新的芳氧基－烷基－二烷基胺類化合物的製作方法
2023-10-30 20:02:47
專利名稱：新的芳氧基－烷基－二烷基胺類化合物的製作方法
技術領域：
本發明提供了用於生物活性化合物生產的新化合物及它們的生產方法。更具體來說，本發明提供了可用於醫藥產品生產的新的芳氧基-烷基-二烷基胺類化合物。
背景技術：
基質金屬蛋白酶(MMPs)是與結締組織和基膜的病理性破壞相關聯的一組酶[Woessner，J.F.，Jr.FASEB J.1991，5，2145；Birkedal-Hansen，H.；Moore，W.G.I.；Bodden，M.K.；Windsor，L.J.；Birkedal-Hansen.B.；DeCarlo，A.；Engler，J.A.Crit.Rev.Oral Biol.Med.1993，4，197；Cawston，T.E.Pharmacol.Ther.1996，70，163；Powell，W.C.；Matrisian，L.M.Cur.Top.Microbiol.and Immunol.1996，213，1].
這些含有肽鏈內切酶的鋅是由幾種包括膠原酶，溶基質素和白明膠酶的酶亞群組成。在這些種類中，白明膠酶是與腫瘤生長和擴散最為密切相關的MMPs，而膠原酶與骨關節炎發病機理有關係。.
防止婦女絕經後骨質損耗的激素替代療法的應用已有先例。正常的規程是要求添加雌激素，該雌激素是含有從天然產物中分離出來的雌酮，雌三醇，乙炔基雌二醇或者結合雌激素的製劑(即，PremarinWyeth-Ayerst結合雌激素)。但對於一些病人來說，由於未結合雌激素(未結合孕激素的雌激素)對子宮組織具有增生作用，因此，不宜採用上述治療。增生作用增加了患子宮內膜異位和/或子宮內膜癌的危險性。目前，對於未結合雌激素對乳腺組織的作用還不大清楚，但也有一些研究。顯然，我們需要既能抑制骨質流失同時又能使其對子宮和乳腺的增生作用最小化的雌激素。在切除卵巢大鼠模型及人體臨床實驗中，某些非甾體類抗雌激素顯示出具有保留骨質作用。例如，三苯氧胺(由德拉瓦洲，威名頓市的Zeneca製藥公司生產的用Novadex商標銷售的枸櫞酸三苯氧胺)是一種治療乳腺癌有效的緩解劑，並且證明其對人體骨質具有雌激素拮抗樣作用。然而，它在子宮內仍然是一種部分拮抗劑，因而這引起了一些關注。雷洛昔芬，一種苯噻吩抗雌激素，其在抑制骨質流失的同時，在對卵巢切除後的大鼠子宮增長的促進作用小於三苯氧胺。在文章「雌激素類似物組織選擇性作用」中披露了關於組織選擇性雌激素的合適的評論。Bone第17卷，第四期，1995年十月。181S-190S。
本發明提供了可用於生產抗雌激素和MMP抑制效用的藥用化合物的新的中間體。如下結構的4-氨基甲醯甲氧基-甲氧基-苯甲醯氯化合物的用途公開在NL6402393中；1964；及1965年，62，7698中的化學文摘上。
在Sharpe，C.J.等人寫的醫藥化學雜誌，1972，15，523和Jones，C.D.等人寫的醫藥化學雜誌，1984，27，1057中公開了如下結構式4-(2-二烷基氨基-乙氧基)苯甲醯氯化合物的用途。
同樣地，在Huang，F.C.等人寫的醫藥化學雜誌，1990，33，1194中也公開了如下結構式的4-(2-喹啉甲氧基)苯甲醯氯化合物的用途。
發明概述本發明提供了可用於生產藥物活性化合物的新化合物及其生產方法。本發明化合物尤其可作為中間體用於生產藥物化合物，例如，低分子量的基質金屬蛋白酶非肽抑制劑(舉例來說，是白明膠酶，溶基質素及膠原酶)和TNF轉換酶(TACE，瘤壞死因子)，轉換酶)。它們可用於治療與這些酶相關聯的疾病，如關節炎，腫瘤轉移，組織潰瘍，異常傷口癒合，牙周病，骨疾病，蛋白尿，動脈瘤主動脈疾病，創傷性關節損傷後軟骨退化損失，神經系統的脫髓鞘病及HIV感染。此外，本發明化合物還可用於生產像雌激素拮抗劑那樣通過降低膽固醇並防止骨質損失來起作用的一類化合物。因此，這些化合物可用於治療許多疾病，包括骨質疏鬆症，前列腺肥大，不孕症，乳腺癌，子宮內膜增生和癌症，心血管疾病，避孕，老年性痴呆及黑色素瘤。
本發明化合物包括結構式(I)新化合物及其可藥用鹽 其中R1和R2獨立地選自H；C1-C12烷基，優選C1-C6烷基；或C1-C6全氟化烷基，優選-CF3；X是離去基團，如滷素，-O-SO2-CH3，-O-SO2-CF3，或如下述結構的基團 Z選自-NO2，滷素，-CH3或-CF3；A選自-O-或-S-，-SO-或-SO2-；m是0到3整數，優選為1；R3，R4，R5和R6獨立地選自H，滷素，-NO2，烷基(優選C1-C12烷基，更優選C1-C6烷基)，烷氧基(優選C1-C12烷氧基，更優選C1-C6烷氧基)，C1-C6全氟化烷基(優選-CF3)，OH或C1-C4酯或烷基醚，-CN，-O-R1，-O-Ar，-S-R1，-S-Ar，-SO-R1，-SO-Ar，-SO2-R1，-SO2-Ar，-CO-R1，-CO-Ar，-CO2-R1，或-CO2-Ar；Y選自a)具有如下結構的基團
其中R7和R8獨立地選自H，C1-C6烷基，或苯基。
b)選自含有至多兩個-O-，-NH-，-N(C1-C4烷基)-，-N＝和-S(O)n-的雜原子的5元飽和，不飽和或部分不飽和雜環，其中n是0-2的整數，該雜環任選被1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，(C1-C4)烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，任選由1-3個下述取代基取代的苯基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2；c)選自含有至多兩個-O-，-NH-，-N(C1-C4烷基)-，-N＝和-S(O)n-雜原子的6元飽和，不飽和或部分不飽和雜環，其中n是0-2的整數，該雜環任選被1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，(C1-C4)烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，任選由1-3個下述取代基取代的苯基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2；d)選自含有至多兩個-O-，-NH-，-N(C1-C4烷基)-，-N＝和-S(O)n-的雜原子的7元飽和，不飽和或部分不飽和雜環，其中n是0-2的整數，該雜環任選被1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，任選由1-3個下述取代基取代的苯基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2；或e)含有6-12個橋連或稠合碳原子並且至多兩個雜原子的雙環雜環，所述雜原子選自-O-，-NH-，-N(C1-C4烷基)-，和-S-(O)n-，其中n是0-2的整數，所述雜環任選被1-3個取代基取代，所述取代基分別選自氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，任選被1-3個下述取代基取代的苯基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2；應當理解，在每一個可能出現的例子中，在以上一般性的描述及本發明化合物的其它基團中，R1和R2獨立地選自所列出的取代基基團。即使在同樣的結構中發現有一個以上的R1或R2，在本發明化合物的任何結構式中，任何所列出的R1不必代表和另外的R1同樣的取代基，R2也不必是和任何另外的R2同樣的取代基。
在上述描述中，符號「Ar」表示可任選被一個或多個選自滷素，C1-C6烷基或-CF3取代基取代的單環或多環芳基或者雜芳基。優選的雜芳基實例包括蒽基，菲基，以及更為優選的苯基，異丙苯基，萊基，甲苯基，二甲苯基，及萘基。優選雜芳基的實例包括吲嗪基，吲唑基，嘌呤基，喹嗪基(quinozinyl)，異喹啉基，喹啉基，酞嗪基，萘啶基，喹喔啉基，喹唑啉基，噌啉基，及喋啶基等等，還有更優選基團吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基(pyridizinyl)及吲哚基。
本發明包括從有機酸或無機酸進行的加成反應形成的可接受鹽。可採用諸如鹽酸，氫溴酸，氫碘酸，硫酸，磷酸，硝酸的無機酸，可採用諸如乙酸，丙酸，檸檬酸，馬來酸，蘋果酸，酒石酸，苯二甲酸，丁二酸，甲磺酸，甲苯磺酸，萘磺酸，樟腦磺酸，苯磺酸的有機酸。已知，擁有鹼性氮的化合物能夠和許多不同的酸配合(無論是質子酸還是非質子酸)，而且本發明化合物通常優選以酸加成鹽的形式服用。此外，本發明還包括可用有合適反應性的烷基化試劑如滷化烷或滷化苯與其側鏈的親核胺反應而製得的本發明化合物的季銨鹽。
本發明優選具有下述結構式(I)及其可藥用鹽
其中R1和R2獨立地選自H；C1-C12烷基，優選C1-C6烷基；或C1-C6全氟化烷基，優選-CF3；X是離去基團，如滷素，-O-SO2-CH3，-O-SO2-CF3，或具有如下結構的基團 Z選自-NO2，滷素，-CH3或-CF3；A選自-O-或-S-，-SO-或-SO2-；m是0到3整數，優選1；Y選自a)具有如下結構的基團 其中R7和R8獨立地選自H，C1-C6烷基或苯基。
b)選自噻吩，呋喃，吡咯，咪唑，吡唑，噻唑，異噻唑，異噁唑，或噁噻烷(oxathiolane)的基團，所述基團可任選被1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，任選1-3個下述取代基取代的苯基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2；
c)選自吡啶，吡嗪，嘧啶，噠嗪，哌啶，嗎啉，和吡喃的基團，所述基團可任選被1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1- C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，任選1-3個下述取代基取代的苯基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2；d)選自氮雜環庚因，二氮雜環庚因，氧雜氮雜環庚因，硫雜氮雜環庚因，噁庚英(oxapin)，噻庚英(thiepin)的基團，該基團任選被1-3個獨立地選自下述取代基組成的基團取代氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，任選被1-3個下述取代基取代的苯基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2；或e)選自苯並呋喃，異苯並呋喃，苯並噻吩，吲哚，異吲哚，中氮茚，吲唑，嘌呤，喹嗪，異喹啉，喹啉，酞嗪，吡啶並吡啶，喹喔啉，喹唑啉及噌啉的雙環雜環，所述的雙環雜環可任選由1-3個獨立地選自下述取代基的基團取代氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，任選被1-3個下述取代基取代的苯基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2；本發明所更優選具有下述結構式(I) 其中R1和R2獨立地選自H；C1-C12烷基，優選C1-C6烷基；或C1-C6全氟化烷基，優選-CF3；X是離去基團，如滷素，-O-SO2-CH3，-O-SO2-CF3，或具有如下結構的基團 Z選自-NO2，滷素，-CH3或-CF3；A選自-O-或-S-，-SO-或-SO2-；m是0到3整數，優選1；Y選自a)具有如下結構的基團 其中R7和R8獨立地選自H，C1-C6烷基或苯基；或b)選自噻吩，呋喃，吡咯，咪唑，吡唑，噻唑，吡啶，吡嗪，嘧啶，噠嗪，哌啶，吲哚或苯並呋喃的基團，其可任選被1-3個獨立地選自下述取代基的基團取代氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，任選被1-3個下述取代基取代的苯基(C1-C4)烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2。
本發明更優選的化合物是那些有如下通式的化合物及其可藥用鹽。
其中
R1和R2獨立地選自H，C1-C6烷基；或C1-C6全氟化烷基，在全氟化烷基基團中，優選-CF3；R3，R4，R5和R6獨立地選自H，OH或其C1-C4酯或烷基醚，滷素，-CN，C1-C6烷基或三氟甲基，m是0到3整數，優選1；R7和R8獨立地選自H，C1-C6烷基，或由(CH2)p-結合成的環，其中p是2到6的整數，此環任選被至多三個選自下述的取代基的基團取代氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，-CO2H，-CN，-CONH(C1-C4)，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2(C1-C4)，-NHCO(C1-C4)和-NO3；並且X的定義如上。
本發明更優選的化合物是那些有如下通式的化合物及其可藥用鹽。
其中R1和R2獨立地選自H，C1-C6烷基；或C1-C6全氟化烷基，在全氟化烷基基團中，優選-CF3；R3，R4，R5和R6獨立地選自H，OH，或其C1-C4酯或烷基醚，滷素，-CN，C1-C6烷基，或三氟甲基；m是0到3整數，優選1；A選擇於-S-，-SO-或-SO2-；R7和R8獨立地選自H，C1-C6烷基，或由(CH2)p-結合成的環，其中p是2到6的整數，此環任選被至多三個選自下述基團的取代基取代氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，-CO2H，-CN，-CONH(C1-C4)，-NH3，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2(C1-C4)，-NHCO(C1-C4)和-NO2；並且X的定義如上。
本發明最優選的化合物是那些有如上結構式II或III的化合物及其可藥用鹽。其中R3-R6的定義如上；X選自Cl，-CF3或-CH3；Y是具有下述結構的基團 R7和R8以-(CH2)r連接在一起形成一個環，其中r是4到6的整數，此環任選被至多三個選自如下基團的取代基取代氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，(C1-C4)羥烷基，-CO2H，-CN，-CONH(C1-C4)，-NH3，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2(C1-C4)，-NHCO(C1-C4)，-NO2。
當R7和R8以-(CH2)p或-(CH2)r連接在一起形成環時，優選是，所形成的環可任選被1到3個選自如下基團的取代基取代C1-C3烷基，三氟甲基，滷素，氫，苯基，硝基，-CN.
