作為蛋白酶抑制劑的氨基吡啶基－,氨基胍基－和烷氧基胍基－取代苯基乙醯胺的製作方法

2023-05-17 03:38:31

專利名稱：作為蛋白酶抑制劑的氨基吡啶基－,氨基胍基－和烷氧基胍基－取代苯基乙醯胺的製作方法
技術領域：
本發明的背景本發明的領域本發明涉及用作蛋白水解酶抑制劑的新型化合物，更具體地涉及新型凝血酶抑制劑。
相關
背景技術：
蛋白酶類是在單個、特定的肽鍵上分裂蛋白質的酶。蛋白酶類能夠分成四個屬類絲氨酸，硫醇或半胱氨醯，酸或天冬氨醯基，和金屬蛋白酶(Cuypers等人，J.Biol.Chem.2577086(1982))。蛋白酶類對於各種生物活性，如血凝塊的消化、形成和溶解，再生和對於外來細胞和生物體的免疫反應來說是重要的。異常的蛋白水解與在人體和其它哺乳動物體內中的許多疾病有關。人嗜中性白細胞蛋白酶類，彈性蛋白酶和組織蛋白酶G，已經被懷疑會導致以組織破壞為特徵的疾病症狀。這些疾病症狀包括肺氣腫，類風溼性關節炎，角膜潰瘍和腎小球性腎炎。(Barret，在Enzyme Inhibitors as Drugs中，Sandler編輯，University Park Press，Baltimore，(1980))。附加的蛋白酶類如纖溶酶，C-1酯酶，C-3轉化酶，尿激酶，纖溶酶原激活物，頂體蛋白，和激肽釋放酶在哺乳動物的正常生物機能中起著重要的作用。在許多情況下，在治療哺乳動物的過程中破壞一種或多種蛋白水解酶的功能是有益的。
絲氨酸蛋白酶包括諸如彈性蛋白酶(人白細胞)，組織蛋白酶G，纖溶酶，C-1酯酶，C-3轉化酶，尿激酶，纖溶酶原激活物，頂體蛋白，糜蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶，因子Xa和激肽釋放酶之類的酶。
人白細胞彈性蛋白酶是在炎症部位被多形核白細胞所釋放，因此是許多疾病症狀的病因。組織蛋白酶G是另一種人嗜中性白細胞絲氨酸蛋白酶。能夠抑制這些酶的活性的化合物預計具有消炎作用，可用於痛風、類風溼性關節炎和其它炎症疾病的治療中，和用於肺氣腫的治療中。糜蛋白酶和胰蛋白酶是消化酶。這些酶的抑制劑可用於治療胰腺炎。尿激酶和纖溶酶原激活物的抑制劑可用於治療過度細胞生長疾病症狀，如良性前列腺肥大，前列腺癌和牛皮癬。
該絲氨酸蛋白酶凝血酶在止血和血栓形成中發揮著中心作用，並作為多因子的蛋白質，會誘導許多對於血小板，內皮細胞，平滑肌細胞，白細胞，心臟，和神經原的作用。該凝固級聯利用內在途徑(接觸激活作用)或外在途徑(由血漿暴露於非內皮表面所活化，損害血管壁或組織因子釋放)的活化會導致一系列的集中於凝血酶上的生物化學作用。凝血酶分解纖維蛋白原而最終導致止血栓(血凝塊形成)，通過細胞表面凝血酶受體的獨特的蛋白水解性分解作用而有效地活化血小板(Coughlin，Seminars in Hematology31(4)270-277(1994))，和通過反饋機理來自動放大它自身的產生。因此，凝血酶功能的抑制劑在大量的心血管和非心血管疾病中具有治療潛力。
因子Xa是以凝固途徑的另一種絲氨酸蛋白酶。因子Xa與在磷脂膜上的因子Va和鈣有關，因此形成了凝血酶原酶配合物。這一凝血酶原酶配合物然後將凝血酶原轉化成凝血酶(Claeson，BloodCoagulation and Fibrinolysis 5411-436(1994)；Harker，BloodCoagulation and Fibrinolysis 5(Suppl 1)S47-S58(1994))。因子Xa的抑制劑被認為提供了與直接抑制凝血酶的試劑相比的優點，因為直接凝血酶抑制劑仍然容許顯著的新凝血酶產生(Lefkovits andTopol，Circulation 90(3)1522-1536(1994)；Harker，BloodCoagulation and Fibrinolysis 5(Suppl 1)S47-S58(1994))。
以前已經報導了血管內血栓的活體內診斷成象方法。這些成象方法使用可檢測性地標記了放射性或順磁性原子的化合物。例如，標記了γ發射體In-111的血小板能夠用作檢測血栓的成像劑(Thakur，M.L.等人，Thromb Res.9345(1976)；Powers等人，Neurology 32938(1982))。標記Tc-99m的血栓溶解酶鏈激酶被建議作為成象劑(Wong，U.S.專利No.4,418,052(1983))。用γ發射體I-125和I-131標記的金黃色葡萄球菌衍生蛋白A的血纖蛋白結合域已經建議作為成象劑(Pang，U.S.專利No.5,011,686(1991))。對血纖蛋白有特異性(與纖維蛋白原相反)和用Tc-99m標記的單克隆抗體已經建議作為成象劑(Berger等人，U.S.專利No.5,024,829(1991)；Dean等人，U.S.專利No.4,980,148(1990))。順磁性造影劑，釓二亞乙基三胺五乙酸在為了急性心肌梗塞而通過血栓溶解來治療的病人的核磁共振成象中的使用已經有報導(De Roos，A.等人，Int.J.Card.Imaging 7133(1991))。放射性標記的和順磁性標記的α-酮醯胺衍生物被推薦作為血栓成象劑(Abelman等人，美國專利No.5,656,600)。
對屬於有潛力和選擇性的蛋白酶抑制劑並比現用的蛋白酶抑制劑有更高的生物利用率和更少副作用的非肽化合物仍然有需求。因此，以強力抑制能力和對哺乳動物低毒性為特徵的新型高效蛋白酶抑制劑對於許多症狀是潛在有價值的治療劑，其中包括許多哺乳動物蛋白水解作用的疾病症狀的治療。
本發明的概述本發明涉及具有通式I(以下)的新型氨基吡啶基-，氨基胍基-，和烷氧基胍基-取代苯基乙醯胺。還提供的是製備通式I的化合物的方法。本發明的新型化合物是蛋白酶類，尤其胰蛋白酶狀絲氨酸蛋白酶，如糜蛋白酶，胰蛋白酶，凝血酶，纖溶酶和因子Xa的高效抑制劑。某些化合物經凝血酶的直接、選擇性抑制作用而顯示出抗血栓形成的活性，或是可用於製備具有抗血栓形成活性的化合物的中間體。也提供的是抑制或治療哺乳動物異常蛋白水解的方法，以及通過施用有效量的通式I的化合物來治療哺乳動物的血栓形成，局部缺血，中風，再狹窄或炎症的方法。
本發明包括在可藥用載體中含有本發明化合物的一種組合物，該組合物用於抑制血小板的損失，抑制血小板聚集體的形成，抑制血纖蛋白的形成，抑制血栓形成，和抑制在哺乳動物體內栓塞形成。這些組合物可以任選包括抗凝劑，抗血小板劑，和溶栓劑。該組合物能夠被加入到血液，血液製品，或哺乳動物器官中，以發揮所需的抑制作用。
還提供是抑制或治療哺乳動物的異常蛋白水解的方法，以及治療心肌梗塞；不穩定的絞痛；中風；再狹窄；深靜脈血栓形成；由外傷引起的瀰漫性血管內凝血，膿毒病或瘤轉移；血液透析作用；心肺分流外科；成人呼吸窘迫症候群；內毒素性休克；類風溼性關節炎；潰瘍性結腸炎；硬化；轉移；化療過程中的高凝性；阿爾茨海默氏病；唐氏症候群；眼睛內血纖蛋白形成；和傷口癒合的方法。本發明化合物的其它用途是作為被包埋於或以物理方式連接於材料中的抗凝劑，該材料用於製造在血收集、血液循環和血儲存中使用的裝置，如導管，血液透析機，血收集注射器和管，血線和支架。
本發明還包括減少在哺乳動物表面血栓形成性的方法，這通過將本發明的化合物以共價鍵或非共價鍵方式結合於該表面來實現。
在另一個方面，本發明包括用於哺乳動物的血栓的體內成象的組合物，該組合物包括能夠在體外檢測到的本發明的化合物。優選的組合物包括本發明的化合物和可檢測的標記物，如放射性或順磁性的原子。
在另一個方面，本發明提供用於哺乳動物的血栓的體內成象的診斷組合物，該組合物包括可藥用的載體和診斷有效量的本發明的化合物或組合物。
在另一個方面，本發明包括可用於哺乳動物的血栓的體內成象的方法。
優選實施方案的詳細說明本發明的化合物包括通式I的化合物
或它的溶劑化物，水合物或可藥用的鹽；其中W是氫，R1，R1OC(O)，R1C(O)，R1(CH2)sNHC(O)，R1S(O)2，或(R1)2CH(CH2)sNHC(O)，其中s是0-4；R1是R2，R2(CH2)tC(R12)2，其中t是0-3，並且各R12能夠是相同的或不同的，(R2)(OR12)CH(CH2)p，其中p是1-4，(R2)2(OR12)C(CH2)p，其中p是1-4，R2C(R12)2(CH2)t，其中t是0-3，並且各R12能夠是相同的或不同的，其中(R12)2還可以與C一起形成以C3-9環烷基為代表的環，R2CF2C(R12)2(CH2)q，其中q是0-2，並且各R12能夠是相同的或不同的，其中(R12)2還可以與C一起形成以C3-9環烷基為代表的環，R2CH2C(R12)2(CH2)q，其中q是0-2，並且各R12能夠是相同的或不同的，其中(R12)2還可以與C一起形成以C3-9環烷基為代表的環，(R2)2CH(CH2)r，其中r是0-4和各R2能夠是相同的或不同的，並且其中(R2)2也能夠與CH形成環，該環的代表有C3-9環烷基，C7-12二環烷基，C10-16三環烷基，或5-到7-員單環或二環的雜環，後者能夠是飽和的或不飽和的，並且它含有1至3個選自N，O和S中的雜原子，R2O(CH2)p，其中p是2-4，(R2)2CF(CH2)r，其中r是0-4和各R2能夠是相同的不同的，其中(R2)2還可以與C一起形成環，該環的代表有C3-9環烷基，C7-12二環烷基，C10-16三環烷基，或5-到7-員單環或二環的雜環，後者能夠是飽和的或不飽和的，並且它含有1-3個選自N，O和S中的雜原子，
其中s是0或1，或R2CF2C(R12)2；R2是苯基，萘基，或聯苯，其中每一個是未被取代的或被下列基因中的一個或多個取代C1-4烷基，C1-4烷氧基，滷素，羥基，CF3，OCF3，COOH，CONH2或SO2NH2，5-到7-員單環族或9-到10-員二環族的飽和或不飽和雜環或非雜環，其中該雜環含有1-4個選自N，O和S中的雜原子，並且其中該雜環或非雜環是未被取代的或被滷素或羥基取代，C1-12烷基，未被取代的或被下列基團中的一個或多個取代羥基，COOH，氨基，任選C1-3烷基取代的芳基，C3-9環烷基，CF3，N(CH3)2，雜芳基，或雜環烷基，CF3，C3-9環烷基，未被取代的或被芳基取代，C7-12二環烷基，或C10-16三環烷基；Y是-NH-或-O-；R3，R4，R5和R6獨立地是氫，烷基，環烷基，鏈烯基，炔基，任選取代的芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的雜芳基，滷代烷基，羥基，烷氧基，芳氧基，雜芳氧基，滷素，滷代烷氧基，羥烷基，氰基，硝基，-CO2Rx，-CH2ORx或-ORx，其中Rx在每種情況下獨立地是氫，C1-12烷基或C3-9環烷基中的一個，其中該C1-12烷基或C3-9環烷基可以任選具有一個或多個不飽和鍵；R11是氫，烷基，或鏈烯基；R12是氫或滷素，苯基，萘基，或聯苯，其中每一個是未被取代的或被下列基團中的一個或多個取代C1-4烷基，C1-4烷氧基，滷素，羥基，CF3，OCF3，COOH，或CONH2，5-到7-員單環族或9-到10-員二環族的雜環，它能夠是飽和或不飽和的，並且它含有1-4個選自N，O和S中的雜原子，C1-12烷基，未被取代的或被下列基團中的一個或多個取代羥基，COOH，氨基，C6-14芳基，雜芳基，或雜環烷基，CF3，C3-9環烷基，C7-12二環烷基，或C10-16三環烷基；B是選自 或 其中R7，R8，R9，和R10獨立地是氫，烷基，芳烷基，芳基，羥烷基，氨基烷基，單烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基或羧基烷基；或R7和R8聯在一起形成-(CH2)u-，其中u是2到7，優選2到5，而R9和R10如以上所定義；
或R9和R10聯在一起形成-(CH2)v-，其中v是2到7，優選2到5，而R7和R8如以上所定義；或R7和R9聯在一起形成-(CH2)y-，其中y是0(一個鍵)或1-7，優選0-4，而R8和R10如以上所定義；X是-O-，-NR18-，或-CH＝N-(其中N鍵接於NR13上)，其中R18是氫，烷基，環烷基或芳基，其中該烷基、環烷基或芳基任選被氨基，單烷基氨基，二烷基氨基，烷氧基，羥基，羧基，烷氧基羰基，芳氧基羰基，芳烷氧基羰基，芳基，雜芳基，醯氨基，氰基或三氟甲基取代；Ra，Rb和Rc獨立地是氫，烷基，羥基，烷氧基，芳氧基，芳烷氧基，烷氧基羰基氧基，氰基或-CO2Rw，其中Rw是C1-12烷基，C3-9環烷基，C6-14芳基，C6-14芳基(C1-12)烷基， 或 其中Re和Rf獨立地是氫，C1-6烷基，C2-6鏈烯基或C6-14芳基，Rg是氫，C1-6烷基，C2-6鏈烯基或C6-14芳基，Rh是氫，C1-6烷基，C2-6鏈烯基或C6-14芳基，和Ri是C6-14芳基(C1-12)烷基或C1-12烷基；n是0到8；和m是0到6；R13是氫，烷基，鏈烯基，芳烷基，芳基，羥烷基，氨基烷基，單烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基或羧基烷基；R14和R15獨立地是氫，烷基，環烷基，滷素或烷氧基；和R16和R17獨立地是氫，烷基，羥基，烷氧基，芳氧基，烷氧基羰基，氰基或-CO2Rj，其中Rj是C1-12烷基，C3-9環烷基，C6-14芳基，C6-14芳基(C1-12)烷基，滷代(C1-12)烷基或
其中Re、Rf和Rg獨立地是氫或C1-12烷基。
在本發明範圍內的化合物包括滿足以下條件的那些R3，R4，R5和R6獨立地是氫，C1-12烷基，C3-9環烷基，滷素，C2-20鏈烯基，C2-20炔基，任選取代的C6-14芳基，任選取代的C6-14芳基(C1-12)烷基，任選取代的雜芳基，滷素(C1-12)烷基，C1-12烷氧基，C6-14芳氧基，雜芳氧基，滷代(C1-20)烷氧基或羥基(C1-12)烷基；R11是氫，C1-12烷基或C2-20鏈烯基；R7，R8，R9和R10獨立地是氫，C1-12烷基，C6-14芳基(C1-12)烷基，C6-14芳基，羥基(C1-12)烷基，氨基(C1-12)烷基，單(C1-12)烷基氨基(C1-12)烷基，二(C1-12)烷基氨基(C1-12)烷基，或羧基(C1-12)烷基；R18是C1-12烷基，C3-9環烷基或C6-14芳基，其中每一個任選被氨基，單(C1-12)烷基氨基，二(C1-12)烷基氨基，C1-20烷氧基，羥基，羧基，C1-20烷氧基羰基，C6-14芳氧基羰基，C6-14芳基(C1-20)烷氧基羰基，C6-14芳基，C5-10雜芳基，醯氨基，氰基或三氟甲基取代；Ra，Rb和Rc獨立地是C1-12烷基，C1-20烷氧基，C6-14芳氧基，C6-14芳基(C1-20)烷氧基，或C1-20烷氧基羰基氧基；R13是C1-12烷基，C1-20烷氧基，C6-14芳氧基或C1-20烷氧基羰基；R14和R15獨立地是C1-12烷基，C3-9環烷基或C1-20烷氧基；和R16和R17獨立地是C1-12烷基，C1-20烷氧基，C6-14芳氧基或C1-20烷氧基羰基。
以上通式I的優選化合物是Y是-NH-或-SO2NH-的那些化合物。
以上通式I的化合物的優選亞屬是其中B是以下基團的那些化合物
其中R7-R10，R13和Ra-Rc如以上所定義。
以上通式I的化合物的另一優選亞屬是其中B是以下基團的那些化合物 其中R9，R10和R14-R17如以上所定義。
以上通式I的優選化合物是滿足以下條件的那些W是R1，而R1是R2且R2是任選取代的苯基，任選取代的萘基或被芳基取代的C1-7烷基。
以上通式I的優選化合物是R1是R2CF2C(R12)2(CH2)q的那些。
以上通式I的優選化合物是R6是C1-6烷基或滷素的那些化合物。在第三個優選的亞屬中的更優選的化合物是其中R6是甲基或氯的那些化合物，其中包括R6是氯而R3是氟的化合物。
以上通式I的優選的化合物是其中R11是氫的那些化合物。
在通式I中Ra，Rb和Rc的優選值獨立地是氫，羥基，C1-6烷基，C1-6烷氧基，氰基或-CO2Rw，其中Rw在各種情況下優選是C1-4烷基，C4-7環烷基或苄氧基羰基中的一個。Ra，Rb和Rc的合適值包括氫，甲基，乙基，丙基，正丁基，羥基，甲氧基，乙氧基，氰基，-CO2CH3，-CO2CH2CH3和-CO2CH2CH2CH3。在最優選的實施方案中，Ra，Rb和Rc都是氫。
Ra，Rb和Rc的其它優選值是基團-CO2Rw，其中Rw是以下基團中的一個 或 其中Re-Ri如以上所定義。當Ra，Rb和Rc是-CO2Rw，其中Rw是這些結構部分中的一種時，所獲得的化合物是具有令人想望的配方和生物利用率特性的前體藥物。Re、Rf和Rh中每一個的優選值是氫，Rg是甲基，Ri的優選值包括苄基和叔丁基。
優選的化合物是通式I的那些，其中R7，R8，R9和R10獨立地是氫，C1-6烷基，C6-10芳基(C1-6)烷基，C6-10芳基，C2-10羥烷基或C2-7羧基烷基中的一個。R7，R8，R9和R10的有用的值包括氫，甲基，乙基，丙基，正丁基，苄基，苯基乙基，2-羥乙基，3-羥丙基，4-羥基丁基，2-羧甲基，3-羧乙基和4-羧基丙基。附加的優選化合物是其中R7和R8或R9和R10聯在一起形成-(CH2)y-(其中y是2)的那些。
當X是NR18時的優選化合物是滿足以下條件的那些其中R18是氫或C1-6烷基，任選被下列基團中的一個、兩個或三個，優選被一個取代氨基，單烷基氨基，二烷基氨基，烷氧基，羥基，烷氧基羰基，芳氧基羰基，芳烷氧基羰基，羰基烷氧基，苯基，氰基，三氟甲基，乙醯氨基，吡啶基，苯硫基，呋喃基，吡咯基或咪唑基。
R18的合適值包括氫，甲基，乙基，丙基，正丁基，苄基，苯乙基，2-羥乙基，3-羥丙基，4-羥基丁基，羧甲基和羧乙基。
最優選的化合物是其中X是氧的那些化合物。
R6能夠表示氫，C1-3烷基，滷素，或C1-2烷氧基。R6優選是C1-3烷基，例如，甲基，或滷素，例如，氯，溴或氟。
R3，R4，R5和R6能夠獨立地表示氫，羥基，C1-3烷基，滷素，或C1-2烷氧基。優選R3是氟和羥基。
在通式I中n的優選值包括0到6，更優選0到4，和最優選0，1或2。m的優選值包括0到4，更優選0，1，2或3。
還可以理解的是，本發明被認為包括立體異構體和旋光異構體，例如對映異構體以及各對映異構體和非對映異構體的混合物，它們起源於在本系列的所選擇化合物中的結構不對稱。本發明的化合物也具有多態晶形，而所有的多態晶形被歸入本發明中。
通式I的化合物也可以是溶劑化的，尤其水合的。水合可以在化合物或包括該化合物的組合物的製造過程中發生或將來由於化合物的吸水性而發生水合。
在通式I的範圍內的某些化合物是稱為前體藥物的衍生物。該表達短語「前體藥物」表示已知的直接作用型藥物的衍生物，該衍生物與該藥物相比具有增強的分配輸送特性和治療價值，並通過酶促或化學過程被轉化成活性藥物。有用的前體藥物是其中Ra，Rb，Rc和/或Rd是-CO2RW，而Rw如以上所定義的那些。參見，U.S.專利No.5,466,811和Saulnier等人，Bioorg.Med.Chem.Lett.41985-1990(1994)。
當任何變量在任何成分或在通式I中出現一次以上時，它的定義在每種情況下與在每一種其它情況下的它的定義無關。同樣，取代基和/或變量的結合只有當該結合導致獲得穩定化合物時才是允許的。
在另一個方面，本發明包括用於哺乳動物的血栓的體內成象的組合物，該組合物包括能夠在體外檢測到的本發明的化合物。優選的組合物包括本發明的化合物和可檢測的標記物，如放射性或順磁性的原子。
在另一個方面，本發明提供用於哺乳動物的血栓的體內成象的診斷組合物，該組合物包括可藥用的載體和診斷有效量的本發明的化合物或組合物。
在另一個方面，本發明包括可用於哺乳動物的血栓的體內成象的方法。
根據優選的方面，有用的化合物是滿足以下條件的那些其中R1取代基用可檢測的標記物如放射性碘原子如I-125，I-131或I-123取代。在這一方面，R1優選是苯基，具有對位I-123，對位I-125或對位I-131取代，或苄基，具有間位I-123，間位I-125或間位I-131取代。
可檢測的標記也可以是放射性或順磁性的螯合物，其中合適的配位體(L)直接或經由二價聯結基A″結合於R1取代基。另外地，該基團-A″-L替代在通式I中的基團W。合適的配位體是指能夠螯合放射性或順磁性金屬離子的有機結構部分。
在這些化合物中，該二價聯結基A″包括能夠以共價鍵方式與游離氨基和螯合單元連接的基團。例如，A″可以是-C(＝S)-，-C(＝O)-，-C(＝NH)-(CH2)6-C(＝NH)-，-C(＝O)-(CH2)6-C(＝O)-， 和類似基團。
同樣，在由通式I表示的化合物中，該螯合配位體，L，包括能夠以共價鍵方式連接於或以非共價鍵方式連接於放射性或順磁性原子的那些基團。該螯合單元是指通常用於配合放射性或順磁性原子的那些。這些包括含有鍵接於氮原子上的3到12個，優選3到8個亞甲基膦酸基團，亞甲基羰基異羥肟酸基團，羧基亞乙基基團，或尤其羧基亞甲基基團的螯合單元。如果只有一個或兩個酸基鍵接於氮原子上，則該氮原子通過任選取代的亞乙基或通過至多4個分開的亞乙基單元(被氮或氧或硫原子分開)而鍵接於具有此類基團的另一個氮原子。優選作為配位單元的是二亞乙基三胺-N，N，N′，N″，N″-五乙酸(DTPA)。DTPA在所屬技術領域中已知作為放射性原子銦-111(In-111)，鎝-99m(Tc-99m)，和順磁性原子釓(Gd)的螯合單元。Khaw等人，Science 209295(1980)；Paik C.H.等人，U.S.專利No.4,652,440(1987)；Gries，H.等人，U.S.專利No.4,957,939(1990)。優選的螯合配位體，L，是1-(對-氨基苄基)-二亞乙基三胺五乙酸。也包括為螯合單元的是含有巰基或胺結構部分的化合物，在任何結合中它的總數是至少四個。這些巰基或胺結構部分彼此被至少兩個原子分開，它們能夠是碳，氮，氧，或硫原子。螯合單元L的尤其優選的是金屬硫因，它在所屬技術領域中已知作為Tc-99m的螯合單元。
