增殖性疾病治療中鈉-鉀ATP酶α1或α3亞單位的靶向作用的製作方法

2023-12-10 01:42:01

專利名稱：：增殖性疾病治療中鈉-鉀ATP酶α1或α3亞單位的靶向作用的製作方法增殖性疾病治療中鈉-鉀ATP酶al或a3亞單位的耙向作用發明領域本發明提供了用於治療增殖性疾病如腫瘤和癌症的方法、試劑、藥用製劑和試劑盒。本發明涉及選擇性地靶向到鈉-鉀ATP酶的亞單位。發明背景設計出新型的和/或改良的方式來治療增殖性疾病如各種腫瘤和癌症的重要性是不言自明的。因此，大量的工作投入到鑑定增殖性疾病相關細胞耙位以及設計作用於這些耙位的治療性試劑的研究中。鈉-鉀ATP酶(NKA或鈉泵)是存在於所有高等真核細胞內的膜內在蛋白，利用ATP水解作用可將Na+和K+離子轉運通過質膜(Horisberger2004，Physiology(Bethesda)19:377-87;Lingrel和Kuntzweiler1994，JBiolChem269:19659-62)。鈉泵由兩個亞單位組成基本上等摩爾比的a和|3。a亞單位被認為是催化亞單位，包含Na+和K+離子的結合位點。P亞單位被認為是調節亞單位，輔助酶複合物的生物合成和活性。到目前為止，已經在哺乳動物細胞內鑑定出了4種不同的a亞單位亞型(al、a2、a3和a4)以及三種不同的P亞單位亞型(pi、卩2、P3)。這些亞型在各種組織中選擇性地表達(Blanco2005，SeminNephrol25:292-303)。Pestov等，1999(FEBSLett456:243-248，1999)報導，在肌肉中特異性地存在第四種卩亞單位((3-m)，但是到目前為止還不清楚該亞型是否能夠組成鈉-鉀ATP酶的一部分或者是另一種X-鉀-ATP酶的一種組分。除了轉運離子以外，鈉泵還可能與其他細胞蛋白相互作用，如其臨近的膜蛋白，以及參與胞眾內的信號級聯反應。據報導，通過強心甙類藥物如烏本苷與鈉泵的相互作用可活化或激發不依賴於胞內Na+和K+濃度變化的幾種信號通路，其中包括Src激酶的活化、Src導致的表皮生長因子受體的反式激活、Ras和p42/p44絲裂原活化的蛋白激酶的活化以及線粒體產生的活性氧的增加(Xie和Askari2002，EurJBiochem269:2434-2439;Wang等，2004，JBiolChem279:17250-17259)。在具有不同功能的細胞的質膜內甚至有可能存在具有實質區別的鈉泵"池"一個池參與(主要參與)離子轉運，而另一個池參與(主要參與)信號轉導通路(Xie和Askari2002)。強心類甾體(CS)包括一組都能與鈉泵的胞外區結合的化合物，其中結合位點由a亞單位中的多個功能基團組成，這些化合物與(3亞單位的結合能力較弱。這組化合物的成員包括植物來源的藥物如洋地黃甾類糖苷藥物(洋地黃毒甙、地高辛等)或極性較高的植物單糖苷烏本苷，以及脊椎動物來源的苷元CS如蟾毒靈和海蟾蜍毒素。CS的典型活性與其抑制鈉泵從而增加胞內鈉離子濃度的能力有關。相應的，強心甙類藥物如洋地黃毒甙或烏本苷常被用於治療充血性心力衰竭。但是，最新的證據表明，在跨膜鈉梯度基本未改變時也會發生CS作用，這種作用通過胞內的第二信號通路最終對基因表達、細胞生長和分裂產生影響(Xie和Askari2002)。研究表明，有幾種強心甙類藥物(洋地黃毒甙、地高辛、烏本苷和夾竹桃苷等)在體外具有抗人癌細胞系的抗增殖效應(Xie和Cai2003。MolInterv3:157-68)。例如，有文獻報導，烏本苷或洋地黃強心甙類藥物在膠質母細胞瘤(Haux1999，MedHypo53:543-548)、前列腺癌(McConkey等，2000，CancerRes60:3807-3812)或乳腺癌(Kometiani等，2005，MolPharmacol67:929-36)細胞模型中可產生凋亡誘導因子的作用。另外，流行病學研究表明洋地黃治療可對乳腺癌患者產生有益效應。Stenkvist2001(AnticancerDrugs12:635-636)報導，經過洋地黃藥物治療(用於治療心臟疾病)的乳腺癌患者來源的腫瘤細胞群具有許多細胞計數特徵，這些特徵強烈暗示這些腫瘤細胞的增殖能力低於未經過洋地黃治療的患者來源的腫瘤細胞。另外，Stenkvist等，1982(NEnglJMed306:484)經過5年的追蹤研究後發現，未經洋地黃治療的患者的復發率是經過洋地黃治療的患者的9.6倍，20年的追蹤研究表明(Stenkvist等，1999，OncolRep6:493-6)，經過洋地黃治療的乳腺癌患者的死亡率(6%)明顯低於未經洋地黃治療的患者(34%)。上述結果表明鈉泵是預防和治療增殖性疾病的合適分子靶位。但是，可用於影響這個分子的物質到目前為止還是相當有限的。因此，我們需要找到靶向到鈉泵的其他試劑，特別是具有如下優越特性的試劑，例如，療效更高和/或不良效應減少、和/或對癌細胞有更高的選擇性、和/或對健康細胞的損傷更小、和/或對特定類型的癌症具有相當的特異性、和/或低毒等。例如，通過與本領域已知的靶向到鈉泵的一種或多種物質，例如，一種或多種強心甙類物質，例如而不限於一種或多種烏本苷、洋地黃毒甙或地高辛進行比較來證明這種試劑的上述特性或其他改良特性。發明概述在多個方面，本發明提供了解決本領域上述需求中至少某些需求，如一種或多種需求的用途、方法、分析方法、試劑、組合物和試劑盒。更具體地說，本發明令人驚訝地實現了當(a)可減少鈉-鉀ATP酶的a-l(al)亞單位和/或a-3(a3)亞單位表達，或(b)可結合鈉-鉀ATP酶的a-l(al)亞單位和/或a-3(a3)亞單位的物質耙向到所述al和/或a3亞單位時，這種耙向作用在增殖性疾病的治療框架中可表現出上述一種或多種優點。例如而不限於，這種鈉泵al和/或a3亞單位的特異性靶向作用可導致(例如)療效提高，和/或副作用降低，和/或與健康組織相比對癌細胞的選擇性更高。即使已經證明存在至少4種a亞單位和3種p亞單位，相應地有至少12種不同的(a-N)2((3-N)2鈉泵亞型，其中N=l-4，但是意外地發現恰恰是a-l和/或a-3亞單位的特異性靶向作用具有特別的益處。本發明在其不同方面整合了上述相關認識。因此，在本發明的一個方面，本發明涉及可用作藥物、特別是治療增殖性疾病藥物的如下物質(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位。在本發明的另一方面，本發明涉及可用作藥物、特別是治療增殖性疾病藥物的如下物質(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位。在本發明的另一方面，本發明涉及(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位的物質在製備增殖性疾病治療藥物中的應用。在本發明的另一方面，本發明涉及(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的物質在製備增殖性疾病治療藥物中的應用。在本發明的另一方面，本發明涉及(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位的物質，以及(c)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的物質在製備增殖性疾病治療藥物中的應用。在本發明的一個方面，本發明提供了治療需要進行所述治療的對象的增殖性疾病的方法，該方法包括給予所述對象治療有效量的(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的物質。在本發明的一個方面，本發明涉及治療需要進行所述治療的對象的增殖性疾病的方法，該方法包括給予所述對象治療有效量(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的物質。在本發明的一個方面，本發明涉及治療需要進行所述治療的對象的增殖性疾病的方法，該方法包括給予所述對象治療有效量(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的物質，以及(c)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的物質。在一個相關方面，本發明提供了包含如下步驟的方法(l)鑑定或製備(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的表達或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的第一物質，和/或鑑定或製備(c)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的第二物質；以及(2)利用第一物質和/或第二物質製備增殖性疾病治療藥物。在一個相關方面，本發明公開了治療需要進行所述治療的對象的增殖性疾病的方法，該方法包含(l)鑑定或製備(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的表達或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的第一物質，和/或鑑定或製備(c)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的第二物質；以及(2)給予所述對象治療有效量的第一和/或第二物質。在另一方面，本發明提供了包含治療有效量的(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位的表達或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的第一物質，和/或包含治療有效量的(c)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的組合物第二物質，或任何這種物質的藥學上可接受的鹽的組合物。所述藥物組合物通常還可以包含一種或多種藥學上可接受的緩衝液、載體、賦形劑、穩定劑等。在另一方面，本發明提供了包含上述抗體物質或藥物組合物以及通常用於治療增殖性疾病的其他試劑、組合物或裝置的試劑盒。在另一方面，本發明提供了從一組待測物質中篩選有可能用作增殖性疾病治療藥物的候選物質的分析方法，所述分析方法包括確定待測物質是否(a)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-1亞單位的表達或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位，和/或(c)能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位。所述分析方法還可以包括監測所選擇的候選物質給予增殖性疾病體外或體內模型，例如細胞、組織或器官模型(如非人動物模型，優選非人哺乳動物模型)時的效應，例如治療效應。另外，所述分析方法可包括用所選擇的候選物質製備給予增殖性疾病非人動物模型，優選非人哺乳動物模型的組合物，和監測增殖性疾病非人動物模型，優選非人哺乳動物模型的效應，例如治療效應。本發明還涉及上述方面所衍生的特別優選、然而是典型的和非限定性的實施方式。在一個實施方式中，能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-l和/或a-3亞單位表達的物質是反義物質，如反義寡核苷酸，或核酶，或能誘導RNA幹擾的物質。在其他實施方式中，能夠結合鈉-鉀ATP酶的a-l和/或a-3亞單位的物質是多肽或蛋白質、抗體、肽、擬肽素(peptidomimetic)、適體、化學物質(優選有機分子，更優選小分子有機分子)、脂質、糖類、核酸等。在其他實施方式中，能夠特異性結合鈉-鉀ATP酶的a-l和/或a-3亞單位的物質也能夠改變，例如抑制或活化，鈉-鉀ATP酶生物學活性的一個或多個方面。在另一實施方式中，增殖性疾病是過度表達鈉-鉀ATP酶a-l和/或a-3亞單位的疾病。在優選實施方式中，增殖性疾病，例如過度表達NKAa-l和/或a-3亞單位的疾病，選自神經膠質瘤，優選膠質母細胞瘤；前列腺癌；非小細胞肺癌(NSCLC);或結腸癌。在一個特別優選的實施方式中，增殖性疾病，特別是過度表達NKAa-l亞單位的疾病是NSCLC。NSCLC中過度表達NKAa-亞單位是令人驚訝的，因為已有報導證明所述亞單位在癌中是下調的(Sakai等，2004，FEBSLett563(1-3):151-4)。本發明的這些方面和其他方面以及優選實施方式在下面的部分和所以附權利要求中有進一步的描述。附圖簡述圖1顯示的是NKAa-l亞單位的典型序列。圖2顯示的是NKAa-3亞單位的典型序列。圖3顯示的是正常肺實質和支氣管組織相較於NSCLC-ADC和NSCLC-SCC中鈉-鉀ATP酶al、a2和a3亞單位的典型表達模式。圖4顯示的是正常肺實質和支氣管組織、NSCLC-ADC、NSCLC-SCC和細胞系中鈉-鉀ATP酶al、a2和a3亞單位更詳細的定量表達。圖5顯示的是siRNA產生的鈉-鉀ATP酶al耗竭效應。圖6顯示的是化合物2與烏本苷、洋地黃毒甙和地高辛相比的體外抗腫瘤效應。本發明的詳細描述除非其內容清楚地指示出例外，本文所使用的單數形式的"一"、"一種"和"這個"既包括單數形式也包括複數形式。例如，"一種"是指一種抗體或多種抗體；"一種抗原"是指一種抗原或多種抗原。術語"由......構成"、"由......形成"和"由......組成"在本文中是"包含"、"包括"或"含有"、"含"的同義詞，是包涵式或開放端的，不排除其他未列舉的成員、元素或方法步驟。在本文中，術語"約"用於指可測量值如參數、量、持續時間等時是指，包括特定值+/-20%或更低的差異，優選+/-10%或更低，更優選+/-5%，更優選+/-1%或更低，甚至更優選+/-0.1%或更低，只要這種差異適合執行本發明。本說明書所引用的所有文獻都已完整納入本文作為參考。更具體地說，本文特地參考的所有文獻的含義都已納入本文作為參考。因此，本發明的方面涉及能夠減少鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位和/或a-3亞單位表達的物質，和能結合鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位和/或a-3亞單位的物質，以及這種物質在治療特別是增殖性疾病如概述部分所列疾病的治療中的用途。在本文中，術語"物質"所涵蓋範圍很廣，是指任何化學的(例如，無機的或有機的)、生化的或生物的物質、分子或大分子(例如，生物大分子)、其組合或混合物、未知組分的樣品、或自生物材料如細菌、植物、真菌或動物細胞或組織製備的提取物。優選但非限定性的"物質"包括核酸、寡核苷酸、核酶、多肽或蛋白質、肽、擬肽素、抗體及其片段和衍生物、適體、化學物質，優選有機分子，更優選小分子有機分子，脂質、糖類、多糖等，以及上述物質的任意組合。術語"多肽"和"蛋白質"在本文中可互換，通常是指由肽鍵連接的胺基酸殘基的聚合物，並且不限於最小長度的產物。因此，肽、寡肽、多肽、二聚體(異源的和同源的)、多聚體(同源的和異源的)等都包括在該定義內。全長蛋白質及其片段都包括在該定義內。該術語還包括多肽的表達後修飾，例如，糖基化、乙醯化、磷酸化等。另外，在本發明中，該術語還指包含修飾如缺失、插入和取代(例如，性質保守的取代)時對天然蛋白或多肽的這種修飾。在本文中，術語"肽"優選指本文所用的主要由^50個胺基酸，例如S5個胺基酸，優選^40個胺基酸，例如《5個胺基酸，更優選20個連續胺基酸，例如《5、20、$15、S10或^5個胺基酸組成的多肽。術語"核酸"用於本文中是指主要由核苷酸如脫氧核糖核苷酸和/或核糖核苷酸組成的任何長度的聚合物。核酸可包含嘌呤和/或嘧啶鹼基、和/或其他天然的、化學或生化修飾的(例如，甲基化的)、非天然的或衍生的核苷酸鹼基。核酸的骨架可包含糖基和磷酸根基團，正如通常在RNA或DNA內所發現的，和/或一個或多個修飾的或取代的(例如，2'-0-烷基化的，如2'-0-甲基化的或2'-0-乙醯化的;或2'-0,4'-C-烷基化的，如2'-0,4'-C-乙醯化的)糖基或一個或多個修飾的或取代的磷酸根基團。例如，核酸內的骨架類似物可以包含磷酸二酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、甲基膦酸酯、氨基磷酸酯(phosphoramidate)、烷基磷酸三酯、氨基磺酸酯、3'-硫代乙縮醛、亞甲基(甲基亞氨基)、3'-N-氨基甲酸酯、嗎啉代氨基甲酸酯和肽核酸(PNA)。