一種從菸草中提取飽和迷迭香酸的方法與流程
2023-11-04 22:48:03 2
本發明涉及一種從菸草中提取飽和迷迭香酸的方法，屬於菸草化學
技術領域：
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背景技術：
：迷迭香酸是一種天然抗氧化劑，具有較強的抗氧化活性，其抗氧化活性強於維生素E，咖啡酸，綠原酸，葉酸等，有助於防止自由基造成的細胞受損，因此降低了癌症和動脈硬化的風險。迷迭香酸具有較強的抗炎活性，同時迷迭香酸還具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤的活性，而具有抑制急慢性感染、抗紫外線、抑制彈性蛋白降解等特性已使迷迭香酸成為化妝品的添加劑。目前，迷迭香酸在製藥、食品、化妝品等領域中已體現出其重要的應用價值。迷迭香酸本身也是一種致香物質，現有的菸草中的需要添加致香物質增加香菸的口感，本發明主要是首次從菸草中分離製備得到該化合物，從菸草中提取的致香物質能最大程度提高香菸口感，並且發現了菸草中本身就具有較強抗氧化的物質。技術實現要素：本發明要解決的技術問題是：提供一種從菸草中提取飽和迷迭香酸的方法，其作為菸草香精香料添加劑，以克服現有技術的不足。本發明的技術方案：一種從菸草中提取飽和迷迭香酸的方法，該方法包含下述步驟：(1)用乙醇水溶液浸提菸草樣品後，通過減壓濃縮得菸草浸膏；(2)將菸草浸膏水溶後，採用有機溶劑萃取後，減壓濃縮萃取液至十分之一體積，得到萃取液；(3)將D101大孔樹脂活化後，裝入層析柱中，純淨水衝洗至無醇味，將上一步驟中得到的萃取液至上而下倒入大孔樹脂層析柱中，然後，以不同濃度梯度的乙醇對大孔樹脂柱進行洗脫；(4)收集洗脫液後，對洗脫液進行減壓濃縮，濃縮至十分之一體積後進行毛細管取樣薄層層析，展開系統為氯仿：甲醇，顯色劑為5％硫酸乙醇溶液，顯示方法為加熱顯色，將含有相似成分的洗脫液進行合併；減壓濃縮洗脫液至幹得菸草極性提取物；(5)採用薄層層析法，展開劑為氯仿：丙酮，合併顯示出棕黑色斑點的樣品減壓濃縮後得到致香類粗提物浸膏；(6)致香類粗提物浸膏與矽膠攪拌均勻後，採用正相矽膠色譜柱進行分離，流動相為氯仿：甲醇梯度洗脫，收集各部分洗脫液；(7)通過薄層層析法，展開劑為氯仿：丙酮，根據不同的Rf值，按照不同極性合併致香類物質，得到致香類細提物；(8)對菸草細提物進行正相柱層析，以甲醇：氯仿為流動相梯度洗脫，TLC檢測分段為A-E5個部分，將其中的B段通過反相矽膠柱層析後，進樣至半製備色譜系統中進行分離；在色譜條件：流動相為甲醇:水，體積比68:32，保留時間7.12分鐘，分離得到該單體化合物。所述的步驟(5)展開劑中氯仿：丙酮體積比為5:1。所述的步驟(7)展開劑中氯仿：丙酮體積比為10:1。所述的步驟(5)和(7)中所述的薄層層析法中顯色劑為α-萘酚5％乙醇溶液，顯色方法為加熱顯色。本發明的有益效果是：在本發明工藝中，各個步驟的提取手段，尤其是步驟8中對TLC檢測分段中B段通過反相矽膠柱層析後，進樣至半製備色譜系統中進行分離；在各色譜條件下，保留時間7.12分鐘得到飽和迷迭香酸是及其重要的步驟，尤其是其中的保留時間，保留時間的長短，甚至是0.1-0.2分的差別，都會導致分離產物的變化，這是發明人在實驗中不斷摸索反覆試驗得到的。本發明通過分離提取技術從菸草中提取得到致香類物質飽和迷迭香酸，飽和迷迭香酸作為捲菸添加劑能降低捲菸的氣相自由基，其可能機理是中草藥中的有效成分阻斷了捲菸在燃燒時自由基的產生或是對生成的自由基進行迅速的淬滅。同時，由於是菸草自身的物質，在添加至捲菸產品中後，不會由於添加非菸草製品類物質而給捲菸產品產生不好的氣味等不良影響。附圖說明圖1為本發明化合物的核磁共振氫譜(1H-NMR)；圖2為本發明化合物的核磁共振碳譜(13C-NMR)；圖3為本發明化合物的異核多量子相干譜；圖4為本發明化合物雙量子過濾的1H1HCOSY譜；圖5為本發明化合物異核多糖相關譜；圖6為本發明中YC-22(飽和迷迭香酸)和VC的體外抗氧化活性圖；圖7為本發明化合物半製備色譜分析檢測結果圖。具體實施方式為使本發明的目的、技術方案和優點更加清楚，下面將結合附圖對本發明作進一步地詳細描述。