這裡其本身或作為另一個基團的一部分來使用的術語「烷基」是指具有至多12個碳原子的直鏈和支鏈基團，如甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，叔丁基，異丁基，戊基，己基，異己基，庚基，4，4-二甲基戊基，辛基，2，2，4-三甲基戊基，壬基，癸基，十一基，十二烷基。優選，烷基具有1到6個碳原子。
這裡使用的術語「鏈烯基」是指具有2-20個碳原子的直鏈或支鏈基團，除非該鏈長度限於它，該基團包括但不限於，乙烯基，1-丙烯基，2-丙烯基，2-甲基-1-丙烯基，1-丁烯基，2-丁烯基，等等。優選，該鏈烯基鏈具有2-10個碳原子的長度，更優選，2到8個碳原子的長度和最優選2到4個碳原子的長度。
這裡使用的術語「炔基」是指具有2-20個碳原子的直鏈或支鏈基團，除非該鏈長度限於它，其中在鏈中的兩個碳原子之間有至少一個叄鍵，該基團包括但不限於，乙炔，1-丙烯，2-丙烯，等等。優選，該炔基鏈具有2-10個碳原子的長度，更優選，2到8個碳原子的長度和最優選2到4個碳原子的長度。
在有鏈烯基或炔基結構部分作為取代基團的所有情況下，該不飽和鍵，即亞乙烯基或炔鍵，優選不直接連接於氮，氧或硫結構部分上。
這裡使用的術語「烷氧基」是指鍵接到氧原子上的具有1到20個碳原子的直鏈或支鏈基團，除非該鏈長度限於它，該基團包括但不限於，甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，等等。優選該烷氧基鏈具有1-10個碳原子的長度，更優選1-8個碳原子的長度。
這裡其本身或作為另一個基團的一部分來使用的術語「芳基」是指在環部分中含有6-14個碳原子，優選在環部分中含有6-10個碳原子的單環或雙環族芳族基，如苯基，萘基或四氫萘基。
這裡使用的術語「雜芳基」是指具有5到14個環原子的基團；在環陣列中共享6，10或14個π電子；並含有碳原子和1，2或3個氧，氮或硫雜原子(其中雜芳基的例子是噻吩基，苯並[b]噻吩基，萘並[2，3-b]噻吩基，噻蒽基，呋喃基，吡喃基，異苯並呋喃基，苯並噁唑基，苯並吡喃基，呫噸基，phenoxathiinyl，2H-吡咯基，吡咯基，咪唑基，吡唑基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，中氮茚基，異氮雜茚基，3H-吲哚基，吲哚基，吲唑基，嘌呤基，4H-喹嗪基，異喹啉基，喹啉基，2，3-二氮雜萘基，萘啶基，喹唑啉基，噌啉基，喋啶基，4αH-咔唑基，咔唑基，β-咔啉基，菲啶基，吖啶基，萘嵌間二氮雜苯基，菲咯啉基，吩嗪基，異噻唑基，吩噻嗪基，異噁唑基，呋咱基和吩噁嗪基團)。
這裡其本身或作為另一個基團的一部分來使用的術語「芳烷基」或「芳基烷基」是指，C1-12烷基，優選C1-6烷基，如以上所討論的具有芳基取代基的基團，如苄基，苯基乙基或2-萘基甲基。
這裡其本身或作為另一個基團的一部分來使用的術語「環烷基」是指含有3-9個碳原子，優選3-7個碳原子的環烷基。典型實例是環丙基，環丁基，環戊基，環己基，環庚基，環辛基和環壬基。
該術語「C7-12二環烷基」希望包括雙環[2.2.1]庚基(降冰片基)，雙環[2.2.2]辛基，1，1，3-三甲基雙環[2.2.1]庚基(冰片基)，和類似基團。
該術語「C10-16三環烷基」希望包括三環[5，2，1，02，6]癸基，金剛烷基，等等。
這裡其本身或作為另一個基團的一部分來使用的術語「滷素」或「滷」是指氯，溴，氟或碘，其中氯和氟是優選的。
這裡其本身或作為另一個基團的一部分來使用的術語「單烷基胺」是指被具有1-12個、優選1-6個碳原子的一個烷基取代的氨基。
這裡其本身或作為另一個基團的一部分來使用的術語「二烷基胺」是指被各自具有1-12個、優選1-6個碳原子的兩個烷基取代的氨基。
這裡使用的術語「羥烷基」是指被一個或多個羥基結構部分取代的上述烷基中的任何一種。
這裡使用的術語「羧基烷基」是指被一個或多個羧酸結構部分取代的上述烷基中的任何一種。
這裡使用的術語「雜環」或「雜環族環」，若指出的則除外，表示穩定的5-到7-員單環族或二環族的或穩定的7-到10-員二環族的雜環族體系，其中任何一個環可以是飽和的或不飽和的，且它由碳原子和1至3個選自N、O和S中的雜原子組成，且其中該氮和硫雜原子可任選被氧化，且該氮雜原子可以任選是季銨化的，並且包括其中以上所定義的雜環族環中任何一個稠合到苯環上的任何雙環基團。尤其有用的是含有一個氧或硫，1-3個氮原子，或一個氧或硫連同一個或兩個氮原子的環。該雜環可以在任何雜原子或碳原子上連接，導致產生了穩定結構。此類雜環基團的例子包括哌啶基，哌嗪基，2-氧代哌嗪基，2-氧代哌啶基，2-氧代吡咯烷基，2-氧代吖庚因基，吖庚因基，吡咯基，4-哌啶酮基，吡咯烷基，吡唑基，吡唑烷基，咪唑基，咪唑啉基，咪唑烷基，吡啶基，吡嗪基，嘧啶基，噠嗪基，噁唑基，噁唑烷基，異噁唑基，異噁唑烷基，嗎啉基，噻唑基，噻唑烷基，異噻唑基，奎寧環基，異噻唑烷基，吲哚基，喹啉基，異喹啉基，苯並咪唑基，噻二唑基，苯並吡喃基，苯並噻唑基，苯並噁唑基，呋喃基，四氫呋喃基，四氫吡喃基，噻吩基，苯並噻吩基，硫雜嗎啉基，硫雜嗎啉基亞碸，硫雜嗎啉基碸，和噁二唑基。嗎啉代(morpholino)與嗎啉基(morpholinyl)相同。
這裡使用的術語「雜原子」是指氧原子(「O」)，硫原子(「S」)或氮原子(「N」)。可以認識到，當雜原子是氮時，它可以形式NRaRb結構部分，其中Ra和Rb彼此獨立地是氫或C1到C8烷基，或與它們所鍵接的氮一起形成飽和的或不飽和的5-，6-，或7-員環。
反應歷程1-8列出了通式I化合物的合成路線。
反應歷程1 在反應歷程1中，乙酸側鏈通過如下被引入到苯環上由氟化硝基苯1，如1，2，3-三氟-4-硝基苯，與取代或非取代的丙二酸酯如丙二酸二乙酯的金屬鹽在合適溶劑如四氫呋喃(THF)中反應，隨後進行酸水解和在加熱下進行脫羧，生產出化合物2(Yokomoto，M，W.，等人，EP出版專利申請No.0470578A1(1991))。化合物2的羧基在典型的還原條件如甲硼烷(BH3)-THF配合物和硼氫化鈉(NaBH4)下，在合適的溶劑如THF中被轉化成羥基，得到醇3(Yokomoto，M，W.等人，在同書的出處中)。在環上硝基的對位上合適官能團的引入可通過在化合物3中的氟被合適親核試劑如叔丁胺在合適溶劑如二甲亞碸(DMSO)和甲苯中在回流條件下的芳族親核取代來實現，獲得化合物4(Yokomoto，M，W.，等人，在同書的出處)。在化合物4中的氮保護基如叔丁基是在標準條件如在回流下的濃鹽酸(HCl)中被除去，得到化合物5(Yokomoto，M，W.，等人，在同書的出處)。化合物5的羥基在本技術領域中公知的標準條件下(Greene，T.W.，和Wuts，P.G.M.，Protecting Groups in Organic Synthesis，第二版，John Wiley and Sons，Inc.，New York(1991))下用合適的保護基如乙醯基加以封閉，如在二氯甲烷(DCM)中的乙醯氯在鹼如三乙胺或二異丙基乙胺(DIEA)存在下，得到化合物6。活化羰基化合物ACOCl與化合物6在合適的溶劑如DCM中的偶合，生產化合物7。
反應歷程2 在反應歷程2中，芳基硝基化合物7在典型條件下的還原，如在鈀/活性炭存在下在乙醇或甲醇中用氫的催化氫化，得到芳基胺8。化合物8的乙醯基保護基通過在鹼性條件下水解而被除去(為了在氨基調整之前提高化合物的溶解度)，如在甲醇中的碳酸鉀(K2CO3)水溶液，以釋放該保護的羥基，得到化合物9。所希望的R6通過如下被引入到化合物9的中心搭交手(scaffold)中通過用合適試劑如亞硝酸鈉(NaNO2)和HCl，隨後用銅(I)氯化物(CuCl)的Sandmeyer型反應((a)Gunstone，F.D.，等人，Org.Syn.Collect vol.1，Wiley，NewYork，N.Y.(1941)，170頁；(b)Yokomoto，M，W.，等人，EP出版專利申請No.0470578A1(1991))，或通過用合適試劑如叔丁基亞硝酸酯(t-BuONO)和銅(II)氯化物(CuCl2)的取代性脫氨基作用(Doyle，M.P.，等人，J.Org.Chem.422426(1977))，得到化合物10。芳基胺9的氨基能夠在碳-碳偶合條件下在鈀催化劑存在下通過芳烴重氮鹽中間體(arenediazonium salt intermediate)而轉化成甲基(Kikukawa，K.，等人，J.Org.Chem.481333(1983))。化合物10進而用合適的還原劑如BH3來還原，產生其中Y是-NH-的化合物11的所需片段WY。化合物11用氧化劑如三氧化硫吡啶配合物(SO3·吡啶)在DCM中的氧化，得到醛12。目標化合物的中心和左片段的構造最終是通過在合適氧化條件下，如亞氯酸鈉(NaClO2)在磷酸二氫鈉(NaH2PO4)和DMSO存在下，醛12進一步氧化成羧酸13來實現的(Dalcanale，E.，等人，J.Org.Chem.51567(1986))。
反應歷程3 在反應歷程3中，酸13與合適的胺14，如受保護的O-胍基胺(Tianbao Lu，等人，WO99/26926(1999))，或氨基吡啶基胺(Sanderson，P.E.，等人，WO97/01338(1997))在典型的肽偶合劑如Castro氏試劑(BOP)和鹼如DIEA存在下，在合適的溶劑如N，N-二甲基甲醯胺(DMF)中偶合，生產醯胺15。任選地，保護基如叔-(丁氧基)羰基(Boc)，能夠在典型的去保護條件下，如在DCM中三氟乙酸(TFA)溶液(當B是O-胍時)，或在1，4-二噁烷中的HCl溶液(當B是氨基吡啶時)，被除去而分別產生游離O-胍，或氨基吡啶。
反應歷程4 在反應歷程4中，苯基乙酸衍生物16通過使用標準條件，如在濃硫酸中的96％硝酸，在苯環的間位上硝化(Sindelar等人，Coll.Czechoslov.Chem.Commun.422231(1977))，得到硝基化合物17。化合物17的羧酸基團然後通過使用本技術領域中已知的標準條件加以保護(Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，Protective Groups inOrganic Synthesis，第二版，John Wiley and Sons，NewYork(1991))，如通過與草醯氯反應和隨後與醇POH反應而轉化成酯，獲得酯18(其中P是典型的羧酸保護基)。硝基的還原通過使用合適的試劑如錫(II)氯化物，在合適溶劑如乙醇中來實現，然後，所獲得的胺19與醯化劑(W＝R1C(O))或磺醯化劑(W＝R1S(O)2)如苄基磺醯氯，和合適的鹼如N-甲基嗎啉，在溶劑如DCM中反應，得到N-取代-氨基苯基乙酸酯20(Y＝-NH-)。該羧酸基團通過使用本技術領域中公知的標準條件(Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，Protective Groupsin Organic Synthesis，第二版，John Wiley and Sons，NewYork(1991))，如用氫氧化物水溶液水解，加以去保護，得到酸13(Y＝-NH-)。它然後與胺14偶合和去保護，與反應歷程3中一樣，生產苯基乙醯胺15(Y＝NH)。
反應歷程5
在反應歷程5中，硝基苯基乙酸17通過使用標準肽偶合程序，與反應歷程3中一樣，偶合到氨基醇21如乙醇胺上，得到醇22。該醇通過使用標準試劑(Mitsunobu，O.，Synthesis 11(1981))，如三苯基膦和偶氮二羧酸二乙基酯，在合適的溶劑如THF中偶合到N-羥基鄰苯二甲醯亞胺上而轉化成受保護的烷氧基胺，獲得化合物23，它然後在典型的還原條件下，如在鈀(O)/炭催化劑上的氫化，在合適溶劑如乙醇中被轉化成苯胺24。該胺然後與反應歷程4中一樣被醯化或磺醯化得到中間體25，和該烷氧基胺通過使用本技術領域中公知的標準條件(Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，ProtectiveGroups in Organic Synthesis，第二版，John Wiley and Sons，New York(1991))，如在乙醇/THF中的含水甲胺，進行去保護。所獲得的烷氧基胺26的胍基化是用標準胍基化試劑如N，N』-雙(叔丁氧基羰基)-S-甲基硫脲(Bergeron，R.J.和McManis，J.S.，J.Org.Chem.521700(1987))或N-Ra-N』-Rb，Rc-1H-吡唑-1-氨代甲醯胺(Bernatowicz，M.S.等人，Tetrahedron Lett.343389(1993))來完成的，然後該胍任選與反應歷程3中一樣進行去保護，得到最終的目標化合物27。
反應歷程6 在反應歷程6中，該酮、醛(R11＝H)或羧酸(R11＝OH)起始原料28用合適試劑如甲硼烷-THF還原而得醇29，它然後通過在合適溶劑如DCM中與磺醯氯如甲磺醯氯反應而轉化成更佳的離去基團，生產化合物30。該磺酸根在標準條件下被置換，如在回流乙腈中的氰化鉀，得到腈31，它然後用典型的試劑如氫氧化物水溶液水解。所獲得的酸17與胺14的偶合是與反應歷程3中一樣完成的，得到中間體32，和該硝基與反應歷程4或5中一樣被還原而獲得苯胺33。它與反應歷程4中一樣被醯化或磺醯化，該胍任選地與反應歷程3中一樣去保護，得到最終目標化合物15(Y＝NH)。
反應歷程7 在反應歷程7中，硝基苯酚34用烯丙基滷35和合適的鹼如碳酸銫在極性非質子傳遞溶劑如DMF中加以烷基化而得到中間體36，它然後通過加熱經由芳族克萊森重排作用(aromatic Claisenrearrangement)而轉化成化合物37。該苯酚通過使用典型的試劑如苄基溴和碳酸銫在溶劑如DMF中加以保護，得到38(其中P是典型的羥基保護基)和該硝基與反應歷程4或5中一樣加以還原而生產苯胺39。苯胺39與反應歷程4中一樣被轉化為中間體40，該烯烴通過使用標準條件，如在二噁烷/水中的高碘酸鈉和四氧化鋨，隨後使用瓊斯試劑(Jones reagent)，而被氧化性分裂，得到酸41。它然後偶合到胺14上，該胍任選按照反應歷程3進行去保護，和酚基團任選使用標準條件進行去保護，如在合適溶劑如乙醇中在鈀(O)/炭上的氫化，得到目標化合物42。
反應歷程8 在反應歷程8中，單-保護的兒茶酚43用試劑W-Cl如間-甲苯磺醯氯，在溶劑如DCM中，在鹼如三乙胺存在下，進行磺醯化，得到化合物44。該保護基通過使用標準條件，如在DCM中三溴化硼而被除去，然後所獲得的酚45用烯丙基滷35烷基化得到46，重排為酚47，然後按照反應歷程7加以保護而獲得中間體48。該烯烴通過使用標準條件，如在乙腈/水中的高碘酸鈉和釕(III)氯化物(Ashby，E.C.和Goel，A.B.，J.Org.Chem.463936(1981))，隨後使用瓊斯試劑，進行分解性分裂，得到酸49，它然後與胺14偶合和任選按照反應歷程3和7進行去保護而獲得目標化合物50。
通式I的化合物的可藥用鹽(水溶性或油溶性或可分散的產品)包括從無機或有機酸或鹼形成的普通的無毒的鹽或季銨鹽。此類酸加合鹽的例子包括乙酸鹽，己二酸鹽，藻酸鹽，天冬氨酸鹽，苯甲酸鹽，苯磺酸鹽，硫酸氫鹽，丁酸鹽，檸檬酸鹽，樟腦酸鹽，樟腦磺酸鹽，環戊烷丙酸鹽，二葡萄糖酸鹽，十二烷基硫酸鹽，乙烷磺酸鹽，富馬酸鹽，葡庚糖酸鹽，甘油磷酸鹽，半硫酸鹽，庚酸鹽，己酸鹽，鹽酸鹽，氫溴酸鹽，氫碘酸鹽，2-羥基乙烷磺酸鹽，乳酸鹽，馬來酸鹽，甲磺酸鹽，2-萘磺酸鹽，煙酸鹽，硝酸鹽，草酸鹽，雙羥萘酸鹽，果膠酯酸鹽(pectinate)，過硫酸鹽，3-苯基丙酸鹽，苦酸鹽，新戊酸酯，丙酸鹽，琥珀酸鹽，硫酸鹽，酒石酸鹽，硫氰酸鹽，甲苯磺酸鹽，三氟乙酸鹽，和十一烷酸鹽。鹼鹽包括銨鹽，鹼金屬鹽如鈉和鉀鹽，鹼土金屬鹽如鈣和鎂鹽，與有機鹼形成的鹽如二環己基胺鹽，N-甲基-D-葡糖胺，和與胺基酸如精氨酸、賴氨酸等形成的鹽，其中包括具有胍基結構部分的鹽。同時，鹼性含氮的基團可以用試劑來季銨化，如低級烷基滷，如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯象二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯；長鏈滷化物如癸基、月桂基、肉豆蔻基和硬脂醯氯化物、溴化物和碘化物；芳烷基滷化物像苄基和苯乙基溴化物以及其它類似物。用於形成酸加合鹽的優選酸包括HCl，乙酸和三氟乙酸。
本發明的化合物代表了金屬，酸，硫醇和絲氨酸蛋白酶類的新型高效抑制劑。被本發明範圍內的化合物所抑制的絲氨酸蛋白酶的例子包括白細胞嗜中性白細胞彈性蛋白酶，在肺氣腫的致病中有牽連的蛋白水解酶；糜蛋白酶和胰蛋白酶，消化酶；胰彈性蛋白酶，和組織蛋白酶G，也與白細胞有關的糜蛋白酶狀蛋白酶；凝血酶和因子Xa，按照血液凝固途徑的蛋白水解酶。嗜熱菌蛋白酶，金屬蛋白酶，和胃蛋白酶，酸性蛋白酶的抑制也可以考慮使用本發明的化合物。本發明的化合物優選用於抑制胰蛋白酶狀蛋白酶類。
對於它們的最終應用，本發明化合物的酶-抑制特性的效力和其它生化參數能夠容易地通過所屬技術領域中那些技術人員已知的標準生物化學技術來確定。例如，抑制糜蛋白酶和胰蛋白酶的化合物的最終用途是用於治療胰腺炎。對於它們的特定最終應用來說的實際劑量範圍當然取決於所要治療的病人或動物的疾病症狀的性質和嚴重性，這可由主治診斷醫生來確定。可以預期的是，為了獲得有效的治療效果，有用的劑量範圍是大約0.01-10mg/kg/天。
以它們的抑制凝血酶的能力而表現突出的本發明化合物可以用於許多治療目的。作為凝血酶抑制劑，本發明的化合物可以抑制凝血酶產生。因此，這些化合物可用於治療或預防以牽涉到凝血酶產生或作用的異常靜脈或動脈血栓形成為特徵的症狀。這些症狀包括，但不限於，深靜脈血栓形成；在膿毒性休克、病毒感染和癌過程中發生的傳播的血管內凝血病；心肌梗塞；中風；冠狀動脈分流術；在眼睛中的血纖蛋白形成；髖置換；以及從溶血栓療法或經皮冠狀動脈成形術(PCTA)引起的血栓形成。其它用途包括該凝血酶抑制劑作為被包埋於或以物理方式連接於材料中的抗凝劑的用途，該材料用於製造在血液收集、血液循環和血液儲存中使用的裝置，如導管，血液透析機，血收集注射器和管，以及血線。本發明的化合物也可在體外的血液迴路中用作抗凝劑。
支架(Stents)已經顯示會減少再狹窄，但卻是發生血栓的。減少支架的血栓形成性的策略是將凝血酶抑制劑塗敷、包埋、吸附或以共價鍵方式附著於支架表面上。本發明的化合物能夠用於這一目的。本發明的化合物能夠附著於，或包埋在可溶性和/或可生物降解的聚合物中，已塗敷在支架材料上和其後塗敷在支架材料上。此類聚合物能夠包括聚乙烯吡咯烷酮，聚羥基丙基甲基丙烯醯胺-苯酚，聚羥乙基-天冬醯胺-苯酚，或被棕櫚醯殘基取代的聚氧化乙烯-聚賴氨酸，聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物，聚ε-己內酯，多羥基丁酸，聚原酸酯(polyorthoesters)，聚縮醛類，聚二氫吡喃，聚氰基丙烯酸酯以及水凝膠的交聯的或兩親性的嵌段共聚物。參見歐洲申請761251，歐洲申請604,022，加拿大專利No.2,164,684和PCT出版申請WO96/11668，WO96/32143和WO96/38136。
利用凝血酶對於大量細胞類型如平滑肌細胞、內皮細胞和嗜中性粒細胞的效果，本發明的化合物發現另外可用於治療或預防成人呼吸窘迫症候群；炎症應答；傷口癒合；再灌注損害；動脈粥樣硬化；和在諸如球囊血管成形術、動脈粥樣硬化斑塊切除術和動脈支架置放之類的損害之後的血管再狹窄。
本發明的化合物可用於治療腫瘤形成和轉移以及神經變性疾病如阿爾茨海默氏病和帕金森氏病。
當用作凝血酶抑制劑時，本發明的化合物能夠以大約0.1-大約500mg/kg，優選在0.1-10mg/kg體重之間的劑量範圍內的有效量給藥，按照單次或2-4均分日劑量的給藥方式。
當用作凝血酶的抑制劑時，本發明的化合物可以與溶栓劑如組織纖溶酶原激活物，鏈激酶，和尿激酶相結合使用。另外，本發明的化合物可以與其它抗血栓形成的或抗凝血藥物聯用，該藥物例如是，但不限於，纖維蛋白原拮抗藥和促血栓素受體拮抗劑。
該凝血酶抑制劑也可與作為靶藥物載體的可溶性聚合物偶合。此類聚合物能夠包括聚乙烯吡咯烷酮，吡喃共聚物，聚羥基-聚甲基丙烯醯胺-苯酚，聚羥乙基-天冬醯胺-苯酚，或聚氧化乙烯-被棕櫚醯殘基取代的聚賴氨酸。此外，該凝血酶抑制劑可以偶合到可用於實現藥物的控制釋放的一類可生物降解的聚合物上，例如，聚乳酸，聚乙醇酸，聚乳酸和聚乙醇酸的共聚物，聚ε-己內酯，聚羥基丁酸，聚原酸酯，聚縮醛類，聚二氫吡喃，聚氰基丙烯酸酯以及水凝膠的交聯的或兩親性的嵌段共聚物。