術語"核酸"還特別包括DNA、RNA和DNA/RNA雜合分子，尤其包括hnRNA、前mRNA、mRNA、cDNA、基因組DNA、基因、擴增產物、寡核苷酸和合成的(例如，化學合成的)DNA、RNA或DNA/RNA雜合體。術語"核糖核酸"和"RNA"用於本文中是指由核糖核苷酸組成的任何長度的聚合物。術語"脫氧核糖核酸"和"DNA"用於本文中是指由脫氧核糖核苷酸組成的任何長度的聚合物。術語"DNA/RNA雜合體"用於本文中是指由一個或多個脫氧核糖核苷酸以及一個或多個核糖核苷酸組成的任何長度的聚合物。核酸可以是天然的，例如天然存在或者從自然界中分離，可以是重組的，即通過重組DNA技術製備，和/或可以是部分或完全化學或生化合成的。核酸可以是雙鏈的、部分雙鏈的或單鏈的。如果是單鏈，核酸可以是正義鏈或反義鏈。另外，核酸可以是環狀的或線性的。在本文中，術語"寡核苷酸"是指長度超過2個核苷酸的單鏈核酸(核苷酸多聚體)，優選長度高達200個核苷酸，更優選的是長度為約10到約100個核苷酸，甚至更優選的是長度為約12到約50個核苷酸。寡核苷酸可以通過本領域熟知的任何方法合成，例如化學或生化合成，如固相亞磷醯胺化學合成，或通過重組核酸分子如細菌或逆轉錄病毒載體的體外或體內表達。"可以減少表達"或"可以特異性結合"中的術語"可以"與"能夠"是同義詞，說明(例如)當實體(如物質)給予對象或相關的體外或體內模型系統時能夠完成所述的效應或作用，與在精確詳述時間實現所述效應或作用不同(可以是這樣但不一定是這樣)。在本文中，術語"鈉-鉀ATP酶"、"NKA"、"鈉泵"及其變體是指本領域根據這些定義通常已知的整合膜蛋白，該蛋白可見於高等真核細胞，通過ATP水解作用轉運Na+和K+離子跨過質膜(綜述參見Horisberger2004;Lingrel和Kuntzweiler1994;同上)。NKA也被稱為EC3.6.3.9。這些術語包含來源於存在此種蛋白的任何生物的這種蛋白，特別是動物，優選脊椎動物，更優選哺乳動物，其中包括人和非人哺乳動物。該術語在本文中是指組成活生物、器官、組織和/或細胞的一部分的鈉-鉀ATP酶，以及至少部分是從中分離的、重組的鈉-鉀ATP酶。該術語還包含一個、多個或全部組分是通過重組DNA技術表達的鈉-鉀ATP酶。NKA的標準結構是由兩個a(a)和兩個PG3)亞單位組成的異源四聚體。本發明特別涉及a亞單位的特定亞型，S卩，a-l(al)和a-3(a3)亞型。在本文中，術語"a-r，或"al"亞單位和"a-3"或"a3"亞單位是指鈉-鉀ATP酶的各個亞單位，這些定義在本領域是眾所周知的。該術語包括來源於存在此種亞單位的任何生物的這種亞單位，特別是動物，優選脊椎動物，更優選哺乳動物，其中包括人和非人哺乳動物。在本文中，"a-l"/"al"亞單位或"a-3"/"a3"亞單位是指包含"天然"序列的多肽，即其基本序列與天然來源的NKAa-l或a-3亞單位的序列相同的多肽。技術人員理解al亞單位或a3亞單位的序列可能會存在物種差異，這是因為物種之間存在遺傳多樣性。另外，同一物種的不同個體之間、甚至不同個體內因給定物種內的正常遺傳多樣性(變異)也會導致al亞單位或a3亞單位的序列存在差異。而且，同一物種的不同個體之間、甚至不同個體內因轉錄後修飾如差異剪接、RNA編輯等也會導致al亞單位或a3亞單位的天然序列存在差異。相應地，天然存在的所有a-l或a-3序列，優選那些已被明確定義為生物功能分子的a-l或a-3序列都被認為是天然的。在本文中，"a-17"al"亞單位或"a-3，7"a3"亞單位可組成活生物、器官、組織和/或細胞的一部分，或者(至少部分地)從中分離、重組等。該術語還包括通過重組或合成方式製備的不同亞單位。典型的NKAa-l亞單位包括而不限於人al亞單位，其基本序列在Uniprot/Swissprot(http:〃www.expasy.org/)中有注釋，檢索號為P05023(在圖1中也被標示為SEQIDNO:1)，以及來源於其他動物的al亞單位，其基本序列在同一資料庫中也有注釋，如來源於狗(檢索號P50997)、豬(P05024)、羊(P04074)、馬(P18907)、雞(P09572)、小鼠(Q8VDN2)或大鼠(P06685)。技術人員應理解，某些上述序列可包含成熟蛋白中缺少的(至少部分缺少)原肽前體。例如，在Uniprot/Swissprot中輸入人al亞單位(P05023)就會檢索到由SEQIDNO:1所示的胺基酸1-5組成的原肽。相似的原肽可能存在於其他al亞單位前體中。應當注意，種內序列變異或翻譯後修飾等可產生出在某種程度上不同於上述序列的其他天然a-l亞單位序列。典型的NKAa-3亞單位包括而不限於人a3亞單位，其基本序列在Uniprot/Swissprot(http:〃www.expasy.org/)中有注釋，檢索號為P13637(在圖2中也被標示為SEQIDNO:2)，以及來源於其他動物的a3亞單位，其基本序列在同一資料庫中也有注釋，如來源於雞(P24798)、小鼠(Q6PIC6)或大鼠(P06687)。技術人員應理解，上述序列或其他a3序列可包含成熟蛋白中缺少的原肽前體。應當注意，種內序列變異或翻譯後修飾等可產生出在某種程度上不同於上述序列的其他天然a-3亞單位序列。術語"分離的(isolated)"是指已經從其天然環境的組分中鑑定並分離和/或回收出來的分子。例如，分離蛋白可以是從細胞材料或者其來源細胞或組織的其他蛋白徹底分離的核酸。同樣，分離核酸可以是從細胞材料或者其來源細胞或組織的其他核酸徹底分離的核酸。術語"分離的"還指製備物，其中分離分子如多肽、蛋白或核酸是基本上純的，例如，以重量計達到至少70-80%的純度，更優選的是達到至少80-90%的純度，更優選的是達到至少least90-95%的純度，最優選的是達到至少95%、96%、97%、98%、99%或100%的純度。例如，多肽或蛋白的純度可通過羅氏蛋白定量法確定。另外，分離多肽或蛋白可純化到同質，其同質性可在還原或非還原條件下通過SDS-PAGE確定，用考馬斯亮藍染色或優選銀染。另外，分離多肽或蛋白可以純化到通過旋轉杯式序列分析儀測序足以獲得至少15個N端或內部胺基酸殘基序列的程度。例如，核酸的純度可通過測定A26。/A28o吸光度值來確定。另外，分離核酸可以純化到同質，其同質性可通過瓊脂糖或聚丙烯醯胺凝膠電泳和溴化乙錠或類似染色來確定。能與鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位和/或a-3亞單位結合的物質因此，在本發明的一個方面，物質能結合到鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位和/或a-3亞單位上。在本文中，術語"結合"通常是指分子實體之間的，例如"配基"(通常指任何物質，如物質或分子)和"受體"(通常指任何分子)之間的物理聯繫，在本文中優選非共價物理聯繫。優選的是，"受體"可以是多肽或蛋白，例如，NKA的a-l亞單位或a-3亞單位，或其變體或片段，或者編碼這些物質的核酸等。優選的是，"配基"可以是例如，多肽或蛋白、抗體、肽、擬肽素、適體、化學物質(優選有機分子，更優選小分子有機分子)、脂質、糖類、核酸等。在優選實施方式中，物質能與NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位的天然構型結合。術語"天然構型"用於描述實質保留天然態蛋白質的二級結構和三級結構的構型。例如，如果NKA的a-l亞單位或a-3亞單位實質保留其天然亞單位的二級結構和三級結構，優選形成天然NKA的一部分，例如優選具有酶活性的NKA部分時，它們被稱為具有天然結構。有益的是，能與靶多肽天然構型結合的物質有望在體內具有特別的效應，其中預計各個靶蛋白如特殊的NKAa亞單位主要以其天然的或實質天然的構型存在。在實施方式中，物質能結合NKAa-l亞單位或a-3亞單位的(l)胞外區，或(2)胞內區，或(3)跨膜區，或者(同時)結合兩個或多個各個亞單位的所述部分。術語NKAa-l亞單位或a-3亞單位的"胞外區"在本文中是指在正常情況下，優選各個亞單位具有天然構型時，例如各個亞單位組成天然NKA的一部分，例如優選NKA的酶活性部分，各個亞單位那些暴露於細胞外空間，或者暴露於胞內膜結合細胞器的腔隙的部分。因此，補充的術語"胞內區"是指NKAa-l亞單位或a-3亞單位的朝向細胞質的那些部分。因此術語"跨膜區"是指NKAa-l亞單位或a-3亞單位包埋在細胞膜內的那些部分。例如而不限於，在Uniprot/Swissprot中輸入人a-l亞單位的檢索詞P05023會顯示，SEQIDNO:1所示的a-l序列的胺基酸109-131、309-320、793-802、867-918和971-985具體預測為構成或組成這個亞單位的腔隙區/胞外區；SEQIDNO:1所示的a-l序列的胺基酸6-87、153-288、339-772、824-843、939-951和1007-1023具體預測為構成或組成該亞單位的胞漿區；SEQIDNO:1所示的a-l序列的胺基酸88-108、132-152、289-308、321-338、773-792、803-823、844-866、919-938、952-970和98-1006具體預測為組成或構成該亞單位的跨膜區。例如而不限於，在Uniprot/Swissprot中輸入人a-3亞單位的檢索詞P13637會顯示，SEQIDNO:2所示的a-3序列的胺基酸99-121、299-310、783-792、857-908和961-975具體預測為構成或組成這個亞單位的腔隙區/胞外區；SEQIDNO:2所示的a-3序列的胺基酸1-77、143-278、329-762、814-833、929-941和997-1013具體預測為構成或組成該亞單位的胞漿區；以及SEQIDNO:2所示的a-3序列的胺基酸78-98、122-142、279-298、311-328、763-782、793-813、834-856、909-928、942-960和976-996具體預測為組成或構成該亞單位的跨膜區。技術人員熟知預測多肽或蛋白膜拓撲學結構的算法以及驗證所預測的拓撲學結構的試驗方法，能夠利用這種方法預測和/或確定NKAa-l亞單位或a-3亞單位的腔隙區/胞外區、跨膜區和胞內區/胞漿區。例如，用於此目的的合適預測算法被描述於Bernsel和VonHeijne2005(ProteinScience14:1723-1728)。在一個優選實施方式中，物質能結合a-l和/或a-3亞單位的胞外區。例如，這種結合不需要物質穿過細胞膜以實現結合，從而可能使物質的遞送變得簡單。在優選實施方式中，物質能在生理條件下結合NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位。"生理條件"是指生物體(例如，待治療對象如動物或人)表現健康或正常功能的那些條件。在本發明各方面的優選實施方式中，本發明的物質可以高親和力結合NKA的a-l亞單位和/或a-3亞單位。在本文中，當結合的親和常數(KA)達到KA2lx104M"，優選KA2lx105M"，更優選的是KA^lx106M"，如Ka^1x107M"，更優選的是Ka^IxIC^M-1,更優選的是KA^1x109，如Ka^lxlO^M",最優選的是KA2lx1011M"，如Ka^1x1012、Ka三1x1013、Ka$1x1014、Ka21x1015或更高時，這種結合就被認為是"高親和力的"，其中&八=[配基_受體]/[配基][受體]。KA可利用本領域熟知的方法確定，如利用平衡透析和斯卡査德(Scatchard)作圖分析。高親和力結合的優點在於可以降低在對象體內產生療效所需的物質的量，這是因為物質與其分子靶位之間具有相當高的相互作用強度。在本發明的其他優選實施方式中，本發明的物質與NKA的ot-l亞單位和/或a-3亞單位的結合可以是特異性的。術語"特異性結合"是指配基與一個特定受體的結合比它與一個隨機的不相關受體的結合更容易的一種狀態。例如，優選的是，在配基與多肽或蛋白(l)特異性結合的條件下，與所述多肽或蛋白(l)特異性結合的配基(物質)很少或根本不結合其他多肽，尤其是該多肽或蛋白(l)的同系物或同源物。很少結合或根本不結合是指KA^lxl(^M—1，優選KA^lxlSM—、更優選KA^1x102m"，更優選KA^lxl(Vlvr1，如KaS1M"，最猶逸Ka1M-1，如KA<1xl(T1M-1，KA^1xl(T2M-1，KA^1xl(T3NT1，KAS1xl(T4M"，KA$lxl(r6M"或更小。例如但不限於，與NKAa-l亞單位特異性結合的物質很少或根本不結合任何其他NKAa亞單位亞型如a-2、a-3和a-4。與NKAa-3亞單位特異性結合的物質很少或根本不結合任何其他NKAa亞單位亞型如ot-l、a-2和a-4。與NKAa-l和a-3亞單位特異性結合的物質很少或根本不結合任何其他NKAa亞單位亞型如a-2和a-4。這種特異性結合的優點在於，可以降低物質對其特異性靶位之外的受體的潛在效應，包括對包含特異性靶a亞單位的那些NKA分子之外的NKA分子的效應，從而提高治療的選擇性，降低不良反應發生的機率。在優選實施方式中，與NKAa-l和a-3亞單位結合，優選以高親和力特異性結合的物質也能改變(例如抑制或活化)NKA的生物活性，即，可以是NKA"抑制劑"或"活化劑"。當這種物質是NKA"抑制劑"或"活化劑"時，這通常是指與所述物質未結合時相比，所述物質與NKA的一個或兩個a亞單位結合時能分別抑制或增強所述NKA生物活性的一個或多個方面。這些術語還指將所述物質給予具有NKA生物活性的體外系統、細胞、組織或生物體，優選患者時，與所述物質未給予時相比能分別抑制或增強所述NKA生物活性的一個或多個方面。NKA生物活性的一個方面是其酶活性，g卩，ATP水解作用驅動的Na+和K+離子交換穿過膜的能力；相應地，NKA"抑制劑"可抑制NKA的酶活性，NKA"活化劑"可活化NKA的酶活性。例如，實施例3描述了測定/檢測感興趣物質所導致的NKA酶活性的水平、抑制或活化的示例性方法。NKA生物活性的一個方面是信號轉導通路的調控，例如，涉及Src激酶、表皮生長因子受體、Ras、p42/p44絲裂原活化的蛋白激酶和活性氧產生增加的通路(Xie和Askari2002;Wang等，2004;同上)；相應地，NKA"抑制劑"可抑制一個或多個NKA調控的信號轉導通路，NKA"活化劑"可活化一個或多個NKA調控的信號轉導通路。技術人員應理解，一個給定配基可能會對NKA生物活性的多個方面(例如上述兩個方面)造成影響，也可能是不同的影響。例如而不限於，一個給定配基可抑制NKA的酶活性，但卻活化一個或多個NKA調控的信號轉導通路。因此，被稱為NKA"抑制劑"的物質，例如，因為它對NKA酶活性的效應，實際上可能能夠活化一個或多個NKA調控的信號轉導通路。或者一個給定物質可能抑制一個或多個NKA調控的信號轉導通路，但卻活化一個或多個其他NKA調控的信號轉導通路。術語"抑制"和"活化"各自包括任何程度的抑制或活化。例如，當物質結合到NKA的一個或兩個a亞單位上時，NKA生物活性的一個或多個(獨立的)方面，例如，其酶活性和/或信號轉導活性的抑制可以是至少約10%，優選至少約20%，優選至少約30%，例如至少約40%，更優選至少約50%，例如至少約60%，更優選至少約70%，例如至少約80%，以及最優選至少約90%，例如，至少約95%，如至少約96%、97%、98%、99%或甚至100%。例如，當物質結合到NKA的一個或兩個a亞單位上時，NKA生物活性的一個或多個(獨立的)方面，例如，其催化活性和/或信號轉導活性的活化可以是至少約10%，例如至少約20%,優選至少約30%，例如至少約40%，更優選至少約50%，例如至少約75%，更優選至少約100%,例如至少約150%、200%、250%、300%、400%或至少約500%。在優選實施方式中，與NKA的a-l和/或a-3亞單位結合的物質可激發下列一個、多個或全部效應1.抑制NKA的酶活性；2.抑制小窩蛋白1的細胞表達(參見，例如，Glenney等，1992，FEBSLett314:45-48和SwissprotQ03135中關於人小窩蛋白1的描述)；3.導致細胞肌動蛋白細胞骨架結構破壞；4.導致細胞ATP耗竭；5.導致NKAa亞單位與細胞肌動蛋白細胞骨架的相互作用解離。本發明的發明者認識到，上述一種或多種效應可能與本發明的增殖性疾病的治療密切相關。物質的上述效應可在合適的模型系統內檢驗，例如，細胞或非人動物模型系統，例如，如實施例3或4所所述，或者利用本領域熟知的方法，例如，免疫組化、共聚焦顯微鏡和/或免疫沉澱。在另一個優選實施方式中，與NKA的a-l和/或a-3亞單位結合的物質可在相關增殖性疾病的細胞培養物和/或非人動物模型中激發抗增殖和/或抗遷移效應，例如，如實施例6所述。