一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法
2024-02-29 02:00:15
專利名稱:一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法
技術領域：
本發明涉及魚類的養殖技術領域：
，具體涉及一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法。
背景技術：
黃姑魚(Nibea albiflora)，俗稱黃婆雞，屬鱸形目，石首魚科，黃姑魚屬，近海中下水層魚類，為我國東南沿海重要的增殖和養殖品種，具有較高的營養和藥用價值，市場需求量在不斷上升。目前黃姑魚的繁殖大多依靠親本自然成熟來實現產卵，由於黃姑魚親本成熟度的差異，造成產卵的不同步性，無法實現對產卵時間及產卵量的人為控制，既不利於生產，也無法滿足魚類遺傳育種定向交配的要求。人工催產在一定程度上解決了黃姑魚等魚類親本群體性腺成熟度差異造成的排卵不集中、排卵周期較長的問題，通過人工催產，可以促使親魚一次性產卵，產卵多，出苗整齊。如中國發明專利申請《黃姑魚提早繁育方法》，發明公開號102257978A，公開了一種黃姑魚的提早繁育方法，步驟包括選400g以上雄性親魚和600g以上雌性親魚，按I :1於培養池中，每立方米水體放養2飛對雌雄親魚；控制光照時間和水溫溫度一月內光照時間從10小時/天延至14小時/天，光照強度在300-5001ux ;水溫從10°C始，1°C /天升至18°C 19°C穩定七天；然後O. 5°C 1°C /天升至22°C停止升溫；維持14小時/天、22°C—個月，得性腺成熟的雌雄親魚；雌性親魚用激素按O. 3-1. 5微克/千克劑量注射催產，雄性減半；親魚在激素誘導下自然受精得受精卵，然後進行常規人工育苗。然而該方法未詳細確定親本的最佳催產期和催產劑，也未建立明確的催產親體培育溫度和催產效應時間的關係，無法形成一個黃姑魚系統的長期的優良家系。
發明內容
針對現有技術中存在的問題，本發明在黃姑魚性腺發育規律的基礎上，確定親本的最佳催產期和催產劑，建立催產親體培育溫度和催產效應時間的關係。
為了解決上述技術問題，本發明的目的在於提供一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於按以下步驟
(1)將黃姑魚親本移入室內大棚中養殖，養殖過程中控制水溫在14 19°C之間，溶解氧5. Omg/L以上，養殖密度10 15尾/立方米，日常投餵料中，每隔2 5天加投餵一次冰鮮小雜魚，投餵量控制在魚體質量2 3%，所述的冰鮮小雜魚以帶魚和小黃魚為主；
(2)將選取的黃姑魚親本轉入室內水泥池進行營養強化，養殖期間控制養殖密度5 10尾/立方米,採用沙濾海水,每天早上換水90%以上,24h充氧，保持水體溶解氧5. Omg/L以上，日常投餵料中，每天加投餵I次縊経，投餵量為魚體質量4 7%，並在投餵的縊蟶中加入O. 2%的維生素E ；
(3)挑選腹部有隆起，用手輕輕觸摸腹部較柔軟，洩殖孔有微微的突起並且顏色略帶紅色的親本作為待催產的親魚，即性腺發育成熟至IV期的親本，用注射用促黃體激素釋放激素作為催產劑，對黃姑魚雌魚採用兩次注射法進行腹腔注射，第一次催產時注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產素，第二次注射時注射劑量為Ikg親本注射I. 5-2 μ g催產素，對黃姑魚雄魚採用一次注射法進行腹腔注射，注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產素；