人白細胞彈性蛋白酶是在炎症部位被多形核白細胞所釋放，因此是許多疾病症狀的病因。本發明的化合物預計具有消炎作用，可用於痛風、類風溼性關節炎和其它炎症疾病的治療中，和用於肺氣腫的治療中。本發明的化合物的白細胞彈性蛋白酶抑制性質可通過上述方法測定。組織蛋白酶G也在關節炎，痛風和肺氣腫的疾病症狀中，和另外在腎小球腎炎和由肺部感染引起的肺感染中有牽連。在它們的最終應用中，通式I化合物的酶抑制性質容易通過本技術領域中公知的標準生物化學技術來確定。
在本發明範圍內的化合物的組織蛋白酶G抑制性質可通過下述方法測定。部分地提純的人組織蛋白酶G的製劑是通過Baugh等人，Biochemistry 15836(1979)的程序獲得的。白細胞顆粒是白細胞彈性蛋白酶和組織蛋白酶G(糜蛋白酶狀活性)的製備的主要來源。白細胞被溶解和分離出顆粒物。該白細胞顆粒用0.20M乙酸鈉(pH4.0)萃取，和萃取物對於含有0.05M NaCl的0.05M三羥甲基氨基甲烷緩衝液(Tris buffer，pH8.0)在4℃下滲析一夜。在滲析過程中蛋白質級分發生沉澱，然後通過離心來分離。這一級分含有大部分的白細胞顆粒的糜蛋白酶狀活性。
為每種酶製備特定的底物即N-Suc-Ala-Ala-Pro-Val-對-硝基苯胺和Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-對-硝基苯胺。後者不被白細胞彈性蛋白酶所水解。酶製劑是在含有0.50M NaCl，10％二甲亞碸和0.0020M作為底物的Suc-Ala-Ala-Pro-Phe-對-硝基苯胺的2.00mL的0.10MHepes緩衝液(pH7.5)中試驗。該對-硝基苯胺底物的水解是在405nm和25℃下監測的。
本發明的化合物作為嗜中性粒細胞彈性蛋白酶抑制劑和作為組織蛋白酶G抑制劑的有用的給藥劑量範圍取決於由主治醫生確定的疾病症狀的性質和嚴重程度，其中0.01-10mg/kg體重/天的範圍可用於上述疾病症狀抑制尿激酶或纖溶酶原激活物的本發明的化合物可有效地用於治療過度細胞生長疾病。照這樣，本發明的化合物也可用於治療良性前列腺肥大和前列腺癌，治療牛皮癬，和作為墮胎藥。對於它們的最終應用，本發明化合物的酶-抑制特性的效力和其它生化參數能夠容易地通過所屬技術領域中那些技術人員公知的標準生物化學技術來確定。對於這一用途來說的實際劑量範圍取決於所要治療的病人或動物的疾病症狀的性質和嚴重性，這由主治診斷醫生來確定。可以預期的是，為了獲得有效的治療效果，一般的劑量範圍是大約0.01-10mg/kg/天。
本發明的化合物的附加用途包括商購試劑酶對於活性部位濃度的分析。例如，糜蛋白酶是作為用於在胰液和糞便中糜蛋白酶活性的臨床定量分析中的標準試劑來提供。這樣的試驗是對於胃腸和胰腺異常的診斷。胰彈性蛋白酶也在商業上作為在血漿中α1-抗胰蛋白酶的定量用試劑來提供。在幾種炎症疾病的過程中血漿α1-抗胰蛋白酶會提高濃度，而且α1-抗胰蛋白酶缺乏與肺疾病的增加發生有關。本發明的化合物可用於通過作為試劑提供的商購彈性蛋白酶的滴定分析標準化，來增強這些分析的精確性和可再現性。參見，U.S.專利No.4,499,082。
在特殊蛋白質的提純過程中在某些蛋白質萃取物中蛋白酶活性是重複性(recurring)問題，它使蛋白質離析程序的結果變複雜和損害該結果。在該萃取物中存在的某些蛋白酶類能夠在提純步驟中通過本發明的化合物來抑制，它們緊密地結合於各種蛋白水解酶上。
本發明的藥物組合物能夠施用於可獲得本發明化合物的有益效果的任何動物。這些動物當中最重要的是人，雖然本發明不希望這樣限定。
本發明的藥物組合物能夠通過實現它們的預定目的的任何方式來給藥。例如，給藥途徑是非腸道的，皮下的，靜脈內的，肌內的，腹膜內的，透皮的，透頰的，或經眼途徑。另外地或同時，可通過口服途徑來給藥。給藥的劑量取決於接受者的年齡、健康狀況和體重，同時治療的類型，如果有的話，治療頻率，和所希望效果的性質。
除了藥理活性化合物之外，該新型藥物製劑能夠含有合適的藥用載體，後者包括有利於活性化合物加工成能夠藥用的製劑的賦形劑和助劑。
本發明的藥物製劑是按照本身已知的方式，例如，利用普通的混合，造粒，糖衣丸製造，溶解，或凍幹工藝來製造。因此，口服的藥物製劑能夠通過將活性化合物與固體賦形劑摻混，任選將所獲得的混合物研磨和將顆粒的混合物(如果希望或需要，在添加合適助劑之後)加工獲得藥片或糖衣丸芯，而獲得。
為了使本發明的組合物適合施用於人，該術語「賦形劑」旨在包括，但不限於，在Handbook of Pharmaceutical Excipients，American Pharmaceutical Association，第二版(1994)中描述的那些賦形劑，該文獻以其全部內容被引入供參考。合適的賦形劑是，尤其，填料如糖類，例如，乳糖或蔗糖，甘露糖醇或山梨糖醇，纖維素製劑和/或磷酸鈣，例如，磷酸三鈣或磷酸氫鈣，以及粘結劑，如，澱粉糊，使用，例如，玉米澱粉，小麥澱粉，大米澱粉，馬鈴薯澱粉，明膠，黃芪膠，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，和/或聚乙烯基吡咯烷酮。如果需要，能夠添加崩解劑，如，上述澱粉以及羧甲基澱粉，交聯的聚乙烯基吡咯烷酮，瓊脂，或藻酸或它的鹽，如，藻酸鈉。助劑，最主要的是，是流動調節劑和潤滑劑，例如，矽石，滑石，硬脂酸或它的鹽，如硬脂酸鎂或硬脂酸鈣，和/或聚乙二醇。糖衣丸芯被提供了合適的塗層，如果需要，它是耐胃液的。為此目的，能夠使用濃的糖溶液，它可以任選含有阿拉伯樹膠，滑石，聚乙烯基吡咯烷酮，聚乙二醇，和/或二氧化鈦，硝基纖維素(lacquer)溶液和合適的有機溶劑或溶劑混合物。為了生產耐胃液的塗層，可使用合適纖維素製劑如乙醯纖維素鄰苯二甲酸酯或羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯的溶液。染料或顏料能夠被加入到藥片或糖衣丸塗層中，例如，為了鑑別或為了表徵活性化合物劑量的結合。
可口服的其它藥物製劑包括由明膠製備的推入配合式膠囊，以及由明膠和增塑劑如甘油或山梨糖醇製成的軟、密封膠囊。該推入配合式膠囊能夠含有顆粒形式的活性化合物，它可以與填料如乳糖，粘結劑如澱粉，和/或潤滑劑如滑石或硬脂酸鎂，和任選的穩定劑混合。在軟膠囊中，該活性化合物優選溶解或懸浮在合適的液體如脂肪油或液體石蠟中。另外，可以添加穩定劑。
腸胃外投藥的合適配製劑包括水溶性形式，例如水溶性鹽，鹼溶液和環糊精包合配合物中的活性化合物的水溶液。尤其優選的鹼鹽是例如用Tris，膽鹼氫氧化物，Bis-Tris丙烷，N-甲基葡糖胺或精氨酸製備的銨鹽。一種或多種改性或未改性的環糊精能夠用於穩定和提高本發明的化合物的水溶性。用於這一目的的有用的環糊精公開於US專利No4,727,064，4,764,604和5,024,998中。
另外，作為合適的油性注射懸浮液的活性化合物懸浮液能夠給藥。合適的親脂性溶劑或媒介物包括脂肪油，例如，芝麻油，或合成脂肪酸酯類，例如，油酸乙酯或三酸甘油酯或聚乙二醇-400(化合物可溶於PEG-400中)。水性注射懸浮液能夠含有會提高懸浮液的粘度的物質，例如羧甲基纖維素鈉，山梨糖醇，和/或右旋糖酐。任選地，該懸浮液也可含有穩定劑。
通式I的化合物能夠通過使用交換反應用放射性碘來標記。把熱碘換成冷碘是本技術領域中公知的。另外地，放射性碘標記的化合物能夠經三丁基甲錫烷基中間體從相應溴化合物製備。參見，美國專利No.5,122,361，引入這裡供參考。
本發明還包括用於在哺乳動物體內血栓的體內成象的組合物，其中該組合物是由與放射性原子配位的通式I的化合物組成。
對於通式I的化合物，合適的放射性原子包括Co-57，Cu-67，Ga-67，Ga-68，Ru-97，Tc-99m，In-111，In-113m，Hg-197，Au-198，和Pb-203。一些放射性原子具有優異的性質，可用於放射化學成象技術中。尤其，鎝-99m(Tc-99m)是成象的理想放射性原子，因為它的原子核性質。錸-186和-188也有γ發射，可以用於成象。優選的組合物含有該放射性原子，Tc-99m。
通式I的化合物能夠通過本技術領域中已知的許多技術當中的任何一種來標記，以提供本發明的組合物。例如，這些化合物能夠通過螯合劑如二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)或金屬硫因來標記，兩者都能夠以共價鍵方式連接於通式I的化合物上。
通常，含有鎝-99m的本發明的組合物是通過形成鎝-99m和還原劑和水溶性配位體的水性混合物，然後讓混合物與由通式I表示的本發明化合物接觸來製備。例如，本發明的成象化合物是通過讓鎝-99m(在氧化狀態)與具有螯合單元的本發明化合物在還原劑存在下反應，在還原狀態(IV或V價態)下的鎝-99m之間形成穩定配合物來製備。
本發明的組合物的一個實例是通過用鎝-99m標記具有DTPA螯合單元的通式I化合物來製備的。這可通過將預定量(作為5μg到0.5mg)的本發明化合物與含有檸檬酸鹽緩衝劑和亞錫類還原劑的水溶液混合，然後添加含有預定水平的放射性(作為15mCi)的新洗脫的高鎝酸鈉，來實現。在混合物在室溫下培養後，經滅菌過濾器(0.2-0.22微米)將反應混合物裝入防護的注射器中，然後，如果需要，分配到0.9％注射鹽水中。
本發明的組合物的另一個實例是通過用鎝-99m標記具有金屬硫因螯合單元的通式I化合物來製備的。這可通過如下來實現將高鎝酸鈉-99m水溶液與葡庚糖酸亞錫鹽水溶液混合而形成了有兩個葡庚糖酸鹽分子的鎝-99m(還原狀態)的可溶性配合物，然後將這一溶液與已連接了金屬硫因的通式I化合物摻混。在允許鎝-99m從葡庚糖酸鹽配合物交換到通式I化合物的金屬硫因中的條件下將混合物培養一段時間後，形成了本發明的鎝-標記的組合物。
用於該方法中的還原劑是在藥理學上可接受被用於將鎝-99m從它的氧化態還原到IV或V價態或用於將錸從它的氧化態還原。能夠使用的還原劑是氯化亞錫，氟化亞錫，葡庚糖酸亞錫，酒石酸亞錫，和連二亞硫酸鈉。該優選的試劑是亞錫還原劑，尤其氯化亞錫或葡庚糖酸亞錫。還原劑的量是為了將鎝-99m還原以便在這一放射性同位素的還原狀態下結合於通式I化合物的螯合單元上所需要的量。例如，氯化亞錫(SnCl2)是還原劑和能夠以1-1,000μg/ml範圍使用。
檸檬酸與鎝-99m快速到配合而形成穩定的鎝-99m-檸檬酸鹽配合物。在與通式I的化合物接觸之後，快速地和在溫和條件下實現了鎝-99m從它的檸檬酸鹽配合物中到通式I的化合物的螯合單元上的大體上定量的轉移。檸檬酸(作為檸檬酸鈉)的量能夠是大約0.5mg/ml到最大限度地可溶於該介質中的量。檸檬酸的優選的量是15-30μg/ml。
具有螯合單元的通式I的化合物的量能夠是0.001-大約3mg/mL，優選大約0.017到大約0.15mg/mL。最後，高鎝酸鹽形式的鎝-99m能夠以優選大約1-50mCi的量使用。每mg本發明化合物而言mCi的量優選是大約30-150。
在通式I的化合物和金屬離子轉移配位體配合物之間的反應優選是在通式I化合物保持穩定的pH下在水溶液中進行。「穩定」是指化合物保持為可溶解的並保留它的抵抗α-凝血酶的抑制活性。正常地，反應的pH是大約5到9，該優選的pH是在大於6到8範圍內。鎝-99m-檸檬酸鹽配合物和通式I化合物，優選在大約20℃到大約60℃，最優選大約20℃到大約37℃的溫度下，被培養一段足夠量的時間，以使金屬離子從檸檬酸鹽配合物中轉移到通式I的化合物的螯合單元中。通常，在這些條件下低於一個小時就足夠完成該轉移反應。
本發明的另一供選擇的組合物包括本發明的In-111標記化合物。
本發明還包括本發明的化合物的組合物，它用於在哺乳動物體內的血栓的活體內成象，由配合到順磁性原子上的通式I表示的化合物組成。
優選的順磁性原子是具有21到29，42，44和58到70的原子序數的元素的二價或三價離子。合適的離子包括鉻(III)，錳(II)，鐵(III)，鐵(II)，鈷(II)，鎳(II)，銅(II)，鐠(III)，釹(III)，釤(III)和鐿(III)。因為它們的非常強烈的磁矩，釓(III)，鋱(III)，鏑(III)，鈥(III)，和鉺(III)是優選的。對於順磁性原子而言的尤其優選的是釓(III)。
本發明的組合物可以通過將通式I的化合物與順磁性原子相結合來製備。例如，將合適的順磁性原子的金屬氧化物或金屬鹽(例如，硝酸鹽，氯化物或硫酸鹽)溶於或懸浮於由水和醇如甲醇，乙醇或異丙醇組成的介質中。這一混合物被加入到等摩爾量的通式I化合物在類似含水介質中的溶液中並加以攪拌。反應混合物可以適度地加熱，直到該反應完成為止。所形成的不溶性組合物可由過濾來分離，而可溶解的組合物可以通過溶劑的蒸發來分離。如果在螯合單元上的酸基仍然存在於本發明的組合物中，則可將無機或有機鹼，和甚至胺基酸，加入以便將酸性配合物轉化成中性配合物，有利於同質的組合物的分離或提純。有機鹼或鹼性胺基酸可以用作中和劑，以及無機鹼如鈉，鉀或鋰的氫氧化物，碳酸鹽或碳酸氫鹽。
本發明還包括用於哺乳動物的血栓的體內成象的診斷組合物，該組合物包括可藥用的載體和診斷有效量的從通式I化合物形成的組合物。
為了劑量給藥所需要的組合物的「診斷有效量」將取決於給藥途徑，所要治療的哺乳動物的類型，和在考慮之中的特定的哺乳動物的生理特徵。確定這一劑量的這些因素和它們的關係是在醫學診斷領域中的熟練執業醫生所公知的。同時，診斷有效量和給藥方法能夠加以調整以適合獲得最佳功效，但取決於諸如體重，日常飲食，同時發生的藥物治療和在醫學領域中執業醫生了解的其它因素之類的因素。在任何情況下，成象的劑量應該足以檢測到在所述血栓的位置中成象劑的存在。典型地，放射成象將會要求由本發明的藥物組合物所提供的劑量是大約5到20μCi，優選大約10μCi。核磁共振成象將要求所提供的劑量是大約0.001到5mmol/kg，優選大約0.005到0.5mmol/kg的與順磁性原子配合的通式I化合物。在任一種情況下，本技術領域中都知道該實際劑量取決於血栓的位置。
活體內使用的「可藥用的載體」是藥物領域中公知的，並描述在，例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Co.(A.R.Gennaro編，1985)。本發明的藥物組合物可用藥用載體配製以獲得供注射給藥用的無菌溶液或懸浮液。尤其，注射劑能夠以普通的形式(作為液體溶液或懸浮液)，適合在注射之前溶解或懸浮在液體中的固體形式，或作為乳液形式製得。合適的賦形劑是，例如，水，鹽水，葡萄糖，甘露糖醇，乳糖，卵磷脂，清蛋白，穀氨酸鈉，半胱氨酸鹽酸鹽，等等。另外，如果需要，可注射的藥物組合物可以含有少量的無毒的輔助物質，如潤溼劑，pH緩衝劑，等等。如果需要，可以使用吸收增強制劑(例如，脂質體)。
本發明還包括為貯存或給藥所製備的診斷組合物。這些另外含有防腐劑，穩定劑和染料。例如，苯甲酸鈉，山梨酸和對-羥基苯甲酸酯類可作為防腐劑添加。Id.at1449。另外，抗氧化劑和懸浮劑都可以使用。
本發明的活體內成象方法也提供了與檢測或監測血栓的存在，尺寸，退化或增大的現有成象技術相比的幾個優點。尤其，本發明提供化合物，組合物和診斷組合物，它們緊密地結合於與血栓有關的凝血酶上和因此減少了起因於未結合的成象劑的循環放射性或順磁性所造成的「背景」。此外，通過本發明的化合物，組合物或診斷組合物的冠內注射(intracoronary injection)的活體內成象預計幾乎是瞬間的，因為這些成象劑即刻飽和了結合於血栓上的凝血酶。
因此，本發明還包括用於哺乳動物中血栓的活體內成象的方法，包括以下步驟(1)對於哺乳動物給予診斷可接受量的本發明的化合物，組合物，或診斷組合物和(2)檢測在血管內的血栓。
這裡使用的術語「活體內成象」涉及檢測哺乳動物體內的血栓，以及監測哺乳動物體內血栓的尺寸、位置和數量的監測及血栓的溶解或生長的方法。
在由這一方法在活體內使用化合物，組合物或診斷組合物時，「給藥」是按系統或局部目標方式經胃腸外途徑完成。系統給藥是通過將本發明的化合物、組合物或診斷組合物注射到適當的和可進入的靜脈或動脈中來完成。這包括但不限於由ankecubutal靜脈的給藥。局部的目標給藥是通過將本發明的化合物，組合物或診斷組合物，在流入的近側注射到被懷疑在注射部位的遠側含有血栓的靜脈或動脈中。這包括但不限於直接注入該冠狀動脈的脈管系統來使冠狀血栓成象，注入頸動脈在腦的脈管系統中使血栓成象，或注入足靜脈使腿的深靜脈血栓形成成象。
同時，本發明的組合物分配到血栓位置的方式也被考慮在術語「給藥」的範圍內。例如，連接了螯合單元的由通式I表示的化合物可以注入到哺乳動物體內，隨後在以後的時間中注入放射性原子，因此在活體內在血栓位置形成了包括已配合於放射性原子上的通式化合物的組合物。另外地，包括已配合於放射性原子上的通式化合物的一種組合物可以注入到該哺乳動物體內。
前面提及的，在本發明的方法中使用的化合物，組合物或診斷組合物的「診斷有效量」，取決於給藥途徑，所要治療的哺乳動物的類型，和所要治療的特定哺乳動物的生理特徵。確定這一劑量的這些因素和它們的關係是在醫學診斷領域中的熟練執業醫生所公知的。在任何情況下，活體內成象的劑量應該足以檢測到在所述血栓的位置中成象劑的存在。典型地，放射成象將會要求由本發明的診斷組合物所提供的劑量是大約5到20μCi，優選大約10μCi。核磁共振成象將要求由診斷組合物所提供的劑量是大約0.001到5mmol/kg，優選大約0.005到0.5mmol/kg的與順磁性原子配合的通式I化合物。在任一種情況下，本技術領域中都知道該實際劑量取決於血栓的位置。
通過成象檢測血栓將因為位於該血栓處的放射性或順磁性原子的存在而成為可能。
與本發明的組合物和診斷組合物結合的的放射性原子優選通過使用能夠檢測γ輻射的放射性檢測設備如γ照相機等來成象。典型地，輻射成象照相機使用轉換介質(其中該高能量γ射線被吸收，置換電子，該電子在它回到軌道狀態之後發射光子)，空間檢測室中排列的光電檢測器(確定該發射光子的位置)，和用於分析在室中檢測到的光子並產生圖象的電路。
與本發明的組合物和診斷組合物結合的順磁性原子可在核磁共振成象(MRI)系統中檢測到。在這樣的系統中，強磁場用於校直排列在病人體內的原子的核自旋矢量。該場因為位於血栓的順磁性原子的存在而受幹擾，在核子回到它們的平衡校直排列(alignments)狀態時讀取了病人的圖像。
下列實施例是本發明的方法和組合物的舉例性質，但沒有限制意義。正常遇到的和為本技術領域中那些技術人員知曉的其它合適改進和各種條件和參數的調整是在本發明的精神和範圍內。
實施例實施例1N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯胺三氟乙酸鹽 1.2，2-二氟-2-苯基乙酸乙酯(Middleton，W.，等人，J.Org.Chem.422883(1980))。
PhCF2CO2Et將苯甲醯基甲酸乙酯(12.5g，70.0mmol)和(二乙基氨基)三氟化硫(DAST，18.5mL，140mmol)的混合物在環境溫度下攪拌48小時，然後傾倒於冰上。將所形成的油溶解到二氯甲烷(DCM)中，用H2O洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，再通過短矽膠柱過濾，用50％DCM/己烷洗脫。濃縮濾液，獲得了呈褐色液體的標題化合物(12.3g，88％收率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.65-7.63(m，2H)，7.52-7.43(m，3H)，4.30(q，J＝7.1Hz，2H)，1.30(t，J＝7.1Hz，3H)。
2.2，2-二氟-2-苯基乙酸PhCF2CO2H將在前一步驟中製備的2，2-二氟-2-苯基乙酸乙酯(6.0g，30mmol)在1N NaOH(36mL，36mmol)中的懸浮液在環境溫度下攪拌。在36小時後，反應變成幾乎均相。混合物用1N HCl(36mL)酸化，再用DCM萃取兩次。合併萃取物，用H2O洗滌，用Na2SO4乾燥，再濃縮，獲得呈淺黃色固體的標題化合物(3.85g，81％收率)，它在沒有進一步純化的情況下使用。
3.2，2-二氟-2-苯基乙醯氯PhCF2COCl向在冰浴中和在氬氣下的裝有在前一步驟中製備的2，2-二氟-2-苯基乙酸(0.8g，5.06mmol)的燒瓶添加草醯氯(5mL)，再將反應混合物攪拌15分鐘。添加二甲基甲醯胺(DMF)(37mg，0.506mmol)在DCM(0.5mL)中的溶液。在2小時後，移走冰浴，混合物繼續攪拌1小時。蒸發溶劑，添加DCM，然後在真空中蒸發，獲得了標題化合物(0.88g，98％收率)，它在沒有進一步純化的情況下立即使用。
4.2-(2，3-二氟-6-硝基苯基)乙酸(Yokomoto，M，W.，等人，1991，EP0470578A1) 在1小時內，向在冰浴中的NaH(11.3g，60％油分散體，282mmol)在四氫呋喃(THF)(35mL)中的懸浮液添加丙二酸二乙酯(45.2g，42.9mL，282mmol)在THF(70mL)中的溶液，使得反應溫度保持在20℃以下。一些白色固體在添加過程中沉澱。在1小時內，向以上反應混合物添加1，2，3-三氟-4-硝基苯(25.0g，141mmol)在THF(35mL)中的溶液，使得反應溫度保持在10℃以下。移走冰浴，將混合物在環境溫度攪拌2小時。將乙酸(18mL)加入到反應溶液中，再在減壓下蒸發THF。添加氯仿(200mL)，H2O(250mL)，和濃HCl(18mL)。分離有機層，濃縮，與4N HCI(45mL)和乙酸(35mL)混合，再回流14小時。讓反應混合物冷卻到室溫。過濾出在冷卻時沉澱的固體，用二異丙基醚洗滌，再溶解在MeOH(70mL)中。在用活性炭處理後，蒸發溶劑，結晶殘留物用異丙基醚洗滌，再過濾，獲得了呈白色固體的標題化合物(17.6g，58％收率)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.05-8.01(m，1H)，7.47(dd，J＝17.4，8.9Hz，1H)，4.10(s，2H)。
