一種野菊花提取物及其指紋圖譜檢測方法

2023-12-09 17:36:11 1

專利名稱：一種野菊花提取物及其指紋圖譜檢測方法
技術領域：
本發明屬於藥物製備、藥物分析和藥物代謝技術領域。具體涉及中藥野菊花提取物的製備，以及通過中藥指紋圖譜方法進行野菊花提取物質量檢測和控制；一方面通過高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜針對野菊花活性成分進行多成分全面質量檢測和控制，另ー方面通過鎖定原型吸收成分，進行具體成分的質量檢測和控制。
背景技術：
中藥中含有多種化學成分，並被同時服用到體內，產生治療作用。但中藥內含化學成分的極性差距顯著，經常是既含有極性很小的化學成分又含有極性很大的化學成分，單 ー溶劑通常難以提取出各類極性成分。所以採用不同極性試劑經兩步或多步提取可儘量提取出各類劑型化學成分，保證提取物中各類成分的充分包含。另外，由於提取物中成分複雜，為了實現質量控制的目的，還需要科學有效的檢測手段針對中藥含有的化學成分進行檢測。指紋圖譜技術是ー種成熟的中藥成分檢測方法，在中藥等植物藥質量控制中的應用，已成為國內外公認的最有效手段之一。美國FDA在1996年頒布的《FDA關於植物製品的指南》和2004年的《植物藥產品的行業指南》中，要求對植物原料、植物藥中間品和植物藥產品以指紋圖譜進行質量控制，提出了建設性意見。英國草藥典、印度草藥典以及加拿大藥用及芳香植物學會、德國藥用植物學會也接受色譜指紋圖譜。中國國家食品藥品監瞀管理局於2000年發布了《中藥注射劑的指紋圖譜研究的技術要求(暫行)》，明確要求對新申請的中藥注射劑和已上市的中藥注射劑實行指紋圖譜標準，中國國家藥典委員會於2002年發布了《中藥注射劑色譜指紋圖譜實驗研究技術指南(試行)》，對色譜指紋圖譜的技術內容提出了指導性意見。化學成分色譜指紋圖譜，尤其是高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜直接顯示多種具體化學成分的指紋特徵信息，便於從成分整體上進行多成分質量控制，在國際上容易獲得認可，因此中藥採用HPLC指紋圖譜進行質量控制，是國際認可、技術合理的有效質量控制手段。採用具體某種中藥內含成分進行中藥質量控制，成分的選擇直接決定中藥質量控制水平的高低。最理想的備選成分是藥效明確，機制清楚，原型吸收並達到靶點的長時間、高濃度駐留，但符合此高要求的成分常難明確，所以間接阻礙了中藥質量控制水平的提升。但藥效-質量關聯的質控目標要求我們實踐創新方法，逐漸接近目標；所以對中藥多成分中主要通過吸收入血產生藥效的情況開展研究，將可以原型吸收入血作為質控成分的篩選原則，可以更接近藥效-質量關聯的質控目標。野菊花為菊科多年生草本植物野菊的頭狀花序，外形與菊花相似，野生於山坡草地、田邊路旁。以色黃無梗、完整、氣香、花未全開者為佳。野菊花含可廣泛用於治療疔瘡癰腫、咽喉腫痛、風火赤眼、頭痛眩暈等病證。同時又有很好的降壓作用，可用於高血壓病的輔助治療。野菊花中的化學活性成分與其功效作用密切相關。其大多以適當形式吸收進入血液循環系統後，運送到相應的作用部位才能產生療效。所以通過提取物指紋圖譜與ロ服提取物後生物樣品指紋圖譜的比較分析，明確野菊花中的原型吸收成分作為檢測具體成分，並結合野菊花總體成分指紋圖譜綜合進行質量控制，是創新性的檢測和質控方法。

發明內容
本發明的目的是提供ー種野菊花提取物的製備方法，並運用HPLC指紋圖譜的方法對其進行檢測和質量控制。為實現此目的，一方面通過高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜進行多成分全面質量檢測和控制，另ー方面通過中藥代謝方法鎖定原型吸收成分，進行具體成分的質量檢測和控制，使野菊花的藥效物質更加明確。為此，本發明第一方面提供了製備野菊花提取物的方法，其包括以下步驟將野菊花葯材粉碎；加入藥材重量5-30倍的水提取30-120分鐘；藥再加入水體積1-3倍的95%乙醇繼續加熱回流提取30-90分鐘；提取液回收こ醇並濃縮、乾燥，即得。根據本發明第一方面的方法，其中水提取時，水的用量是藥材重量的5-20倍，例如5-15倍，例如5-10倍。 根據本發明第一方面的方法，其中水提取時，是以煎煮的方式提取。在一個實施方案中，煎煮的時間為30-120分鐘，例如30-90分鐘，例如30-60分鐘，例如約45分鐘。根據本發明第一方面的方法，其中水提取時，是以回流的方式提取。在一個實施方案中，回流的時間為30-120分鐘，例如60-120分鐘，例如約100分鐘。