抗Aβ抗體及其用途的製作方法

2023-05-25 10:58:11 2

專利名稱：抗Aβ抗體及其用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及能特異識別β-A4肽的2個區域的抗體分子，其中第一個區域包括SEQ IDNO1所示的胺基酸序列AEFRHDSGY或其片斷且第二個區域包括SEQ ID NO2所示的胺基酸序列VHHQKLVFFAEDVG或其片斷。此外，揭示了編碼發明抗體分子的核酸分子和載體及含所述核酸分子的宿主。另外，本發明提供組合物，優選藥物或診斷組合物，包括發明化合物以及發明抗體分子、核酸分子、載體或宿主的特定用途。
本說明書正文引用了一些文獻。本文所引用的各文獻(包括任何廠商說明書、規程等)納入本文供參考。
約70％的所有痴呆病例是由於阿爾茨海默氏病，此病與對識別關鍵的大腦區域的選擇性操作和神經迴路相關。阿爾茨海默氏病的特徵是神經纖維纏結，特別是海馬的錐形神經元和多種澱粉樣斑，主要含澱粉樣沉積物的緻密核和緩和暈。
胞外神經炎性斑含有大量佔優勢的纖維肽，名為「澱粉樣β」、「A-β」、「Aβ4」、「β-A4」或「Aβ」；參見Selkoe(1994)，Ann.Rev.Cell Biol.10，373-403，Koo(1999)，PNAS第96卷，9989-9990頁，US 4,666,829或Glenner(1984)，BBRC 12，1131。此澱粉樣β衍生自「阿爾茨海默氏前體蛋白/β-澱粉樣前體蛋白」(APP)。APPs是整合膜糖蛋白(參見Sisodia(1992)，PNAS第89卷，6075頁)且是通過血漿膜蛋白酶α-分泌酶在Aβ序列中內切蛋白酶解切割的(參見Sisodia(1992)，在上述引文中)。此外，進一步的分泌酶活性，尤其是β-分泌酶和γ-分泌酶活性導致胞外釋放澱粉樣β(Aβ)，Aβ包括39個胺基酸(Aβ39)、40個胺基酸(Aβ40)、42個胺基酸(Aβ42)或43個胺基酸(Aβ43)；參見Sinha(1999)，PNAS 96，11094-1053；Price(1998)，Science 282，1078到1083；WO 00/72880或Hardy(1997)，TINS 20，154。
注意到Aβ有一些天然產生的形式，其中人類形式指上述Aβ39、Aβ40、Aβ41、Aβ42和Aβ43。最主要形式Aβ42具有胺基酸序列(從N-末端開始)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(SEQ ID NO27)。在Aβ41、Aβ40、Aβ39中，分別缺失C-末端胺基酸A、IA和VIA。在Aβ43-形式中，另外的蘇氨酸殘基包括在上述序列的C-末端(SEQ ID NO27)。
成核Aβ40纖維所需的時間顯著長於成核Aβ42纖維；參見Koo，在上述引文中和Harper(1997)，Ann.Rev.Biochem.66，385-407。綜述於Wagner(1999)，J.Clin.Invest.104，1239-1332。Aβ42更常發現與神經炎必斑相關並認為在體外原纖維形成更多。也提示Aβ42作為有序非晶體Aβ肽的成核依賴性聚合中的「晶種」；Jarrett(1993)，Cell 93，1055-1058。
要強調的是修飾APP加工和/或產生含蛋白質沉積的胞外斑不僅從阿爾茨海默氏的病理學中知道，也從患其它神經和/或神經變性疾病的患者中知道。這些疾病包括唐氏綜合症、澱粉樣變荷蘭型的遺傳性腦出血、帕金森氏病、ALS(肌萎縮側索硬化)、克-雅氏病、HIV-相關痴呆和運動神經病。
為防止、治療和/或改善與澱粉樣斑病理沉積相關的紊亂和/或疾病，必須開發方式和方法幹擾β-澱粉樣斑形成，能防止Aβ聚集和/或用於解聚已形成的澱粉樣沉積物或澱粉樣-β聚集體。
因此，考慮到修飾和/或病理澱粉樣生物學的嚴重缺陷，高度需要治療澱粉樣相關疾病的方式和方法。尤其需要有效藥物幹擾病理澱粉樣聚集或能解聚聚集的Aβ。此外，需要診斷方法檢測澱粉樣斑。
因而，本發明的技術問題是滿足本文上述需要的。
因此，本發明涉及能特異識別β-A4/Aβ4肽的2個區域的抗體分子，其中第一個區域包括胺基酸序列AEFRHDSGY(SEQ ID NO1)或其片斷且第二個區域包括胺基酸序列VHHQKLVFFAEDVG(SEQ ID NO2)或其片斷。
在本發明中，術語「抗體分子」涉及完整免疫球蛋白分子，優選IgMs、IgDs、IgEs、IgAs或IgGs，更優選IgG1、IgG2a、IgG2b、IgG3或IgG4以及部分這種疫球蛋白分子，像Fab-片段或VL-、VH-或CDR-區。此外，術語涉及修飾和/或改變的抗體分子，像嵌合和人源化抗體。術語也涉及修飾和/或改變的單克隆或多克隆抗體以及重組或合成產生/合成的抗體。術語也涉及完整抗體以及抗體片段/其部分，像分離的輕和重鏈Fab、Fab/c、Fv、Fab』、F(ab』)2。術語「抗體分子」也包括抗體衍生物、生物功能抗體和抗體構建物，像單鏈Fvs(scFv)或抗體-融合蛋白。本文下面提供關於本發明術語「抗體分子」的更多細節。
根據本發明的術語「特異識別」指抗體分子能與本文所定義β-A4的2個區域的至少2個胺基酸特異相互作用和/或結合。所述術語涉及抗體分子的特異性，即它分辨本文所定義β-A4肽的特定區域的能力，不是β-A4肽的相關區，不是APP-相關蛋白/肽/(不相關)測試肽。因此，特異性可通過本領域已知方法和本文所示和所述方法來實驗確定。這些方法包括但不限於蛋白質印跡、ELISA-、RIA-、ECL-、IRMA-測試和肽掃描。這些方法也包括確定KD-值，如所附例子所示。肽掃描(肽點)測定)常規用於繪製多肽抗原中的線性表位圖譜。多肽的一級序列在肽相互重疊的活化纖維素上連續合成。通過抗體測試識別某些肽，測試其檢測或識別特定抗原/表位的能力，通過常規顯色(具辣根過氧化物酶的二抗和4-氯奈酚和過氧化氫)、化學發光反應或本領域已知類似方法評估。在化學發光反應的情況中，可定量反應。如果抗體與一組重疊肽反應，能推出反應所需胺基酸的最小序列；參見說明性的實施例6和附加表2。
相同測定可揭示反應肽的2個遠緣簇，指示識別抗原多肽中的不連續即構象表位(Geysen(1986)，Mol.Immunol.23，709-715)。
除了肽點測定，可完成標準ELISA測定。如附加例子所證明，小六肽可偶聯蛋白質並包被免疫板且與待測試抗體反應。評分可通過標準顯色(如有辣根過氧化物酶的二抗和有過氧化氫的四甲基聯苯胺)完成。一些孔中的反應通過光密度評分，例如在450nm。典型背景(＝陰性反應)可以是0.1OD，典型陽性反應可以是1OD。這意味著陽性/陰性差異(比例)能超過10倍。更多細節在附加例子中給出。另外，下文給出定量方法確定特異性和「特異識別」本文所定義β-A4肽的2個區域的能力。
術語「β-A4肽的2個區域」涉及的2個區域由SEQ ID NOs1和2中所示胺基酸序列定義，涉及β-A4肽的N-末端胺基酸2到10和12到25。本發明中的術語「β-A4肽」涉及本文上述的Aβ39、Aβ41、Aβ43，優選Aβ40和Aβ42。Aβ42也描述於附加SEQ ID NO27。注意到術語「β-A4肽的2個區域」也涉及「表位」和/或「抗原決定簇」，包括本文定義的β-A4肽的2個區域或其部分。根據本發明，所述β-A4肽的2個區域在β-A4肽的一級結構中被至少1個胺基酸分開(在胺基酸序列水平上)，優選至少2個胺基酸，更優選至少3個胺基酸，更優選至少4個胺基酸，更優選至少5個胺基酸，更優選至少6個胺基酸，更優選至少9個胺基酸且最優選至少12個胺基酸。如本文所示和附加例子所證明，發明抗體/抗體分子檢測/相互作用和/或結合本文定義的β-A4肽的2個區域，其中所述2個區域被至少1個胺基酸分開(在胺基酸序列一級結構水平上)且其中分開所述2個區域/「表位」的序列可包括超過10個胺基酸，優選14個胺基酸，更優選15個胺基酸或16個胺基酸。例如，MSR-3 Fab(作為發明的抗體分子)識別檢測/相互作用β-A4肽上的2個區域，其中所述第一個區域包括胺基酸3和4(EF)且所述第二個區域包括胺基酸18到23(VFFAED)。因此，待檢測/識別區域/表位間的分開序列在一級胺基酸序列結構上長度為13個胺基酸。類似地，MSR#3.4H7 IgG1是獲得自MSR-3的最佳和成熟抗體且包括於IgG1-構架中，檢測/相互作用/結合β-A4的2個表位/區域，包括本文所定義β-A4的第一個區域位置1到4(DAEF)和第二個區域位置19到24(FFAEDV)。因此，MSR#3.4H7 IgG1識別/檢測/相互作用/結合2個表位/區域，它們在一級胺基酸序列水平上被14個胺基酸分開。如附加例子中所詳述，親和力成熟與單價發明的Fab片段轉變成全長IgG1抗體可導致肽點、ELISA測定等中檢測到的表位/區域的一些擴大。因而，發明的抗體分子能同時和單獨識別β-A4肽/Aβ4的2個區域，其中所述區域包括SEQ ID NO1中所示的胺基酸序列(或其部分)和SEQ IDNO2中所示的胺基酸序列(或其部分)。然而，由於如本文所詳述的可能擴大表位，也檢測/識別序列SEQ ID NO1和2鄰近的胺基酸，即另外的胺基酸是待檢測/識別的2個區域部分。因此，也認為例如本文所定義Aβ(1-42)的第一個胺基酸即D(天冬氨酸)是待檢測/識別的1個表位部分或者檢測/識別位於SEQ ID NO2中所定義區域Aβ(1-42)後的胺基酸。所述另外胺基酸可以是例如在SEQ ID NO27(βA4/Aβ(1-42))26位上的胺基酸，即S(絲氨酸)。
術語也涉及構象表位或不連續表位，由所述2個區域或其部分組成；也參見Geysen(1986)，在上述引文中。在本發明中，構象表位由2個或多個一級序列中分開的不連續胺基酸序列定義，當多肽摺疊成天然蛋白時，這些胺基酸序列在表面集合(Sela，(1969)Science 166，1365和Laver，(1990)Cell 61，553-6)。認為本發明的抗體分子特異結合構象/結構表位/與之相互作用，表位由本文所述β-A4的2個區域或其部分組成和/或包括它們，如本文下面所示。認為本發明「抗體分子」包括對胺基酸延伸同時且獨立的雙重特異性，胺基酸延伸包含(a)β-A4的胺基酸2到10(或其部分)和(b)胺基酸延伸包含胺基酸12到25(或其部分)(SEQ ID NO27)。這些延伸的片段或部分包括至少2個胺基酸，更優選至少3個。優選片段或部分在SEQ ID NO27的第一個區域/延伸即胺基酸序列AEFRHD、EF、EFR、FR、EFRHDSG、EFRHD或HDSG和SEQ ID NO27的第二個區域/延伸即胺基酸序列HHQKL、LV、LVFFAE、VFFAED VFFA或FFAEDV中。如上所述，所述片段也可包括另外的胺基酸或可以是本文所定義片段部分。特定例子是DAE、DAEF、FRH或RHDSG。
本領域描述了一些特異識別Aβ肽的抗體。獲得這些抗體主要通過用Aβ1-40或Aβ1-42或其片段免疫動物，使用標準技術。根據發表的數據，用完整Aβ肽(1-40或1-42)免疫產生的單克隆抗體專一識別Aβ的N-末端附近的表位。此外，例子是抗體BAP-1和BAP-2(Brockhaus，未發表)，它們通過用Aβ1-40免疫小鼠產生並識別較大Aβ肽中的胺基酸4-6；參見附加實施例7、表2和實施例12、表7。識別Aβ中部的抗體通過用較小肽免疫獲得。例如，抗體4G8通過用Aβ肽1-24免疫產生且專一識別序列17-24(Kim，(1988)Neuroscience Research Communications 2，121-130)。許多其它單克隆抗體通過用Aβ衍生的片段免疫小鼠產生，識別Aβ1-40和Aβ1-42的C末端的抗體廣泛用於通過ELISA、蛋白質印跡和免疫組化分析區別和定量生物液體和組織中的相應Aβ肽(Ida等，(1996)J.Biol.Chem.271，22908-22914；Johnson-Wood等.，(1997)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1994)，1550-1555；Suzuki等.，(1994)，Science 264，1336-1340；Brockhaus(1998)，Neuro Rep.9，1481-1486)。BAP-17是小鼠單克隆抗體，通過用Aβ片段35-40免疫小鼠產生。它特異識別Aβ1-40的C-末端(Brockhaus(1998)Neuroreport 9，1481-1486)。
據信用T-細胞依賴抗原(通常是弱免疫原)免疫需要在抗原呈遞細胞的內體中蛋白酶剪切抗原。免疫後體內選擇高親和性抗體通過輔助T細胞接觸抗原呈遞細胞來驅動。抗原呈遞細胞僅呈遞短肽而不是尺寸大的多肽。因此，這些細胞有複雜(但熟知)機制以內吞抗原、在內體中降解抗原、用合適的MHC II型分子結合選擇肽並將肽-MHC複合體輸出到細胞表面。在那裡發生抗原被T細胞特異識別，目標是輔助成熟B細胞。接受大部分T細胞幫助的B細胞有最佳機會發展成抗體分泌細胞並增殖。這顯示通過蛋白水解來加工抗原是體內產生高親和性抗體反應的一個重要步驟且可解釋N-末端Aβ表位在現有單克隆和多克隆抗體現有技術中的優勢，這些抗體由免疫獲得。
相反，選擇本發明抗體/抗體分子通過Fab表達噬菌體物理粘附抗原來驅動。參與此體外選擇過程的抗原沒有降解。選擇並增殖的噬菌體表達對抗原有最高親和性的Fab。附加例子中使用的合成文庫用於選擇根據本發明的特定抗體分子，特別適合避免對單個、連續表位的任何偏性，它們通常發現於獲得自免疫B細胞的文庫。
注意到現有技術沒有描述識別Aβ4的2個單獨區域的抗體分子，特異識別不連續/構象表位和/或能同時且獨立識別Aβ4的2個區域/表位。
當治療開始於年輕動物即神經病理開始前，用Aβ1-42接種過度表達突變人APPV717F(PDAPP小鼠)的轉基因小鼠幾乎完全防止腦中澱粉樣沉積，而在年長動物中觀察到已形成斑減少，提示斑的抗體-介導的清除(Schenk等.，(1999)，Nature400，173-177)。通過此免疫過程產生的抗體抗Aβ4的N-末端反應，Aβ4的N-末端涵蓋胺基酸3-7周圍的表位(Schenk等.，(1999)，在上述引文中；WO 00/72880)。用Aβ1-42主動免疫在不同的阿爾茨海默氏病轉基因模型中也減少行為損傷和記憶喪失(Janus等.，(2000)Nature 408，979-982；Morgan等.，(2000)Nature 408，982-985)。隨後用外周施用抗體即被動免疫的研究證實抗體在APP轉基因小鼠(PDAPP小鼠)中能進入中樞神經系統、修飾斑和誘導清除先前存在的澱粉樣斑(Bard等.，(2000)Nat.Med.6，916-919；WO 00/72880)。在這些研究中，在體內和活體外有最有效的單克隆抗體(觸發外源小膠質細胞中的吞噬作用)識別Aβ4 N-末端表位1-5(mab 3D6，IgG2b)或3-6(mab 1OD5，IgG1)。同樣，用Aβ1-42免疫後分離自小鼠、兔或猴子的多克隆抗體表現出類似的N-末端表位特異性且也有效觸發吞噬作用和體內斑清除。相反，高親和性結合Aβ1-40或Aβ1-42的C-末端特異抗體不在活體外測定中誘導吞噬作用且在體內不有效(WO 00/72880)。單克隆抗體m266(WO 00/72880)抗Aβ13-28(Aβ的中央結構域)且表位圖譜確定抗體特異性涵蓋Aβ序列中的胺基酸16-24。此抗體不很好地結合聚集的Aβ和澱粉樣沉積物並僅與可溶性(單體)Aβ反應，即性質類似於另一種識別相同表位的熟知且可商業購買的單克隆抗體(4G8；Kim，(1988)Neuroscience Research Communications 2，121-130；商業購買自SignetLaboratories Inc.Dedham，MA USA)。
在體內，近來發現m266抗體在外周施用後顯著降低PDAPP小鼠中的Aβ沉積(DeMattos，(2001)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 98，8850-8855)。然而，與N-末端特異抗體相反，m266在體內不修飾澱粉樣斑，因此假設減少腦Aβ負擔是通過抗體-誘導CNS和血漿Aβ間平衡的轉移，導致外周中獲得自腦的Aβ的積聚，穩固地絡合m266(DeMattos，(2001)在上述引文中)。
本發明抗體/抗體分子同時(例如本文所述由βA4的N-末端和中央區域形成的結構/構象表位)且單獨結合N-末端和中央表位，將N-末端特異抗體和中央表位-特異抗體的性質與(例如在附加實驗部分中確證的肽點測定)單個分子中的中央表位特異性抗體結合。本發明所述具有雙重表位特異性的抗體被認為在體內更有效，尤其在醫學和診斷情況中，例如減少澱粉樣斑負擔或澱粉樣發生或澱粉樣沉積物和斑的檢測。熟知在Aβ4聚集和澱粉樣沉積構象變化發生過程中儘管中央表位在可溶性Aβ4中易接近，它似乎隱藏於聚集或纖維性Aβ4中並反應性較小。中央/中間表位特異性抗體m266在體內有效的事實說明中和可溶性Aβ4也能是關鍵參數。由於雙重表位特異性，本發明抗體/抗體分子能以類似效率結合纖維性和可溶性Aβ4，從而可與澱粉樣斑相互作用以及中和可溶性Aβ4。本文在發明抗體分子中使用的術語「同時且單獨結合Aβ4的N-末端和中央/中間表位」涉及本文所述抗體/抗體分子可檢測和/或同時結合2種表位，即同時(例如如本文所述，由βA4的N-末端表位(或(a)其部分)和中央表位(或(a)其部分)形成的構型/結構表位)和相同抗體分子，然而它們也能以單獨方式檢測/結合各定義的表位，如例子中所示肽點分析證明。
直接應用抗體到腦後體內清除PDAPP小鼠中的澱粉樣斑不取決於IgG亞型且可包括非Fc-介導的機制，即斑清除中沒有活性的小膠質參與(Bacskai，(2001)，《第31屆神經科學學會年會摘要》(Abstract Society for Neuroscience 31stAnnualMeeting)，2001年11月10-15日，聖地牙哥)。此觀察與Bard(2000)，在上述引文中較早研究中假定的相反。
在另一個研究中，發現抗Aβ1-28和Aβ1-16肽的抗體在體外有效解集Aβ纖維，而對Aβ13-28特異的抗體在此測定中活性小得多(Solomon，(1997)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 94，4109-4112)。還報導了通過抗Aβ1-28抗體(AMY-33)防止Aβ聚集(Solomon，(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93，452-455)。在相同研究中，抗Aβ片段8-17的抗體6F/3d稍幹擾Zn2+-誘導的Aβ聚集，但對由其它聚集誘導劑誘導的自身積聚沒有效果。
這些體外測定中多種抗體的功效與它們表位在Aβ聚集中的易接近性相關。N-末端被暴露且N-末端特異抗體明顯誘導解聚，而中央區域和C-末端被隱藏且不易接近，因此抗這些表位的抗體的有效性小得多。
關於表位對抗體易接近性的研究顯示在聚集的Aβ中N-末端表位被暴露並與BAP-1抗體反應，而中間和中央表位確實保持隱性，即沒有觀察到4G8抗體的結合。然而在單體Aβ中，2種表位明顯且被2種現有技術的抗體同等識別。
相反，在本發明中，驚訝地發現本文所述抗體分子識別2種不連續胺基酸序列，例如Aβ肽上的構象表位。根據本發明的2種「不連續胺基酸序列」指分別形成N-末端和中央/中間表位的所述2種胺基酸序列在β-A4一級結構上被至少2個胺基酸分開，這些胺基酸不是任一表位的部分。
抗體Fab(＝抗原互補位)的結合區域佔據約30×30_大小的分子表面(Laver，Cell61(1990)，553-556)。這足以接觸15到22個胺基酸殘基，殘基可存在於一些表面環上。由發明抗體分子識別的不連續表位類似一種構象，其中N-末端(殘基2到10或其部分)和中間Aβ肽序列(殘基12到25或其部分)鄰近。僅在此構象內獲得最大數量的抗原-抗體接觸和最低自由能狀態。
在能量計算基礎上提示不以線性序列排列而在表位表面上分散的5-6個殘基的較小亞群促使大部分結合能量而周圍殘基僅構成互補陣列(Laver(1990)在上述引文中)。
發明抗體/抗體分子能結合聚集的Aβ並與AD病人腦中的澱粉樣斑強烈反應(如附加例子中所證明)。此外，它們能解聚/分解澱粉樣積聚。