5.2-(2，3-二氟-6-硝基苯基)乙醇(Yokomoto，M，W.，等人，EP0470578A1(1991))。
經1小時向冷卻到10℃以下的NaBH4(3.60g，95.4mmol)在THF(12mL)中的混合物添加如前一步驟製備的2-(2，3-二氟-6-硝基苯基)乙酸(10.9g，50.2mmol)在THF(4mL)中的溶液。再經1小時，向該混合物添加三氟化硼二乙醚絡合物(16.5mL，131mmol)在THF(24mL)中的溶液，保持反應溫度在10℃以下。在反應後，反應物繼續在冰上攪拌15分鐘，然後在環境溫度下攪拌20分鐘。向DCM(180mL)和H2O(140mL)的混合物添加NaHCO3(15g，179mmol)。將反應混合物緩慢加入到以上NaHCO3溶液中，再攪拌一整夜。分離有機層，用Na2SO4乾燥，再濃縮，獲得了呈淺褐色油的標題化合物(10.1g，99％收率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.82(dd，J＝9.1，4.4Hz，1H)，7.27-7.18(m，1H)，3.95(t，J＝6.3Hz，2H)，3.30-3.27(m，2H)，1.82(s，1H)。
6.2-{3-[(叔丁基)氨基]-2-氟-6-硝基苯基}乙醇(Yokomoto，M，W.等人。EP0470578A1(1991))
將在前一步驟中製備的2-(2，3-二氟-6-硝基苯基)乙醇(6.00g，29.6mmol)，叔丁基胺(18.6mL，1.77mmol)，DMSO(30mL)，和甲苯(5mL)的混合物在回流下加熱16小時。在冷卻到環境溫度之後，將褐色溶液傾倒於H2O(300mL)中，再過濾沉澱的黃色晶體和用H2O洗滌兩次。將黃色固體溶解在CHCl3(70mL)中，用Na2SO4乾燥，濃縮，再從己烷中結晶出來，獲得呈黃色固體的標題化合物(4.70g，62％收率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.92(dd，J＝9.3，1.5Hz，1H)，6.79(t，J＝8.7Hz，1H)，4.69(brs，1H)，3.96(dd，J＝11.4，5.9Hz，2H)，3.32(dt，J＝6.5，3.1Hz，2H)，1.75(t，J＝5.3Hz，1H)，1.46(s，9H)。
7.2-(3-氨基-2-氟-6-硝基苯基)乙醇(Yokomoto，M，W.，等人。EP0470578A1(1991)) 將在前一步驟中製備的2-{3-[(叔丁基)氨基]-2-氟-6-硝基苯基}乙醇(3.9g，15mmol)在濃HCl(40mL)中的溶液回流2小時。在冷卻到室溫後，混合物用乙酸乙酯(6×50mL)萃取。合併萃取物，用飽和NaHCO3(2次)和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，再濃縮，獲得了呈固體的粗產物。固體在己烷中研磨，過濾，再在高度真空中乾燥，獲得了呈黃色固體的標題化合物(2.8g，93％收率)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ7.80(dd，J＝9.1，1.5Hz，1H)，6.70(t，J＝9.0Hz，1H)，3.77(t，J＝7.1Hz，2H)，3.26(dt，J＝7.3，2.8Hz，2H)。
8.2-(3-氨基-2-氟-6-硝基苯基)乙酸乙酯 向在冰浴中的DIEA(1.80mL，10.6mmol)和在前一步驟中製備的2-(3-氨基-2-氟-6-硝基苯基)乙醇(0.88g，4.40mmol)在THF(10mL)中的溶液添加乙醯氯(319μL，4.49mmol)在THF(5mL)中的溶液。在攪拌1.5小時後，移走冰浴，再將混合物在環境溫度下繼續攪拌一整夜。添加另外的乙醯氯(63μL，，0.88mmol)，再將混合物攪拌另外16小時。去除溶劑，讓混合物在DCM和H2O之間分配。分離有機層，以及含水層用DCM反萃取。合併有機層，用H2O洗滌(二次)，用Na2SO4乾燥，濃縮，再用矽膠急驟層析，用EtOAc/DCM(0，1，2，和5％)洗脫，獲得了呈黃色固體的標題化合物(0.73g，69％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.85(dd，J＝9.0，1.5Hz，1H)，6.68(t，J＝8.9Hz，1H)，4.38-4.35(m，4H)，3.38(dt，J＝6.6，2.8Hz，2H)，2.03(s，3H)。
9.2-[3-(2，2-二氟-2-苯基乙醯基氨基)-2-氟-6-硝基苯基]乙酸乙酯 向DIEA(1.49mL，8.55mmol)和如在前一步驟中製備的2-(3-氨基-2-氟-6-硝基苯基)乙酸乙酯(690mg，2.85mmol)在DCM(6mL)中的溶液添加根據實施例1的步驟3的工序製備的2，2-二氟-2-苯基乙醯氯(0.99g，5.20mmol)在DCM(3mL)中的溶液。在攪拌24小時後，濃縮混合物，再在DCM和H2O之間分配。分離有機層，含水層用DCM萃取。合併有機層，用H2O和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，再用矽膠進行急驟層析，用EtOAc/DCM(0，2.5，和5％)洗脫，獲得了呈橙色油的標題化合物(1.04g，92％收率)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.49-8.43(m，2H)，7.87(d，J＝9.2Hz，1H)，6.68(d，J＝7.1Hz，2H)，7.55-7.49(m，3H)，4.35(t，J＝6.4Hz，2H)，3.37(dt，J＝6.3，2.3Hz，2H)，2.01(s，3H)。
10.2-[2-氨基-5-(2，2-二氟-2-苯基乙醯基氨基)-6-氟苯基]乙酸乙酯 將在前一步驟獲得的2-[3-(2，2-二氟-2-苯基乙醯基氨基)-2-氟-6-硝基苯基]乙酸乙酯(0.84g，2.12mmol)，和鈀催化劑(226mg，10％，擔載在活性炭上，0.212mmol)在乙醇(17mL)中的混合物在氫氣球下氫化3.5小時。混合物用塞力特(硅藻土)過濾，再用MeOH洗滌。合併濾液和洗液，濃縮，再用矽膠急驟層析，用EtOAc/DCM(5，10，和20％)洗脫，獲得了呈白色固體的標題化合物(0.713g，92％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.10(bs，1H)，7.81(t，J＝8.7Hz，1H)，7.68-7.66(m，2H)，7.52-7.44(m，3H)，6.45(dd，J＝8.8，1.2Hz，1H)，4.18(t，J＝7.4Hz，2H)，4.07(bs，2H)，2.90(dt，J＝7.4，1.9Hz，2H)，2.07(s，3H).質譜(LCMS，ESI)C18H18F3N2O3(M+H)的計算值367.1。實測值367.1。
11.N-[4-氨基-2-氟-3-(2-羥乙基)苯基]-2，2-二氟-2-苯基乙醯胺 向在前一步驟中製備的2-[2-氨基-5-(2，2-二氟-2-苯基乙醯基氨基)-6-氟苯基]乙酸乙酯(0.67g，1.84mmol)在MeOH(19mL)中的溶液滴加K2CO3(280mg，2.03mmol)在H2O(4.8mL)中的溶液。將混合物攪拌45分鐘，然後用1N HCl中和。蒸發MeOH，混合物再用EtOAc萃取2次。合併萃取物，用H2O洗滌，用Na2SO4乾燥，再濃縮，獲得了呈淺褐色固體的標題化合物(0.55g，92％收率)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ7.70-7.68(m，2H)，7.54-7.48(m，3H)，7.01(t，J＝8.5Hz，1H)，6.53(dd，J＝8.6，1.3Hz，1H)，3.70(t，J＝6.7Hz，2H)，2.80(dt，J＝6.7，2.0Hz，2H)。質譜(LCMS，ESI)C16H16F3N2O2(M+H)的計算值325.1.實測值325.3。
12.N-[4-氯-2-氟-3-(2-羥乙基)苯基]-2，2-二氟-2-苯基乙醯胺(Yokomoto，M，W.，等人，1991，EP0470578A1) 將根據前一步驟的工序製備的N-[4-氨基-2-氟-3-(2-羥乙基)苯基]-2，2-二氟-2-苯基乙醯胺(1.63g，5.00mmol)在6N HCl(9mL)中的懸浮液在冰浴中冷卻，然後在5分鐘內添加NaNO2(434mg，6.30mmol)在H2O(2.4mL)中的溶液。在30分鐘後，添加乙酸(2.9mL)和濃HCl(2.9mL)，再將反應混合物攪拌1小時。在20分鐘內，向該混合物添加CuCl(848mg，8.55mmol)在濃HCl(5mL)中的溶液。在冰浴中攪拌3小時後，反應混合物用EtOAc(200mL×3)萃取。合併萃取物，用H2O(2次)和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，再用矽膠進行急驟層析，用EtOAc/DCM(0，2.5，和5％)洗脫，獲得呈淺橙色油的標題化合物(0.845g，48％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.31(s，1H)，8.14(t，J＝8.6Hz，1H)，7.68-7.66(m，2H)，7.54-7.46(m，3H)，7.19(dd，J＝8.9，1.7Hz，1H)，3.86(dd，J＝12.6，6.5Hz，2H)，3.09(dt，J＝6.7，2.3Hz，2H)，1.58(t，J＝5.7Hz，1H)。
質譜(LCMS，ESI)C16H14ClF3NO2(M+H)的計算值344.1。實測值344.2。
13.2-{3-[(2，2二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醇 在0℃和氬氣氛圍下，在10分鐘內向根據前一步驟的工序製備的N-[4-氯-2-氟-3-(2-羥乙基)苯基]-2，2-二氟-2-苯基乙醯胺(1.05g，3.06mmol)在THF(12mL)中的溶液添加硼烷-THF絡合物在THF中的溶液(12.3mL，12.3mmol，1.0M)，繼續攪拌反應混合物，直到冰浴開始無效為止。將反應混合物在回流下加熱20小時，再冷卻到室溫。添加K2CO3(1.7g，12mmol)在H2O(12mL)中的溶液，在真空中去除THF，混合物用DCM萃取(3次)。合併萃取物，用鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，再用矽膠進行急驟層析，用EtOAC/DCM(0和2.5％)洗脫，獲得了呈無色油的標題化合物(815mg，81％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.52-7.43(m，5H)，6.97(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，6.51(t，J＝8.9Hz，1H)，4.17(bs，1H)，3.83(t，J＝6.9Hz，2H)，3.74(dt，J＝13.4，6.6Hz，2H)，3.04(dt，J＝6.9，2.4Hz，2H)，1.43(s，1H)。質譜(LCMS，ESI)C16H16ClF3NO(M+H)的計算值330.1。實測值330.3。
14.2-{3-[(2，2-二氟-2-苯基乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醛 向在冰浴中的DMSO(1.03mL，14.5mmol)，DIEA(1.99mL，11.4mmol)，和根據前一步驟的工序製備的2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醇(1.45g，4.4mmol)在DCM(140mL)中的溶液添加三氧化硫吡啶絡合物(1.82g，11.4mmol)，再在相同的溫度下攪拌3.5小時。混合物用DCM(300mL)稀釋，用10％檸檬酸(3次)，H2O和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，再濃縮，獲得呈橙色油的的標題化合物(1.43g，99％收率)，它們在沒有進一步純化的情況下使用。
15.2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙酸(Dalcanale，E.，et al.J.Org.Chem.，51567(1986))
在30分鐘內，將亞氯酸鈉(692mg，6.11mmol)在H2O(6.1mL)中的溶液添加到在前一步驟製備的2-{3-[(2，2-二氟-2-苯基乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醛(1.43g，4.37mmol)在DMSO(4.5mL)中和NaH2PO4(141mg，1.18mmol)在H2O(1.7mL)中的攪拌混合物中。在添加後，混合物在環境溫度下攪拌一整夜，用10M HCl酸化到pH1，再用DCM(3次)萃取。合併萃取物，用H2O和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，再在真空中濃縮。所得殘留物用矽膠進行急驟層析，用MeOH/DCM(0，2，和4％)洗脫，獲得了呈淺褐色固體的標題化合物(0.77g，51％收率)。
1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ7.53-7.51(m，2H)，7.44-7.41(m，3H)，6.93(dd，J＝8.9，1.8Hz，1H)，6.62(t，J＝9.1Hz，1H)，3.80(t，J＝13.7Hz，2H)，3.74(d，J＝2.2Hz，2H)。質譜(LCMS，ESI)C16H14ClF3NO2(M+H)的計算值344.1。實測值344.4。
16.2-氮雜-3-{[2-(2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯基氨基)乙氧基]氨基}-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯 向在冰浴中的前一步驟製備的2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙酸(28mg，82μmol)在DMF(0.3mL)中的溶液添加BOP(58mg，130μmol)，[N，N』-二(叔丁氧基羰基)]-2-氨基乙氧基胍的HCl鹽(36mg，102ummol)(Tianbao Lu等人，WO99/26926(1999))，和DIEA(42mg，33μmol)在DMF(0.1mL)中的溶液。在冰浴開始無效後，將反應混合物在環境溫度下繼續攪拌一整夜。蒸發溶劑，所得殘留物在飽和NaHCO3和DCM之間分配。水相用DCM萃取，合併有機層，用10％KHSO4，H2O和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，再用矽膠進行急驟層析，用MeOH/DCM(1％)洗脫，獲得呈無色油的標題化合物(44mg，83％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.54-7.50(m，2H)，7.45-7.42(m，3H)，6.93(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，6.63(t，J＝9.0Hz，1H)，4.03(t，J＝4.8Hz，2H)，3.81(t，J＝13.7Hz，2H)，3.71(d，J＝1.9Hz，2H)，3.47(t，J＝5.1Hz，2H)，1.50(s，9H)，1.48(s，9H)。
質譜(LCMS，ESI)C29H38ClF3N5O6(M+H)的計算值644.2。實測值644.1。
17.N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯胺三氟乙酸鹽 將在前一步驟中製備的2-氮雜-3-{[2-(2-[3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基]乙醯基氨基)乙氧基]氨基}-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯(44mg，68μmol)在TFA/DCM(2mL，2/3)中的溶液在室溫下攪拌4小時。蒸發溶劑，以及所得殘留物用矽膠進行急驟層析，用在MeOH/DCM(5和10％)中的0.05％TFA洗脫，獲得呈白色固體的標題化合物(37mg，98％收率)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ7.67-7.52(m，2H)，7.47-7.42(m，3H)，6.96(dd，J＝8.9，1.7Hz，1H)，6.66(t，J＝9.1Hz，1H)，3.93(t，J＝5.4Hz，2H)，3.82(t，J＝13.8Hz，2H)，3.71(d，J＝2.0Hz，2H)，3.50(t，J＝5.4Hz，2H).質譜(LCMS，ESI)C19H22ClF3N5O2(M+H)的計算值444.1。
實測值444.2。
實施例2N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯胺鹽酸鹽 1.2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}-N-({6-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2-甲基(3-吡啶基)}甲基)乙醯胺 向在實施例1的步驟15中製備的2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙酸(516mg，1.5mmol)在DMF(8.0mL)中的溶液添加N-[5-(氨基甲基)-6-甲基(2-吡啶基)](叔丁氧基)羧醯胺(498mg，2.1mmol)(Sanderson，P.E.等人，WO97/01338(1997))，BOP(1.06g，2.4mmol)，和DIEA(0.78mL，4.5mmol)。在攪拌18小時後，添加另外的胺(107mg，450μmol)，混合物繼續攪拌18小時。蒸發溶劑，以及讓反應混合物在DCM和飽和NaHCO3之間分配。分離有機層，以及含水層用DCM萃取。合併有機層，用10％KHSO4(2二次)，H2O，和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，再用矽膠進行急驟層析，用MeOH/DCM(0，1.5，和2.5％)洗脫，獲得了呈淺褐色泡沫的標題化合物(770mg，91％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.66(d，J＝8.4Hz，1H)，7.51-7.41(m，6H)，7.23(bs，1H)，7.01(dd，J＝8.8，1.5Hz，1H)，6.57(t，J＝9.0Hz，1H)，5.64(brs，1H)，4.37(d，J＝5.6Hz，2H)，4.26-4.22(m，1H)，3.79-3.70(m，4H)，2.35(s，3H)，1.50(s，9H)。質譜(LCMS，ESI)C28H31ClF3N4O3(M+H)的計算值563.2。實測值562.9。
2.N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯胺鹽酸鹽 向裝有在前一步驟製備的2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}-N-({6-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2-甲基(3-吡啶基)}甲基)乙醯胺(770mg，1.37mmol)的燒瓶添加HCl在1，4-二噁烷(5mL，20mmol，4.0M)中的溶液。在環境溫度下1.5小時後，一些固體沉澱下來。添加MeOH(1mL)在DCM(3mL)中溶液，以溶解該固體，再將混合物攪拌另外4小時。去除溶劑，所得殘留物用DCM(5mL×2)，醚(8mL×2)洗滌，再在高度真空中乾燥，獲得呈淺褐色固體的標題化合物(620mg，91％收率)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ7.81(d，J＝9.1Hz，1H)，7.54-7.51(m，2H)，7.45-7.42(m，3H)，6.94(dd，J＝8.9，1.6Hz，1H)，6.80(d，J＝9.1Hz，1H)，6.65(t，J＝9.1Hz，1H)，4.25(s，2H)，3.81(t，J＝13.8Hz，2H)，3.70(d，J＝1.8Hz，2H)，2.50(s，3H)。質譜(LCMS，ESI)C23H23ClF3N4O(M+H)的計算值463.1。實測值463.7。