在優選實施方式中，能與NKA的a-l亞單位和/或a-3亞單位結合的物質可選自化學物質，優選有機分子，更優選小分子有機分子；肽；擬肽素；多肽或蛋白；抗體，包括其片段或衍生物；適體；脂質；糖類；或核酸，包括寡核苷酸。這種物質可以是分離的或實質分離的，如本文所定義。上述類型的物質中有許多類型的物質，例如，化學物質、肽、適體、糖類或核酸，都可以在合成的、組合的和天然的產物庫中找到，利用本發明的確定待測物質與NKAa-l和/或a-3亞單位結合活性的篩選方法可以從中篩選出來。在一個優選實施方式中，能與NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位結合的物質或配基是化學物質，優選有機分子，更優選小分子有機分子。術語"化學物質"或"化合物"用於本文中是指其在本領域的含義；該術語包含由兩個或多個不同化學鍵合化學元素組成的物質，具有確定組合物的固定比例。該術語既包括無機化合物也包含有機化合物。在本文中，術語"有機化合物"或"有機分子"是指其在本領域的廣泛含義。該術語包含天然的有機分子以及半合成的或全合成的有機分子。大小與製藥學常用的那些有機分子相似的有機化合物。該術語不包括生物大分子(例如，蛋白質、核酸等)。優選的小分子有機分子的大小最高可達約5000Da，例如，最高達約4000，優選最高達3000Da，更優選最高達2000Da，更優選最高達約1000Da，例如，最高達約900、800、700、600或最高達約500Da。在一個實施方式中，有機分子選自具有式I的化合物其中W選自甲醯基、羥基CL4烷基、CL4烷基羰氧基CM烷基、C5.12芳基羰氧基CL4垸基，W選自氧代、CM烷基羰氧基CM垸基、<:5.12芳基羰氧基Cl4院基，或者W是含R2的C原子與雜環的N原子之間的雙鍵。優選的是，w選自甲醯基、羥甲基、羥乙基、甲基羰氧基甲基、乙基羰氧基甲基、丙基羰氧基甲基、苯基羰氧基甲基，w選自氧代、甲基羰氧基甲基、乙基羰氧基甲基、丙基羰氧基甲基、苯基羰氧基甲基，或者w是含R2的C原子與雜環的N原子之間的雙鍵。本實施方式的非限定性的典型化合物包括表1所列的那些化合物表ltableseeoriginaldocumentpage20tableseeoriginaldocumentpage21*是指式I含N雜環上的N原子和C原子之間的雙鍵。在一個優選實施方式中，有機分子是具有如下化學式的化合物2:上述化合物可利用，例如VanQuaquebeke等，2005(JMedChem48:849-856)所描述的方法或其改良版進行合成(半合成)。在一個優選實施方式中，能與NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位結合的物質或配基是擬肽素，特別是與不同亞單位結合的肽的擬肽素。在本文中，術語"擬肽素"是指非肽物質，這種物質是相應肽的拓撲學類似物。合理設計肽的擬肽素的方法是本領域熟知的。例如，Horwell1995(TrendsBiotechnol13:132-134)描述了根據硫酸化8-mer肽CCK26-33合理設計的三個擬肽素，根據ll-mer肽物質P合理設計的兩個擬肽素，以及相關擬肽素設計原則。擬肽素與其相應的肽相比，通常具有改良的特性，例如，穩定性提高、對水解的耐受性更高、或者更容易遞送。在另一優選實施方式中，能與NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位結合的物質或配基是適體。在本文中，術語"適體"是指能夠特異性結合併改變靶分子，優選多肽或蛋白，如NKAa-l亞單位或a-3亞單位的生物活性的單鏈或雙鏈寡-DNA、寡-RNA或寡-DNA/RNA或其類似物。適體能在生理條件下與其各自的靶位結合。在體外篩選適體可以快速分離對特定蛋白有高特異性和親和性的十分稀有的寡聚物。典型的RNA適體可見於US5，270，163、Ellington和Szostak19卯(Nature346:818-822)、Tuerk禾卩Gold1990(Science249:505-510)的描述，本文已納入參考。在蛋白的不連續功能位點中通常可以很精確地分辨出RNA適體，參見Gold等，1995(AnnuRevBiochem64:763-797)。在一個優選實施方式中，能與NKAot-l亞單位和/或a-3亞單位結合的物質或配基是抗體，包括其片段和衍生物。在本文中，所用的術語"抗體"具有最廣泛的含義，通常是指任何免疫結合性物質。該術語具體涵蓋完整的單克隆抗體；多克隆抗體；由至少兩個完整抗體形成的多價(例如，2-、3-或更多價)和/或多特異性抗體(例如，雙特異性或多特異性抗體)；和抗體片段，只要它們具有所需的生物活性(特別是特異性結合感興趣抗原的能力)；以及這種片段的多價和/或多特異性複合物。術語"抗體"不僅包括通過免疫法製備的抗體，而且包括通過製備含有至少一個補體決定區(CDR)的任何多肽(例如，重組表達的多肽)，其中CDR能夠特異性結合感興趣抗原上的表位。因此，該術語可用於描述這種分子，無論它們是在體外製備的還是在體內製備的。本發明方法中使用的抗體優選是分離的抗體。"分離"抗體是已經從其天然環境的組分中鑑定和分離和/或回收出來的抗體。其天然環境的汙染組分是會干擾抗體的治療用途的材料，這些材料可能包括酶、激素、其他蛋白性或非蛋白性溶質等。優選的是，分離抗體被純化至以下程度(l)通過羅氏蛋白質定量法測定抗體的純度大於80重量％，更優選大於90重量％，更優選大於95重量％，最優選大於99重量％;和/或(2)在還原或非還原條件下進行SDS-PAGE然後利用考馬斯亮藍染色或者優選銀染，證明是同質的；和/或(3)通過旋轉杯式測序儀測序足以獲得至少15個N端或內部胺基酸殘基序列。分離抗體包括重組細胞內的原位抗體，因為該抗體的天然環境的至少一個組分是不存在的。但是，一般來說，分離抗體至少通過一個純化步驟製備。因此，本發明的抗體優選"特異性結合"NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位，或者是NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位特異性的(因此，這些亞單位是抗體的抗原)，這意味著抗體能通過其補體決定區(CDR)與各自亞單位的表位結合，所述結合說明CDR與表位之間有某些互補性。抗體與抗原之間的特異性結合通常是非共價的，並且是可逆的。因此，當抗體通過其CDR與該亞單位的表位結合比它與隨機的不相關表位結合更容易時，該抗體"特異性結合"各自的亞單位或是各亞單位特異性的。特異性結合通常意味著高親和力，結合容量低到中，而非特異性結合通常具有低親和力，結合容量中到大。在本文中，術語抗體與抗原的"親和力"是指各個表位與抗體分子的CDR結合的強度值。參見，例如，Harlow等，1988.《抗體實驗室手冊》(Antibodies:ALaboratoryManual),冷泉港實驗室出版社，第二版，27-28頁。因此，術語"親合力"是指免疫球蛋白群和抗原之間形成的複合物的整體穩定性，也就是說，免疫球蛋白混合物與抗原功能性結合的強度。參見，例如，Harlow等，29-34頁。在本文中，當親和常數KA^lx104！^1，優選KA21xl0S]Vr1，更優選的是Ka^lx106M"，如Ka^lx107M"，更優選的是KA^lx108M"，如Ka^1x109、KA2lxlO^M-1,最優選的是KA^lxlOuM"，如K^lx1012、KA21xl013、KA^lxl014、KA2lxl0"或更高時，認為抗體與抗原的結合是特異性的，其中KA:[AgAb]/[Ag][Ab]。例如，抗體的結合親和力可通過Munson等，1980(AnalBiochem107:220)所述的斯卡查德作圖分析來確定，例如，在BIAcore系統內(瑞典烏普薩拉的拜考公司(BiacoreAB，Uppsala，Sweden))。抗體還可以其交叉反應性的方式進行描述。在本文中，術語"交叉反應性"是指一種抗原特異性的抗體與第二抗原反應的能力，即，兩種不同抗原物質之間的親緣關係值。因此，如果抗體與誘導其形成的表位之外的一個表位結合，那麼該抗體是交叉反應性的。交叉反應性表位通常包含許多與誘導表位相同的互補結構特徵。在抗體能與其誘導(g卩，特異性)表位特異性結合的條件下，如果抗體不能與其他表位，如與其特異性表位的序列一致性小於99.5%、小於99%、小於98%、小於97%、小於96%、小於95%、小於94%、小於93%、小於92%、小於91%、小於90%、小於85%、小於80%、小於75%、小於70%、小於65%、小於60%、小於55%和/或小於50%的表位實質結合(例如，Ka^1x104m"，優選KA^1x103m"，更優選KA^1x102M"，更優逸Ka^lxl011^1，如KaS1M-1，；Stti^KAlM-1，如KA^lxl(T1M曙1，KA^1x10-2M"，KA^1xl(T3M"，KA^1x10國4M國1，KAS1xl(T6M"或更小)，則認為該抗體幾乎沒有或沒有"交叉反應性"。在抗體能與一個給定多肽或蛋白特異性結合的條件下，如果抗體不能與所述多肽或蛋白的同系物或同源物實質結合(例如，Ka^1x1(^M—1，優逸Ka^1x103m"，更優選KA^lxl02NT1，更優選KA^lxl(^IVr1，如KA^1M-1，最優選KA《1M-1，如KAS1x1(T1M-1，K"1x10-2M-1，KAS1x10-3M"，KASlxlO^Nr1,Ka$lxl(T6M"或更小)，則所述多肽或蛋白特異性的抗體被認為與所述多肽或蛋白的同系物或同源物幾乎沒有或沒有"交叉反應性"。例如，當一個給定多肽或蛋白(1)特異性的抗體與其他多肽或抗體(2)的結合活性佔抗體與多肽或蛋白(1)和(2)的總結合活性的10%以下，優選5%以下，更優選1%以下，更優選0.1%以下，最優選0.01%以下或甚至0.001%以下，則該抗體與其他多肽或蛋白(2)，例如，所述多肽或蛋白(l)的同系物或同源物幾乎沒有或沒有"交叉反應性"，其中結合活性是通過，例如，螢光活化細胞分類(FACS)分析或(放射性)免疫沉澱(RIA)分析來測定的。這也可用於上述NKAa亞單位。在優選實施方式中，優選的是，NKAa-l亞單位特異性的抗體與其他任何NKAa亞單位亞型如a-2、a-3和a-4很少有或沒有交叉反應性。NKAa-3亞單位特異性的抗體與其他任何NKAa亞單位亞型如a-l、a-2和a-4很少有或沒有交叉反應性。NKAa-l亞單位和a-3亞單位特異性的抗體與其他任何NKAa亞單位亞型如a-2和a-4很少有或沒有交叉反應性。在一個實施方式中，抗體可以是完整抗體。"完整"抗體是包含抗原結合可變區以及輕鏈恆定區(CL)和重鏈恆定區CH1、CH2禾nCH3的抗體。恆定區可以是天然序列恆定區(例如，人天然序列恆定區)或其胺基酸序列變體。根據其重鏈恆定區的胺基酸序列，完整抗體可分成不同的"類"，這些類型的抗體也包含在本發明的範圍之內。完整抗體包括5個主要的類:IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有些還可以進一步分成"亞類"(同種型)，例如，IgGl、lgG2、lgG3、lgG4、IgA和lgA2。不同類抗體相應的重鏈恆定區分別被稱為a、S、s、y和P。根據其恆定區胺基酸序列，脊椎動物來源的抗體的"輕鏈"可清楚地分成兩種不同類型，稱為K和人。不同類的免疫球蛋白的亞單位結構和三維構型是大家所熟知的。在一個實施方式中，抗體可以是上述免疫球蛋白的任何一類，優選IgG類抗體。大多數天然脊椎動物(包括哺乳動物)抗體通常是約150,000道爾頓的異源四聚體糖蛋白，由兩個一樣的輕鏈(L)和兩個一樣的重鏈(H)組成。每條輕鏈通過一個共價二硫鍵與一條重鏈相連，而不同免疫球蛋白同種型的重鏈所包含的二硫鍵數目是不同的。每一條重鏈和輕鏈也含有空間基本規則的鏈內二硫鍵。在每一條重鏈的一端包含一個可變區(VH)，隨後是幾個恆定區。在每一條輕鏈的一端包含一個可變區(VL)，另一端包含一個恆定區。輕鏈的恆定區與重鏈的第一恆定區排列在一起，輕鏈的可變區與重鏈的可變區排列在一起。特定胺基酸殘基被認為形成了輕鏈和重鏈可變區之間的界面。術語"可變的"是指不同抗體序列之間區別最多的可變區的某些部分的事實，被用於每一特定抗體與其特定抗原的結合和特性。但是，變異性並不是平均分布於整個抗體可變區。變異性集中分布在輕鏈和重鏈可變區中被稱為超變區的三個片段上。可變區內保守程度較高的部分被稱為框架區(FR)。天然重鏈和輕鏈的每一個可變區通常包含4個FR，分別由三個超變區相連。每一條鏈的超變區與其他鏈的超變區通過FR密切結合在一起，形成抗體的"抗原結合位點"(參見Kabat等，1991。《有免疫學意義的蛋白的序歹ll》(SequencesofProteinsofImmunologicalInterest),第5版，公共健康服務中心，國立衛生研究院，Bethesda,Md.)。恆定區不直接參與抗體和抗原的結合，但是具有各種效應功能，如參與抗體依賴性細胞毒效應(ADCC)。在某些例子中，例如，來源於駱駝化(camelid)或根據駱駝化免疫球蛋白設計出的某些免疫球蛋白分子，完整免疫球蛋白分子可能只包含重鏈而沒有輕鏈(參見，Hamers-Casterman等，1993.Nature363:446-448)。因此，在這些免疫球蛋白中，被稱為VHH的重鏈可變區形成整個CDR。這些分子和功能性片段和/或其衍生物也包含在本文所述的術語"抗體"的範圍內。相應地，在一個實施方式中，抗體可以是上述駱駝化抗體。在一個優選實施方式中，抗體是單克隆抗體或單克隆抗體的混合物。單克隆抗體具有一些優點，例如，特異性和重複性地靶向到特定抗原和所述抗原內的特定表位，可重複製備和滴度，以及技術人員熟知的其他優點。在本文中，術語"單克隆抗體"是指從一群基本同質的抗體獲取的抗體，即，除了少量存在的天然發生的突變之外，該群內的各個抗體都是一致的。單克隆抗體是高度特異性的，直接導向單個抗原位點。另外，與包含導向不同抗原決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體製備物不同，每一種單克隆抗體針對抗原上的一個決定簇。除了其特異性之外，單克隆抗體的優點還在於它們可以通過合成方法製備而不會被其他抗體汙染。"單克隆"修飾子是指從基本同質的抗體群獲取抗體的特徵，而不能被解釋為需要通過任何特定方法製備抗體。例如而不限於，本發明所用的單克隆抗體可以通過Kohler等，1975(Nature256:495)首先報導的雜交瘤方法製備，或者通過重組DNA方法(例如，US4,816,567所描述的)製備。單克隆抗體還可以利用Clackson等，1991(Nature352:624-628)和Marks等，1991(JMolBiol222:581-597)所描述的技術從噬菌體抗體文庫中分離。本文所定義的單克隆抗體還特別包括"嵌合"抗體以及這種抗體的片段，只要它們具有所需的生物活性，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與特定物種來源的抗體內的相應序列一致或同源，或者屬於一個特定類或亞類的抗體，而鏈的其餘部分與另一物種來源的抗體內的相應序列一致或同源，或者屬於另一個特定類或亞類的抗體(參見，例如，US4,816,567;Morrison等，1984，PNAS81:6851-6855)。相應地，在一個實施方式中，抗體可以是嵌合抗體。本文感興趣的典型嵌合抗體包括"靈長類化"抗體，其中包含來源於非人靈長類(例如，舊世界猴(OldWorldMonkey),類人猿等)的可變區抗原結合序列和人恆定區序列。非人(例如，嚙齒類)抗體的"人源化"形式是包含最少非人免疫球蛋白來源序列的嵌合抗體。人源化抗體的大部分是人免疫球蛋白(受者抗體)，其中受者超變區來源的殘基被非人物種(供者抗體)如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類的超變區來源的殘基取代，具有理想的特異性、親和力和結合容量。在某些例子中，人免疫球蛋白的框架區(FR)殘基被相應的非人殘基取代。另外，人源化抗體可包含受者抗體或供者抗體內不存在的殘基。這些修飾可進一步改良抗體的效能。總之，人源化抗體包含至少一個，通常兩個，可變區的幾乎全部序列，其中超變環的全部或幾乎全部序列對應於非人免疫球蛋白相應的超變區，FR的全部或幾乎全部序列是人免疫球蛋白的相應序列。可選的是，人源化抗體還可以包含至少一部分免疫球蛋白恆定區(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恆定區。