一種春蘭與大花蕙蘭雜交種育苗的方法

2023-10-06 17:31:59

一種春蘭與大花蕙蘭雜交種育苗的方法
【專利摘要】一種春蘭與大花蕙蘭雜交種育苗的方法，屬於植物生物【技術領域】，以春蘭為母本，大花蕙蘭為父本，通過人工授粉獲得雜交種，在雜交種的蒴果未開裂前採收，經表面消毒和種子用營養液前處理後進行無菌播種，經暗培養種子萌發、種子直接成苗或原球莖增殖，原球莖再經芽誘導、根誘導、組培苗煉苗，然後進行溫室栽培。本發明為一種雜交成苗快、品質好、高效、簡便、推廣性強的春蘭和大花蕙蘭雜交和無菌播種育苗方法。
【專利說明】一種春蘭與大花蕙蘭雜交種育苗的方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於植物生物【技術領域】，具體涉及一種遠緣雜交育種和雜交種繁殖方法。【背景技術】
[0002]春蘭(Cym.goeringii)，又稱草蘭、山蘭、朵朵香。是蘭科，蘭屬，地生蘭類多年生草本。是中國蘭的代表種，原產於我國長江流域或西南地區，日本和朝鮮半島也有分布。春蘭名優品種具有很高的觀賞價值和經濟價值，在東南亞特別是日本、韓國和臺灣地區，春蘭十分受歡迎。春蘭傳統的品種選育以綠色為基本，崇尚瓣型和素心，是貫徹執行瓣型理論最具代表的國蘭種，因此流傳至今的名優春蘭品種，絕大部分為綠色瓣型花或素心花品種。
[0003]大花繁竺XCymbidium又叫喜姆比蘭和蝶蘭。蘭科、蘭屬植物。它是由蘭屬中的大花附生種、小花垂生種以及一些地生蘭經過一百多年的多代人工雜交育成的品種群。大花蕙蘭葉長碧綠，花姿粗曠，花色豔麗，是世界著名的「蘭花新星」。在國際花卉市場十分暢銷，深受花卉愛好者的傾愛。大花蕙蘭的生產地主要是日本，韓國和中國，澳洲及美國等。
[0004]鑑於人們對新產品和新蘭花的追求，培育更多品種的蘭花種是植物界的研究的一個課題。

【發明內容】

[0005]本發明目的是為人們提供一種以春蘭與大花蕙蘭雜交種育苗的方法。
[0006]本發明以春蘭為母本，大花蕙蘭為父本，母本在開花2天後去雄，父本取開花後3~5天的花粉，通過人工授粉獲得雜交種，在雜交種的蒴果未開裂前採收，經表面消毒和種子用營養液前處理後進行無菌播種，經暗培養種子萌發、種子直接成苗或原球莖增殖，原球莖再經芽誘導、根誘導、組培苗煉苗，然後進行溫室栽培。
[0007]本發明針對春蘭與大花蕙蘭種間雜交育種和種子無菌播種中，如何提高優良品種授粉結實率，種子萌發率、原球莖增殖率、誘芽誘根成苗率和煉苗成活率等，提出一種使雜交成苗快，品質好，高效、簡便、推廣性強的春蘭和大花蕙蘭雜交和無菌播種育苗方法。
[0008]具體方法:
無菌播種是:將未開裂的蒴果表面用質量分數為75%的酒精消毒後，以質量分數為
.0.1%的HgCl水溶液浸泡10分鐘後取出，再浸入質量分數為95%的酒精內，取出蒴果立即在酒精燈上點燃，待蒴果表面酒精燃燒完後，切開蒴果，取出種子，放入裝有營養液的玻璃試劑瓶內，振蕩10~20分鐘後，將種子用無菌不鏽鋼小勺均勻分散於培養基表面。
[0009]種子前處理營養液中含有I/2MS、萘乙酸(NAA) 0.5mg/1、蔗糖20g/1和蛋白腖
.0.5g/l，營養液的pH值為5.25~5.3 ;所述無菌播種培養基中含有1/2MS、萘乙酸(NAA)
.0.5mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白腖0.5g/l和瓊脂6g/l，培養基的pH值為5.25~
5.3。
[0010]暗培養種子萌發是:將連同培養基的種子置於無光、培養溫度為23±0.2°C的環境溫度下放置。
[0011]原球莖增殖是:待原球莖萌發至長度為2~5mm時，原球莖材料每隔60天轉入一次增殖培養基，轉入增殖培養基後將玻璃瓶置於溫度為23±0.2°C的環境中，並且光照8小時/天，光照強度為15001ux±100 lux ;所述增殖培養基中含有1/2MS、2，4_D2mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白腖0.5g/l和瓊脂6g/l，所述增殖培養基的pH值為5.25~5.3。