未被理論約束，認為構象/結構表位(包括本文所述Aβ4的2個區域或其部分)在聚集的Aβ中部分暴露。然而，已知中間/第二個表位/區域的主要部分單獨在這些Aβ聚集中不能自由接近(在中間表位-特異抗體4G8和m266反應性差的基礎上)。另一方面，鑑於上述考慮，可能中間區域的一個或幾個殘基是構象表位的組成並結合來自N-末端區域的殘基，易為本發明抗體接近，從而顯著地促使抗體-Aβ4相互作用的結合能量。因此，有聚集Aβ中構象表位的發明抗體分子的反應性獨特並與現有技術中所述α-Aβ4抗體明顯不同。而如本文上面所指出，發明抗體/抗體分子的進一步獨特特徵是它們同時和獨立結合/識別β-A4上2個分離表位的能力，如本文和附加例子中所定義。在發明的一個較佳實施方案中，發明的抗體分子中由所述抗體特異識別的β-A4的至少2個區域形成構象/結構表位或不連續表位；參見Geysen(1986)，在上述引文中；Ghoshal(2001)，J.Neurochem.77，1372-1385；Hochleitner(2000)，J.Imm.164，4156-4161；Laver(1990)，在上述引文中。術語「不連續表位」指發明中非線性表位，從來自多肽鏈遠距離部分的殘基中集合。當多肽鏈摺疊成3維結構以形成構象/結構表位時，這些殘基集合於表面。本發明提供β-A4內優選、未預期的表位，使發明產生能與這些表位特異相互作用的特異抗體分子。這些發明抗體/抗體分子提供基礎用於提高功效、減少副作用的可能性。然而如上所指出，發明的抗體也能單獨與各定義的β-A4的2個區域/表位反應，例如在附加例子中記載的肽點測定中。
因此，本發明提供獨特工具，可用於體內和體外解聚集合的Aβ纖維和/或能穩定和/或中和單體Aβ的構象表位並從而能防止病理Aβ聚集。
此外，認為發明的抗體在阿爾茨海默氏的腦中澱粉樣斑邊緣結合Aβ沉積物並有效溶解病理初原纖維和纖維。
在一個較佳實施方案中，發明的抗體分子識別本文所定義Aβ4的2個區域內至少2個連續胺基酸，更優選所述抗體分子識別第一個區域和第二個區域中的胺基酸序列，第一個區域中的胺基酸序列包括胺基酸AEFRHD、EF、EFR、FR、EFRHDSG、EFRHD或HDSG且第二個區域中的胺基酸序列包括胺基酸HHQKL、LV、LVFFAE、VFFAED、VFFA或FFAEDV。更多片段或擴大部分包括DAE、DAEF、FRH或RHDSG。
特別優選的是本發明抗體分子包括由SEQ ID NO3、5或7所示核酸分子編碼的可變VH-區或SEQ ID NOs4、6或8所述胺基酸序列顯示的可變VH-區。
SEQ ID NOs3和4所示序列分別描述發明VH-區、親代抗體MSR-3的編碼區和胺基酸序列，SEQ ID NOs5和6的序列分別描述發明VH-區、親代抗體MSR-7的編碼區和胺基酸序列，SEQ ID NOs7和8分別描述發明VH-區、親代抗體MSR-8的編碼區和胺基酸序列。因此，發明也提供抗體分子，包括由SEQ ID NO所示核酸分子編碼的VL-區，SEQ ID NO選自SEQ ID NO9、11或13，或包括SEQ ID NOs10、12或14所示胺基酸序列顯示的可變VL-區。SEQ ID NOs9和10對應於MSR-3的VL-區，SEQ ID NOs11和12對應於MSR-7的VL-區，SEQ ID NOs13和14對應於MSR-8的VL-區。
如附加例子所示，親代抗體MSR-3、-7和-8用於進一步產生最佳化抗體分子，分子具有甚至更好的性質和/或結合親和性。說明了一些對應和可能的策略度示於附加例子中。
如附加例子所示的最優化策略產生了多種發明的最佳抗體。這些最佳化抗體與它們的親代抗體共享VH-區的CDR-3結構域。而原始構架區(如附

圖1所示)保持相同，在成熟/最佳化抗體分子中，CDR1、CDR2和/或VLCDR3-區改變。最佳化抗體分子的說明性、修飾序列目的示於附表1。因此，最佳化抗體分子在本發明範圍中，它們獲得自本文所示MSR-3、-7和-8且能與本文所定義β-A4肽的2個區域特異反應/特異識別。CDR-區可用於產生更多的發明抗體/抗體分子，優選CDR1s，更優選CDR1s和CDR2s，最優選CDR1s、CDR2s和CDR3s，通過本領域已知的CDR-移植方法；參見Jones(1986)，Nature 321，522-515或Riechmann(1988)，Nature 332，323-327。最優選發明抗體/抗體分子以及抗體片段或衍生物獲得自本文所示親代抗體並如上所述與至少1個所述親代抗體共享VH-區的CDR-3結構域。如下所示，也認為產生的交叉-克隆抗體是本發明最佳/成熟的抗體/抗體分子。因此，優選抗體分子也包括或也可獲得自抗體/抗體分子，特徵是任何SEQ ID NOs32到45中所示VH-區或可包括任何SEQ ID NOs60到87所定義CDR3-區。在一個特定實施方案中，本發明最佳化抗體分子分別包括SEQ IDNOs88/89和90/91所示VH-區和VL-區或其部分。其部分可以是CDR-區，優選CDR3-區。最佳類型的特別優選抗體包括特徵示於SEQ ID NOs92或93的H-CDR3和/或特徵示於SEQ ID NOs94或95的L-CDR3。
優選發明抗體/抗體分子的特徵是它們與β-A4和/或來自所述β-A4的肽特異反應。例如，ELISA測試中的光密度，如附加例子所示可被確定且光密度比例能用於確定親代或最佳化抗體的特異反應性。因此，發明的優選抗體在ELISA測試中與β-A4反應以達到光密度，在450nm測量時比沒有β-A4所測光密度高10倍，即10倍高於背景。光密度測量優選在顯色反應開始後幾分鐘(如1、2、3、4、5、6或7分鐘)進行以最優化信號與背景比例。
在一個特定較佳實施方案中，發明的抗體分子包括至少1個由SEQ ID NOs15、17或19所示核酸分子編碼的VH-區的CDR3或至少1個由SEQ ID NOs16、18或20所示VL-區的CDR3胺基酸序列和/或所述抗體分子包括至少1個由SEQ ID NOs21、23或25所示核酸分子編碼的VH-區的CDR3或至少1個由SEQ ID NOs22、24或26所示VH-區的CDR3胺基酸序列。最優選抗體包括至少1個本文所定義VH-區的CDR3。上文所述CDR3結構域涉及發明的例證性親代抗體分子MSR-3、-7或-8。然而，如附表1、8或10所示，通過附加例子所示方法可獲得的成熟和/或最佳化抗體分子能包括修飾的VH-、VL-、CDR1、CDR2和CDR3區。因此，發明的抗體分子優選選自MSR-3、-7和-8或者MSR-3、-7或-8的親和力-成熟形式。MSR-3、-7和-8的親和力-成熟形式以及交叉-克隆形式包括抗體分子，抗體分子包含表1或8所示CDR1、CDR2和/或CDR3區或者特徵示於任何SEQ ID NOs15到20、21到26、60到74、75到87、92和93或94和95。發明的抗體最優選包括至少1個CDR，優選CDR1，更優選CDR2，最優選CDR3，如附表1、8所示或如附表10所證明。
注意到親和力-成熟技術在本領域已知，描述於附加例子和Knappik(2000)，J.Mol.Biol.296，55；Krebs(2000)，J.Imm.Meth.254，67-84；WO 01/87337；WO01/87338；US 6,300,064；EP 96 92 92 78.8和下文所引用的更多參考文獻。
在發明的一個更佳實施方案中，抗體分子是完整抗體(免疫球蛋白，像IgG1、IgG2、IgG2b、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgD或IgE)、F(ab)-、Fabc-、Fv-、Fab』-、F(ab』)2-片段、單鏈抗體、嵌合抗體、CDR-移植抗體、二價抗體-構建物、抗體-融合蛋白、交叉克隆抗體或合成抗體。
也認識到免疫球蛋白基因的遺傳變體。遺傳變體如免疫球蛋白重G鏈亞類1(IgG1)可包括CH1結構域中的G1m(17)或G1m(3)同種異型標記或者CH3結構域中的G1m(1)或G1m(非-1)同種異型標記。發明的抗體分子也包括修飾或突變抗體，像突變IgG，具有提高或減弱的Fc-受體結合或補體活化。還設想用常規方法產生發明的抗體，例如用肽免疫哺乳動物(優選小鼠)產生特異性抗體，肽包含如本文定義的βA4的2個區域，例如N-末端和中央區/表位包含(a)βA4的胺基酸2到10(或(a)其部分)和(b)胺基酸延伸包含β-A4(SEQ ID No.27)的胺基酸12到25(或(a)其部分)。因此，本領域技術人員可產生抗這一種肽的單克隆抗體，且可篩選得到具有同時和單獨結合/與N-末端和中央區/表位反應能力的抗體。在附加例子中提示了相應的篩選方法。
如附加例子所示，發明抗體/抗體分子能容易地和優先地重組構建和表達。發明的抗體分子包括至少1個本文所定義MSR-3、MSR-7或MSR-8親代抗體或來自所述親代抗體的親和力-成熟/最佳化抗體的CDRs，更優選至少2個，優選至少3個，更優選至少4個，更加優選至少5個且最優選至少6個。注意到在發明的重組產生的抗體中也包括6個以上CDRs。本領域技術人員可容易地使用附加例子中給出的信息以推出親代以及親和力最佳化抗體的相應CDRs。通過親代抗體的成熟/最優化獲得的最佳化抗體例子示於附表1。發明的成熟/最佳化抗體分子是例如MSR 7.9H7，其特徵也由本文所附序列確定，序列包括SEQ ID NOs88到95且描述MSR 7.9H7的VH-區(SEQ ID NOs88和89)、MSR 7.9H7的VL-區(SEQ ID NOs90和91)、MSR 7.9H7的H-CDR3(SEQ ID NOs92和93)以及MSR 7.9H7的L-CDR3(SEQ ID NOs94和95)。例證性抗體分子7.9H7獲得自親代抗體MSR7且是本發明最佳/成熟抗體分子的特別優選發明例子。此抗體分子可根據本發明進一步修飾，例如以交叉克隆形式，參見下文和附加例子。
如附加例子所證明，發明的抗體也包括交叉克隆抗體，即抗體包括來自一個或多個本文所述親代或親和力-最佳化抗體的不同抗體區(如CDR區)。這些交叉克隆抗體可以是一些不同構架中的抗體，其中最優選構架是IgG-構架，甚至更優選在IgG1-、IgG2a或IgG2b-構架中。特別優選所述抗體構架是哺乳動物，最優選人構架。輕和重鏈上的結構域有相同的一般結構且各結構域包括4個構架區，其序列相對保守，由稱為互補決定區(CDR1-3)的3個超變結構域連接。
如本文所用，「人構架區」涉及的構架區與天然產生的人免疫球蛋白的構架區大體相同(約85％或更高，通常90-95％或更高)。抗體的構架區即組成輕和重鏈的組合構架區用於安置和排列CDRs。CDRs主要用於結合抗原的表位。注意到本文所述的交叉克隆抗體不但存在於優選的(1)抗體構架，而且在免疫球蛋白構架中可引入抗體分子包括來自本文所述的親代抗體MSR-3、-7或-8或衍生自所述親代抗體的成熟抗體。優選的構架是IgG1、IgG2a和IgG2b。最優選是人構架和人IgG1構架。
如附加例子所示，能通過本領域已知遺傳工程將完整輕鏈從最佳供體克隆轉移到最佳受體克隆。最佳供體克隆的例子是例如L-CDR1(L1)且最佳受體克隆的例子是H-CDR2(H2)。表位特異性可通過結合克隆而保守，克隆具有相同的H-CDR-3區。更多細節在說明性實施例13中給出。
發明的優選交叉克隆抗體分子選自MS-R3.3H1×3.4L9、MS-R #3.4H1×3.4L9、MS-R#3.4H3×3.4L7、MS-R #3.4H3×3.4L9、MS-R #3.4H7×3.4L9、MS-R #3.4H7×3.4L7、MS-R #3.6H5×3.6L1、MS-R #3.6H5×3.6L2、MS-R #3.6.H8×3.6.L2、MS-R #7.2H2×7.2L1、MS-R #7.4H2×7.2L1、MS-R #7.4H2×7.12L2、MS-R #7.9H2×7.2L1(L1)、MS-R#7.9H2×7.12L1、MS-R 7.9H2×7.12L2、MS-R #7.9H2×7.12L2(L1+2)、MS-R #7.9H4×7.11.L2、MS-R #7.11H1×7.2L1、MS-R #7.11H1×7.11L1、MS-R #7.11H2×7.2L1(L1)、MS-R #7.11H2×7.9L1(L1)、MS-R #7.11H2×7.12L1或MS-R #8.1H1×8.2L1。
交叉克隆抗體的產生也描述於附加例子中。上述優選交叉克隆抗體/抗體分子是獲得自本文所示親代抗體的最佳/成熟抗體分子，尤其來自MSR-3和MSR-7，另外，交叉克隆抗體分子/抗體的更多特徵性CDR-序列和V-區在所附SEQ ID NOs32、33、46和47(MSR 3.6H5×3.6.L2；VH-，VL-區)；34、35、48和49(MSR 3.6H8×3.6.L2；VH-，VL-區)；36、37、50和51(MSR 7.4H2×7.2.L1；VH-，VL-區)；38、39、52和53(MSR7.9H2×7.12.L2；VH-，VL-區)；40、41、54和55(MSR #7.9H4×7.12.L2；VH-，VL-區)；42、43、56和57(MSR #7.11H1×7.11.L1；VH-，VL-區)；以及44、45、58和59(MSR #7.11H1×7.2.L1；VH-，VL-區)中給出。這些特別優選的交叉克隆抗體分子的對應CDR3區描述於SEQ ID NOs60到87。對於更多MSR抗體分子，VH-、VL-、CDR區可從附表8或10和所附序列列表中推出，尤其是SEQ ID NOs32到95用於MS-R抗體/抗體分子#3.6H5×3.6L2、#3.6H8×3.6L2、#7.4H2×7.2L1、#7.9H2×7.12L2、#7.9H4×7.12L2、#7.11H1×7.11L1、#7.11H1×7.2L1和#7.9H7或SEQ ID NOS294到413用於MSR-R抗體/抗體分子#3.3H1×3.4L9、#3.4H1×3.4L9、#3.4H3×3.4L7、#3.4H3×3.4L9、#3.4H7×3.4L9、#3.4H7×3.4L7、#3.6H5×3.6L1、#7.2H2×7.2L1、#7.4H2×7.12L2、#7.9H2×7.2L1、#7.9H2×7.12L1、#7.11H2×7.2L1、#7.11H2×7.9L1、#7.11H2×7.12L1或#8.1H1×8.2L1。
因此，除了以上定義的VH-區，發明的優選抗體分子可包括如SEQ ID Nos294到323中任一定義的VH-區。類似地，除了以上定義的VH-區，SEQ ID Nos324到353描述優選的VL-區可包括在發明的抗體分子中。相應的CDR-3區是以上定義的，以及附加的序列示於SEQ ID Nos354到413。
發明的抗體分子可通過本領域已知重組方法容易地產量生產，參見例如Bentley，Hybridoma 17(1998)，559-567；Racher，Appl.Microbiol.Biotechnol.40(1994)，851-856；Samuelsson，Eur.J.Immunol.26(1996)，3029-3034。
在理論上，在可溶性β-A4(單體/寡聚)中，N-末端和中間表位對於抗體相互作用易接近且本發明抗體分子能單獨結合N-末端或中間表位，但在這些情況下不獲得最大親和力。然而，更可能通過同時結合2種表位獲得與抗體互補位的最佳接觸，即類似丁和聚集的β-A4相互作用。因此，本發明抗體是獨特的抗Aβ抗體，因為它們結合聚集的β-A4(通過與N-末端和中間表位相互作用)且同時能穩定和中和可溶性β-A4中的構象表位。這些抗體與現有技術的抗體不同。
最優選本發明抗體分子與Aβ或其定義片段有親和力，KD值低於2000nM，優選低於100nM，更優選低於10nM，最優選低於1nM。測量這種親和力可通過例子所述和本領域已知方法完成。這些方法包括但不限於BIACORETM-測定(www.biacore.com；Malmquist(1999).Biochem.Soc.Trans 27，335-340)和用標記抗體或標記Aβ的固相測定。
發明的抗體分子優選能修飾/與體外(死後)腦切片中的澱粉樣斑反應/結合切片來自患澱粉樣-相關疾病的患者，像阿爾茨海默氏病。發明抗體/抗體分子優選防止體內以及體外測定中的Aβ聚集，如附加例子所述。類似地，本發明的抗體分子優選在例子所示體內和/或體外測定中解聚Aβ聚集。發明抗體/抗體分子的能力用於醫學情況，尤其用於本文以下所述藥物組合物。
發明也提供編碼本文所定義發明抗體分子的核酸分子。
所述核酸分子可以是天然核酸分子以及重組核酸分子。因此，發明的核酸分子可以是天然來源、合成或半合成。它可包括DNA、RNA以及PNA且它可以是它們的雜合體。
對於本領域技術人員顯然的是調節序列能加入發明的核酸分子。例如，可使用啟動子、轉錄增強子和/或能誘導表達發明多核苷酸的序列。合適的誘導系統是例如四環素-調節的基因表達，如Gossen和Bujard(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89(1992)，5547-5551)和Gossen等.(Trends Biotech.12(1994)，58-62)所述，或是地塞米松-誘導型基因表達系統，如Crook(1989)EMBO J.8，513-519所述。
此外，進一步目的是核酸分子可包含例如硫酯鍵和/或核苷酸類似物。所述修飾可用於穩定核酸分子抗細胞中的內和/或外切核酸酶。所述核酸分子能由適當載體轉錄，載體所含嵌合基因能在細胞中轉錄所述核酸分子。在此方面，也要理解的是發明的多核苷酸可用於「基因尋靶」或「基因治療」方法。在另一個實施方案中，標記所述核酸分子。檢測核酸分子的方法在本領域熟知，如DNA和RNA印跡、PCR或引物延伸。此實施例可用於基因治療期間確定成功引入發明的核酸分子的篩選方法。
發明的核酸分子可以是重組產生的嵌合核酸分子，包括單獨或組合的任何上述核酸分子。發明的核酸分子優選是載體的一部分。
因此本發明也涉及包含本發明核酸分子的載體。
本發明的載體可以是例如質粒、粘粒、病毒、噬菌體或另外使用的載體如常規用於遺傳工程的，且可包括更多基因如標記基因，能在合適的宿主細胞和合適的條件下選擇所述載體。
另外，除了發明的核酸序列，本發明的載體可包括表達控制元件，能在合適的宿主中適當表達編碼區。這種控制元件對技術人員已知並可包括啟動子、剪接盒、翻譯起始密碼子、翻譯和插入位點用於將插入引入載體。
發明的核酸分子優選可操作連接於所述表達控制序列，能在真核或原核細胞中表達。
確保在真核和原核細胞中表達的控制元件對本領域技術人員熟知。如上文所述，它們通常包括確保轉錄起始的調節序列和確保轉錄終止及穩定轉錄物的任選多腺苷酸信號。其它調節元件可包括轉錄以及翻譯增強子和/或天然相聯或異源啟動子區域。允許在例如哺乳動物宿主細胞中表達的可能調節元件包括CMV-HSV胸苷激酶啟動子、SV40、RSV-啟動子(勞氏肉瘤病毒)、人延伸因子1α-啟動子、糖皮質激素-誘導型MMTV-啟動子(莫洛尼小鼠腫瘤病毒)、金屬硫蛋白-或四環素誘導型啟動子、或增強子，像CMV增強子或SV40-增強子。對於在神經細胞中表達，可使用神經絲-、PGDF-、NSE-、PrP-或thy-1-啟動子。所述啟動子在本領域已知，描述於Charron(1995)，J.Biol.Chem.270，25739-25745。對於在原核細胞中表達，描述了多種啟動子，包括例如tac-lac-啟動子或trp啟動子。除了用於轉錄起始的元件，這些調節元件也可包括多核苷酸下遊的轉錄終止信號，如SV40-poly-A位點或tk-poly-A位點。在此方面，合適的表達載體在本領域已知，如Okayama-Berg cDNA表達載體pcDV1(Pharmacia)、pRc/CMV、pcDNA1、pcDNA3(In-vitrogene)、pSPORT1(GIBCO BRL)、pX(Pagano(1992)Science 255，1144-1147)，酵母雙雜交載體如pEG202和dpJG4-5(Gyuris(1995)Cell75，791-803)，或原核表達載體如lambda gtll或pGEX(Amersham-Pharmacia)。除了本發明的核酸分子，載體可進一步包括編碼分泌信號的核酸序列。這些序列對於本領域技術人員熟知。此外，取決於所用表達系統，能指導發明肽到細胞區室的前導序列可加入發明核酸分子的編碼序列並在本領域熟知。前導序列在翻譯、起始和終止序列的適當階段集合，優選前導序列能指導翻譯蛋白或其蛋白質分泌到周質空間或胞外基質。任選地，異源序列可編碼融合蛋白，包括賦予所需特徵的C-或N-末端鑑定肽，如穩定或簡化表達重組產物的純化。一旦載體摻入到適當宿主中，宿主維持於適合高水平表達核酸序列的條件下維持，任意地，接著能收集和純化發明的抗體分子或其片斷。因此發明也涉及宿主/宿主細胞，它們包括本文定義的載體。這種宿主可用於加工以獲得發明的抗體/抗體分子以及用於醫學/藥物配置。所述宿主細胞也可包括轉導或轉染的神經元細胞，像神經元幹細胞，優選成體神經元幹細胞。這種宿主細胞能用於移植治療。