如何製備人源化抗體的詳細描述可參見，例如，Jones等，1986(Nature321:522-525)，Riechmann等，1988(Nature332:323-329)以及Presta1992(CurrOpStructBiol2:593-596)。相應地，在一個實施方式中，抗體可以是人源化抗體，例如，有益地使抗原始抗體非人部分的免疫反應降到最低。在本文中，術語"超變區"是指抗體上負責抗原結合的胺基酸殘基。超變區通常包含來源於"補體決定區"或"CDR"的胺基酸殘基(例如，輕鏈可變區上的殘基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97(L3),重鏈可變區上的殘基31-35(H1)、50-65(H2)和95-102(H3);Kabat等，1991.《有免疫學意義的蛋白的序歹U》(SequencesofProteinsofImmunologicalInterest),第5版，公共健康服務中心，國立衛生研究院，Bethesda，Md.)和/或來源於"超變環"的那些殘基(例如，輕鏈可變區上的殘基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)，重鏈可變區上的殘基26-32(Hl)、53-55(H2)和96-101(H3);Chothia和Lesk1987,JMolBiol196:901-917)。"框架區"或"FR"殘基是超變區殘基之外的那些可變區殘基。在其他實施方式中，抗體物質可以是下文所描述的抗體片段。這種片段優點包括，例如，較小的尺寸、更容易遞送、缺少效應區等。"抗體片段"包含完整抗體的一部分，包含其抗原結合區或可變區。抗體片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab')2、Fv和scFv片段；雙價抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；以及抗體片段形成的多價和/或多特異性抗體，如雙價抗體、三價抗體和多價抗體。上述定義Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、scFv等意味著具有其本領域已確定的含義。通過進一步解釋的方式，用木瓜蛋白酶消化抗體可產生兩個相同的抗原結合片段和一個殘存的"Fc"片段，其中抗原結合片段被稱為"Fab"片段，每一個片段包含一個抗原結合位點。胃蛋白酶處理可產生包含兩個抗原結合位點的F(ab')2片段。典型的Fc片段包含由二硫鍵連接的兩個H鏈的C端部分。抗體的效應功能是由Fc區的序列決定的，該區還是可以被某些類型的細胞上存在的Fc受體(FcR)識別的部分。"Fv"是包含完整抗原識別和抗原結合位點的抗體片段。該區主要由一個重鏈和一個輕鏈可變區以非共價緊密連接的二聚體組成。在這個構型中，每一個可變區的三個超變區相互作用形成位於VH-VL二聚體表面上的抗原結合位點。六個超變區共同決定抗體的抗原結合特異性。但是，即使一個可變區，VH或VL，即，只包含三個抗原特異性超變區的Fv的一半，也能夠識別和結合抗原，儘管比完整結合位點的親和力低("單-區抗體)。"單鏈Fv"或"scFv"抗體片段包含抗體的VH和VL區，其中這些區存在於一條多肽鏈上。優選的是，Fv多肽還包含VH和VL區之間的多肽連接子，使scFv形成有利於結合抗原的理想結構。有關使用scFv的綜述參見PKickthun，《單克隆抗體藥理學》(ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies),13巻，Rosenburg和Moore編輯，Springer-Verlag，紐約，269-315頁(1994)。另外，術語"Fv"還包括其他功能性(即，特異性抗原結合)片段。這種片段的例子包括而不限於只包含FV的重鏈片段的"小體"、包含抗體重鏈可變區一小部分的"微體"(參見PCT/IL99/00581)、包含輕鏈片段的相似體、以及包含輕鏈可變區功能性單位的相似體。應當了解Fv分子的片段可以是基本上呈環形的或環狀的多肽。典型的Fab片段還包含輕鏈的恆定區和重鏈的第一恆定區(CHl)。Fab'片段與Fab片段的不同在於，Fab，片段內的重鏈CHl區C端多了幾個殘基，其中包括抗體鉸鏈區的一個或多個半胱氨酸殘基。Fab'-SH在本文中被定義為恆定區的半胱氨酸殘基攜帶至少一個游離巰基的Fab'。"F(ab')2"抗體片段最初是作為Fab'片段對被製備出來的，在兩個Fab'片段之間有鉸鏈半胱氨酸殘基。抗體片段的其他化學偶合也是本領域熟知的，也包括在該術語的範圍內。術語"雙價抗體"是指含有兩個抗原結合位點的小抗體片段，該片段包含位於同一條多肽鏈(VH-VL)上的相連的一個重鏈可變區(VH)和一個輕鏈可變區(VL)。連接子太短無法使同一條鏈上的兩個區配對，因此兩個區被迫與其他鏈的互補區配對形成兩個抗原結合位點。有關雙價抗體的更完整描述參見，例如，EP404,097、WO93/11161和Hollinger等，1993(PNAS卯6444-6448)。在另一實施方式中，抗體可以是下面所描述的多克隆抗體。術語"多克隆抗體"是指一群異源抗體分子組成的抗體，其中的抗體分子對不同的表位具有特異性的抗原結合功能，例如，對同一抗原的不同表位。一般而言，多克隆抗體來源於用一種抗原免疫的動物的血清。更具體說，該術語還包括全抗血清、代表全抗血清的抗體群以及全抗血清來源的抗體亞群，例如，Ig類特異性的亞群或抗原特異性的亞群(例如，通過親和層析純化)。優選的是，多克隆抗體可從血清組分中分離，和/或可以是純化的和/或親和純化的Ig類抗體，從而使抗體的特異性更高，非特異性反應的風險更低。除了抗原結合功能以外，某些抗體(特別是天然抗體)具有"效應功能"，"效應功能"是指抗體的Fc區(天然序列Fc區或功能性胺基酸序列變體Fc區)所具有的那些生物活性。抗體效應功能的例子包括Clq結合；補體依賴的細胞毒作用；Fc受體結合；抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用(ADCC);吞噬作用；下調細胞表面受體(例如，B細胞受體；BCR)等。技術人員理解，可以降低或消除抗體的效應功能而不實質降低抗體與其各自抗原結合的能力。例如而不限於，可以從抗體上刪除負責一種或多種待消除效應功能的Fc部分或其一部分。另外，可以在一個或多個胺基酸位置突變抗體的Fc部分以降低或消除其效應功能。另外，抗體的效應區在一個物種內有效，但是可能在另一物種內活性降低或靜默。相應地，在一個優選實施方式中，抗體不含效應功能，例如，缺乏負責效應功能的區或者包含降低或消除這種效應功能的突變等。優選的是，在本發明的治療方法中給予缺乏這種區(例如，缺失、突變、修飾等)的抗體，其中在將抗體給予生物體時這種區在生物體內會發揮效應功能。這種抗體的優點在於能夠特異性地結合NKA的不同a亞單位，但是卻不會誘導補體或免疫系統發生抗這些抗體結合的細胞的反應(例如，細胞免疫反應或體液免疫反應)。這可降低治療不良反應的風險。術語抗體包括來源於任何動物物種的抗體或包含任何動物物種來源的一個或多個部分的抗體，優選脊椎動物物種，包括例如，鳥和哺乳動物。抗體可以是但不限於雞、火雞、鵝、鴨、珍珠雞、鵪鶉或野雞的抗體。也是非限制性的，抗體可以是人、鼠(小鼠、大鼠等)、驢、兔、山羊、綿羊、豚鼠、駱駝(例如雙峰駝和單峰駝)、駝馬(例如，羊駝，大羊駝或小羊鴕)或馬的抗體。另外還包括而不限於，可變區可以是海洋生物(condricthoid)起源的(例如，來源於鯊魚)。在本文中，"人"抗體包括具有人免疫球蛋白的胺基酸序列的抗體，包括分離自人免疫球蛋白文庫或分離自不表達內源性免疫球蛋白的一個或多個人免疫球蛋白基因轉基因動物的抗體，如下文所描述的那樣以及，例如，US5,939,598所描述的那樣。技術人員應了解，抗體可包含一個或多個胺基酸缺失、插入和/或取代(例如，保守取代)，只要這種改變能保留其對各自抗體的結合能力。抗體還可包含其組成胺基酸的一個或多個天然或人工修飾(例如，糖基化等)。製備單克隆抗體、多克隆抗體及其片段的方法是本領域熟知的(參見，例如，Harlow和Lane，《抗體實驗室手冊》(Antibodies:ALaboratoryManual),冷泉港實驗室出版社，紐約，1988，本文已納入作為參考)。以及製備重組抗體或其片段的方法。例如，製備和使用單克隆抗體的方法參見，例如US5,688,681;US5,688,657;US5,683,693;US5,667,781;US5,665,356;US5，591,628;US5,510,241;US5,503,987;US5,501,988;US5,500,345和US5,496,705;Skerra等，1993(CurrOpinioninImmunol5:256-262);PKickthun1992(Imm腦lRevs130:151-188);McCafferty等，1990(Nature348:552-554);Clackson等，1991(Nature352:624-628);Marks等，1991(JMolBiol222:581-597);Mark等，1992(BioTechnology10:779-783);Waterhouse等，1993(NuCAcidsRes21:2265-2266);US4，816，567;Morrison等，1984(PNAS81:6851);本文已完整納入作為參考。製備和使用多克隆抗體的方法的例子見於US5,512,282;US4,828,985;US5,225,331和US5,124,147的描述，本文已完整納入作為參考。製備抗體片段的方法的例子參見，例如，Morimoto等，1992(JBiochemBiophysMethods24:107-117);Brennan等，1985(Science229:81);Carter等，1992(BioTechnology10:163-167);WO93/16185;US5,571,894;US5,587,458;US5,641,870;本文已完整納入作為參考。EP0656946描述了駱駝化(camdid)免疫球蛋白的分離和使用，本文已納入作為參考。一般而言，本發明的抗體製備方法包括用合適的抗原免疫宿主動物，優選脊椎動物，更優選哺乳動物。在本文中，術語"抗原"是指能在宿主體內激發免疫反應的任何物質，特別是能激發產生所述抗原特異性的抗體的體液免疫反應。抗原包含一個或多個抗原決定簇或表位，這些抗原決定簇或表位可以相同，也可以不同。術語"抗原決定簇"或"表位"是指與相應抗體的抗原結合位點互補因而能與抗原結合位點特異性相互作用的抗原位點。為了本發明的特定目的，"抗原"可包含、基本包含或包括鈉泵的a-1或oi-3亞單位、其片段(例如，包含其S4、^5、26、28、210個連續胺基酸，優選215，更優選^20，更優選225、230、240、250、2100或^500個連續胺基酸；或者，例如，包含多肽序列的210%、220%、230%、240%、250%、$60%、^70%、280%或290%)、其變體(例如，包含一個或多個胺基酸缺失、插入和/或取代，優選保守取代，其中通過NCBIBLAST序列排列算法確定與天然蛋白或其片段的序列一致性30%、260%，優選^70%，更優選280%，更優選290%、295%、299%)、其衍生物(例如，包括其一個或多個胺基酸殘基的衍生形式，例如，通過糖基化、磷酸化、二硫鍵等，其中修飾胺基酸部分與天然蛋白或其片段或變體相比的一致性《0%、$40%、S30%，優選^20%，更優選^10%，更優選《％，例如，3%、S3%、2%或^1%)或上述任何序列與異源呈現載體如GST、HBc、鑰孔血藍蛋白、血清白蛋白、牛甲狀腺蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑等的遺傳融合蛋白或化學融合蛋白，只要上述物質能誘導產生天然a-l或a-3亞單位(一個或多個表位)特異性的抗體。這些修飾可以是精心設計的，例如通過定向誘變，也可以是偶發性的，例如通過產生抗原的宿主的突變。或者，在其表面表達a-l亞單位和/或a-3亞單位的細胞可用於製備抗體。本領域的技術人員了解可用於製備抗體的其他形式的a-l和/或a-3亞單位。利用分析抗原性圖譜的Hopp/Woods法(Hopp等，1981，PNAS78:3824-3828)，以及用於親水性分布的Kyte-Doolittle技術(Kyte等，1982。JMolBiol157:105-132)計算，進行標準抗原性與親水性作圖，可以鑑定出蛋白，尤其是NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位上的抗原區。標準序列分析軟體如Accelrys的GCGTMv.11丄2軟體包中也有這種預測程序。多肽或蛋白分子內的預測表位可以是"線性的"，即，包含幾個連續胺基酸，例如，多肽或蛋白分子的約5到12個相鄰胺基酸，或約6到10個相鄰胺基酸。多肽或蛋白分子內的預測表位也可以是"構象的"，即，構成表位的胺基酸不是或不全是多肽或蛋白分子的一級胺基酸序列上順序排列的胺基酸，而是它們在天然多肽或蛋白的三維摺疊結構上靠近，因而可以被抗體識別。表位還可以包含天然多肽或蛋白的其他結構特徵，例如而不限於糖基化、磷酸化等。在一個優選實施方式中，被本發明的抗體識別的表位位於NKAot-l亞單位或的a-3亞單位的胞外區。這有利於給予的抗體接近並結合各自的亞單位。相應地，在一個實施方式中，免疫抗原可包含、基本包含或包括NKAa-l亞單位或a-3亞單位的胞外區的至少一部分、其變體或其衍生物，游離或連接於呈現載體。以NKA(x-l亞單位和/或a-3亞單位作為誘導抗原製備出的抗體可用本領域熟知的方法檢測其與各個亞單位的結合能力，例如，免疫沉澱、親和層析、ELISA、RIA、變性或非變性免疫印跡、免疫細胞化學、免疫組化等，例如篩選具有上述特性以及可用於本發明的方法的抗體。單克隆抗體的結合親和力可通過Munson等，1980(AnalBiochem107:220)的斯卡査德分析確定。同樣，抗體的分離和純化方法，例如，親和純化、蛋白A瓊脂糖層析、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析、鹽沉澱等，都是本領域熟知的。減少NKAa-l和/或a-3亞單位的表達的物質在本發明的另一方面，物質可減少鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位和/或a-3亞單位的表達。當一種物質，如物質或分子，被認為可"減少NKAa-l亞單位或a-3亞單位的表達，'時，這通常意味著給予細胞、組織或生物體所述的物質，可導致各個亞單位的表達水平較未給予所述物質時低。這種減少表達的作用可在各個亞單位的異質性核RNA(hnRNA)、前體mRNA(前-mRNA)、mRNA、cDNA和/或蛋白水平上觀察和定量檢測。定量檢測表達水平的合適方法是本領域熟知的，其中包括而不限於RNA印跡、定量RT-PCR、蛋白印跡、ELISA、RIA、免疫沉澱等。該術語包括任何程度的表達減少，例如，以總量和/或單個細胞水平為基準計，表達減少至少約10%，例如，至少約20%，優選至少約30%，例如，至少約40%，更優選至少約50%，例如，至少約60%，更優選至少約70%，例如，至少約80%，以及最優選至少約90%或者甚至更高，例如，至少約95%、至少約96%、至少約97%、至少約98%、至少約99%或者甚至(約)100%。在優選實施方式中，能抑制NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位表達的物質或配基可選自化學物質，優選有機分子，更優選小分子有機分子；反義物質，例如，反義寡核苷酸、核酶或能誘導RNA幹擾的物質。這種物質可以是分離的或實質分離的，如本文所定義。在一個優選實施方式中，這種物質可靶向到NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位而特異性地減少其表達。術語"特異性減少"反映了這樣一種狀態，即，當物質減少其耙位表達時卻不會實質減少其他隨機的不相關分子的表達。在一個優選實施方式中，能減少NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位表達的物質是反義試劑，特別是反義寡核苷酸。術語"反義"用於本文中是指可幹擾基因表達並能特異性結合所需的靶多聚核苷酸序列的分子。反義分子一般(但不是必須的)包含能特異性地與靶序列雜交的寡核苷酸或寡核苷酸類似物。