一種用於楊樹擴繁的通用培養基及快速擴繁方法與流程

2024-03-27 21:12:05 1

本發明屬於楊樹擴繁技術領域，具體涉及一種用於楊樹擴繁的通用培養基及快速擴繁方法。

背景技術：

楊樹對環境的適應能力強，在我國分布廣泛，無論是肥沃的土地還是貧瘠的山地，均能很好的生長。楊樹具有很高的經濟使用價值和環保價值，其主幹通直、材質細密、生長快，是紙漿材原料林的重要樹種之一，也是優良水源涵養林和主要防護林帶的造林樹種之一。但由於許多楊樹嫁接成活率低、扦插生根困難，難以採用常規的無性繁殖方法進行增殖，影響了楊樹的大面積推廣。

為了有效的解決這一難題，我國的學者開始嘗試使用組織培養的方法對楊樹進行增殖。但到目前為止，人們對各品種楊樹的組織培養，多採用各自獨立的培養基，用於楊樹組織培養的通用培養基很少見。

技術實現要素：

為了解決楊樹組織培養中各楊樹品種需分別單獨製作培養基的複雜過程，本發明提供了一種用於楊樹擴繁的通用培養基及快速擴繁方法。所述通用培養基能夠在不同的楊樹品種上使用，使用所述通用培養基的所述快速擴繁方法，操作程序簡便，無需分別單獨製作培養基，使複雜生產工序簡化，工藝成本降低，經濟效益增加。

本發明所採用的技術方案為：一種用於楊樹擴繁的通用培養基，將MS培養基中NH4NO3的濃度降低四分之一後作為基礎培養基，並向所述基礎培養基中添加6-BA、NAA、TDZ、蔗糖和瓊脂，得到所述通用培養基，所述通用培養基中6-BA的濃度為0.2-0.4mg/L，NAA的濃度為0.04-0.07mg/L，TDZ的濃度為0.0005-0.0015mg/L，蔗糖的濃度為25-35g/L，瓊脂的濃度為5-6g/L。

本發明按照「先進、適用、經濟」的原則，巧妙地選用合適的激素及其配比，提供一種楊樹組織培養的通用培養基，以滿足楊樹組織培養的技術性能要求，所述通用培養基採用MS培養基為基礎，同時減少了其中NH4NO3的用量；附加成分由激素、蔗糖和固化劑組成。其中激素包括細胞分裂素和生長素兩種，採用6-BA(苄氨基腺嘌呤)、TDZ(噻苯隆)作為細胞分裂素，NAA(萘乙酸)和IBA(吲哚乙酸)作為生長素，多種成分綜合使用，得到一種適用多種楊樹品種(如楊樹雜交種、遼楊、毛新楊和新疆楊)的通用培養基。

進一步地，所述通用培養基中6-BA的濃度為0.3mg/L，NAA的濃度為0.05mg/L，TDZ的濃度為0.001mg/L，蔗糖的濃度為30g/L，瓊脂的濃度為5.5g/L。

為保證楊樹擴繁的正常進行，所述通用培養基的pH值為5.8-6.2。

作為一種保持通用培養基pH值的方法，在所述通用培養基中加入pH緩衝劑。

本發明還提供了一種使用所述通用培養基的快速擴繁方法，包括以下步驟：

A、原料準備：取楊樹莖段並做滅菌處理，得脫毒莖段；

B、增殖繼代培養，在無菌條件下，將步驟A中得到的所述脫毒莖段接種在所述通用培養基上，並置於22-28℃的黑暗條件下培養7-10天後，轉入22-28℃的光照條件下培養20-40天，光照強度為1600-2000Lux，每天光照時間為10-16小時；即可得到楊樹幼苗。

使用所述通用培養基的快速擴繁方法，操作程序簡便，無需分別單獨製作培養基，使複雜生產工序簡化，工藝成本降低，經濟效益增加。

為了促使楊樹幼苗更好地生根，優選的技術方案是，增殖繼代培養之後還包括C、生根培養：取步驟B得到的楊樹幼苗頂端3-5cm的部分，接種在生根培養基上，並置於22-28℃的光照條件下培養30-40天，光照強度為1600-2000Lux，每天光照時間為10-16小時；即可得到帶有根的楊樹幼苗。

