含有枸杞提取活性物質的藥物組合物及其應用的製作方法
2023-10-05 01:58:39 2
專利名稱：含有枸杞提取活性物質的藥物組合物及其應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及到枸杞(Lycium barbarum)提取物、其藥物組合物及其應用。枸杞提取物具有抗血管新生之性能，可用於防止和/或治療癌細胞轉移及與病理性血管新生和新血管形成相關的健康類疾病，由此本發明亦涉及新血管及癌細胞轉移病理形成的新奇幹預治療法。
背景技術：
枸杞(Lycium barbarum)的藥物學名稱為Fructus lycii，通常稱為枸杞子，主要源自亞洲(寧夏、甘肅、青海、西藏、內蒙古和河北)，但現在美國許多地區也在廣泛種植。亞洲人幾千年前就開始使用枸杞和甘草強身健體。枸杞是一種傳統中藥，能夠改善視力，防止因肝臟和腎臟疾病引起的頭痛和頭暈症狀。枸杞在治療輕度糖尿病方面也具有一定療效。相信枸杞能夠改善和調節免疫系統；降低血脂含量；保護肝臟功能；在化療過程中增加白細胞數量；降低血糖和血壓。
血管新生是一個新血管生成的過程，即原先已有血管的派生物。在這一過程中，當蛋白水解酶進行降解作用時，內皮細胞逐漸與基底膜產生分離。然後，這些內皮細胞游離於母體血管之外，分裂並形成一種新的變異血管組織(Risau，(1997)《自然》386671-674；Wilting等，(1995)《細胞分子生物學》，參考41(4)219-232)。目前發現，多種不同的生物因子都對控制血管的形成產生作用(Bussolino等，(1997)「生物化學的發展趨勢」，《科學》，22(7)251-256；Folkman和D』Amore，(1996)細胞871153-1155)。這些生物因子包括具有不同功能的蛋白質，如生長因子、細胞表面受體、蛋白酶、蛋白酶抑制物和細胞外母體蛋白質(Achen和Stacker，(1998)Int.J.Exp.Pathol.79255-265；Devalaraja和Richmond，(1999)發展趨勢；《科學》，20(4)151-156；Hanahan，(1997)《科學》27748-50；Maisonpierre等，(1997)《科學》27755-60；Suri等，(1996)細胞871171-1180；Sato等，(1995)《自然》37670-74；Mignatti和Rifkin，(1996)酶蛋白49117-137；Pintucci等，(1996)Semin Thromb Hemost22(6)517-524；Vernon和Sage，(1995)《美國藥理學期刊》147(4)873-883；Brooks等，(1994)《科學》264569-571；Koch等，(1995)《自然》376517-519)。
血管新生參與了許多基本的生理活動，如發育、繁殖及傷口癒合等。在正常的條件下，血管新生都是在嚴格控制及高度調節的方式發生的，一般是在胚胎發育期間、成長期間以及一些特殊的情形下，如傷口癒合及女性生殖周期中(Wilting和Christ，(1996)《自然科學》83153-164；Goodger和Rogers，(1995)《微循環》2329-343；Augustin等，(1995)《美國藥理學期刊》147(2)339-351)。
然而，許多疾病或健康失調，如癌細胞轉移、糖尿病視網膜病變、風溼性關節炎和其它諸如牛皮癬之類的感染疾病等，都是由長期沒有規律的血管新生引起的(Folkman，(1995)《自然醫學》1(1)27-31；Polverini，(1995)《風溼病學》38(2)103-112；Healy等，(1998)《人類生殖新知》4(5)736-396)。例如，在風溼性關節炎中，新的毛細血管侵襲關節並破壞了軟骨組織。在糖尿病視網膜病變中，視網膜中的新毛細血管入侵玻璃狀體，造成出血並引起失明。因此，對病理性血管新生進行有效的治療幹預、控制和/或抑制可以減輕許多重要的疾病。
