從羅漢果植株中提取降血糖和抗糖尿病的活性組合物及其提取方法
2023-12-08 19:40:21 1
專利名稱：從羅漢果植株中提取降血糖和抗糖尿病的活性組合物及其提取方法
技術領域：
本發明涉及從天然物質提取生物活性成分，具體而言涉及從羅漢果植林 提取降血糖和抗糖尿病活性物質及方法。
背景技術：
羅漢果植抹為葫,科多年生宿根攀援藤本植物羅漢果(#OM i^/ CS
^TWM/7or/),羅漢果主要栽培在中國的廣西北部，在華南、貴州、江西以 及其它許多地區都有分布，已有300多年的種植、應用歷史，其果有"東方 神果"之稱。中醫藥學認為，羅漢果具有降血糖作用，可以用來輔助治療糖 尿病；含豐富的維生素C,有抗衰老、抗癌及益膚美容作用；有降血脂及減 肥作用，可輔助治療高脂血症，改善肥胖者的形象。對羅漢果果實的生物活 性研究報導中有關羅漢果苷V具有抗口腔微生物的活性，另有羅漢果苷的抗 腫瘤活性和有降血糖作用的文獻報導。羅漢果的果實通常是在秋末進行採 摘，與此同時，羅漢果植抹的藤就被欲掉，葉被丟棄，其根仍埋在土裡。迄 今為止，人們對於羅漢果的利用基本上只利用了其果實，例如中國專利申請 件200510055228.1號"一種添加了羅漢果提取物的甜味劑及其製備方法" 和200410103484. 9號"羅漢果袋泡茶"，而對羅漢果植林的非果實部分幾 乎沒有多少研究，其葉和藤也從未加以利用，對於其植抹非果實部分的生物 活性人們知之甚少，也沒有人從其中獲得任何有活性的提取物。 發明內容本發明的目的在於提供從羅漢果植林提取的具有降血糖和抗糖尿病活 性組合物。
本發明的另 一 目的是提供從羅漢果植抹提取具有降血糖和抗糖尿病活 性天然組合物的提取方法。
迄今為止，在對羅漢果的研究中，非果實部分及果實的具有降血糖作用 活性成分的研究尚屬於創新型的研究。發明人率先通過研究發現了羅漢果中 具有激發胰島素分泌、降血糖和抗糖尿病活性有效組分，從羅漢果全植抹， 即葉、藤、根、莖和果實中分離得到了具有很強的i膚胰島素分泌活性的有 效組分。經研究發現，上述活性組分不只是存在於人們已知的羅漢果香中， 而且還存在於羅漢果葉、藤、根、和莖中，活性在羅漢果葉、藤、根、莖和 果實提取物的中等極性部分，所述的活性主要表現在激發胰島素分泌而降低 血糖，提取的活性組分可用於藥物及功能性食品和飲料、保健品、日用品及 食品添加劑等，將會有很大的實用價值和經濟價值。
為了將這一發現造福於人類，發明人對從羅漢果植株提取激發胰島素分 泌活性成分的方法進行了探索。經過反覆研究、試驗，發明人提供的從羅漢 果植林提取的具有降血糖和抗糖尿病活性組合物是從羅漢果全植抹中提取、 分離、純化具有降血糖和抗糖尿病活性天然組合物。
發明人提供的提取活性天然組合物的具體方法包括以下第一步或第一
步和第二步
①將事先曬乾的羅漢果植林的各個部分，即葉、藤、根、莖和果實分 別或一起進行機械粉碎得到粗粉，或將新鮮的羅漢果植抹的葉、藤、根、莖 和果實分別或一起壓碎得到溼的碎塊，用清水或水溶性有機溶劑的水溶液浸 泡所述粗粉和碎塊，在室溫提取或加熱提取，得到粗提取液，過濾並乾燥得到粗提物，此粗提物即具有所述的活性；
②以中等極性溶劑對粗提取液進行萃取以除去雜質，水層乾燥即得到 具有以上所述的活性的組合物；或將粗提取液過濾，濾液在室溫下通過大孔 吸附樹脂以層析方法進行分離，大孔吸附樹脂柱在經水洗去未吸附的物質後 用乙醇水溶液洗脫，分別收集從40%乙醇水溶液到100%乙醇水溶液的洗脫 液，即得到所需的活性部分；
上述用來進行分離的大孔吸附樹脂和矽膠包括市售的各種孔徑和型號 的樹脂和矽膠，如Amberlite XAD系列及山東魯抗醫藥股份有限/>司的DM 系列的大孔吸附樹脂等。
上述第 一步中所使用的水溶性有機溶劑主要選自含碳數介於1 ~ 8的醇 類、烷類及酯類，常用的是乙醇或曱醇，其水溶液濃度為任意濃度。
