一種固相多肽合成奧米加南的製備方法
2024-01-30 09:18:15 2
專利名稱：一種固相多肽合成奧米加南的製備方法
技術領域：
本發明涉及一種奧米加南(Omiganan)的製備方法，具體涉及固相多肽合成奧米加南的製備方法。
背景技術：
中文名奧米加南英文名OmigananCAS 號204248-78-2分子式C90H127N27Oi2分子量1779.0胺基酸序列 IIe-Leu-Arg-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg-Arg-Lys-NH2奧米加南是一個人工合成的12肽。目前已經進入美國FDA申報的臨床三期試驗末期。其原研公司Cadence Pharma在2010年9月對外宣布，奧米加南的臨床三期試驗結果可觀，該產品將在近期被FDA批准上市，用於治療和預防導尿管插管引起的感染。奧米加南在美國已有4項相關專利申請，專利持有者均為原研者Cadence Pharma。主要內容牽涉該藥物的適應用途以及藥劑配方，其中US 6835536特別保護了該製劑配方關於泌尿系統感染治療的靶向性。但並沒有發現該多肽序列以及化學合成製備的相關專利申請。
權利要求
1.本發明是一種固相多肽合成奧米加南的製備方法，包括以下步驟(1)WRinkAmide MBHA樹脂為起始原料，按照固相合成的方法依次連接具有 Fmoc-保護基團的胺基酸，最後一個胺基酸使用Boc-Ile-OH，獲得保護的十二肽樹脂，其間依次脫去Fmoc-保護基團；(2)切肽同時去除Boc和Pbf等側鏈保護基團，獲得粗品；(3)粗品經製備型HPLC(C18柱)，分離純化，加入15ml鹽酸處理，減壓除溶劑，凍幹後，製得奧米加南精品。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所說的依次連接具有Fmoc-保護基團的胺基酸，獲得保護十二肽樹脂，其間依次脫去Fmoc-保護基團的方法，包括如下步驟(1)製備 Fmoc-Lys (Boc)-樹脂 取所說的樹脂用DMF浸泡，使樹脂溶脹，抽乾，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，然後加入溶解於接肽試劑的Fmoc-Lys (Boc) -OH,HBTU和HOBt的混合物，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，再加入醋酐和DMF，反應，獲得Fmoc-Lys (Boc)-樹脂；所說的接肽試劑為NMM DMF=I 5 15，體積比，下同； 所說的脫帽試劑為PIP DMF=I 2 5，體積比，下同； 混合物中，溶劑對樹脂重量的體積濃度為5 20ml/g ；下同； HBTU的摩爾數為樹脂的2飛倍；下同； HOBt的摩爾數為樹脂的2飛倍；下同； Fmoc-Lys (Boc) -OH的摩爾數為樹脂的2 6倍； 脫帽試劑對樹脂的加入量的比例為5 20ml/g ；下同； (2 )製備 Fmoc-Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂在步驟(1)的Fmoc-Lys (Boc)-樹脂中，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，然後加入溶解於接肽試劑的Fmoc-Arg (Pbf) -OH、HBTU、HOBT的混合物，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，獲得Fmoc-Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂； 混合物中，Fmoc-Arg (I^bf)-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍； (3 )製備 Rnoc-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂 在步驟(2)的樹脂中，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，加入用接肽試劑溶解的Fmoc-Arg (Pbf) -OH,HBTU和HOBT的混合物，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，獲得 Fmoc-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂； 混合物中，Fmoc-Arg(Pbf)-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍；(4)製備 Fmoc-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂在步驟(3)的樹脂中，加入脫帽試劑，反應鐘，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，加入用接肽試劑溶解的Fmodrp-OH、HBTU和HOBT的混合物，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，獲得 Fmoc-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂； 混合物中，Fmoc-Trp-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍； 其餘操作以及工藝條件同上；(5 )製備 Fmoc-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂 在步驟(4)的樹脂中，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，加入用接肽試劑溶解的FmOC-PrO-0H、HBTU和HOBT的混合物，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌， 抽乾，獲得 Fmoc-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂； 混合物中，Fmoc-Pro-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍； 其餘操作以及工藝條件同上；(6 )製備 Fmoc-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹月旨 在步驟(5)的樹脂中，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，加入用接肽試劑溶解的FmoC-Trp-OH、HBTU和HOBT的混合物，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌， 抽乾，獲得 Fmoc-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂； 混合物中，Fmoc-Trp-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍； 其餘操作以及工藝條件同上；(7 )製備 Fmoc-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) - Lys (Boc)-樹月旨 