另外，本發明載體也可以是表達、基因轉移或基因靶向載體。基因治療是在通過活體外或體內技術將治療基因導入細胞的基礎上，它是基因轉移最重要應用之一。用「神經抗體」技術產生了表達抗神經生長因子的中和抗體的轉基因小鼠；Capsoni，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 97(2000)，6826-6831和Biocca，Embo J.9(1990)，101-108。用於體外或體內基因治療的合適載體、方法或基因傳遞系統描述於文獻且對本領域技術人員已知；參見例如Giordano，Nature Medicine 2(1996)，534-539；Schaper，Circ.Res.79(1996)，911-919；Anderson，Science 256(1992)，808-813，Isner，Lancet 348(1996)，370-374；Muhlhauser，Circ.Res.77(1995)，1077-1086；Onodua，Blood 91(1998)，30-36；Verzeletti，Hum.Gene Ther.9(1998)，2243-2251；Verma，Nature 389(1997)，239-242；Anderson，Nature 392(Supp.1998)，25-30；Wang，Gene Therapy 4(1997)，393-400；Wang，NatureMedicine 2(1996)，714-716；WO 94/29469；WO 97/00957；US 5,580,859；US5,589,466；US 4,394,448或Schaper，《生物技術的當前觀點7)》(Current Opinionin Biotechnology 7)(1996)，635-640和本文所引用參考文獻。所述載體和/或基因傳遞系統也描述於神經組織/細胞(參見Bl_mer，J.Virology 71(1997)6641-6649)或下丘腦(參見Geddes，Front Neuroendocrinol.20(1999)，296-316或Geddes，Nat.Med.3(1997)，1402-1404)中的基因治療方法。用於神經細胞/組織的更多合適基因治療構建物在本領域已知，例如Meier(1999)，J.Neuropathol.Exp.Neurol.58，1099-1110。發明的核酸分子和載體可設計用於指導引入或經脂質體、病毒載體(如腺病毒、逆轉錄病毒)、電穿孔、彈導(如基因搶)或其它傳遞系統導入細胞。另外，杆狀病毒系統能用作發明核酸分子的真核表達系統。導入和基因治療方法應優選表達發明的功能性抗體分子，因而所述表達抗體分子特別用於治療、改善和/或防止神經疾病，疾病與異常澱粉樣合成、集合和/或聚集相關，像阿爾茨海默氏病等。
因此，本發明的核酸分子和/或上述本發明載體/宿主可特別用作藥物組合物。所述藥物組合物能用於基因治療方法。在此方面，本發明的核酸分子和/或載體可用於調節、改變和/或修飾(細胞)表達和/或濃縮本發明抗體分子或其片段。
對於基因治療應用，編碼本發明肽或其片段的核酸可克隆到基因傳遞系統如病毒，病毒用於感染或在感染細胞或生物體中改善疾病或賦予治療效果。
本發明也涉及用發明載體轉染或轉化的宿主細胞或攜帶發明載體的非人宿主，即宿主細胞或宿主用根據發明的核酸分子或含這種核酸分子的載體遺傳修飾。術語「遺傳修飾」指除了其天然基因組，宿主細胞或宿主包括根據發明的核酸分子或載體，它被導入細胞或宿主或者導入其先驅物/親代之一。核酸分子或載體可存在於遺傳修飾的宿主細胞或宿主，作為基因組外的單獨分子且優選作為能複製的分子或者可穩定整合到宿主細胞或宿主的基因組中。
本發明的宿主細胞可以是任何原核或真核細胞。合適的原核細胞一般用於克隆像大腸桿菌或枯草芽孢桿菌。此外，真核細胞包括例如真菌或動物細胞。合適的真菌細胞的例子是酵母細胞，優選酵母屬且最優選釀酒酵母種。合適的動物細胞是例如昆蟲細胞、脊椎動物細胞，優選哺乳動物細胞如HEK293、NSO、CHO、MDCK、U2-OSHela、NIH3T3、MOLT-4、Jurkat、PC-12、PC-3、IMR、NT2N、Sk-n-sh、CaSki、C33A。這些宿主細胞如CHO-細胞可提供翻譯後修飾給發明的抗體分子，包括去除前導肽、摺疊和集合H(重)和L(輕)鏈、以正確側向糖基化分子和分泌功能分子。本領域已知的更多合適細胞系獲得自細胞系存放處，像美國模式培養物保藏所(ATCC)。根據本發明，更認為原代細胞/細胞培養物可作為宿主細胞發揮功能。所述細胞特定獲得自昆蟲(像果蠅或蠊屬種的昆蟲)或哺乳動物(像人、豬、小鼠或大鼠)。所述宿主細胞也可包括來自和/或獲得自細胞系如成神經細胞瘤細胞系的細胞。上述原代細胞在本領域熟知並包括原代星形膠質細胞、(混合的)脊髓培養物或海馬培養物。
在一個更佳實施方案中，用本發明載體轉化的宿主細胞是神經元細胞、神經元幹細胞(如成體神經元幹細胞)、腦細胞或從其中衍生的細胞(系)。然而，含本發明核酸分子的CHO-細胞可特別用作宿主。這種細胞能在表達分子即本發明的抗體分子上提供正確的二級修飾。這些修飾包括糖基化和磷酸化。
宿主可以是非人的哺乳動物，最優選小鼠、大鼠、綿羊、小牛、狗、猴子或猿。所述哺乳動物對於發展治療也許是不可缺少的，優選治療上述神經性和/或神經變性疾病。此外，本發明的宿主可特別用於產生發明的抗體分子(或其片段)。認為所述抗體分子(或其片段)分離自所述宿主。認為本文所述核酸分子和/或載體摻入序列中用於轉基因表達。將發明的核酸分子作為轉基因導入非人宿主且它們隨後的表達可用於產生發明的抗體。例如，在轉基因動物的牛奶中表達這種轉基因提供了獲得定量的發明抗體分子的方法；參見US 5,741,957、US 5,304,489或US 5,849,992。此方面有用的轉基因包括發明的核酸分子，例如本文所述抗體分子輕和重鏈的編碼序列，可操作連接於乳腺特異基因的啟動子和/或增強子結構，像酪蛋白或β-乳球蛋白。
發明也提供方法用於製備發明的抗體分子，包括在能合成所述抗體分子的條件下培養本文所述宿主細胞並從所述培養物中回收所述抗體分子。
發明也涉及的組合物包括發明抗體分子或由上文所述方法產生的、編碼發明抗體分子的核酸分子，載體包括所述核酸分子或上文定義的宿主細胞以及任選的更多單獨或組合分子，如能干擾澱粉樣斑形成或能解聚已形成澱粉樣斑的分子。如本文所用，術語「組合物」包括至少1個發明的化合物。這種組合物優選是藥物或診斷組合物。
組合物可以是固體或液體形式，可以是粉末、片劑、溶液或氣霧劑形式。所述組合物可包括一個或多個發明的抗體/抗體分子或發明的核酸分子、載體或宿主。也認為所述組合物包括至少2個發明的抗體分子或編碼所述抗體分子的核酸分子，優選3個，更優選4個，最優選5個。所述組合物也可包括最佳的發明抗體/抗體分子，它們通過下文和附加例子所述方法獲得。
優選所述藥物組合物任選包括藥學上可接受載體和/或稀釋劑。本文所述藥物組合物可特別用於治療神經性和/或神經變性疾病。所述疾病包括但不限於阿爾茨海默氏病、肌萎縮側索硬化(ALS)、澱粉樣變荷蘭型的遺傳性腦出血、唐氏綜合症、HIV-相關痴呆、帕金森氏病和與衰老相關的神經元疾病。認為發明的藥物組合物是澱粉樣斑形成的有效抑制劑或解聚澱粉樣斑的有效刺激劑。因此，本發明提供含發明化合物的藥物組合物用於治療與病理APP蛋白酶解和/或澱粉樣斑形成相關的疾病/紊亂。
合適的藥物載體、賦形劑和/或稀釋劑的例子在本領域熟知並包括磷酸緩衝鹽水溶液、水、乳劑如油/水乳劑、多種類型的潤溼劑、無菌溶液等。包括這種載體的組合物可通過熟知的常規方法製成。這些藥物組合物能以合適的劑量施用給受試者。施用合適的組合物可通過不同方式實現，如靜脈內、腹膜內、皮下、肌肉內、局部、皮內、鼻內或支氣管內施用。所述施用特別優選通過注射和/或傳遞到腦動脈中的位點或直接到腦組織中完成。發明組合物也可直接施用到靶位點，如通過彈導傳遞到外部或內部靶位點，像腦。劑量方案由參與的醫師和臨床因素確定。如醫學領域熟知的，任何病人的劑量取決於許多因素，包括病人體型、體表面積、年齡、待施用的特定化合物、性別、施用時間和途徑、總體健康和其它同時施用的藥物。蛋白質藥物活性物質的存在量可在1ng和10mg/kg體重每劑量間；然而考慮低於或高於此示範範圍的劑量，尤其考慮上述因素。如果方案是連續輸注，範圍也應在1μg到10mg單位每千克體重每分鐘。
進展能通過定期評估監控。發明組合物可局部或全身施用。注意到外周施用的抗體能進入中樞神經系統，參見Bard(2000)，Nature Med.6，916-919。腸胃外施用製品包括無菌水或非水溶液、懸浮液和乳劑。非水溶劑的例子是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油、可注射有機酯如油酸乙酯。含水載體包括水、醇/水溶液、乳劑或懸浮液，包括鹽水和緩衝基質。腸胃外載體包括氯化鈉溶液、林格右旋糖、右旋糖和氯化鈉、乳酸鹽林格溶液或不揮發性油。靜脈內載體包括流體和營養補充物、電解液補充物(如以林格右旋糖為基礎)等。防腐劑和其它添加劑也可存在，例如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑和惰性氣體等。此外，發明的藥物組合物可包括更多試劑，取決於藥物組合物的預期用途。所述試劑可以是作用於中樞神經系統的藥物，像神經保護因子、膽鹼脂酶抑制劑、M1毒蠅鹼受體的拮抗劑、激素、抗氧化劑、炎症抑制劑等。所述藥物組合物特別優選包括更多試劑，如神經遞質和/或神經遞質的取代分子、維生素E或α-硫辛酸。
藥物組合物以及本發明方法或所述發明的用途能用於治療所有類型的疾病，這些疾病迄今未知或涉及或取決於病理APP聚集或病理APP加工。它們可特別用於治療阿爾茨海默氏病和其它疾病，其中澱粉樣-β的胞外沉積物似乎發揮作用。它們需要用於人，儘管動物治療也包括在本文所述方法、用途和組合物中。
在發明的一個較佳實施方案中，上文所述本發明組合物是診斷組合物，進一步包括任選的合適檢測方法。診斷組合物包括至少1個上述發明化合物。
所述診斷組合物可包括發明的化合物，特別且優選本發明以可溶形式/液相的抗體分子，但也認為所述化合物結合/附著和/或連接固體支持物。
固體支持物能用於結合本文定義的診斷組合物使用或本發明化合物可直接結合所述固體支持物。這些支持物在本領域熟知並包括商業購買的柱材料、聚苯乙烯珠、膠乳珠、磁性珠、膠態金屬顆粒、玻璃和/或矽片和表面、硝化纖維條、膜、薄片、duracytes、孔和反應槽壁、塑料管等。發明化合物，特別是本發明抗體可結合許多不同載體。熟知載體的例子包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、聚碳酸酯、葡聚糖、尼龍、直鏈澱粉、天然和修飾的纖維素、聚丙烯醯胺、瓊脂糖和磁鐵礦。為了發明目的，載體性質可以是可溶或不溶。上面鑑定了適當標記和標記方法且進一步在下文描述。固定/固相化所述發明化合物的合適方法熟知，包括但不限於離子、疏水、共價相互作用等。
發明的診斷組合物特別優選用於檢測和/或定量APP和/或APP-加工產物(像澱粉樣-β)，或用於檢測和/或定量病理和/或(遺傳)修飾的APP-切割面。
如附加例子所示，本發明化合物特別是發明的抗體分子，特別用作診斷試劑通過間接免疫螢光檢測阿爾茨海默氏病患者腦切片中的真人澱粉樣斑。
用於診斷組合物的所述本發明化合物優選可檢測標記。多種技術可用於標記生物分子，對本領域技術人員熟知並認為在本發明範圍內。這種技術例如描述於Tijssen，《酶免疫測定的實踐和理論》(Practice and theory of enzyme immuno assays)，Burden，RH和von Knippenburg(主編)，15卷(1985)，《分子生物學的基本方法》(Basic methods in molecular biology)；Davis LG，Dibmer MD；Battey Elsevier(1990)，Mayer等.，(主編)《細胞和分子生物學的免疫化學方法》(Immunochemicalmethods in cell and molecular biology)Academic Press，London(1987)，或叢書《酶學方法》(Methods in Enzymology)，Academic Press，Inc.。
有許多不同標記和標記方法對本領域普通技術人員已知。能用於本發明的標記類型的例子包括酶、放射性同位素、膠態金屬、螢光化合物、化學發光化合物和生物發光化合物。
常用標記包括螢光染料(像螢光素、若丹明、德克薩斯紅等)、酶(像辣根過氧化物酶、β-半乳糖苷酶、鹼性磷酸酶)、放射性同位素(像32P或125I)、生物素、洋地黃毒苷、膠態金屬、化學-或生物發光化合物(像二氧雜環丁烷、螢光醇或吖啶)。標記過程在本領域熟知，像酶或生物素醯基的共價偶聯、碘化、磷酸化、生物素醯化等。
檢測方法包括但不限於放射自顯影、螢光顯微鏡、直接和間接酶反應等。常用檢測測定包括放射性同位素或非放射性同位素方法。這些包括蛋白質印跡、重疊測定、RIA(放射免疫測定)和IRMA(免疫放射測定)、EIA(酶免疫測定)、ELISA(酶聯免疫吸附測定)、FIA(螢光免疫測定)和CLIA(化學發光免疫測定)。
此外，本發明提供發明的抗體分子的用途或由本發明方法產生的抗體分子，使用發明的核酸分子、載體或宿主以製備藥物或診斷組合物用於預防、治療和/或診斷與澱粉樣生成和/或澱粉樣斑形成相關的疾病。另外優選的是，本文所述化合物(尤其是發明的抗體分子)用於預防和/或治療與改良成異常App-/或澱粉樣生成相關的神經病狀。抗體分子如以(基因工程的)免疫球蛋白形式，像IgG構架尤其是IgG1構架中的抗體，或以嵌合抗體、雙特異性抗體、單鏈Fvs(ScFvs)或雙特異性scFvs等的形式用於製備藥物組合物。如附加例子中所證明，抗體分子也用於診斷情況，由於發明的抗體分子/檢測Aβ4和/或澱粉樣沉積物/斑特異地相互作用。
因此，本發明化合物的用途是使用藥物組合物製品用於神經性疾病，這需要改善例如分解β-澱粉樣斑澱粉樣(斑)清除或抗β-澱粉樣斑形成的被動免疫。如附加例子所示，發明的抗體分子特別用於防止Aβ聚集和解聚已形成的澱粉樣集合。因此，發明的抗體用於減少病理性澱粉樣沉積物/斑，用於清除澱粉性斑/斑前體，以及用於神經元保護。尤其認為發明的抗體分子用於體內預防澱粉樣斑，以及體內清除先存在的澱粉樣斑/沉積物。此外，發明的抗體分子可用於抗Aβ4的被動免疫方法。通過包含Fc部分的本發明醫用抗體可獲得Aβ4/Aβ4沉積物的清除。所述抗體的Fc部分特別用於Fc-受體介導的免疫應答，例如吸引巨噬細胞(吞噬細胞和/或小膠質細胞)和/或輔助細胞。對於Fc部分相關的免疫應答的介導，發明的抗體分子優選在(人)IgG1-構架中。如本文所討論，用發明的抗體分子、編碼相同或其部分的核酸分子、發明的載體或本發明的宿主細胞治療的優選受試者是人。也設想了其它構架像抗體分子的用於發明的IgG2a-或IgG2b-構架。
特別設想了在小鼠配置中以IgG2a和IgG2b形式的免疫球蛋白構架，例如科學使用發明的抗體分子，如對表達(人)野生型或突變的App、App-片段和/或Aβ4的轉基因小鼠的測試。
上述與澱粉樣生成和/或澱粉樣斑形成相關的疾病包括但不限於痴呆、阿爾茨海默氏病、運動神經病、帕金森氏病、ALS(肌萎縮側索硬化)、癢病、HIV-相關痴呆以及克-雅氏病、澱粉樣變病荷蘭型的遺傳性腦出血或唐氏綜合症和與衰老相關的神經元疾病。發明的抗體分子和本文提供的組合物也用於。改善和/或預防與澱粉樣生成和/或澱粉樣斑形成有關的炎性過程。
因此，本發明也提供方法治療、防止和/或延遲神經性和/或神經變性疾病，包括施用有效量的發明抗體分子、發明核酸分子和/或上文定義組合物給受試者的步驟，受試驗者患所述神經性和/或神經變性疾病和/或受試者易患所述神經性和/或神經變性疾病。
而在另一個實施方案中，本發明提供的試劑盒包括至少1個抗體分子、至少1個核酸分子、至少1個載體或至少1個發明的宿主。有利的是，本發明試劑盒進一步包括任選緩衝液、貯存溶液和/或剩餘試劑或進行醫學、科學或診斷測定和目標所需材料。此外，部分發明試劑盒能單獨包裝於小瓶或瓶或組合容器或多容器單位。
本發明試劑盒可有利地用於完成發明方法並能作為研究工具或醫學工具用於本文所指多種應用，如診斷試劑盒。另外，發明的試劑盒可包含適一科學、醫學和/或診斷目的的檢測方法。製造試劑盒優選遵循本領域技術人員已知的標準過程。
發明也提供方法用於最優化本工文定義的抗體分子，包括步驟(a)構建多種獲得自抗體的Fab抗體片段的文庫，包含至少1個由SEQ ID NOs21、23或25所示核酸分子編碼的VH-區的CDR3或至少1個由SEQ ID NOs22、24或26所示VH-區的CDR3胺基酸序列。
(b)通過抗Aβ/Aβ4淘冼測試所得Fab最優化文庫；(c)鑑定最佳克隆；(d)表達選擇的最佳克隆。
最優化發明的抗體/抗體分子也在附加例子中證明並可包括選擇對本文所定義β-A4的一個或兩個區域/表位的親和性較高或選擇表達改進等。在一個實施方案中，對β-A4的一個或兩個區域/表位的所述選擇包括選擇對(a)含β-A4的胺基酸2到10(或(a)其部分)的胺基酸延伸和/或(b)含β-A4的胺基酸12到25(或(a)其部分)(SEQ ID No.27)的胺基酸延伸的高親和力。
本領域技術人員能容易地用本發明講授完成發明方法。抗體的最優化方案在本領域已知。這些最優化方案包括本文所示和所述的CDR步行誘變並描述於Yang(1995)，J.Mol.Biol.25，392-403；Schier(1996)，J.Mol.Biol.263，551-567；Barbas(1996)，Trends.Biotech 14，230-34或Wu(1998)，PNAS 95，6037-6042；Schier(1996)，Human Antibodies Hybridomas 7，97；Moore(1997)，J.Mol.Biol.272，336。
「淘洗」-技術也在本領域已知，參見例如Kay(1993)，Gene 128，59-65。此外，出版物像Borrebaeck(1995)，《抗體工程》「Antibody Engineering」，OxfordUniversity，229-266；McCafferty(1996)，《抗體工程》，Oxford University Press；Kay(1996)，《實驗室手冊》(A Laboratory Manual)，Academic Press提供最優化方案，可根據本發明修改。
最優化方法可進一步包括步驟，其中最佳克隆進一步通過盒誘變來最優化，如附加例子所示。
最優化本文所述抗體分子的方法進一步示於附加例子，親代抗體/抗體分子的親和力成熟能特異識別β-A4肽/Aβ4/Aβ4/Aβ4的2個區域。
上文所述方法步驟(b)中的所述Aβ/Aβ4優選是聚集的Aβ/Aβ4。可完成所述淘洗(如附加例子所述)而增加結合的嚴緊性。增加嚴緊性可通過減少Aβ/Aβ4濃度或提高(測定)溫度。通過淘洗測試最佳文庫對技術人員已知且描述於Kay(1993)，在上述引文中。步驟(c)中的鑑定根據最低KD-值排列來完成。
所述步驟(c)中的鑑定最優選通過Koff-排列完成。Koff-排列對技術人員已知且描述於Schier(1996)，在上述引文中；Schier(1996)，J.Mol.Biol.255，28-43或Duenas(1996)，Mol.Immunol.33，279-286。此外，Koff-排列描述於附加例子。可如附加例子所述測定非標準條件的常數。
如上文所述，可表達鑑定的克隆以進一步評估。表達能用附加例子所示的已知方法完成。表達可產生表達的Fab-片段、scFvs，雙特異性免疫球蛋白、雙特異性抗體分子、Fab-和/或Fv融合蛋白或完整抗體像IgGs，特別是IgG1。
最佳化抗體特別是最佳化Fabs或最佳化IgGs，優選IgG1s，可通過附加例子所示方法測試。這種方法包括但不限於測試結合親和力、確定KD-值、肽點分析、ELISA-測定、RIA測定、CLIA-測定、(免疫)組織學研究(例如染色澱粉樣斑)、解聚測定或抗體-依賴的β-A4吞噬。
在本發明又一個實施方案中，提供一種方法其中通過交叉克隆產生最佳化抗體。此方法也描述於附加例子並包括單獨結合最佳化CDR-區的步驟，例如通過單獨結合來自成熟克隆的最佳化H-CDR2和L-CDR2，克隆有H-CDR3，優選相同的H-CDR3。
在一個較佳實施方案中，發明涉及方法用於製備藥物組合物，包括步驟(a)根據本文所述和附加例子所示方法最優化抗體；(b)用生理上可接受載體製成最佳化抗體/抗體分子，如上文所述。
因此，發明也提供由本文所述方法製備的藥物組合物並包括更多最佳化抗體分子，抗體分子能特異識別β-A4肽/Aβ4/Aβ4/Aβ4的2個區域，如上文所述。