根據本發明第一方面的方法，其中加こ醇提取時，所用こ醇的量是水體積的1-2倍，優選I倍。根據本發明第一方面的方法，其中こ醇提取時，是以回流的方式提取。在一個實施方案中，回流的時間為30-90分鐘，例如30-60分鐘，例如約45分鐘。本發明第二方面提供了ー種野菊花提取物，其是基本上按照本發明第一方面的方法提取得到的。本發明第二方面提供了ー種野菊花提取物，其是以野菊花為藥材經如下步驟的方法提取得到的將野菊花葯材粉碎；加入藥材重量5-30倍的水提取30-120分鐘；再加入水體積1-3倍的95%こ醇繼續加熱回流提取30-90分鐘；提取液回收こ醇並濃縮、乾燥，即得。根據本發明第二方面的野菊花提取物，其中水提取時，水的用量是藥材重量的
5-20倍，例如5-15倍，例如5-10倍。根據本發明第二方面的野菊花提取物，其中水提取時，是以煎煮的方式提取。在一個實施方案中，煎煮的時間為30-90分鐘，例如30-60分鐘，例如約45分鐘。根據本發明第二方面的野菊花提取物，其中水提取時，是以回流的方式提取。在一個實施方案中，回流的時間為30-120分鐘，例如60-120分鐘，例如約100分鐘。根據本發明第二方面的野菊花提取物，其中加こ醇提取時，所用こ醇的量是水體積的1_2倍，優選I倍。根據本發明第二方面的野菊花提取物，其中こ醇提取時，是以回流的方式提取。在一個實施方案中，回流的時間為30-90分鐘，例如30-60分鐘，例如約45分鐘。本發明第三方面提供了用指紋圖譜方法檢測野菊花葯材或野菊花提取物的方法，該方法包括如下步驟(a)取供測試的野菊花葯材或供測試的野菊花提取物，所述供測試的野菊花葯材照本發明第一方面所述方法處理得到野菊花提取物(由此獲得的野菊花提取物或者前述供測試的野菊花提取物，二者可稱為供試品，或者可稱為供試品提取物)；(b)另取對照的野菊花葯材或對照的野菊花提取物，所述對照的野菊花葯材照本發明第一方面所述方法處理得到野菊花提取物(由此獲得的野菊花提取物或者前述對照的野菊花提取物，二者可稱為對照品，或者可稱為對照品提取物)；(c)分別精密稱取供試品提取物和對照品提取物適量，用50-100倍體積的甲醇溶解，經O. 45 μ m微孔濾膜過濾，濾液分別稱為供試品溶液和對照品溶液，用於高效液相色譜(HPLC)分析；(d)高效液相色譜條件為色譜柱為C18色譜柱，流動相為O. 1%的磷酸水溶液-乙腈；流速O. 8" . 2ml/min ;採用200_400nm波長紫外檢測記錄每一波長下成分響應值的方式
檢測；梯度洗脫方式為
權利要求
1.製備野菊花提取物的方法，其包括以下步驟將野菊花葯材粉碎；加入藥材重量5-30倍的水提取30-120分鐘；再加入水體積1-3倍的95%こ醇繼續加熱回流提取30-90分鐘；提取液回收こ醇並濃縮、乾燥，即得。
2.ー種野菊花提取物，其是基本上按照權利要求I所述的方法提取得到的。
3.—種野菊花葯材或野菊花提取物的指紋圖譜檢測方法，該方法包括如下步驟 (a)取供測試的野菊花葯材或供測試的野菊花提取物，所述供測試的野菊花葯材照權利要求I所述方法處理得到野菊花提取物(由此獲得的野菊花提取物或者前述供測試的野菊花提取物，二者可稱為供試品，或者可稱為供試品提取物)； (b)另取對照的野菊花葯材或対照的野菊花提取物，所述對照的野菊花葯材照權利要求I所述方法處理得到野菊花提取物(由此獲得的野菊花提取物或者前述対照的野菊花提取物，二者可稱為對照品，或者可稱為對照品提取物)； (c)分別精密稱取供試品提取物和對照品提取物適量，用50-100倍體積的甲醇溶解，經O. 45 μ m微孔濾膜過濾，濾液分別稱為供試品溶液和對照品溶液，用於高效液相色譜(HPLC)分析； (d)高效液相色譜條件為色譜柱為C18色譜柱，流動相為O.1%的磷酸水溶液-こ腈；流速O. 8" . 2ml/min ;採用200-400nm波長紫外檢測記錄姆一波長下成分響應值的方式檢測；梯度洗脫方式為J 0min—>I 5min— lOmin^·ISniin->I 20mm—>25min— :乙腈 +: S%—: 5%^18%—18%—丨 25%一25%^30min^J 40mm^ιι 45min—^ι SOmin-^155min~^60mm 乙腈 3 %—55% 70%丨 75% 80%80% (e)吸取步驟(C)的供試品溶液和對照品溶液，分別將其注入高效液相色譜中，照(d)項所述色譜條件進行洗脫，分別得到供試品HPLC圖和對照品HPLC圖； (f)比較步驟(e)所得供試品HPLC圖和對照品HPLC圖。