這一血管新生的過程為控制體內血管形成的幹預性治療提供了節點。在實驗模式中，我們發現了控制血管形成的血管新生蛋白質抑制劑如血管阻斷素(O』Reilly等，(1994)《細胞》79(2)315-328)內皮抑素(O』Reilly等，(1997)《細胞》88(2))。不過，這類蛋白質療法生產起來非常昂貴，且發現它們很難配製，很難注射到患者體內。目前，蛋白質血管新生抑制劑並沒有發展成為治療患者疾病的藥物。因此，我們仍然需要一種可以安全地投入到患者體內並可以有效地抑制、幹預、修改和/或控制血管內皮細胞病理性生長的治療物質。我們目前的發明提供了適用於這一目的的組合物及方法。
發明內容
根據目前的發明，我們發現，枸杞提取物可以抑制癌細胞轉移、內皮細胞的生長及增生以及血管生成的過程。目前的發明提供了一種抑制、修改和/或控制內皮細胞病理性增生的方法，包括將有效量的枸杞提取物送到內皮細胞中的方法。在本發明的範圍內，我們提供的是一種抑制一個細胞組織內新血管形成的方法，包括將有效量的枸杞提取物送到內皮細胞中的方法。通過投入有效量的枸杞提取物到一個患者體內，我們可以實踐抑制、修改和/或控制內皮細胞病理性增生的方法及抑制細胞組織內新血管形成的方法。其中每種方法可以進一步地包括一種針對患者的抗血管生成、抗新血管生成或抗腫瘤療法的應用，在此，枸杞提取物可以增強抗血管生成、抗新血管生成或抗腫瘤療法的治療效果。抗血管生成、抗新血管生成或抗腫瘤療法包括a)，投入一種除枸杞提取物外的抗血管生成劑或抗新血管生成劑(例如，放射療法、抗癌新藥Avastin、鯊魚軟骨的硫酸胺沉澱物、鯊魚軟骨提取物、Shimeji DEAEalpha、Shimeji Mono-Q alpha、3-氨基苯甲醯胺和順鉑-cisplatin)給患者；b)投入一種抗腫瘤化療劑給患者；或c)為患者採用放射性療法。
通過給患者投入有效量的枸杞提取物或其藥物組合物，本發明還提供了治療與內皮細胞病理性增生和/或新血管生成相關的疾病之方法。同時，這一方法還進一步包括為患者採用的一種抗腫瘤、抗血管生成或抗新血管生成的療法，這一療法可以包括化學療法、放射性療法或投入一種除枸杞提取物之外的抗血管生成或抗新血管生成劑等方法。而枸杞提取物可以提高抗腫瘤、抗血管生成或抗新血管生成療法的效果。
本發明還提供了一種防止及抑制癌細胞轉移的方法，包括為癌症患者投入有效量的枸杞提取物。
在本發明的範圍內，我們還提供了包括有效量枸杞提取物以及在治療中使用這種提取物的說明書的藥盒。這些藥盒對治療那些患有與內皮細胞和/或新血管生成過度增生相關的疾病非常有用。
本發明進一步提供的是一種篩選識別新治療藥劑的方法以確認它們與枸杞提取物具有相同的、類似的或更好的治療效果。這種篩選方法包括把這一藥劑對內皮細胞增生的效果與枸杞提取物的抗增生效果進行比較。
圖1顯示枸杞含水提取物在內皮細胞測定試驗中對內皮細胞增生基於濃度的抑制效果。
本發明之詳細描述在本專利說明書及權利要求中，除非文中另行說明，否則所有單數形式如」a」、」an」和」the」等均包含複數含義。例如，「某個細胞」雖然為單數形式，但同樣包含該細胞的複數含義以及單數和複數混合使用的含義。
本發明還提供了包含本發明的枸杞提取物的產品，其發明的方法在操作時可以使用這一產品而不是提取物。在此，當過渡詞「包含」指的是一種方法、物質或本發明的組合物時，則該方法、該物質或該組合物既包括了詳細列舉的各個要素，但也並沒有將其他未詳細列舉的要素排除在外。
發明還提供了基本上由本發明的枸杞提取物組成的一種藥物組合物產品，其發明的方法在操作時可以使用這一產品而不是提取物。這裡的過渡短語「基本上由……組成」當用來定義本專利申請中本發明的一種組合物、物質或方法時，它表示既包含了詳細列舉的各個要素，也沒有將實質上沒有對本發明基本及新穎特性產生影響的那些未詳細列舉的要素排除在外。因此，一種基本上由枸杞提取物或醫學上可以接受的載體組成的專利申請組合物不應將來自提取物或本質上不影響該組合物之病理性血管形成抑制性能的物質如磷酸緩衝液、防腐劑和氯化鈉的製備步驟中如分離和提純方法中產生的微量汙染物排除在外。
術語「分離」在指稱一種天然物質時，其含義指這一自然物質從組合物、細胞及其他與化合物天然結合的成分中單獨分離。
「受試者」或「宿主」為脊椎動物，最好是哺乳動物或人類，人類患者最佳。哺乳動物包括(但不僅限於)鼠類、猿猴類、馬、牛、豬、羊、畜類、競技類動物、寵物及人類，如人類患者。