(4)待親魚注射完催產素後，立即將它們分別放到不同的催產池中培育，雌魚的培育池要用黑布將池口遮住，等效應時間過後，對催產後的雄魚採精，用淡水衝洗雄魚的洩殖孔，擦淨，輕輕擠壓腹部，用吸管將精液收集到離心管中暫存，再對催產後的雌魚取卵，同樣用淡水衝洗雌魚的洩殖孔，擦淨，輕輕擠壓腹部，用塑料杯收集卵子，將收集好的精液用Hank’s液，按照I :30比例稀釋，然後與卵子按照每IOOg卵子加入IOml精液的比例混合，並立即混勻，然後加入海水完成受精，所述的Hank』 s液配方為NaCl 8.01 g/1 ；KC1 0.4g/1 ；CaCl2 0. 14 g/1 ；NaHCO3 0. 35 g/1 ；KH2P04 0 . 06 g/1 ；Glucose 0. 34 g/1 ； pH 8. 0 ；
(5)收集精液和卵子時，分別把每一條雄魚的精液和雌魚的卵子都單獨保存，在顯微鏡下分別觀察，選取精子活力好的雄魚和卵子形狀完整規則並且透明的雌魚進行I對I人工受精，並把雌性和雄性親魚分別剪取尾鰭低溫保存，並做好記錄，用於建立家系。所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(I)中當水溫在16°C以上時日常投餵料中，每隔2 3天加投餵一次冰鮮小雜魚，投餵量控制在魚體質量2 3%，當水溫低於16°C時日常投餵料中，每隔3 5天加投餵一次冰鮮小雜魚，投餵量控制在魚體質量2 3%。
所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(2)中在水泥池的四周和頂部以黑布遮光，並在上方Im安裝2隻60W的日光燈，儘量使燈光在培育池的水面分布均勻，開始每天連續照射8小時，並每隔5天增加I小時，至每日照射14個小時，後維持14小時/天，光照強度為50 lOOLx。
所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(3)所述的注射用促黃體激素釋放激素選用注射用促黃體素釋放激素A2。
所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(3)所述的雌魚的第二次注射時間和雄魚的注射時間都要選在早上的8 00o
所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(4)所述的效應時間為當培育水溫為20°C時催產效應時間為31-32h，當培育溫度為22°C時催產效應時間為29-30h。
所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(5)所述的I對I人工受精採用的是幹法受精。
本發明的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，詳細確定親本的最佳催產期和催產劑，建立明確的催產親體培育溫度和催產效應時間的關係，且催產成功率高，產卵時間統一，產卵量多，解決了黃姑魚排卵不同步的問題，實現對親本的按需供卵，也便於建立黃姑魚系統的長期的優良家系。
具體實施方式
以下結合具體實施例對本發明作進一步說明。
實施例在11月下旬將黃姑魚親本移入室內大棚中養殖，池壁和池底均用水泥修聾，養殖水深為I. 5-2. 0m，養殖密度10 15尾/立方米，控制水溫在14 19°C之間，根據水體的溫度調整投餵量，當水溫在16°C以上時，日常投餵料中，每隔2-3天加投餵一次冰鮮小雜魚，以帶魚和小黃魚為主。當水溫低於16°C時，日常投餵料中，每隔3-5天加投餵一次冰鮮小雜魚，投餵量控制在魚體重的2 3%，並且在室內大棚內放置增氧機兩臺，保持水體中的溶解氧充足。次年3月中旬將親魚運至室內水泥池中培育和營養強化,採用沙濾海水，每天早上換水90%以上，24h充氧，保持水體溶解氧5. Omg/L以上，在日常投餵料中，每天加投餵I次縊蟶,投餵量為魚體重的4 7%，並在投餵的縊蟶中加入O. 2%的維生素E。在培育池四周和頂部以黑布遮光，並在親魚培育池的上方Im安裝2隻60W的日光燈，儘量使燈光在培育池的水面分布均勻，開始每天連續照射8小時，並每隔5天增加I小時，至每日照射14個小時，後維持14小時/天，光照強度為50 lOOLx。