為了使楊樹苗迅速適應陸地的環境條件，優選的技術方案是，生根培養之後還包括D、煉苗移栽：將步驟C得到的根系達2-3cm的楊樹苗進行煉苗移栽。

所述生根培養基是使用1/2MS培養基為基礎，並添加蔗糖、IBA和瓊脂得到，所述生根培養基中蔗糖的濃度為30g/L，IBA的濃度為0.5mg/L，瓊脂的濃度為5.5g/L。

在步驟A中，取楊樹半木質化嫩枝，去除葉片以及頂芽，依次使用洗滌劑溶液、酒精溶液和氯化汞溶液衝洗後，吸乾楊樹莖段表面水分後得到脫毒莖段。

進一步地，所述酒精溶液的體積分數為75％，所述氯化汞溶液的中氯化汞的質量分數為0.1％；在酒精溶液和0.1％的氯化汞溶液衝洗後，均使用無菌水對所述楊樹莖段進行衝洗。

本發明的有益效果為：

1、本發明公開了一種用於楊樹擴繁的通用培養基，所述通用培養基能夠在不同的楊樹品種上使用，擴大了培養基使用的範圍，從而減少了楊樹擴繁的步驟。

2、本發明還公開了一種快速擴繁方法，操作程序簡便，無需分別單獨製作培養基，使複雜生產工序簡化，工藝成本降低，經濟效益增加。

具體實施方式

下面結合實施例，更具體地說明本發明的內容。應當理解，本發明的實施並不局限於下面的實施例，對本發明所做的任何形式上的變通和/或改變都將落入本發明保護範圍。

在本發明中，若非特指，所有的份、百分比均為重量單位，所有的設備和原料等均可從市場購得或是本行業常用的。下述實施例中的方法，如無特別說明，均為本領域的常規方法。

實施例1

一種用於楊樹擴繁的通用培養基，將MS培養基中NH4NO3的濃度降低四分之一後作為基礎培養基，並向所述基礎培養基中添加6-BA、NAA、TDZ、蔗糖和瓊脂，得到所述通用培養基，所述通用培養基中6-BA的濃度為0.2mg/L，NAA的濃度為0.07mg/L，TDZ的濃度為0.0005mg/L，蔗糖的濃度為35L，瓊脂的濃度為5g/L。

實施例2

一種用於楊樹擴繁的通用培養基，將MS培養基中NH4NO3的濃度降低四分之一後作為基礎培養基，並向所述基礎培養基中添加6-BA、NAA、TDZ、蔗糖和瓊脂，得到所述通用培養基，所述通用培養基中6-BA的濃度為0.4mg/L，NAA的濃度為0.04mg/L，TDZ的濃度為0.0015mg/L，蔗糖的濃度為25g/L，瓊脂的濃度為6g/L。

實施例3

一種用於楊樹擴繁的通用培養基，將MS培養基中NH4NO3的濃度降低四分之一後作為基礎培養基，並向所述基礎培養基中添加6-BA、NAA、TDZ、蔗糖和瓊脂，得到所述通用培養基，所述通用培養基中6-BA的濃度為0.3mg/L，NAA的濃度為0.05mg/L，TDZ的濃度為0.001mg/L，蔗糖的濃度為30g/L，瓊脂的濃度為5.5g/L。

實施例4

一種使用實施例3中所述通用培養基的快速擴繁方法，包括以下步驟：

A、原料準備：取楊樹半木質化嫩枝，去除葉片以及頂芽，放入含有洗滌劑溶液中浸泡1min，再用流水衝洗40min，用75％的酒精對其再進行消毒，消毒時間為40s，消毒後用無菌水衝洗4次，然後用質量分數為0.1％的氯化汞溶液處理3min後，用無菌水衝洗5次，衝洗後，吸乾楊樹莖段表面水分後得到脫毒莖段；

B、增殖繼代培養，在無菌條件下，將步驟A中得到的所述脫毒莖段切成長度為1cm的帶單芽莖段，接種在所述通用培養基上，並置於28℃的黑暗條件下培養7天後，轉入28℃的光照條件下培養20天，光照強度為2000Lux，每天光照時間為10小時；即可得到楊樹幼苗；