本文引用的示範序列SEQ ID NO1AEFRHDSGYβ-A4肽的第一個區域，「N-末端區域/表位」SEQ ID NO2VHHQKLVFFAEDVGβ-A4肽的第二個區域，「中央/蹭區域/表位」SEQ ID NO3MS-Roche#3的VH-區(核酸序列)CAGGTGCAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGCGATTAGCGGTAGCGGCGGCAGCACCTATTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTCTTACTCATTATGCTCGTTATTATCGTTATTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCAGC(SEQ ID NO3)SEQ ID NO4MS-Roche#3的VH-區(胺基酸序列)QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLTHYARYYRYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO4)SEQ ID NO5MS-Roche#7的VH-區(核酸序列)CAGGTGCAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGCGATTAGCGGTAGCGGCGGCAGCACCTATTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGIATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCAGC(SEQ ID NO5)SEQ ID NO6MS-Roche#7的VH-區(胺基酸序列)QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGKGNTHKPYGYVRYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO6)SEQ ID NO7MS-Roche#8的VH-區(核酸序列)CAGGTGCAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGCGATTAGCGGTAGCGGCGGCAGCACCTATTATGCGGATAGCGTGAAAGGCCGTTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTCTTCTTTCTCGTGGTTATAATGGTTATTATCATAAGTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCAGC(SEQ ID NO7)SEQ ID NO8MS-Roche#8的VH-區(胺基酸序列)QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISGSGGSTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLLSRGYNGYYHKFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO8)SEQ ID NO9MS-Roche#3的VL-區(核酸序列)GATATCGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGTCTCCGGGCGAACGTGCGACCCTGAGCTGCAGAGCGAGCCAGAGCGTGAGCAGCAGCTATCTGGCGTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAAGCACCGCGTCTATTAATTTATGGCGCGAGCAGCCGTGCAACTGGGGTCCCGGCGCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACGGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCTGAAGACTTTGCGGTTTATTATTGCCAGCAGGTTTATAATCCTCCTGTTACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG(SEQ ID NO9)
SEQ ID NO10MS-Roche#3的VL-區(胺基酸序列)DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQVYNPPVTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO10)SEQ ID NO11MS-Roche#7的VL-區(核酸序列)GATATCGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGTCTCCGGGCGAACGTGCGACCCTGAGCTGCAGAGCGAGCCAGAGCGTGAGCAGCAGCTATCTGGCGTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAAGCACCGCGTCTATTAATTTATGGCGCGAGCAGCCGTGCAACTGGGGTCCCGGCGCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACGGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCTGAAGACTTTGCGACTTATTATTGCTTTCAGCTTTATTCTGATCCTTTTACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG(SEQ ID NO.11)SEQ ID NO12MS-Roche#7的VL-區(胺基酸序列)DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCFQLYSDPFTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO12)SEQ ID NO13MS-Roche#8的VL-區(核酸序列)GATATCGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGTCTCCGGGCGAACGTGCGACCCTGAGCTGCAGAGCGAGCCAGAGCGTGAGCAGCAGCTATCTGGCGTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAAGCACCGCGTCTATTAATTTATGGCGCGAGCAGCCGTGCAACTGGGGTCCCGGCGCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACGGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCTGAAGACTTTGCGACTTATTATTGCCAGCAGCTTTCTTCTTTTCCTCCTACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG(SEQ ID NO13)SEQ ID NO14MS-Roche#8的VL-區(胺基酸序列)DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQLSSFPPTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO14)
SEQ ID NO15MSR-3 VL-區的CDR3(核酸序列)CAG CAG GTT TAT AAT CCT CCT GTT(SEQ ID NO15)SEQ ID NO16MSR-3 VL-區的CDR3(胺基酸序列)QQVYNPPV(SEQ ID NO16)SEQ ID NO17MSR-7 VL-區的CDR3(核酸序列)TTT CAG CTT TAT TCT GAT CCT TTT(SEQ ID NO17)SEQ ID NO18MSR-7 VL-區的CDR3(胺基酸序列)FQLYSDPF(SEQ ID NO.18)SEQ ID NO19MSR-8 VL-區的CDR3(核酸序列)CAG CAG CTT TCT TCT TTT CCT CCT(SEQ ID NO.19)SEQ ID NO20MSR-8 VL-區的CDR3(胺基酸序列)QQLSSFPP(SEQ ID NO20)SEQ ID NO21MSR-3 VH-區的CDR(核酸序列)
CTL ACT CAT TAT GCT CGT TAT TAT CGT TAT TTT GAT GTT(SEQ ID NO21)SEQ ID NO22MSR-3 VH-區的CDR(胺基酸序列)LTHYARYYRYFDV(SEQ ID NO22)SEQ ID NO23MSR-7 VH-區的CDR(核酸序列)GGT AAG GGT AAT ACT CAT AAG CCT TAT GGT TAT GTTCGT TAT TTT(SEQ ID NO23)SEQ ID NO24MSR-7 VH-區的CDR(胺基酸序列)GKGNTHKPYGYVRYFDV(SEQ ID NO24)SEQ ID NO25MSR-8 VH-區的CDR(核酸序列)CTT CTT TCT CGT GGT TAT AAT GGT TAT TAT CAT AAGTTT GAT GTT(SEQ ID NO.25)SEQ ID NO26MSR-8 VH-區的CDR(胺基酸序列)LLSRGYNGYYHKFDV(SEQ ID NO26)SEQ ID NO27Aβ4(胺基酸1到42)DAEFRHDSGYEVHHQKLVFFAEDVGSNKGAIIGLMVGGVVIA(SEQ ID NO27)
SEQ ID NO28引物5』-GTGGTGGTTCCGATATC-3′(SEQ ID NO28)SEQ ID NO29引物5′-AGCGTCACACTCGGTGCGGCTTTCGGCTGGCCAAGAACGGTTA-3′(SEQ ID NO29)SEQ ID NO30引物5′-CAGGAAACAGCTATGAC-3′(SEQ ID NO30)SEQ ID NO31引物5′-TACCGTTGCTCTTCACCCC-3′(SEQ ID NO31)SEQ ID NO32 MS-Roche#3.6H5×3.6L2的VH；DNA；人工序列CAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGCTATTTCTGAGTCTGGTAAGACTAAGTATTATGCTGATTCTGTTAAGGGTCGTTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTCTTACTCATTATGCTCGTTATTATCGTTATTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA(SEQID NO32)SEQ ID NO.33MS-Roche#3.6H5×3.6L2的prot VH區；蛋白質/1；人工序列QLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISESGKTKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLTHYARYYRYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO33)SEQ ID NO34 MS-Roche#3.6H8×3.6L2的VH區；DNA；人工序列CAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGCTATTTCTGAGTATTCTAAGTTTAAGTATTATGCTGATTCTGTTAAGGGTCGTTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTCTTACTCATTATGCTCGTTATTATCGTTATTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA(SEQID NO34)SEQ ID NO35 MS-Roche#3.6H8×3.6L2的prot VH區；蛋白質/1；人工序列QLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAISEYSKFKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARLTHYARYYRYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO35)SEQ ID NO36 MS-Roche#7.4H2×7.2L1的VH區；DNA；人工序列CAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGCTATTAATTATAATGGTGCTCGTATTTATTATGCTGATTCTGTTAAGGGTCGTTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA(SEQ ID NO36)SEQ ID NO37 MS-Roche#7.4H2×7.2L1的prot VH區；蛋白質/1；人工序列QLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAINYNGARIYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGKGNTHKPYGYVRYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO37)SEQ ID NO38 MS-Roche#7.9H2×7.12L2的VH區；DNA；人工序列CAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGCTATTAATGCTGATGGTAATCGTAAGTATTATGCTGATTCTGTTAAGGGTCGTTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA(SEQ ID NO38)SEQ ID NO39 MS-Roche#7.9H2×7.12L2的prot VH區；蛋白質/1；人工序列QLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAINADGNRKYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGKGNTHKPYGYVRYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO39)
SEQ ID NO40 MS-Roche#7.9H4×7.12L2的VH區；DNA；人工序列CAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGCTATTAATGCTGTTGGTATGAAGAAGTTTTATGCTGATTCTGTTAAGGGTCGTTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA(SEQ ID NO40)SEQ ID NO41 MS-Roche#7.9H4×7.12L2的prot VH區；蛋白質/1；人工序列QLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAINAVGMKKFYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGKGNTHKPYGYVRYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO41)SEQ ID NO42 MS-Roche#7.11H1×7.11L1的VH區；DNA；人工序列CAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGGTATTAATGCTGCTGGTTTTCGTACTTATTATGCTGATTCTGTTAAGGGTCGTTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA(SEQ ID NO42)SEQ ID NO.43 MS-Roche#7.11H1×7.11L1的prot VH區；蛋白質/1；人工序列QLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSGINAAGFRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGKGNTHKPYGYVRYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO43)SEQ ID NO44 MS-Roche#7.11H1×7.2L1的VH區；DNA；人工序列CAATTGGTGGAAAGCGGCGGCGGCCTGGTGCAACCGGGCGGCAGCCTGCGTCTGAGCTGCGCGGCCTCCGGATTTACCTTTAGCAGCTATGCGATGAGCTGGGTGCGCCAAGCCCCTGGGAAGGGTCTCGAGTGGGTGAGCGGTATTAATGCTGCTGGTTTTCGTACTTATTATGCTGATTCTGTTAAGGGTCGTTTTACCATTTCACGTGATAATTCGAAAAACACCCTGTATCTGCAAATGAACAGCCTGCGTGCGGAAGATACGGCCGTGTATTATTGCGCGCGTGGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTTTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACGGTTAGCTCA(SEQ ID NO44)SEQ ID NO45 MS-Roche#7.11H1×7.2L1的prot VH區；蛋白質/1；人工序列QLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSGINAAGFRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGKGNTHKPYGYVRYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO45)SEQ ID NO46 MS-Roche#3.6H5×3.6L2的VL區；DNA；人工序列GATATCGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGTCTCCGGGCGAACGTGCGACCCTGAGCTGCAGAGCGAGCCAGTTTCTTTCTCGTTATTATCTGGCGTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAAGCACCGCGTCTATTAATTTATGGCGCGAGCAGCCGTGCAACTGGGGTCCCGGCGCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACGGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCTGAAGACTTTGCGGTTTATTATTGCCAGCAGACTTATAATTATCCTCCTACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG(SEQ ID NO46)SEQ ID NO47 MS-Roche#3.6H5×3.6L2的prot VL區；蛋白質/1；人工序列DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQFLSRYYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQTYNYPPTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO47)SEQ ID NO48 MS-Roche#3.6H8×3.6L2的VL區；DNA；人工序列GATATCGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGTCTCCGGGCGAACGTGCGACCCTGAGCTGCAGAGCGAGCCAGTTTCTTTCTCGTTATTATCTGGCGTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAAGCACCGCGTCTATTAATTTATGGCGCGAGCAGCCGTGCAACTGGGGTCCCGGCGCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACGGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCTGAAGACTTTGCGGTTTATTATTGCCAGCAGACTTATAATTATCCTCCTACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG(SEQ ID NO48)SEQ ID NO49 MS-Roche#3.6H8×3.6L2的prot VL區；蛋白質/1；人工序列DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQFLSRYYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQTYNYPPTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO49)SEQ ID NO50 MS-Roche#7.4H2×7.2L1的VL區；DNA；人工序列
GATATCGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGTCTCCGGGCGAACGTGCGACCCTGAGCTGCAGAGCGAGCCAGTATGTTGATCGTACTTATCTGGCGTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAAGCACCGCGTCTATTAATTTATGGCGCGAGCAGCCGTGCAACTGGGGTCCCGGCGCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACGGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCTGAAGACTTTGCGACTTATTATTGCCAGCAGATTTATTCTTTTCCTCATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG(SEQ ID NO50)SEQ ID NO51 MS-Roche#7.4H2×7.2L1的prot VL區；蛋白質/1；人工序列DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQYVDRTYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQIYSFPHTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO51)SEQ ID NO52 MS-Roche#7.9H2×7.12L2的VL區；DNA；人工序列GATATCGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGTCTCCGGGCGAACGTGCGACCCTGAGCTGCAGAGCGAGCCAGCGTTTTTTTTATAAGTATCTGGCGTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAAGCACCGCGTCTATTAATTTCTGGTTCTTCTAACCGTGCAACTGGGGTCCCGGCGCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACGGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCTGAAGACTTTGCGGTTTATTATTGCCTTCAGCTTTATAATATTCCTAATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG(SEQ ID NO52)SEQ ID NO53 MS-Roche#7.9H2×7.12L2的prot VL區；蛋白質/1；人工序列DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQRFFYKYLAWYQQKPGQAPRLLISGSSNRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCLQLYNIPNTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO53)SEQ ID NO54 MS-Roche#7.9H4×7.12L2的VL區；DNA；人工序列GATATCGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGTCTCCGGGCGAACGTGCGACCCTGAGCTGCAGAGCGAGCCAGCGTTTTTTTTATAAGTATCTGGCGTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAAGCACCGCGTCTATTAATTTCTGGTTCTTCTAACCGTGCAACTGGGGTCCCGGCGCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACGGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCTGAAGACTTTGCGGTTTATTATTGCCTTCAGCTTTATAATATTCCTAATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG(SEQ ID NO54)SEQ ID NO55 MS-Roche#7.9H4×7.12L2的prot VL區；蛋白質/1；人工序列DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQRFFYKYLAWYQQKPGQAPRLLISGSSNRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCLQLYNIPNTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO55)SEQ ID NO56 MS-Roche#7.11H1×7.11L1的VL區；DNA；人工序列GATATCGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGTCTCCGGGCGAACGTGCGACCCTGAGCTGCAGAGCGAGCCAGCGTATTCTTCGTATTTATCTGGCGTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAAGCACCGCGTCTATTAATTTATGGCGCGAGCAGCCGTGCAACTGGGGTCCCGGCGCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACGGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCTGAAGACTTTGCGACTTATTATTGCCAGCAGGTTTATTCTCCTCCTCATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG(SEQ ID NO56)SEQ ID NO57 MS-Roche#7.11H1×7.11L1的prot VL區；蛋白質/1；人工序列DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQRILRIYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQVYSPPHTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO57)SEQ ID NO58 MS-Roche#7.11H1×7.2L1的VL區；DNA；人工序列GATATCGTGCTGACCCAGAGCCCGGCGACCCTGAGCCTGTCTCCGGGCGAACGTGCGACCCTGAGCTGCAGAGCGAGCCAGTATGTTGATCGTACTTATCTGGCGTGGTACCAGCAGAAACCAGGTCAAGCACCGCGTCTATTAATTTATGGCGCGAGCAGCCGTGCAACTGGGGTCCCGGCGCGTTTTAGCGGCTCTGGATCCGGCACGGATTTTACCCTGACCATTAGCAGCCTGGAACCTGAAGACTTTGCGACTTATTATTGCCAGCAGATTTATTCTTTTCCTCATACCTTTGGCCAGGGTACGAAAGTTGAAATTAAACGTACG(SEQ ID NO58)SEQ ID NO59 MS-Roche#7.11H1×7.2L1的prot VL區；蛋白質/1；人工序列DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQYVDRTYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCQQIYSFPHTFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO59)SEQ ID NO60 MS-Roche#3.6H5×3.6L2的HCDR3區；DNA；人工序列CTTACTCATTATGCTCGTTATTATCGTTATTTTGATGTT(SEQ ID NO60)SEQ ID NO61 MS-Roche#3.6H5×3.6L2的prot HCDR3區；蛋白質/1；人工序列LTHYARYYRYFDV(SEQ ID NO61)
SEQ ID NO62 MS-Roche#3.6H8×3.6L2的HCDR3區；DNA；人工序列CTTACTCATTATGCTCGTTATTATCGTTATTTTGATGTT(SEQ ID NO62)SEQ ID NO63 MS-Roche#3.6H8×3.6L2的prot HCDR3區；蛋白質/1；人工序列LTHYARYYRYFDV(SEQ ID NO63)SEQ ID NO64 MS-Roche#7.4H2×7.2L1的HCDR3區；DNA；人工序列GGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTT(SEQ ID NO64)SEQ ID NO65 MS-Roche#7.4H2×7.2L1的prot HCDR3區；蛋白質/1；人工序列GKGNTHKPYGYVRYFDV(SEQ ID NO65)SEQ ID NO66 MS-Roche#7.9H2×7.12L2的HCDR3區；DNA；人工序列GGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTT(SEQ ID NO66)SEQ ID NO67 #MS-Roche 7.9H2×7.12L2的prot HCDR3區；蛋白質/1；人工序列GKGNTHKPYGYVRYFDV(SEQ ID NO67)SEQ ID NO68 MS-Roche#7.9H4×7.12L2的HCDR3區；DNA；人工序列GGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTT(SEQ ID NO68)SEQ ID NO69 MS-Roche#7.9H4×7.12L2的prot HCDR3區；蛋白質/1；人工序列GKGNTHKPYGYVRYFDV(SEQ ID NO69)SEQ ID NO70 MS-Roche#7.11H1×7.11L1的HCDR3區；DNA；人工序列GGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTT(SEQ ID NO70)
SEQ ID NO71 MS-Roche#7.11H1×7.11L1的prot HCDR3區；蛋白質/1；人工序列GKGNTHKPYGYVRYFDV(SEQ ID NO71)SEQ ID NO72 MS-Roche#7.11H1×7.2L1的HCDR3區；DNA；人工序列GGTAAGGGTAATACTCATAAGCCTTATGGTTATGTTCGTTATTTTGATGTT(SEQ ID NO72)SEQ ID NO73 MS-Roche#7.11H1×7.2L1的prot HCDR3區；蛋白質/1；人工序列GKGNTHKPYGYVRYFDV(SEQ ID NO73)SEQ ID NO74 MS-Roche#3.6H5×3.6L2的LCDR3區；DNA；人工序列CAGCAGACTTATAATTATCCTCCT(SEQ ID NO74)SEQ ID NO75 MS-Roche#3.6H5×3.6L2的prot LCDR3區；蛋白質/1；人工序列QQTYNYPP(SEQ ID NO75)SEQ ID NO76 MS-Roche#3.6H8×3.6L2的LCDR3區；DNA；人工序列CAGCAGACTTATAATTATCCTCCT(SEQ ID NO76)SEQ ID NO77 MS-Roche#3.6H8×3.6L2的prot LCDR3區；蛋白質/1；人工序列QQTYNYPP(SEQ ID NO77)SEQ ID NO78 MS-Roche#7.4H2×7.2L1的LCDR3區；DNA；人工序列CAGCAGATTTATTCTTTTCCTCAT(SEQ ID NO78)SEQ ID NO79 MS-Roche#7.4H2×7.2L1的prot LCDR3區；蛋白質/1；人工序列QQIYSFPH(SEQ ID NO79)SEQ ID NO80 MS-Roche#7.9H2×7.12L2的LCDR3區；DNA；人工序列CTTCAGCTTTATAATATTCCTAAT(SEQ ID NO80)SEQ ID NO81 MS-Roche#7.9H2×7.12L2的prot LCDR3區；蛋白質/1；人工序列LQLYNIPN(SEQ ID NO81)SEQ ID NO82 MS-Roche#7.9H4×7.12L2的LCDR3區；DNA；人工序列CTTCAGCTTTATAATATTCCTAAT(SEQ ID NO82)SEQ ID NO83 MS-Roche#7.9H4×7.12L2的prot LCDR3區；蛋白質/1；人工序列LQLYNIPN(SEQ ID NO83)SEQ ID NO84 MS-Roche#7.11H1×7.11L1的LCDR3區；DNA；人工序列CAGCAGGTTTATTCTCCTCCTCAT(SEQ ID NO84)SEQ ID NO85 MS-Roche#7.11H1×7.11L1的prot LCDR3區；蛋白質/1；人工序列QQVYSPPH(SEQ ID NO85)SEQ ID NO86 MS-Roche#7.11H1×7.2L1的LCDR3區；DNA；人工序列CAGCAGATTTATTCTTTTCCTCAT(SEQ ID NO86)SEQ ID NO87 MS-Roche#7.11H1×7.2L1的prot LCDR3區；蛋白質/1；人工序列QQIYSFPH(SEQ ID NO87)
SEQ ID NO88 MS-Roche#7.9H7的VH區；DNA；人工序列Caggtgcaattggtggaaagcggcggcggcctggtgcaaccgggcggcagcctgcgtctgagctgcgcggcctccggatttacctttagcagctatgcgatgagctgggtgcgccaagcccctgggaagggtctcgagtgggtgagcgctattaatgcttctggtactcgtacttattatgctgattctgttaagggtcgttttaccatttcacgtgataattcgaaaaacaccctgtatctgcaaatgaacagcctgcgtgcggaagatacggccgtgtattattgcgcgcgtggtaagggtaatactcataagccttatggttatgttcgttattttgatgtttggggccaaggcaccctggtgacggttagctca(SEQ ID NO88)SEQ ID NO89 MS-Roche#7.9H7的prot VH區；蛋白質/1；人工序列QVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAMSWVRQAPGKGLEWVSAINASGTRTYYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARGKGNTHKPYGYVRYFDVWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO89)SEQ ID NO90 MS-Roche#7.9H7的VL區；DNA；人工序列Gatatcgtgctgacccagagcccggcgaccctgagcctgtctccgggcgaacgtgcgaccctgagctgcagagcgagccagagcgtgagcagcagctatctggcgtggtaccagcagaaaccaggtcaagcaccgcgtctattaatttatggcgcgagcagccgtgcaactggggtcccggcgcgttttagcggctctggatccggcacggattttaccctgaccattagcagcctggaacctgaagactttgcgacttattattgccttcagatttataatatgcctattacctttggccagggtacgaaagttgaaattaaacgtacg(SEQ ID NO90)SEQ ID NO91 MS-Roche#7.9H7的prot VL區；蛋白質/1；人工序列DIVLTQSPATLSLSPGERATLSCRASQSVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYGASSRATGVPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFATYYCLQIYNMPITFGQGTKVEIKRT(SEQ ID NO91)SEQ ID NO92 MS-Roche#7.9H7的HCDR3區；DNA；人工序列Ggtaagggtaatactcataagccttatggttatgttcgttattttgatgtt(SEQ ID NO92)SEQ ID NO93 MS-Roche#7.9H7的prot HCDR3區；蛋白質/1；人工序列GKGNTHKPYGYVRYFDV(SEQ ID NO93)
SEQ ID NO94 MS-Roche#7.9H7的LCDR3區；DNA；人工序列Cttcagatttataatatgcctatt(SEQ ID NO94)SEQ ID NO95 MS-Roche#7.9H7的prot LCDR3區；蛋白質/1；人工序列LQIYNMPI(SEQ ID NO95)更多說明性序列描述於所附序列列表且也示於附表，特別是表1、8和10。
圖顯示圖1 HuCAL_-Fab1文庫的序列概括編號方式是根據VBASE，除了VLλ位置9中的間距。在VBASE中，間距設於位置10(Chothia等.，1992)。在序列概括中，指示所有保持不變的CDR3殘基。用於HuCAL-Fab1文庫的對應序列可發現於附加的序列列表。
A胺基酸序列BDNA序列圖2 Fab展示載體pMORPH_18_Fab載體圖譜和DNA序列，包括限制性酶切位點圖3 Fab表達載體pMORPH_x9_Fab載體圖譜和DNA序列，包括限制性酶切位點圖4親代Fab片段MS-Roche-3、MS-Roche-7和MS-Roche 8的序列A胺基酸序列BDNA序列圖5來自人顳皮層的恆冷切片的澱粉樣斑的間接免疫螢光。斑用MS-R#3.2 Fab(上側組)和MS-R#7.4 Fab(下側組)標記，在嚴格封閉條件下以20μg/ml(左側組)和5μg/ml(右側組)。結合的MS-R Fab通過山羊抗-人-Cy3來顯示。
圖6來自人顳皮層的恆冷切片的澱粉樣斑的間接免疫螢光。斑用MS-R#3.3IgG1(上側組)和MS-R#7.12 IgG1(下側組)標記，在嚴格封閉條件下以0.05μg/ml(左側組)和0.01μg/ml(右側組)。結合的MS-R IgG1抗體通過山羊抗-人(H+L)-Cy3來顯示。
圖7來自人顳皮層的恆冷切片的澱粉樣斑的間接免疫螢光，最終親和力成熟後使用抗體。斑用MS-R#7.9.H7 IgG1(MAB 31，頂部組)、MS-R#7.11.H1×7.2.L1 IgG1(MAB 11，中間組)和MS-R#3.4.H7，底部組)標記。抗體在嚴格封閉條件下以0.05μg/ml(左側組)和0.01μg/ml(右側組)使用。結合的MS-R IgG1抗體通過山羊抗-人(H+L)-Cy3來顯示。
標度8,5mm＝150μm.