術語「腫瘤」及「贅生物」可交換使用，既可用作單數也可用作複數形式，它是指細胞的異常生長，通常產生一種細胞組織堆積塊，既可能是良性的，也可能是惡性的。
術語「癌症」既可用作單數也可用作複數形式，它是指經歷了惡性病變的一個細胞聚合體。在本發明中，一個癌症細胞的定義不僅包括原代癌細胞，而且指源自癌細胞原種的任何細胞。因此，術語「癌細胞」包括轉移的癌細胞、體外培養及源自癌細胞的細胞株。
在本文中，「抑制」內皮細胞生長或一個細胞組織的血管形成指的是阻止、推遲或延緩內皮細胞的生長、增殖或細胞分裂、或細胞組織中血管的形成。監測抑制的方法包括(但不限於)內皮細胞增殖化驗、通過測定血液含量測量血管床體積、以及定量測定血管結構的密度。當培養物質為細胞混合體時，監測新血管形成的過程需要通過定量測量能夠體現內皮細胞特定指標的細胞加以完成，這些指標包括血管新生因子、蛋白水解酶、以及內皮細胞的特定細胞粘附分子等。
本發明還提供了一種「藥物組合物」，目的是為了包括至少還含有其它物質的枸杞提取物的組合物質，如一種載體、穩定劑、防腐劑或另一種有效成分，如另一種治療性藥劑，從而使該組合物適合在體內、體外進行診斷性或治療性用途。「另一種治療性有效成分」的實施例包括類固醇，如強的松、脫氫皮質(甾)醇、甲基強的松龍、氫化可的松、皮質酮和地塞米松，以及非甾族抗炎藥物，如硫代蘋果酸鈉、硫代葡萄金、右旋青黴胺、氯喹、羥化氯喹、硫氮磺吡啶、咪唑硫嘌呤，和抗腫瘤製劑，如α-幹擾素、β-幹擾素、γ-幹擾素、2號白介素、阿地白介素、惠而血添(重組人粒細胞集落刺激因子)、沙格司亭(重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子)、左咪唑、BCG疫苗、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟脫氧尿苷、阿糖胞苷、5-氮雜胞苷、巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、pentastatin、阿氟酸、克拉屈賓、二氟胞嘧啶、二氯甲基二乙胺、苯丁酸氮芥、環磷醯胺、左旋溶肉瘤素、洛莫司汀、亞硝(基)脲氮芥、司莫司汀、鏈佐星、氮烯咪胺、白消安、三胺硫磷、六甲蜜胺、異環磷醯胺、順鉑、碳鉑、甲基苄肼、放線菌素D、普卡黴素、博來黴素、亞德裡亞黴素、道諾黴素、去甲柔紅黴素、米託蒽醌、絲裂黴素、長春新鹼、長春鹼、長春瑞賓、依託泊甙、替尼泊甙、太平洋紫杉醇、鹽酸拓撲替康、天(門)冬醯胺酶、羥基脲、氯苯二氯乙烷、地塞米松、氨格魯米特、雌二酮、乙烯雌酚、羥孕酮、甲孕酮、甲地孕酮、睪丸激素、氟羚甲基睪丸素、它莫西芬、亮丙瑞林和氟他胺片。
在本文中，術語「藥物學上可接受載體」的含義包含磷酸緩衝溶液、水(最好是消毒水)、乳化劑及各種溼潤劑等任何標準的藥物學載體。藥物學載體、穩定劑和防腐劑的實例請參閱馬丁·雷明頓1975年《藥物學標準》第15版(麥克米倫出版公司，伊斯頓市，1975年)。
「有效量」是指能夠對有利或預期效果產生影響的充足數量。例如，治療數量指能夠獲得預期療效的數量。預防性有效量是指能夠防止疾病發作或疾病症狀的必要數量。
通過把一定量的枸杞提取物生長抑制劑送入到細胞之中，本發明提供了一種對內皮細胞的病理性生長進行抑制的方法。本發明還提供了一種通過把一定量抗血管形成的枸杞提取物送到細胞組織內而對組織內的血管形成進行抑制的方法。這些方法既可以在體內操作，也可以在體外操作。當在體外操作時，內皮細胞或血管化組織在業內專業人士熟知的條件下進行培養，具體如下所述。這些細胞和/或組織既可以從現存的細胞株中進行培養，也可以從受試者即患者身上得到的活組織切片檢查樣本中進行培養。然後，這些細胞和/或組織被投入枸杞提取物中，例如，可以把枸杞提取物加入到細胞和/或組織的培養基中。