實施例3N-[(6-氨基-2，4-二甲基(3-吡啶基))甲基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯胺鹽酸鹽
1.2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基]-N-({6-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2，4-二甲基(3-吡啶基)}甲基)乙醯胺 向如在實施例1的步驟15中製備的2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙酸(25mg，73μmol)在DMF(0.25mL)中的溶液添加BOP(52mg，116μmol)，DIEA(38mg，295mol)在DMF(0.1mL)中的溶液，和N-[5-(氨基甲基)-4，6-二甲基(2-吡啶基)](叔丁氧基)羧醯胺(23mg，91μmol)(Sanderson，P.E.等人，WO97/01338(1997))。在環境溫度下攪拌2天後，添加另外的胺(7mg，28μmol)，BOP(16mg，36μmol)，和DIEA(9mg，70μmol)，再將混合物攪拌另外16小時。蒸發溶劑，所得殘留物在飽和NaHCO3和DCM之間分配。分離有機層，含水層用DCM萃取。合併有機層，用10％檸檬酸，H2O和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，再用矽膠進行急驟層析，用MeOH/DCM(0，1，2％)洗脫，獲得了呈淺褐色固體的標題化合物(18.5mg，44％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ7.58(s，1H)，7.50-7.41(m，5H)，7.24(s，1H)，6.98(dd，J＝8.8，1.1Hz，1H)，6.55(t，J＝9.0Hz，1H)，5.33(bs，1H)，4.40(d，J＝4.7Hz，2H)，4.24-4.20(m，1H)，3.78-3.70(m，4H)，2.39(s，3H)，2.28(s，3H)，1.50(s，9H)。質譜(LCMS，ESI)C29H33ClF3N4O3(M+H)的計算值577.0。實測值577.1。
2.N-[(6-氨基-2，4-二甲基(3-吡啶基))甲基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯胺鹽酸鹽 將HCl在1，4-二噁烷(4.0M，0.5mL，2mmol)中的溶液加入到如在前一步驟中製備的2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}-N-({6-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2，4-二甲基(3-吡啶基)}甲基)乙醯胺(18.5mg，32μmol)中。在環境溫度下攪拌3小時後，固體沉澱出來。添加MeOH(0.1mL)在DCM(1mL)中的溶液，以溶解該固體。在攪拌另外2小時後，濃縮反應物，獲得褐色固體，用醚和DCM洗滌，再在真空中乾燥，獲得呈淺褐色固體的標題化合物(12.6mg，77％收率)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.40(bs，1H)，7.53-7.51(m，2H)，7.47-7.40(m，3H)，6.93(dd，J＝8.8，1.3Hz，1H)，6.68(s，1H)，6.64(t，J＝9.1Hz，1H)，4.31(d，J＝4.6Hz，2H)，3.81(t，J＝13.8Hz，2H)，3.67(d，J＝1.2Hz，2H)，2.54(s，3H)，2.42(s，3H)。質譜(LCMS，ESI)C24H25ClF3N4O(M+H)的計算值477.2。實測值477.5。
實施例4N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]-2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醯胺三氟乙酸鹽
1.2-(4-氟萘基)-2-氧代乙酸乙酯 將正丁基鋰(2.5M THF溶液，20mL，50mmol)冷卻-78℃，再緩慢添加1-溴-4-氟萘(11.25g，50mmol)在THF(40mL)中的溶液和將混合物攪拌1小時。將反應混合物升溫到-20℃，然後加入到-78℃的草酸二乙酯(29.2g，200mmol)在THF(40mL)中的溶液中。在緩慢升溫到室溫後，添加EtOAc(100mL)，10％HCl(50mL)和水(50mL)和分離各相。含水層用EtOAc(2×100mL)萃取，再合併有機層，用鹽水(50mL)洗滌，和用Na2SO4乾燥。在高度真空下蒸發溶劑和過量草酸二乙酯後，殘留物通過急驟柱層析法(1∶1DCM∶己烷)純化，獲得了呈白色固體的標題化合物(9.4g，76％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ(9.13(d，J＝8.6Hz，1H)，8.20(d，J＝8.4Hz，1H)，8.01(dd，J＝8.2，5.4Hz，1H)，7.76(t，J＝7.2Hz，1H)，7.67(t，J＝8.1Hz，1H)，7.21(t，J＝8.5Hz，1H)，4.49(q，J＝7.1Hz，2H)，1.45(t，J＝7.1Hz，3H)。
2.2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙酸乙酯 向在前一步驟製備的2-(4-氟萘基)-2-氧代乙酸乙酯(9.4g，38.2mmol)在DCM(60mL)中的溶液添加(16.1g，100mmol)。混合物在室溫下攪拌一整夜，緩慢傾倒於冰中，再用DCM(3×50mL)萃取。合併有機層，用鹽水洗滌，和用Na2SO4乾燥。在蒸發溶劑後，殘留物通過急驟柱層析法純化。(1∶1DCM∶己烷)，獲得呈淺褐色油的標題化合物(9.7g，95％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.20(m，2H)，7.82(dd，J＝8.2，5.3Hz，1H)，7.63(m，2H)，7.20(t，J＝8.4Hz，1H)，4.28(q，J＝7.1Hz，2H)，1.24(t，J＝7.1Hz，3H)。
3.2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙酸 向如在前一步驟製備的2，2-二氟2(4-氟萘基)乙酸乙酯(9.6g，35.8mmol)在甲醇(20mL)和THF(20mL)中的溶液添加NaOH(2.0g，50mmol)在水(40mL)中的溶液。將反應混合物在室溫下攪拌2小時。在真空下蒸發甲醇和THF後，水相用10％HCl酸化到pH2，再用DCM(3×50mL)萃取。合併萃取物，用鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，再濃縮，獲得了呈灰白色固體的標題化合物(8.1g，94％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.68(brs，1H)，8.18(m，2H)，7.83(dd，J＝8.1，5.3Hz，1H)，7.62(m，2H)，7.19(t，J＝8.3Hz，1H)。
4.2-{3-[2，2二氟-2-(4-氟萘基)乙醯基氨基]-2-氟-6-硝基苯基}乙酸乙酯 向DIEA(7.8mL)和在實施例1的步驟8中製備的2-(3-氨基-2-氟-6-硝基苯基)乙酸乙酯(4.6g，19mmol)在DCM(60mL)中的溶液添加在DCM(40mL)中的2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙醯氯(通過用草醯氯回流如在前一步驟中製備的2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙酸來製備)(7.8g，30mmol)。將混合物在室溫下攪拌1小時。添加另外的DCM(100mL)，所得混合物10％檸檬酸(3×40mL)和鹽水洗滌，再用Na2SO4乾燥。在蒸發溶劑後，殘留物通過急驟柱層析法純化，用DCM洗脫，獲得了呈黃色油的標題化合物(5.3g，61％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.45(m，2H)，8.21(d，J＝7.0Hz，2H)，7.87(s，1H)，7.85(t，J＝4.1Hz，1H)，7.66(m，2H)，7.22(t，J＝8.3Hz，1H)，4.34(t，J＝6.4Hz，2H)，3.36(t，J＝6.4Hz，2H)，2.00(s，3H)。
5.2-{2-氨基-5-[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙醯基氨基]-6-氟苯基}乙酸乙酯 在氫氣下，將如在前一步驟製備的2-{3-[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙醯基氨基)-2-氟-6-硝基苯基}乙酸乙酯(4.9g，10.5mmol)和Pd/C(10％，500mg)在乙醇(50mL)和THF(50mL)中的混合物攪拌5小時。反應混合物用塞力特過濾，再用THF和MeOH洗滌。合併濾液和洗液，在真空中濃縮，再用矽膠進行急驟層析，用EtOAc/DCM(0-2％)洗脫，獲得了呈灰白色固體的標題化合物(3.8g，83％)，1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.27(d，J＝8.2Hz，1H)，8.19(d，J＝8.6Hz，1H)，8.10(s，1H)，7.82(m，2H)，7.63(m，2H)，7.19(t，J＝8.6Hz，1H)，6.46(d，J＝8.7Hz，1H)，4.19(t，J＝7.4Hz，2H)，4.08(s，2H)，2.91(t，J＝7.3Hz，2H)，2.08(s，3H)。
6.N-[4-氨基-2-氟-3-(2-羥乙基)苯基]-2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙醯胺
向如在前一步驟中製備的2-{2-氨基-5-[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙醯基氨基]-6-氟苯基}乙酸乙酯(3.8g，8.8mmol)在MeOH(40mL)和THF(20mL)中的溶液添加K2CO3(1.68g，12mmol)在水(30mL)中的溶液。混合物在室溫下攪拌3小時。添加另外的水(50mL)，所得混合物用EtOAc(3×50mL)萃取。合併萃取物。用鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，以及在真空中濃縮，獲得了呈灰白色固體的標題化合物(3.3g，96％)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.27(d，J＝8.4Hz，1H)，8.19(d，J＝8.2Hz，1H)，8.13(s，1H)，7.81(m，2H)，7.64(m，2H)，7.19(t，J＝8.7Hz，1H)，6.47(d，J＝8.7Hz，1H)，4.07(s，2H)，3.89(t，J＝5.6Hz，2H)，2.85(t，J＝5.5Hz，2H)。
7.N-[4-氯-2-氟-3-(2-羥乙基)苯基-2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙醯胺(Doyle，M.P.，等人，J.Org.Chem.，422426(1977)) 在氬氣氛圍下，向裝有氯化銅(II)(1.84g，13.7mmol)的燒瓶添加叔丁基腈(1.46g，12.8mmol，90％，Aldrich)在乙腈(35mL)中的溶液。所得綠色反應混合物在冰浴中在0℃下冷卻，以及經45分鐘加入根據前一步驟的工序製備的N-[4-氨基-2-氟-3-(2-羥乙基)苯基]-2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙醯胺(3.58g，9.13mmol)在乙腈(60mL)中的溶液。在0℃下攪拌另外6小時後，將所得褐色混合物加熱到環境溫度，然後傾倒於20％HCl水溶液(160mL)中，再用DCM萃取(3次)。合併萃取物，用20％HCl，H2O，和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，再用矽膠進行急驟層析，用EtOAc/DCM(0和2.5％)洗脫，獲得了呈白色固體的標題化合物(2.1g，56％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.31(brs，1H)，8.24-8.12(m，3H)，7.84(dd，J＝8.2，5.3Hz，1H).7.68-7.60(m，2H)，7.22-7.20(m，2H)，3.87(dd，J＝12.6，6.5Hz，2H)，3.09(dt，J＝6.7，2.2Hz，2H)，1.47(t，J＝5.6Hz，2H)。質譜(LCMS，ESI)C20H15ClF4NO2(M+H)的計算值412.1。
實測值412.6。
8.2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醇 在0℃下，經20分鐘向在前一步驟製備的N-[4-氯-2-氟-3-(2-羥乙基)苯基-2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙醯胺(1.9g，4.6mmol)在THF(19mL)中的溶液滴加BH3·THF絡合物的溶液(19.4mL，19.4mmol，1.0MTHF溶液)，繼續攪拌反應混合物，直到冰浴開始無效為止。混合物然後在油浴中在回流下在75-80℃加熱3小時，繼續在環境溫度攪拌過夜。添加NaHCO3(1.63g，19.4mmol)在H2O(20mL)中的溶液，蒸發THF，以及所得混合物用DCM萃取2次。合併萃取物，用HO和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，以及用矽膠進行急驟層析，用EtOAc/DCM(0，1，1.5％)洗脫，獲得呈白色固體的標題化合物(805mg，44％收率)。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.24-8.19(m，2H)，7.70-7.61(m，3H)，7.14(t，J＝9.3Hz，1H)，6.90(dd，J＝8.7，1.6Hz，1H)，6.42(t，J＝8.9Hz，1H)，4.22-4.16(m，1H)，4.00(dt，J＝13.4，6.8Hz，2H)，3.82(dd，J＝12.1，6.4Hz，2H)，3.02(dt，J＝6.8，2.3Hz，2H)，1.39(brs，1H)。質譜(LCMS，ESI)C20H17ClF4NO(M+H)的計算值398.1。實測值398.3。
9.2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醛 向在冰浴中的DMSO(470mg，6.0mmol)，DIEA(823μL，4.74mmol)和在前一步驟製備的2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醇(723mg，1.82mmol)在DCM(55mL)中的溶液添加三氧化硫吡啶絡合物(754mg，4.74mmol)。在攪拌3.5小時後，反應混合物用DCM(110mL)洗脫。分離有機層，以及含水層用DCM(100mL)萃取。合併有機層，以及含水層用DCM(100mL)萃取。合併有機層，用10％檸檬酸(3次)，H2O和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥和濃縮，獲得了呈橙色油的標題化合物(722mg，定量收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ9.69(d，J＝1.1Hz，1H)，8.22-8.18(m，2H)，7.67-7.60(m，3H)，7.14(t，J＝9.2Hz，1H)，6.94(d，J＝8.8Hz，1H)，6.49(t，J＝8.7Hz，1H)，4.20(bs，1H)，4.00(dt，J＝13.3，6.7Hz，2H)，3.83(s，2H)。
10.2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙酸
經30分鐘，將氯化鈉(309mg，2.73mmol，80％)在H2O(3.0mL)中的溶液滴加到到如在前一步驟製備的2-(3-{{2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醛(722mg，1.82mmol)在DMSO(3.6mL)中和NaH2PO4(74mg，0.55mmol)在H2O(0.9mL)中的攪拌混合物中。在添加後，將混合物在環境溫度下攪拌48小時，然後用10MHCl酸化到pH1再用DCM萃取(3次)。合併萃取物，用H2O和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，和在真空中濃縮。所得殘留物用矽膠進行急驟層析，用MeOH/DCM(0，1，1.5，和2％)洗脫，獲得了起始醛2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醛(165mg，23％收率)和呈固體的標題化合物(570mg，76％收率)。1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ8.32(d，J＝8.4Hz，1H)，8.15(d，J＝8.0Hz，1H)，7.71-7.61(m，3H)，7.18(dd，J＝9.8，8.5Hz，1H)，6.78(dd，J＝8.8，1.5Hz，1H)，6.44(t，J＝9.1Hz，1H)，4.05(t，J＝13.5Hz，2H)，3.69(d，J＝2.1Hz，2H)。
11.2-氮雜-3-({2-[2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醯基氨基]乙氧基}氨基)-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯 向在冰浴中的如前一步驟製備的2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙酸(570mg，1.39mmol)在DMF(7.5mL)中的溶液添加BOP(981mg，2.22mmol)，[N，N』-二(叔丁氧羰基)]-2-氨基乙氧基胍的HCl鹽(689mg，1.94mmol)，和DIEA(0.96mL，5.55mmol)。在冰浴開始無效後，混合物在環境溫度下攪拌一整夜。添加另外的BOP(123mg，0.28mmol)和[N，N』-二(叔丁氧羰基)]-2-氨基乙氧基胍的HCl鹽(98mg，0.28mmol)，再將反應混合物攪拌24小時。蒸發溶劑，以及所得殘留物在飽和NaHCO3和DCM之間分配。分離有機層，以及含水層用DCM萃取。合併有機層，用10％KHSO4，H2O，和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，以及用矽膠進行急驟層析，用MeOH/DCM(0，0.5，和1％)洗脫，獲得了呈白色泡沫的標題化合物(720mg，73％yield)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ9.12(s，1H)，8.24-8.19(m，2H)，7.78-7.81(m，1H)，7.70-7.60(m，4H)，7.14(dd，J＝9.6，8.4Hz，1H)，6.91(dd，J＝8.8，1.6Hz，1H)，6.44(t，J＝8.8Hz，1H)，4.20-4.15(m，1H)，4.13-4.10(m，2H)，3.98(dt，J＝13.4，6.7Hz，2H)，3.78(d，J＝1.9Hz，2H)，3.60(dd，J＝8.6，4.9Hz，2H)，1.51(s，9H)，1.48(s，9H)。質譜(LCMS，ESI)C33H39ClF4N5O6(M+H)的計算值712.2。實測值712.3.