圖8聚合測定。抗Aβ抗體防止生物素醯化的Aβ摻入預形式的Aβ聚集物。
圖9解聚測定。抗Aβ抗體誘導生物素醯化的Aβ從聚集Aβ中釋放。
圖10靜脈內注射1mg MS-Roche IgG#7.9.H2×7.12.L2後，在APP/PS2雙重轉基因小鼠中的澱粉樣斑的體內修飾。小鼠用磷酸緩衝鹽水灌注，3天後殺死。存在結合澱粉樣斑的人IgG通過共焦顯微鏡在標記後顯示，用山羊抗-人IgG-Cy3綴合物(b組)標記來自前皮層的恆冷切片。相同切片用抗-Aβ小鼠單克隆抗體(BAP-2-Alexa488綴合物，a組)復染以呈現澱粉樣斑的位置。顯示單獨的紅(B組)和綠(A組)通道、合併圖像(D組)共定位的(C組)信號。
標度1cm＝50μm圖11靜脈內注射1mg MS-Roche IgG#7.9.H4×7.12.L2後在APP/PS2雙重轉基因小鼠中的澱粉樣斑體內修飾。實驗條件和染色過程與圖10所述相同。
標度1.6cm＝50μm圖12靜脈內注射1mg MS-Roche IgG#7.11.H1×7.2.L1(MAB 11)後，在APP/PS2雙重轉基因小鼠中的澱粉樣斑的體內修飾。實驗條件和染色過程與圖10所述相同。
標度1,4cm＝70μm圖13第0、3和6天靜脈內注射2mg MS-Roche IgG#7.9.H7(MAB 31)後在APP/PS2雙重轉基因小鼠中的澱粉樣斑的體內修飾。小鼠用磷酸緩衝鹽水灌注，9天後殺死。存在結合澱粉樣斑的人IgG通過共焦顯微鏡在標記後顯示，用山羊抗-人IgG-Cy3綴合物(B組)標記來自前皮層的恆冷切片。相同切片用抗-Aβ小鼠單克隆抗體(BAP-2-Alexa488綴合物，a組)復染以呈現澱粉樣斑的位置。顯示單獨的紅(B組)和(A組)綠通道、合併圖像(d組)和共定位的(C組)信號。
標度1.6cm＝80μm(A、B、C組)1.0cm＝50μm圖14第0、3和6天靜脈內注射2mg MS-Roche IgG#7.11.H1×7.2.L1(MAB 11)後，在APP/PS2雙重轉基因小鼠中的澱粉樣斑的體內修飾。實驗條件和染色過程與圖13所述相同。
比例1,6cm＝80μm圖15抗Aβ抗體與細胞表面APP的結合分析。通過流式細胞儀分析結合人APP-轉染的HEK293細胞和非轉染對照細胞的抗體。
實施例闡述發明。
實施例1構建和篩選人組合抗體文庫(HuCAL_-Fab 1)克隆HuCAL_-Fab 1HuCAL_-Fab 1是以Fab抗體片段形式的充分合成、模式人抗體文庫。HuCAL_-Fab 1以單鏈形式從抗體文庫開始集合(HuCAL_-scFv；Knappik，(2000)，J.Mol.Biol.296，57-86)。
Vλ位置1和2.原始HuCAL_主基因用它們的真實N-末端構建VLλ1QS(CAGAGC)，VLλ2QS(CAGAGC)，和VLλ3SY(AGCTAT)。含這些胺基酸的序列示於WO 97/08320。在HuCAL_文庫構建中，頭2個胺基酸變成DI以促進文庫克隆(EcoRI位點)。所有HuCAL_文庫包含5』-末端有EcoRV位點GATATC(DI)的VL/λ基因。所有HuCAL_κ基因(主基因和文庫中所有基因)在5』-末端包含DI(圖1A和B)。
VH位置1.原始HuCAL_主基因用它們的真實N-末端構建VH1A、VH1B、VH2、VH4和有Q(＝CAG)作為第一個胺基酸的VH6、VH3和有E(＝GAA)作為第一個胺基酸的VH5。含這些胺基酸的序列示於WO 97/08320。在構建HuCAL_-Fab1文庫中，所有VH基因中VH的1位上的胺基酸變成Q(CAG)(圖1A和B)。
設計CDR文庫Vκ1/Vκ3位置85.由於盒誘變過程用於導入CDR3文庫(Knappik，(2000)，在上述引文中)，Vκ1和Vκ3的85位可以是T或V。因此，在HuCAL_-scFv1文庫構建中，Vκ1和Vκ3的85位變化如下原始Vκ1，85T(密碼子ACC)；Vκ1文庫85T或85V(TRIM密碼子ACT或GTT)；原始Vκ3，85v(密碼子GTG)；Vκ3文庫，85T或85V(TRIM密碼子ACT或GTT)；同樣應用於HuCAL_-Fab1。
CDR3設計.所有保持不變的CDR3殘基示於圖1A和B。
CDR3長度.設計的CDR3長度分布如下。變化的殘基在圖1中以括號(x)顯示。VκCDR3有8個胺基酸殘基(位置89到96)(偶爾7-10個殘基)，Q89、S90和D92固定；VH CDR3有5到28個胺基酸殘基(位置95到102)(偶爾4-28個殘基)，D101固定。
HuCAL_-Fab 1克隆到噬菌粒表達載體pMORPH_18_Fab1(圖2)。此載體包括Fd片段，其phoA信號序列在C-末端融合絲狀噬菌體的截短基因III蛋白，進一步包括有ompA信號序列的輕鏈VL-CL。兩個鏈都在lac操縱子控制下。恆定結構域CλCκ和CH1是合成基因，與HuCAL_的模塊系統完全相容(Knappik，(2000)，在上述引文中)。
完整VH-鏈(MunI/StyI-片段)被含β-內醯胺酶轉錄單位(bla)的1205bp模擬物片段取代，從而促進位備載體片段和選擇完全去除VH的隨後步驟。
VH-取代後，VLλ通過EcoRI/DraIII去除且VLκ通過EcoRI/BslWI去除並用細菌鹼性磷酸酶(bap)基因片段(1420bp)取代。
由於輕鏈的可變性低於重鏈，克隆開始於輕鏈文庫。VLλ和VLκ輕鏈文庫在L-CDR3中多樣化，產生的輕鏈文庫用於HuCAL_-scFv文庫(Knappik，(2000)，在上述引文中)，它們也用於克隆HuCAL_-Fab1。在λthey的情況中，λthey由λ1-、λ2-和λ3-HuCAL_-構架組成且總可變性為5.7×106。VLλ片段用引物5』-GTGGTGGTTCCGAT ATC-3′(SEQ ID NO28)和5′-AGCGTCACACTCGGTGCGGCTTTCGGCTGGCCAAG AACGGTTA-3′(SEQ ID NO29)通過15個PCR循環(Pwo-聚合酶)擴增。PCR產物用EcoRV/DraIII消化並凝膠純化。在VLλ-文庫的情況中，bap-模擬物用EcoRV/DraIII從文庫載體中去除。2μg凝膠純化的載體用3倍摩爾過量VLλ-鏈在16℃連接16小時，連接混合物在800μl大腸桿菌TOP10F細胞(Invitrogen)中電穿孔，產生總共4.1×108個單獨菌落。轉化子在2×YT/1％葡萄糖/34μg/ml氯黴素/100μg/ml氨苄青黴素中擴增約2000倍，收集並在-80℃貯存於20％(w/v)甘油中。
κ文庫包括κ1-、κ2-、κ3-和κ4-HuCAL_主基因，總可變性為5.7×106。獲得VLκ-鏈是通過EcoRV/BsiWI限制性消化並凝膠純化。在VLκ-文庫的情況中，bap-模擬物用EcoRV/BslWI從文庫載體中去除。2μg凝膠純化的載體混合5倍摩爾過量的VLκ-鏈。連接和轉化入大腸桿菌TOP10F細胞(Invitrogen)如VLλ-鏈所述進行，產生總共1.6×108個單獨菌落。
製備2個輕鏈文庫的DNA且bla-模擬物用MunI/StyI去除，從而產生2個載體用於插入VH亞文庫。HuCAL_-scFv的VH文庫用於產生HuCAL_-Fab1。HuCAL_-scFv的VH文庫由主基因VH1A/B-6組成，2個VH-CDR3三核苷酸文庫盒的區別在於單獨的CDR3長度，各VH-文庫結合VLκ-和VLλ-1文庫。為產生HuCAL_-Fab1，製備來自這些VH-文庫的DNA且保持原始可變性。DNA用MunI/StyI消化並凝膠純化。5倍摩爾過量的VH-鏈用3μg VLλ-文庫載體和3μgVLκ-文庫載體在22℃連接4小時。連接混合物在1200μl大腸桿菌TOP10F細胞(Invitrogen)中電穿孔用於各載體，產生總共2.1×1010個單獨菌落。轉化子在2×YT/1％葡萄糖/34μg/ml氯黴素/10μg/ml四環素中擴增約4000倍，收集並在-80℃貯存於20％(w/v)甘油中。
作為質量控制，單個克隆的輕和重鏈分別用5′-CAGGAAACAGCTATGAC-3′(SEQ ID NO30)和5′-TACCGTTGCTCTTCACCCC-3′(SEQ ID NO31)測序。
噬菌粒拯救、噬菌體擴增和純化HuCAL_-Fab 1在2×TY培養莖中擴增，培養莖含34μg/ml氯黴素、10μg/ml四環素和1％葡萄糖(2×TY-CG)。在37℃以約0.5的OD600輔助噬菌體感染(VCSM13)後，離心和重懸浮於2×TY/34μg/ml氯黴素/50μg/ml卡那黴素，細胞在30℃過夜生長。噬菌體從上清中PEG-沉澱(Ausubel，(1998)，《精編分子生物學實驗摜》(Currentprotocols in molecular biology).John Wiley Sons，Inc.，New York，USA)，重懸浮於PBS/20％甘油並貯存於-80℃。2輪淘洗間的噬菌體擴增如下進行對數中期TG1-細胞用洗脫的噬菌體感染並平板培養於LB-瓊脂上，LB-瓊脂補充1％葡萄糖和34μg/ml氯黴素。30℃過夜生長後，刮下菌落，調節至OD600為0.5並如上所述加入輔助噬菌體。
實施例2固相淘洗MaxiSorpTM微量滴定板F96(Nunc)的孔塗布100μl 2.5μM人Aβ(1-40)肽(Bachem)，肽溶解於含NaN3(0.05％v/v)的TBS，密封平板在37℃培養3天，其中肽易在平板上聚集。用TBS中的5％無脂乾燥乳封閉後，如上純化的1-5×1012個HuCAL_-Fab噬菌體在20℃加入1小時。一些洗滌步驟之後，通過用500mM NaCl、100mM甘氨酸(pH2.2)的pH-洗脫來洗脫結合的噬菌體，隨後用1M TRIS-Cl(pH7)中和。進行3輪淘洗，如上所述各輪間進行噬菌體擴增，洗滌嚴格性逐輪增加。
實施例3亞克隆選擇的Fab片段用於表達選擇的HuCAL_-Fab片段的Fab-編碼插入物亞克隆到表達載體pMORPH_x7_FS以促進迅速表達可溶性Fab。選擇的HuCAL_-Fab克隆的DNA製備物用XbaI/EcoRI消化，因此切掉編碼Fab的插入(ompA-VL和phoA-Fd)。將純化的插入物亞克隆到XbaI/EcoRI切割的載體pMORPH_x7，此載體先前攜帶scFv插入，產生名為pMORPH_x9_Fab1的Fab表達載體(圖3)。此載體中表達的Fab攜帶2個C-末端標記(FLAG和Strep)用於檢測和純化。
實施例4通過ELISA鑑定Aβ-結合Fab片段MaxiSorpTM微量滴定板F384(Nunc)的孔塗布20μl 2.5μM人Aβ(1-40)肽(Bachem)，肽溶解於含NaN3(0.05％v/v)的TBS，密封平板在37℃培養3天，其中肽傾易於在平板上聚集。單獨Fab的表達用1mM IPTG在22℃誘導16小時。可溶性Fab通過BEL裂解(硼酸、NaCl、EDTA和含緩衝液pH8的溶菌酶)提取並用於ELISA。Fab片段用鹼性磷酸酶-綴合的山羊抗Fab抗體(Dianova/Jackson Immuno Research)檢測。在340nm激發後，加入AttoPhos螢光底物(Roche Diagnostics)後，讀出在535nm的發射。
實施例5抗體片段的最優化為最優化選擇的Aβ結合抗體片段的結合親和力，一些Fab片段MS-Roche-3(MSR-3)、MS-Roche-7(MSR-7)和MS-Roche-8(MSR-8)(圖4)用於構建Fab抗體片段文庫，通過來自HuCAL_文庫的所有CDR3不同的κ鏈κ1-3的庫取代親代VLκ3鏈(Knappik et al.，2000)。
Fab片段MS-Roche-3、7和8經XbaI/EcoRI從pMORPH_x9_FS克隆到pMORPH_18以產生pMORPH_18_Fab1(圖2)，pMORPH_18是以噬菌粒為基礎的載體，用於噬菌體展示Fab片段。κ鏈庫通過XbaI/SphI限制性酶切位點克隆到pMORPH_18_Fab1。
所得Fab最優化文庫通過淘洗篩選，淘洗抗實施例2所述包被固體支持物的聚集的人Aβ(1-40)肽。
最佳克隆在Biacore測定中通過koff-排列鑑定，如實施例8所述。進一步確定最佳克隆MS-Roche-3.2、3.3、3.4、3.6、7.2、7.3、7.4、7.9、7.11、7.12、8.1、8.2的特徵且與起始片段MS-Roche-3、MS-Roche-7和MS-Roche-8相比，顯示改進的親和性和生物活性(圖4)。所列CDRs指HuCAL_以共有區為基礎的抗體基因VH3kappa3。Fab片段MS-Roche-7.12通過克隆親代克隆MS-R7的HCDR3到HuCAL_-Fab文庫來獲得，文庫在所有6個CDR區有多樣性，使用的設計過程與Knappik等.，2000所述用於CDR3盒的相同。設計的文庫盒強烈偏向於已知胺基酸的自然分布並遵循由Allazikani確立的規範CDR構象概念(Allazikani等.，1997)。然而與HuCAL_主基因相反，克隆MS-Roche 7.12在VL鏈的49位包含胺基酸S(參見附表1)。
第一輪親和力成熟後，最佳Fabs顯示改進的特徵超過起始MS-Roche-3、MS-Roche-7和MS-Roche-8克隆(圖4)。成熟Fabs與Aβ1-40和Aβ1-42的結合親和力顯著增加，產生的KD值範圍在22-240nM，與親代克隆的850-1714nM相比(表3)。免疫組化分析人AD腦切片中的澱粉樣斑也顯示成熟克隆的染色分布顯著增加，即獲得更好的信號與背景比例且陽性斑染色以相對低濃度的成熟Fabs檢測(圖5)。
為進一步最優化，獲得自L-CDR3最佳MS-Roche-3、-7和-8(表1；圖4)的一組抗體片段的VH CDR2區和VL CDR1區通過盒誘變用三核苷酸-定向誘變(Virnek_s等.，1994)來最優化。因此，構建以三核苷酸為基礎的HCDR2盒和以三核苷酸為基礎的LCDR1盒，所用設計過程與Knappik等.，2000所述用於CDR3盒的相同。設計文庫盒強烈偏向於已知胺基酸的自然分布並遵循由Allazikani確立的規範CDR構象概念(Allazikani等.，1997)。用於最優化初始選擇抗體片段的方案通過自然免疫反應中觀察到的體細胞高變來模擬親和力成熟的過程。
如上所述單獨篩選所得文庫，產生H-CDR2或L-CDR1區中的最佳克隆。所有克隆如上鑑定，通過在Biacore中koff-排列後對Aβ1-40-纖維的koff改進且與對應親代克隆相比，對Aβ1-40或Aβ-42或2者的親和力提高(表3)。表1包含親代的序列特徵以及最佳克隆的序列。所列CDRs指HuCAL_以共有區為基礎的抗體基因VH3kappa3。
例如，L-CDR3最優化後(MS-Roche-7.9)，MS-Roche-7親代Fab對Ab1-40的親和力增加35倍，從1100nM到31nM，且H-CDR2最優化後(MS-Roche-7.9H2)進一步提高到5nM，如表3所示。
H-CDR2和L-CDR1最優化過程不僅增加親和力，而且使一些克隆在AD腦切片中的澱粉樣斑染色有顯著改進，特別如用MS-Roche 7.9H2和7.9H3所見。
表1
表1(續)
表1(續)
表1(續)
表1(續)
表1(續)
表1(續)
序列屬於VH3和Vk3 HuCA共有序列，參見圖1A。
實施例6HuCAL_免疫球蛋白表達載體的構建重鏈克隆.pcDNA3.1+(invitrogen)的多克隆位點被去除(NheI/ApaI)，與用於HuCAL_設計的限制性位點相容的填充片段被插入用於連接前導序列(NheI/EcoRI)、VH-結構域(MuhI/)和免疫球蛋白恆定區(BlpI/ApaI)。前導序列(EMBL 83133)裝有Kozak序列(Kozak，1987)。人IgG(PIR A02146)、IgG4(EMBL K01316)和血清IgA1(EMBL J00220)的恆定區切成長度約70個鹼基的重疊寡核苷酸。引入沉默突變以去除與HuCAL_設計不相容的限制性位點。寡核苷酸通過重疊延伸-PCR來剪接。
在從Fab亞克隆到IgG中，Fab的VH DNA序列通過Mfe I/Blp I切掉並連接入IgG載體，載體經EcoR I/Blp I打開。EcoR I(g/aattc)和Mfe I(c/aattg)共享相容粘性末端(aatt)，連接入IgG表達載體後，Fab中原始Mfe I位點的DNA序列從c/aattg變為g/aattg，從而破壞Mfe I和EcoR I位點，因此也導致從Q(密碼子caa)變為E(密碼子gaa)。
輕鏈克隆.pcDNA3.1/Zeo+(Invitrogen)的多克隆位點被2個不同填充片段取代。κ-填充片段提供限制性位點用於插入κ-前導區(NheI/EcoRV)、HuCAL_-scFv Vκ-結構域(EcoRV/BsiWI)和κ-鏈恆定區(BsiWI/ApaI)。λ-填充片段中的對應限制性位點是NheI/EcoRV(λ-前導區)、EcoRV/HpaI(Vλ-結構域)和HpaI/ApaI(λ-鏈恆定區)κ-前導區(EMBL Z00022)以及λ-前導區(EMBL J00241)都裝有Kozak序列。人κ-(EMBL L00241)和λ-鏈(EMBL M18645)的恆定區通過上述重疊延伸-PCR裝配。
產生表達IgG的CHO-細胞.CHO-K1細胞用IgG重和輕鍊表達載體的等摩爾混合物共轉染。雙重抗性轉染子用600μg/ml G418和300μg/ml零黴素(Invitrogen)選擇，接著有限稀釋。通過捕獲-ELISA評估單克隆上清的IgG表達。陽性克隆在RPMI-1640培養基中擴增，培養基補充10％超低IgG-FCS(Life Technologies)。上清pH調至8.0並無菌過濾後，溶液進行標準蛋白A柱層析(Poros 20 A，PE Biosystems)。
實施例7用十肽的肽點分析下列涵蓋Aβ(1-42)的胺基酸序列分成43個重疊十肽，十肽有1個胺基酸的移碼。
ISEVKM1DAEF RHDSGYEVHH QKLVFFAEDV GSNKGAIIGL MVGGVVI42ATVIV(SEQ ID NO414)。因此，所包括的DAEF RHDSGYEVHH QKLVFFAEDVGSNKGAIIGL MVGGVVIA(SEQ ID NO27)代表Aβ4/β-A4肽的胺基酸1到42。