根據本發明，枸杞提取物的製備方法如下將枸杞或其中部分如果實、葉子、莖幹、分枝、軀幹、皮或根(最好是篩選過的、壓碎的或碾碎的)投入到一種有機溶劑中，最好是含水介質中，從而把得到的液體與至少一些、或全部、最好是全部枸杞的固體部分分離開來，以獲得一種液體形式的提取物，這一液體提取物還可以通過溶劑蒸發或凍幹法在除去有機溶劑或水之後將之還原成一種固體形態，從而獲得固體形態的提取物。有機溶劑最好是一種極性有機溶劑，如某種醇類物質，如甲醇、乙醇、N-丙醇、異丙醇、N-丁醇、異丁醇和叔丁醇，最好是甲醇和乙醇。使用有機溶劑或水介質進行提取的溫度應在0℃至200℃之間，0℃至150℃之間更佳，最好在4℃至100℃之間，例如4℃、室溫、40℃、60℃、80℃或100℃。溫度在提取過程中可以有所變化。例如提取開始時的溫度可能與結束時的溫度不一樣。製備本發明枸杞提取物時，優選以枸杞的果實或部分果實作原料，如此，果實(鮮果或乾果)或部分果實被放進含水介質或有機溶劑之中，然後採用離心過濾或過濾的方法將得到的液體物質與枸杞果實的固體部分分離開來，以獲得提取物。更理想的是，在投放到含水介質或有機溶劑之前，將枸杞的全部或部分果實粉碎或磨碎。最好在粉碎或磨碎全部或部分果實的時候，儘量小心操作避免粉碎或磨碎果實內的種子。同時，本發明的枸杞提取物還可以通過將新鮮或乾燥的枸杞或其中的任何部分(最好是經過篩選、粉碎或磨碎)投入到有機溶劑(最好是含水介質)之中進行製備，從而把所得液體物質與枸杞的固體部分分離開來，形成一種液體物質，可通過透析法、超濾法或層析法把分子量約為200-1000，優選約200-900，更優選約300-800，再優選約400-700，最優選約500-600的化合物從這一液體物質中除去，以獲得液體形式的提取物。這一液體提取物還可以在除去有機溶劑或水之後將之還原為固體形態，從而獲得固體形態的提取物。
本項發明涉及液態或固態枸杞提取物的具體形式包括(1)不含硫胺、核黃素、胡蘿蔔素、隱黃質和玉米黃質，(2)不含核黃素、胡蘿蔔素、隱黃質和玉米黃質，(3)不含胡蘿蔔素、隱黃質和玉米黃質，(4)不含胡蘿蔔素和隱黃質，(5)不含胡蘿蔔素和玉米黃質，(6)不含隱黃質和玉米黃質，或(7)不含硫胺、核黃素、胡蘿蔔素、隱黃質或玉米黃質等形式。
並不是每一個療法對每一個體都有效，因此，採用試管化驗的方法檢測出每一個受試者(即患者)的施藥功效是有益的。本發明提供了測定枸杞提取物是否能治療某一受試者(即患者)與內皮細胞病理性增生相關的特定疾病的一種方法。例如從受試者體內分離出某一細胞活組織切片，然後與有效量的枸杞提取物或含有該提取物的藥物組合物進行接觸。使用傳統程序(如以下要描述的CPAE化驗)測定的內皮細胞病理性生長的抑制表明了枸杞提取物或含有該提取物的藥物組合物是否能有效地治療該受試者(即患者)的疾病。
通過向受試者(即患者)體內投入有效藥量的枸杞提取物或含有該提取物的藥物組合物，本發明還提供了一種治療與患者病理性新血管形成相關的失調症之方法。在本文的上下文中，進行「治療」意味著減緩與病理性新血管形成相關的症狀或減輕新血管形成。這類失調症包括(但不限於)關節炎症狀、基於新血管形成的皮膚病症狀、糖尿病視網膜病變、再狹症、卡波西氏肉瘤、老年黃斑病變、毛細血管擴張、青光眼、瘢痕瘤、角膜移植排斥、創傷性肉芽、血管纖維瘤、遺傳性出血性毛細血管擴張症、心肌血管新生、牛皮癬、硬皮病及一些炎症，如由病理性血管形成或新血管形成相關或造成的痔瘡。典型的關節炎症狀為風溼性關節炎和骨關節炎。
本發明還提供了一種預防或抑制(如阻止、減少、減緩或推遲)癌細胞轉移的方法，包括將枸杞提取物投入到某個癌症患者體內的方法；投入枸杞提取物以治療關節炎症狀會減輕軟骨(特別是關節)中的血管形成，從而增強這些區域的靈活性和適應性。就治療牛皮癬而言，投入枸杞提取物會減少一些皮膚病的症狀，如結疤、片狀剝落和皮膚表體下的可見血管。就治療糖尿病視網膜病變而言，投入枸杞提取物會減少視網膜中新異血管的形成，從而使視覺不受阻礙。就治療卡波西氏肉瘤而言，投入枸杞提取物會抑制血管的生長或更進一步的形成，從而抑制住傷害的形成。
枸杞提取物投送的方式可以是口入式、口腔式、鼻入式、直腸式、靜脈注射式、腹膜腔引流式、肌肉注射式、或局部性方法，如經過皮膚或眼部、陰道或吸入式。當枸杞提取物被投入到受試者(如人類，人類患者，或其它哺乳動物，如貓、狗、老鼠、家鼠、馬、豬、羊和牛等)體內時，這些提取物可以與醫學上可以接受的載體混合在一起，然後投入到患者體內。枸杞提取物的藥劑量可以根據一個熟悉這一技藝的人士之經驗加以確定，並隨接受治療的症狀、關聯的病理、瞄準的細胞類型以及接受治療的患者而加以變化。枸杞提取物的藥劑量可以在每天0.1毫克及每天1克之間變化，優選為每天1到500毫克、更優選10到100毫克。在整個治療過程中，體內投入可以採取一個劑量、持續性或間歇性方式的進行。