因此，術語"反義"寡核苷酸是指包含、基本包含或包括核酸序列的寡核苷酸或寡核苷酸類似物，其中的核酸序列與基因組DNA、hnRNA、mRNA或cDNA內的序列互補或基本互補(即，大部分但不是全部互補)，優選編碼感興趣蛋白的mRNA或cDNA;例如，NKAa-l亞單位或a-3亞單位的基因組DNA、hnRNA、mRNA或cDNA內的序列，優選mRNA或cDNA。"基本互補"是指至少85%互補，例如，優選至少3390%互補，例如，至少91%互補，92%互補，更優選至少93%互補，例如，94%互補，更優選至少95%互補，例如，至少％%互補，更優選至少97%互補，例如，至少98%互補，最優選至少99%互補。應當注意，反義寡核苷酸可以是與mRNA或cDNA的任何5'非翻譯區、編碼區和/或3'非翻譯區互補或基本互補。儘管不局限於任何理論或機制，但是一般認為反義寡核苷酸的活性依賴於寡核苷酸與耙核酸的結合，因而能阻斷耙位的功能，通過雜交捕獲(例如，阻止聚合酶RNA處理機制發揮作用)或通過RNA酶H破壞靶RNA(當與RNA雜交時能活化RNA酶H)，導致表達被抑制。在這裡以及下面的參考文獻中，本文所用的術語"雜交"是指核酸鏈通過鹼基配對與包含互補序列的鏈結合的任何過程，優選包括氫鍵作用，更優選通過沃森-克裡克(Watson-Crick)鹼基配對作用。雜交可發生在不同鏈之間，也可發生在同一條鏈內。影響雜交和雜交強度(S卩，核酸鏈之間的相互作用的強度)的因素包括核酸之間的互補性、雜交條件的嚴謹程度、形成的雜合子的解鏈溫度以及核酸內的G:C(或RNA的U:C)比例。除了序列信息以外，通過在高嚴謹條件下雜交也有可能確定核酸是否有285、30、295或甚至2100%的一致性/互補性。"高嚴謹"條件包括與如下典型結合或雜交條件相等的條件65°C，在含有5xSSPE(43.8g/1NaCI，6.9g/1NaH2P04'H20和1.85g/1EDTA，用NaOH將pH調整到7.4)、0.1%SDS、5x登哈特(Denhardt)試齊lJ(每500ml50xDenhardt's包含5gFicoll(型號400，法瑪西亞公司(Pharmacia))、5gBSA(FractionV;西格瑪公司(Sigma))和100pg/ml變性鮭精DNA)的溶液中結合或雜交，然後在包含5xSSPE、0.1%SDS的65'C溶液中洗滌，利用長度約為500個核苷酸的探針。超過約50-100個核苷酸長度的核酸序列的其他典型"高嚴謹"雜交條件包括與如下雜交條件相等的條件45°C，在6xSSC中雜交，然後在65。C，在0.2xSSC、0.1%SDS中洗滌一次或多次。許多等價條件可用於改變雜交的嚴謹程度；可以考慮下列因素如探針的長度和性質(DNA、RNA、鹼基組成)和靶位的性質(DNA、RNA、鹼基組成、溶到溶液中或固化等)和鹽及其他組分的濃度(例如，是否含有甲醯胺，硫酸葡聚糖，聚乙二醇)，調整雜交溶液可獲得與上述條件不同但等價的低嚴謹或高嚴謹雜交條件。另外，在高嚴謹條件下促進雜交的條件(例如，提高雜交溫度和/或增加洗滌步驟，在雜交溶液中添加甲醯胺等)是本領域熟知的。進行雜交反應的指導方法可見於，例如，《當代分子生物學手冊》(CurrentProtocolsinMolecularBiology),JohnWiley&Sons,N.Y.，6.3.1-6.3.6，1989以及更新的版本，本文都已納入作為參考。一般而言，適用於本發明的反義物質能在高嚴謹條件下與其各自的靶位雜交。這種物質可在生理條件下與靶位特異性雜交。在本文中，術語"互補的"或"互補性"用於核酸時是指，在容許鹽(離子強度)和溫度條件下多聚核苷酸通過鹼基配對正常結合，優選沃森-克裡克鹼基配對。例如，鹼基A和T、A和U或G和C之間可發生互補的沃森-克裡克鹼基配對。例如，序列A-G-T(即，5'-A-G-T-3，)是T-C陽A(即,5'-T-C-A-3，)的互補序列。兩個單鏈核酸分子之間的互補性可以是"部分的"，這樣當兩條鏈雜交時核酸上只有某些核苷酸結合；或者是"完全的"，這樣單鏈分子之間存在完整互補性。例如，如果相對較長的核酸鏈包含與較短核酸鏈的序列完全互補的序列，那麼相對較短的核酸鏈就具有與相對較長的核酸鏈的完整互補性。核酸分子(1)與核酸分子(2)的"互補程度"可表示為，當所述的核酸分子(1)與(2)雜交時，優選在高嚴謹條件下，預計能與核酸分子(2)的核苷酸匹配，即形成沃森-克裡克鹼基配對的核酸分子(l)的核苷酸的比例(百分比)。"編碼"是指核酸序列或其相應部分根據遺傳密碼(本文所述的遺傳密碼是生物體的遺傳密碼，優選哺乳動物，例如人)翻譯成特定的胺基酸序列，例如，特定多肽或蛋白的胺基酸序列。例如，"編碼"特定多肽或蛋白的核酸序列可包含所述多肽或蛋白的天然基因組序列、hnRNA、前-mRNA、mRNA(或從中反轉錄出的cDNA)，或者包含這種天然核酸序列的重組版本或變體。編碼NKAa-l亞單位或(x-3亞單位、或其任何(優選功能性的)變體或片段的核酸序列是指，根據遺傳密碼(本文所述的遺傳密碼是生物體的遺傳密碼，優選哺乳動物，例如人)與所述亞單位或其變體或片段的胺基酸序列相應的核酸序列。例如而不限於，編碼NKAa-l亞單位或a-3亞單位的核酸序列可包含所述亞單位各自的天然基因組序列、hnRNA、前-mRNA、mRNA(或從中反轉錄出的cDNA)，或者包含這種天然核酸序列的重組版本或變體。技術人員理解，編碼NKAal亞單位或NKAa3亞單位的天然核酸序列可能會存在物種差異，這是因為物種之間存在遺傳多樣性。另外，同一物種的不同個體之間、甚至不同個體內因給定物種內的正常遺傳多樣性(變異)或由於翻譯後修飾也會導致編碼NKAal亞單位或a3亞單位的天然核酸序列存在差異。因此，天然存在的編碼a-l或a-3亞單位的所有核酸序列，優選那些編碼生物功能多肽分子的序列都被認為是天然的。NKAa-l亞單位的示例性cDNA序列包括而不限於人al亞單位cDNA序列，該序列已收錄於NCBIGenBank(http:〃www.ncbi.nlm.nih.gov/)，檢索號為NM_000701。NKAa-3亞單位的示例性cDNA序列包括而不限於人a3亞單位cDNA序列，該序列已收錄於NCBIGenBank，檢索號為NM—152296。在另一優選實施方式中，能減少NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位表達的物質是核酶。在本文中，術語"核酶"是指能催化裂解多聚核苷酸的核酸分子，優選寡核苷酸或寡核苷酸類似物。優選的是，"核酶"能裂解一個給定多肽或蛋白的mRNA，從而減少其翻譯；例如，優選NKAa-l亞單位或a-3亞單位的mRNA。本文所述的示例性核酶包括而不限於錘頭型核酶、發卡型核酶、8型核酶等。有關核酶及其設計方法的描述參見，例如，US5,354,855，US5,591,610，Pierce等，1998(NucleicAcidsRes26:5093-5101)，Lieber等，1995(MolCellBiol15:540-551)和Benseler等，1993(JAmChemSoc115:8483-8484)，本文已完整納入作為參考。在另一優選實施方式中，能減少NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位表達的物質能誘導各自的轉錄子被RNA幹擾，優選mRNA。"RNA幹擾"或"RNAi"是一個最初應用於在植物和蠕蟲內觀察到的一種現象的術語，其中雙鏈RNA(dsRNA)可以以特異性和翻譯後方式阻斷基因表達。因此，RNAi通常是指動物體內短幹擾核酸(siNA)，優選短幹擾RNA(siRNA)所介導的序列特異性翻譯後基因靜默的過程。RNAi是一種在體外或體內抑制基因表達的有用方法。RNA幹擾物質可包括能介導RNA幹擾(RNAi)以抑制NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位表達的任何短幹擾核酸(siNA)、短幹擾RNA(siRNA)、雙鏈RNA(dsRNA)、微小RNA(miRNA)和短髮卡RNA(shRNA)分子。在本文中，表達"dsRNA"涉及能誘導RNA幹擾的雙鏈RNA。根據本發明，能誘導RNAi或RNA介導的耙基因靜默的任何合適雙鏈RNA片段都可以使用。在本文中，"雙鏈核糖核酸分子(dsRNA)"是指包含能形成RNA雙螺旋的兩條鏈的任何RNA分子、片段或部分，儘管其中可能會存在包含突出的未配對核苷酸的單鏈部分。雙鏈RNA包含退火的互補鏈，其中一條鏈的核苷酸序列對應於將被下調的靶基因的靶核苷酸序列(即，至少是mRNA轉錄子的一部分)。雙鏈RNA的另一條鏈與這個耙核苷酸序列互補。雙鏈RNA只需與被下調的耙基因的mRNA序列足夠相似就能夠介導RNAi。因此，本發明的優點在於能夠容忍序列變異，這些變異可能是因為遺傳突變、鏈多態性或進化多樣性引起的。靶序列與dsRNA序列的核苷酸序列之間能允許的核苷酸錯配數目不超過1/5鹼基對，或1/10鹼基對，或l/20鹼基對，或l/50鹼基對。根據本發明，每當所述表達涉及能導致幹擾的RNA時，能退火復性在一起的兩條獨立(正義和反義)RNA鏈都可以形成"dsRNA"或"雙鏈RNA"。或者，dsRNA可具有摺疊的柄-環結構或發卡結構，其中dsRNA的兩條退火鏈共價連接在一起。在這個實施方式中，dsRNA的正義鏈和反義鏈可由單鏈RNA序列上部分自身互補的不同區形成。在本文中，術語"RNAi分子"是一個通用術語，是指雙鏈RNA分子，包括小幹擾RNA(siRNA)、發卡RNA(shRNA)和能在體內裂解形成siRNA的其他RNA分子。RNAi分子可包含與靶核酸序列一致或基本一致的長鏈dsRNA，也可包含只與耙核酸序列的一個區一致或基本一致的短鏈dsRNA。本發明的RNAi分子可以是"小幹擾RNA"或"siRNA"。siRNA通常合成成雙鏈分子，其中每條鏈的長度約為19-30個核苷酸，更優選21-23個核苷酸。siRNA被認為可招募核酶複合體，通過配對到特異性序列上引導複合體結合靶mRNA。結果，靶mRNA被蛋白複合體內的核酶降解。在一個具體實施方式中，siRNA分子包含3'羥基基團。在某些實施方式中，siRNA是由較長的雙鏈RNA經過處理而生成的，例如，在存在酶切割件(dicer)的情況下。或者，RNAi可以是發卡結構的形式，稱為發卡RNA或shRNA。發卡RNA可外源合成，也可以在體內由RNA聚合酶III啟動子控制轉錄形成。優選的是，在細胞或動物內利用基因工程技術表達這種發卡RNA以確保持續而穩定地抑制所需基因。在細胞內通過處理髮卡RNA生成siRNA的方法是本領域熟知的。本發明的RNAi分子可包含對磷酸-糖骨架或核苷的修飾，例如，以降低對細胞內核酶的敏感性、提高生物利用度、改善製劑的特性和/或改變其他藥代動力學特徵。在某些例子中，RNAi分子至少有一條鏈包含約1-6個核苷酸長的3'懸突，例如2到4個核苷酸長。更優選的是，3'懸突為l-3個核苷酸長。在某些實施方式中，一條鏈有3，懸突，而另一條鏈或者是平端的，或者也包含懸突。兩條鏈懸突的長度可以相同也可以不同。為了進一步提高RNAi分子的穩定性，可以使3，懸突穩定化以對抗降解。在一個實施方式中，通過加入嘌呤核苷酸如腺嘌呤或鳥嘌呤核苷酸使RNA穩定化。或者，用修飾的類似物取代嘧啶核苷酸，例如，用2'-脫氧胸腺嘧啶核苷取代尿嘧啶核苷3'懸突是可以被耐受的而不會影響RNAi的活性。有關設計siRNA物質的其他細節可參見，例如，Elbashir等，2001(Nature411:494-501)。在一個優選實施方式中，本發明涉及RNA序列在製備本文所定義的RNAi分子，優選siRNA分子中的用途。所述的siRNA分子符合下列標準中的一個或多個，優選符合全部標準-與靶mRNA，優選NKAa-l或a-3亞單位的mRNA，具有至少50%的序列一致性，優選至少70%的序列一致性，更優選至少80%的序列一致性，更優選至少90%的序列一致性；-包含能耙向到靶基因的外顯子區的序列；-優先耙向到靶基因的3'末端而不是靶向到靶基因的5'末端。在另一優選實施方式中，siRNA分子還可以符合如下標準中的一個或多個-核酸長度在15到25個核苷酸之間，優選18到22個核苷酸，優選19個核苷酸；-所包含的GC含量在30%到50%之間；-其3'末端是TT(T)序列；-當採用雙螺旋形式時無二級結構；-Tm(解鏈溫度)低於2(rC;-核苷酸序列中包含表2所示的核苷酸，其中h是a、c、t/u，但不是g,d是a、g、t/u但不是c，w是a或t/u但不是g或c:表2tableseeoriginaldocumentpage39上述核酸試劑，包括反義試劑、核酶和RNAi分子的製備可通過化學合成方法或重組核酸技術完成，例如，在細胞內由載體如病毒載體、真核細胞表達載體、基因治療表達載體(g卩，體內)等表達，或者通過酶催化合成，例如在體外通過用T7或SP6RNA聚合酶從DNA模板轉錄。核酸分子可通過酶催化或通過部分/全部有機合成來製備。通過體外酶催化或有機合成可以引入任何經修飾的核糖核苷酸。上述所有核酸試劑，包括反義試劑、核酶和RNAi分子，都可以利用本領域技術人員熟知的多種技術純化。例如，凝膠電泳可用於純化核酸試劑。或者，非變性方法如非變性柱層析可用於純化分子。另外，層析(例如，分子排阻層析)、甘油梯度離心、抗體親和純化可用於純化分子。現在已經有好幾種大家所熟知的將(核糖)核酸(例如，反義核酸、核酶或RNAi)導入動物細胞內的方法，其中任何一種方法都可用於本發明中，具體選擇何種方法要根據宿主而定。將核酸直接注射到靶細胞/靶組織內是最簡單的方法。其他方法包括受體細胞與包含核酸的細菌原生質體融合，利用組合物如氯化鈣、氯化銣、氯化鋰、磷酸鈣、DEAE葡聚糖、陽離子脂質或脂質體，或者諸如受體介導的胞吞作用、生物射彈(biolistic)粒子轟擊("基因槍"方法)、用病毒載體感染、電穿孔等方法。適於將(核糖)核酸分子遞送到靶細胞的其他技術或方法包括從乳酸-乙醇酸共聚物微球中持續釋放本文所定義的這種分子，或者將被保護的(穩定化的)分子直接注射到微泵內，微泵將產品遞送到手術切除腫瘤後在手術部位殘存的腫瘤細胞內，例如，神經外科手術切除腫瘤後留下的空洞內，腦實質依然存在腫瘤細胞，以及以前有關使用其他抗遷移化合物的詳細描述(Lefmnc等，2003。Neurosurgery52:881-891)。也可以利用對流增強遞送方法來遞送本文所述的穩定化的RNAi分子，如Kawakami等，2004(JNeurosurg101:1004-1011)所述。另一種可能是利用可植入的生物可降解的藥物釋放微球，如Menei和Benoit2003(ActaNeurochir88:51-55)最近所描述的那些。應當清楚，上述不同遞送模式或方法的組合也可以使用。一種優選方法是利用奧馬耶(Ommaya)貯器(微泵)遞送本發明的RNAi分子，或者利用生物可降解的微球包裹核酸，如RNAi分子，或者同時利用兩種方法。利用核酸如反義核酸、核酶或RNAi技術來完成體內基因靜默遇到的主要障礙是遞送。為了提高熱穩定性、增強對核酸酶消化的耐受以及提高細胞對這種工具的攝取，目前有多種方法可以利用，這些都是技術人員所熟知的。其中包括，例如-化學修飾如鎖核酸(LNA)、膦酸酯取代、硫代磷酸酯取代、二硫代磷酸酯取代、嗎啉代寡聚物、2，-氟取代、2，-0-甲基取代、穩定化的隱性TMRNAi(英傑公司傳。-包裹到各種類型的脂質體(免疫脂質體，PEG化的(免疫)脂質體)、陽離子脂質和聚合物、納米粒子或樹突狀大分子(dendrimers)、乳酸-乙醇酸共聚物微球、可植入的生物可降解的藥物釋放微球等中；-與保護劑如核酸酶抑制劑金精三羧酸共注射。增殖性失調本發明涉及用於增殖性失調治療的方法和物質。"增殖性疾病或失調"是指所有惡性和良性的腫瘤性細胞增殖和增殖，其中包括所有的轉化細胞和組織以及癌細胞和癌組織。增殖性疾病或失調包括而不限於惡變前損傷和癌前病變、異常細胞增殖、良性腫瘤、惡性腫瘤和"癌症"。增殖性疾病和/或失調其他例子包括而不限於位於如下部位的良性或惡性腫瘤前列腺、結腸、腹部、骨、乳腺、消化系統、肝臟、胰腺、腹膜、內分泌腺體(腎上腺、甲狀旁腺、垂體、睪丸、卵巢、胸腺、甲狀腺)、眼睛、頭頸部、神經(中樞和外周)、淋巴系統、骨盆、皮膚、軟組織、脾、胸和泌尿生殖道。在一個優選實施方式中，增殖性失調包括腫瘤。在本文中，術語"腫瘤"或"腫瘤組織"是指細胞過度分裂導致的異常組織腫塊。腫瘤或腫瘤組織包含"腫瘤細胞"，腫瘤細胞是具有異常生長特徵並且無有用軀體功能的贅生細胞。腫瘤、腫瘤組織和腫瘤細胞可以是良性的，也可以是惡性的。腫瘤或腫瘤組織還可包含"腫瘤相關的非腫瘤細胞"，例如，形成血管為腫瘤或腫瘤組織供血的血管細胞。非腫瘤細胞可以被腫瘤細胞誘導和發育，例如，在腫瘤或腫瘤組織內誘導血管形成。在另一優選實施方式中，增殖性失調包括惡性腫瘤或癌症。