12.N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]-2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醯胺三氟乙酸鹽 將如前一步驟製備的2-氮雜-3-({2-[2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醯基氨基]乙氧基}氨基)-3-[(叔丁氧基)羰基氨基]丙-2-烯酸叔丁酯(720mg，1.01mmol)在TFA/DCM(2∶3，30mL)中的溶液在環境溫度下攪拌4小時。蒸發溶劑，所得殘留物用矽膠進行急驟層析，用在MeOH/DCM(5和10％)中的0.05％TFA洗脫，獲得呈淺褐色泡沫的標題化合物(626mg，99％收率)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.33(d，J＝8.5Hz，1H)，8.17-8.15(m，1H)，7.73-7.63(m，3H)，7.20(dd，J＝10.0，8.3Hz，1H)，6.82(dd，J＝8.8，1.6Hz，1H)，6.92(t，J＝9.1Hz，1H)，4.07(t，J＝13.7Hz，2H)，3.92(t，J＝5.4Hz，2H)，3.67(d，J＝1.8Hz，2H)，3.52-3.51(m，2H)。質譜(LCMS，ESI)C23H23ClF4N5O2(M+H)的計算值512.1。實測值512.2。
實施例5N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醯胺鹽酸鹽 1.2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)-N-({6-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2-甲基(3-吡啶基)}甲基)乙醯胺 向根據實施例4的步驟10製備的2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙酸(15mg，37μmol)在DMF(0.3mL)中的溶液添加BOP(26mg，58μmol)，N-[5-(氨基甲基)-6-甲基(2-吡啶基)](叔丁氧基)羧醯胺(12mg，51μmol)和DIEA(19mg，146μmol)在DMF(0.1mL)中的溶液(Sanderson，P.E.等人，WO97/01338(1997))。將混合物攪拌一整夜，蒸發溶劑，所得混合物在飽和NaHCO3和DCM之間分配。分離有機層，以及含水層用DCM萃取。合併有機層，用10％KHSO4，H2O，和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，濃縮，以及用矽膠進行急驟層析，用MeOH/DCM(0.3，0.6，和1％)洗脫，獲得了呈白色固體的標題化合物(11mg，49％收率)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.33(d，J＝8.4Hz，1H)，8.17-8.14(m，1H)，7.72-7.61(m，4H)，7.55(d，J＝8.5Hz，1H)，7.19(dd，J＝10.0，8.3Hz，1H)，6.81(dd，J＝8.8，1.7Hz，1H)，6.47(t，J＝9.1Hz，1H)，4.32(s，2H)，4.12-4.03(m，2H)，3.67(d，J＝2.0Hz，2H)，2.40(s，3H)，1.50(s，9H)。質譜(LCMS，ESI)C32H32ClF4N4O3(M+H)的計算值631.2。實測值631.1。
2.N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醯胺鹽酸鹽 將前一步驟製備的2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)-N-({6-[(叔丁氧基)羰基氨基]-2-甲基(3-吡啶基)}甲基)乙醯胺(10mg，16μmol)在HCl(0.5mL，4.0M的1，4-二噁烷溶液)中的溶液在環境溫度下攪拌2小時。添加MeOH/DCM(25％，0.4mL)的溶液，再將混合物繼續攪拌一整夜。蒸發溶劑，以及所得褐色殘留物用矽膠進行急驟層析，用MeOH/DCM(2.5，5，和10％)洗脫，獲得了固體產物。它用在DCM(0.5mL)中的HCl溶液(0.01mL，4.0M1，4-二噁烷溶液，40μmol)處理，攪拌5分鐘，以及蒸發溶劑，獲得了呈白色固體的標題化合物(6.2mg，69％收率)。1H-NMR(400MHz，CD3OD)δ8.26(d，J＝8.4Hz，1H)，8.17-8.14(m，1H)，7.80(d，J＝9.1Hz，1H)，7.73-7.64(m，4H)，7.20(dd，J＝10.0，8.3Hz，1H)，6.82-6.79(m，1H)，6.49(t，J＝9.1Hz，1H)，4.24(s，2H)，4.10-4.02(m，2H)，3.66(d，J＝2.3Hz，2H)，2.49(s，3H)。質譜(LCMS，ESI)C27H24ClF4N4O(M+H)的計算值531.1。實測值531.6。
實施例6N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(3-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺三氟乙酸鹽 1.N-(2-羥乙基)-2-(3-硝基苯基)乙醯胺 向3-硝基苯乙酸(3.21g，17.7mmol)，乙醇胺(2.8g，46mmol)和三乙胺(3.0mL，22mmol)在無水DMF(110mL)中的溶液添加六氟磷酸苯並三唑-1-基-氧基-三-吡咯烷基-鏻(PyBOP，9.37g，18.0mmol)在無水DMF(80mL)中的溶液。在環境溫度下攪拌16小時後(在氮氣下)，將反應混合物在真空中濃縮，溶解在DCM中，再過濾。濾液用10％檸檬酸水溶液，飽和NaHCO3水溶液，pH7緩衝液，和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥和過濾。蒸發的濾液然後通過急驟層析法純化(在DCM中的10％甲醇)，獲得了呈淺褐色固體的標題化合物(1.02g，26％)。1HNMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ8.18(m，1H)，8.11(ddd，1H，J＝8.1Hz，2.4Hz，1.1Hz)，7.72(m，1H)，7.60(t，1H，J＝7.8Hz)，3.62(s，2H)，3.44(t，2H，J＝5.9Hz)，3.16(t，2H，J＝5.9Hz)。
2.N-[2-(N』-鄰苯二甲醯亞胺基)羥乙基]-2-(3-硝基苯基)乙醯胺 通過注射器向前一步驟的產物(1.02g，4.55mmol)，N-羥基鄰苯二甲醯亞胺(0.76g，4.64mmol)，和三苯基膦(1.22g，4.65mmol)在無水THF(100mL)中的溶液添加二乙基氮雜二羧酸酯(0.75mL，4.77mmol)。在環境溫度下攪拌一整夜(在氮氣下)，反應物在真空中濃縮和通過急驟層析法純化(在DCM中的40％乙酸乙酯)，獲得了不純產物，將它溶解在DCM中，冷卻，再過濾。蒸發的濾液然後通過急驟層析法(在己烷中的66％-100％乙酸乙酯)純化，獲得了呈白色固體的標題化合物(0.86g，51％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.26(t，1H，J＝1.7Hz)，8.15(ddd，1H，J＝8.3Hz，2.3Hz，1.0Hz)，7.82(m，4H)，7.74(m，1H)，7.53(t，1H，J＝7.9Hz)，7.03(brs，1H)，4.26(m，2H)，3.76(s，2H)，3.57(dd，2H，J＝9.8Hz，5.7Hz)。
3.N-[2-(N』-鄰苯二甲醯亞胺基)羥乙基]-2-(3-氨基苯基)乙醯胺 將前一步驟的產物(0.66g，1.80mmol)和10％Pd/C(15mg)在脫氣1∶1乙醇∶THF(40mL)中的溶液在氫氣下在環境溫度下攪拌。在6小時後，用塞力特過濾反應物，蒸發濾液，再通過急驟層析法純化(在DCM中的5％甲醇)，獲得了呈黃色固體的標題化合物(0.20g，33％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.81(m，4H)，7.14(t，1H，J＝8.0Hz)，6.72(m，2H)，6.61(ddd，1H，J＝8.0Hz，2.2Hz，1.0Hz)，4.23(m，2H)，3.55(m，4H)。質譜(MALDI-TOF，α-氰基-4-羥基肉桂酸基質)C18H17N3O4的計算值362.1(M+Na)，340.1(M+H)。實測值362.2，340.3。
4.N-[2-(N』-鄰苯二甲醯亞胺基)羥乙基]-2-(3-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺 先後向在前一步驟的產物(0.20g，0.58mmol)在無水DCM(50mL)中的冰冷卻的溶液添加α-甲苯磺醯氯(0.11g，0.58mmol)在無水DCM(20mL)中的溶液和N-甲基嗎啉(0.10mL，0.91mmol)。在環境溫度下攪拌16小時後，添加另外的α-甲苯磺醯氯(0.07g，0.36mmol)和N-甲基嗎啉(0.10mL，0.91mmol)，將反應物攪拌另外4小時，在真空中蒸發。將殘留物溶解在DCM中，用10％檸檬酸水溶液，pH7緩衝液和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，過濾，再蒸發濾液，獲得了呈淺黃色固體的標題化合物(0.20g，69％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.77(m，4H)，7.35(m，1H)，7.22(s，5H)，7.17(m，1H)，7.11(m，1H)，7.05(s，1H)，6.71(br m，1H)，4.37(s，2H)，4.25(m，2H)，3.64(s，2H)，3.64(dd，2H，J＝10Hz，5.5Hz)。
5.N-[2-(氨基氧基)乙基]-2-(3-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺
將前一步驟的產物(0.19g，0.39mmol)溶解在1∶1乙醇∶THF(20mL)中，再在環境溫度下與40％甲基胺水溶液(10mL)反應1小時。反應物在真空中蒸發，再用Waters Sep-Pak(5g矽石，1∶1 DCM∶乙酸乙酯)純化，獲得了不純的黃色固體。這之後通過製備薄層色譜法(在DCM中的10％甲醇)，獲得了呈白色固體的標題化合物(0.10g，72％)。1HNMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ7.34(m，3H)，7.28(m，3H)，7.10(m，1H)，7.05(m，2H)，4.35(s，2H)，3.69(t，2H，J＝5Hz)，3.51(s，2H)，3.43(t，2H，J＝5Hz)。質譜(MALDI-TOF，α-氰基-4-羥基肉桂酸基質)C17H21N3O4S的計算值386.1(M+Na)。實測值386.6。
6.N-[2-({N，N』-二[叔丁氧羰基]}{胍基氧基)乙基]-2-(3-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺 在環境溫度下，將前一步驟的產物(89mg，0.24mmol)和[N，N』-二(叔丁氧羰基)]脒基吡唑(86mg，0.28mmol)在DMF(5mL)中的溶液攪拌4天。在真空中蒸發反應物，通過急驟層析法純化粗產物(在DCM中的5％甲醇)，獲得了不純黃色油。這之後通過製備薄層色譜法純化(在DCM中的5％甲醇)，獲得了呈無色固體的標題化合物(72mg，49％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.19(s，1H)，8.22(brt，1H，J＝5.0Hz)，7.62(s，1H)，7.23(m，10H(Ar+NH))，4.27(s，2H)，4.08(m，2H)，3.57(m，4H)，1.51(s，9H)，1.49(s，9H)。
7.N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(3-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺三氟乙酸鹽 將前一步驟的產物(72mg，0.12mmol)溶解在DCM(5mL)中，再在環境溫度下與三氟乙酸(2mL)反應4小時。反應物在真空中濃縮，粗產物通過製備薄層色譜法純化(在DCM中的20％甲醇)，獲得了呈淺黃色蠟的標題化合物(44mg，71％)。1H NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ7.34(m，3H)，7.28(m，3H)，7.11(m，1H)，7.05(m，2H)，4.35(s，2H)，3.90(t，2H，J＝4.9Hz)，3.52(s，2H)，3.47(t，2H，J＝4.8Hz)。質譜(MALDI-TOF，α-氰基-4-羥基肉桂酸基質)C18H23N5O4S的計算值428.1(M+Na)，406.2(M+H)。實測值428.4，406.4。
實施例7N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(2-氯-5-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺三氟乙酸鹽 1.2-氯-5-硝基苯基乙酸一水合物
將2-氯苯基乙酸(10.0g，58.6mmol)在濃硫酸(40mL)中的溶液冷卻到-10℃，再與發煙硝酸(2.80mL，66.7mmol)在濃硫酸(7.2mL).中的溶液反應。在2.5小時後，將反應物緩慢傾倒於冰水(400mL)上，用粗孔玻璃濾器過濾，用冷水洗滌一次，和在玻璃濾器上乾燥一整夜，獲得了呈白色固體的標題化合物(13.5g，98％)。質子NMR譜的積分顯示，產物含有大約0.2當量的2-氯苯基乙酸，但薄層色譜法表明這不能從產物中分離出來。1H NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ8.25(d，1H，J＝2.7Hz)，8.13(dd，1H，J＝8.7Hz，2.7Hz)，7.61(d，1H，J＝8.8Hz)，3.89(s，2H)。
2.2-(3-氨基-6-氯苯基)乙酸乙酯 將前一步驟的產物(4.14g，17.7mmol)懸浮在DCM(70mL)中，再與草醯氯(4.0mL，46mmol)和幾滴DMF反應。在環境溫度下攪拌1小時後，反應變得均勻，加入試劑級乙醇(30mL)，再將反應物攪拌另外30分鐘。粗產物在真空中蒸發，再通過急驟層析法純化(在己烷中的10％-15％乙酸乙酯)，獲得了呈淺黃色油的標題化合物(4.6g)。質子NMR顯示，產物含有大約0.8當量的草酸二乙酯，它不能通過薄層色譜法查出。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.21(d，1H，J＝2.7Hz)，8.11(dd，1H，J＝8.8Hz，2.7Hz)，7.57(d，1H，J＝8.8Hz)，4.21(q，2H，J＝7.2Hz)，3.87(s，2H)，1.28(t，3H，J＝7.2Hz)。
3.2-(3-氨基-6-氯苯基)乙酸乙酯 讓前一步驟的產物(2.00g，8.21mmol)在試劑級乙醇(50mL)中的溶液與氯化錫(II)二水合物(9.40g，41.7mmol)在環境溫度下反應。在16小時後，反應物在真空中濃縮，溶解在DCM中和過濾。濾液用水和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，再過濾。蒸發過的濾液然後通過急驟層析法(在己烷中的40％乙酸乙酯)純化，獲得了呈淺黃色油的標題化合物(0.53g，30％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.12(d，1H，J＝8.5Hz)，6.60(d，1H，J＝2.8Hz)，6.53(dd，1H， 8.5Hz，2.9Hz)，4.17(q，2H，J＝7.1Hz)，3.65(s，2H)，1.26(t，3H，J＝7.1Hz)。
4.2-(2-氯-5-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙酸乙酯 將前一步驟的產物(0.50g，2.32mmol)和α-甲苯磺醯氯(0.74g，3.88mmol)在DCM(40mL)和N-甲基嗎啉(0.80mL，7.3mmol)中的溶液在環境溫度下攪拌3小時，用稀HCl水溶液、水和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，再過濾。蒸發過的濾液通過急驟層析法(在DCM中的5％乙酸乙酯)，獲得了呈淺黃色固體的標題產物(0.693g，81％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.36(m，4H)，7.26(m，2H)，7.04(d，1H，J＝2.7Hz)，6.99(dd，1H，J＝8.5Hz，2.8Hz)，6.47(br s，1H)，4.33(s，2H)，4.20(q，2H，J＝7.1Hz)，3.73(s，2H)，1.29(t，3H，J＝7.1Hz)。質譜(MALDI-TOF，α-氰基-4-羥基肉桂酸基質)C17H18NO4SCl的計算值390.1(M+Na)。實測值390.7。
5.2-(2-氯-5-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙酸 將前一步驟的產物(0.69g，1.87mmol)在1∶1水/THF(20mL)中的溶液與氫氧化鉀(0.52g，9.32mmol)在環境溫度下反應20小時。在真空中蒸發THF之後，剩餘含水層用1N HCl酸化到pH3，再用DCM和醚萃取。合併的有機層用鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，再過濾。然後在真空中蒸發濾液，獲得了呈白色固體的標題化合物(0.586g，92％)。1H NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ7.34(m，4H)，7.28(m，2H)，7.07(m，2H)，4.34(s，2H)，3.73(s，2H)。質譜(MALDI-TOF，(α-氰基-4-羥基肉桂酸基質)C15H14NO4SCl的計算值378.0(M+K)，362.0(M+Na)。實測值378.8，362.9。
6.N-[2-({N，N』-二-[叔丁氧羰基]}胍基氧基)乙基]-2-(2-氯-5-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺
讓前一步驟的產物(0.21g，0.60mmol)和[N，N』-二(叔丁氧羰基)]-2-氨基乙氧基胍(Tianbao Lu等人，WO99/26926(1999))(0.19g，0.60mmol)在無水THF(50mL)中的溶液與BOP(0.33g，0.75mmol)和三乙胺(0.25mL，1.8mmol)在環境溫度下反應16小時。反應物在真空中蒸發，溶解在DCM中，用pH7緩衝液和鹽水洗滌，用Na2SO4乾燥，再過濾。蒸發過的濾液通過急驟層析法(在DCM中的5％甲醇)純化，獲得了呈橙色固體的標題化合物(0.380g，98％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.14(s，1H)，8.22(brt，1H，J＝5.0Hz)，7.60(s，1H)，7.34(m，3H)，7.28(m，3H)，7.10(d，1H，J＝2.6Hz)，7.03(dd，1H，J＝8.6Hz，2.7Hz)，6.84(brs，1H)，4.29(s，2H)，4.13(m，2H)，3.75(s，2H)，3.62(dd，2H，J＝8.8Hz，5.1Hz)，1.51(s，9H)，1.46(s，9H)。質譜(MALDI-TOF，龍膽酸基質)C28H38N5O8SCl的計算值662.2(M+Na)，440.1(M-2Boc+H)。實測值661.7，439.9。
7.N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(2-氯-5-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺三氟乙酸鹽 將前一步驟的產物(0.375g，0.586mmol)在DCM(10mL)中的溶液用三氟乙酸(5mL)在環境溫度下處理16小時。反應物在真空中蒸發，以及粗產物通過急驟層析法(在DCM中的20％甲醇)純化。反應物在真空中蒸發，以及粗產物通過急驟層析法(在DCM中的20％甲醇)純化，獲得了呈淺黃色固體的標題化合物(0.326g，100％)。1HNMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ7.34(m，3H)，7.29(m，3H)，7.06(m，2H)，4.35(s，2H)，3.94(brt，2H，J＝5Hz)，3.65(s，2H)，3.49(brt，2H，J＝5Hz)。質譜(MALDI-TOF，α-氰基-4-羥基肉桂酸基質)C18H22N5O4SCl的計算值462.1(M+Na)，440.1(M+H)。實測值461.9，439.9。
實施例8N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(2-甲基-5-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺三氟乙酸鹽 1.(2-甲基-5-硝基苯基)甲醇 在氮氣下加熱2-甲基-5-硝基苯甲酸(2.00g，11.0mmol)，溶解在無水THF(25mL)中，再用硼烷在THF(16.5mL)的1N溶液處理。在環境溫度下攪拌18小時後，反應物用碳酸鉀(1.8g，13mmol)在水(50mL)中的溶液驟冷，以及在真空中去除THF。剩餘水溶液用DCM萃取，以及有機層用pH7緩衝劑和鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，再過濾。蒸發過的濾液提供了呈淺黃色固體的標題化合物(1.76g，95％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.29(d，1H，J＝2.5Hz)，8.04(dd，1H，J＝8.3Hz，2.5Hz)，7.31(d，1H，J＝8.31Hz)，4.77(d，2H，J＝5.5Hz)，2.41(s，3H)，2.09(t，1H，J＝5.6Hz)。
2.甲磺酸(2-甲基-5-硝基苯基)甲酯
將前一步驟的產物(1.74g，10.4mmol)在DCM(50mL)中的溶液冷卻到0℃，再用甲磺醯氯(0.90mL，11.6mmol)三乙胺(1.75mL，12.6mmol)處理。在攪拌30分鐘後，將反應物升溫到環境溫度，攪拌另外30分鐘，再傾倒於pH7緩衝溶液中。分離各相，有機層用鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，再過濾。蒸發過的濾液提供了呈淺黃色油的標題化合物(2.53g，99％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.26(d，1H，J＝2.5Hz)，8.16(dd，1H，J＝8.4Hz，2.4Hz)，7.42(d，1H，J＝8.4Hz)，5.31(s，2H)，3.08(s，3H)，2.51(s，3H)。
3.2-(2-甲基-5-硝基苯基)乙腈 將前一步驟的產物(2.48g，10.1mmol)和氰化鉀(2.00g，30.7mmol)在乙腈(100mL)中回流8小時，然後冷卻到環境溫度和攪拌一整夜。反應物在真空中蒸發，溶解在DCM中，再過濾。濾液用pH7緩衝劑和鹽水洗滌，蒸發，再通過急驟柱層析法(1∶1己烷∶乙酸乙酯洗脫劑)純化，獲得了呈黃色固體的標題化合物(1.27g，71％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ8.26(d，1H，J＝2.4Hz)，8.13(dd，1H，J＝8.3Hz，2.4Hz)，7.42(d，1H，J＝8.3Hz)，3.78(s，2H)，2.48(s，3H)。