上述第二步中所用的溶劑為中等極性溶劑，常用的是乙酸乙酯；所用的 乙醇水溶液濃度為任意濃度。
發明人對活性組合物的降血糖和抗糖尿病活性進行過驗證試驗即取5 ia 1羅漢果植抹各部分的活性提取物溶液力口入200 ja 1的胰島細胞培養液中， 使其終濃度為5 mg/ml，於37。C培養lh,將此培養液稀釋1: 10;取50ial 稀釋過的培養液檢驗胰島素分泌濃度；計算胰島素濃度與對照對比計算胰島 素分泌濃度，濃度5 mg/ml的提取物能激發50多倍胰島素分泌，結果表明 羅漢果植抹的提取物具有很好的激發胰島素分泌活性。
本發明的從羅漢果植抹中提取的降血糖和抗糖尿病活性組合物及其提 取方法，首次發現並提供了從羅漢果葉，藤，根，莖和果實中提取、分離、 純化具有激發胰島素分泌活性的天然組合物，提供的方法是從實驗室到工業 化規模的提取技術。本發明實現了將廢棄的羅漢果的葉、莖、藤、根用來製備降血糖和抗糖尿病的提取物，並為其應用於製備抗糖尿病相關的產品，如 藥物、功能性食品、飲料、保健品、日用品及食品添加劑等創造了條件，將 會有很大的實用價值和經濟價值。
具體實施例方式
實施例1 100g羅漢果葉研磨粉碎後在500ml水中煮沸30min進行提 取，此過程重複3次；將提取液過濾得到濾液約1G00ml;濾液乾燥得到7g 具有活性的粗提物，此粗提物具有一定的激發胰島素分泌及降血糖的活性。
實施例2 100g羅漢果葉研磨粉碎後在500ml水中煮沸30min進行提 取，此過程重複3次；將提取液過濾得到濾液約1000ml，濾液通過100ml 已進行過水平衡的非極性的Amberlite XAD柱；用1000ml水洗以移去未吸 附的物質；分別再用乙醇水溶液進行梯度洗脫；40%到IO(W的洗脫液中含有 激發胰島素分泌的活性物質，收集該部分洗脫液，乾燥得到2. 5g的活性提 取物。
實施例3取50g羅漢果葉研磨粉碎後在250ml水中煮沸30min進4亍才是 取，提取重複3次；將提取液過濾得到濾液約500ml;濃縮濾液，用乙酸乙酯 進行30min以上的萃取，重複3次，得到有機層和水層；將水層萃取重複3 次，分離有機層和水層；合併水層，將其通過50min已進行過水平衡的非極 性的Amberlite XAD離子交換柱；用500min水洗以移去未p及附的物質；分 別再用乙醇水溶液進行梯度洗脫；40%到100%的洗脫液中含有激發胰島素分 泌的活性物質，收集該部分洗脫液，乾燥得到1. 2g的活性提取物。
實施例4 取100g羅漢果果實研磨粉碎後在500ml水中煮沸30min進 行提取，此過程重複3次；將提取液過濾得到濾液約1000ml;濾液通過100ml已進行過水平衡的非極性的Amberlite XAD柱；用1000ml水洗以移去未吸 附的物質；分別再用乙醇水溶液進行梯度洗脫；40%到100%的洗脫液中含有 激發胰島素分泌的活性物質，收集該部分洗脫液，乾燥得到2. lg的活性提 取物。
實施例5取50g羅漢果莖研磨粉碎後在250ml水中煮沸30min進行提 取，此過程重複3次；將提取液過濾得到濾液約500ml;濾液通過50ml已進 行過水平衡的非極性的Amberlite XAD柱；用500ml水洗以移去未吸附的物 質；分別再用乙醇水溶液進行梯度洗脫；40%到100%的洗脫液中含有激發胰 島素分泌的活性物質，收集該部分洗脫液，乾燥得到'1.25g的活性提取物。
實施例6取50g羅漢果根研磨粉碎後在250ml水中煮沸30min進行提 取，此過程重複3次；將提取液過濾得到濾液約500ml;濾液通過50ml已進 行過水平衡的非極性的Amberlite XAD離子交換柱；用500ml水洗以移去未 吸附的物質；分別再用乙醇水溶液進行梯度洗脫；40%到100°/。的洗脫液中含 有激發胰島素分泌的活性物質，收集該部分洗脫液，乾燥得到1.25g的活性 提取物。