藥劑組合物可以採取片劑、錠劑、顆粒、膠囊、丸劑、針劑、栓劑或氣霧劑的形式。它們還可以採用有效成分在水性或非水稀釋劑中的懸浮液、溶液或乳液形式、糖漿、顆粒或粉末等形式。
雖然枸杞提取物可以採取單獨投入的方式，但它還可以以藥物製劑的形式出現，該製劑包含枸杞提取物連同一種或多種醫學上可以接受的載體及視需要可選的其它治療劑。每一載體必須是「可接受的」並與製劑中其它成分相容，且對受試者如人類患者無害。
藥物製劑可方便地以單位劑量形式出現，也可以採用加入枸杞提取物液態載體或細分的固態載體或兩者的方法進行製備，然後，如果必要，將之製備成型。
本發明適宜口服的製劑可以採用散劑的方式，如膠囊、扁膠劑或片劑，每一種都含有預定量的枸杞提取物；還可呈粉狀或顆粒狀；或呈一種含水或非水液態的溶液或懸浮液狀；或水包油液體乳劑或油包水液體乳劑。枸杞提取物也可以為大丸藥、幹藥糖劑或漿狀物。
片劑可以通過枸杞提取物的壓縮和成型進行製作，可根據需要添加一種或多種附屬成分。壓縮的片劑可以通過適當的機器壓縮鬆散形式的有機成分(如粉末或顆粒)而製備，如果需要，還可以與粘合劑(如聚乙烯吡咯酮、明膠、羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(如羥基乙酸澱粉鈉、交聯聚乙烯吡咯酮、交聯羧甲基纖維素鈉)和表面活性劑或分散劑。模製片劑可以採用適當的機器將粉末狀的化合物混合物用惰性液體稀釋劑溼化後經模製加工而成。如果需要，片劑還可以包衣或形成刻痕，並且可以配製成使那些有效成分緩慢地、而加以控制地釋放的形式，例如採用不同比例的羥丙基甲基纖維素，就可以達到所期望的釋放形式。根據需要，片劑還可以提供腸溶包衣，使其部分在腸內釋放而不是在胃部釋放。
適用於口腔局部投藥的製劑，包括風味化有效成分的錠劑，所述風味劑通常為蔗糖和阿拉伯樹膠或黃蓍膠；包括含惰性基質的枸杞提取物的芳香燻劑，所述惰性基質如凝膠和甘油，或蔗糖和阿拉伯樹膠；包括含適當液態載體的枸杞提取物的漱劑。
根據本發明，適用於局部投藥的藥劑組合物可以配製成一種藥膏、乳霜、懸浮液、洗劑、粉末、溶液、軟膏、凝膠、噴劑、氣霧劑或油狀物。此外，一種製劑可能包含一種貼片劑或敷料，如浸含枸杞提取物的繃帶或粘合劑膏藥，同時根據需要還可以含有一種或多種賦形劑或稀釋劑。
有些藥物製劑可以為一種局部塗敷用的含有枸杞提取物的藥膏或乳霜。當配製成一種藥膏時，提取物既可以與石蠟，也可以與水混溶式藥膏基質一起使用。此外，藥物成分可與水包油乳霜基質配製成一種乳霜。
如果需要，乳霜基質的水相可包括，例如，至少約30％w/w的多元醇，即具有兩個或多個羥基的醇，如丙二醇、丁烷-1、3-二醇、甘露醇、山梨糖醇、丙三醇和聚乙二醇及以上之混合物。局部用製劑可根據需要包括可促進枸杞提取物經由皮膚或其它感染區域吸收或穿透之化合物。這類真皮穿透增強劑的實際實施例包括二甲亞碸和及相關的類似物。
本發明乳狀液之油相可用現有技術的成分以任何現有技術的方式構成。而此油相可能僅僅包含一種乳化劑(即為熟知的利洩劑)，它還可以根據需要包括至少一種乳化劑與脂肪或油或脂肪與油之混合物。較理想的是，親水的乳化劑還與用作穩定劑的親脂乳化劑一起包括在內。優選既把油又把脂肪包括在內。總之，含有或未含有穩定劑的乳化劑組成了所謂的乳化蠟，蠟與油一起和/或脂肪組成了所謂的乳化藥膏，從而形成了乳霜製劑的油性分散相。
適用於本發明之製劑的利洩劑和乳化穩定劑包括Tween 60、Span 80、十六醇和十八醇混合物、肉豆寇醇、單硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸鈉。