本發明還包括了製備上述化合物的方法。
本發明化合物可以由包含下述步驟之一的方法來製備a)採用適當的方法，例如，使用含有離去基團X的滷化劑，硫醯化劑或醯化劑，將下述結構式的醇轉化為相應的結構式I化合物。
其中，m，A，Y和R1-6的定義如上，b)將結構式I的化合物氧化，其中A是S，得到相應的結構式I的化合物，其中A是SO或-SO2-；或c)將結構式I的化合物轉變為其可藥用鹽。
結構式(A)化合物可以通過與如下結構式的酚
其中P是羥基保護基團而R1-6的定義如上(例如，R1和R2分別是氫或C1-C12烷基)，與如下結構式化合物反應， 其中Y，R1，R2和m的定義如上，滷素是F，Cl，Br或I並且除去移去保護基團，可以製得式(A)化合物。
″A″是氧時的本發明化合物可以由下述工藝步驟合成a)將具有下述結構式的相應的羥基苯甲醛， 其中R3-R6的定義如上，用具有下述結構式的相應的滷代烷基進行烷基化反應 其中Y，R1，R2和m與上文提到的通式結構基團和子結構基團定義相同，滷素是Cl，F，Br或I，製得如下結構式的醛
b)還原步驟a)的醛產品得到有如下結構式的相應的醇化合物 c)用諸如HCL/THF將步驟b)的醇轉變成它的鹽酸鹽。
d)在像吡啶或三乙基胺這樣的鹼存在的情況下，例如，通過用甲磺醯氯，甲苯磺醯氯，或的三氟醋酸酐進行處理將醇轉變成一個優選的離去基。
同樣地，本發明還提供了經過如下的步驟生產″A″是S時的本發明化合物的方法。
a)將下式化合物 用下式的烷基化試劑進行烷基化， 其中Y和m定義如上，滷素選自Cl，F，Br或I，製得出如下結構式的醛化合物 b)用例如硼氫化鈉將步驟a)的醛產品還原成如下結構式的醇化合物 c)用氣體氯化氫處理步驟b)的醇化合物，得到它的鹽酸化物；和d)例如，在像吡啶或三乙基胺這樣的鹼存在的情況下，通過用甲磺醯氯，甲苯磺醯氯，或三氟醋酸酐處理，或用鹽酸進行處理，將步驟c)的醇鹽酸物轉變成優選離去基，形成相應的苄基氯；e)用諸如m-氯過苯甲酸任選完成從硫到亞碸或碸的控制氧化。
上述步驟a)的起始原料，苯硫氧化物醛(thiophenoxide)用例如氫化鈉處理，可以從相應的苯硫酚醛產生，這可以被看作是上述方法的一步，反之亦可。
發明詳述下面反應流程I-IV說明了不同的變量「Y」本發明化合物的合成過程。每一步驟所用的試劑或溶劑僅僅是為了說明，其試劑或溶劑可以用本領域技術人員已知的其它試劑或溶劑替代。
反應流程I a，R7R8＝(CH2)5；b，R7R8＝(CH2)6；c，R7＝R8＝CH3和R3＝H.
反應流程II 反應流程IIa 以4-(2-哌啶基乙氧基)苄醇的合成為例，反應流程IIa提供了本發明苄醇的另一種合成路徑，在合成中，4-羥基苄醇用適當的芳氨基烷基氯處理得到其相應的烷氧基苄醇。在反應流程IIa的具體實施例中，4-羥基苄醇在K2CO3/Me2CO的存在下用1-(2-氯乙基)哌啶鹽酸化物處理得到4-(2-哌啶基乙氧基)苄醇。
反應式IIa也更具體地說明了本發明另外優選實施方案。本發明還包括生產如下結構式的有用的醇化合物的方法。
其中Y代表Y基團，其任選的取代基如上一般所描述的任意取代基。
在該方法的優選基團中，Y代表a)如下結構的基團 其中R7和R8獨立地選自H，C1-C6烷基，或苯基。
b)含有一個或兩個氮原子的五元，六元或七元的不飽和或部分不飽和的雜環，該雜環的氮原子與雜環有乙氧基橋相連接，並且該雜環任選被選自如下基團的1到3個基團取代滷素，C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，-CF3或-NO2。
該方法優選Y基團是氮雜(azepine)，吡咯，咪唑啉，咪唑烯，六亞甲基亞胺，吡咯烷，吡唑烷，吡唑啉，哌啶，哌嗪。
該方法包含在鹼性介質中，將用4-羥基苄醇與下述結構式化合物的鹽如醋酸鹽，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，或氫碘酸鹽的反應 其中Y定義如上。
該反應在有機溶劑或溶劑系統中進行，例如，在丙酮，二甲基甲醯胺或四氫呋喃中進行，介質的pH值優選保持在pH8以上，更優選在pH9以上。
反應流程III 反應流程IV 利用類似的步驟，按如下反應流程V可以製得「A」是硫的本發明化合物。第一步反應，苯硫氧化物可以用氫化鈉反應製得，接著進行烷化反應，然後用諸如硼氫化鈉或使用氫或負載於碳上的蘭尼鎳，鉑或鈀催化劑進行還原成相應的醇。所得到醇化合物然後用氣體氯化氫處理得到它的鹽酸鹽，再接著用鹽酸處理形成其苄基氯化合物。然後，例如，用m-氯過苯甲酸來進行控制硫轉變亞碸甚至碸從而得到最終產物。
反應流程V 以下用的實施例說明本發明但並不限制於本發明的範圍。
在上述反應過程中，鄰近於X基團R1和R2表示氫的結構式(I)化合物是由伯醇製備的，(例如，反應流程I，3a-c化合物)，所述伯醇本身是通過還原其醛前體而製備的(例如，反應流程I，2a-c化合物)。
鄰近於X基團的R1和R2之一是烷基或全氟烷基，另一為氫的類似的式(I)化合物可以從適當的仲醇來製備，所述仲醇本身可以從其相應的酮來製備，所述酮是例如具有R1是烷基或全氟烷基的基團COR1的化合物。
分別選自烷基或全氟烷基的R1和R2都鄰近於X基團化合物的類似的式(I)的化合物可以通過合適的叔醇來製備。
實施例14-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基醛(2a)向攪拌均勻的p-羥基苯甲醛(83.5g，0.68mol，1.05eq.)和K2CO3(224g，1.6mol，2.5eq.)DMF(1L)淤漿中，加入1-(2-氯乙基)哌啶鹽酸鹽(120g，0.65mol，1.0eq.)。反應混合物經劇烈的機械攪拌回流兩個小時，此時，薄層分析分析結果顯示出沒有初始原料，幾乎全部是產品(EtOAc/己烷1∶1)。反應混合物經硅藻土(Celite)過濾後，用EtOAc(2L)稀釋，然後用水(3×500ml)洗滌，用旋轉蒸發器濃縮有機層得到147g(97％)黃色油狀物的醛化合物(2a)。
1H NMR(CDCl3/TMS)9.87(s，1H)，7.81(d，2H，J＝8.7Hz)，7.01(d，2H，J＝8.7Hz)，4.18(t，2H，J＝6.03Hz)，2.79(t，2H，J＝6.03Hz)，2.51(m，4H)，1.6-1.4(m，6H)實施例24-(2-六亞甲基亞胺-1-基--乙氧基)-苄基醛(2b)向攪拌均勻的NaH(65g，60％油分散液，1.6mol，2.2eq.)的DMF(500mL)溶劑淤漿中，在0℃下，滴加p-羥基苯甲醛的鹽酸鹽溶液(90g，0.74mol，1.0eq.)。將反應混合物攪拌30分鐘，然後分批加入4-[2-(六亞甲基亞胺)]乙基氯(153g，0.77mol，1.0eq.)。將反應混合物攪拌1小時。此時，薄層分析分析結果顯示出幾乎沒有初始原料，幾乎全部是產品(EtOAc/己烷1∶1)。反應混合物用水(1L)稀釋後，用乙醚(5L)萃取。將有機層用MgSO4乾燥後，用旋轉蒸發器濃縮有機層得到176.8g(97％)黃色油狀物的醛化合物(2b)。
1H NMR(CDCl3/TMS)9.87(s，1H)，7.81(d，2H，J＝8.7Hz)，7.02(d，2H，J＝8.7Hz)，4.14(t，2H，J＝6.09Hz)，2.98(t，2H，J＝6.14Hz)，2.78(m，4H)，1.66-1.61(m，8H)實施例34-(2-二甲氨基-乙氧基)-苄基醛(2c)向攪拌均勻的p-羥基苯甲醛(9.54g，0.078mol，1.00eq.)和K2CO3(27g，0.195mol，2.5eq.)的DMF(100mL)淤漿中加入1-(2-氯乙基)二甲基胺的鹽酸鹽(11.26g，0.078mol，1.0eq.)在60-70℃下，將反應混合物攪拌2個小時。此時，薄層分析分析結果顯示出沒有初始原料，幾乎全部是產品(EtOAc/己烷/Et3N 3∶7∶1)，將反應混合物到入冰水混合物中(200mL)，用Et2O(3×200mL)萃取。將有機層用MgSO4乾燥後，用旋轉蒸發器濃縮有機層得到5.9g(39％)略帶桃紅色的液體醛化合物(2c)。
1H NMR(CDCl3/TMS)9.88(s，1H)，7.8(d，2H，J＝8.7Hz)，7.02(d，2H，J＝8.7Hz)，4.15(t，2H，J＝5.64Hz)，2.77(t，2H，J＝5.64Hz)，2.35(s，6H).