親本經營養強化後，至次年5月上旬，挑選性腺發育較好的黃姑魚雌魚200尾和雄魚100尾轉移至各自催產池中培育。挑選雌魚時要選擇個體較大、體色正常、健康的親本，輕摸魚體的腹部可以清晰地感覺到性腺的輪廓，且腹部較鬆軟。挑選雄魚時用毛巾裹住魚 體的頭部，輕輕的擠壓腹部略有乳白色的精液流出。在親本的挑選和轉移過程中，可適當的用MS-222麻醉，以減少對親本的刺激和傷害。
催產劑選用的是寧波第二激素廠生產的注射用促黃體素釋放激素A2，利用O. 7%的生理鹽水稀釋催產素來進行腹腔注射。對於雌魚選用兩次注射法，第一次催產時注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產素，第二次注射時注射劑量為Ikg親本注射I. 5-2 μ g催產素。對黃姑魚雄魚採用一次注射法，注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產素。待親本注射完催產素後，立即將它們分別放到不同的催產池中培育，即催產後雌魚和雄魚是分開培育的，並且雌魚的培育池要用黑布將池口遮住。當培育水溫為20°C時親本的催產效應時間為31-32h，而當培育溫度為22°C時親本的催產效應時間為29-30h，雌魚的第二次注射時間和雄魚的注射時間都要選在早上的8 :00，使親本在第二天晚上的19:00前後產卵，與黃姑魚自然產卵時間相近。5月中旬至六月中旬，共催產親本11批次，共催產雌魚120尾和雄魚80尾，經人工催產的養殖親魚，雄魚的催產成功率達到100%，雌魚的催產成功率達到60%-80%，有效地提高了親魚的年供卵量，共提供給育苗場達20000ml優質受精卵，實現經濟效益可達300餘萬。
對催產後的親本分別進行精子和卵子的收集。首先用淡水衝洗完雄魚的洩殖孔，擦淨，輕輕擠壓腹部，用吸管將精液收集到2ml離心管中，放置在保溫冰盒中暫存。精液收集完後，再對雌魚取卵，同樣要將雌魚的洩殖孔擦拭乾淨，防止海水汙染，擠壓腹部，用塑料杯收集卵子。將收集好的精液用Hank’s液按照I :30比例稀釋，然後與卵子按照每IOOg卵子加入IOml精液的比例混合，並立即混勻，然後加入少量的海水完成受精，所述的Hank』 s液配方為NaCl 8. 01 g/1 ；KC1 O. 4 g/1 ；CaCl2 0. 14 g/1 ；NaHCO3 0. 35 g/1 ；KH2P04 0 . 06g/1 ；Glucose 0. 34 g/1 ； pH 8.0。
收集精液和卵子時，分別把每一條雄魚的精液和雌魚的卵子都單獨保存，在顯微鏡下分別觀察，選取精子活力好的雄魚和卵子形狀完整規則並且透明的雌魚進行I對I人工幹法受精，並把雌性和雄性親魚分別剪取尾鰭低溫保存，並做好記錄。在5月至6月共對人工催產後的16000ml卵子進行人工受精，受精率達到60% ;共構建黃姑魚全同胞家系28個，此方法特別適用於黃姑魚的遺傳育種。
權利要求
1.一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於按以下步驟 (1)將黃姑魚親本移入室內大棚中養殖，養殖過程中控制水溫在14 19°C之間，溶解氧5. Omg/L以上，養殖密度10 15尾/立方米，日常投餵料中，每隔2 5天加投餵一次冰鮮小雜魚，投餵量控制在魚體質量2 3%，所述的冰鮮小雜魚以帶魚和小黃魚為主； (2)將選取的黃姑魚親本轉入室內水泥池進行營養強化，養殖期間控制養殖密度5 10尾/立方米,採用沙濾海水,每天早上換水90%以上,24h充氧，保持水體溶解氧5. Omg/L以上，日常投餵料中，每天加投餵I次縊経，投餵量為魚體質量4 7%，並在投餵的縊蟶中加入O. 2%的維生素E ； (3)挑選腹部有隆起，用手輕輕觸摸腹部較柔軟，洩殖孔有微微的突起並且顏色略帶紅色的親本作為待催產的親魚，即性腺發育成熟至IV期的親本，用注射用促黃體激素釋放激素作為催產劑，對黃姑魚雌魚採用兩次注射法進行腹腔注射，第一次催產時注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產素，第二次注射時注射劑量為Ikg親本注射I. 