在本文中，術語"惡性腫瘤"是指非良性腫瘤或癌症。在本文中，術語"癌症"是指一種類型的增殖性疾病，其中包括以失調的或不可控的細胞增殖為特徵的惡性腫瘤。癌症的例子包括而不限於癌、淋巴瘤、母細胞瘤、肉瘤和白血病或淋巴系統惡性腫瘤。這種癌症的更具體例子收錄如下，其中包括鱗狀細胞癌(如上皮鱗狀細胞癌)、肺癌包括小細胞肺癌、非小細胞肺癌、肺腺癌、肺鱗狀細胞癌和肺大細胞癌、腹膜癌、肝細胞癌、胃癌包括胃腸道癌、胰腺癌、膠質母細胞瘤、子宮頸癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝細胞瘤、乳腺癌、結腸癌、直腸癌、結腸癌、子宮內膜癌或子宮癌、唾液甲狀腺癌、腎癌、前列腺癌、外陰腫瘤、甲狀腺癌、肝癌、肛門癌、陰莖癌、以及頭頸癌。術語"癌症"包括原發惡性細胞或腫瘤(例如，細胞未遷移到對象體內原發惡性腫瘤部位之外的位置的那些腫瘤)和繼發惡性細胞或腫瘤(由於轉移、惡性細胞或腫瘤細胞遷移到原發腫瘤所處位置之外的第二部位而形成的那些腫瘤)。癌症或惡性腫瘤的其他例子包括而不限於兒童急性淋巴母細胞白血病、急性成淋巴細胞性白血病、急性淋巴細胞白血病、急性髓性白血病、腎上腺皮質癌、成人(原發)肝細胞癌、成人(原發)肝癌、成人急性淋巴細胞白血病、成人急性髓細胞白血病、成人霍奇金病、成人霍奇金淋巴瘤、成人淋巴細胞白血病、成人非霍奇金淋巴瘤、成人原發性肝癌、成人軟組織肉瘤、愛滋病相關淋巴瘤、愛滋病相關惡性腫瘤、肛門癌、星形細胞瘤、膽管癌、膀胱癌、骨癌、腦幹膠質瘤、腦腫瘤、乳腺癌、癌腎盂和尿道癌、中樞神經系統(原發)淋巴瘤、中樞神經系統淋巴瘤、小腦星形細胞瘤、腦星形細胞瘤、子宮頸癌、兒童(原發)肝細胞癌、兒童(原發)肝癌、兒童急性成淋巴細胞白血病、兒童急性髓細胞白血病、兒童腦幹膠質瘤、膠質母細胞瘤、兒童小腦星形細胞瘤、兒童腦星形細胞瘤、兒童顱外生殖細胞腫瘤、小兒霍奇金病、兒童霍奇金淋巴瘤、兒童下丘腦和視覺通路膠質瘤、兒童成淋巴細胞白血病、兒童髓母細胞瘤、兒童非霍奇金淋巴瘤、兒童松果體和幕上原發神經外胚層腫瘤、小兒原發性肝癌、兒童橫紋肌肉瘤、兒童軟組織肉瘤、兒童視覺通路和下丘腦膠質瘤、慢性淋巴細胞白血病、慢性粒細胞性白血病、結腸癌、皮膚T細胞淋巴瘤、內分泌胰島細胞癌、子宮內膜癌、室管膜瘤、上皮癌、食道癌、尤文氏肉瘤及相關腫瘤、外分泌胰腺癌、顱外生殖細胞瘤、性腺外生殖細胞瘤、肝外膽管腫瘤、眼癌、女性乳腺癌、高雪氏病、膽囊癌、胃癌、消化道類癌腫瘤、胃腸腫瘤、生殖細胞腫瘤、妊娠滋養細胞腫瘤、毛細胞白血病、頭頸癌、肝細胞癌、霍奇金病、霍奇金淋巴瘤、高丙種球蛋白血症、下咽癌、腸道癌、眼內黑色素瘤、胰島細胞癌、胰島細胞胰腺癌、卡波西氏肉瘤、腎癌、喉癌、唇和口腔癌、肝癌、肺癌、淋巴增殖性疾病、巨球蛋白血症、男性乳腺癌、惡性胸膜間皮瘤、惡性胸腺瘤、髓母細胞瘤、黑色素瘤、間皮瘤、轉移隱匿原發性鱗狀頸部癌、轉移性原發頸部鱗癌、轉移性頸部鱗癌、多發性骨髓瘤、多發性骨髓瘤/漿細胞瘤、骨髓增殖異常症候群、粒細胞性白血病、骨髓性白血病、骨髓增殖異常紊亂、鼻腔鼻竇癌、鼻咽癌、神經母細胞瘤、懷孕期間的非霍奇金淋巴瘤、非黑色素瘤、皮膚癌、非小細胞肺癌、原發隱匿轉移性頸部鱗癌、口咽癌、骨V惡性纖維肉瘤、骨肉瘤/骨惡性纖維組織細胞瘤、骨肉瘤/惡性纖維組織細胞瘤骨、卵巢上皮癌、卵巢生殖細胞瘤、卵巢癌低度潛在惡性腫瘤、胰腺癌、副蛋白血症、紫癜、甲狀腺癌、陰莖癌、嗜鉻細胞瘤、垂體瘤、漿細胞腫瘤/多發性骨髓瘤、原發性中樞神經系統淋巴瘤、原發性肝癌、前列腺癌、直腸癌、腎細胞癌、腎盂尿道癌、視網膜母細胞瘤、橫紋肌肉瘤、涎腺癌、結節病肉瘤、賽塞利(Sezary)症候群、皮膚癌、小細胞肺癌、小腸癌、軟組織肉瘤、頸部鱗癌、胃癌、幕上原發神經外胚層和松果體腫瘤、T細胞淋巴瘤、睪丸癌、胸腺瘤、甲狀腺癌、腎盂和尿道移行細胞癌、移行腎盂和尿道癌、滋養細胞腫瘤、尿道及腎盂細胞癌、尿道癌、子宮癌、子宮肉瘤、陰道癌、視覺通路和下丘腦膠質瘤、外陰癌、沃爾登斯特倫巨球蛋白血症、威爾曼瘤/以及位於上述器官系統內的腫瘤之外的其他增殖性疾病。在另一實施方式中，增殖性失調是指惡變前狀態。惡變前狀態是已知或懷疑能進一步發展成瘤或癌的狀態，具體說，已發生非瘤性細胞生長，包括增生、化生，或者最具體發育不良(這種異常生長狀態的綜述可參見Robbins和Angell1976(《基礎病理學》(BasicPathology),第二版，W.B.SaundersCo.，費城，第68-79頁)。"增生"是一種受控的細胞增殖形態，包括組織或器官內細胞數目的增加，但是其結構或功能沒有明顯改變。可利用本發明的方法治療的增生性失調包括而不限於血管濾泡縱隔淋巴結增生、血管淋巴樣增生伴嗜酸細胞增多症、不典型黑素細胞增生、基底細胞增生、良性巨大淋巴結增生、牙骨質增生、先天性腎上腺增生、先天性皮脂腺增生、囊性增生、囊性乳腺增生、義齒增生、導管增生、子宮內膜增生、纖維肌性增生、局灶性上皮增生、牙齦增生、炎性纖維增生、炎症性乳頭狀增生、血管內乳頭狀內皮細胞增生、前列腺的結節性增生、結節性再生性增生、假性上皮瘤增生、老年性皮脂腺增生、以及疣狀增生。"化生"是一種受控的細胞增生狀態，其中一種類型的成熟或完全分化的細胞取代另一種類型的成熟細胞。可利用本發明的方法治療的化生性失調包括而不限於原因不明性髓樣化生、頂漿分泌腺化生、不典型化生、自身實質組織化生、結締組織化生、上皮化生、腸化生、化生貧血、化生性骨化、化生性息肉、髓樣化生、原發性骨髓化生、繼發性髓樣化生、鱗狀上皮化生、羊膜的鱗狀上皮化生和有症狀的髓樣化生。"發育不良"通常是癌症的前兆，主要存在於上皮組織；它是非腫瘤性細胞生長的一種最無序的形態，包括單個細胞均一性和細胞結構定向的喪失。發育不良的細胞通常異常巨大，細胞核深染，並且呈多形性。當存在慢性刺激或炎症時通常會發生發育不良。可利用本發明的方法治療的發育不良失調包括而不限於無汗性外胚層發育不良、前頜面發育不良、窒息性胸廓發育不良、心-指發育不良、肺支氣管發育不良、腦發育異常、宮頸發育不良、軟骨外胚層發育不良、鎖骨顱骨發育不良、先天性外胚層發育不良、顱骨骨幹發育不良、顱腕蹠骨發育不良、顱幹骨後端發育不良、牙本質發育不良、骨幹發育不良、外胚層發育不良、釉質發育不良、腦性眼球發育不良、偏側骨骺發育不良、多發性骨骺發育不良、多發性骨骺發育不良、上皮發育不良、面-指(趾)-生殖器發育不良、家族頜骨骨纖維異常增殖症、家族性白色摺疊發育不良、纖維肌性發育不良、骨纖維發育不良、旺盛骨性發育不良、遺傳性腎臟視網膜發育不良、有汗性外胚層發育不良、少汗性外胚層發育不良、淋巴性胸腺發育不良、乳腺發育不良、下頜面發育不良、幹骨後端發育不良、蒙迪尼發育不良、單骨纖維發育不良、黏膜上皮發育不良、多骨骺發育不良、眼耳脊椎發育不良、眼齒指發育不良、眼椎骨發育不良、牙發育不良、眼下頜支發育不良、根尖周牙骨質發育不良、多骨纖維發育不良、假性軟骨脊椎骨骺發育不良、視網膜發育不良、透明隔4見神經發育不良、脊椎骨骺發育不良、以及室徑向發育不良。其他腫瘤前失調包括而不限於良性異常增殖性失調(例如，良性腫瘤、纖維囊性疾病、組織肥厚、腸息肉、結腸息肉和食管發育不良)、白斑、角化病、鮑恩病、農民皮膚(Farmer，sSkin)、日光性唇炎和日光性角化病。在優選實施方式中，增殖性失調選自膠質瘤，優選膠質母細胞瘤；前列腺癌；非小細胞肺癌(NSCLC);或結腸癌。本發明的發明者認識到上述類型的癌可從本發明的方法和物質中特別獲益。在本文中，術語"膠質瘤"是指其所屬領域認可的含義。作為進一步闡述而不是限制，術語"膠質瘤"是指起源於腦或脊髓的神經膠質的腫瘤。膠質瘤可能來源於神經膠質細胞，例如，星形膠質細胞和少突膠質細胞，因而膠質瘤包括星形細胞瘤和少突神經膠質瘤、以及變性膠質瘤、膠質母細胞瘤和室管膜瘤。星形膠質細胞瘤和室管膜瘤可發於兒童和成人的腦和脊髓的所有部位。少突神經膠質瘤一般發生在成人的大腦半球。惡性星形膠質瘤的預後最差，因為它能彌散性地侵潤到正常腦實質，包括世界衛生組織(WHO)定義的n、m和iv級腫瘤。在本文中，術語"膠質母細胞瘤"是指其所屬領域認可的含義。作為進一步闡述而不是限制，膠質母細胞瘤也被稱為"多形性膠質母細胞瘤"(GBM)或者"4級星形細胞瘤"，或許是最常見的和惡性度最高的惡性原發腦腫瘤。在本文中，術語"前列腺癌"是指其所屬領域認可的含義。作為進一步闡述而不是限制，術語"前列腺癌"既指可觸及的前列腺腫瘤的表象，又指前列腺內通過顯微鏡可檢測到的瘤性細胞或轉化細胞。對於後者而言，所述的細胞學可檢測的前列腺癌可以是無症狀的，患者和醫生都未檢測到癌細胞的存在。癌細胞通常見於七八十歲男性的前列腺內，但是並不是所有的這些人都會發展成前列腺癌。當前列腺癌轉移到遠離前列腺的其他部位時，這種狀態被描述為轉移癌(MC)，以區別於局限在前列腺內的前列腺癌。前列腺癌引起的死亡通常是由於前列腺腺癌細胞轉移分散到遠端部位導致的，通常是轉移到中軸骨骼。術語"非小細胞肺癌"(NSCLC)是指其所屬領域認可的含義。作為舉例而不是限制，術該術語包括其任何亞型，即肺腺癌、肺鱗狀細胞癌和大細胞肺癌。術語"結腸癌"是指其所屬領域認可的含義。作為進一步闡述而不是限制，術語"結腸癌，，是指起源於任意組織學類型的大腸(包括結腸和直腸)的癌症，其中包括而不限於惡性上皮腫瘤。因此，在本文中，術語結腸癌包括結腸直腸癌。大腸的惡性上皮腫瘤可分為五種主要的組織學類型腺癌、黏膜腺癌(也被稱為膠樣腺癌)、環狀體腺癌、硬癌和單純癌。利用本領域熟知的幾種分類系統中的任何一種都可以對結腸癌分期。Dukes系統是一種最常用的分期系統。參見Dukes和Bussey1958(BrJCancer12:309)。在另一優選實施方式中，增殖性失調是一種過度表達NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位的疾病。"過度表達"NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位的增殖性失調，例如，癌症或上述任何疾病，是一種每個完整腫塊和/或在單個細胞水平所表達的所述亞單位都明顯高於相同組織類型的健康細胞如非癌性細胞的疾病。通過測定患者樣品如腫瘤活檢樣品內的亞單位多肽和/或編碼這種多肽的核酸的水平可以診斷出所述亞單位是否過度表達。進行這種檢測的常用技術是本領域熟知的，其中包括而不限於IHC、FISH、DNA印跡、PCR、蛋白質印跡、ELISA、RIA、免疫沉澱等。該術語包含任何程度的過度表達，例如，以整個腫塊和/或在單細胞水平為基準計，過度表達至少約10%，例如至少約20%，優選至少約30%，例如至少約40%，更優選至少約50%，例如至少約60%，更優選至少約70%，例如至少約80%,更優選至少約90%，例如至少約100%甚至更高，例如至少約150%、至少約200%、至少約250%、至少約300%、至少約400%或者甚至至少約500%。在另一個優選實施方式中，過度表達NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位的增殖性失調選自膠質瘤，優選膠質母細胞瘤；前列腺癌；非小細胞肺癌(NSCLC);或結腸癌。本發明的發明者認識到這些類型的癌症通常過度表達NKA的a-l亞單位和/或a-3亞單位。在另一個優選實施方式中，過度表達NKAa-l亞單位的增殖性失調是非小細胞肺癌。本發明的發明者認識到這種類型的癌症通常過度表達NKA的a-l亞單位。治療本發明還涉及治療需要這種治療的對象體內的增殖性失調，包括給予治療有效量的一種或多種本發明的上述物質。除了特別註明的以外，"對象"或"患者"可互換使用，是指動物，優選脊椎動物，更優選哺乳動物，具體包括人患者和非人哺乳動物。"哺乳動物"對象包括而不限於人、家畜、農場動物、動物園的動物、運動動物、寵物和實驗動物、如狗、貓、豚鼠、兔、小鼠、馬、牛、奶牛；靈長類動物，如猩猩；猴；紅毛猩猩和黑猩猩；犬科動物如狗和狼；貓科動物如貓、獅、虎；馬科動物如馬、驢和斑馬；肉食動物如牛、豬和羊；有蹄類動物，如鹿和長頸鹿；嚙齒類動物如小鼠、大鼠、倉鼠和豚鼠等。相應地，在本文中，"對象"或"患者"是指給予本發明的組合物的任何哺乳動物患者或對象。優選的患者是人對象。術語"治療"既指治療性治療，又指預防性措施，其目標是阻止或減緩(減輕)不良的生理變化或失調，例如增殖性疾病如癌症的惡化或擴散。有益的或理想的臨床結果包括而不限於症狀的緩和、病變範圍縮小、病情穩定(即，不再惡化)、疾病惡化的延遲或減緩、病情改善或減輕以及可檢測的或不可檢測的緩和(部分或整體)。"治療"還意味著與不接受治療時的預期存活期相比存活期的延長。在本文中，術語如"需要治療的對象"包括會因給定疾病的治療而獲益的對象，例如哺乳動物對象，所述疾病優選增殖性疾病，例如，癌症，如上述癌症。這種對象一般包括而不限於已確診患有疾病，優選增殖性疾病如癌症的那些對象，易患所述疾病的那些對象和/或需要防止所述疾病的那些對象。術語"治療有效量"是指能有效治療對象體內的疾病或失調的治療性物質或組合物的量，即，獲得理想的局部或系統性療效和表現。例如而不限於，對於增殖性疾病如癌症來說，治療有效量的藥物可以降低癌細胞的數目；縮小腫瘤的尺寸；抑制(即一定程度的減緩，優選終止)癌細胞侵潤到周圍器官；抑制(即一定程度的減緩，優選終止)腫瘤轉移；一定程度的腫瘤生長抑制；增強其他癌症治療措施的療效；和/或一定程度地減緩一種或多種癌症相關症狀。如果藥物能一定程度地阻止癌細胞的生長和/或殺死現存的癌細胞，那麼該藥物就是細胞生長抑制的和/或細胞毒性的。對於癌症治療來說，療效可通過評估疾病惡化時間(TTP)和/或確定應答率(RR)來測定。本發明的物質可單獨使用，或者與選自以下的任何癌症治療措施聯合使用化療、放療、免疫治療和/或基因治療。在本文中，術語"癌症治療"意味著包括放療、化療、免疫治療、基因治療、手術及其組合。在另一個優選實施方式中，本發明的物質可單獨使用，或者與適於治療癌症的一種或多種活性化合物組合使用，所述癌症優選膠質瘤，優選膠質母細胞瘤；前列腺癌；NSCLC;或結腸癌。術語"活性化合物"是指可用於治療癌症的本發明的物質之外的化合物。活性化合物優選選自放療藥物、化療藥物、免疫治療和/或基因治療，化療和放療藥物包括而不限於替莫唑胺、長春新鹼、長春瑞濱、苄肼、卡莫司汀、洛莫司汀、紫杉醇、泰索帝、他莫昔芬、維甲酸、氟尿嘧啶、環磷醯胺和沙利度胺，免疫治療的例子包括而不限於活化的T細胞和脈衝的樹突狀細胞，基因治療方法包括將CD3、CD7和CD45的基因轉移到膠質瘤細胞內，同時遞送本發明的物質。因此，本發明的物質可單獨使用，或者與一種或多種活性化合物組合使用。後者可在給予所述物質之前、之後或同時給予。藥用製劑本發明的另一目的是藥物製劑，其包含治療有效量的本文所述的本發明物質或其藥學上可接受的鹽，和藥學上可接受的載體，即一種或多種藥學上可接受的載體物質和/或添加劑如緩衝劑、載體、賦形劑、穩定劑等。在本文中，術語"藥學上可接受的"與本領域的含義一致，是指與藥物組合物的其他組分相容且對其受者無害。在本文中，術語"藥學上可接受的鹽"是指無機酸加成鹽，例如鹽酸鹽、硫酸鹽和磷酸鹽，或有機酸加成鹽，例如乙酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、酒石酸鹽和擰檬酸鹽。藥學上可接受的金屬鹽的例子有鹼金屬鹽如鈉鹽和鉀鹽，鹼土金屬鹽如鎂鹽和轉鹽，鋁鹽，以及鋅鹽。藥學上可接受的銨鹽的例子有銨鹽和四甲銨鹽。藥學上可接受的有機胺加成鹽的例子有含嗎啉和哌啶的鹽。藥學上可接受的胺基酸加成鹽的例子有含賴氨酸、甘氨酸和苯丙氨酸的鹽。本發明的藥物組合物還可以包含至少一種上述活性化合物。本發明的藥物組合物可通過口服給藥，例如，以丸劑、片劑、塗漆片、糖衣片、顆粒、硬膠囊和軟膠囊、水溶液、醇溶液或油溶液、糖漿劑、乳劑或混懸劑的形式，或者通過直腸給藥，例如，以栓劑的形式給藥。也可以通過胃腸外途徑給藥，例如，以注射液或大輸液的形式通過皮下、肌內或靜脈注射。其他合適的給藥形式有，例如，經皮給藥或局部給藥，例如，以軟膏、酊劑、噴霧劑或透皮治療系統的形式，或者以鼻腔噴霧或氣溶膠混合物的形式吸入給藥，或者，例如微膠囊、植埋劑或小杆(rods)。藥物組合物的製備可以本領域熟知的方式完成。為達此目的，核酸和/或活性化合物與一種或多種固體或液體藥用載體物質和/或添加劑(或輔料)以及如果需要，加上其他具有治療或預防作用的藥學活性化合物一起製成合適的給藥形式或劑型，然後可作為藥物用於人的醫療。為了製備丸劑、片劑、糖衣片和硬膠囊，可能會使用例如，乳糖、澱粉如玉米澱粉或澱粉衍生物、滑石粉、硬脂酸或其鹽等。軟膠囊和栓劑使用的載體包括例如，脂肪、蠟類、半固體或液體多元醇、天然油或硬化油等。用於製備溶液如注射液、乳劑或糖漿劑的合適載體包括例如，水、生理鹽水、醇如乙醇、甘油、多元醇、蔗糖、轉化糖、葡萄糖、甘露醇、植物油等。