實施例44-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯甲醇(3a)在0/+5℃下，向攪拌了的醛化合物2a(115g，0.494mol，1.0eq.)甲醇(360mL)溶液中分批加入硼氫化鈉(9.44g，0.249mol，0.5eq.)溶液。將反應混合物攪拌30分鐘，此時，薄層分析分析結果顯示出沒有初始原料，幾乎全部是產品(EtOAc/己烷/三乙基氨3∶7∶1)。將反應混合物到入水中(1.1L)，用二氯甲烷(3×550mL)萃取，然後用MgSO4乾燥。用旋轉蒸發器濃縮溶液得到91.6g(80％)在有晶種時能立即結晶的稠密油狀的醇化合物3a。
1H NMR(CDCl3/TMS)7.23(d，2H，J＝8.5Hz)，6.80(d，2H，J＝8.5Hz)，4.56(s，2H)3.99(t，2H，J＝6.12Hz)，2.69(t，2H，J＝6.14Hz)，2.47(m，4H)，1.6-1.25(m，6H)13C NMR(DMSO-d6)158.23，135.34，128.70，114.84，66.42，63.44，58.27，55.29，26.45，24.80實施例54-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苯甲醇(3a)將4-羥基苯甲醇(6.2g，0.005mol)溶解於氫氧化鈉水溶液中(5N，30mol)。加入甲苯(30mL)，接著加入1-(2-氯乙基)哌啶鹽酸鹽(9.29g，0.05mol)和溴化苄基三乙基銨(0.3g)。劇烈攪拌反應混合物並加熱1個半小時。分層，水層用甲苯(2×15mL)萃取。合併有機萃取液並用水(50mL)和鹽水(50mL)洗滌，用硫酸鈉乾燥，用旋轉蒸發器濃縮得到8.725g(75％)黃粽色油狀醇化合物(3a)。
實施例64-(2-六亞甲基亞胺-1-基--乙氧基)-苯甲醇(3b)在0/+5℃下，向攪拌的醛化合物2b(200g，0.72mol，1.0eq.)甲醇(400mL)溶液中，分批加入硼氫化鈉(15.6g，0.41mol，0.57eq.)溶液。將反應混合物攪拌30分鐘，此時，薄層分析分析結果顯示出沒有初始原料，幾乎全部是產品(EtOAc/己烷/三乙基氨3∶7∶1)。將反應混合物用水稀釋(400mL)，再用二氯甲烷(3×400mL)萃取，然後用MgSO4乾燥。用旋轉蒸發器濃縮溶液得到201g(100％)稠密油狀的醇化合物3b。
1H NMR(CDCl3/TMS)7.27(d，2H，J＝8.5Hz)，6.87(d，2H，J＝8.5Hz)，4.60(s，2H)，4.05(t，2H，J＝6.21Hz)，2.93(t，2H，J＝6.15Hz)，2.77(m，4H)，1.7-1.5(m，8H)實施例74-(2-二甲基氨基-乙氧基)-苯甲醇(3c)在22℃下，向攪拌的醛化合物2c(5.9g，0.031mol，1.0eq.)的甲醇(20mL)溶液中，分批加入硼氫化鈉(0.58g，0.015mol，0.5eq.)。將反應混合物攪拌30分鐘，此時，薄層分析分析結果顯示出沒有初始原料，幾乎全部是產品(EtOAc/己烷/三乙基氨5∶5∶1)將反應混合物用水稀釋(50mL)，再用二氯甲烷(3×40mL)萃取，然後用MgSO4乾燥。用旋轉蒸發器濃縮溶液得到5.25g(88％)稠密油狀的醇化合物3c。
1H NMR(CDCl3/TMS)7.25(d，2H，J＝8.64Hz)，6.85(d，2H，J＝8.64Hz)，4.52(s，2H)，3.99(t，2H，J＝5.88Hz)，2.67(t，2H，J＝5.79Hz)，2.29(s，6H)實施例8(4-氯甲基-苯氧基-)-乙基-哌啶-1-基-鹽酸鹽(1a)將醇化合物3a(61.3g，0.26mol，1eq)四氫呋喃(500mL)的溶液冷卻到0/-5℃(冰水浴)，然後鼓入氣體氯化氫。持續鼓氣直至反應混合物不再增稠，撤掉冰水浴，將亞硫醯氯(29mL，0.39mol，1.5eq.)加入到鹽酸鹽的稠密淤漿(4a)中，將混合物加熱到50℃直至溶液澄清。再將反應混合物冷卻到-3℃，然後攪拌30分鐘。過濾得到白色固體並乾燥得到72g(96％)的氯化物1a。
4a1H NMR(DMSO-d6)10.9(s，HCl)，7.25(d，2H，J＝8.5Hz)，6.94(d.2H，J＝8.5Hz)，4.42(m，4H)，3.41(m，4H)1a1H NMR(DMSO-d6)11(br s，HCl)，7.39(d，2H，J＝8.5Hz)，6.99(d，2H，J＝8.5Hz)，4.74(s，2H)，4.46(m，2H)，3.45(m，4H)，2.69(m，2H)and 1.9-1.2(m，6H)實施例9(4-氯甲基-苯氧基-)-乙基-六亞甲基亞胺-1-基-鹽酸鹽(1b)在0/+10℃下，向醇化合物3b(179g，0.72mol，1eq)的四氫呋喃(300mL)溶液中滴加鹽酸溶液(263mL的四氫呋喃中含有26.3gHCl，0.72mol，1.0eq.)形成白色沉澱物，將亞硫醯氯(80mL，1.1mol，1.5eq.)加入到稠密的鹽酸鹽淤漿(4b)中，將混合物加熱到50℃直至溶液澄清。將反應混合物濃縮到350mL並放置冰箱裡過夜。過濾得到的白色固體，用冷四氫呋喃(100mL)洗滌並乾燥得到147g(67％)的氯化物1b。
1H NMR(DMSO-d6)11(br s，HCl)，7.40(d，2H，J＝8.6Hz)，7.00(d，2H，J＝8.6Hz)，4.74(s，2H)，4.44(t，2H，J＝5.25)，3.64-3.39(m，4H)，3.25-3.17(m，2H)，1.84-1.54(m，8H)實施例10(4-氯甲基-苯氧基-)-乙基-二甲基氨鹽酸鹽(1c)向醇化合物3c(5.25g，0.027mol，1eq)四氫呋喃(100mL)溶液中，在0/+25℃下，鼓入氣體氯化氫15分鐘，形成白色沉澱物。將亞硫醯氯(6mL，9.6g，0.081mol，3.0eq.)加入到稠密的鹽酸鹽淤漿(4b)中，將混合物加熱到30℃直至溶液澄清，將反應混合物濃縮到350mL並放置冰箱裡過夜。過濾得到的白色固體，用冷四氫呋喃(100mL)洗滌並乾燥得到4.57g(68％)的氯化物1c。
在本發明化合物生產的有藥物活性的化合物之中作為雌激素劑使用的是2-苯基-1-[4-(2-氨基乙氧基)-苄基]-吲哚類化合物。這些化合物包括有下述結構式IV和結構式V的化合物
其中R11選自H，OH，或其C1-C12酯(直鏈或支鏈)或C1-C12(直鏈或支鏈或環)烷基醚，或滷素，或包括三氟甲基醚和三氯甲基醚的滷代醚。
R12，R9和R10獨立地選自H，OH或其C1-C12酯(直鏈或支鏈)或C1-C12(直鏈或支鏈或環狀)烷基醚，或滷素；或包括三氟甲基醚和三氯甲基醚的滷代醚，氰基，C1-C6烷基(直鏈或支鏈)，或三氟甲基，條件是當R1是H時，R2不是OH。
R13選自H，C1-C6烷基，氰基，硝基，三氟甲基，滷素；和Y，A，m，R3和R4的定義如上。
這種類型的2-苯基-1-[4-(2-氨基乙氧基)-苄基]-吲哚化合物是部分雌激素拮抗藥並且對雌激素受體表現出高親和性。然而，不像許多雌激素，這些化合物不會引起子宮溼重的增加。這些化合物在子宮中是抗雌激素的並且能夠完全拮抗雌激素拮抗藥在子宮組織中的營養作用。這些化合物可以用於治療或預防哺乳動物由雌激素缺乏引起的或相關聯的病症或綜合症。
像雌激素拮抗藥一樣。這些化合物具有通過降低膽固醇和防止骨質損失起作用的能力。因此，這些化合物可用於治療包括骨質疏鬆症，前列腺肥大，不孕症，乳腺癌，子宮內膜癌，心血管疾病，避孕，老年性痴呆及黑色素瘤等許多疾病。另外，這些化合物還可以用於絕經後婦女中的或其它激素缺乏症中的激素替代療法，此時雌激素的補充是有益的。
用本發明化合物生產的2-苯基-1-[4-(2-氨基乙氧基)-苄基]-吲哚化合物還可以用於因新骨組織的個別形成與較陳舊組織再吸收之間的不平衡而導致骨質淨損失的骨質損失治療方法。許多個體，特別是絕經後的婦女，經過子宮切除後的婦女，正在接受或已經接受長期皮質類固醇治療的婦女，有過性腺發育不全的婦女和患有庫欣綜合症的婦女會產生這種骨質損耗。對於骨替換的特殊需要也可以根據骨折，骨結構缺欠和正在接受骨相關的外科手術和/或假肢移植的個體情況來建議使用這些化合物。除了上述描述過的那些問題以外，這些化合物還可以用於治療骨關節炎，派傑病，骨質軟化症，骨鈣缺乏症，子宮內膜癌，多發性骨髓瘤和作用於骨組織具有毒害作用的其它形式癌症。可以理解的是本發明例舉的治療疾病的方法包含對需要上述治療的個體以一種或多種本發明化合物或其可藥用鹽進行藥物有效量給藥。本發明還包括利用一種或多種本發明的化合物和/或其可藥用鹽及一種或多種藥物可接受載體，賦形劑等的藥物組合物。
可以理解，這些2-苯基-1-[4-(2-氨基乙氧基)-苄基]-吲哚化合物的給藥劑量，服用方式和模式將會根據疾病和正接受治療的個體的不同而變化並且還取決於所涉及的執業醫師的判斷。對於一種或多種本發明化合物的給藥，優選的是剛開始時以低劑量，然後增加劑量直到取得所期望的作用。
