒精含量，總有衛生 安全隱患，因而更青睞於取唾液進行酒精檢測。目前，出現了很多便於攜帶的檢測試劑條，如公開號為CN1837821A和CN1904619A，它們都利用了以下，原理CH3CH2OH+02 CH3CHO+ H202H202+還原態TMB (無色)， > 氧化態TMB (藍色)+H20ALO:酒精氧化酶 HRP:辣根過氧化物酶 TMB: 3,3'5,5，-四甲基聯苯月安但對於高酒量人群，在酗酒以後，檢測結果會出現反而降低的現象，因此在執行交通 法規的檢測時，作為處罰的依據反而難以執行。 發明內容本發明的目的是提供一種檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法，該方法能改善上述 問題，清除測定高酒量人群中的抑制反應，使反應結果更準確。本發明的一種檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法，包括下列步驟(1) 濾紙在第一相浸液中浸泡後，吸去過多的浸液，20-30。C迅速溫熱乾燥，再在第二相 浸液中浸泡，20-3(TC再次千燥，得到測定試紙的原紙；(2) 用雙面膠將上述測定試紙的原紙粘貼在塑料片上，切割成小塊的測定試紙條。 所述的第一相浸液總體積為10mL的配製過程如下1) 配pH7.2的0.1 mol/L 2 mol/L Tris-丙二酸緩衝液或pH7.8的0.5 mol/L PB(磷酸鹽緩衝 液)；2) 溶入乙醇氧化酶，10mL緩衝液中含有10 200iu;3) 溶入辣根過氧化物酶，10mL緩衝液中含有200 5000iu;4) 溶入乙醛脫氫酶，10mL緩衝液中含有2 100iu， NAD+0.01-0.1g;5) 溶入穩定劑和保護劑，濃度0.1%~3% (g/100mL)。所述的穩定劑和保護劑是天然或人工聚合高分子膠體，是明膠、阿拉伯膠、牛血清白 蛋白、聚乙二醇、聚丙烯酸-丙烯酸酯中的一種或幾種混合物。所述的第二相浸液是採用3,3'5，5'-四甲基聯苯胺顯色劑，溶於有機溶劑，濃度為0. 2.~1.5% (g/100mL)。採用甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲垸、二氯乙烷或二甲基甲醯胺作為溶劑。 所述步驟(2)中的切割成小塊的測定試紙條是切割成含有0.4X0.4 0.6X0.6cm的小 塊的測定試紙條。 本發明的原理1. CH3CH2OH+02 CH3CHO+ H202 H202+還原態TMB (無色)腳 > 氧化態TMB (藍色)+H20CH3CHO 她一掘> CH3COOH2. CH3CHO+NAD+ 她—，> CH3COOH+NADHNADH+氯化硝基四氮唑蘭^^NAD++還原型氯化硝基四氮唑蘭(紅色)ALO:酒精氧化酶 HRP:辣根過氧化物酶 TMB: 3,3'5,5'-四甲基聯苯胺 Aldehyde-DH:乙醛脫氫酶 NAD+:輔酶I NADH:還原輔酶I本發明的有益效果1) 可以加速反應進程；2) 清除反應產物，有利於反應更完全；3) 當被測樣品中含有較高濃度乙醇時，可減少反應物和反應產物的幹擾；4) 有利於清除測定高酒量人群中的抑制反應，使反應結果更準確。5) 對於高酒量人群大酒量飲酒後產生的乙醛，通過酶催化顯色反應進行測定。
圖1是本發明的製備流程圖。圖2是酒精測定試劑條。圖3是酒精和酒精在體內代謝產物乙醛二項測定試劑條。
具體實施方式
下面結合具體實施例，進一歩闡述本發明。應理解，這些實施例僅用於說明本發明 而不用於限制本發明的範圍。此外應理解，在閱讀了本發明講授的內容之後，本領域技術 人員可以對本發明作各種改動或修改，這些等價形式同樣落於本申請所附權利要求書所限 定的範圍。實施例11. 配製第一相浸液在pH7.2的0.2mol/L Tris-丙二酸緩衝液lOmL中，溶解100iu的乙醇氧化酶，再加入 辣根過氧化物酶2500iu，攪拌均勻，充分溶解後，再加入乙醛脫氫酶100iu、 NAD+20mg、 20mg明膠(預溶)。2. 以3號whatman定量分析試紙浸溼均勻，取出，吸去多餘液體，在28。C下孵箱中吹乾。3. 配製第二相浸液稱取TMB 100mg，用10mL 二甲基甲醯胺溶解。將已乾燥的浸取第一相浸液的濾紙再次在第二相浸液中浸潤，迅速取出，在2(TC下孵箱 中吹乾。4. 將浸取後的乾燥濾紙用雙面膠粘貼在塑料卡片上，切成條狀，每條長度為8cm，頂部帶 有0.5X0.5cm的測定試紙塊。(圖2)實施例21. 在pH7.8的0.5 mol/L PB緩衝液10mL中，溶解200iu的乙醇氧化酶，再加入辣根過 氧化物酶1000iu，攪拌均勻，充分溶解後，再加入乙醛脫氫酶20iu、 NAD+10mg、終濃度 為3% (w/v)的BSA (牛血清白蛋白)。2. 以3號whatman定量分析試紙浸溼均勻，取出，吸去多餘液體，在28。