也可冷凍乾燥核酸和/或活性化合物，利用得到的凍乾物製備用於注射或輸注的製劑。微膠囊、植埋劑或小杆的合適載體有，例如，乙醇酸和乳酸的共聚物。藥用製劑還可以包含添加劑，例如，填充劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、溼潤劑、穩定劑、乳化劑、分散劑、防腐劑、甜味劑、著色劑、調味劑、芳香劑、增稠劑、稀釋劑、緩衝物質、溶劑、增溶劑、用於達到儲存效果的物質、用於改變滲透壓的鹽、包衣劑或抗氧化劑。優選的是，本發明的組合物可溶於包含或不包含P環糊精和/或類似化合物的GLP/GMP溶劑中給藥。任選與一種或多種活性化合物一同給藥的本發明的物質的劑型或劑量依據不同情況而定，習慣而言，取決於個體的狀況以達到最佳療效。因此，選擇使用的劑型或劑量要依據被治療疾病的性質和嚴重程度，也要依據被治療的人或動物的性別、年齡、體重和個體反應性，所使用化合物的效果和作用持續時間，治療是急性的或慢性的或者是預防性的，或者除了本發明的物質之外是否還給予了其他活性化合物。作為非限定性的例子，根據疾病的類型和嚴重程度，典型的每日劑量約為1嗎/kg到100mg/kg或更多，具體劑量要根據上述因素確定。對於在數天或更長時間內的重複給藥來說，根據疾病的狀況，治療可持續到疾病的症狀被抑制到理想的程度為止。優選的藥物劑量範圍為約0.05mg/kg到10mg/kg。因此，可以給予患者一次或多次約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任意組合)的劑量。這種給藥劑量可間歇執行，例如每周一次或每三周一次。在可以使用時，例如，當物質是多肽、肽、抗體、反義物質、核酶或siRNA物質時，本發明還包括利用本領域熟知的有效技術通過基因治療給予上述物質。例如，本發明的物質可遞送到腫瘤部位，例如原發腫瘤和/或轉移灶。一種實現局部遞送的方式是利用本文其他地方所描述的奧馬耶貯器。在另一實施方式中，本發明提供了包含本發明的藥物組合物以及本文所述的活性化合物的試劑盒，其中的藥物組合物和活性化合物可同時、單獨或先後給予有需要的對象。篩選實驗在一個方面，本發明提供了從一組待測物質中篩選候選物質的實驗，其中的候選物質可作為治療藥物用於增殖性疾病的治療，所述的實驗包括確定待測物質是否能夠(a)減少鈉-鉀ATP酶a-l亞單位的表達，或者(b)結合鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位，和/或待測物質是否能夠(c)減少鈉-鉀ATP酶a-3亞單位的表達，或者(d)結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位。篩選實驗中優選類型的待測物質是上文所述的物質，其中包括反義物質，例如，反義寡核苷酸、核酶、具有導致RNA幹擾潛力的物質；多肽或蛋白質；抗體；肽，擬肽素，適體，化學物質(優選有機分子，更優選小分子有機分子)，脂質，糖類，核酸等。所述待測物質的某些類型，例如化學化合物、肽、糖類等，可得自合成的、組合的或天然的產物文庫。其他待測物質可根據其靶位信息進行設計。在一個實施方式中，實驗(藥物篩選實驗或生物實驗)包括評價待測物質與NKAa-l亞單位和/或(x-3亞單位、其變體、其片段或其功能性/或免疫活性衍生物的結合能力的步驟，其中變體優選其功能性的和/或免疫活性的變體，片段優選其功能性和/或免疫活性片段。在本文中，術語NKAa-l亞單位或a-3亞單位的"變體"是指其胺基酸序列與NKA(x-l或a-3亞單位的各自天然序列基本一致(S卩，大部分但不是全部一致)的多肽。"基本一致"是指至少85%是一致的，例如，優選至少90%—致，例如至少91%—致、92%—致，更優選至少93%—致，例如94%一致，更優選至少95%—致，例如至少96%—致，更優選至少97%—致，例如至少98%—致，以及最優選至少99%—致。兩個多肽之間的序列一致性可通過使多肽的胺基酸序列最佳排列在一起(兩個蛋白序列達到最佳排列是指引入的間隙補償很少而能得到最高配對得分的排列；優選利用電腦程式化的算法來完成，如"間隙(Gap)"，利用Needleman和Wunsch1970(JMolBiol48:443-453)的算法，或"最佳擬合(Bestfit)"，利用Smkh和Waterman1981(JMolBiol147:195-197)的算法，如Accelrys的GCGTMv.11丄2軟體包中的算法)，一方面計分排列中多肽包含相同胺基酸殘基的位置的數目，另一方面計分排列中兩個多肽序列不同的位置的數目。在排列的給定位置上兩個多肽的序列不同是指多肽在該位置上包含不同的胺基酸殘基(胺基酸取代)，或者一個多肽在該位置上是一種胺基酸殘基而另一個多肽不含該胺基酸殘基，反之亦然(胺基酸插入或缺失)。序列一致性計算為排列中多肽包含相同胺基酸殘基的位置佔排列中位置總數的比例(百分比)。用於執行序列排列和確定序列一致性的其他合適算法包括基於鹼基局部比對搜索工具(BLAST)(BasicLocalAlignmentSearchTool)的那些算法，BLAST是由Altschul等，19卯(JMolBiol215:403-10)首先描述的，如Tatusova和Madden1999(FEMSMicrobiolLett174:247-250)描述的"Blast2序列，，算法。變體和天然a-1或a-3亞單位的胺基酸序列之間的至少一些差異包括胺基酸取代，其中變體與天然序列基本一致。所述差異中優選至少有85%，例如至少卯％，更優選至少95%，例如100%是胺基酸取代，優選保守胺基酸取代。術語"保守取代"用於本文中是指一個胺基酸殘基被另一個生物學上類似的胺基酸殘基取代。保守取代的非限定性例子包括一個疏水性胺基酸如異亮氨酸、纈氨酸、亮氨酸或蛋氨酸被另一個疏水性胺基酸取代，或者一個極性殘基被另一個極性殘基取代，例如精氨酸和賴氨酸之間、穀氨酸和天冬氨酸之間或者穀氨醯胺和天冬醯胺之間的取代等。在本文中，術語NKAa-l亞單位或a-3亞單位的"變體"還特別包括與NKAa-l或a-3亞單位分別有某種程度的相似性的多肽。優選的是，這種變體至少90%是相似的，例如，優選至少91%相似，例如至少92%相似、93%相似，更優選至少94%相似，例如95%相似，更優選至少96%相似，例如至少97%相似，更優選至少98%相似，例如至少99%相似。兩個多肽之間的序列相似性可通過使多肽的胺基酸序列最佳排列在一起(見上)，一方面計分排列中多肽包含相同或相似(即，保守取代的)胺基酸殘基的位置的數目，另一方面計分排列中兩個多肽序列不同的位置的數目。在排列的給定位置上兩個多肽的序列不同是指多肽在該位置上包含非保守胺基酸殘基，或者一個多肽在該位置上是一種胺基酸殘基而另一個多肽不含該胺基酸殘基，反之亦然(胺基酸插入或缺失)。序列相似性計算為排列中多肽包含相同或相似胺基酸殘基的位置佔排列中位置總數的比例(百分比)。在本文中，術語NKAa-l亞單位或a-3亞單位的"功能性變體"是指上面所定義的至少部分保留了其鈉-鉀ATP酶的功能的變體。例如，包含一個或兩個這種突變a-l亞單位或突變a-3亞單位的鈉-鉀ATP酶保留了其酶活性的20%，例如，至少30%或40%，優選至少50%，例如，至少60%，更優選至少70%，更優選至少80%，最優選至少90%，例如，至少95%，酶活性是利用本領域的標準方法測定的。在本文中，術語NKAa-l亞單位或a-3亞單位的"片段"是指與NKAa-l亞單位或NKAa-3亞單位或其變體(優選功能性變體)相比有一個或多個N端和/或C端胺基酸殘基缺失的多肽，但是剩餘片段的一級序列與NKAot-l亞單位或NKAa-3亞單位或其各自變體(優選功能性變體)的胺基酸序列上的相應位置一致。例如，a-l亞單位或a-3亞單位或其變體(優選功能性的)的片段可分別包含所述a-l亞單位或a-3亞單位或其變體(優選功能性的)的25個連續胺基酸，優選210個連續胺基酸，更優選^20個連續胺基酸，更優選230個連續胺基酸，例如，240個連續胺基酸，以及最優選250個連續胺基酸，例如，$60、270、$80、290、2100、2200或^500連續胺基酸。a-l亞單位或a-3亞單位或其變體(優選功能性的)的片段還可分別包含所述a-l亞單位或a-3亞單位或其變體(優選功能性的)的胺基酸序列的至少80%,例如，至少85%，優選至少90%，更優選至少95%、甚至99%。在本文中，術語NKAa-l亞單位或a-3亞單位的"功能性片段"是指上面所定義的至少部分保留了其鈉-鉀ATP酶的功能的片段。例如，包含一個或兩個這種a-l亞單位片段或a-3亞單位片段的鈉-鉀ATP酶保留了其酶活性的20%，例如，至少30%或40%,優選至少50%，例如，至少60%，更優選至少70%，更優選至少80%，最優選至少90%，例如，至少95%，酶活性是利用本領域的標準方法測定的。一般而言，實施方式包括(a)混合(l)NKA的a-l亞單位或a-3亞單位或其變體、片段或衍生物(優選功能性的和/或免疫活性的)和(2)待測物質，例如，在允許多肽(1)和待測物質(2)結合形成複合物的條件下，以及(b)檢測複合物的形成，由複合物中待測物質的存在水平指出待測物質(2)與多肽(l)相互作用的能力。所述複合物的形成可利用(例如)標準免疫分析方法定量檢測。實施方式還可以包含所述待測物質的分離和/或鑑定。用於該實驗的NKAa-l亞單位或a-3亞單位、其變體、片段或衍生物(優選功能性的和/或免疫活性的)可游離在溶液中，固定到固相支持物上，在細胞表面生成，或胞內定位。該方法可使用天然表達a-l或a-3亞單位，或者瞬時或穩定轉化表達所述亞單位或其變體、片段或衍生物的重組核酸的原核或真核宿主細胞。本發明還涉及競爭性篩選實驗，其中能結合NKAa-l亞單位或a-3亞單位、其變體、片段或衍生物(優選功能性的和/或免疫活性的)的中和抗體或化合物(例如，烏本苷，地高辛)與能結合所述亞單位的待測物質競爭。具體地說，本發明涉及競爭性篩選實驗，該實驗包括(a)NKAa-l亞單位或(X-3亞單位、其變體、片段或衍生物(優選功能性的和/或免疫活性的)特異性的抗體或化合物與待測物質競爭結合所述的多肽，以及(b)確定與所述待測物質相比所述抗體競爭結合的量。上述篩選實驗還可以包括通過比較待測物質與a-l或a-3亞單位結合的強度和所述物質與其他細胞蛋白、尤其是NKA的其他a亞單位的結合強度來確定待測物質與NKAa-l亞單位或a-3亞單位的結合特異性。上述篩選實驗還可以包括以下步驟分析待測物質，優選與NKAa-l和/或a-3亞單位結合的待測物質，是否也能改變(例如，抑制或活化)所述NKA的生物活性如酶活性。一般而言，所述方法可包括使待測物質與表達NKAa-l亞單位或a-3亞單位、其功能性變體、片段或衍生物並且具有NKA活性的細胞、組織、器官或非人模型生物體接觸，然後分析NKA的生物活性。合適的分析方法見於，例如，實施例3、4和6的描述。在一個實施方式中，實驗(藥物篩選實驗或生物檢測實驗)包括評價待測物質減少NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位表達的能力的步驟。在一個實施方式中，所述實驗包括(a)提供表達NKAa-l亞單位或a-3亞單位，或任選其變體、衍生物或片段的細胞，(b)將待測物質導入到所述細胞內，以及(c)測定NKAa-l亞單位或a-3亞單位，或任選其變體、衍生物或片段的表達水平，從而確定待測物質是否能夠調節所述表達。表達可在上述各種水平上定量測定。a-l亞單位或a-3亞單位在細胞內的表達對細胞來說可以是固有的，也可以是利用重組技術誘導的，例如，利用核酸如表達編碼a-l亞單位或a-3亞單位或其合適變體、片段或衍生物的cDNA瞬時或穩定轉化所述細胞。上述篩選實驗還可以包括分析待測物質，優選能減少NKAa-l和/或a-3亞單位表達的待測物質，是否也能改變所述NKA的生物活性如酶活性的步驟。一般而言，所述方法可包括使待測物質與表達NKAa-l亞單位或a-3亞單位、其功能性變體、片段或衍生物並且具有NKA活性的細胞、組織、器官或非人模型生物體接觸，然後分析NKA生物活性的變化。合適的分析方法見於，例如，實施例3、4和6的描述。在實施方式中，實驗用於從一組待測物質中篩選有可能作為藥物用於治療選自膠質瘤，優選上述膠質母細胞瘤；前列腺癌；非小細胞肺癌(NSCLC)或結腸癌的增殖性失調的候選物質。在一個實施方式中，實驗用於從一組待測物質中篩選有可能作為藥物用於治療上述非小細胞肺癌(NSCLC)的候選物質。在另一個實施方式中，實驗用於從一組待測物質中篩選有可能作為藥物用於治療過度表達NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位的增殖性失調的候選物質。在另一個實施方式中，實驗用於從一組待測物質中篩選有可能作為藥物用於治療過度表達NKAot-l亞單位和/或a-3亞單位的增殖性失調的候選物質，其中增殖性失調選自膠質瘤，優選膠質母細胞瘤；前列腺癌；非小細胞肺癌(NSCLC)或結腸癌。在另一個實施方式中，實驗用於從一組待測物質中篩選有可能作為藥物用於治療過度表達NKAa-l亞單位的增殖性失調的候選物質，其中增殖性失調是非小細胞肺癌(NSCLQ。另外，本發明還涉及可通過本文所述的任一篩選方法鑑定的物質。另外，本發明還包括製備組合物的方法，該方法包括可用本文所述的實驗鑑定的物質與藥學上可接受的載體混合的步驟。很明顯，本發明涉及包含可用本文所述的任一方法鑑定的物質的組合物。另外，本發明涉及可用本文所述的任一方法鑑定的物質作為藥物的用途。這種物質尤其適用於治療上述增殖性失調，特別是癌症，例如過度表達NKAa-l或a-3亞單位的癌症，如膠質瘤、膠質母細胞瘤、前列腺癌、NSCLC或結腸癌。利用非限定性的實施例對本發明做進一步的闡述。實施例實施例1:a-lNKA亞單位在NSCLC中的表達水平升髙實驗用的細胞系得自美國典型培養物保藏所(維吉尼亞州馬納薩斯)，其中包括兩個人NSCLC模型，S卩A549(ATCC代碼CCL-185)和A427(ATCC代碼HTB-53);兩株人正常肺成纖維細胞系，艮卩，WI-38(ATCC代碼CCL-75)和ccd25-Lu(ATCC代碼CCL-215);小鼠黑色素瘤細胞系B16F10(ATCC代碼CRL-6475);以及大鼠膠質瘤細胞系C6(ATCC代碼CCL-107)。CAL-12T細胞得自DSMZ動物細胞係數據庫(代碼ACC-443;德國不倫瑞克)。NCI-H727細胞得自歐洲細胞培養物收藏所(代碼ECACC94060303;比利時布朗的西格瑪阿爾得裡奇公司(Sigma-Aldrich，Bornem，Belgium))。小鼠MXT乳腺癌細胞系是在我們實驗室建立的(Kiss等，CancerRes49:2945-2951，1989)。84個有檔案記載的(甲醛固定和石蠟包埋)的肺組織由I.Salmon博士(Erasme大學醫院病理科，布魯塞爾，比利時)提供，是一系列病例中的一部分，其所有臨床病理學數據都已有報導(Mathieu等，2005，ModPathol18:1264-1271)。25例正常組織來自手術切除的NSCLC的邊緣部位。其餘的59例樣品包括30例NSCLC起源的腺癌(NSCLC-ADC)和29例NSCLC起源的鱗狀細胞癌(NSCLC-SCC)。所研究的60例NSCLC來自59位NSCLC患者，其NSCLC都是於1995到2000年期間在Erasmus大學醫院手術切除的。現有的臨床數據總結在表l中。根據TNM分類法(UICC2002;23)對腫瘤分類，按如下標準分期I期(Tl-2NOMO)，II期(Tl-2NlMO或T3NOMO)，III期(Tl-2N2誦3M0，T3Nl-3MO或T4N0-3MO)和IV期(任何T和N和Ml)。表3:59例原發鱗狀細胞癌或腺癌患者的臨床病例數據年齡(歲)中位數(範圍)64(43—78)性別，女/男14/45級，S像。吸菸51(94%)不吸菸3(6%)搬薪勵微,)化療4放療0放化療0手術辦方某肺段切除術4(7%)肺葉切除術46(78%)全肺切除術9(15%)鄉學鱗狀細胞癌30(51%)分化良好4中度分化14低分化11腺癌29(49%)纖毛性腺癌(Cinar)22乳頭狀腺癌1實性腺癌4混合腺癌3a54例患者的吸菸習慣是已知的84例人組織樣品來自甲醛固定的石蠟包埋歸檔材料的回顧分析。實驗所用的6株細胞系(兩株正常成纖維細胞系和4株NSCLC細胞系)中，我們通過離心每一株細胞系的1><107個細胞，800xgl0分鐘，獲得細胞團，如其他文獻所述(Sunaga等，2004，CancerRes64:4277-4285)。這些細胞團在緩衝的甲醛溶液(4%)中固定20分鐘，脫水，包埋到石蠟中。6株細胞系每一株製備三個細胞團。