4.ー種野菊花葯材或野菊花提取物的指紋圖譜檢測方法，該方法包括如下步驟 (i)取供測試的野菊花葯材或供測試的野菊花提取物，所述供測試的野菊花葯材照權利要求I所述方法處理得到野菊花提取物(由此獲得的野菊花提取物或者前述供測試的野菊花提取物，二者可稱為供試品，或者可稱為供試品提取物)； ( )另取對照的野菊花葯材或対照的野菊花提取物，所述對照的野菊花葯材照權利要求I所述方法處理得到野菊花提取物(由此獲得的野菊花提取物或者前述対照的野菊花提取物，二者可稱為對照品，或者可稱為對照品提取物)； (iii)分別精密稱取供試品提取物和對照品提取物適量，用50-100倍體積的甲醇溶解，經O. 45 μ m微孔濾膜過濾，濾液分別稱為供試品溶液和對照品溶液，用於高效液相色譜(HPLC)分析； (iv)高效液相色譜條件為色譜柱為C18色譜柱，流動相為O.1%的磷酸水溶液-こ腈；流速O. 8" . 2ml/min ;採用200_400nm波長紫外檢測記錄姆一波長下成分響應值的方式檢測；梯度洗脫方式為
5.根據權利要求4所述的方法，其中 所述 C18 色譜柱是 Thermo scientific 0DS-2 Hypersil C18 色譜柱; 所述C18色譜柱是Thermo scientific 0DS-2Hypersil C18色譜柱，規格為4.6mmX 250mm, 5 μ m ； 其中(iv)項所述流動相的流速為I. Oml/min ； 其中(iv)項所述波長為267nm ； 其中(iv)項中所述色譜柱的柱溫控制在30°C ;和/或 其中步驟(vii)中所述哺乳動物選自人、大鼠、小鼠、狗、猴等。
6.ー種以原型吸收成分和/或代謝成分為指標的野菊花葯材或野菊花提取物的指紋圖譜檢測方法，該方法包括如下步驟 (1)取供測試的野菊花葯材或供測試的野菊花提取物，所述供測試的野菊花葯材照權利要求I所述方法處理得到野菊花提取物(由此獲得的野菊花提取物或者前述供測試的野菊花提取物，二者可稱為供試品，或者可稱為供試品提取物)； (2)另取對照的野菊花葯材或対照的野菊花提取物，所述對照的野菊花葯材照權利要求I所述方法處理得到野菊花提取物(由此獲得的野菊花提取物或者前述対照的野菊花提取物，二者可稱為對照品，或者可稱為對照品提取物)； (3)分別精密稱取供試品提取物和對照品提取物適量，用50-100倍體積的甲醇溶解，經O. 45 μ m微孔濾膜過濾，濾液分別稱為供試品溶液和對照品溶液，用於高效液相色譜(HPLC)分析； (4)高效液相色譜條件為色譜柱為C18色譜柱，流動相為O.1%的磷酸水溶液-こ腈；流速O. 8" . 2ml/min ;採用200-400nm波長紫外檢測記錄姆一波長下成分響應值的方式檢測；梯度洗脫方式為
7.根據權利要求6的方法，其中 所述 C18 色譜柱是 Thermo scientific 0DS-2Hypersil C18 色譜柱; 所述C18色譜柱是Thermo scientific 0DS-2Hypersil C18色譜柱，規格為4.6mmX 250mm, 5 μ m ； 其中(4)項所述流動相的流速為lml/min ； 其中⑷項所述波長為267nm ;和/或 其中(4)項中所述色譜柱的柱溫控制在30°C。
8.根據權利要求6的方法，其中步驟(7)中所述哺乳動物選自人、大鼠、小鼠、狗、猴等。
9.根據權利要求6的方法，其中步驟(7)中所述生物樣品選自血樣、尿樣及唾液樣品。
10.根據權利要求6的方法，其中步驟(10)中獲得2個代謝成分；在ー個實施方案中，所述2個代謝成分的保留時間分別約為46. 56min和47. 90min。
全文摘要
本發明提供了一種野菊花提取物及其指紋圖譜檢測方法。具體地，製備野菊花提取物的方法包括以下步驟將野菊花葯材粉碎；加入藥材重量5-30倍的水提取30-120分鐘；再加入水體積1-3倍的95%乙醇繼續加熱回流提取30-90分鐘；提取液回收乙醇並濃縮、乾燥，即得。還提供了由該方法製備得到的野菊花提取物，用指紋圖譜方法檢測和評價野菊花葯材或野菊花提取物的方法，用指紋圖譜方法檢測和評價野菊花葯材或野菊花提取物的方法，以及以原型吸收成分和/或代謝成分為指標用指紋圖譜方法檢測和評價野菊花葯材或野菊花提取物的方法。本發明方法可以有效地用於野菊花或其提取物的質量控制。
文檔編號G01N30/02GK102706978SQ20121017841
公開日2012年10月3日 申請日期2012年6月1日 優先權日2012年6月1日
發明者劉洋, 方敏, 李錚, 汪國鵬, 潘豔麗, 胡宇馳 申請人:北京市藥品檢驗所