5-2 μ g催產素，對黃姑魚雄魚採用一次注射法進行腹腔注射，注射劑量為Ikg親本注射I μ g催產素； (4)待親魚注射完催產素後，立即將它們分別放到不同的催產池中培育，雌魚的培育池要用黑布將池口遮住，等效應時間過後，對催產後的雄魚採精，用淡水衝洗雄魚的洩殖孔，擦淨，輕輕擠壓腹部，用吸管將精液收集到離心管中暫存，再對催產後的雌魚取卵，同樣用淡水衝洗雌魚的洩殖孔，擦淨，輕輕擠壓腹部，用塑料杯收集卵子，將收集好的精液用Hank’s液，按照I :30比例稀釋，然後與卵子按照每IOOg卵子加入IOml精液的比例混合，並立即混勻，然後加入少量的海水完成受精，所述的Hank’s液配方為=NaCl 8.01 g/1 ；KC1O.4 g/1 ；CaCl2 0. 14 g/1 ；NaHCO3 0. 35 g/1 ；KH2P04 0 . 06 g/1 ；Glucose 0. 34 g/1 ； pH8.0 ； (5)收集精液和卵子時，分別把每一條雄魚的精液和雌魚的卵子都單獨保存，在顯微鏡下分別觀察，選取精子活力好的雄魚和卵子形狀完整規則並且透明的雌魚進行I對I人工受精，並把雌性和雄性親魚分別剪取尾鰭低溫保存，並做好記錄，用於建立家系。
2.如權利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(1)中當水溫在16°C以上時日常投餵料中，每隔2 3天加投餵一次冰鮮小雜魚，投餵量控制在魚體質量2 3%，當水溫低於16°C時日常投餵料中，每隔3 5天加投餵一次冰鮮小雜魚，投餵量控制在魚體質量2 3%。
3.如權利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(2)中在水泥池的四周和頂部以黑布遮光，並在上方Im安裝2隻60W的日光燈，儘量使燈光在培育池的水面分布均勻，開始每天連續照射8小時，並每隔5天增加I小時，至每日照射14個小時，後維持14小時/天，光照強度為50 IOOLx。
4.如權利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(3)所述的注射用促黃體激素釋放激素選用注射用促黃體素釋放激素A2。
5.如權利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(3)所述的雌魚的第二次注射時間和雄魚的注射時間都要選在早上的8:00。
6.如權利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(4)所述的效應時間為當培育水溫為20°C時催產效應時間為31-32h，當培育溫度為22°C時催產效應時間為29-30h。
7.如權利要求
I所述的一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，其特徵在於步驟(5)所述的I對I人工受精採用的是幹法受精。
專利摘要
一種黃姑魚的人工催產受精及家系建立方法，屬於魚類的養殖技術領域：
。步驟包括1.親魚的培育及營養強化；2.催產親魚的選擇；3.催產劑的選擇以及劑量；4.催產時間及溫度的選擇；5.人工受精及家系建立。本發明在黃姑魚性腺發育規律的基礎上，確定親本的最佳催產期和催產劑，建立催產親體培育溫度和催產效應時間的關係，催產成功率高，產卵時間統一，產卵量多，實現了對親本的按需供卵。
文檔編號A01K61/00GKCN102870719SQ201210420294
公開日2013年1月16日 申請日期2012年10月29日
發明者樓寶, 薛寶貴, 徐冬冬, 史會來, 詹煒, 辛儉, 毛國民, 祝家俊 申請人:浙江省海洋水產研究所導出引文BiBTeX, EndNote, RefMan