本化合物的有效給藥量可以為0.1mg/天至1,000mg/天。優選的給藥量是以單劑量或兩個或多個分劑量以50mg/天至大約600mg/天給藥。上述劑量給藥可用任何能直接使本發明活性化合物到達受者血液中的方法進行，包括口服給藥，腸外給藥(包括靜脈注射，腹膜內注射，及皮下注射)和經皮給藥。為了公開的目的，經皮給藥認為是包括所有經過肌體表面和包括皮上和黏膜組織的身體通道的內層給藥。該給藥方式可以用本發明化合物或其可藥用鹽以洗劑，軟膏，泡沫劑，貼劑，懸浮劑，溶液，栓劑(直腸和陰道)進行。
含有本發明活性化合物的口服製劑可包括任何常規用過的口服製劑，包括片劑，膠囊，口腔劑型，錠劑，藥糖塊劑和口服液體，懸浮劑或溶液。膠囊可含有帶有惰性填料和/或稀釋劑與活性化合物的混合物，其中惰性填料和/或稀釋劑是，例如可藥用澱粉(例如，玉米，土豆，木薯澱粉)，糖，合成甜味劑，如晶體和微晶纖維素的粉末纖維素，麵粉，凝膠和樹膠等等。有用的片劑劑型可以用常規壓碎，溼法或幹法制粒，並利用可藥用稀釋劑，粘合劑，潤滑劑，崩解劑，懸浮劑或穩定劑，包括但並不局限於硬脂酸鎂，硬脂酸，滑石，十二烷基硫酸鈉，微晶纖維素，羧甲基纖維素鈣，聚乙烯吡咯烷酮，凝膠，海藻酸，阿拉伯膠，黃原膠，檸檬酸鈉，複合矽酸鹽，碳酸鈣，甘氨酸，糊精，蔗糖，山梨醇，磷酸二鈣，硫酸鈣，乳糖，高嶺土，甘露醇，氯化鈉，滑石，幹澱粉及粉末糖來製備。本發明的口服製劑可以利用標準延遲或時間釋放劑型來改變活性化合物的吸收。栓劑劑型可以用傳統原料來製備，所述傳統原料包括加蠟或不加蠟的改變栓劑的熔點的可可油和甘油。也可以應用水溶性栓劑基質，例如不同分子量的聚乙二醇。
如反應流程VI所示和下述實施例11-13中所述，分別利用實施例8中的(4-氯甲基-苯氧基-)-乙基-哌啶-1-基-鹽酸鹽，實施例9中的(4-氯甲基-苯氧基-)-乙基-六亞甲基亞胺-1-基-鹽酸鹽和實施例10中(4-氯甲基-苯氧基-)-乙基-二甲基氨基鹽酸鹽，將本發明的化合物吲哚環上的氮原子烷基化就可以合成這組化合物。除了用氫化鈉以外，其它的鹼包括叔-丁醇鉀或叔-丁醇鈉也可以應用。
反應流程VI 反應式VII和VIII具體說明了用本發明中間體化合物合成1-[4-(2-(Azepan)-1-基-乙氧基)-苯甲基]2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-醇鹽酸鹽。
反應流程VII 反應式VII說明了用2-(哌啶-1-基)氯乙基鹽酸鹽的烷基化4-羥基苯甲醛，該反應可以在有碳酸鉀存在的條件下合成出其相應的醛I(步驟1)。當反應完成時，混合物澄清，將其用甲苯混合，然後再用水洗滌。隨後濃縮甲苯溶液，得到的殘留物用異丙醇處理得到醛I溶液。將醛I異丙醇溶液用例如蘭尼鎳催化劑作催化還原可得到醇化合物II(步驟2)。還原反應後，將反應混合物澄清並濃縮，用二氯化乙烯溶解得到的殘留物得到含有醇II的溶液。該溶液用亞硫醯二氯處理，然後濃縮。得到的殘留物隨後用1，2二甲氧基乙烷處理，得到晶體化合物III(步驟3)。
反應流程VIII 步驟4的反應流程VIII中，將4-苄氧基苯基乙基酮在醋酸中用溴溴化。當反應完成時，其混合物用水驟冷，得到的沉澱物用稀釋醋酸，水和庚烷洗滌。得到的固體經乾燥得到IV，4-苄氧基苯胺鹽酸鹽。在步驟5中，IV、N，N-二異丙乙基胺和甲苯的混合物加熱回流並去水，反應完成時，將混合物冷卻然後用甲醇稀釋。收集所製得的固體，然後用甲醇洗滌並乾燥得到吲哚化合物V。在步驟6中，化合物V和III的混合物可與N，N-二甲基甲醯胺中的叔-丁醇鈉混合併攪拌直到反應完成。然後，混合物先用鹽水驟冷再用甲苯萃取。將萃取物濃縮後用甲醇稀釋殘留物。收集得到的固體，在乙酸乙酯中溶解，澄清，再用甲醇稀釋。從該稀釋液中收集固體並乾燥得到化合物VI。
在步驟7(沒有表示出來)，在乙醇溶液中的化合物VI用鈀碳催化劑進行氫化反應。澄清後，經過氫化的物質與少量的抗壞血酸混合，然後用醋酸處理。收集得到的晶體沉澱物，用乙醇洗滌並乾燥得到終產物，1-[4-(2-(Azepan)-1-基-乙氧基)-苄基]2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚-5-醇鹽酸鹽。所用乙醇任選含有少量的抗壞血酸，優選含大約0.5wt％-3.0wt％抗壞血酸從乙醇中重結晶產物。
在如上的描述中，中間體III-VI可以容易地以固體分離出來。所有其它中間體更優選作為在有機溶劑中的溶液應用。
反應流程IX-XII具體說明了利用本發明中間體來合成2-(4-羥基-苯基)3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苄基]-1H-吲哚-5醇化合物。如上所述的反應流程IIa可以被認為是反應流程IX的第一步或者在之先前的一步反應。在該步反應中，用期望的芳基氨基烷基氯處理4-羥基苯甲醇得到其相應的烷氧基苯甲醇。在反應流程IIa具體的實施例中，4-羥基苯甲醇在K2CO3/Me2CO的存在下用1-(2-氯乙基)-哌啶鹽酸鹽處理，得到4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲醇。將甲苯和鹽水加到製得的醇混合物中，將其相分離出來。甲苯相隨後依次用帶鹼的水溶液和鹽水洗滌。後濃縮，加入二氯化乙烯，得到中間體4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲醇溶液。
如反應流程IX所示，將4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲醇的二氯化乙烯溶液與亞硫醯氯混合併加熱直到反應完成。冷卻後，將混合物濃縮，接著加入1，2-二甲氧基乙烷，然後再濃縮。收集沉澱物並乾燥得到中間體4-(2-哌啶基乙氧基)苄基氯鹽酸鹽。
反應流程IX 如反應流程IX所示，將4-(2-哌啶基乙氧基)苯甲醇的溶液與二氯化乙烯和亞硫醯氯混合併加熱產生反應混合物。冷卻後，將反應混合物用1，2-二甲氧基乙烷處理並再次濃縮。收集並乾燥反應得到的沉澱物4-(2-哌啶基乙氧基)苄基氯鹽酸鹽。
反應流程X
反應流程X描述了在醋酸中用溴對4-苄氧基苯基乙基酮進行溴化，得到4′-(苄氧基)-2-溴苯基乙基酮。當反應完成時，混合物用水驟冷。收集反應得到的沉澱物，用稀釋醋酸，水和庚烷洗滌並乾燥。
反應流程XI 如反應流程XI所示，在N，N-二異丙乙基胺和甲苯的存在下，加熱回流用4-苄氧苯胺鹽酸鹽反應流程X的產品4′-(苄氧基)-2-溴苯基乙基酮，並共沸去水。當反應完成時，冷卻混合物，用甲醇稀釋。收集反應得到的固體3-甲基-2-(4-苄氧基)苯基-5-苄氧基吲哚，用甲醇洗滌並乾燥。
反應流程XII 在N，N-二甲基甲醯胺的叔丁醇鈉存在的條件下，將反應流程XI產品3-甲基-2-(4-苄氧基)苯基-5-苄氧基吲哚與4-(2-哌啶基乙氧基)苄基氯鹽酸鹽進行反應。反應得到的混合物用鹽水驟冷，然後用甲苯萃取。接下來澄清，濃縮萃取物然後用甲醇稀釋。收集反應得到的固體5-苄氧基-2-(4-苄氧基苯基)-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苄基]-1H-吲哚，並將其溶解於醋酸乙酯中，然後用甲醇稀釋並乾燥。將固體溶解於乙醇-四氫呋喃中，用鈀-碳作催化劑進行氫化反應。接著將溶液澄清，任選與少量的抗壞血酸混合，然後用帶鹽酸水溶液處理。收集沉澱物，用乙醇-四氫呋喃和水洗滌並乾燥得到最終產品2-(4-羥基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基]-1H-吲哚-5-醇。
實施例115-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基]-1H-吲哚在溫度-5/-8℃下，經1小時，向5-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚(117.5g，0.28mol，1.0eq.)的DMF(1.3L)溶液中分批加入NaH(28.0g，60％油分散液，0.7mol，2.5eq.)。攪拌反應混合物2小時。在溫度-10/0℃下，滴加實施例8氯化物的四氫呋喃(1.0L)溶液經2個小時。在溫度25℃下，將反應混合物攪拌過夜。此時，薄層分析分析結果顯示出沒有初始原料，幾乎全部是產品(EtOAc/己烷1∶5)。反應混合物用水(6L)稀釋，然後用醋酸乙酯(2×3L)萃取並用Na2SO4乾燥。將溶液濃縮至1L，到入甲醇(2.5L)中，並攪拌1小時。將沉澱物過濾並乾燥得到標題化合物(129g，73％)。
1H NMR(CDCl3/TMS)7.64-6.63(m，21H)，5.12(s，2H)，5.09(s，2H)，5.07(s，2H)，4.07(t，2H，J＝6.06Hz)，2.72(t，2H，J＝6.06Hz)，2.48(m，4H)，2.24(s，3H)，1.62-1.24(m，6H).
