韃靼忍冬組培配方和培養方法
2024-03-27 20:04:05
韃靼忍冬組培配方和培養方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及植物培養技術領域，具體涉及一種韃靼忍冬組培配方和培養方法。
【背景技術】
[0002]韃靼忍冬別名桃色忍冬、新疆忍冬，忍冬科忍冬屬落葉灌木，高達3米。葉卵形或卵狀橢圓形，長2-6釐米。花成對腋生，總花梗長1-2釐米，花冠唇形，桃紅色、紅色或白色，外面光滑，裡面有毛。漿果紅色，常合生。韃靼忍冬花開繁茂燦爛，白的皎潔高貴，紅的激情似火，桃紅色的嬌豔嫵媚，各色都別具風採!夏日，紅果燦若瑪瑙，圓如珍珠，掛滿枝梢更添火熱，因此具有很高的園林價值。
[0003]目前，韃靼忍冬常用的繁殖方法為種子繁殖、扦插繁殖，受季節的限制，繁殖係數低，目前尚未看到韃靼忍冬組培方面的報導和專利。
【發明內容】
[0004]針對上述現有技術，本發明要解決的技術問題在於提供一種韃靼忍冬組培配方和培養方法，通過消毒外植體，得到無菌培養體系，繼而利用不同種類和不同濃度的外源激素的配比，對組培苗進行繼代增殖、生長和生根進行篩選、調控，最後確定最佳外植體和培養基配方，使韃靼忍冬能不受季節的限制、快速的增殖，能適應工廠化生產。
[0005]為此，本發明提供了一種韃靼忍冬組培配方，其特徵在於，包括:
[0006]初代培養基:MS+6-BA0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0007]繼代增殖培養基:MS+6-BA2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0008]生根培養基:1/2MS+NAA1.5mg/L；
[0009]上述培養基均添加3%質量百分比蔗糖和0.65%質量百分比瓊脂粉，pH值5.85。
[0010]優選的，所述MS培養基為:工作液濃度單位為mg/L，其中包含:
[0011]大量元素:NH4NO31650、KN03 1900^CaCl2.2H20 440^MgSO4.7H20370^KH2PO4170；
[0012]微量元素:KI0.83^H3BO3 6.2^MnSO4.H2O 21.4^ZnSO4.7H20 8.6^Na2MnO4.2H200.25、CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H20 0.025；
[0013]鐵鹽:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8；
[0014]有機物:煙酸0.5、鹽酸吡哆素0.5、鹽酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。
[0015]優選的，所述培養基需要經過高壓滅菌鍋消毒25min，高壓滅菌鍋工作溫度120°C，壓強 115kPa。
[0016]所述6-BA為6-苄基嘌呤，所述KT為激動素，所述NAA為奈乙酸。
[0017]本發明還提供了一種韃靼忍冬培養方法，包括以下幾個步驟:
[0018](I)選擇外植體，用肥皂水清洗後在接種室超淨工作檯用75%體積百分比酒精消毒Imin，接著用無菌水衝洗2遍，再用0.1 %質量百分比升萊消毒15min，用無菌水衝洗3遍，最後用消毒過的濾紙吸乾外面的水分；
[0019](2)將消毒好的外植體接種到初代培養基上，培養得到無菌的幼苗；
[0020](3)將得到無菌的幼苗接種到繼代增殖培養基上，培養得到分化苗；
[0021](4)將得到的分化苗接種到生根培養基上，培養得到生根苗；
[0022](5)煉苗，把得到的生根組培苗在煉苗室中不開蓋煉苗10天，然後移栽到珍珠巖:土壤=1:4的基質中，得到成品；
[0023]所述培養基為:
[0024]初代培養基:MS+6-BA0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0025]繼代增殖培養基:MS+6-BA2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L；
[0026]生根培養基:1/2MS+NAA1.5mg/L；
[0027]上述培養基均添加3%質量百分比蔗糖和0.65%質量百分比瓊脂粉，pH值5.85。
[0028]優選的，所述MS培養基為:
[0029]工作液濃度單位為mg/L，其中包含:
[0030]大量元素:NH4NO31650、KN03 1900、CaCl2.2H20 440、MgS(k.7H20370、ΚΗ2Ρ〇4170；
[0031]微量元素:KI0.83^H3BO3 6.2^MnSO4.H2O 21.4^ZnSO4.7H20 8.6^Na2MnO4.2H200.25^CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H2O 0.025；
[0032]鐵鹽:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8；