43個十肽由商業供應商(Jerini BioTools，Berlin)合成，N-末端乙醯化且C-末端共價附著纖維素薄片(「肽點」)。纖維素薄片在搖臺上用封閉緩衝液(50mM TrisHCl、140mM NaCl、5mM NaEDTA、0.05％NP40(Fluka)、0.25％明膠(Sigma)、1％牛血清白蛋白部分V(Sigma)，pH7.4)中的單克隆抗體(2μg/ml)孵育2小時。薄片在搖臺上用TBS(10mM Tris.HCl、150mM NaCl，pH7.5)洗3次3分鐘。然後用陰極緩衝液(25mM Tris鹼、40mM 6-氨基己酸、0.01％SDS、20％甲醇)弄溼並轉至半乾印跡堆，肽側面向等大小的PVDF膜(Biorad)。
半乾印跡堆由新弄溼的濾紙(WhatmanNo.3)組成，比肽薄片稍大。
3張紙用陰極緩衝液弄溼肽薄片用甲醇弄溼的PVDF膜薄片3張紙用陽極緩衝液1(30mM Tris鹼、20％甲醇)弄溼3張紙用陽極緩衝液2(0.3mM Tris鹼、20％甲醇)弄溼轉移以陰極和陽極間0.8mA/cm2的電流密度進行40分鐘，足以從纖維素薄片中洗脫大部分抗體並使其沉積在PVDF膜上。然後PVDF膜換成第2張PVDF膜且再轉移40分鐘以確保從纖維素薄片中完全洗脫。
PVDF膜在封閉緩衝液中浸10分鐘。然後HRP-標記的抗人IgH+L(Pierce)以1∶1000稀釋加入，膜在搖臺上孵育1小時。它用TBST(有0.005％吐溫20的TBS)洗3×10分鐘。將膜浸入溶液來顯色，溶液由溶於9ml甲醇的3mg 4-氯萘酚和41ml PBS(20mM磷酸鈉、150mM NaCl，pH7.2)、10μl 30％過氧化氫(Merck)組成。顯出藍黑斑點後，膜用水充分洗滌並乾燥。
抗體-反應性肽點排布通過視覺檢查透明點基質來產生。所討論擾體的表位定義為反應性肽中的最小胺基酸序列。為比較起見，小鼠單克隆抗體(BAP-2、BAP-1、BAP-17、BAP-21、BAP-24和4G8)以同樣方式分析，除了使用HRP-標記的抗小鼠Ig代替抗人Ig。
注意到單價Fab片段的親和力成熟和轉變成全長IgG1抗體通常導致表位識別序列有些擴大，如肽點和ELISA分析所示。這可能涉及在抗體-抗原相互作用區域中補充更多接觸點作為親和力成熟的結果，或涉及較強結合最小表位從而也能檢測與鄰近胺基酸的弱相互作用。當衍生自Aβ的肽用全長IgG抗體探測時，也許是後一種情況。如用於肽點分析的表2所示，當比較親代Fabs和相應充分成熟的IgG抗體時，N-末端和中間表位的識別序列延伸至3個胺基酸。然而，要牢記修飾十肽以在C-末端胺基酸上共價附著，且由於位阻因而此胺基酸可能不易接邊全長抗體。如果是這種情況，最後的C-末端胺基酸對表位識別序列沒有明顯影響，在本發明所用肽點分析中需要考慮通過C-末端上的1個胺基酸減少最小識別序列的可能性。
表2肽點分析纖維素薄片上Fabs和全長IgG抗體與十肽的結合。數字指來自Aβ1-40序列的必需胺基酸，它們必須存在於十肽以最佳結合抗體。弱肽反應性且因此對表位有弱的影響由括號表示。
實施例8通過表面胞質基因組共振(SPR)確定MS-R Fab和MS-R IgG1抗體體外結合Aβ1-40和Aβ1-42纖維的KD值抗Aβ抗體(Fabs和IgG1)結合纖維狀Aβ通過表面胞質基因組共振(SPR)在線測量，確定分子相互作用的親和力如Johnson，Anal.Biochem.1991，198，268-277和Richalet-Sécordel，Anal.Biochem.1997，249，165-173所述。Biacore2000和Biacore3000儀器用於這些測量。體外產生Aβ1-40和Aβ1-42纖維通過合成肽以200μg/ml濃度在10mM乙酸鈉緩衝液(pH4.0)中37℃孵育3天。電鏡分析確定2種肽的纖維結構，Aβ1-40顯示主要較短(＜1微米)纖維且Aβ1-42顯示主要較長(＞1微米)纖維。假定這些纖維代表人AD腦中聚集的Aβ肽，比無定形集合與無結構沉澱的不定混合物更緊密。纖維以1∶10稀釋並直接偶聯「先鋒傳感晶片F1」，如廠商說明手冊(BIAapplication手冊，AB版，Biacore AB，Uppsala，1998)所述。在開始的實驗中發現選擇的MS-Roche Fabs的反應動力學顯著不同，因此須相應選擇數據分析模式。對於動力學慢的結合物，KD值通過曲線擬合時間依賴性傳感器反應來計算，即來自k關/k開比例。動力學快的結合物通過擬合平衡時濃度依賴性傳感器反應(吸收-等溫線)來分析。KD值從Biacore傳感圖計算，用蛋白質測定法確定的總Fab濃度為基礎。對於獲得自第1和第2個親和力成熟循環的克隆，各製品中活性Fab含量在Biacore中確定，根據Christensen《分析生物化學》(Analytical Biochemistry)(1997)249，153-164所述方法。簡要地，在分析物溶液的不同流速的質量限制條件下測量聯合階段中蛋白質與Aβ1-40纖維的時間依賴性結合，纖維固定於Biacore晶片。認識質量限制的條件通過在測量通道的晶片表面上固定大量Aβ纖維(2300個反應單位)和以相對低的分析物濃度工作，即160 nM(以總Fab蛋白濃度為基礎)。
初步篩選HuCAL文庫中鑑定的選擇MS-Roche克隆的KD值的總結和第1和第2個親和力成熟循環後它們對應的成熟衍生物示於表3。在第1個親和力成熟循環中重鏈CDR3(VH-CDR3)保持不變且最優化集中於輕鏈CDR3(VL-CDR3)的多樣性。在第2個親和力成熟循環中，進行了VL-CDR1和VH-CDR2的多樣化。一些來自第1個成熟循環的結合物轉變成全長人IgG1抗體，根據實施例6所述MorphoSys開發的技術和上述Biacore中確定的KD值。全長IgG1結合Aβ1-40和Aβ1-42的KD值示於表4。
鑑定第2個成熟循環後來自L-CDR1以及H-CDR2文庫的成熟衍生物並可組合輕和重鏈。交叉克隆策略描述於實施例13。交換完整輕鏈LCDR1或L-CDR1+2。所選交叉克隆Fabs的KD值示於表8。
一些來自第1和第2個成熟循環及來自交叉克隆結合物的Fabs根據實施例6所述MorphoSys開發的技術轉變成全長人IgG1抗體。IgG結合Aβ1-40和Aβ1-42纖維的KD值在Biacore中確定。簡要地，使用逐步形成二價複合體的動力學模型，KD值通過斯卡查德類型分析平衡結合來計算。由於聯合過程在低抗體濃度很低(到達平衡幾小時)，平衡結合數據通過外推聯合曲線到長時間間隔來獲得。
形成單價和二價複合體的開和關速度經曲線擬合過程確定並用於外推。在這些Req值基礎上，進行斯卡查德分析且確定形成單價和二價複合體的KD值。數據總結於表5。從曲線斯卡查德圖獲得較高(二價)和較低(單價)親和相互作用用於MS-R IgGs，MS-R IgGs獲得自第2個親和力成熟循環和交叉克隆。這2種親和力代表表5所示範圍的較低和較高KD值。
表3
表3Biacore中確定的MS-R Fab結合Aβ1-40和Aβ1-42纖維的KD值。對於獲得自第1和第2個親和力成熟循環的克隆，校正值用於本文所述各樣品中活性Fab的存在量。a，從平衡時濃度依賴性傳感器反應計算的值；n.d.，未確定。
表4
表4Biacore中確定的MS-R IgG1結合Aβ1-40和Aβ1-42纖維的KD值。第1個親和力成熟循環後從所選MS-RFabs中獲得IgGs。校正值用於本文所述各樣品中活性MS-R IgGs的存在量。
表5Biacore中確定的MS-R IgG1結合Aβ1-40和Aβ1-42纖維的KD值。IgGs獲得自第1和第2個親和力成熟循環後所選的MS-R Fabs和交叉克隆的Fabs。校正值用於本文所述各樣品中活性MS-R IgGs的存在量。2個賦予MS-R IgGs的KD值獲得自第2個親和力成熟步驟且交叉克隆的結合物代表較高和較低親和相互作用，如曲線斯卡查德圖所計算。有了一些另外的MS-R IgGs(例如MS-R IgG 7.9.H2×7.12.L2和MS-RIgG 7.9.H4×7.12.L2)，獲得復曲線斯卡查德圖，因此不能確定KD值。
實施例9通過間接免疫螢光染色阿爾茨海默氏病患者腦切片中真人澱粉樣斑通過免疫組化分析測試所選MS-Roche Fabs和全長IgG1對β-澱粉樣斑的結合。來自人顳皮層(從診斷為阿爾茨海默氏病陽性患者死後獲得)未固定組織的恆冷切片通過間接免疫螢光標記，使用不同濃度的MS-Roche Fabs或全長人IgG1抗體。Fabs和IgG1抗體分別用綴合Cy3的山羊抗人親和純化的F(ab『)2片段和綴合Cy3的山羊抗人(H+L)顯示。二級試劑都獲得自Jackson Immuno Research。對照包括不相關Fab和單獨二抗，它們都給出陰性結果。用所選MS-Roche Fabs和MS-Roche IgG1抗體染色斑的典型例子示於圖5到7。
實施例10聚合測定防止Aβ聚集當在含水緩衝液中孵育幾天時，合成的Aβ自發聚集和形成纖維狀結構，與阿爾茨海默氏病患者腦中的澱粉樣沉積物類似。我們開發了體外測定用於測量生物素醯化的Aβ摻入預形成的Aβ聚集體以分析抗Aβ抗體和其它Aβ-結合蛋白如清蛋白的Aβ-中和潛能(Bohrmann等.，1999，J.Biol.Chem.274，15990-15995)。小分子對Aβ聚集的效果也可在此測定中分析。
實驗過程NUNC Maxisorb微量滴定板(MTP)用Aβ1-40和Aβ1-42的1∶1混合物(各2μM，100μl每孔)37℃塗布3天。在這些條件下，高度聚集、纖維狀Aβ被吸收和固定於孔的表面。然後取出塗布溶液且平板在室溫乾燥2-4小時。(乾燥板可貯存於-20℃)。剩餘結合部位通過加入300μl/孔磷酸緩衝鹽水封閉，鹽水含0.05％吐溫20(T-PBS)和1％牛血清白蛋白(BSA)。室溫孵育1-2小時後，平板用1×300μl T-PBS洗。加入20mM Tris-HCl中的20nM生物素醯化的Aβ1-40溶液、含0.05％NaN3的150mM NaClpH7.2(TBS)和連續稀釋的抗體(100μl/孔)，平板在37℃孵育過夜。用3×300μl T-PBS洗後，鏈黴抗生物素蛋白-POD綴合物(Roche Molecular Biochemicals)在含1％BSA的T-PBS中1∶1000稀釋，加入(100μl/孔)並在室溫孵育2小時。孔用3×300μl T-PBS洗並加入100μl/孔的新製備四甲基聯苯胺(TMB)溶液。[製備TMB溶液10ml 30mM檸檬酸pH4.1(用KOH調節)+0.5ml TMB(1ml丙酮中的12mg TMB+9ml甲醇)+0.01ml 35％H2O2]。通過加入100μl/孔1N H2SO4終止反應且吸光度在微量滴定板讀數器中450nm讀。
結果圖8顯示MS-Roche IgG1抗體防止生物素醯化的Aβ1-40摻入預形成的Aβ1-40/Aβ1-42聚集體中。當用實施例7所述肽點技術分析時，這些全長人IgGs的Aβ-中和能力類似於小鼠單克隆抗體BAP-1，BAP-1通過標準免疫過程產生並特異識別Aβ肽的胺基酸殘基4-6。小鼠單克隆抗體BAP-2也專一地與胺基酸4-6反應(Brockhaus，未發表)，它在此測定中活性顯著小。用Aβ1-40 C-末端特異抗體BAP-17甚至發現更低活性(Brockhaus，Neuroreport 9(1998)，1481-1486)且單克隆抗體4G8識別Aβ序列中17位和24位間的表位(Kim，1988，Neuroscience Research Communication，第2卷，121-130)。濃度達10μg/ml的BSA不影響生物素醯化的Aβ的摻入並作為負對照。然而，在較高濃度即＞100μg/ml，已報導BSA抑制生物素醯化的Aβ摻入預形成的Aβ纖維中(Bohrmann，(1999)J Biol Chem 274(23)，15990-5)，表明BSA與Aβ的相互作用沒有高親和性。
實施例11解聚測定從聚集的Aβ中釋放生物素醯化的Aβ在類似實驗方案中，我們測試了MS-Roche IgG抗體誘導聚集的Aβ解聚的潛力。生物素醯化的Aβ1-40首先摻入預形成的Aβ1-40/Aβ1-42纖維中，然後用多種抗Aβ抗體處理。生物素醯化的Aβ的釋放用聚合測定中所述相同測定法測量。
實驗過程NUNC Maxisorb微量滴定板(MTP)用聚合測定中所述Aβ1-40和Aβ1-42的1∶1混合物塗布。為摻入生物素醯化的Aβ，塗布的平板用TBS中200μl/孔20nM生物素醯化的Aβ1-40在37℃過夜孵育，TBS含0.05％NaN3。平板用3×300μl/孔T-PBS洗，抗體在含0.05％NaN3的TBS中連續稀釋，加入並於37℃孵育3小時。洗平板並如上所述分析生物素醯化的Aβ1-40的存在。
結果圖9A到D顯示發明的抗體誘導聚集的Aβ的解聚，通過釋放摻入的生物素醯化的Aβ1-40來測量。MS-R抗體和小鼠單克隆抗體BAP-1活性類似，而BAP-2、BAP-17和4G8抗體從大量固定的Aβ聚集體中釋放生物素醯化的Aβ的效率明顯較小。BAP-1明顯不同於MS-R抗體，差異在於其與細胞表面全長APP的反應性(見圖15)，有這種性質的抗體像BAP-1不用於治療應用，因為可能誘導潛在的自身免疫反應。有趣的是注意到儘管BAP-2對聚集的Aβ中暴露的胺基酸殘基4-6有特異性，它在此測定中活性明顯較低，表明不是所有N-末端特異抗體事先在從預形成的聚集體中釋放Aβ上同樣有效。MS-Roche IgGs在解聚活性方面明顯優於BAP-2。此測定中BAP-17(C-末端特異)和4G8(胺基酸殘基16-24-特異)的相對低效率是由於這2種表位在聚集的Aβ中的隱蔽性質。在聚合測定中已指出這裡所用濃度BSA對聚集的Aβ沒有效果。
MS-R抗體獲得自第2個親和力成熟循環和交叉克隆的結合物，抗體在解聚測定中一般顯示較高效率(圖9A與圖9B和C比較)，這與這些抗體的結合親和力增加一致(見表3-5)。已報導單克隆抗體AMY-33和6F/3D在一些實驗條件下體外防止Aβ聚集(Solomon，(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93，452-455；AMY-33和6F/3D抗體分別獲得自Zymed Laboratories Inc.，San Francisco(定貨號13-0100)和Dako DiagnosticsAG，Zug，Switzerland(定貨號M08721))。如圖9D所證明，這些抗體在解聚測定中都完全失活。
實施例12通過ELISA對肽綴合物進行表位分析下列七肽(單字母編碼)通過固相合成獲得並通過液相層析用本領域已知技術純化。
AEFRHDCEFRHDSCFRHDSGCRHDSGYCHDSGYECDSGYEVCSGYEVHCYEVHHQCEVHHQKCVHHQKLCHHQKLVCHQKLVFCQKLVFFCKLVFFACLVFFAECVFFAEDCFFAEDVCFAEDVGCAEDVGSCEDVGSNCDVGSNKC
VGSNKGGGSNKGACCSNKGAICNKGAIICKGAIIGCGLMVGGCMVGGVVCGGVVIA肽溶解於DMSO以達到10mM濃度。
牛清蛋白(無BSA的必需脂肪酸，Sigma批號112F-9390)溶解於0.1M碳酸氫鈉至10mg/ml，通過每ml加入50μl 26mg/ml溶液來活化，溶液是DMSO中的N-琥珀醯亞胺基-馬來醯亞胺丙酸值(NSMP，Pierce)。室溫反應15分鐘後，活化的BSA通過在PBS中凝膠過濾(NAP-10，Pharmacia)來純化，0.1％疊氮化鈉作為溶劑。50μl NSMP活化的BSA(6.7mg/ml)用50μl PBS、0.1％疊氮化鈉稀釋且加入10μl肽溶液(DMSO中1mM)。作為負對照，模擬處理活化的BSA而不加肽。室溫4小時後，通過加入10μl 10mM半胱氨酸來終止反應。綴合反應混合物的等分樣品用0.1M碳酸氫鈉緩衝液1∶100稀釋並立即注滿ELISA平板(Nunc免疫平板)的孔(100μl)。4℃放置16小時後，100μl封閉緩衝液(如上)加入各孔並再孵育30分鐘。平板用2×300μl/孔TBST(如上)洗且用100μl抗體充滿，抗體以10μg/ml或2μg/ml在封閉緩衝液中。平板在4℃放置16小時並用2×300μl TBST洗。加入100μl/孔HRP-綴合的抗人Ig H+L(Pierce，用封閉緩衝液1∶1000稀釋)並在環境溫度孵育1小時。平板用3×300ul/孔TBST洗。通過加入100μl四甲基聯苯胺/過氧化氫試劑開始顯色。加入100μl/孔1M硫酸5分鐘後終止反應且通過光讀數器(微量滴定板讀數器3550 BioRad)在450nm測量光密度。為比較起見，小鼠單克隆抗體以同樣方式分析，除了使用HRP-標記的抗小鼠Ig作為顯色劑而不是抗人Ig。
使用上述獲得自Aβ的特定七肽，完成上文所述特定ELISA-測試。發明的抗體優選包括抗體，當它們與A-β衍生物肽(AEFRHD；A-β的胺基酸2到7)的反應性與非相關蛋白質/肽(像BSA)相比時，光密度測量顯示信號與背景比高於「10」。最優選對應反應的光密度比例高於「5」，有至少1個下列3種Aβ衍生的肽(VFFAED；Aβ的胺基酸18到23)或(FFAEDV；Aβ的胺基酸19到24)或(LVFFAE；Aβ的胺基酸17到22)。
發明的親代和/或成熟抗體的相應結果示於下列2個表
第1表
未反應的長鏈單烷基酚(a)及(b)的測定
將聚碳酸酯樹脂片2g溶解於二氯甲烷50毫升中，然後一點一點地加丙酮250毫升使聚合物析出。
將該體系抽濾後，進行濃縮，使用正己烷20毫升將該濃縮液定容後，採用氣相色譜(GC)進行定量。
測定條件如下。
GC本體HEWLETT PACKARD HP 6890譜柱JW SCIENTIFIC公司制、DB-1(15m×0.53mmφ×0.15μm)溫度曲線40℃/保持1分鐘→40℃/分升溫→120℃/保持7分鐘→10分鐘/升溫→330℃保持5分鐘載氣氦(40cm3/秒、恆定流速)
表6MS-R Fabs與BSA-綴合的Aβ七肽2-7(AEFRHD)、17-22(LVFFAE)、18-23(VFFAED)和19-24(FFAEDV)的反應性。給出ELISA讀出的比例(光密度)，用肽-綴合和非-綴合的BSA獲得。也指明用17-22、18-23、19-24肽所得相對於2-7肽的信號強度。
