一種甘蔗梢腐病抗性鑑定方法
2024-03-01 14:41:15
一種甘蔗梢腐病抗性鑑定方法
【專利摘要】本發明公開了一種甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，是將配製好的甘蔗梢腐病病原菌孢懸液注射到甘蔗苗生長點上，同時設空白無菌水為對照，接種後的甘蔗苗培養10～15天後調查病原菌繁殖情況，根據發病程度和發病病情指數將甘蔗品種對甘蔗梢腐病的抗病性分為免疫、抗病、中抗和感病四個級別。本發明所採用的注射接種方式對甘蔗苗梢腐病進行鑑定，該方法更接近于田間甘蔗苗期感染梢腐病的實際情況，能直觀的表現出不同品種甘蔗苗對甘蔗梢腐病的抗性水平。
【專利說明】一種甘蔗梢腐病抗性鑑定方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，屬於作物病害抗性鑑定【技術領域】。
【背景技術】
[0002] 甘鹿梢腐病（Pokkah Boeng Disease)病原為串珠鐮孢（Fusarium moniliformae)，無性階段可產生串珠狀分生孢子或者假頭狀產孢，有性態為串珠赤黴菌 (Gibberella moniliformis)。甘鹿梢腐病主要發生在甘鹿的幼嫩葉片和梢部，感病後引起 植株梢部腐爛，故名梢腐病。植株感染後心葉呈現梯形凹凸扭曲，有縱裂，梢頭部葉片常纏 在一起發生變形，並出現明顯的褐色皺紋。植株受害嚴重時，其生長點周圍的組織會變軟變 褐，心葉壞死，形成梢腐，導致整株甘蔗枯死，對甘蔗的產量和品質產生很大的影響。1921在 印度尼西亞爪哇首次報導了該病，目前該病幾乎遍及所有的甘蔗生產國和地區，已發展成 一種世界性病害。
[0003] 在我國，由於新臺糖22的大面積推廣種植，品種單一，梢腐病在我國蔗區的發生 呈逐漸加重趨勢，導致該病已成為甘蔗生長前中期的主要病害。甘蔗梢腐病在我國蔗區普 遍發生，在高溫高溼天氣持續時間長的年份，部分地區梢腐病發病率在25 %以上，最高達 40%，已對我國甘蔗生產和糖業的可持續發展構成嚴重威脅。
[0004] 但至今尚未建立高效、準確的甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，鑑於我國甘蔗梢腐病發 生逐漸加重的趨勢，因此建立一套快速有效的甘蔗梢腐病抗性鑑定方法並篩選抗性種質資 源和品種勢在必行。
【發明內容】
[0005] 針對我國甘蔗梢腐病抗性鑑定方法的空白，本發明的目的在於提供一種簡便、快 速、準確的甘蔗梢腐病抗性鑑定方法。
[0006] 為實現上述目的，本發明採用的技術方法如下：
[0007] -種甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，包括以下步驟：
[0008] 1)配製甘蔗梢腐病病原菌孢懸液
[0009] 將甘蔗梢腐病病原菌接種於PDA培養基上活化，挑取邊緣菌絲接種在滅菌後的 馬鈴薯葡萄糖水培養基中震蕩培養，離心、過濾收集菌體，用無菌水製成濃度為1 X 106? 1 X 107CFU/ml的甘蔗梢腐病病原菌孢懸液備用；
[0010] 2)參試甘蔗苗的準備
[0011] 將各品種的甘蔗種消毒、播種，出苗後長至3?4片完全葉，備用；
[0012] 3)接種鑑定
[0013] 將步驟1)得到的甘蔗梢腐病病原菌孢懸液接種到步驟2)所述的各品種的甘蔗苗 生長點，同時對各品種的甘蔗苗都設空白無菌水為對照；
[0014] 4)病情調查
[0015] 接種後的甘蔗苗培養10?15天後調查梢腐病病原菌繁殖情況，根據發病程度和 病原拓展面積，按發病等級劃分標準進行分級並計算病情指數，根據病情指數進行甘蔗品 種的梢腐病抗性水平評價，甘蔗梢腐病品種抗性等級劃分標準如下：
[0016] 免疫 病情指數￡0.01; 抗病 0.01 <病情指數夂0.0; 中抗 30.0<病情指數550.0; 感病 50.0 <病情指數。
[0017] 對於注射接種法，所述的發病等級劃分標準如下：
[0018] 0級葉片無症狀；
[0019] 1級新葉無症狀，一片葉片發病,接種後病原拓展面積佔發病葉片面積小於5% ;
[0020] 2級新葉無症狀，一片葉片發病，接種後病原拓展面積佔發病葉片面積5%? 15%之間，包括5% ;
[0021] 3級新葉無症狀，兩片葉片發病，接種後病原拓展面積佔發病葉片面積15%? 25%之間，包括15% ;