4.2-(2-甲基-5-硝基苯基)乙酸 向前一步驟的產物(1.27g，7.21mmol)在甲醇(30mL)中的溶液添加氫氧化鉀(4.06g，72.4mmol)在水(30mL)中的溶液。反應在回流下攪拌一整夜，和在真空中去除甲醇。剩餘含水層用3NHCl酸化，再過濾，固體用二乙醚洗滌，以及分離濾液。含水層用DCM和二乙醚洗滌，以及合併的有機層用鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，再過濾。蒸發過的濾液提供了呈橙色固體的標題化合物(0.84g，60％)。1HNMR(300MHz，丙酮-d6)δ8.17(d，1H，J＝2.3Hz)，8.06(dd，1H，J＝8.4Hz，2.5Hz)，7.29(d，1H，J＝8.4Hz)，3.88(s，2H)，2.45(s，3H)。
5.N-[2-({N，N』-二-[叔丁氧羰基]}胍基氧基)乙基]-2-(2-甲基-5-硝基苯基)乙醯胺 將前一步驟的產物(0.27g，1.40mmol)，BOP(0.70g，1.58mmol)，三乙胺(0.50mL，3.60mmol)，和[N，N』-二(叔丁氧羰基)]2-氨基乙氧基胍(Tianbao Lu等人，WO99/26926(1999))(0.44g，1.38mmol)在無水DMF中的溶液在環境溫度下攪拌一整夜。反應物在真空中濃縮，粗產物通過急驟柱層析法(在DCM洗脫劑中的5％甲醇)純化，獲得了呈淺橙色固體的標題化合物(0.63g，92％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.21(s，1H)，8.42(m，1H)，8.17(d，1H，J＝2.4Hz)，7.99(dd，1H，J＝8.4Hz，2.5Hz)，7.59(s，1H)，7.29(d，1H，J＝8.4Hz)，4.12(m，2H)，3.74(s，2H)，3.63(m，2H)，2.48(s，3H)，1.52(s，9H)，1.47(s，9H)。
6.N-[2-({N，N』-二-[叔丁氧羰基]}胍基氧基)乙基]-2-(3-氨基-6-甲基苯基)乙醯胺 將前一步驟的產物(0.29g，0.58mmol)和10％鈀(O)/碳(0.06g)溶解在試劑乙醇(50mL)中，用氮氣和真空脫氣，再在氫氣球下在環境溫度下攪拌。在4小時後，反應物用塞力特過濾，該玻璃料用甲醇洗滌，以及濾液在真空中蒸發，獲得了標題化合物(0.27g，100％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.10(s，1H)，7.61(s，1H)，7.30(m，1H)，6.94(d，1H，J＝8.0Hz)，6.63(d，1H，J＝2.4Hz)，6.51(dd，1H，J＝8.0Hz，2.5Hz)，4.09(m，2H)，3.58(m，2H)，3.53(s，2H)，2.21(s，3H)，1.52(s，9H)，1.47(s，9H)。
7.N-[2-({N，N』-二-[叔丁氧羰基]}胍基氧基)乙基]-2-(2-甲基-5-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺
將前一步驟的產物(0.27g，0.58mmol)，α-甲苯磺醯氯(0.18g，0.96mmol)和N-甲基嗎啉(0.20mL，1.82mmol)在環境溫度下在DCM(20mL)中攪拌。在2小時後，反應物用其它DCM稀釋，再用稀HCl水溶液，飽和碳酸氫鈉水溶液，pH7緩衝液和鹽水洗滌。有機層用硫酸鈉乾燥，過濾，和濾液在真空中濃縮，獲得了呈淺黃色固體的標題化合物(0.35g，97％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.15(s，1H)，8.04(brt，1H，J＝5Hz)，7.60(s，1H)，7.34(m，5H)，7.12(d，1H，J＝8.0Hz)，7.03(dd，1H，J＝11Hz，2.3Hz)，6.26(s，1H)，4.31(s，2H)，4.12(m，2H)，3.63(m，4H)，2.33(s，3H)，1.51(s，9H)，1.45(s，9H)。
8.N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(2-甲基-5-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺三氟乙酸鹽 將前一步驟的產物(0.35g，0.56mmol)溶解在DCM(10mL)中和用三氟乙酸(3mL)在環境溫度下處理。在16小時後，反應物在真空中濃縮，以及粗產物用10g Waters silica Sep-Pak(在DCM中的5-20％甲醇梯度洗脫劑)純化，獲得了呈淺黃色固體的標題化合物(0.27g，89％)。1H NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ7.34(m，3H)，7.29(m，2H)，7.14(d，1H，J＝9.0Hz)，7.02(dd，1H，J＝6.5Hz，2.3Hz)，7.00(s，1H)，4.33(s，2H)，3.92(brt，2H，J＝5Hz)，3.55(s，2H)，3.48(brt，2H，J＝5Hz)，2.28(s，3H)。質譜(MALDI-TOF，龍膽酸基質)C19H25N5O4S的計算值442.2(M+Na)，420.2(M+H)。實測值442.5，420.6。
實施例9N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(2-羥基-6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺鹽酸鹽 1.4-甲基-1-硝基-2-丙-2-烯基氧基苯 將5-甲基-2-硝基酚(2.00g，13.1mmol)，烯丙基溴(1.30mL，15.0mmol)，和碳酸銫(5.5g，17mmol)在DMF(100mL)中的溶液在環境溫度下攪拌。在20小時後，過濾反應物，用甲醇在玻璃料上洗滌，以及濾液在真空中在50℃下蒸發。殘留物通過急驟柱層析法(4∶1然後2∶1己烷∶乙酸乙酯洗脫劑)純化，獲得了呈黃色油的標題化合物(2.39g，95％)，它在環境溫度下放置3天後結晶。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.79(d，1H，J＝8.2Hz)，6.86(s，1H)，6.82(m，1H)，6.05(ddt，1H，J＝17.3Hz，10.6Hz，5.0Hz)，5.50(ddd，1H，J＝17.3Hz，3.3Hz，1.7Hz)，5.33(ddd，1H，J＝10.6Hz，2.9Hz，1.5Hz)，4.6 7(dt，2H，J＝4.9Hz，1.6Hz)，2.40(s，3H)。
2.3-甲基-6-硝基-2-丙-2-烯基酚
將如在前一步驟製備的4-甲基-1-硝基-2-丙-2-烯氧基苯(7.11g，36.8mmol)在氮氣下在200℃下均勻加熱3小時，冷卻到環境溫度，再通過急驟柱層析法(1∶1己烷∶DCM洗脫劑)純化，獲得了呈橙色油的標題化合物(5.04g，71％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ11.07(s，1H)，7.90(d，1H，J＝8.7Hz)，6.80(d，1H，J＝8.7Hz)，5.93(m，1H)，5.03(m，1H)，4.96(m，1H)，3.50(dt，2H，J＝5.9Hz，1.7Hz)，2.36(s，3H)。
3.1-甲基-4-硝基-3-(苯基甲氧基)-2-丙-2-烯基苯 將前一步驟的產物(5.02g，26.0mmol)，苄基溴(3.40mL，28.6mmol)，碳酸銫(17.2g，52.8mmol)在DMF(100mL)中的溶液在環境溫度下攪拌20小時。過濾溶液，在真空中濃縮濾液，以及將粗產物吸附到矽石上。將這傾倒於矽石的短床上和用DCM洗脫，和蒸發洗脫物，獲得呈黃色油的標題化合物(7.20g，98％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.72(d，1H，J＝8.4Hz)，7.46(m，2H)，7.37(m，3H)，7.06(d，1H，J＝8.5Hz)，5.93(m，1H)，5.08(m，1H)，4.98(s，2H)，4.88(m，1H)，3.51(dt，2H，J＝5.4Hz，1.9Hz)，2.36(s，3H)。
4.4-甲基-2-(苯基甲氧基)-3-丙-2-烯基苯基胺
將前一步驟的產物(0.55g，1.94mmol)和氯化錫(II)二水合物(2.89g，12.8mmol)在試劑級乙醇(40mL)中在環境溫度下攪拌。在20小時後，反應物在真空中濃縮，以及殘留物在飽和碳酸氫鈉和DCM之間分配。過濾所得乳液，固體和含水層用另外的DCM洗滌，以及合併的有機層用鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，再過濾。然後蒸發濾液，獲得了呈橙色油的標題化合物(0.51g，90％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.47(m，2H)，7.38(m，3H)，6.78(d，1H，J＝8.1Hz)，6.60(d，1H，J＝8.0Hz)，5.97(m，1H)，5.02(m，1H)，4.95(m，1H)，4.85(s，2H)，3.64(brs，2H)，3.47(dt，2H，J＝5.7Hz，1.8Hz)，2.20(s，3H)。
5.[4-甲基-2-(苯基甲氧基)-3-丙-2-烯基苯基][(3-甲基苯基)磺醯基]胺 將前一步驟的產物(0.49g，1.92mmol)溶解在DCM(10mL)中，並用間-甲苯磺醯氯(0.37g，1.96mmol)和N-甲基嗎啉(0.25mL，2.27mmol)在環境溫度下處理。在18小時後，反應在真空中濃縮，以及殘留物通過急驟柱層析法(DCM洗脫劑)純化，獲得了呈淺黃色油的標題化合物(0.72g，92％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.54(m，2H)，7.35(m，8H)，6.89(d，1H，J＝8.3Hz)，6.80(s，1H)，5.87(m，1H)，4.99(m，1H)，4.79(m，1H)，4.43(s，2H)，3.36(dt，2H，J＝5.3Hz，1.9Hz)，2.31(s，3H)，2.19(s，3H)。
6.2-(6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}-2-(苯基甲氧基)苯基)乙醇
將前一步驟的產物(0.71g，1.74mmol)溶解在1，4-二噁烷(25mL)中，並用過碘酸鈉(1.50g，7.01mmol)在水(12mL)中的溶液和四氧化鋨(0.25mL，0.02mmol)在2-甲基-2-丙醇中的2.5wt％溶液處理。在環境溫度下攪拌4小時後，反應物用DCM稀釋，用5％亞硫酸氫鈉水溶液，水和鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，再過濾。濾液在真空中濃縮，獲得了淺黃色油，它在沒有進一步純化的情況下使用。
7.2-(6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}-2-(苯基甲氧基)苯基)乙酸 將重鉻酸鈉(0.79g，2.64mmol)和濃硫酸(1.5mL，28mmol)在水(25mL)中的溶液加入到前一步驟的產物在丙酮(25mL)中的溶液中，以及反應物在環境溫度下攪拌3天。在添加甲醇(3mL)和攪拌另外15分鐘後，在真空中去除有機溶劑，和剩餘的含水層用DCM萃取。DCM層用鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，過濾，再濃縮濾液和通過急驟柱層析法(在DCM中的10％甲醇)純化，獲得了呈淺黃色固體的標題化合物(0.51g，步驟5的69％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.56(m，2H)，7.39(m，4H)，7.31(m，4H)，6.93(d，1H，J＝8.4Hz)，6.78(s，1H)，4.52(s，2H)，3.67(s，2H)，2.33(s，3H)，2.21(s，3H)。質譜(LCMS，ESI pos.)C23H23NO5S的計算值448.1(M+Na)，425.1(M+H)。實測值448.1，425.9。
8.N-[2-({N，N』-二-[叔丁氧羰基]}胍基氧基)乙基]-2-(6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}-2-(苯基甲氧基)苯基)乙醯胺 將前一步驟的產物(0.32g，0.75mmol)，BOP(0.34g，0.77mmol)，三乙胺(0.25mL，1.80mmol)，和[N，N』-二-(叔丁氧羰基)]-2-氨基乙氧基胍(Tianbao Lu等人，WO99/26926(1999))(0.27g，0.76mmol)在DMF(15mL)中的溶液在環境溫度下攪拌一整夜。在真空中濃縮反應物，將殘留物溶解在DCM中，用飽和碳酸氫鈉、水和鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，再過濾。濾液在真空中濃縮，以及粗產物通過急驟柱層析法(在DCM中的7％甲醇洗脫劑)，獲得了淺黃色固體的標題化合物(0.41g，76％)。
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.11(s，1H)，7.93(m，1H)，7.55(m，3H)，7.36(m，8H)，6.90(d，1H，J＝8.3Hz)，6.84(s，1H)，4.60(s，2H)，4.06(m，2H)，3.71(s，2H)，3.56(dd，2H，J＝8.8Hz，5.2Hz)，2.34(s，3H)，2.23(s，3H)，1.51(s，9H)，1.43(s，9H)。
9.N-[2-({N，N』-二-[叔丁氧羰基]}胍基氧基)乙基]-2-(2-羥基-6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺
將前一步驟的產物(0.41g，0.57mmol)和10％鈀(O)/碳(60mg)溶解在試劑級乙醇(20mL)中，用氮和真空脫氣，再在氫氣球下在環境溫度下攪拌4小時。反應物用塞力特過濾，用甲醇在玻璃料上洗滌，蒸發濾液，以及殘留物通過製備薄層色譜法(在DCM中的5％甲醇洗脫劑)純化，獲得了呈淺黃色固體的標題化合物(13.0mg，4％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ9.25(s，1H)，8.62(m，1H)，7.61(m，3H)，7.29(m，3H)，6.61(d，1H，J＝8.5Hz)，4.06(m，2H)，3.64(s，2H)，3.54(dd，2H，J＝8.7Hz，5.0Hz)，2.34(s，3H)，2.30(s，3H)，1.51(s，9H)，1.49(s，9H)。
10.N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(2-羥基-6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺鹽酸鹽 將前一步驟的產物(13.0mg，0.02mmol)溶解在DCM(5mL)中，並用三氟乙酸(1mL)在環境溫度下處理。在16小時後，在真空中濃縮反應物，以及粗產物通過製備薄層色譜法(在DCM中的12％甲醇洗脫劑，用氨飽和)純化。所得產物用HCl的4N乙醇溶液處理，過濾，蒸發濾液，以及固體用二乙醚洗滌，再真空乾燥，獲得了呈黃褐色固體的標題化合物(5.0mg，52％)。1H NMR(300MHz，CD3OD)δ7.51(m，2H)，7.38(m，2H)，6.56(m，2H)，3.91(t，2H，J＝5.3Hz)，3.61(s，2H)，3.47(t，2H，J＝5.3Hz)，2.36(s，3H)，2.27(s，3H)。質譜(LCMS，ESI pos.)C19H25N5O5S的計算值436.1(M+H)。實測值436.2。
實施例10N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-(2-羥基-6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺鹽酸鹽 1.N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-(6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}-2-(苯基甲氧基)苯基)乙醯胺 將實施例9步驟7的產物(0.18g，0.42mmol)，BOP(0.21g，0.47mmol)，三乙胺(0.25mL，1.80mmol)和2-氨基-5-氨基甲基-6-甲基吡啶二鹽酸鹽(Sanderson，P.E.，等人，WO97/01338(1997))(0.10g，0.48mmol)溶解在DMF(10mL)中，再在環境溫度下攪拌2小時。將反應物在真空中濃縮，以及粗產物通過急驟柱層析法(梯度洗脫在DCM中的10-15％甲醇)純化，獲得了不純產物，將它溶解在DCM中，用飽和碳酸氫鈉和歲和鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，再過濾。蒸發過的濾液然後得到了呈淺黃色固體的標題化合物。(0.23g，99％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.64(m，1H)，7.56(m，1H)，7.35(m，10H)，7.11(d，1H，J＝8.3Hz)，6.94(d，1H，J＝8.5Hz)，6.22(d，1H，J＝8.1Hz)，5.60(brt，1H，J＝5.3Hz)，4.49(s，2H)，4.37(brs，2H)，4.19(d，2H，J＝5.5Hz)，3.56(s，2H)，2.34(s，3H)，2.23(s，3H)，2.22(s，3H)。質譜(LCMS，ESIpos.)C30H32N4O4S的計算值545.2(M+H)。實測值545.2。
2.N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-(2-羥基-6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺鹽酸鹽 將前一步驟的產物(0.22g，0.41mmol)和10％鈀(O)/碳(0.03g)溶解在2∶1乙醇∶THF(30mL)中，用氮和真空脫氣，再在氫氣球下在環境溫度下攪拌。在7小時後，用塞力特過濾反應物，用甲醇在玻璃料上洗滌，以及濾液在真空中濃縮。殘留物用HCl的4N乙醇溶液(約3mL)處理，在高度真空下蒸發，溶解在DCM中，過濾，再次在高度真空下蒸發濾液，獲得了呈淺棕色固體的標題化合物(0.14g，71％)。1H NMR(300MHz，CDCl3/CD3OD)δ7.60(m，3H)，7.33(m，2H)，6.82(d，1H，J＝8.2Hz)，6.67(d，1H，J＝9.0Hz)，6.58(d，1H，J＝8.3Hz)，4.18(s，2H)，3.58(s，2H)，2.45(s，3H)，2.37(s，3H)，2.25(s，3H)。質譜(LCMS，ESI pos.)C23H26N4O4S的計算值455.2(M+H)。實測值455.2。
實施例113-({N-(2-(胍基氧基)乙基]氨基甲醯基}甲基)-2-羥基-4-甲基苯基3-甲基苯磺酸酯鹽酸鹽 1.3-甲基苯磺酸2-甲氧基-4-甲基苯基酯
將間甲苯磺醯氯(0.53g，2.78mmol)和2-甲氧基-4-甲基酚(0.38g，2.75mmol)在DCM(10mL)中的溶液用三乙胺(0.5mL，3.6mmol)處理，並在環境溫度下攪拌。在18小時後，在真空中濃縮反應物，將殘留物溶解在1∶1己烷∶DCM中，過濾，以及在高度真空下蒸發濾液，獲得了呈白色固體的標題化合物(0.79g，99％)。1HNMR(300MHz，CDCl3)δ7.72(brs，1H)，7.66(brd，1H，J＝7.2Hz)，7.45(brd，1H，J＝7.2Hz)，7.38(t，1H，J＝7.6Hz)，7.00(d，1H，J＝8.1Hz)，6.67(m，1H)，3.54(s，3H)，2.42(s，3H)，2.31(s，3H)。
2.3-甲基苯磺酸2-羥基-4-甲基苯基酯 將前一步驟的產物(0.79g，2.72mmol)溶解在DCM(10mL)中，冷卻到-78℃，再用三溴化硼在DCM(3.0mL)中的1N溶液在氮氣下處理。在10分鐘後，移走於冰浴，再將反應物攪拌另外1小時，同時升至環境溫度。在用水緩慢驟冷後，反應物用另外的DCM稀釋，用鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，再過濾。濾液在真空中濃縮，殘留物通過急驟柱層析法(梯度洗脫在DCM中的50％到33％到0％己烷)純化，獲得了呈白色結晶固體的標題化合物(0.51g，68％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.71(brs，1H)，7.67(brd，1H，J＝7.7Hz)，7.51(brd，1H，J＝8.1Hz)，7.43(t，1H，J＝7.7Hz)，6.81(d，1HJ＝1.7Hz)，6.63(d，1H，J＝8.3Hz)，6.55(m，1H)，5.87(s，1H)，2.43(s，3H)，2.26(s，3H)。
3.3-甲基苯磺酸4-甲基-2-丙-2-烯基氧基苯基酯 將前一步驟的產物(0.51g，1.83mmol)，烯丙基溴(0.20mL，2.30mmol)碳酸銫(0.77g，2.40mmol)在DMF(25mL)中的溶液在環境溫度下攪拌16小時。反應物在真空中濃縮，將殘留物溶解在DCM中，過濾，以及濾液用1NKOH水溶液、水和鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，再過濾。蒸發過的濾液然後產生了呈淺黃色油的標題化合物(0.54g，93％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.72(s，1H)，7.64(d，1H，J＝7.7Hz)，7.42(d，1H，J＝7.7Hz)，7.35(t，1H，J＝7.7Hz)，7.04(d，1H，J＝8.2Hz)，6.68(m，2H)，5.80(ddt，1H，J＝17.3Hz，10.6Hz，5.1Hz)，5.28(ddd，1H，J＝17.3Hz，3.1Hz，1.6Hz)，5.20(ddd，1H，J＝10.6Hz，2.8Hz，1.3Hz)，4.29(dt，2H，J＝5.1Hz，1.5Hz)，2.40(s，3H)，2.30(s，3H)。
4.3-甲基苯磺酸2-羥基-4-甲基-3-丙-2-烯基苯酯 將前一步驟的產物(0.54g，1.70mmol)在200℃下均勻加熱6小時，冷卻到環境溫度，再通過急驟柱層析法純化2次(第一次用2∶1DCM∶己烷，然後用4∶1己烷∶乙酸乙酯洗脫劑)，獲得了呈無色油的標題化合物(84mg，16％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.74(s，1H)，7.67(d，1H，J＝7.8Hz)，7.44(d，1H，J＝7.6Hz)，7.36(t，1H，J＝7.7Hz)，6.86(d，1H，J＝8.3Hz)，6.55(d，1H，J＝8.3Hz)，4.74(m，1H)，3.15(dd，1H，J＝1 5.5Hz，8.9Hz)，2.61(dd，1H，J＝15.5Hz，7.6Hz)，2.41(s，3H)，2.16(s，3H)，1.24(d，2H，J＝6.3Hz)。
5.3-甲基苯磺酸4-甲基-2-(苯基甲氧基)-3-丙-2-烯基苯酯 在環境溫度下，將前一步驟的產物(68mg，0.21mmol)和碳酸銫(0.19g，0.58mmol)溶解在DMF(5mL)中，再用苄溴(0.05mL，0.42mmol)處理。在3天後，反應物在真空中濃縮，以及殘留物通過急驟柱層析法(DCM洗脫劑)純化，獲得了呈淺黃色油的標題化合物(50mg，58％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.60(brs，1H)，7.54(brd，1H，J＝7.8Hz)，7.34(m，4H)，7.27(m，3H)，7.10(d，1H，J＝8.4Hz)，6.91(d，1H，J＝8.4Hz)，5.74(ddt，1H，J＝17.1Hz，10.2Hz，5.7Hz)，4.93(dq，1H，J＝10.2Hz，1.7Hz)，4.81(s，2H)，4.72(dq，1H，J＝17.1Hz，1.8Hz)，3.30(dt，2H，J＝5.7Hz，1.7Hz)，2.24(s，3H)，2.23(s，3H)。