C、生根培養：取步驟B得到的楊樹幼苗頂端5cm的部分，接種在生根培養基上，並置於22℃的光照條件下培養30天，光照強度為1600Lux，每天光照時間為16小時；即可得到帶有根的楊樹幼苗；所述生根培養基是使用1/2MS培養基為基礎，並添加蔗糖、IBA和瓊脂得到，所述生根培養基中蔗糖的濃度為30g/L，IBA的濃度為0.5mg/L，瓊脂的濃度為5.5g/L；

D、煉苗移栽：將步驟C得到的根系達2-3cm的楊樹苗進行煉苗移栽。

實施例5

一種使用實施例3中所述通用培養基的快速擴繁方法，包括以下步驟：

A、原料準備：取楊樹半木質化嫩枝，去除葉片以及頂芽，放入含有洗滌劑溶液中浸泡2min，再用流水衝洗20min，用75％的酒精對其再進行消毒，消毒時間為50s，消毒後用無菌水衝洗2次，然後用質量分數為0.1％的氯化汞溶液處理7min後，用無菌水衝洗4次，衝洗後，吸乾楊樹莖段表面水分後得到脫毒莖段；

B、增殖繼代培養，在無菌條件下，將步驟A中得到的所述脫毒莖段切成長度為2cm的帶單芽莖段，接種在所述通用培養基上，並置於22℃的黑暗條件下培養10天後，轉入22℃的光照條件下培養40天，光照強度為1600Lux，每天光照時間為16小時；即可得到楊樹幼苗；

C、生根培養：取步驟B得到的楊樹幼苗頂端3cm的部分，接種在生根培養基上，並置於28℃的光照條件下培養35天，光照強度為2000Lux，每天光照時間為10小時；即可得到帶有根的楊樹幼苗；所述生根培養基是使用1/2MS培養基為基礎，並添加蔗糖、IBA和瓊脂得到，所述生根培養基中蔗糖的濃度為30g/L，IBA的濃度為0.5mg/L，瓊脂的濃度為5.5g/L；

D、煉苗移栽：將步驟C得到的根系達2-3cm的楊樹苗進行煉苗移栽。

實施例6

一種使用實施例3中所述通用培養基的快速擴繁方法，包括以下步驟：

A、原料準備：取楊樹半木質化嫩枝，去除葉片以及頂芽，放入含有洗滌劑溶液中浸泡1min，再用流水衝洗30min，用75％的酒精對其再進行消毒，消毒時間為30s，消毒後用無菌水衝洗3次，然後用質量分數為0.1％的氯化汞溶液處理5min後，用無菌水衝洗4次，衝洗後，吸乾楊樹莖段表面水分後得到脫毒莖段；

B、增殖繼代培養，在無菌條件下，將步驟A中得到的所述脫毒莖段切成長度為1cm的帶單芽莖段，接種在所述通用培養基上，並置於25℃的黑暗條件下培養8天後，轉入25℃的光照條件下培養30天，光照強度為1800Lux，每天光照時間為13小時；即可得到楊樹幼苗；

C、生根培養：取步驟B得到的楊樹幼苗頂端4cm的部分，接種在生根培養基上，並置於25℃的光照條件下培養40天，光照強度為1800Lux，每天光照時間為13小時；即可得到帶有根的楊樹幼苗；所述生根培養基是使用1/2MS培養基為基礎，並添加蔗糖、IBA和瓊脂得到，所述生根培養基中蔗糖的濃度為30g/L，IBA的濃度為0.5mg/L，瓊脂的濃度為5.5g/L；

D、煉苗移栽：將步驟C得到的根系達2-3cm的楊樹苗進行煉苗移栽。

最後所應說明的是，以上實施例僅用以說明本發明的技術方案而非限制，儘管參照較佳實施例對本發明進行了詳細說明，所應理解的是，以上所述僅為本發明的具體實施方式而已，並不用於限定本發明的保護範圍，凡在本發明的精神和原則之內，所做的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的保護範圍之內。