實施例7取50g羅漢果葉研磨粉碎後在250ml水中煮沸30min進行提 取，此過程重複3次；將提取液過濾得到濾液約500ml;'濃縮濾液，用中等極 性溶劑乙酸乙酯進行30min以上的萃取，重複3次，得到有機層和水層；將 水層萃取重複3次，分離有機層和水層；合併水層，乾燥得到所需活性組合 物。
實施例8取50g羅漢果莖研磨粉碎後在250ml水中煮沸30min進行提 取，此過程重複3次；將提取液過濾得到濾液約500ml;濃縮濾液，用中等極性溶劑乙酸乙酯進行30min以上的萃取，重複3次，得到有機層和水層；將 水層萃取重複3次，分離有機層和水層；合併水層，將其乾燥得到所需活性 組合物。
實施例9取市售的25g羅漢果提取物粉末在250ml水中溶解；將提取 液過濾並通過50ml已進行過水平衡的非極性的Amber lite XAD離子交換柱； 用500ml水洗以移去未吸附的物質；分別再用乙醇水溶液進行梯度洗脫；40% 到100°/ 的洗脫液中含有激發胰島素分泌的活性物質，收集該部分洗脫液，幹 燥得到20g的活性提取物。
實施例IO取市售的25g羅漢果提取物粉末在250ml水中溶解，用中等 極性溶劑乙酸乙酯進行30min以上的萃取，重複3次，得到有機層和水層； 將水層萃取重複3次，分離有機層和水層；合併水層，將其乾燥得到所需活 性組合物。
權利要求
1從羅漢果植株提取的具有降血糖和抗糖尿病的活性組合物，其特徵在於該活性組合物是從羅漢果全植株中提取、分離、純化具有降血糖和抗糖尿病活性的天然組合物。
2. 根據權利要求1所述的活性組合物的提取方法，其特徵包括以下第 一步或第一步和第二步① 將事先曬乾的羅漢果植抹的各個部分，即葉、藤、根、莖和果實分別 或一起進行機械粉碎得到粗粉，或將新鮮的羅漢果植抹的葉、藤、根、莖和 果實分別或一起壓碎得到溼的碎塊，用清水或水溶性有機溶劑浸泡所述粗粉 和碎塊，室溫提取或加熱提取，得到粗提取液，過濾並乾燥得到具有活性的 粗提物；② 以中等極性溶劑對粗提取液進行萃取以除去雜質，水層乾燥即得到 具有以上所述的活性組合物；或將提取混合物過濾，濾液在室溫下通過大孔 吸附樹脂以層析方法進行分離，大孔吸附樹脂柱在經水洗去未吸附的物質後 用乙醇水溶液洗脫，收集40%到100%乙醇水溶液的洗脫液，即得到所需的活 性組合物。
3,按照權利要求2所述的提取方法，其特徵在於用來進行分離的大孔 吸附樹脂和矽膠包括市售的各種孔徑和型號的樹脂和矽膠，即Amberlite XAD系列或山東魯抗醫藥股份有限公司的DM系列的大孔吸附樹脂。
4.按照權利要求2所述的提取方法，其特徵在於上所述第一步中所使 用的水溶性有機溶劑主要選自含碳數介於1~8的醇類、烷類及酯類，常用 的是乙醇或曱醇，其水溶液濃度為任意濃度。
5.按照權利要求2所述的提取方法，其特徵在於所述第二步中所用溶 劑為中等極性溶劑，常用的是乙酸乙酯；所用的乙醇水溶液濃度為任意濃度。
全文摘要
本發明公開了從羅漢果植株中提取的降血糖和抗糖尿病活性組合物及其提取方法，該活性組合物是從羅漢果全植株中提取、分離、純化具有降血糖和抗糖尿病活性的天然組合物；提取方法包括以下一步或兩步將幹的羅漢果植株粉碎得到粗粉，或將新鮮植株壓碎得到溼的碎塊，用水或水溶性有機溶劑浸泡，室溫提取或加熱提取，得到粗提取液，過濾並乾燥得到活性粗提物；以中等極性溶劑萃取粗提取液，乾燥即得到具有以上所述的活性組合物；或將粗提取液過濾，濾液通過大孔吸附樹脂層析分離，經水洗後用乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，即得到活性組合物。本方法首次提供了從羅漢果植株中提取、分離、純化具有生物活性的組合物，其應用將有很大的實用價值和經濟意義。
文檔編號A61P3/10GK101297852SQ200710077750
公開日2008年11月5日 申請日期2007年4月30日 優先權日2007年4月30日
發明者英 周, 黃赤夫 申請人:英 周