在步驟(6)的樹脂中，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，加入用接肽試劑溶解的FmoC-Trp-OH、HBTU和HOBT的混合物，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌， 抽乾，獲得 Fmoc-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹月旨； 混合物中，Fmoc-Trp-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍； 其餘操作以及工藝條件同上；(8)製備Fmoc-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂 在步驟(7)的樹脂中，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，加入用接肽試劑溶解的Fmoc-Trp-OH、/HBTU和HOBT的混合物，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，獲得 Fmoc-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂； 混合物中，Fmoc-Pro-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍； 其餘操作以及工藝條件同上；(9)製備Fmoc-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹月旨 在步驟(8)的樹脂中，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，加入用接肽試劑溶解的Fmoc-Trp-OH、HBTU和HOBT的混合物，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌， 抽乾，獲得 Fmoc-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) - Lys (Boc)-樹脂； 混合物中，Fmoc-Trp-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍； 其餘操作以及工藝條件同上；(10)製備Fmoc-Arg (Pbf) -Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (B oc)-樹脂在步驟(9)的樹脂中，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，加入用接肽試劑溶解的Fmoc-Arg (Pbf) -OH、HBTU和HOBT的混合物，反應，抽乾， 分別用 DMF 和甲醇洗滌，抽乾，獲得 Fmoc-Arg(Pbf)-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)樹脂；混合物中，Fmoc-Arg(Pbf)-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍； 其餘操作以及工藝條件同上；(11)製備Fmoc-Leu-Arg (Pbf) -Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -L ys (Boc)-樹月旨在步驟(10)的樹脂中，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，加入用接肽試劑溶解的Fmoc-Leu-OH、HBTU和HOBT的混合物，反應，抽乾，分別用 DMF 和甲醇洗滌，抽乾，獲 H Fmoc-Leu-Arg(Pbf)-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂；混合物中，Fmoc-Leu-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍；其餘操作以及工藝條件同上；(12)製備 Boc-Ile-Leu-Arg(Pbf) -Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf) -Arg(Pb f)- Lys (Boc)-樹脂在步驟(11)的樹脂中，加入脫帽試劑，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，加入用接肽試劑溶解的Boc-Ile-OH、HBTU和HOBT的混合物，反應，抽乾，分別用DMF和甲醇洗滌，抽乾，獲得 Boc-Ile-Leu-Arg(Pbf)-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Trp-Arg(Pbf)-Arg(Pbf)-Lys (Boc)-樹脂；混合物中，Boc-Ile-OH的摩爾數為樹脂的2飛倍；其餘操作以及工藝條件同上。
3.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，所說的切肽包括如下步驟將權利要求 2 步驟(12)所獲得的 Boc-Ile-Leu-Arg(Pbf)-Trp-Pro-Trp-Trp-Pro-Tr P- Arg (Pbf) -Arg (Pbf) -Lys (Boc)-樹脂加入預冷至(TlO°C的切肽試劑中，反應，收集切肽後的粗品；所說的切肽試劑為HCl/i-PrOH/DCM/Na2S 為0. 5-2/3-4/3-5/1-2 ；優選 1/3. 5/4/1. 5。
4.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於，粗品經HPLC分離純化的方法包括如下步驟將奧米加南粗品溶於乙酸中，過濾，濾液經HPLC純化，流速為100-1500ml/min ；檢測波長為250-300nm ；用液相色譜儀跟蹤收集所需要的流出液，樣品峰合併後加入15ml鹽酸酸化，除溶劑、凍幹，獲得成品；流動相為0.廣IM硫酸銨乙腈=9 6 廣4。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，乙酸的重量濃度為0.5^10%,乙酸中奧米加南粗品的重量濃度為廣50%。
6.根據權利要求廣5任一項所述的方法，其特徵在於，脫帽反應溫度為1(T6(TC，反應時間為5 30分鐘。
7.根據權利要求廣5任一項所述的方法，其特徵在於，接肽反應溫度為1(T60°C，反應時間為0. 5^1. 5小時。
8.根據權利要求廣5任一項所述的方法，其特徵在於，切肽溫度為1(T60°C，時間為廣6 小時。
全文摘要
本發明公開了一種固相多肽合成奧米加南的製備方法，本發明的技術方案包括以下步驟以RinkAmideMBHA樹脂為起始原料，按照固相合成的方法依次連接具有Fmoc-保護基團的胺基酸，最後一個胺基酸使用Boc-Ile-OH，獲得保護的十二肽樹脂，其間依次脫去Fmoc-保護基團，同步進行脫側鏈保護基團及切肽，獲得粗品，粗品經製備型HPLC(C18柱)分離純化，凍幹後，製得奧米加南精品。本發明的方法，工藝穩定，原輔材料來源方便，生產周期短，收率高，質量穩定，生產成本低，接肽收率高，避免使用氟化氫等劇毒試劑，三廢汙染少。每步接肽收率均在98%以上，切肽後收率為95.8%，純化收率高達35%以上，總收率為36.7%。本發明的方法便於工業化實施，具有較大的產業化前景。
文檔編號C07K7/08GK102167731SQ201110035559
公開日2011年8月31日 申請日期2011年2月10日 優先權日2011年2月10日
發明者周逸明, 崔頎, 蔡華成 申請人:上海蘇豪逸明製藥有限公司, 周逸明