由於該活性化合物在大多數用於醫藥學乳劑製劑的油中其溶解度都非常低，所以可根據所需求的化妝品特性選擇適當的油類或脂肪進行製劑。因此，乳霜最好應是具有適當的堅硬度的非油脂的、非染色的以及可清洗的產物，以避免從試管或其它容器中漏出。可以使用直鏈的或支鏈、單或二烷基酯類，如二異己二酸酯、硬脂酸異十六烷基酯、椰子脂肪酸丙二醇二酯、異丙基肉豆蔻酸酯、油酸癸酯、異丙基棕櫚酸酯、硬脂酸丁酯、2-乙基己基棕櫚酸酯或名為Crodamol CAP的支鏈酯類摻合物，優選後三種酯類。這些可以單獨使用，也可以根據所要求的特性結合使用。此外，可使用高熔點的脂質，如白色軟石蠟和/或液體石蠟或其它礦物油。
適用於眼睛局部投藥的製劑還包括眼藥水，其中之有效成分可溶解於或懸浮於適當的載體內，特別是這種有效成分的水溶劑。直腸投藥的製劑表現為具有適當基質的栓劑，包括，例如可可油和水楊酸鹽。
適用於陰道投藥的製劑可以是陰道栓劑、止血塞、乳霜、凝膠、軟膏、泡沫膠或噴霧劑等，這些製劑都含有枸杞提取物及一種或多種適宜的載體。
適用於鼻腔投藥的製劑(其載體為一種固態物質)包括顆粒大小從20微米到500微米左右的粗粉末，投藥的方式為鼻吸入式，即通過鼻腔從靠近鼻孔的容器內快速吸入粉末。而適用於投藥的液體載體製劑表現為鼻噴液、鼻腔滴液或採用噴霧器進行氣霧劑投藥，這些製劑包括枸杞提取物之水溶液或油溶液。
適用於腸胃外投藥的製劑包括水溶性或非水溶性的等滲消毒注射溶液，它們可能含有抗氧化劑、緩衝溶液、細菌抑制劑和使製劑與預期受體的血液等張的溶質；它還包括含懸浮劑、增稠劑的含水或非水的消毒懸浮液，和用來將枸杞提取物指定導向血液成分，或者一個或多個器官的脂質體或其它微顆粒系統。這些製劑可存在於單位劑量或多劑量密封容器之中，如安瓿和玻璃瓶中，並可以存放在一個冷凍乾燥(凍幹的)條件下，在使用之前僅需加入消毒的液體載體，如注射用水。即用的注射溶液和懸浮液可以從前面描述的消毒粉末、顆粒和片劑來進行製備。
除了以上特別提到的成分外，本發明的製劑可能包括其它業內常規的、與討論中製劑類型相關的藥劑，例如，那些適用於口腔投藥的製劑可能進一步包括諸如甜味劑、增稠劑和風味劑等之類的試劑。
枸杞提取物及包含一種或多種該提取物的組合物也可作為獸醫製劑的形式使用，可以採用業內常規的方法進行製備。
本發明進一步提供了一種醫療藥劑的篩選方法，以抑制新血管形成或內皮細胞的增長。其篩選要求如下(a)將一種試驗藥劑與適當的細胞或組織樣本接觸；(b)將適當細胞或組織樣本的分離樣本與有效治療量的枸杞提取物接觸，然後，(c)比較步驟a)樣本中的內皮細胞增長和步驟b)樣本中的內皮細胞增長，其中，步驟a)中用以抑制內皮細胞增長的任何試驗藥劑與步驟b)中的幾乎一樣，都可以用做抑制新血管形成或內皮細胞病理性增長的藥劑。
實施例1枸杞提取物的製備將20克幹枸杞子在250毫升的二次蒸餾水中漂洗兩次，然後在20-25℃溫度下使用200毫升的二次蒸餾水浸泡一晚。將浸泡後的枸杞子搗成糊狀，操作時應小心謹慎，避免壓碎或碾碎枸杞子裡的種子。將糊狀物放置過夜，採用預先用二次蒸餾水清洗過的Miracloth雙層進行過濾。這種混濁的濾出液通過離心法以每分鐘約7,000的轉數淨化30分鐘。上清液從沉澱物中輕輕倒出，獲得一種清澈的介乎橙色和紅色之間的溶液，然後在4℃溫度下使用截止分子量為1000MW的透析管進行透析過夜，用二次蒸餾水需更換三次。透析管內的這一液體經過凍幹就獲得了固態枸杞提取物。
內皮細胞化驗根據Connally等人的《模擬生物化學》(1986年)152136-140及修改稿中介紹的程序進行(Liang和Wong(2000)，《血管新生從分子到綜合的藥理學》，由Maragoudakis、Kluwer Academic/Plenum出版社編輯出版，紐約pp209-223)，各種不同濃度的固態枸杞提取物經過水溶後用於內皮細胞化驗之中。圖1顯示的是內皮細胞培養化驗結果說明，將枸杞提取物加入內皮細胞培養液可顯著抑制內皮細胞的生長，證明枸杞提取物是一種非常有效的內皮細胞生長抑制劑。枸杞提取物的凍幹樣本對於內皮細胞繁殖也具有類似的抑制效果，通過水進行的提取操作應在100℃以內的不同溫度下進行，例如4℃、20到25℃、80℃和100℃左右。
實施例2作為測定枸杞提取物藥劑數量的一個動物模型實施例，我們選擇了幾組裸鼠(Balb/cNCRnu/nu雌性，加州吉爾羅伊實驗室)，每組都採用皮下注射的方式嫁接約105到109高增生狀態的細胞，其定義如本文所述。當嫁接完成後，通過在嫁接的周圍採用皮下注射的方式投入提取物。測定嫁接尺寸減少的大小可以採用遊標卡尺每周檢查兩次。