[0033]有機物:煙酸0.5、鹽酸吡哆素0.5、鹽酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。
[0034]優選的，所述步驟(I)選擇的外植體為當年新生帶側芽莖段。
[0035]優選的，所述步驟(2)至(4)選用的培養室條件為:培養溫度25°C，光照強度1200勒克斯，光照時間12h/d。
[0036]本發明的韃靼忍冬組培配方和培養方法，通過消毒外植體，得到無菌培養體系，繼而利用不同種類和不同濃度的外源激素的配比，對組培苗進行繼代增殖、生長和生根進行篩選、調控，最後確定最佳外植體和培養基配方，使其能適應工廠化生產。通過該組培配方和方法能夠大量繁殖韃靼忍冬，滿足園林綠化需求，所生產的苗木形狀穩定，生產周期短，能夠滿足規模化快速生產。本發明能不受季節的限制、快速的增殖，繁殖周期短，能完整的繼承母本的優良特性，為組培工廠化生產解決了一個難題。
【具體實施方式】
[0037]下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明:
[0038]1、韃靼忍冬培養基配方的配製
[0039]1.1培養基母液的配製和保存
[0040]MS培養基含有近30種營養成分，為了避免每次配製培養基都要對這幾十種成分進行稱量，可將培養基中的各種成分，按原量的整數倍分別稱量，配成濃縮液，這種濃縮液叫做培養基母液。
[0041]母液INH4NO333g/L、KN03 38g/L、MgS04.7H20 7.4g/L、KH2P043.4g/L，母液 ΠCaCl2.2H20 8.8g/L，母液ΙΠΗ3ΒΟ3 620mg/L、MnS04.H202140mg/L、ZnSO4.7H20 860mg/L、KI83mg/L，母液IVNa2MnO4.2H20250mg/L、CuSO4.5H20 25mg/L、CoCl2.6H2O 25mg/L，母液 VNa2.EDTA3.73g/L,FeSO4.7H20 2.78g/L，母液VI肌醇 10g/L、甘氨酸0.2g/L，母液VII煙酸0.5g/L、鹽酸吡哆素(VB6)0.5g/L、鹽酸硫胺素(VBl)0.lg/L，溶液①NAA1000mg/L，溶液②KT1000mg/L，溶液③升汞lg/L，溶液④6-BA1000mg/L，溶液⑤NaOH0.5mol/L，溶液⑥HC10.5mol/Lo
[0042]配製母液1、母液Π、母液m、母液IV、母液V、母液V1、母液νπ、溶液①、溶液②、溶液③、溶液④，溶液⑤，溶液⑥各IL。
[0043]母液I和母液Π為20倍濃縮液，母液m、母液V和母液VI為100倍濃縮液，母液IV和母液W為1000倍濃縮液，保存在冰箱的冷藏室中。
[0044]1.2配製IL韃靼忍冬初代培養基配方需要母液I和母液Π 50ml，母液ΙΠ、母液V和母液VIlOml，母液IV和母液VHlml，溶液①0.2ml，溶液②0.5ml，溶液④0.5ml，蔗糖25g，瓊脂粉6.5g。
[0045]1.3配製IL韃靼忍冬繼代增殖培養基配方需要母液I和母液Π 50ml，母液ΙΠ、母液V和母液VI1ml，母液IV和母液Wlml，溶液①0.2ml，溶液②Iml，溶液④2ml，蔗糖30g，瓊脂粉6.5g。
[0046]1.4配製IL韃靼忍冬生根培養基配方需要母液I和母液Π 25ml，母液ΙΠ、母液V和母液VIlOml，母液IV和母液VHlml，溶液①1.5ml，蔗糖30g，瓊脂粉6.5g。
[0047]1.5用溶液⑤或溶液⑥將pH值調到5.85。
[0048]1.6把IL韃靼忍冬培養基配方分裝到培養瓶中，每瓶50ml。
[0049]1.7把裝有韃靼忍冬培養基配方的培養瓶放到高壓滅菌鍋中，消毒25min，高壓滅菌鍋工作溫度120 °C，壓強115kPa。
[0050]1.8把滅菌好的韃靼忍冬培養基放置接種室，冷卻凝固。
[0051]2、外植體的處理，選擇韃靼忍冬當年生的帶側芽的莖段作為外植體，以下都稱作外植體，用肥皂水清外植體，晾乾備用。
[0052]3、外植體接種到韃靼忍冬初代培養基上，外植體接種步驟都在接種室的超淨工作檯上操作。
[0053]3.1外植體首先用75%體積百分比酒精消毒lmin，用無菌水清洗2遍。
[0054]3.2外植體再用0.1 %質量百分比升汞溶液消毒15min，用無菌水清洗3遍。
[0055]3.3用消毒過的濾紙吸乾外植體表面的水分。
[0056]3.4用消毒過的鑷子把外植體接種到初代培養基上。
[0057]3.5每瓶培養基接種4個外植體。
[0058]4、外植體的培養，把接種外植體的培養基放置到培養室培養I個月，可以誘導出側芽，得到韃靼忍冬無菌苗。培養室溫度25°C，光照強度1200勒克斯，每天光照時間12h。
[0059]5、繼代接種和培養，在接種室超淨工作檯上取初代培養中生長良好的側芽，然後接種到韃靼忍冬繼代增殖培養基上，每瓶接種4個，把接種好的韃靼忍冬繼代增殖培養基放置到培養室培養1.5個月，增殖得到更多的無菌苗。培養室溫度25°C，光照強度1200勒克斯，每天光照時間12h。
[0060]6、生根接種和培養，在接種室超淨工作檯上，把繼代增殖培養基中無菌苗接種到生根培養基上，每瓶接種5株，接種好的韃靼忍冬生根培養基放置到培養室培養1.5個月。培養室溫度25°C，光照強度1200勒克斯，每天光照時間12h。