實施例125-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-1-[4-(2-六亞甲基亞胺-1-基-乙氧基)-苄基]-1H-吲哚在溫度0/+10℃下，經1小時，向NaH(20.0g，60％油分散液，0.5mol，2.5eq.)的淤漿中，加入5-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚(84g，0.2mol，1.0eq.)DMF(100mL)溶液。將反應混合物攪拌30分鐘，在溫度0/+10℃下，經2個小時，滴加實施例9的氯化物(67g，0.22mol，1.1eq)四氫呋喃(200mL)溶液。在溫度25℃下，將反應混合物攪拌2個小時。此時，薄層分析分析結果顯示出沒有初始原料，幾乎全部是產品(EtOAc/己烷1∶5)。反應混合物用水(1L)稀釋，然後用醋酸乙酯(3×1L)萃取並用Mg2SO4乾燥。將溶液濃縮至150mL，到入甲醇(750mL)中並攪拌過夜。將沉澱物過濾並於燥得到標題化合物(99g，76％)。
1H NMR(CDCl3/TMS)7.48-6.74(m，21H)，5.13(s，2H)，5.11(s，2H)，5.09(s，2H)，4.00(t，2H，J＝6.24Hz)，2.91(t，2H，J＝6.27Hz)，2.75(m，4H)，2.24(s，3H)，1.71-1.52(m，8H)實施例135-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-1-[4-(2-二甲氨基乙氧基)-苄基]-1H-吲哚在溫度0/+10℃下，經0.5小時，向NaH(1.1g，60％油分散液，0.05mol，2.5eq.)的淤漿中，加入5-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-甲基-1H-吲哚(6.97g，0.017mol，1.0eq.)DMF(100mL)溶液。將反應混合物攪拌30分鐘，在溫度0/+10℃下，經2小時以上，部分滴加實施例10氯化物溶液(4.57g，0.018mol，1.1eq.)。在溫度25℃下，將反應混合物攪拌0.5小時。此時，薄層分析分析結果顯示出沒有初始原料，幾乎全部是產品(EtOAc/己烷1∶5)。反應混合物用水(200mL)稀釋，然後用醋酸乙酯(EtOAc)(3×200mL)萃取並用Mg2SO4乾燥。將溶液濃縮至150mL，到入甲醇(300mL)中並攪拌過夜。將沉澱物過濾並乾燥得到標題化合物5.6g(53％)。
1H NMR(CDCl3/TMS)7.50-6.66(m，21H)，5.13(s，2H)，5.11(s，2H)，5.09(s，2H)，3.99(t，2H，J＝5.76Hz)，2.69(t，2H，J＝5.73Hz)，2.31(s，6H)，2.42(s，3H)實施例145-苄氧基-2-(4-苄氧基-苯基)-3-甲基]-1H-吲哚 將4-苄氧基苯胺(45g，0.23mol)，4′-苄氧基-2-溴苯基苯基乙基酮(66414-19-5)(21g，0.066mol)和50mLDMF裝入燒瓶中，使反應加熱回流30分鐘，然後冷卻至室溫，隨後在250mL的醋酸乙酯和100mL1N的鹽酸水溶液中分層。醋酸乙酯層用NaHCO3水溶液和鹽水洗滌並用Mg2SO4乾燥。濃縮溶液，將殘留物溶解於CH2Cl2和己烷，沉澱出25g的固體粗品。將固體溶解於CH2Cl2中，並在矽膠上蒸發，用CH2Cl2/己烷(1∶5)作洗脫劑，層析分離出9.2g的棕褐色固體(33％)熔點＝150-152℃；1H NMR(DMSO)10.88(s，1H)，7.56(d，2H，J＝8.8Hz)，7.48(d，4H，J＝7.9Hz)，7.42-7.29(m，6H)，7.21(d，1H，J＝7.0Hz)，7.13(d，2H，J＝8.8Hz)，7.08(d，1H，J＝2.2Hz)，6.94(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，5.16(s，2H)，5.11(s，2H)，2.33(s，3H)；IR(KBr)3470，2880，2820，1620cm-1；MS eI m/z 419.
實施例152-(4-羥基-苯基)-3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基]-1H-吲哚-5-醇將10％Pd/C(1.1g)的乙醇懸浮液用實施例11標題化合物THF/EtOH溶液(2.2g，3.4mmol)處理。加入環己二烯(6.0mL，63mmol)，攪拌48小時。經硅藻土濾除催化劑，濃縮反應混合物，在矽膠上用洗脫劑為MeOH/CH2Cl2(1∶19到1∶10)以梯度洗脫方法進行層析分離得到0.8g的白色固體產品。
熔點＝109-113℃；C29H32N2O3+0.5H2O的CHN理論值；C29H32N2O3+0.5H2O；1H NMR 9.64(s，1H)，8.67(s，1H)，7.14(d，2H，J＝8.6Hz)，7.05(d，1H，J＝8.6Hz)，6.84(d，2H，J＝8.8Hz)，6.79(d，1H，J＝2.2Hz)，6.74(s，4H)，6.56(dd，1H，J＝8.8，2.4Hz)，5.09(s，2H)，3.95-3.93(m，2H)，2.60-2.51(m，2H)，2.39-2.38(m，4H)，2.09(s，3H)，1.46-1.45(m，4H)，1.35-1.34(m，2H)；IR(KBr)3350(br)，2920，1620，1510cm-1；MS(EI)m/z 456.
體外雌激素受體結合試驗受體製備將過量表達雌激素受體的中國倉鼠卵巢細胞放在塗有除掉胎牛血清的DMEM+10％右旋糖酐培養基的木炭中，在大小為150mm2培養皿中培養生長。培養皿用PBS洗兩次，用10mM三鹽酸，pH7.4，1mM EDTA洗一次。通過刮培養皿表面來收取細胞，然後將細胞懸液放置於冰上。用兩次10秒脈衝的手握動力組織研磨器將細胞破壞。以12,000g的速度將其粗品標本離心20分鐘，然後再以100,000g的速度旋轉60分鐘製備成核糖體游離細胞溶膠。將該細胞溶膠冷凍並在-80℃下保存。細胞溶膠的蛋白質濃度可以用帶有參考標準蛋白質的BCA測定法來測定。
結合試驗條件競爭測定可以在一個結合了小於2.0％[3H]-17雌二醇96孔板(聚苯乙烯*)中進行，並且每一數據點可收集三次。每孔等分100uG/100uL的受體製品。將在體積50uL中，2.5nM[3H]-17雌二醇+競爭者(或緩衝劑)的飽和劑量加到預備競爭中，當100x和500x競爭者被估算出來的時候，僅使用了0.8nM[3H]-17雌二醇。將孔板在室溫下培養2.5小時.在培養期結束時，將塗有150uL用水預冷的右旋糖酐的木碳(5％塗有0.05％69K右旋糖酐的活性碳)加入到每個孔中，將孔板立即在4℃下以99g速度離心5分鐘。取出200uL上清液進行閃爍計數。不管哪個先產生，只計數樣品的2％或10分鐘。因為聚苯乙烯會吸收含有放射性和細胞溶質的孔中少量的[3H]-17雌二醇。但是，用碳處理過的孔不包括可供同位素的測算量。含有放射性而不含有細胞溶質的孔可用碳處理來估計去不掉的[3H]-17雌二醇的DPM。我們採用Corning#25880-96，96孔板，這是因為它們已被證實只結合最少量的雌二醇。
結果分析對每一樣品，每分鐘計數的放射性(CPM)是通過Beckman LS 7500閃爍計數器，利用一套淬火標準產生H#，將其自動轉變為每分鐘裂變數(DPM)。在有100或500倍競爭者的存在下，為了計算雌二醇結合百分比，可以應用下面的公式((DPM樣品-沒有被碳除去的DPM/DPM雌二醇-沒有被碳除去的DPM))×100％＝雌二醇結合百分比％為了生成IC50曲線，以結合百分比對化合物畫曲線。對於化合物產生出的IC50表示化合物在500x競爭者濃度下大於30％的競爭性。關於此方法的描述，參見Hulme，E.C.等人1992，(Receptor-LigandInteraction；A Practical Approach.IRL出版社，紐約(具體參見第八章)。參照下表，實施例1的化合物是指其最終產品，2-(4-羥基-苯基)3-甲基-1-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基]-1H-吲哚-5-醇。
雌激素受體親和性(RBA17-雌二醇＝100)化合物RBA雷洛昔芬(Raloxifene) 200
他末昔芬(Tamoxifen) 1.8馬烯雌酮(Equilin) 5.3實施例15 400Ishikawa細胞鹼性磷酸酶試驗細胞保存和處理Ishikawa細胞保存在含有酚紅+10％胎牛血清的DMEM/F12(50％∶50％)的保存液中，媒質中補充有2mM Glutamax、1％Pen/Strap和1mM丙酮酸鈉。在每項實驗(細胞處理)開始前5天，將媒質改換為不含酚紅的DMEM/F12+去血清的10％右旋糖苷塗碳。在處理前一天，細胞用0.5％胰蛋白酶/EDTA來收穫，然後將細胞以每孔5×104個細胞的密度放於96孔組織培養孔板中。除了以10-6M(化合物)+10-9M 17_雌二醇的劑量外，還分別以10-6，10-7，和10-8M不同劑量測試化合物來評估化合物作為抗雌激素的能力.在測定前，細胞要處理48小時。每一96孔板都含有17_雌二醇。每一劑量樣品種群是n＝8.
