一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體複合物及其製備方法

2023-12-08 11:40:16

專利名稱：一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體複合物及其製備方法
技術領域：
本專利涉及一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體複合物及其製備方法，屬於生物疫苗領域。背景知識雞傳染性支氣管炎(IB)是由雞傳染性支氣管炎病毒(IBV)引起的一種高度接觸傳染的疾病，主要侵害雞的呼吸系統、泌尿生殖系統和消化系統。雛雞發病後通常表現流鼻液、呼吸困難等呼吸道症狀，甚至會發生死亡；此外，該病還可導致蛋雞產蛋量下降和蛋白品質下降，是目前嚴重危害世界養禽業的重大傳染病之一，給家畜養殖業造成巨大的經濟 損失。目前尚無特效療法，主要採用接種疫苗方式。由於傳染性支氣管炎病毒血清型複雜且相互之間交叉保護力弱，而且新的血清型和變異株不斷出現，如果選擇的疫苗不當，不但起不到預防的效果，而且還可能給當地增添新的病毒株。所以用疫苗前必須掌握當地疾病流行的病毒血清型，並使用與當地流行毒株抗原性一致的疫苗品系，這樣才能達到有效的免疫預防目的。目前市場上還是主要以弱毒苗為主，雖然有一定的治療效果，但是，效果還不是很好，針對目前這種狀況，研製出一種安全、有效、經濟、穩定的疫苗就顯得尤為重要。