C下孵箱中吹乾。3. 配製第二相浸液稱取TMB 1 OOmg，用1 OmL 二甲基甲醯胺溶解。將已乾燥的浸取第一相浸液的濾紙再次在第二相浸液中浸潤，迅速取出，在28"C下孵箱 中吹乾。將浸取後的乾燥濾紙用雙面膠粘貼在塑料卡片上，切成條狀，每條長度為8cm， 頂部帶有0.5X0.5cm的測定試紙塊。(圖2)實施例31. 配製乙醛測定試劑塊浸液在pH7. 2的0.2 mol/LTris-丙二酸緩衝液10mL中，溶解120iu乙酸脫氫酶、NAD+50mg、 黃遞酶60iu和氯化硝基四氮唑蘭200mg、牛血清白蛋白100mg。2. 以3號Whatman定量分析試紙浸溼均勻，取出，吸去多餘液體，在28'C下孵箱中吹乾。3. 將浸取後的乾燥原紙用雙面膠粘貼在塑料卡片上，作為第二測定塊，切成條狀。(圖3)
權利要求
1. 一種檢測唾液中酒精含量及其在體內代謝產物的試劑的製備方法，包括下列步驟(1)濾紙在第一相浸液中浸泡後，吸去過多的浸液，20-30℃迅速溫熱乾燥，再在第二相浸液中浸泡，20-30℃再次乾燥，得到測定試紙的原紙；(2)將上述測定試紙的原紙粘貼在塑料片上，切割成小塊的測定試紙條。
2. 根據權利要求1所述的檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法，其特徵在於，所述的 第一相浸液總體積為10mL的配製過程如下1) 酉己pH6.5-8.5的0.1mol/L 2mol/LTris-丙二酸緩衝液或pH7.2-8.0的0.5 mol/L磷酸鹽緩 衝液；2) 溶入乙醇氧化酶，lOmL緩衝液中含有10 500iu;3) 溶入辣根過氧化物酶，10mL緩衝液中含有500 10000iu;4) 溶入乙醛脫氫酶，10mL緩衝液中含有2 100iu， NAD+0.01-0.1g;5) 溶入穩定劑和保護劑，濃度0.1%~3% (g/100ml)。
3. 根據權利要求2所述的檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法，其特徵在於，所述的 穩定劑和保護劑是天然或人工聚合高分子膠體，是明膠、阿拉伯膠、牛血清白蛋白、聚乙 二醇、聚丙烯酸-丙烯酸酯中的一種或幾種混合物。
4. 根據權利要求1所述的檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法，其特徵在於，所述的 第二相浸液是3,3'5，5'-四甲基聯苯胺(TMB)顯色劑溶於有機溶劑，濃度為0.2% 1.5%(g/100ml)。
5. 根據權利要求4所述的檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法，其特徵在於，TMB被 溶解在甲苯、二甲苯、氯仿、二氯甲垸、二氯乙烷、二甲基甲醯胺中。
6. 根據權利要求1所述的檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法，其特徵在於，所述步 驟(2)中的切割成小塊的測定試紙條是切割成含有0.4X0.4 0.6X0.6cm的小塊的測定試 紙條。
7. 根據權利要求1所述的檢測唾液中酒精含量及其在體內代謝產物的試劑製備方法，其 特徵在於，所述的測定酒精代謝產物乙醛第一相浸液總體積為10mL的配製過程如下1) 配pH6.5-8.5的0.1mol/L~2 mol/L Tris-丙二酸緩衝液或pH7.2-8.0的0.5 mol/L磷酸鹽緩 衝液；2) 溶入乙醛脫氫酶，10mL緩衝液中含有20 200iu， NAD+0.01-0.1g;3) 溶入NAD黃遞酶10-100iu;4) 溶入氯化硝基四氮唑蘭0.01-0.5g;5)溶入穩定劑和保護劑，濃度0.1% 3% (g/100ml)。
8.根據權利要求7所述的檢測唾液中含有的酒精代謝產物乙醛測定試劑塊，被切割成含 有0.4X0.4-0.6X0.6cm的小塊，並列在測定試劑條上。
全文摘要
本發明涉及一種檢測唾液中酒精含量的試劑的製備方法，包括1)濾紙在第一相浸液中浸泡後，吸去過多的浸液，20-30℃迅速溫熱乾燥，再在第二相浸液中浸泡，20-30℃再次乾燥，得到測定試紙的原紙；2)將上述測定試紙的原紙粘貼在塑料片上，切割成小塊的測定試紙條。該方法可以加速反應進程；清除反應產物，有利於反應更完全；當被測樣品中含有較高濃度乙醇時，可減少反應物和反應產物的幹擾；有利於清除測定高酒量人群中的抑制反應；本方法還可以在一根測試條上，同時設置二個測試塊，使結果判斷更準確。
文檔編號G01N33/98GK101271120SQ200810036780
公開日2008年9月24日 申請日期2008年4月29日 優先權日2008年4月29日
發明者孫大尼, 王福進, 管利豐 申請人:上海高豐科技有限公司