鹼性磷酸酶試驗在48小時結束時，將介質抽出，細胞用磷酸緩衝鹽溶液(PBS)洗滌三次。在每孔中加入50_L的溶解緩衝液(0.1M三-鹽酸，pH9.8，0.2％屈力通(Triton)X-100)。將孔板放置於零下80℃下至少15分鐘。將孔板在37℃下解凍，接著在每個孔中加入含有4mM磷酸對-硝基苯酯(pNPP)的150_L0.1M，pH9.8三-鹽酸(最後濃度，3mM pNPP)。吸收度及斜率計算可以用Kinetic Calc應用程式進行(Bio-Tek儀器公司，winooski，VT)。實驗結果可以用平均相對於動力反應曲線直線部分(30分鐘中每5分鐘吸收讀數的光密度讀數)的酶反應速率(斜率)的平均值+/-S.D.來表示。化合物的實驗結果可以用與1nM 17_雌二醇響應的有關的百分比來總計。各種化合物可以通過鹼性磷酸酶法測定其雌激素活性並且其相應ED50值(95％C.I.)可以計算出來。如下例舉的四種雌激素可以用作參考標準
Holinka，C.F.Hata，H.，kuramota，H.和Gurpide，E.(1986)就這些方法在「Effects of steroid hormones and antisteroids onalkaline phosphatase activity in human endometrial cancercells(Ishikawa Line)」中進行了描述。癌症研究，462771-2774和littlefield，B.A.，Gurpide，E.，Markiewicz，L.、McKinley，B.和Hochberg，R.B，(1990)。在Ishikawa細胞中基於刺激於鹼性磷酸酶的一種簡單、靈敏的進行雌激素生物測定的微量滴定板；D5腎上腺類固醇雌激素作用。內分泌學，62757-2762。
Ishikawa鹼性磷酸酶試驗化合物％活性17_雌二醇 100％活性它莫昔酚0％活性(45％，用1nM 17_雌二醇)雷洛昔酚5％活性(5％，用1nM 17_雌二醇)實施例151％活性(1％，用1nM 17_雌二醇)2X VIT ERE轉移試驗細胞保存和處理將被人體雌激素受體穩定轉染的中國倉鼠卵巢細胞(CHO)保存在DMEM+10％胎牛血清(FBS)中，在處理前48小時，培養基用無酚紅的DMEM+去FBS血清的10％右旋糖酐塗碳(處理介質)來替換。將細胞以每孔5000個細胞的密度放於含有每孔200_L基質的96孔板中。
磷酸鈣轉染受體DNA(在推進螢光素酶基因最小胸腺嘧啶核苷激酶促進劑之前的含有兩個卵黃蛋白原ERE宮腔管的複製品的Promega質體pGL2)與B-牛乳糖表達質體p CH110(藥品)和載體DNA(pTZ18U)以下列比率結合10uG受體DNA5uG p CH110 DNA5uG pTZ18U20uG DNA/1mL轉染溶液將20uG DNA溶解於500uL，250mM消毒過的CaCl2中，然後滴加於500uL 2xHeBS(0.28M NaCl，50mMHEPES，1.5mM Na2HPO4，pH7.05)中，之後在室溫下培養20分鐘。將20uL該混合物滴在培養皿的每個孔中，並且在培養皿中保持16小時。在培養結束時，去掉沉澱物，然後用介質洗滌培養皿，回收新處理的介質，培養皿用媒介物，1nM 17_雌二醇，1uM化合物或1uM化合物+1nM 17_雌二醇處理(雌激素對抗性實驗)。每個處理條件都是以在螢光素酶試驗之前，進行24小時培養的8個孔中實行的(n＝8)。
螢光素酶試驗在化合物暴露放置24小時後，除去基質，然後，每個孔用2×125uL的無Mg++和Ca++的PBS溶液洗滌。將PBS溶液移去後，在每個孔裡加25uL的Promega溶解緩衝液，並在室溫下放置15分鐘，接下來在零下80℃下冷凍15分鐘，再在37℃下解凍15分鐘。將20uL溶解產物轉移到不透明的96孔板中用於螢光素酶活性評價(標準化轉染)。將100uL螢光素酶培養基(Promega)自動由照度計等分加入到每個孔中，並且加入以後，所產生的光(相對光單位)讀數為10秒。
感染螢光素酶試驗化合物％活性17_雌二醇 100％活性雌三醇 38％活性它莫昔酚0％活性(10％，用1nM 17_雌二醇)雷洛昔酚0％活性(0％，用1nM 17_雌二醇)實施例150％活性(0％，用1nM 17_雌二醇)B-牛乳糖試驗向剩下的5uL溶解產物中，加入45uL的PBS。然後再加入50uL的Promega B-牛乳糖2X測定緩衝液，混勻後，在37℃下培養1小時。將帶有標準曲線的平板(0.1至1.5毫單位，一試三份)用於每個實驗過程。用一種分子裝置的分光光度計的平板讀數器在410nm讀數。從標準曲線中，利用數學外推法將未知的光密度轉變成活性毫單位。
結果分析在10秒中的測定當中，作為累積起來的相對光單位(RLUs)而產生螢光素酶數據自動地轉移到背景相對光單位(RLUs)被減除的JMp(SAS公司)文檔中。B-牛乳糖值被自動地輸入到文檔中並且這些值被分成相對光單位(RLUs)以標準化數據。平均標準偏差可以從每個處理樣n＝8來測定。化合物活性與每個平板中的17_雌二醇進行比較。相對於17_雌二醇的活性百分比用如下公式計算％＝((雌二醇對照)/化合物值))×100.這些技術的描述者為Tzukerman，M.T.，Esty，A.，Santiso-Mere，D.，Danielian，P.，Parker，M.G.Stein，R.B.，Pike，J.W.和McDonnel，D.P.(1994)。人體雌激素受體轉移活性能力可以用細胞和促進劑菌肉來測定，並且由兩個功能性獨特的內分子區來傳遞。(參見分子內分泌學，821-30)。
大鼠子宮性營養/抗子宮性營養生物試驗化合物的雌激素和抗雌激素性質可以用未成熟大鼠子宮性營養測定實驗來測定(4天)(測定方法以前由L.J.Black和R.L.Goode在「生命科學」中有所描述，「生命科學」，26，1453(1980)。用未成熟Sprague-Dawley大鼠(雌性，18天大的)進行6組實驗。實驗動物每天用10uG化合物，100uG的化合物和(100uG的化合物+1uG17_雌二醇)ip注射處理來檢測，並且用1uG17_雌二醇加有50％DMSO/50％鹽水作為注射載體。用藥後第四天，用二氧化碳窒息法將動物處死，將其子宮取出，撥掉多餘脂肪和除去任何體液並稱其溼重。將子宮角的一小部分送去組織分離，其剩餘物用於分離全部RNA來鑑定補體成分3基因表達。
三天卵巢切除大鼠模型化合物10uG100uG它莫昔芬 69.6mg 71.4mg雷洛昔芬 47.543.2對照＝42.7mg1uG17_雌二醇＝98.2化合物10uG100uG 100uG+1uG17_雌二醇實施例15 39.9mg 27.4mg 24.3mg對照＝30.7mg1uG17_雌二醇＝63.2當顯示出在子宮和乳腺有雌激素拮抗作用時，化合物雷洛昔芬[2-(4-羥苯基)-6-羥基苯並[b](thien)-3-基]4-(1-哌啶乙氧基)苯基-甲酮鹽酸鹽是已知的選擇性雌激素受體調節劑的一類化合物的代表，對於骨組織和血脂具有類雌激素拮抗樣作用，而對子宮和乳腺有雌激素拮抗作用。Palkowitz等人在「藥物化學」雜誌1997，40，1407中提出利用本發明化合物也可以生產出雷洛昔芬的活性類似物。例如，他們描述的化合物4a，[2-(4羥苯基)-6-羥氧苯並[b](thien)-3-基][4-(1-哌啶基)乙氧基]苯甲烷鹽酸鹽可以用如下的一般反應流程來生產。
實施例162-(4-甲氧基-苯磺醯胺基)-苯甲酸甲基酯 向溶解於20mL氯仿中的2.00g(0.013mol)鄰氨基苯甲酸甲酯中加入3.2mL(0.039mol)的吡啶隨後加入2.733g(0.013mol)的p-甲氧苯磺醯氯。將反應混合物在室溫下攪拌5個小時，然後用3N的鹽酸和水洗滌。將有機物用Na2SO4乾燥，過濾並在真空中減壓濃縮。反應得到的白色固體用乙醚洗滌，然後在真空中減壓乾燥得到3.7g(87％)所需的磺醯胺。
CI Mass質譜特徵322(M+H)。
實施例172-(4-甲氧基-苯磺醯胺基)-3-甲基-苯甲酸甲基酯
如實施例16，使用6.24g(0.038mol)3-甲基-鄰氨基苯甲酸甲酯，可以得到6.21g(49％)所需的白色固體狀磺醯胺。
Electrospray Mass質譜特徵336.2(M+H)實施例184-(2-哌啶-1-基-乙氧基)-苄基氯 向攪拌的4-羥基苯甲醛(12.2gm，0.1mol)和K2CO3(25gm，過量)的N，N-二甲基甲醯胺(250ml)溶液中加入1-(2-氯乙基)哌啶單鹽酸鹽(20.0gm，1.08mol)。將反應混合物在80℃下加熱24小時，然後冷卻至室溫。將反應混合物用冰水驟冷終止反應並用氯仿萃取。將有機物用水洗滌，用無水MgSO4乾燥，過濾並在真空中減壓濃縮。將殘留物溶解於甲醇中，在0℃下，慢慢加入硼氫化鈉(10gms，超量)，將反應混合物在室溫下攪拌2個小時，然後用水終止反應。用氯仿萃取醇，有機物用水充分洗滌，然後用Na2SO4乾燥，過濾，並在真空中減壓濃縮。
將上述製得的醇粗產物溶解於四氫呋喃(200ml)中，然後，在0℃下通入HCl氣體三十分鐘。於是向所得到的鹽酸鹽的懸浮溶液中，慢慢加入亞硫醯氯(30mL，超量)。將反應混合物回流三十分鐘，然後冷卻至室溫。再將反應混合物濃縮至幹狀態，並用無水乙醚研製。將沉澱的固體過濾並在室溫下，真空中乾燥得到25g(86％)白色固體狀產品。
熔點145-148℃，Electrospray Mass質譜特徵256(M+H)實施例194-(2-N，N-二乙基-乙氧基)-苄基氯
向攪拌的4-羥基苯甲醛(12.2gm，0.1mol)和K2CO3(25gm，過量)的N，N-二甲基甲醯胺(250ml)溶液中加入2-二乙基-氨基乙基氯單鹽酸鹽(20.0gm，1.2mol)。將反應混合物在80℃下加熱24小時，然後冷卻至室溫。將反應混合物用冰水驟冷終止反應並用氯仿萃取。將有機物用水洗滌，用無水MgSO4乾燥，過濾並在真空中減壓濃縮。將殘留物溶解於甲醇中，在0℃下，慢慢加入硼氫化鈉(10gms，超量)，將反應混合物在室溫下攪拌2個小時，然後用水終止反應。用氯仿萃取醇，用水認真洗滌，乾燥，過濾，並在真空中減壓濃縮。
將上述所得的醇粗產物溶解於四氫呋喃(200ml)中，然後，在0℃下通入HCl氣體三十分鐘。於是向所得到的鹽酸鹽的懸浮溶液中，慢慢加入亞硫醯氯(30mL，超量)。將反應混合物回流三十分鐘，然後冷卻至室溫。再將反應混合物濃縮至幹狀態，並用無水乙醚研製。將沉澱的固體過濾並在室溫下，真空中乾燥得到18g(65％)白色固體狀產品。