[0012]種子直接成苗是:待原球莖萌發的幼芽長度為2~5mm時，向玻璃瓶內轉入二次培養基；所述二次培養基中含1/2MS、萘乙酸(NAA) 0.5mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白腖0.5g/l和瓊脂6g/l，二次培養基的pH值為5.25~5.3。
[0013]莖誘芽是:待原球莖萌發的幼芽長度為I~2cm時，轉入誘芽培養基，置於23±0.2°C的環境中2~3個月，期間光照12小時/天，光照強度為20001ux±100 lux ;所述誘芽培養基中含1/21^、萘乙酸(應麼)0.lmg/l、6-BAlmg/l、蔗糖20g/l、蛋白腖0.5g/l和瓊脂6g/l，所述誘芽培養基的pH值為5.25~5.3。
[0014]根誘導是:待原球莖萌發的幼芽長度為2~3cm時，向玻璃瓶內轉入生根壯苗培養，置於23±0.2°C的環境中，並且光照10小時/天，光照強度15001ux±100 lux ;所述生根壯苗培養基中含1/21^、萘乙酸(應麼)0.5mg/l、6-BA0.5mg/l、蔗糖20g/l、蛋白腖0.5g/1、活性碳0.5g/l和瓊脂6g/l，所述生根壯苗培養基的pH值為5.25~5.3。
[0015]組培苗移栽煉苗是:在小苗生長至8~10 cm、形成3~4個葉片、根長5~8cm、根數2~3條時出瓶移栽至移栽基質，移栽後澆透水，置於光照10小時/天、光照強度20001ux±100 lux、溫度為20~25°C、溼度為80~85%的環境中；所述移栽基質由小號松鱗和珍珠巖以質量比為8:2的比例混合。
[0016]溫室栽培的溫度 條件為18~30°C，溼度為75~85%，自然光照，每3~5天澆一次透水，溫室保持良好通透性，噴施廣譜性殺菌劑殺蟲劑，每一星期噴施I次1/2MS培養液或濃度為I %。的蘭菌王。
[0017]本發明所具有的優點:
1、本發明提出當花期不遇時，短期保存花粉採用冷藏花蕊柱的方法，利用植物營養體短期保鮮的方法，使花粉最大程度的保持活力和潔淨度，提高雜交成功率和種子育性。根據花蕊柱萎縮的程度，在花蕊柱腐敗前取出花粉繼續保存，可延長花粉的活性，提高雜交成功率。
[0018]2、本發明對播種前無菌種子進行振蕩前處理，使種子充分與營養液接觸，儘量克服其種皮不易透水性，使種子胚能儘早接觸到營養液，加快其萌發速度。取分散於營養液的種子倒入培養基，種子連同營養液能均勻的分布於培養基表面，整個操作方便高效，汙染機率極低。
[0019]3、本發明利用不同配方培養基，可採用播種培養基直接對原球莖誘芽誘根，快速成苗，再利用根莖周圍少量原球莖繼代增殖實現株系的快繁。原球莖也可直接繼代增殖，擴大株系群體，再進行誘芽誘根壯苗培養。使多種育種途徑可自由轉換，更好的達到育種者的目標。
[0020]4、本發明的煉苗間採用精確控制溫度、溼度和光照，大大提高小苗成活率和質量的同時，節省了經濟成本。
[0021]5、本發明栽培小苗的基質為小號松鱗加珍珠巖，是酥鬆透氣的軟質料，保水性能好，對組培苗根系生長十分適合，材料收集容易，成本低廉。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0022]圖1為宜春仙春蘭的開花照片。
[0023]圖2為大花蕙蘭的開花照片。
[0024]圖3為雜交蒴果照片。
[0025]圖4為種子無菌播種照片。
[0026]圖5為原球莖萌發照片。
[0027]圖6為直接成苗照片。
[0028]圖7為原球莖增殖照片。
[0029]圖8為原球莖誘芽照片。
[0030]圖9為原球莖誘根照片。
[0031]圖10為組培苗照片。
[0032]圖11為小苗出瓶照片。
[0033]圖12為煉苗室煉苗照片。
[0034]圖13為溫室栽培照片。
【具體實施方式】
[0035]本發明結合附圖和實施例作進一步的說明，但本發明的內容不是僅限於此。
[0036]本例採用春蘭宜春仙為母本，大花蕙蘭為父本，進行雜交無菌播種育苗，具體步驟:
1、人工授粉:在I月下旬，兩親本同時開花時，春蘭宜春仙(附圖1)開花兩天後，去除鼻頭和花粉塊，在鼻頭下蕊柱腔授入紅花大花蕙蘭品種(附圖2)開花3天後的花粉塊，授粉後用白色小紗袋，以免昆蟲重複授粉，操作要輕柔，儘量不要碰傷蕊柱和折斷花葶，保證雜交成功率，在母本花盆上註明雜交日期和雜交父本。小紗袋可在種子受精膨大後去除。
[0037]若春蘭宜春仙與大花蕙蘭花期不遇，可取大花蕙蘭花蕊柱或花粉塊放入潔淨玻璃小瓶，7天內短期保存置於4°C低溫冰箱備用，長期保存可放入_20°C超低溫冰箱保存。
[0038]所選春蘭名優品種是指香味純正的瓣型品種、素心品種或葉藝品種，大花蕙蘭優良品種指花型碩大、花色純正，鮮豔，株型挺拔的各色品種。
[0039]2、無菌播種:9月中旬，折下蒴果(附圖3 )，剝去殘餘花瓣，用75%酒精插淨表皮後，帶入無菌培養室。在超淨工作檯上，把種子放入0.1%的HgCl，輕輕搖晃，表面滅菌10分鐘，取出蒴果晾乾後，放入95%酒精浸一下，酒精燈上接觸，使表面酒精燃燒完。用無菌解剖刀劃開種皮，把種子刮入，已整體滅菌的裝有25毫升營養液的50毫升磨口玻璃瓶，蓋上瓶蓋，用力振蕩10分鐘，用滅菌的容量為1.5毫升小勺舀出小瓶中均勻分散種子的營養液，倒入培養基，輕晃培養基，使種子均勻分布於培養基表面(附圖4)。營養液為1/2MS+NAA0.5mg/1+蔗糖 20g/l+蛋白腖 0.5g/l，pH5.25-5.3。播種用培養基為 1/2MS+NAA0.5mg/l+蔗糖 20g/1+ 蛋白腖 0.5g/l+ 活性碳 0.5g/l + 瓊脂 6g/l，ρΗ5.25-5.3。
[0040]3、種子萌發:種子播種後避光暗培養，培養溫度23°C左右。播後43天種子開始萌發(附圖5)，90天左右原球莖生長至2-5_時，需要增殖的株系轉入增殖培養基。如需要種子直接成苗，原球莖生長至2-5_，可轉入新的播種培養基，培養6個月後原球莖可直接分化出芽和根，直接成苗(附圖6)。但這種培養方式，得到的種苗有限，但一般小苗根莖處會有部分原球莖，也可再進增殖培養。具體培養方案，可根據育種者育種思路自主選擇。直接成苗培養基為1/2MS+NAA0.5mg/l+蔗糖20g/l+活性碳0.5g/l+蛋白腖0.5g/l +瓊脂6g/l，ρΗ5.25~5.3ο
[0041]4、原球莖增殖:原球莖生長至0.5-lcm時，部分原球莖轉入增殖培養基進行繼代培養(附圖7)，培養基配方為1/2MS+2, 4-D2mg/l+蔗糖20g/l +蛋白腖0.5g/l +瓊脂6g/1，ρΗ5.25~5.3ο
[0042]5、原球莖誘芽:至原球莖生長至l-2cm，轉入誘芽培養基，室溫23度，光照強度20001ux左右，光照12小時/天，培養2個月小芽生長至2-3cm (附圖8)。誘芽培養基1/2MS+NAA0.lmg/l+6-BAlmg/l + 蔗糖 20g/l+ 蛋白腖 0.5g/l + 瓊脂 6g/l，ρΗ5.25-5?
[0043]6、生根壯苗培養:待芽高l_2cm時轉至生根壯苗培養(附圖9)，室溫23度左右，光照強度15001ux左右，光照10小時/天。生根壯苗培養基:1/2MS+NAA0.5mg/l+6-BA0.5mg/I + 蔗糖 20g/l+蛋白腖 0.5g/l + 活性碳 0.5g/l + 瓊脂 6g/l，pH5.25-5.3。
[0044]7、組培苗移栽煉苗。培養2個月，小苗(附圖10)生長至8-10 cm，葉片3-4片，根長5-8 cm,每苗根數2-3條時移栽,移栽基質為小號松鱗:珍珠巖=8:2。口徑15 cm小號盆，每盆移栽小苗(附圖11) 6苗左右，栽完後就澆透水。出瓶後移栽，氣候不適宜可先移入煉苗室(附圖12)，溫度為20-25°C，溼度80%-85%，光照強度20001ux左右，光照10小時/天。
[0045]8、溫室栽培。氣候適宜時小苗便可移入溫室栽培(附圖13)，栽培適宜溫度為16-300C ,不低於5°C，不高於35°C，溼度80%左右，自然光照。3_5天澆一次透水，保持基質溼潤。溫室保持良好通透性，`噴施廣譜性殺菌劑殺蟲劑，防治病害和飛蝨、草蚊、薊馬等蟲害，每星期噴施I次1/2MS培養液，或濃度為1%。的蘭菌王水溶液。
【權利要求】