6.3-甲基苯磺酸4-甲基-3-(2-氧代乙基)-2-(苯基甲氧基)苯基酯
向前一步驟的產物(50mg，0.12mmol)和過碘酸鈉(0.12g，0.56mmol)在5∶1乙腈∶水(12mL)中的溶液添加氯化釕(III)水合物(8mg，0.04mmol)。將反應物在環境溫度下攪拌6小時，用DCM稀釋，再用5％亞硫酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌。有機溶液用硫酸鈉乾燥，過濾，再蒸發濾液，獲得了作為粗油的標題化合物，它在沒有進一步純化的情況下使用。
7.2-{6-甲基-3-[(3-甲基苯基)磺醯氧基]-2-(苯基甲氧基)苯基}乙酸 將前一步驟的產物溶解在丙酮(5mL)中，再用重鉻酸鈉(65mg，0.22mmol)和濃硫酸(1mL)在水(4mL)中的溶液在環境溫度下處理。在攪拌3天後，在真空中除去丙酮，剩餘含水層用DCM萃取。有機相然後用鹽水洗滌，用硫酸鈉乾燥，過濾，以及蒸發過的濾液用急驟柱層析法(在DCM中的8％甲醇洗脫劑)純化，獲得了呈白色固體的標題化合物(45mg，步驟5的88％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.61(brs，1H)，7.53(brd，1H，J＝7.8Hz)，7.33(brd，1H，J＝7.6Hz)，7.27(m，6H)，7.12(d，1H，J＝8.4Hz)，6.92(d，1H，J＝8.4Hz)，4.87(s，2H)，3.60(s，2H)，2.24(s，3H)，2.23(s，3H)。
8.3-甲基苯磺酸3-({N-[2-({N，N』-二-[叔丁氧羰基]}胍基氧基)乙基]氨基甲醯基}甲基)-4-甲基-2-(苯基甲氧基)苯酯 向前一步驟的產物(45mg，0.11mmol)，BOP(48mg，0.11mmol)，和[N，N』-二(叔丁氧羰基)]-2-氨基乙氧基胍(TianbaoLu等人，WO99/26926(1999))(39mg，0.11mmol)在DMF(5mL)中的溶液添加三乙胺(0.2mL，1.4mmol)。在環境溫度下攪拌18小時後，反應物在真空中濃縮，以及殘留物通過急驟柱層析法(3∶1DCM∶乙酸乙酯洗脫劑)純化，獲得了呈無色油的標題化合物(61mg，79％)。1H NMR(300MHz，CDCl3)δ9.11(s，1H)，7.65(brs，1H)，7.58(brd，1H，J＝8.5Hz)，7.48(m，1H)，7.36(brd，1H，J＝7.6Hz)，7.29(m，7H)，7.03(d，1H，J＝8.4Hz)，6.90(d，1H，J＝8.5Hz)，4.92(s，2H)，4.02(m，2H)，3.66(s，2H)，3.50(dd，2H，J＝9.2Hz，5.2Hz)，2.28(s，3H)，2.26(s，3H)，1.51(s，9H)，1.45(s，9H)。
9.3-甲基苯磺酸3-({N-[2-({N，N』-二-[叔丁氧羰基]}胍基氧基)乙基]氨基甲醯基}甲基)-2-羥基-4-甲基苯酯 將前一步驟的產物(61mg，0.08mmol)和10％鈀(o)/碳(20mg)溶解在THF、甲醇和水的1∶1∶1混合物(50mL)中，用氮和真空脫氣，再在氫氣球下在環境溫度下強力攪拌。在18小時後，反應物用塞力特過濾，用甲醇在玻璃料上洗滌，以及蒸發過的濾液通過急驟柱層析法(在DCM中的10％乙酸乙酯洗脫劑)純化，獲得了呈無色固體的標題化合物(40mg，74％)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ9.25(s，1H)，8.50(brt，1H，J＝4.9Hz)，7.79(s，1H)，7.57(d，1H，J＝7.7Hz)，7.59(brs，1H)，7.43(d，1H，J＝7.7Hz)，7.38(t，1H，J＝7.6Hz)，6.90(d，1H，J＝8.3Hz)，6.62(d，1H，J＝8.4Hz)，4.08(m，2H)，3.69(s，2H)，3.56(dd，2H，J＝8.7Hz，5.0Hz)，2.41(s，3H)，2.35(s，3H)，1.51(s，9H)，1.50(s，9H)。
10.3-甲基苯磺酸3-({N-[2-(胍基氧基)乙基]氨基甲醯基}甲基)-2-羥基-4-甲基苯基酯鹽酸鹽 將前一步驟的產物(40mg，0.06mmol)溶解在DCM(4mL)中，再用純三氟乙酸(1.5mL)在環境溫度下處理。在3小時後，反應物在真空中濃縮，以及殘留物通過製備薄層色譜法(用氨氣飽和的在DCM中的20％甲醇作為洗脫劑)，純化，用在乙醇中的4NHCl處理，再過濾。蒸發過的濾液用二乙醚洗滌，以及在高度真空下乾燥，獲得了呈淺黃色固體的標題化合物。(17mg，57％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.87(s，1H)，9.76(s，1H)，7.67(m，5H)，7.60(d，1H，J＝7.6Hz)，7.51(t，1H，J＝7.7Hz)，6.70(d，1H，J＝8.3Hz)，6.60(d，1H，J＝8.5Hz)，3.79(t，2H，J＝5.5Hz)，3.45(m，4H)，2.39(s，3H)，2.17(s，3H)。
質譜(LCMS，ESIpos.)C19H24N4O6S的計算值437.1(M+H)。實測值437.3。
實施例12片劑製備如以下所述製備分別含有25.0，50.0和100.0mg的以下活性化合物的片劑a.N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯胺三氟乙酸鹽；和b.N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯胺鹽酸鹽。
含25-100mg活性化合物劑量的片劑量-mg活性化合物25.0 50.0 100.00微晶纖維素37.25 100.0 200.0改性食品玉米澱粉 37.25 4.25 8.5硬脂酸鎂 0.50 0.75 1.5全部的活性化合物，纖維素，和一部分的玉米澱粉被混合和造粒成10％玉米澱粉糊。所獲得的顆粒物進行篩選，乾燥和與剩餘部分的玉米澱粉和硬脂酸鎂摻混。所獲得的顆粒物然後被壓製成每片分別含有25.0，50.0和100.0mg的活性成分的片劑。
實施例13靜脈內溶液製備如下製備實施例1和2的以上所指定的活性化合物的靜脈內劑型活性化合物0.5-10.0mg檸檬酸鈉 5-50mg檸檬酸1-15mg
氯化鈉 1-8mg注射用水(USP)相對於1ml的餘量利用上述用量，在室溫下將活性化合物溶解在預先製備的氯化鈉，檸檬酸，和檸檬酸鈉在注射用水的溶液中(USP，參見1995版的United States Pharmacopeia/National Formulary的1636頁，由United States Pharmacopeial Convention，Inc.，Rockyille，Maryland出版(1994)。
實施例14純化酶的活體外抑制試劑全部緩衝鹽是從Sigma Chemical Company(St.Louis，MO)獲得，並且具有可行的最高純度。酶底物，N-苯甲醯基-Phe-Val-Arg-對-硝基苯胺(Sigma B7632)，N-苯甲醯基-Ile-Glu-Gly-Arg-對-硝基苯胺鹽酸鹽(Sigma B2291)，N-對-甲苯磺醯基-Gly-Pro-Lys-對-硝基苯胺(Sigma T6140)，N-琥珀醯基-Ala-Ala-Pro-Phe-對-硝基苯胺(Sigma S7388)和N-CBZ-Val-Gly-Arg-對-硝基苯胺(Sigma C7271)都是從Sigma獲得的。N-琥珀醯基-Ala-Ala-Pro-Arg-對-硝基苯胺(BACHEML-1720)和N-琥珀醯基-Ala-Ala-Pro-Val-對-硝基苯胺(BACHEML-1770)是從BACHEM(King of Prussia，PA)獲得。
人α-凝血酶，人因子Xa和人纖溶酶都是從Enzyme ResearchLaboratories(South Bend，Indiana)獲得。牛α-糜蛋白酶(SigmaC4129)，牛胰蛋白酶(Sigma T8642)和人腎細胞尿激酶(Sigma U5004)是從Sigma獲得。人白細胞彈性蛋白酶是從Elastin Products(Pacific，MO)獲得。
Ki測定全部試驗是基於試驗化合物抑制肽對-硝基苯胺底物的酶催化水解的能力。在典型的Ki測定中，底物是在DMSO中製備，並且稀釋到由50mM HEPES，200mM NaCl，pH7.5組成的分析緩衝液中。每一種底物的最後濃度列於如下。通常，底物濃度低於Km的實驗測定值。試驗化合物是作為在DMSO中的1.0mg/ml溶液來製備。稀釋液是在DMSO中製備，得到了包括200倍濃度範圍的8個最終濃度。在分析緩衝液中按下面所列濃度製備酶溶液。
在典型的Ki測定中，用移液管向96孔板的每個孔中移取280mL的底物溶液，10mL的試驗化合物溶液，然後將該板在MolecularDevices板讀取器中在37℃下熱平衡＞15分鐘。通過添加酶的10mL等分試樣來引發反應，在405nm下提高的吸光率被記錄15分鐘。在計算中使用與低於10％的總底物水解對應的數據。不含試驗化合物的樣品的速度的比率(吸光率變化速率與時間的關係)除以含有試驗化合物的樣品的速度，並作為試驗化合物濃度的函數來描繪。該數據擬合到線性回歸，計算直線斜率的值。斜率的倒數是實驗上確定的Ki值。
凝血酶凝血酶活性是作為水解該底物N-琥珀醯基-Ala-Ala-Pro-Arg-對-硝基苯胺的能力來分析。底物溶液是以在分析緩衝液中32mM的濃度(32mM＜＜Km＝180mM)來製備。最終的DMSO濃度是4.3％。提純後的人α-凝血酶被稀釋到分析緩衝液中達到15nM的濃度。最終試劑濃度是[凝血酶]＝0.5nM，[底物N-琥珀醯基-Ala-Ala-Pro-Arg-對-硝基苯胺]＝32mM。
因子X[FXa]FXa活性是作為水解該底物N-苯甲醯基-Ile-Glu-Gly-Arg-對-硝基苯胺鹽酸鹽的能力來分析的。底物溶液是以在分析緩衝液中51mM的濃度(51＜＜Km＝1.3mM)製備的。最終的DMSO濃度是4.3％。將純化的活化的人因子X稀釋到分析緩衝液中達到300nM的濃度。最終試劑濃度是[FXa]＝10nM，[N-苯甲醯基-Ile-Glu-Gly-Arg-對-硝基苯胺鹽酸鹽]＝51mM。
纖溶酶纖溶酶活性是作為水解該N-p-甲苯磺醯基-Gly-Pro-Lys-對-硝基苯胺的能力來分析。底物溶液是以在分析緩衝液中37mM的濃度(37mM＜＜Km＝243mM)製備的。最終的DMSO濃度是4.3％。提純後的人纖溶酶被稀釋到分析緩衝液中達到240nM的濃度。最終試劑濃度是[纖溶酶]＝8nM，[N-對-甲苯磺醯基-Gly-Pro-Lys-對-硝基苯胺]＝37mM。
糜蛋白酶糜蛋白酶活性是作為水解該N-琥珀醯基-Ala-Ala-Pro-Phe-對-硝基苯胺的能力來分析。底物溶液是以在分析緩衝液中14mM的濃度(14mM＜＜Km＝62mM)製備的。最終的DMSO濃度是4.3％。提純後的牛糜蛋白酶被稀釋到分析緩衝液中達到81nM的濃度。最終試劑濃度是[糜蛋白酶]＝2.7nM，[N-琥珀醯基-Ala-Ala-Pro-Phe-對-硝基苯胺]＝14mM。
胰蛋白酶胰蛋白酶活性是作為水解該N-苯甲醯基-Phe-Val-Arg-對-硝基苯胺的能力來分析。底物溶液是以在分析緩衝液中13mM的濃度(13mM＜＜Km＝291mM)製備的。最終的DMSO濃度是4.3％。提純後的牛胰蛋白酶被稀釋到分析緩衝液中達到120nM的濃度。最終試劑濃度是[胰蛋白酶]＝4nM，[N-苯甲醯基-Phe-Val-Arg-對-硝基苯胺]＝13mM。
彈性蛋白酶彈性蛋白酶活性是作為水解該N-琥珀醯基-Ala-Ala-Pro-Val-對-硝基苯胺的能力來分析。底物溶液是以在分析緩衝液中19mM的濃度(19mM＜＜Km＝89mM)製備的。最終的DMSO濃度是4.3％。提純後的人白細胞彈性蛋白酶被稀釋到分析緩衝液中達到750nM的濃度。最終試劑濃度是[彈性蛋白酶]＝25nM，[N-琥珀醯基-Ala-Ala-Pro-Val-對-硝基苯胺]＝19mM。
尿激酶尿激酶活性是作為水解該N-CBZ-Val-Gly-Arg-對-硝基苯胺的能力來分析。底物溶液是以在分析緩衝液中100mM的濃度(100mM＜Km＝1.2mM)製備的。最終的DMSO濃度是4.3％。提純後的人腎尿激酶被稀釋到分析緩衝液中達到1.2mM的濃度。最終試劑濃度是[尿激酶]＝40nM，和[N-CBZ-Val-Gly-Arg-對-硝基苯胺]＝100mM。
結果表明，實施例1-11的化合物具有對於人凝血酶而言在0.0028-20μM之間的Ki值。實施例5的化合物具有0.0028μM的Ki值。
現在已充分地描述了本發明，本技術領域中的那些技術人員會明白，本發明能夠在不影響本發明的範圍或它的任何實施方案的寬而等同範圍的條件，配方和其它參數內完成。這裡所列舉的全部專利和出版物以它們的整個內容充分引入供參考。
權利要求
1.通式I的化合物 或它的溶劑化物，水合物或可藥用的鹽；其中W是氫，R1，R1OC(O)，R1C(O)，R1(CH2)sNHC(O)，R1S(O)2，或(R1)2CH(CH2)sNHC(O)，其中s是0-4；R1是R2，R2(CH2)tC(R12)2，其中t是0-3，並且各R12能夠是相同的或不同的，(R2)(OR12)CH(CH2)p，其中p是1-4，(R2)2(OR12)C(CH2)p，其中p是1-4，R2C(R12)2(CH2)t，其中t是0-3，並且各R12能夠是相同的或不同的，其中(R12)2還可以與C一起形成以C3-9環烷基為代表的環，R2CF2C(R12)2(CH2)q，其中q是0-2，並且各R12能夠是相同的或不同的，其中(R12)2還可以與C一起形成以C3-9環烷基為代表的環，R2CH2C(R12)2(CH2)q，其中q是0-2，並且各R12能夠是相同的或不同的，其中(R12)2還可以與C一起形成以C3-9環烷基為代表的環，(R2)2CH(CH2)r，其中r是0-4和各R2能夠是相同的或不同的，並且其中(R2)2也能夠與CH形成環，該環的代表有C3-9環烷基，C7-12二環烷基，C10-16三環烷基，或5-到7-員單環或二環的雜環，後者能夠是飽和的或不飽和的，並且它含有1至3個選自N，O和S中的雜原子，R2O(CH2)p，其中p是2-4，(R2)2CF(CH2)r，其中r是0-4和各R12能夠是相同的不同的，其中(R12)2還可以與C一起形成環，該環的代表有C3-9環烷基，C7-12二環烷基，C10-16三環烷基，或5-到7-員單環或二環的雜環，後者能夠是飽和的或不飽和的，並且它含有1-3個選自N，O和S中的雜原子， 其中s是0或1，或R2CF2C(R12)2；R2是苯基，萘基，或聯苯，其中每一個是未被取代的或被下列基團中的一個或多個取代C1-4烷基，C1-4烷氧基，滷素，羥基，CF3，OCF3，COOH，CONH2或SO2NH2，5-到7-員單環族或9-到10-員二環族的飽和或不飽和雜環或非雜環，其中該雜環含有1-4個選自N，O和S中的雜原子，並且其中該雜環或非雜環是未被取代的或被滷素或羥基取代，C1-12烷基，未被取代的或被下列基團中的一個或多個取代羥基，COOH，氨基，任選C1-3烷基取代的芳基，C3-9環烷基，CF3，N(CH3)2，雜芳基，或雜環烷基，CF3，C3-9環烷基，未被取代的或被芳基取代，C7-12二環烷基，或C10-16三環烷基；Y是-NH-或-O-；R3，R4，R5和R6獨立地是氫，烷基，環烷基，鏈烯基，炔基，任選取代的芳基，任選取代的芳烷基，任選取代的雜芳基，滷代烷基，羥基，烷氧基，芳氧基，雜芳氧基，滷素，滷代烷氧基，羥烷基，氰基，硝基，-CO2Rx，-CH2ORx或-ORx，其中Rx在每種情況下獨立地是氫，C1-12烷基或C3-9環烷基中的一個，其中該C1-12烷基或C3-9環烷基可以任選具有一個或多個不飽和鍵；R11是氫，烷基，或鏈烯基；R12是氫或滷素，苯基，萘基，或聯苯，其中每一個是未被取代的或被下列基團中的一個或多個取代C1-4烷基，C1-4烷氧基，滷素，羥基，CF3，OCF3，COOH，或CONH2，5-到7-員單環族或9-到10-員二環族的雜環，它能夠是飽和或不飽和的，並且它含有1-4個選自N，O和S中的雜原子，C1-12烷基，未被取代的或被下列基團中的一個或多個取代羥基，COOH，氨基，C6-14芳基，雜芳基，或雜環烷基，CF3，C3-9環烷基，C7-12二環烷基，或C10-16三環烷基；B是選自 或 其中R7，R8，R9，和R10獨立地是氫，烷基，芳烷基，芳基，羥烷基，氨基烷基，單烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基或羧基烷基；或R7和R8聯在一起形成-(CH2)u-，其中u是2到7，優選2到5，而R9和R10如以上所定義；或R9和R10聯在一起形成-(CH2)v-，其中v是2到7，優選2到5，而R7和R8如以上所定義；或R7和R9聯在一起形成-(CH2)y-，其中y是0(一個鍵)或1-7，優選0-4，而R8和R10如以上所定義；X是-O-，-NR18-，或-CH＝N-(其中N鍵接於NR13上)，其中R18是氫，烷基，環烷基或芳基，其中該烷基、環烷基或芳基任選被氨基，單烷基氨基，二烷基氨基，烷氧基，羥基，羧基，烷氧基羰基，芳氧基羰基，芳烷氧基羰基，芳基，雜芳基，醯氨基，氰基或三氟甲基取代；Ra，Rb和Rc獨立地是氫，烷基，羥基，烷氧基，芳氧基，芳烷氧基，烷氧基羰基氧基，氰基或-CO2Rw，其中Rw是C1-12烷基，C3-9環烷基，C6-14芳基，C6-14芳基(C1-12)烷基， 或 其中Re和Rf獨立地是氫，C1-6烷基，C2-6鏈烯基或C6-14芳基，Rg是氫，C1-6烷基，C2-6鏈烯基或C6-14芳基，Rh是氫，C1-6烷基，C2-6鏈烯基或C6-14芳基，和Ri是C6-14芳基(C1-12)烷基或C1-6烷基；n是0到8；和m是0到6；R13是氫，烷基，鏈烯基，芳烷基，芳基，羥烷基，氨基烷基，單烷基氨基烷基，二烷基氨基烷基或羧基烷基；R14和R15獨立地是氫，烷基，環烷基，滷素或烷氧基；和R16和R17獨立地是氫，烷基，羥基，烷氧基，芳氧基，烷氧基羰基，氰基或-CO2Rj，其中Rj是C1-12烷基，C3-9環烷基，C6-14芳基，C6-14芳基(C1-12)烷基，滷代(C1-12)烷基，或 其中Re、Rf和Rg獨立地是氫或C1-12烷基。
2.權利要求1的化合物，其中R3，R4，R5和R6獨立地是氫，C1-12烷基，C3-9環烷基，滷素，C2-20鏈烯基，C2-20炔基，任選取代的C6-14芳基，任選取代的C6-14芳基(C1-12)烷基，任選取代的雜芳基，滷素(C1-12)烷基，C1-12烷氧基，C6-14芳氧基，雜芳氧基，滷代(C1-20)烷氧基或羥基(C1-12)烷基；R11是氫，C1-12烷基或C2-20鏈烯基；R7，R8，R9和R10獨立地是氫，C1-12烷基，C6-14芳基(C1-12)烷基，C6-14芳基，羥基(C1-12)烷基，氨基(C1-12)烷基，單(C1-12)烷基氨基(C1-12)烷基，二(C1-12)烷基氨基(C1-12)烷基，或羧基(C1-12)烷基；R18是C1-12烷基，C3-9環烷基或C6-14芳基，其中每一個任選被氨基，單(C1-12)烷基氨基，二(C1-12)烷基氨基，C1-20烷氧基，羥基，羧基，C1-20烷氧基羰基，C6-14芳氧基羰基，C6-14芳基(C1-20)烷氧基羰基，C6-14芳基，C5-10雜芳基，醯氨基，氰基或三氟甲基取代；Ra，Rb和Rc獨立地是C1-12烷基，C1-20烷氧基，C6-14芳氧基，C6-14芳基(C1-20)烷氧基，或C1-20烷氧基羰基氧基；R13是C1-12烷基，C1-20烷氧基，C6-14芳氧基或C1-20烷氧基羰基；R14和R15獨立地是C1-12烷基，C3-9環烷基或C1-20烷氧基；和R16和R17獨立地是C1-12烷基，C1-20烷氧基，C6-14芳氧基或C1-20烷氧基羰基。
3.根據權利要求1的化合物，其中B是
4.根據權利要求1的化合物，其中B是
5.根據權利要求1-4中任何一項的化合物，其中Y是-NH-。
6.根據權利要求1-5中任何一項的化合物，其中W是R1或R1S(O)2，其中R1是R2且R2是任選被取代的芳基或被芳基取代的C1-7烷基。
7.根據權利要求1-5中任何一項的化合物，其中W是R1，其中R1是R2或R2CF2C(R12)2(CH2)q，和R2是任選被取代的芳基或被芳基取代的C1-7烷基；R12是氫；和q等於零。
8.根據權利要求1和3-7中任何一項的化合物，其中R6是C1-6烷基或滷素。
9.根據權利要求8的化合物，其中R6是甲基，氯或氟。
10.根據權利要求9的化合物，其中R6是氯而R3是氟或羥基。
11.根據權利要求1，3-10中任何一項的化合物，其中R11是氫。
12.根據權利要求1，3和5-11中任何一項的化合物，其中Ra，Rb，Rc和R13各自是氫。
13.根據權利要求1和3-12中任何一項的化合物，其中R7，R8，R9和R10中每一個是氫。
14.權利要求1的化合物，它是以下當中的一種N-[2-脒基氨基氧基)乙基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯基乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯胺；N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯基乙基)氨基]-6-氯-2-氟苯基}乙醯胺；N-(6-氨基-2，4-二甲基(3-吡啶基))甲基]-2-{3-[(2，2-二氟-2-苯基乙基}乙醯胺；N-[2-(脒基氨基氧基)乙基]-2-(3-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醯胺；N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-{[2，2-二氟-2-(4-氟萘基)乙基]氨基}-6-氯-2-氟苯基)乙醯胺；N-2-(胍基氧基)乙基]-2-(3-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺；N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(2-氯-5-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺；N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(2-甲基-5-{[苄基磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺；N-[2-(胍基氧基)乙基]-2-(2-羥基-6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺；N-[(6-氨基-2-甲基(3-吡啶基))甲基]-2-(2-羥基-6-甲基-3-{[(3-甲基苯基)磺醯基]氨基}苯基)乙醯胺；或N-({N-[2-(胍基氧基)乙基]氨基甲醯基}甲基)-2-羥基-4-甲基苯基3-甲基苯磺酸酯；或它們的溶劑化物，水合物或可藥用的鹽。
15.藥物組合物，它包括權利要求1-14中任何一項的化合物和可藥用的載體。
16.根據權利要求15的藥物組合物，進一步包括抗凝劑，抗血小板劑或溶栓劑中的至少一種。
17.根據權利要求15的藥物組合物，其中化合物是以大約0.1和大約500mg之間的量存在。
18.抑制或治療哺乳動物異常蛋白水解，血栓形成，局部缺血，中風，再狹窄或炎症的方法，包括對該哺乳動物施用有效量的權利要求1-14中任何一項的化合物。
19.治療或預防哺乳動物以牽涉到凝血酶產生或作用的異常靜脈或動脈血栓形成為特徵的症狀的方法，包括對該哺乳動物施用權利要求15的組合物。
20.用於血液收集、血儲存或血液循環的醫用裝置，它包括被包埋於或以物理方式附著於該醫用裝置中的權利要求1-14中任何一項的化合物。
21.根據權利要求20的醫用裝置，它是導管，支架，血液透析機，血收集注射器或管，或血線。
22.抑制蛋白水解酶的作用的方法，包括讓該酶與權利要求1-14中任何一項的化合物接觸。
23.根據權利要求22的方法，其中該酶是白細胞嗜中性粒細胞彈性蛋白酶，糜蛋白酶，胰蛋白酶，尿激酶，纖溶酶原激活物，胰彈性蛋白酶，組織蛋白酶G，凝血酶或因子Xa。
24.適合於口服的根據權利要求14-16中任何一項的藥物組合物。
全文摘要
描述了苯基乙醯胺化合物，包括通式(I)的化合物或它的溶劑化物，水合物或可藥用的鹽；其中R
文檔編號A61L31/00GK1568307SQ01818254
公開日2005年1月19日 申請日期2001年10月5日 優先權日2000年10月6日
發明者W·潘, 魯天保, T·P·馬爾科坦, B·E·託姆蘇克 申請人:三維藥物公司