熔點76-79℃，Electrospray Ma8s質譜特徵244(M+H)實施例20N-羥基-2-[[(4-甲氧苯基)磺醯基][[4-[2-(1-哌啶基)乙氧基]苯基]甲基]氨基]-3-甲基苯甲醯胺向1.00g(2.985mmol)2-(4-甲氧基-苯磺醯氨基)-3-甲基-苯甲酸甲基酯的5ml DMF中加入0.952g(3.284mmol)4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苄基氯和1.65g(11.9mmol)碳酸鉀。將反應混合物在室溫下攪拌18小時，之後用水稀釋再用乙醚萃取。有機物用6N HCl溶液萃取，酸性水層用6N NaOH溶液鹼化，之後再用乙醚萃取。所得到的醚層用硫酸鈉乾燥，經過濾再在真空中減壓濃縮得到0.965g無色油狀的哌啶-酯。
Electrospray Mass質譜特徵553.5(M+H)+。
向溶液0.889g(1.611mmol)哌啶酯7ml四氫呋喃中加入0.203的一水合氫氧化鋰。將反應混合物加熱回流15小時，然後在真空中濃縮成殘留物。殘留物被水稀釋後，用5％HCl的溶液中和，再用二氯甲烷萃取。將有機層用Na2SO4乾燥，過濾，然後在真空中減壓濃縮後得到0.872g的白色泡沫狀羧酸。Electrospray Mass質譜特徵539.2(M+H)+向0.814g(1.513mmol)羧酸的10ml DMF溶液中加入0.245g(1.82mmol)HOBT和0.386g(2.01mmol)EDC。將反應混合物在室溫下攪拌1小時，然後，加入0.46ml(7.57mmol)50％羥胺水溶液。再將反應攪拌過夜，隨即在真空中減壓濃縮成殘餘物。將此殘餘物用醋酸乙酯稀釋，用水和碳酸氫鈉溶液洗滌，用Na2SO4乾燥，過濾，在真空中減壓濃縮成殘餘物。將殘餘物溶解於5ml的二氯甲烷，再加入0.69ml 1N的鹽酸乙醚溶液。1小時後，用乙醚稀釋反應混合物，反應得到的固體經過濾並在真空中乾燥得到0.179g的白色固體狀的羥胺鹽(hydroxamate-amine salt)。
Electrospray Mass質譜特徵554.5(M+H)+實施例212-[[4-(2-二乙基氨基-乙氧基)-苄基]-(4-甲氧基-苯磺醯基)-氨基]-N-羥基-3-甲基-苯甲醯胺向1.0g(2.653mmol)2-(4-甲氧苯磺醯胺基)-3-甲基苯甲酸甲酯10ml DMF中加入0.811g(2.918mmol)4-(2-N，N-二乙基-乙氧基)-苄基氯和1.5g(10.9mmol)碳酸鉀。將反應混合物在室溫下攪拌18小時，然後用水稀釋再用乙醚萃取。有機層用6N的鹽酸溶液萃取，酸性水層用6N的氫氧化鈉溶液鹼化再用乙醚萃取。所得到的醚層用硫酸鈉乾燥，經過濾，並在真空中濃縮得到0.575g(37％)棕褐色泡沫狀N，N，-二乙基氨酯。
Electrospray Mass質譜特徵583.1(M+H)+向0.539g(0.926mmol)N，N-二乙基氨基酯二氯甲烷中加入2ml的三氟醋酸。將反應混合物在室溫下攪拌2小時，然後在真空中減壓濃縮得到殘餘物。將殘餘物用乙醚研製，所得到的固體經過濾並在真空中乾燥得到0.369g的白色固體狀羧酸。
Electrospray Mass質譜特徵525.2(M+H)+向0.328g(0.513mmol)羧酸6.5ml的二氯甲烷中的溶液中，加入0.12mlDMF，接下來加入0.77ml 2.0M的草醯氯的CH2Cl2溶液中，將反應混合物在室溫下攪拌1小時。
在一另外的燒瓶中，在0℃下，加入由0.47ml(7.7mmol)50％羥胺水溶液，8ml THF和1.7ml水組成的混合物。在0℃下，將混合物攪拌15分鐘後，一次加入酸性氯化物溶液，所得到的溶液攪拌下加熱到室溫並過夜。將反應混合物用10％HCl酸化至pH3，再用醋酸乙酯萃取。將合併的有機層用Na2SO4乾燥，經過濾，並在真空中減壓濃縮得到殘留物。殘留物用乙醚研製，得到0.194g的白色固體狀的羥胺鹽(hydroxamate-amine salt)。
Electrospray質譜特徵542.3(M+H)+。
實施例222-(4-甲氧基-苯基硫代)-丙酸乙酯 向圓底燒瓶裡攪拌的4-甲氧苯硫醇(2.5gm，14mmol)和無水K2CO3(4.0gm，過量)的無水丙酮(100ml)溶液中，加入2-溴-丙酸乙酯(3.0gm，16mmol)，將反應混合物充分攪拌下加熱回流8個小時。反應結束時，將反應冷卻，過濾，然後將反應混合物濃縮得到殘留物。再將殘留物用氯仿萃取並用水洗滌，將有機層用MgSO4乾燥，過濾並濃縮得到淺黃色油狀的2-(4-甲氧基-苯基硫代)-丙酸乙酯。
收率3.6gms(94％)。
實施例232-(4-甲氧基-苯磺醯基)-丙酸乙酯 在0℃下，為控制放熱，緩慢地以一定的速度向攪拌的12.0gm(50mmol)2-(4-甲氧基-苯基硫代)-丙酸乙酯300ml二氯甲烷溶液中加入，將反應混合物在室溫下攪拌2小時，然後用600ml己烷洗滌。將反應混合物過濾，濾出液與500ml的飽和Na2SO3溶液一起攪拌3個小時。將有機層分離開後，用水認真洗滌，並乾燥，在真空中蒸發得到12gm半固體狀產品。
實施例242-(4-甲氧基-苯磺醯基)-2-甲基-3-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苯基]-丙酸乙酯 將攪拌的2.7g(10mmol)2-(4-甲氧基-苯磺醯基)丙酸乙酯、3.03gm(10mmol)4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苄基氯，10gm的K2CO3和500mg 18-冠-6250ml的丙酮溶液混合物回流16小時。反應結束時，將反應混合物過濾，丙酮層經濃縮得到殘留物。殘留物用氯仿萃取，用水洗滌和無水MgSO4乾燥，然後過濾、濃縮再次得到殘留物。將得到的殘留物用50％醋酸乙酯-己烷作洗脫液進行矽膠柱色譜提純得到所希望得到的4.8gm(92％)油狀物產品。
質譜特徵MS490(M+H)+。
實施例252-(4-甲氧基-苯磺醯基)-2-甲基-3-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苯基]-丙酸 向攪拌的中的2-(4-甲氧基苯磺醯基)-2-甲基-3-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苯基]-丙酸乙酯(4.9gm，10mmol)甲醇溶液中加入10N的NaOH(20ml，過量)。將反應混合物在室溫下攪拌48小時。反應結束時，將反應混合物濃縮並用稀釋鹽酸小心地進行中和反應。所得到的殘留物用氯仿萃取，然後用水洗滌並乾燥濃縮。將得到的產品用醋酸乙酯-甲醇(95∶5)作洗脫液進行矽膠柱色譜提純得到無色結晶狀實施例產品。熔點106℃，MS462.5(M+H)+收率4.1gm，88-1。
實施例262-(4-甲氧基-苯磺醯基)-2-甲基-3-[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)苯基]-丙醯胺 在0℃下，向攪拌的2-(4-甲氧基-苯磺醯基)-2-甲基-3-苯基[4-(2-哌啶-1-基-乙氧基)]-丙酸和(2.3g，5mmol)的DMF(兩滴)的二氯甲烷(100ml)溶液中，滴加草醯氯(1.2gm，10mmol)。加入後，將反應混合物在室溫下攪拌1小時。同時，在一另外的燒瓶中，將鹽酸羥胺(3.4gm，50mmol)，三乙氨(10.1gm，100mmol)的混合物在0℃下，在THF∶水(5∶1，50ml)中攪拌1小時。1小時結束時，將草醯氯反應混合物濃縮，將淺黃色殘留物溶解於10ml的二氯甲烷中並在0℃下，緩慢地加入到羥胺中。再將反應混合物在室溫下攪拌24小時並濃縮。所得到的殘留物用氯仿萃取，然後用水認真洗滌。將得到的產品用醋酸乙酯作洗脫液進行矽膠柱色譜提純分離得到無色固體狀實施例產品。熔點98℃；收率48％；MS477(M+H)+1H NMR(300MHz，CDCl3)_1.2(s，3H)，3.5-1.5(m，16H)，3.9(s，3H)，4.4(m，1H)；6.5-7.8(m，8H)；10.8(bs，1H).
本發明標題化合物都根據如下實驗過程進行過生物活性實驗。
體外白明膠酶試驗本測定是基於由酶，白明膠酶釋放與DTNB((5，5』-二硫代-雙(2-硝基-苯甲酸))比色反應的底物，引起硫酞底物的((Ae-Pro-Leu-Gly(2-氫硫基-4甲基-戊醇基)-Leu-Gly-OEt)分裂，BachemBioscience(生物科學)。酶活性通過顏色增加率來測定。硫酞底物是新製備的20mM的100％DMSO貯備液，DTNB是100mM溶解於100％DMSO的貯備液，並且在室溫下黑暗貯存。底物和DTNB在使用前都用底物緩衝液(50mM HEPES pH7.5，5mM Ca Cl2)稀釋到1mM。人體嗜中性白明膠酶B貯備液用測定緩衝液(50mM HEPES pH7.5，5mM Ca Cl2，0.02％Brij)稀釋成最後濃度0.15nM。將測定緩衝液，酶，DTNB/底物(最後濃度500μM)和載體或抑制劑加入到96孔板中(總反應體積200μl)，顏色的增加用板讀器在405nm處進行5分鐘的分光光度測定。在OD405的增加可以用圖示意，計算出的曲線的斜率代表反應率。確認反應速率的線性(r2＞0.85)。平均控制率(x±sem)可以計算出來，並且與用Dunnett’s多次對比實驗的藥物處理率統計顯著性進行比較。劑量響應關係可以用藥物多劑量產生出來，具有95％CI的IC50值可以用線性回歸來估計(IPRED，HTB)。
參考文獻Weingarten，H和Feder，J.，脊椎動物膠原酶分光光度法測定，Anal.Biochem 147，437-440(1985)。
體外膠原酶測定本測定是基於通過膠原酶釋放用螢光光度計定量的螢光NMa基團引起的肽底物((Dnp-Pro-Cha-Gly-Cys(Me)-His-Ala-Lys(NMa)-NH2)，肽國際公司)的分裂。Dnp能在完整的底物中熄滅NMa螢光。本測定用人體重組纖維細胞膠原酶(去掉頂端的，mw＝18，828，WAR，Radnor)在HCBC測定緩衝液(50mM HEPES，pH7.0，5mM Ca+2，0.02％Brij，0.5％半胱氨酸)中進行。將底物溶解在甲醇中並且在1mM等分試樣中冷凍儲存。膠原酶在25μM等分試樣的緩衝液中冷凍儲存。對於測定來說，溶解在最終濃度為10μM的HCBC緩衝液中的底物最終濃度為5nM的膠原酶中。將化合物溶解在甲醇，DMSO或HCBC中。將甲醇和DMSO在HCBC中稀釋至濃度小於1.0％。將化合物加入到含有酶的96孔板中，通過加入底物而開始反應。將反應讀取10分鐘(340nm激發，444nm發射)。用螢光對時間的增加作線性圖。曲線的斜率可以計算出來並且代表反應速率。確認反應速率的線性(r2＞0.85)，平均控制率(x±sem)可以計算出來並且與Dunnett’s多次對比實驗的用藥物處理率統計顯著性進行比較。劑量響應關係可以用多劑量藥物產生出來，具有95％CI的IC50值可以用線性回歸來估計(IPRED，HTB)。