1.一種春蘭與大花蕙蘭雜交種育苗的方法，其特徵在於以春蘭為母本，大花蕙蘭為父本，母本在開花2天後去雄，父本取開花後3~5天的花粉，通過人工授粉獲得雜交種，在雜交種的蒴果未開裂前採收，經表面消毒和種子用營養液前處理後進行無菌播種，經暗培養種子萌發、種子直接成苗或原球莖增殖，原球莖再經芽誘導、根誘導、組培苗煉苗，然後進行溫室栽培。
2.根據權利要求1所述方法，其特徵在於所述無菌播種是:將未開裂的蒴果表面用質量分數為75%的酒精消毒後，以質量分數為0.1%的HgCl水溶液浸泡10分鐘後取出，再浸入質量分數為95%的酒精內，取出蒴果立即在酒精燈上點燃，待蒴果表面酒精燃燒完後，切開蒴果，取出種子，放入裝有營養液的玻璃試劑瓶內，振蕩10~20分鐘後，將種子用無菌不鏽鋼小勺均勻分散於培養基表面。
3.根據權利要求2所述方法，其特徵在於所述營養液中含有1/2MS、萘乙酸0.5mg/l、蔗糖20g/l和蛋白腖0.5g/l，營養液的pH值為5.25~5.3 ;播種用培養基中含有1/2MS、萘乙酸0.5mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白腖0.5g/l和瓊脂6g/l，培養基的pH值為5.25 ~5.3。
4.根據權利要求1所述方法，其特徵在於所述暗培養種子萌發是:將連同培養基的種子置於無光、培養溫度為23 ±0.2°C的環境溫度下放置。
5.根據權利要求1所述方法，其特徵在於所述原球莖增殖是:待原球莖萌發至長度為2~5_時，原球莖材料每隔60天轉入一次增殖培養基，轉入增殖培養基後將玻璃瓶置於溫度為23±0.2°C的環境中，並且光照8小時/天，光照強度為15001ux±100 lux ;所述增殖培養基中含有1/2MS、2，4-D2mg/1、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白腖0.5g/l和瓊脂6g/l，所述增殖培養基的PH值為5.25~5.3。
6.根據權利要求1所述方法，其特徵在於所述種子直接成苗是:待原球莖萌發的幼芽長度為2~5mm時，轉入二次培養基；所述二次培養基中含1/2MS、萘乙酸0.5mg/l、蔗糖20g/l、活性碳0.5g/l、蛋白腖0.5g/l和瓊脂6g/l，二次培養基的pH值為5.25~5.3。`
7.根據權利要求1所述方法，其特徵在於所述莖誘芽是:待原球莖萌發的幼芽長度為I~2cm時，向玻璃瓶內轉入誘芽培養基,置於23±0.2°C的環境中2~3個月，期間光照12小時/天，光照強度為20001ux±100 lux ;所述誘芽培養基中含1/2MS、萘乙酸0.lmg/1、6-BAlmg/l、蔗糖20g/l、蛋白腖0.5g/l和瓊脂6g/l，所述誘芽培養基的pH值為5.25~5.3ο
8.根據權利要求1所述方法，其特徵在於所述根誘導是:待原球莖萌發的幼芽長度為2~3cm時，轉入生根壯苗培養基，置於23±0.2°C的環境中，並且光照10小時/天，光照強度15001ux±100 lux ;所述生根壯苗培養基中含1/2MS、萘乙酸0.5mg/l、6-BA0.5mg/l、蔗糖20g/l、蛋白腖0.5g/l、活性碳0.5g/l和瓊脂6g/l，所述生根壯苗培養基的pH值為5.25 ~5.3。
9.根據權利要求1所述方法，其特徵在於所述組培苗移栽煉苗是:在小苗生長至8~10 cm、形成3~4個葉片、根長5~8 cm、根數2~3條時出瓶移栽至移栽基質，移栽後澆透水，置於光照10小時/天、光照強度20001ux±100 lux、溫度為20~25°C、溼度為80~85%的環境中；所述移栽基質由小號松鱗和珍珠巖以質量比為8:2的比例混合。
10.根據權利要求1所述方法，其特徵在於所述溫室栽培的溫度條件為18~30°C，溼度為75~85%，自然光照，每3~5天澆一次透水，溫室保持良好通透性，噴施廣譜性殺菌劑殺蟲劑， 每一星期噴施I次1/2MS培養液或濃度為1%。的蘭菌王。
【文檔編號】A01H1/02GK103704130SQ201410002480
【公開日】2014年4月9日 申請日期:2014年1月3日 優先權日:2014年1月3日
【發明者】孫葉, 包建忠, 劉春貴, 李風童, 馬輝, 陶凡, 張甜, 張靚, 陳秀蘭 申請人:江蘇裡下河地區農業科學研究所