發明內容
本發明目的在於提供一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體複合物，該複合物性能穩定、免疫作用快、免疫力強。本發明的目的還在於提供一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體複合物的製備方法，該方法操作簡單，成本低。為實現上述目的，本發明通過以下技術方案實現首先按常規方法製備抗原，然後製得抗體，最後將抗原抗體按最合適的比例進行配比。具體實施方案如下I.抗原的製備(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接種雞胚,繁殖溫度為35_37°C,每天照兩次蛋，收穫24-60h死亡的雞胚尿囊液；對於60h的活胚需置2-8°C過夜，然後收穫尿囊液,收穫尿囊液時,需棄去24h之前死亡的雞胚；對收穫的病毒尿囊液進行檢驗,凡菌檢為陽性，毒價彡IO7EID5tlA). lmL，作為製備疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的濃縮、純化用醋酸鋅沉澱法濃縮病毒液，Sepharose 4FF凝膠層析柱純化病毒液。2.抗體的製備用抗原配製油乳劑滅活疫苗免疫25日齡的SPF雞，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔2周，最後I次免疫是在第3周後用活毒加強免疫I次，第2周後心臟無菌採血分離血清，初步得到的IBV抗血清，首先在54-58°C的水浴鍋中水浴20-40min滅活補體，在3-5°C下以4000-6000r/min離心20_40min，吸取淡黃色上清液作為製備疫苗的抗體。經檢驗，製備的抗體無菌，血凝抑制價大於I :28的血清經檢驗合格後保存備用。3.抗原抗體複合物疫苗的配製及檢測用製備好的抗原和抗體按不同的體積比例進行複合，抗原與抗體的體積比分別為3:4 8，加入凍幹保護劑充分混合後進行真空凍幹。配製成抗原抗體複合物疫苗用HA試驗檢測複合物的血凝價，並按常規方法測定複合物的EID5(i。製備的抗原抗體複合物每份所含的抗原量與常規疫苗所含的抗原量一樣。經試驗測定，複合物的HA效價在抗原抗體的比例在3:4 8時效價最大,免疫力效果最好。本發明獲得的複合物具有性能穩定、安全性好、動物免疫後產生免疫作用快、免疫力強、保護率高特點。
具體實施方式
下面結合一些具體實施方式
對本發明進一步詳細介紹。實施例I(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接種雞胚,繁殖溫度為35°C,每天照兩次蛋，收穫24_60h死亡的雞胚尿囊液；對於60h的活胚需置5°C過夜，然後收穫尿囊液，收穫尿囊液時，需棄去24h之前死亡的雞胚；對收穫的病毒尿囊液進行檢驗，凡菌檢為陰性，毒價> IO7EID5tlA). lmL，作為製備疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的濃縮、純化用醋酸鋅沉澱法濃縮病毒液，Sepharose 4FF凝膠層析柱純化病毒液。(3)用抗原配製油乳劑滅活疫苗免疫25日齡的SPF雞，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔2周，最後I次免疫3周後用活毒加強免疫I次，2周後心臟無菌採血分離血清，初步得到雞傳染性支氣管炎病毒IBV血清；(4)56°C水浴30min滅活補體，在4°C以5000r/min離心30min，淡黃色上清液作為製備疫苗的抗體；(5)用製備好的抗原和抗體按體積比3:8進行混合，加入凍幹保護劑進行真空凍幹，得到抗原抗體複合物。實施例2(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接種雞胚,繁殖溫度為37°C,每天照兩次蛋，收穫24_60h死亡的雞胚尿囊液；對於60h的活胚需置2°C過夜，然後收穫尿囊液，收穫尿囊液時，需棄去24h之前死亡的雞胚；對收穫的病毒尿囊液進行檢驗，凡菌檢為陰性，毒價> IO7EID5tlA). lmL，作為製備疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的濃縮、純化用醋酸鋅沉澱法濃縮病毒液，Sepharose 4FF凝膠層析柱純化病毒液。(3)用抗原配製油乳劑滅活疫苗免疫25日齡的SPF雞，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔2周，最後I次免疫3周後用活毒加強免疫I次，2周後心臟無菌採血分離血清，初步得到雞傳染性支氣管炎病毒IBV血清；(4)54°C水浴40min滅活補體，在3°C下以4000r/min離心40min,淡黃色上清液作為製備疫苗的抗體；(5)用製備好的抗原和抗體按體積比3:5進行混合，加入凍幹保護劑進行真空凍幹，得到抗原抗體複合物。實施例3(I)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接種雞胚,繁殖溫度為36°C,每天照兩次蛋，收穫24-60h死亡的雞胚尿囊液；對於60h的活胚需置8°C過夜，然後收穫尿囊液，收穫尿囊液時，需棄去24h之前死亡的雞胚；對收穫的病毒尿囊液進行檢驗，凡菌檢為陰性，毒價> IO7EID5tlA). lmL，作為製備疫苗的部分的抗原液。(2)病毒液的濃縮、純化用醋酸鋅沉澱法濃縮病毒液，Sepharose 4FF凝膠層析柱純化病毒液。(3)用抗原配製油乳劑滅活疫苗免疫25日齡的SPF雞，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔2周，最後I次免疫3周後用活毒加強免疫I次，2周後心臟無菌採血分離血清，初步得到雞傳染性支氣管炎病毒IBV血清； (4)58°C水浴20min滅活補體，在5°C下以6000r/min離心20min,淡黃色上清液作為製備疫苗的抗體；(5)用製備好的抗原和抗體按體積比3:4進行混合，加入凍幹保護劑進行真空凍幹，得到抗原抗體複合物。免疫效力試驗I日齡SPF雛雞200隻分成10組，每組20隻，分別飼養於隔離器內。第I組至第8組分別經頸部皮下接種複合物疫苗I 8 (I 3組接種實施例I的複合物疫苗，4 6組接種實施例2的複合疫苗，7 8接種實施例3的複合物疫苗)；第9組免疫雞傳染性支氣管炎常規活疫苗;第10組是空白對照組。免疫後觀察記錄雞的疫苗反應情況，3周後採血檢測雞傳染性支氣管炎HI抗體水平。結果疫苗免疫後雞群的臨床症狀I組 8組雞接種複合物疫苗後均無任何反應，採食飲水正常；第9組雞接種疫苗後，有3隻雞出現雞傳染性支氣管炎症狀，表現有精神萎頓，羽毛松亂，輕微喘氣甚至張口呼吸，3d 4d後症狀消失;第10組雞一直保持健康，說明隔離器運轉正常。免疫組的抗體水平比常規苗的抗體水平要高。攻毒試驗免疫接種28d後，即28日齡時，用雞傳染性支氣管炎病種(M41)進行攻毒試驗，攻毒劑量為每隻雞108_°EID5(I,肌肉注射0. 2mL。攻毒後觀察14d,記錄雞群的發病症狀和死亡情況，並剖檢觀察病死雞的病理變化，計算發病率和死亡率。其結果顯示攻毒後各組雞發病和死亡情況試驗I 9組在攻毒後第3天和第4天，雞出現輕微的雞傳染性支氣管炎發病症狀，在觀察期內，第9組發病I只；第10組為空白對照組，攻毒後7d內全部發病死亡，剖檢死雞，病程急發病快的多無典型雞傳染性支氣管炎病變。100%和89%。
權利要求
1.一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體複合物，其特徵在於抗原與抗體按體積比3:4 8進行混合後成為保護機體的複合物。
2.如權利要求I所述的一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體複合物，其特徵在於抗原毒價彡 IO7EID50A). ImL0
3.如權利要求I所述的一種雞傳染性支氣管炎抗原抗體複合物，其特徵在於抗體血凝抑制價HA大於I :28。
4.一種如權利要求I所述的雞傳染性支氣管炎抗原抗體複合物的製備方法，其特徵在於包括以下步驟 (1)病毒的繁殖Massachusetts41病毒株接種雞胚,繁殖溫度為35_37°C,每天照兩次蛋，收穫24-60h死亡的雞胚尿囊液；對於60h的活胚需置2-8°C過夜，然後收穫尿囊液，收穫尿囊液時，需棄去24h之前死亡的雞胚；對收穫的病毒尿囊液進行檢驗，凡菌檢為陰性，毒價> IO7EID5tlA). lmL，作為製備疫苗的部分的抗原液。
(2)病毒液的濃縮、純化用醋酸鋅沉澱法濃縮病毒液，Sepharose4FF凝膠層析柱純化病毒液。
(3)用抗原配製油乳劑滅活疫苗免疫25日齡的SPF雞，胸部肌肉分點注射，免疫3次，每次間隔2周，最後I次免疫3周後用活毒加強免疫I次，2周後心臟無菌採血分離血清，初步得到雞傳染性支氣管炎病毒IBV血清； (4)54-58°C水浴 20-40min 滅活補體，在 3_5°C下以 4000_6000r/min 離心 20_40min，淡黃色上清液作為製備疫苗的抗體； (5)用製備好的抗原和抗體按體積比3:4 8進行混合，加入凍幹保護劑進行真空凍幹，得到抗原抗體複合物。
全文摘要
本發明公開了一種雞傳染性支氣管炎複合物，具體是將純化好的抗原的和血凝抑制效價大於128的抗體按體積比3:4～8時進行配比，製得雞傳染性支氣管炎抗原抗體複合物，該複合物穩定性好，副作用少，免疫效果好。
文檔編號A61K39/395GK102973938SQ20121030285
公開日2013年3月20日 申請日期2012年8月23日 優先權日2012年8月23日
發明者吳紅雲, 徐進, 韓改會 申請人:鄭州后羿製藥有限公司