在開始免疫組化實驗前，脫蠟的組織切片在Dakocytomation緩衝液(pH6.1)(DAKO，丹麥科羅普(Glostrup，Denmark))進行抗原恢復，600W,2x5分鐘。然後切片在0.4%過氧化氫甲醇溶液中孵育30分鐘以封閉內源性的過氧化物酶活性，在磷酸鹽緩衝液(PBS;0.04MNa2HP04，0.01MKH2PO4和0.12MNaC了，pH7.4)中漂洗。切片隨後在室溫下先後暴露於i)特異性一抗1小時(見下文)；ii)二抗(超義(Ultosense)生物素化的羊抗多價RTU，荷蘭杜溫的免疫科技公司(Immunologic，Duiven，TheNederlands))iii)超義鏈親和素過氧化物酶RTU(荷蘭杜溫的免疫科技公司)IO分鐘，以及iv)親和素-生物素-過氧化物酶複合物(ABC試劑盒，丹麥科羅普)。通過與包含二氨基聯苯胺和過氧化氫的發色底物混合物共孵育來觀察切片上是否存在抗原依賴性的標記過氧化物酶。小心漂洗後切片用Mayer的蘇木精復染，EntellanNeu(荷蘭阿姆斯特丹的默克公司(Merck,Amsterdam,TheNederlands))包埋。作為排除抗原非依賴性染色的對照，省去一抗或者用非免疫抗血清替代。在所有例子中，這些對照都是陰性的。抗鈉-鉀ATP酶al、a2和a3亞單位的一抗購自Upstate(荷蘭紐森的生物聯繫公司(Bio-ConnectBV;Huissen;TheNederlands);al和a2)和西格瑪(Sigma)(比利時布朗(Bornem，Belgium);a3)。經過免疫組化分析後，利用計算機輔助的KS400成像系統(德國豪本歌的CZV公司(CarlZeissvision,Hallbergmoos，Germany))按照以前文獻所描述的方法(Saussez等，2006，AnnSurgOncol13:999-1009)定量測定鈉-鉀ATP酶al、a2和a3亞單位的表達水平。每一例標本掃描20個視野，相當於60,000到120,000^11112的表面。每一例標本由兩個不同的人分別分析10個視野。每一個標記物免疫組化表達的參數的計算機輔助形態測定分析與下面兩個變量定量相關l)標記指數(LI)，是指一個給定標記物染色陽性的細胞百分數，以及2)平均光密度(MOD)，與陽性細胞的染色強度有關(Saussez等，2006，同上)。圖3從形態學上描述了正常肺實質支氣管組織以及NSCLC-ADC和NSCLC-SCC內鈉-鉀ATP酶al、a2和a3亞單位的典型表達模式。可以明顯看出，al在NSCLC-ADC內的表達水平升高，而在NSCLC-SCC內的表達水平非常高。本研究的數據有力地證明，與正常肺組織相比，大多數NSCLC內的鈉-鉀ATP酶al亞單位表達上調。因此，這個鈉-鉀ATP酶al亞單位可作為治療性靶位，尤其是那些NSCLC過度表達該亞單位的患者。與此形成明顯對比的是，正常肺組織好像更多表達鈉-鉀ATP酶a2亞單位。在這個具體的試驗中，NSCLC和正常肺組織內鈉-鉀ATP酶(x3亞單位的表達水平相對較低。圖4描述的是25例正常肺組織的實質(空心圓點)和支氣管組織(空心方塊)、30例NSCLC-ADC(實心圓點)和29例NSCLC-SSC(實心方塊)內鈉-鉀ATP酶al、a2和a3亞單位的免疫組化表達水平的定量測定結果(通過計算機輔助顯微鏡的方式完成)。數字1和2代表兩株人正常肺成纖維細胞系(WI-38和ccd25-Lu)，數字3-6代表人NSCLC細胞系(A549、Cal-12T、NCI-H727、A427)。數字7-9代表三株嚙齒類腫瘤細胞系，即，大鼠C6膠質瘤(數字7)，小鼠B16黑色素瘤(數字8)和小鼠MXT乳腺癌(數字9)模型。每一例進行20次定量測定，計算這20個值的平均LI(表達標記物的細胞百分數)和平均MOD(每個細胞的標記物濃度(以光密度表示))，因此每一個病例都能定位到Y軸為平均LI值、X軸為MOD值的二維平面上。橢圓形虛線代表的區域包含根據所有50例正常組織(25例實質和25例支氣管組織)計算出的平均值+lxSdev值，而橢圓形實線所代表的區域包括根據這50例正常組織樣品計算出的平均值+2xSdev。圖4A顯示的是45/50(90%)的正常組織包括在由鈉-鉀ATP酶免疫組化表達有關的橢圓(平均值+2xSdev)所描繪的區域內，而只有30/50(50.85%)的NSCLC包括在這個區域內。這些數據說明可以定義(以及如何確定)閾值以鑑定哪些患者的NSCLC所測定的鈉-鉀ATP酶al免疫組化表達水平比正常肺組織明顯升高。實施例2:a-lNKA亞單位表達的siRNA抑制設計幾種抗-al亞單位-siRNA-靶向核苷酸，然後通過Eurogentec(比利時賽拉(Seraing，Belgium))合成，並評價其在人A549NSCLC細胞內抑制鈉-鉀ATP酶al亞單位表達的能力。最佳結果得自包含正義鏈5'-GGGCAGUGUUUCAGGCUAA-3'和反義鏈5，-UUAGCCUGAAACACUGCCC-3，的抗-al亞單位siRNA。相應的不規則siRNA作為對照(正義鏈5'-UCUACGAGGCACGAGACUU-5'和反義鏈5，-AACUCUCGUGCCUCGUAGA-5')。在DEPC-處理水配製的50mMTris，pH7.5-8.0，100mMNaCl內操作以使siRNA反義鏈和正義鏈退火。siRNA雙螺旋的終濃度為100HM。不規則對照的反義鏈和正義鏈以同樣方式退火。我們利用能靶向到鈉-鉀ATP酶al亞單位的siRNA，其活性在圖5Ab中被證明。利用這種siRNA("alsiRNA")的方式降低鈉-鉀ATP酶al亞單位的表達水平不會改變鈉-鉀ATP酶a2(圖5Bb)和a3(圖5Cb)亞單位的表達水平。利用不規則siRNA沒有檢測到表達降低(圖5Aa，Ba，Ca)。我們利用計算機輔助顯微鏡觀察到利用本發明的siRNA作用6天可以使鈉-鉀ATP酶al亞單位的表達降低80%，明顯抑制A549NSCLC細胞的增殖和遷移(圖5Db)，而利用抗al不規則siRNA沒有觀察到這個特徵(圖5Da)。實施例3:昆蟲細胞內的鈉泵抑制實驗利用表達al/pi、a2/(31和a3/pl同工酶的Sf-9細胞勻漿物分析鈉-鉀ATP酶活性。測定32Pi從y[32P]-ATP釋放的初始速率。在終體積為0.25ml的介質內測定30-40嗎總蛋白樣品的鈉-鉀ATP酶活性，其中介質包含120mMNaCl、30mMKCl、3mMMgCl2、0.2mMEGTA、30mMTris-HCl(pH7.4)±特定濃度的待測物質，如本文的化合物2。樣品與抑制劑預孵育10分鐘。加入含0.2^Ciy[32P]-ATP的ATP(2mM終濃度)開始實驗。在37"孵育30分鐘後，試管置於冰上，通過加入2555%的三氯乙酸終止反應。釋放出的32Pi-Pi轉化成磷鉬酸鹽，用異丁醇萃取。利用液閃計數測定150pl有機相內的放射活性。0.0001M化合物2的活性與0.001M烏本苷的活性相當。因而特異性活性確定為存在和不存在0.0001M化合物2的條件下ATP水解作用的差值。實施例4:胞內ATP([ATP]i)測定按照ATP檢測試劑盒(比利時麥貝克的英吉分子探針公司(MolecularProbes,Invitrogen，Merelbeke，Belgium))附帶的說明書的指導，通過生物發光實驗測定細胞ATP水平。簡言之，在存在或不存在待測物質，例如推測的鈉-鉀ATP酶抑制劑如本發明的化合物2(10nM)的條件下培養細胞以所示的時間，然後用被動性裂解緩衝液(荷蘭萊頓的普麥公司(Promega，Ldden，TheNetherlands))裂解，利用BCA(比利時埃伯特吉的皮爾斯科技公司(Pierce，PerbioSciences,Erembodegem，Belgium))蛋白含量觀!j定實驗確定蛋白濃度。細胞裂解物(l嗎)與100pl螢光素酶試劑混合，在TD-20/20(荷蘭萊頓的普麥公司)上測定光度值。根據在同一時間製作的已知濃度的ATP的校準曲線計算樣品的ATP濃度。數據表示為處理誘導的ATP濃度下降值佔未處理的對照條件的百分數，後者設定為100%。實施例5:化合物2比其他參比強心甙類物質具有更髙的結合鈉-鉀ATP酶al亞單位的親和力我們想要了解化合物2是否比其他參比強心甙類物質如烏本苷和地高辛具有更高的結合鈉-鉀ATP酶al亞單位的親和力。我們選擇烏本苷作為第一個參比強心甙類物質是因為，到目前為止其通過鈉泵發揮生物效應和信號轉導的特徵了解得最清楚。我們選擇地高辛作為第二參比強心甙類物質是因為，在美國每年大約有170萬患者使用它來治療心衰和/或房顫，儘管已有更新的藥物如血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑、血管緊張素II受體拮抗劑和(3-阻滯劑被開發出來。為了確定化合物2對鈉-鉀ATP酶及其各種同工酶活性的效應，利用杆狀病毒表達系統製備al/|31、a2/pi和a3/(31鈉泵複合物，測定化合物的劑量-效應曲線。採用在昆蟲細胞內進行異種蛋白表達(實施例3)，因為它具有真核表達系統的優點，能在很少或沒有內源性鈉-鉀ATP酶存在的背景下產生大量的活性重組鈉-鉀ATP酶(Blanco2005，FrontBiosci10:2397-2411)。化合物2對所有al/(31、a2/|31和a3/pi鈉-鉀ATP酶都有抑制效應(表4A)。計算出的抑制常數(Ki)顯示化合物2抑制al/pi的能力比烏本苷高100倍(表4A)。表4Atableseeoriginaldocumentpage60Blanco等，2005(同上)實施例6:在癌內化合物2表現出比正常細胞內明顯升髙的抗增生活性，化合物2的抗腫瘤效應明顯高於地髙辛實施例4的數據有力地證明鈉泵的al亞單位是化合物2的靶位，化合物2結合這個al亞單位的親和力明顯高於烏本苷和地高辛。為了功能性地檢測這個假設，我們首先利用4株人NSCLC細胞系檢測化合物2、烏本苷、洋地黃毒甙和地高辛的體外抗腫瘤效應(在三天的細胞群總體生長發育水平上)。我們還使用了三株鼠細胞系，S卩，三株癌細胞系，其中包括C6大鼠膠質瘤、MXT小鼠乳腺癌和小鼠B16F10黑色素瘤模型。圖6Aa的數據顯示，四株NSCLC細胞系的總體生長被抑制水平以地高辛<洋地黃毒甙<烏本苷<化合物2的順序排列，說明在這四種強心甙類物質中，地高辛是最弱的抗腫瘤物質，而化合物2是最強的抗腫瘤物質。考慮到平均生長曲線(根據每一個產物的四條生長曲線計算出來的)時，這一順序在圖6Ab中得到了確認。因此，我們使用了三株嚙齒類癌細胞系，即，C6大鼠膠質瘤、MXT小鼠乳腺癌和小鼠B16F10黑色素瘤模型。數據圖6B的數據顯示，除高劑量(IO^M)的化合物2表現出了實際的抗腫瘤效應外，其餘三種強心甙類物質都沒有任何明顯的抗腫瘤效應。根據物種的不同，鈉泵al亞單位對強心甙類物質具有不同的敏感性。在嚙齒類中，al對強心甙類的敏感性比人al亞單位低100到1000倍(因為嚙齒類的al亞單位存在兩個人al亞單位所沒有的突變)，而a2和(x3亞單位沒有這種情況。因此，通過比較圖6A和6B的數據可以得出如下結論i)鈉泵的al亞單位主要參與腫瘤細胞的生長，以及ii)化合物2與其他已知的強心甙類物質如烏本苷、洋地黃毒甙或地高辛相比具有更高的抑制al亞單位活性的能力。權利要求1.一種可用作藥物，優選用作治療增生性疾病的藥物的物質，其(a)能減少鈉-鉀ATP酶的α-1亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的α-1亞單位，和/或(c)能減少鈉-鉀ATP酶的α-3亞單位的表達，或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的α-3亞單位。2.—種(a)能減少鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位，和/或(c)能減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的物質在製備增生性疾病治療藥物中的應用。3.—種(a)能減少鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位的物質，以及一種(c)能減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的物質在製備增生性疾病治療藥物中的應用。4.一種方法，該方法包括(l)鑑定或製備(a)能減少鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位的第一物質，禾卩/或(2)鑑定或製備(c)能減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的第二物質；以及(2)利用第一物質和/或第二物質製備增生性疾病治療藥物。5.如上述任一權利要求所述的物質、應用或方法，其特徵在於，能結合NKAa-l和/或a-3亞單位的物質可改變，優選抑制或活化，NKA生物活性的一個或多個方面。6.如上述任一權利要求所述的物質、應用或方法，其特徵在於，能結合NKAa-l和/或a-3亞單位的物質選自下組化學物質，優選有機分子，更優選小分子有機分子；肽；擬肽素；多肽或蛋白；抗體，包括其片段和衍生物；適體；脂質；糖類；或核酸，包括寡核苷酸。7.如權利要求6所述的物質、應用或方法，其特徵在於，所述物質是選自包括或由式I的化合物組成的有機分子其中W選自甲醯基、羥基d-4烷基、CL4垸基羰氧基CM垸基、<:5.12芳基羰氧基d-4垸基，W選自氧代、d.4垸基羰氧基d.4垸基、Cw2芳基羰氧基CM烷基，或者^是含W的C原子與雜環的N原子之間的雙鍵；優選的是，R1選自甲醯基、羥甲基、羥乙基、甲基羰氧基甲基、乙基羰氧基甲基、丙基羰氧基甲基、苯基羰氧基甲基，W選自氧代、甲基羰氧基甲基、乙基羰氧基甲基、丙基羰氧基甲基、苯基羰氧基甲基，或者W是含W的C原子與雜環的N原子之間的雙鍵。8.如權利要求7所述的物質、應用或方法，其特徵在於，所述物質是如下化學式的有機分子9.如權利要求6所述的物質、應用或方法，其特徵在於，所述物質是NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位特異性的抗體、其片段或衍生物。10.如權利要求1-4中任一項所述的物質、應用或方法，其特徵在於，所述能結合鈉-鉀ATP酶a-l和/或a-3亞單位的物質選自下組化學物質，優選有機分子，更優選小分子有機分子；反義物質，優選反義寡核苷酸、核酶或能導致RNA幹擾的物質。11.如權利要求10所述的物質、應用或方法，其特徵在於，所述物質是反義物質，優選反義寡核苷酸。12.如權利要求10所述的物質、應用或方法，其特徵在於，所述物質能導致RNA幹擾。13.如上述任一權利要求所述的物質、應用或方法，其特徵在於，所述增生性疾病包括腫瘤、瘤或癌症。14.如上述任一權利要求所述的物質、應用或方法，其特徵在於，所述增生性疾病是過度表達NKAa-l亞單位和/或a-3亞單位的增生性疾病。15.如權利要求13或14所述的物質、應用或方法，其特徵在於，所述增生性疾病選自膠質瘤，優選膠質母細胞瘤；前列腺癌；非小細胞肺癌(NSCLC);或結腸癌。16.如權利要求15所述的物質、應用或方法，其特徵在於，所述增生性疾病是非小細胞肺癌(NSCLC)。17.—種藥物組合物，其包含治療有效量的如上述任一權利要求所述的一種或多種物質，或其藥學上可接受的鹽，以及還包含一種或多種藥學上可接受的緩衝劑、載體、賦形劑、穩定劑。18.—種從一組待測物質中篩選可潛在作為增生性疾病治療藥物的候選物質的實驗，所述實驗包括確定待測物質是否(a)能減少鈉-鉀ATP酶的oc-l亞單位的表達，或(b)能結合鈉-鉀ATP酶的a-l亞單位，禾B/或(c)能減少鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位的表達，或(d)能結合鈉-鉀ATP酶的a-3亞單位。19.如權利要求18所述的實驗，其特徵在於，該實驗還包括利用篩選出的候選物質製備組合物，該組合物給予增生性疾病的非人動物模型，優選非人哺乳動物模型並監測其療效。20.通過如權利要求18或19的實驗篩選出的候選物質在製備增生性疾病治療藥物中的應用。全文摘要本發明提供了用於治療增生性疾病如腫瘤和癌症的方法、試劑、藥用製劑和試劑盒。本發明涉及選擇性地靶向到鈉-鉀ATP酶的亞單位，特別是其α-1亞單位和/或α-3亞單位。文檔編號A61P35/00GK101583714SQ200680056342公開日2009年11月18日申請日期2006年11月9日優先權日2006年11月9日發明者E·范夸克比克,F·達羅,L·范德霍夫,N·德納夫,R·基斯,T·米加託維克申請人:優尼拜爾斯金股份有限公司