[0061]7、經過生根培養後，成為生根苗，經過15天開蓋煉苗，然後移栽到珍珠巖:土壤=1:4的基質中，得到成品。
[0062]上述對本發明的實施方式作了詳細說明，但是本發明並不限於上述實施方式，在本領域的普通技術人員所具備的知識範圍內，還可以對其作出種種變化。
【主權項】
1.一種韃靼忍冬組培配方，其特徵在於，包括: 初代培養基:MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 繼代增殖培養基:MS+6-BA 2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 生根培養基:1/2MS+NAA 1.5mg/L ； 上述培養基均添加3 %質量百分比蔗糖和0.65 %質量百分比瓊脂粉，pH值5.85。2.根據權利要求1所述的韃靼忍冬組培配方，其特徵在於，所述MS培養基為: 工作液濃度單位為mg/L，其中包含: 大量元素:NH4NO3 1650、KN03 1900、CaCl2.2H20 440^MgSO4.7H20 370^KH2PO4 170；微量元素:KI 0.83、Η3Β03 6.2、MnS04.H2O 21.4 ^ ZnSO4.7H20 8.6 ^Na2MnO4.2H200.25^CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H2O 0.025； 鐵鹽:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8； 有機物:煙酸0.5、鹽酸吡哆素0.5、鹽酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。3.根據權利要求1所述的韃靼忍冬組培配方，其特徵在於，所述培養基需要經過高壓滅菌鍋消毒25min，高壓滅菌鍋工作溫度120°C，壓強115kPa。4.根據權利要求1所述的韃靼忍冬組培配方，其特徵在於，所述6-BA為6-苄基嘌呤，所述KT為激動素，所述NAA為奈乙酸。5.一種韃靼忍冬培養方法，其特徵在於，包括以下幾個步驟: (1)選擇外植體，用肥皂水清洗後在接種室超淨工作檯用75%體積百分比酒精消毒Imin，接著用無菌水衝洗2遍，再用0.1 %質量百分比升萊消毒15min，用無菌水衝洗3遍，最後用消毒過的濾紙吸乾外面的水分； (2)將消毒好的外植體接種到初代培養基上，培養得到無菌的幼苗； (3)將得到無菌的幼苗接種到繼代增殖培養基上，培養得到分化苗； (4)將得到的分化苗接種到生根培養基上，培養得到生根苗； (5)煉苗，把得到的生根組培苗在煉苗室中不開蓋煉苗10天，然後移栽到珍珠巖:土壤=1:4的基質中，得到成品； 所述培養基為: 初代培養基:MS+6-BA 0.5mg/L+KT 0.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 繼代增殖培養基:MS+6-BA 2.0mg/L+KT 1.5mg/L+NAA 0.2mg/L； 生根培養基:1/2MS+NAA 1.5mg/L ； 上述培養基均添加3 %質量百分比蔗糖和0.65 %質量百分比瓊脂粉，pH值5.85。6.根據權利要求5所述的韃靼忍冬培養方法，其特徵在於，所述MS培養基為: 工作液濃度單位為mg/L，其中包含: 大量元素:NH4NO3 1650、KN03 1900、CaCl2.2H20 440^MgSO4.7H20 370^KH2PO4 170；微量元素:KI 0.83、Η3Β03 6.2、MnS04.H2O 21.4 ^ ZnSO4.7H20 8.6 ^Na2MnO4.2H200.25^CuSO4.5H20 0.025、CoC12.6H2O 0.025； 鐵鹽:Na2.EDTA 37.3^FeSO4.7H20 27.8； 有機物:煙酸0.5、鹽酸吡哆素0.5、鹽酸硫胺素0.1、肌醇100、甘氨酸2。7.根據權利要求5所述的韃靼忍冬培養方法，其特徵在於，所述步驟(I)選擇的外植體為當年新生帶側芽的莖段。8.根據權利要求5所述的韃靼忍冬培養方法，其特徵在於，所述步驟(2)至(4)選用的培養室條件為:培養溫度25°C，光照強度1200勒克斯，光照時間12h/d。
【專利摘要】本發明的韃靼忍冬組培配方和培養方法，通過消毒外植體，得到無菌培養體系，繼而利用不同種類和不同濃度的外源激素的配比，對組培苗進行繼代增殖、生長和生根進行篩選、調控，最後確定最佳外植體和培養基配方，使其能適應工廠化生產。通過該組培配方和方法能夠大量繁殖韃靼忍冬，滿足園林綠化需求，所生產的苗木形狀穩定，生產周期短，能夠滿足規模化快速生產。本發明能不受季節的限制、快速的增殖，繁殖周期短，能完整的繼承母本的優良特性，為組培工廠化生產解決了一個難題。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105706937
【申請號】CN201610168489
【發明人】李根生
【申請人】寧夏皇達生物科技股份有限公司