[0022] 4級新葉部分發病，緊挨新葉的葉片有明顯黃褐色病斑，接種後病原拓展面積佔 發病葉片面積25%?35%之間，包括25% ;
[0023] 5級新葉大部分或全部死亡，緊挨新葉的葉片有大面積黃褐色病斑，接種後病原 拓展面積佔發病葉片面積的35%以上。
[0024] 對於剪葉接種法，所述的發病等級劃分標準如下：
[0025] 0級無病症；
[0026] 1級剪口處黑色無擴展，〈1mm失綠；
[0027] 2級病斑從剪口向外擴展，1?3mm壞死斑；
[0028] 3級病斑從剪口向外擴展，3?5mm褐斑；
[0029] 4級病斑從剪口向外擴展，5?7mm黃褐色病斑；
[0030] 5級病斑從剪口向外擴展，>7mm以上黃褐色病斑。
[0031] 所述的病情指數計算公式為：
[0032] 病情指數=[2 (發病等級數X相應等級的發病棵數V (最高發病等級數X總 調查棵數）]X100。
[0033] 所述的病情指數計算公式同時適用於剪葉接種法和注射接種法。
[0034] 優選的，步驟1)中，所述甘蔗梢腐病病原菌活化時間為2?8天。
[0035] 優選的，步驟1)中，所述甘蔗梢腐病病原菌震蕩培養時間為2?8天。
[0036] 優選的，步驟3)中,所述孢懸液注射量為10?100 ii 1。
[0037] 優選的，步驟3)中，接種方法為剪葉法或注射法。
[0038] 本發明的有益效果是：
[0039] 1、本發明通過注射接種方式對甘蔗苗梢腐病進行鑑定，該方法更接近于田間甘蔗 苗感染梢腐病的實際情況，能直觀的表現出不同品種甘蔗苗對甘蔗梢腐病的抗性水平。
[0040] 2、本鑑定方法快速、操作簡便，對實驗設備要求不高，各育種單位均能通過此法開 展鑑定工作。
[0041] 3、該鑑定方法為甘蔗抗病育種前期提供技術支持，剔除部分感病品種，為後期品 種篩選減輕人力物力，該方法的推廣使用，對於篩選抗病品種和指導甘蔗抗病育種具有重 要意義和現實作用。
【具體實施方式】
[0042] 下面結合具體實施例，對本發明作進一步詳細的闡述，但本發明的實施方式並不 局限於實施例表示的範圍。這些實施例僅用於說明本發明，而非用於限制本發明的範圍。此 夕卜，在閱讀本發明的內容後，本領域的技術人員可以對本發明作各種修改，這些等價變化同 樣落於本發明所附權利要求書所限定的範圍。
[0043] 實施例1
[0044] 1、接種體的製備
[0045] 分別製備甘蔗梢腐病病原菌菌株CN0?1和菌株YN41 (廣西大學甘蔗種質資源 創新與遺傳改良實驗室提供）孢懸液。兩種菌株孢懸液的製備方法相同，具體為：將甘蔗 梢腐病病原菌接種於PDA培養基上活化3天，挑取邊緣菌絲接種在滅菌的馬鈴薯葡萄糖水 培養基中震蕩培養3天，離心收集菌體，用滅菌的脫脂棉過濾，用無菌水調節孢子濃度至 1 X 106CFU/ml濃度。獲得菌株CN0?1孢懸液和菌株YN41孢懸液。
[0046] 2、接種材料的處理
[0047] 選取不同的甘蔗品種為接種材料，包括新臺糖22、福桂1號、福桂2號和福桂3號， 用0. 3 %多菌靈浸種20min，每桶種植10芽於溫室中，出苗後正常管理，長出3?4片完全 葉時進行接種。
[0048] 3、接種
[0049] 3. 1剪葉接種法
[0050] 操作要點為：首先，用無菌剪刀沾取待接孢懸液；然後，在最頂部一片完全葉葉片 中間剪5mm大小傷口。要求無菌剪刀沾取一次孢懸液，只剪切一次葉片，剪切下一張葉片 前，必須重新沾取孢懸液。
[0051] 3. 2注射接種法
[0052] 操作要點為：用1ml醫用注射器將20 yl孢子懸浮液注射到甘蔗生長點。
[0053] 3. 3試驗方案設計
[0054] ①取長勢相同的各品種甘蔗苗各10株，分別用剪葉接種法接種，接種體為菌株 CN0?1孢懸液；再取長勢相同的各品種甘蔗苗各10株，以沾無菌水剪葉為對照。
[0055] ②取長勢相同的各品種甘蔗苗各10株，分別用剪葉接種法接種，接種體為菌株 YN41孢懸液；再取長勢相同的各品種甘蔗苗各10株，以沾無菌水剪葉為對照。
[0056] ③取長勢相同的各品種甘蔗苗各10株，分別用注射接種法接種，接種體為菌株 CN0?1孢懸液；再取長勢相同的各品種甘蔗苗各10株，以注射無菌水為對照。
[0057] ④取長勢相同的各品種甘蔗苗各10株，分別用注射接種法接種，接種體為菌株 YN41孢懸液；再取長勢相同的各品種甘蔗苗各10株，以注射無菌水為對照。
[0058] 4、病情調查