一種飽和迷迭香酸，所述飽和迷迭香酸具有下述結構式：白色粉末(CD3OD)，C18H18O8ExactMass:362.10MolecularWeight:362.33m/z:362.10(100.0％),363.10(19.8％),364.11(1.9％),364.10(1.6％)ElementalAnalysis:C,59.67；H,5.01；O,35.33。一種從菸草中提取飽和迷迭香酸的方法，包含以下步驟：(1)用75％乙醇水溶液浸提菸草樣品後，通過減壓濃縮得菸草浸膏；(2)將菸草浸膏用水，超聲波助溶後，採用乙酸乙酯或石油醚萃取後，減壓濃縮萃取液至十分之一體積，得到萃取液；(3)將D101大孔樹脂按照說明書要求活化後，裝入適當尺寸的層析柱中，純淨水衝洗至無醇味，將上一步驟中得到的萃取液至上而下倒入大孔樹脂層析柱中，然後，以不同濃度梯度的乙醇(10％-100％)對大孔樹脂柱進行洗脫；(4)收集多瓶洗脫液後，對每一瓶洗脫液進行減壓濃縮，濃縮至十分之一體積後進行毛細管取樣薄層層析，展開系統為氯仿：甲醇，顯色劑為5％硫酸乙醇溶液，顯示方法為加熱顯色。將含有相似成分的洗脫液進行合併；減壓濃縮洗脫液至幹得菸草極性提取物；(5)採用薄層層析法，展開劑為氯仿：丙酮(5:1)，顯色劑為α-萘酚5％乙醇溶液，顯色方法為加熱顯色，合併顯示出棕黑色斑點的樣品減壓濃縮後得到致香類粗提物浸膏；(7)致香類粗提物浸膏與矽膠攪拌均勻後，採用正相矽膠色譜柱進行分離，流動相為氯仿：甲醇梯度洗脫，洗脫液比例為100:0-0:100；收集各部分洗脫液；(8)通過薄層層析法，展開劑為氯仿：丙酮(10:1)，顯色劑為α-萘酚5％乙醇溶液，顯色方法為加熱顯色，根據不同的Rf值，按照不同極性合併致香類物質，得到致香類細提物；(9)對菸草細提物進行正相柱層析，以甲醇：氯仿為流動相梯度洗脫，TLC檢測分段為A-E5個部分，將其中的B段通過凝膠柱層析後，進樣至半製備色譜系統中進行分離；在色譜條件下(流動相為甲醇:水，68:32)，保留時間7.12分鐘，分離得到該單體化合物。抗氧化活性研究(1)DPPH儲備液的配製準確稱取1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)0.078g，用無水乙醇溶解定容至100ml棕色容量瓶中，搖勻，得濃度為2mmol/L母液，4℃保存。用時取10ml母液稀釋定容到100ml容量瓶中，得濃度為0.2mmol/L。(2)VC溶液的配製精密稱取VC0.25g，水溶解得母液濃度2.5mg/ml，分別取母液0.01ml、0.02ml、0.03ml、0.05ml、0.08ml、0.1ml、0.15ml定容至25ml容量瓶中，得一定濃度梯度0.001mg/L、0.002mg/L、0.003mg/L、0.005mg/L、0.008mg/L、0.01mg/L、0.015mg/L搖勻，室溫放置。分別吸取2ml樣品溶液按照「1.1.4」項下方法測定。(3)供試品溶液配製取一定量所分離的單體化合物，按照一定濃度梯度稀釋，再分別取2ml供試溶液，按照「1.1.4」項下方法測定。(4)自由基清除率測定方法取2ml不同濃度供試品溶液與2ml0.2mmol/LDPPH溶液加入比色管中，混勻後室溫放置30min，於517nm處測定A值，平行測定三次，以VC為陽性對照。利用DPPH溶液的特徵紫紅色基團的吸收，用紫外－可見分光光度法測定反應後的供試溶液在517nm吸收的下降程度表示其對有機自由基的清除能力。試樣對DPPH清楚率按照以下公式計算：DPPH清除率＝1－(Ai－Aj)/A0Ai為樣品+DPPH吸光度的平均值；Aj為樣品溶液吸光度的平均值；A0為DPPH吸光度的平均值。結果表1YC-22(飽和迷迭香酸)和VC的體外抗氧化活性樣品線性回歸R2IC50/(mg·mL-1)YC-22y＝363.46x-9.9410.99790.1649VCy＝6573.2x-3.16450.99960.0081飽和迷迭香酸具有一定的體外抗氧化活性，該實驗是首次利用菸草中分離製備得到的飽和迷迭香酸進行抗氧化實驗，論證了菸草本身含有的物質就具有抗氧化的功能。當前第1頁1 2 3