實施例3在此，我們提供了測定本發明提取物在治療關節炎症時藥劑效果之動物模式實施例。受試者為美國緬因州傑克遜實驗室的MRL/lpr老鼠(MRL/MpJ-Faslpr)，對試驗或監測採用本發明的枸杞提取物治療關節炎症的功效非常有用。老鼠在投入了提取物後，在X光線的監控下，動物的關節和後腿的腫脹明顯減少，軟骨退化也有所下降，這都充分表明了這一提取物對治療關節炎症的積極效果。
實施例4在此，我們還提供了採用動物模型測定本發明提取物在治療關節炎症時的藥劑效果的另外一個例子。受試者為幾組Lewis老鼠(鼠齡8周；重30-150g，來自美國緬因州傑克遜實驗室)，採用二類(BII)牛骨膠原進行免疫處理誘發關節炎症狀。BII在400ug/ml的條件下在0.1M的乙酸中溶解。每隻老鼠都在尾巴的底部皮內注射了20ug(100ul)的乳劑，其中BII和ICFA(不完全Freund之佐劑)的量相等。當確定了關節炎症狀時，將本發明中的枸杞提取物投入到老鼠體內，然後以四級評分制對多種誘導性鼠體疾病進行為期28天的觀察評估，結果顯示，這種提取物對治療關節炎症有效。
權利要求
1.一種含有枸杞提取物的產品。
2.權利要求1的產品，其中，這種提取物是通過將枸杞投入到極性有機溶劑中或含水介質中製備的。
3.權利要求2的產品，其中，這種提取物是通過將枸杞投入到極性有機溶劑中製備的。
4.權利要求3的產品，其中，所述極性有機溶劑為乙醇。
5.權利要求2的產品，其中，這種提取物是通過將枸杞投入到含水介質之中製備的。
6.權利要求1的產品，不包含任何分子量為500到600的化合物。
7.權利要求1的產品，(1)不含硫胺、核黃素、胡蘿蔔素、隱黃質和玉米黃質，(2)不含核黃素、胡蘿蔔素、隱黃質和玉米黃質，(3)不含胡蘿蔔素、隱黃質和玉米黃質，(4)不含胡蘿蔔素和隱黃質，(5)不含胡蘿蔔素和玉米黃質，(6)不含隱黃質和玉米黃質，或(7)不含硫胺、核黃素、胡蘿蔔素、隱黃質或玉米黃質。
8.抑制內皮細胞病理性生長的一種方法，包括將權利要求1一定量的生長抑制劑產品投入到內皮細胞之中。
9.權利要求8的方法，其中，內皮細胞是組織和器官內的內皮細胞，可以取得組織或器官中新血管形成的抑制效果。
10.權利要求8的方法，其中，該產品被投入到體外的內皮細胞之中。
11.權利要求8的方法，其中，該產品被投入到體內的內皮細胞之中。
12.權利要求11的方法，其中，通過把有效量的該產品投放給患者，而將該產品投入到內皮細胞之中。
13.權利要求12的方法，其中，接受治療者需要抑制其病理性血管形成。
14.權利要求13的方法，其中，對治療有效的病症選自關節炎、基於新血管形成的皮膚病症狀、糖尿病視網膜病變、老年黃斑病變、再狹症、毛細血管擴張、青光眼、瘢痕瘤、角膜移植排斥、創傷性肉芽、血管纖維瘤、遺傳性出血性毛細血管擴張症、心肌血管新生、牛皮癬、硬皮病及與病理性血管形成或新血管形成有關的炎症。
15.權利要求14的方法，其中，關節炎是指風溼性關節炎或骨關節炎，與病理性血管新生或新血管形成有關的炎症指牛皮癬或痔瘡。
16.權利要求12的方法，其中，接受治療者為哺乳動物。
17.權利要求16的方法，其中，哺乳動物為寵物、家畜或人類患者。
18.權利要求12的方法，其中，接受治療者患有癌症，由此癌細胞轉移得到預防、阻止、減少、減緩或推遲。
19.一種用來抑制新血管形成或內皮細胞生長的藥劑之篩選方法，包括以下步驟a.將試驗藥劑與細胞或組織樣本接觸；b.將分離的細胞或組織樣本與治療有效量的權利要求1的產品接觸；以及c.比較步驟a)樣本中的內皮細胞增長和步驟b)樣本中的內皮細胞增長，其中，步驟a)中用以抑制內皮細胞增長的任何試驗藥劑與步驟b)中的幾乎一樣，都可以用做抑制新血管形成或內皮細胞病理性增長的藥劑。
20.治療與病理性新血管形成相關疾病之患者的藥盒，包括治療有效劑量的權利要求1產品以及治療使用之說明書。一種製備權利要求1中產品的方法，包括以下步驟把枸杞或其部分投入到溶劑中，形成液體部分或固態部分，然後把液體部分與至少一些固態部分分離開來，以獲得作為本產品的液體物質。