[0059] 4. 1發病等級劃分標準：
[0060] 接種後的甘蔗苗培養10天後調查梢腐病病原菌繁殖情況,根據發病程度和病原 拓展面積，按發病等級劃分標準進行分級並計算病情指數，發病等級劃分標準見表1。
[0061] 表1發病等級劃分標準
[0062]
【權利要求】
1. 一種甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，其特徵在於，包括以下步驟： 1) 配製甘蔗梢腐病病原菌孢懸液 將甘蔗梢腐病病原菌接種於PDA培養基上活化，挑取邊緣菌絲接種在滅菌後的馬 鈴薯葡萄糖水培養基中震蕩培養，離心、過濾收集菌體，用無菌水製成濃度為IX 106? 1 X 107CFU/ml的甘蔗梢腐病病原菌孢懸液備用； 2) 參試甘蔗苗的準備 將各品種的甘蔗種消毒、播種，出苗後長至3?4片完全葉，備用； 3) 接種鑑定 將步驟1)得到的甘蔗梢腐病病原菌孢懸液接種到步驟2)所述的各品種的甘蔗苗生長 點，同時對各品種的甘蔗苗都設空白無菌水為對照； 4) 病情調查 接種後的甘蔗苗培養10?15天後調查梢腐病病原菌繁殖情況，根據發病程度和病原 拓展面積，按發病等級劃分標準進行分級並計算病情指數，根據病情指數進行甘蔗品種的 梢腐病抗性水平評價，甘蔗梢腐病品種抗性等級劃分標準如下： 免疫病情指數< 〇. 〇1 ; 抗病 0. 01 <病情指數< 30. 0 ; 中抗 30. 0 <病情指數< 50. 0 ; 感病 50. 0 <病情指數。
2. 根據權利要求1所述甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，其特徵在於，步驟3)中，接種方法為 剪葉接種法或注射接種法。
3. 根據權利要求2所述甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，其特徵在於，對於注射接種法，所述 的發病等級劃分標準如下： 〇級葉片無症狀； 1級新葉無症狀，一片葉片發病，接種後病原拓展面積佔發病葉片面積小於5% ; 2級 新葉無症狀，一片葉片發病，接種後病原拓展面積佔發病葉片面積5%?15% 之間，包括5% ; 3級新葉無症狀,兩片葉片發病，接種後病原拓展面積佔發病葉片面積15%?25% 之間，包括15% ; 4級 新葉部分發病，緊挨新葉的葉片有明顯黃褐色病斑，接種後病原拓展面積佔發 病葉片面積25%?35%之間，包括25% ; 5級 新葉大部分或全部死亡，緊挨新葉的葉片有大面積黃褐色病斑，接種後病原拓 展面積佔發病葉片面積的35%以上。
4. 根據權利要求2所述甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，其特徵在於，對於剪葉接種法，所述 的發病等級劃分標準如下： 〇級無病症； 1級剪口處黑色無擴展，〈1mm失綠； 2級病斑從剪口向外擴展，1?3mm壞死斑； 3級病斑從剪口向外擴展，3?5mm褐斑； 4級病斑從剪口向外擴展，5?7_黃褐色病斑； 5級病斑從剪口向外擴展，>7mm以上黃褐色病斑。
5. 根據權利要求2所述甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，其特徵在於，所述的病情指數計算 公式為： 病情指數=[2 (發病等級數x相應等級的發病棵數V(最高發病等級數x總調查 棵數）]X100; 所述的病情指數計算公式同時適用於剪葉接種法和注射接種法。
6. 根據權利要求2所述甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，其特徵在於，步驟1)中，所述甘蔗梢 腐病病原菌活化時間為2?8天。
7. 根據權利要求2所述甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，其特徵在於，步驟1)中，所述甘蔗梢 腐病病原菌震蕩培養時間為2?8天。
8. 根據權利要求2所述甘蔗梢腐病抗性鑑定方法，其特徵在於，步驟3)中，所述孢懸液 注射量為10?100 u 1。
【文檔編號】A01G7/00GK104450862SQ201410614074
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年11月4日 優先權日:2014年11月4日
【發明者】張木清, 徐世強, 王繼華 申請人:廣西大學