參考文獻Biekett，D.M.等人，A high throughputfluorogenic substrate for interstitial collagenase(MMP-1)and gelatinase(MMP-09)，Anal.Biochem，212，58-64(1993)。
測定TACE抑制劑的方法將96孔黑色微量滴定板的每一孔中放有由10μL TACE(Immunex，最終濃度1μg/mL)、含有10％甘油(最終濃度10mM)的70μL三緩衝液，pH7.4，和10μL DMSO的溶液的實驗化合物(最終濃度1μM，DMSO濃度小於1％)組成的溶液並且在室溫下孵化10分鐘。向每個孔中加入螢光肽醯底物(最終濃度100μM)而開始反應，然後用震蕩混合器震蕩5秒鐘。將反應讀取10分鐘(340nm激發，420nm發射)。用螢光對時間的增加作線性圖。曲線的斜率可以計算出來並且代表反應速率。確認反應速率的線性(r2＞0.85)，平均值控制率(x±sem)可以計算出來並且用Dunnett’s多次對比實驗的藥物處理率統計顯著性進行比較。劑量響應關係可以用藥物多劑量產生出來，具有95％CI的IC50值可以用線性回歸來估計。
這些標準實驗方法所得到的結果在如下表所示IC 50(nM或在1mmol時的％抑制劑)
測定MMP-1，MMP-9，和MMP-13抑制劑的方法這些測定是基於通過基質金屬蛋白酶MMP-1、MMP-13(膠原酶)或MMP-9(白明膠酶)導致與DTNB((5，5』-二硫代-雙(2-硝基-苯甲酸))有比色反應的底物釋放，引起例如Ac-Pro-Leu-Gly(2-氫硫基-4-甲基-戊醇基)-Leu-Gly-OEt硫酞酶底物的分裂。酶活性通過顏色增加率來測定。硫酞酶底物是製備的20mM的100％DMSO貯備液，DTNB是溶解於100％DMSO的中的100mM貯備液，並且在室溫下黑暗貯存。底物和DTNB在使用前都用底物緩衝液(50mM HEPES pH7.5 5mM CaC12)稀釋到1mM。酶貯備液用測定緩衝液(50mM HEPES pH7.5，5mMCa Cl2，0.02％Brij)稀釋成最後所需要的濃度。將測定緩衝液、酶、載體或抑制劑和DTNB/底物以上述次序加入到96孔板中(總反應體積200μl)，顏色的增加用板讀器在405nm處進行5分鐘的分光光度測定。將顏色對時間的增加作線性圖。
另外，還可以使用螢光縮氨酸底物。在本測定中，縮氨酸底物含有螢光基團和熄滅基團。由MMP使底物分裂後，產生的螢光可以用螢光板讀器來定量。本測定用人體重組酶MMP-1、MMP-9、或MMP-13在HCBC測定緩衝液(50mM HEPES，pH7.0，5mM Ca+2，0.02％Brij，0.5％半胱氨酸)中進行。將底物溶解在甲醇中並且在1mM等分試樣中冷凍儲存。對於測定來說，底物和酶用HCBC緩衝液稀釋成所需要的濃度。將化合物加入到含有酶的96孔板中，通過加入底物而開始反應。將反應讀取10分鐘(340nm激發，444nm發射)。用螢光對時間的增加作線性圖。
無論是對於硫縮氨酸還是螢光縮氨酸的測定，曲線的斜率可以計算，並代表反應速率。確認反應速率的線性(r2＞0.85)。平均控制率(x±sem)可以計算出來，並且與用Dunnett’s多次對比實驗的藥物處理率的統計顯著性進行比較。劑量響應關係可以用藥物多劑量產生出來，具有95％CI的IC50值可以用線性回歸來估計。
體內MMP抑制在麻醉狀態下，將一個含有基質金屬蛋白酶溶基質素、膠原酶或白明膠酶的0.5mL緩衝液2cm長的透析管(分子量切斷12-14,000，10mm平折寬度)以ip或sc(在後面)方式置入到大鼠(Sprague-Dawley，150-200g)或小鼠(CD-1，25-50g)體內。以PO(口服)、IP(腹膜內)、SC或通過頸靜脈導管以IV(靜脈)方式給藥。以每個動物0.1到0.25mL的體積劑量來給藥。收集透析管的內容物，就可以測定酶活性。
每個透析管的酶反應速率可以計算出來。從至少3種不同動物的透析管可用來計算平均±sem，用載體處理的動物相對於用藥物處理動物的統計顯著性可以通過方差分析來測定。(agents and Actions藥劑和作用21331，1987)。
測定TACE抑制的方法將96孔黑色微量滴定板的每一孔中放入由10μL TACE(Immunex，最終濃度1μg/mL)、含有10％甘油(最終濃度10mM)的70μL三緩衝液，pH7.4和10μL實驗化合物的DMSO溶液(最終濃度1μM，DMSO濃度小於1％)組成的溶液，並且在室溫下培養10分鐘。向每個孔中加入螢光肽醯底物(最終濃度100μM)而開始反應，然後用震蕩混合器震蕩5秒鐘。將反應讀取10分鐘(340nm激發，420nm發射)。用螢光對時間的增加作線性圖。曲線的斜率可以計算出來，並且代表反應速率。確認反應速率的線性(r2＞0.85)，平均控制率(x±sem)可以計算出來，並且與用Dunnett’s多次對比實驗的藥物處理率統計顯著性進行比較。劑量響應關係可以用藥物多劑量產生出來，具有95％CI的IC50值可以用線性回歸來估計。
以上體內和體外基質金屬蛋白酶抑制和TACE抑制的藥物測定結果見如下表I表I.MMP和TACE抑制
1.IC50nM或在濃度1μM時的％抑制2.％抑制相對於MMP-9(劑量，mg/kg)，ip＝腹膜內，po＝口服
權利要求
1.式I化合物及其藥用鹽 其中R1和R2獨立地選自H；C1-C12烷基或C1-C6全氟化烷基；X選擇於-O-SO2-CH3，-O-SO2-CF3或如下結構的基團 Z是-NO2，滷素，-CH3或-CF3；A選自-O-或-S-，-SO-或-SO2-；m是0到3整數；R3，R4，R5和R6獨立地選自H，滷素，-NO2，C1-C12烷基，C1-C12烷氧基，C1-C6全氟化烷基，OH或其C1-C4酯或烷基醚；-CN，-O-R1，-O-Ar，-S-R1，-S-Ar，-SO-R1，-SO-Ar，-SO2-R1，-SO2-Ar，-CO-R1，-CO-Ar，-CO2-R1，或-CO2-Ar；和Y是含有至多兩個選自-O-，-NH-，-N(C1-C4烷基)-，-N＝和-S(O)n-，的雜原子的6元飽和，不飽和或部分不飽和雜環，其中n是0-2的整數，該雜環任選被1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，C1-C4羥烷基，任選由1-3個下述取代基取代的苯基C1-C4烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2。
2.權利要求1的下式化合物和其藥用鹽 其中R1和R2獨立地選自H；C1-C12烷基，或C1-C6全氟化烷基；X是-O-SO2-CH3，-O-SO2-CF3，或如下結構的基團 Z是-NO2，滷素，-CH3或-CF3；A選自-O-或-S-，-SO-或-SO2-；m是0到3整數；Y是選自吡啶，吡嗪，嘧啶，噠嗪，哌啶，嗎啉，和吡喃的基團，所述基團可任選被1-3個取代基取代，所述取代基獨立地選自氫，羥基，滷素，C1-C4烷基，三滷甲基，C1-C4烷氧基，三滷甲氧基，C1-C4醯氧基，C1-C4烷硫基，C1-C4烷基亞硫醯基，C1-C4烷基磺醯基，C1-C4羥烷基，任選1-3個下述取代基取代的苯基C1-C4烷基，-CO2H，-CN，-CONHR1，-NH2，C1-C4烷氨基，C1-C4二烷氨基，-NHSO2R1，-NHCOR1，-NO2。
3.權利要求1的下式化合物及其可藥用鹽 其中A選自-S-，-SO-或-SO2-；R1和R2獨立地選自H，C1-C6烷基或C1-C6全氟化烷基，R3，R4，R5和R6獨立地選自H，OH或其C1-C4酯或其烷基醚，滷素，-CN，C1-C6烷基，或三氟甲基，m是0到3整數；Y的定義如權利要求1中所限定；X是-O-SO2-CH3，-O-SO2-CF3，或如下結構的基團 Z選自-NO2，滷素，-CH3或-CF3。
4.權利要求1的化合物是(4-氯甲基-苯氧基)-乙基-哌啶-1-基鹽酸鹽。
5.權利要求1的化合物是(4-氯甲基-苯氧基)-乙基-六亞甲基亞胺-1-基鹽酸鹽。
6.權利要求1的化合物是(4-氯甲基-苯氧基)-乙基-二甲基氨基鹽酸鹽。
7.權利要求1-3的任何一個權利要求的式(I)化合物或其可藥用鹽的製備方法，該方法包括下述步驟之一a)採用適當的方法，例如，用含有離去基團X的磺醯化劑或醯化劑，將下式的醇轉化成相應的式(I)的化合物， 其中，m，A，Y和R1-6的定義如權利要求1，X是離去基團；或b)將式(I)的化合物氧化，其中A是S，得到相應的式(I)化合物，其中A是SO或-SO2-；或c)將式(I)化合物轉變成其可藥用鹽。
8.製備權利要求1的化合物的方法，其中A是氧，該方法包含下述步驟a)將如下式的羥基苯甲醛 其中R5-R6的定義如權利要求1，用具有如下結構式的烷基滷化物進行烷基化反應 其中R1-R2的定義如權利要求1，m是0-3的整數，滷素選自Cl，F，Br或I，製得如下式的醛 b)還原步驟a)的醛而得到如下式的醇化合物 c)轉變步驟b)的醇，成為其鹽酸鹽；和d)將步驟c)的醇化合物轉變成權利要求1的化合物。
9.製備權利要求1化合物的方法，其中A是S，該方法包括下述步驟a)將下式的化合物， 其中R3-6的定義如權利要求1，用下述結構的烷基化劑進行烷基化 其中Y，R1，R2和m定義如權利要求1，滷素可以是Cl，F，Br或I，製得如下結構式的醛 b)用硼氫化鈉還原該醛製得如下式的醇 c)用氯化氫氣體處理步驟b)的醇化合物製得其鹽酸鹽；和d)將步驟c)的醇化合物的鹽酸鹽轉變成為權利要求1的化合物。
10.權利要求9的製備方法還包括將步驟d)的醇化合物的鹽酸鹽中的硫控制氧化成亞碸或碸。
11.根據權利要求7-10的任何一個權利要求的方法，其中，在吡啶或三乙胺的存在下，通過用甲磺醯氯或甲苯磺醯氯或三氟乙酸酐處理，將醇轉變成權利要求1的化合物。
12.根據權利要求7-11的任何一個權利要求的方法，其中滷素是Cl，m是2。
13.生產下式化合物的方法 其中Y代表含有一個或兩個氮原子的六元不飽和或部分不飽和的雜環，該雜環通過所述環上的氮原子與乙氧基橋相連接，並且任選被選自如下述基團的1到3個基團取代C1-C6烷基，C1-C6烷氧基，C1-C6烷硫基，-CF3或-NO2；該方法包括在鹼性介質下，將4-羥基苯甲醇與下式的化合物的鹽進行反應 其中Y的定義如上。
14.如權利要求13的製備方法，其中鹼性介質的pH保持在9或更大。
15.包含利要求1-6中任何一權利要求的式(I)的化合物或其藥用鹽和可藥用載體的藥物組合物。
全文摘要
本發明提供了用於生物活性化合物的合成的式(I)化合物及其製備方法，其中R
文檔編號C07C217/48GK1765891SQ20051011810
公開日2006年5月3日 申請日期1998年10月14日 優先權日1997年10月15日
發明者P·拉韋德拉納特, J·澤爾迪斯, G·維德, J·R·波託斯基, 任建新 申請人:惠氏公司