22.權利要求21的方法，其中，步驟b後，將溶劑除去，從而獲得本產品的固態物質。
23.權利要求21的方法，其中，溶劑指極性有機溶液或含水介質。
24.權利要求23的方法，其中，溶劑是醇。
25.權利要求24的方法，其中溶劑是甲醇或乙醇。
26.權利要求23的方法，其中溶劑指含水介質。
27.權利要求26的方法，其中溶劑是含水緩衝液。
28.權利要求26的方法，其中溶劑是水。
29.權利要求28的方法，其中溶劑是二次蒸餾水。
30.權利要求21的方法，其中，步驟a是通過將枸杞果實或其部分投入到溶劑之中，以形成液體部分及固態部分完成的。
31.權利要求30的方法，其中，所述果實在投入到溶劑之前被壓碎、過篩或磨碎。
32.權利要求31的方法，其中，果實裡的種子不應被壓碎、過篩或磨碎。
33.權利要求21的方法，其中，步驟b是通過把液體部分與所有的固態部分分離開來，以獲得本產品的液體物質而完成的。
34.權利要求21的方法，其中，步驟a是將乾燥的枸杞子浸入水中以獲得浸溼的枸杞果實，然後將其過篩、壓碎或磨碎成糊狀，但不要過篩、壓碎或磨碎枸杞子裡面的種子，該糊狀物質由液相和固相組成；然後，步驟b是通過把液相與固相分離來完成的，以獲得本產品的液體物質。
35.權利要求34的方法，其中，液相與固相採用離心法分離，然後傾出所得上清液作為產品。
36.權利要求34的方法，其中，在步驟b中將液相與固相分離後，將分子重量約400到600的化合物從液相中除去，得到本產品的液體物質。
37.權利要求36的方法，其中，採用透析法，將分子重量約400到600的化合物從液相中除去。
38.權利要求36的方法，其中，將水從液體中除去，得到本產品的固體物質。
39.一種藥用組合物，包括權利要求1的產品和醫學上可接受的藥用載體。
40.權利要求39的藥用組合物，進一步包括至少一種其它治療活性藥劑。
41.權利要求40的藥用組合物，其中，至少一種其它治療活性藥劑選自至少一種類固醇、非類固醇抗炎藥物、硫代蘋果酸鈉、金硫葡糖、D-青黴胺、氯喹、羥基氯喹、硫氮磺吡啶、咪唑硫嘌呤、或抗腫瘤藥劑及其他抗血管增生或抗新血管形成製劑。
42.權利要求41的藥用組合物，其中，至少一種其它治療活性藥劑選自至少一種下列藥劑，如α-幹擾素、β-幹擾素、γ-幹擾素、2號白介素、阿地白介素、惠而血添(重組人粒細胞集落刺激因子)、沙格司亭(重組人粒細胞巨噬細胞集落刺激因子)、左咪唑、BCG疫苗、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、氟脫氧尿苷、阿糖胞苷、5-氮雜胞苷、巰基嘌呤、硫鳥嘌呤、pentastatin、阿氟酸、克拉屈賓、二氟胞嘧啶、二氯甲基二乙胺、苯丁酸氮芥、環磷醯胺、左旋溶肉瘤素、洛莫司汀、亞硝(基)脲氮芥、司莫司汀、鏈佐星、氮烯咪胺、白消安、三胺硫磷、六甲蜜胺、異環磷醯胺、順鉑、碳鉑、甲基苄肼、放線菌素D、普卡黴素、博來黴素、亞德裡亞黴素、道諾黴素、去甲柔紅黴素、mitoxanthrone、絲裂黴素、長春新鹼、長春鹼、長春瑞賓、依託泊甙、替尼泊甙、太平洋紫杉醇、鹽酸拓撲替康、天(門)冬醯胺酶、羥基脲、氯苯二氯乙烷、地塞米松、氨格魯米特、雌二酮、乙烯雌酚、羥孕酮、甲孕酮、甲地孕酮、睪丸激素、氟羚甲基睪丸素、它莫西芬、亮丙瑞林和氟他胺。
43.權利要求12的方法，進一步包括向接受治療者施用抗癌療法或另一種抗血管新生或新血管形成療法。
44.權利要求43的方法，其中，所述抗癌症療法為放射療法。
45.權利要求13的方法，其中，接受治療者患有的卡波西氏肉瘤或血管纖維瘤的治療取得了實效。
全文摘要
本發明提供了枸杞提取物，用於抑制、幹擾和/或控制細胞組織的病理性血管新生或新血管形成。通過把有效量的枸杞提取物送入到細胞或組織中，本發明還提供了一種抑制組織中新血管形成的方法。這裡提供的還有一種通過向受治者投入有效量的枸杞提取物而治療內皮細胞高增生和/或新血管形成相關的某種疾病之方法。
文檔編號A61KGK1741806SQ200380108522
公開日2006年3月1日 申請日期2003年11月10日 優先權日2002年11月8日
發明者汪建平, 汪明中 申請人:汪建平, 汪明中