表7MS-R IgGs和小鼠單克隆抗體BAP-1、BAP-2、4G8、6E10 Amy-33和6F/3D與BSA-綴合的Aβ七肽2-7(AEFRHD)、17-22(LVFFAE)、18-23(VFFAED)和19-24(FFAEDV)的反應性。給出ELISA讀出的比例(光密度)，用肽-綴合和非-綴合的BSA獲得。也指明用17-22、18-23、19-24肽所得相對於2-7肽的信號強度。*此抗體對序列8-17特異且不識別N-末端或中間表位序列。
實施例13通過交叉克隆組合最佳化的H-CDR2和L-CDR1HuCAL文庫的模塊設計可在一簡單克隆步驟中交換2個不同Fab編碼基因的互補決定區(CDRs)。為進一步改進親和性，來自成熟克隆有相同H-CDR3的單獨最佳化的H-CDR2和L-CDR1被組合，因為很可能此組合會進一步獲得親和力(Yang等.，1995，J.Mol.Biol.254，392-403；Schier等.，1996b，J.Mol.Biol.263，551-567；Chen等.，1999，J.Mol.Biol.293，865-881)。完整輕鏈或其片段從L-CDR1最佳化供體克隆轉至H-CDR2最佳化受體克隆。如果供體和受體克隆都攜帶相同H-CDR3序列，僅組合它們。所有供體和受體克隆攜帶VH3-Vκ3構架。
這通過將完整輕鏈從L-CDR1-最佳化供體克隆轉至H-CDR2-最佳化受體克隆來完成。僅通過組合有相同H-CDR3的克隆保存表位特異性。如果交換發生在有相同L-CDR3的克隆間，H-CDR2-最佳化克隆通過輕鏈交換僅獲得最佳化L-CDR1。如果待組合的克隆的L-CDR3不同，除了最佳化L-CDR1，H-CDR2-最佳化克隆獲得另一種L-CDR3(L-CDR2保持HuCAL共有序列(Knappik等.，2000))，當MS-Roche#7.12的衍生物用作輕鏈供體時，L-CDR1，2和3在H-CDR2-最佳化受體克隆中交換。使用3種不同的克隆策略1)完整抗體輕鏈片段用限制性內切酶XbaI和SphI從質粒1(如pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H1_FS)中切去，由此所得載體主鏈然後連接質粒2(如pMx9_Fab_MS-Roche#7.2.L1_FS)的輕鏈片段，此片段通過XbaI和SphI消化產生。由此產生一個新的質粒(命名pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H1×7.2.L1_FS)，編碼親代克隆#7.2.L1的L-CDR1、2、3和親代克隆#7.11.H1的H-CDR1、2、3。
2)L-CDR1編碼片段用限制性內切酶XbaI和Acc65I從質粒1(如pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H2_FS)中切去，由此所得載體主鏈然後連接質粒2(如pMx9_Fab_MS-Roche#7.12.L1_FS)的L-CDR1片段，此片段通過XbaI和Acc65I消化產生。由因此產生一個新的質粒(命名pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H2×7.12.L1(L-CDR1)_FS)，編碼親代克隆#7.12.L1的L-CDR1，而L-CDR2、3和H-CDR1、2、3獲得自親代克隆#7.11.H2。
3)L-CDR1和L-CDR2編碼片段用限制性內切酶XbaI和BamHI從質粒1(如pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H2_FS)中切去，由此所得載體主鏈然後連接質粒2(如pMx9_Fab_MS-Roche#7.12.L1_FS)的L-CDR1和L-CDR2片段，此片段通過XbaI和BamHI消化產生。由此產生一個新的質粒(命名pMx9_Fab_MS-Roche#7.11.H2×7.12.L1(L-CDR1+2)_FS)，編碼親代克隆#7.12.L1的L-CDR1和L-CDR2，而L-CDR3和H-CDR1、2、3獲得自親代克隆#7.11.H2。
不同克隆策略以及序列供體和受體克隆的說明性例子在表8中給出。
大規模表達和純化後，它們的親和性在Aβ(1-40)纖維上確定。此外，所選交叉克隆的MS-R Fab/抗體的KD值在附表9中給出。
克隆策略1)↓ ↓
克隆策略2)↓ ↓
↓↓克隆策略3)
表8箭頭表示用於消化相應質粒的限制性酶切位點的位置
表9Biacore中確定的交叉克隆MS-R Fab結合Aβ1-40和Aβ1-42纖維的KD值。交叉克隆Fabs的製備描述於實施例13。KD值通過動力學曲線擬合確定並校正用於本文所述各樣品中活性Fab的存在量。一些Fabs另外通過大小排阻層析純化或準備超離心以去除聚集的物質。H-CDR2-成熟受體克隆(L1)僅從L-CDR1改進供體克隆中接受L-CDR1；H-CDR2-成熟受體克隆(L1+2)從L-CDR1改進供體克隆中接受L-CDR1+2。
實施例14通過共焦雷射掃描顯微鏡和共定位分析揭示阿爾茨海默氏病的小鼠模型中的體內澱粉樣斑修飾選擇的MS-R IgG1抗體在APP/PS2雙重轉基因小鼠(參考文獻Richards等.，Soc.Neurosci.Abstr.，27卷，程序號5467，2001)中測試體內澱粉樣斑修飾。抗體(1mg/小鼠)i.v.施用，3天後腦用鹽水灌注並準備用於冷凍切片。在另一個研究中，小鼠接受較高濃度的抗體，即在第0、3和6天i.v.注射2mg且在第9天殺死。通過雙標記間接免疫螢光在未固定冷凍切片上評估抗體結合澱粉樣斑的存在，使用綴合任一Cy3的山羊抗人IgG(H+L)(#109-165-003，Jackson Immuno Research)，接著用BAP-2-Alexa488免疫綴合物。通過共焦雷射顯微鏡完成成像且通過IMARIS和COLOCALIZATION軟體(Bitplane，Switzerland)處理圖像以定量檢測共定位。典型例子示於圖10-14。發現所有測試的MS-R抗體在體內澱粉樣斑的免疫修飾中陽性，儘管注意到一些可變性。
實施例15研究HEK293細胞表面上不同單克隆抗體與澱粉樣前體蛋白(APP)的結合APP在中樞神經系統中廣泛表達。抗體結合細胞表面APP可導致補體活化和健康腦區域中的細胞破壞。因此，治療的A-β抗體必須對APP沒有反應性。抗A-β的N-末端結構域的高親和性抗體(如BAP-1、BAP-2)識別也在APP構架中的各表位。相反，抗中間表位的抗體(如4G8)和發明的抗體令人驚訝地不能識別細胞表面APP。因此，體內修飾A-β但不是APP的發明抗體優於非選擇性抗體。
流式細胞儀的方法在本領域熟知。流式細胞儀測量螢光的相對單位(FL1-H)表明各抗體的細胞表面結合。與未轉染的HEK293細胞相比，轉染APP的HEK293上的螢光轉移表明與細胞表面APP的不需要反應。例如，與未轉染HEK293細胞(虛線)相比，抗N-末端結構域的抗體BAP-1和BAP-2顯示在HEK293/APP(粗線)中的FL-1信號顯著轉移。4G8抗體(對中間A-β表位特異)和所有發明的抗體(對N-末端和中間A-β表位特異)沒有顯示明顯的螢光轉移。HE293/APP和HEK293細胞間的本底螢光差異是由於不同的細胞大小。FACScan儀器與CellquestPro軟體包(都是Becton Dickinson)聯合使用。
實施例16涉及發明抗體分子的鑑定SEQ ID NOs的列表附表10涉及本文所定義序列，用於一些特定的發明抗體分子。
表10鑑定親代抗體以及最佳、成熟和/或交叉克隆抗體分子的SEQ ID NOs
序列表110豪夫邁·羅氏有限公司(F.Hoffmann-La Roche AG)莫弗西斯股份公司(MorphoSys AG)120抗Aβ抗體及其用途130F 2842 PCT140EP 02003844.41412002-02-20150EP 02003844.41512002-02-20160414170PatentIn version 3.121012119212PRT213人工序列220
223合成構建物；β-A4肽的第一區域4001Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr1 5210221114212PRT213人工序列220
223合成構建物；β-A4肽的第二區域4002Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly1 5 102103211368212DNA213人工序列
220
223合成構建物；MS-Roche#3的VH區4003caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg60agctgcgcgg cctccggatt tacctttagc agctatgcga tgagctgggt gcgccaagcc120cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagcgcg attagcggta gcggcggcag cacctattat180gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tcacgtgata attcgaaaaa caccctgtat240ctgcaaatga acagcctgcg tgcggaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtcttact300cattatgctc gttattatcg ttattttgat gtttggggcc aaggcaccct ggtgacggtt360agctcagc 3682104211122212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的VH區4004Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95
Ala Arg Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp100 105 110Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 1202105211379212DNA213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的VH區4005caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg60agctgcgcgg cctccggatt tacctttagc agctatgcga tgagctgggt gcgccaagcc120cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagcgcg attagcggta gcggcggcag cacctattat180gcggatagcg tgaaaggccg tttaccattt cacgtgataa ttcgaaaaac accctgtatc240tgcaaatgaa cagcctgcgt gcggaagata cggccgtgta ttattgcgcg cgtggtaagg300gtaatactca taagccttat ggttatgttc gttattttga tgtttggggc caaggcaccc360tggtgacggt tagctcagc 3792106211126212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的VH區4006Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr100 105 110Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120 1252107211374212DNA213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8的VH區4007caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg60agctgcgcgg cctccggatt tacctttagc agctatgcga tgagctgggt gcgccaagcc120cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagcgcg attagcggta gcggcggcag cacctattat180gcggatagcg tgaaaggccg ttttaccatt tcacgtgata attcgaaaaa caccctgtat240ctgcaaatga acagcctgcg tgcggaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtcttctt300tctcgtggtt ataatggtta ttatcataag tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg360acggttagct cagc 3742108211124
212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8的VH區4008Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Leu Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Tyr His Lys Phe Asp100 105 110Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 1202109211330212DNA213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的VL區4009gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60
ctgagctgca gagcgagcca gagcgtgagc agcagctatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcggttta ttattgccag caggtttata atcctcctgt tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021010211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的VL區40010Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Asn Pro Pro85 90 95Val Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 11021011211330
212DNA213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的VL區40011gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60ctgagctgca gagcgagcca gagcgtgagc agcagctatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcgactta ttattgcttt cagctttatt ctgatccttt tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021012211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的VL區40012Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Phe Gln Leu Tyr Ser Asp Pro
85 90 95Phe Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 11021013211330212DNA213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8的VL區40013gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60ctgagctgca gagcgagcca gagcgtgagc agcagctatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagctttctt cttttcctcc tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021014211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8的VL區40014Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Phe Pro85 90 95Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 1102101521124212DNA213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的VL區的CDR340015cagcaggttt ataatcctcc tgtt24210162118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的VL區的CDR340016Gln Gln Val Tyr Asn Pro Pro Val1 52101721124212DNA213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的VL區的CDR340017
tttcagcttt attctgatcc tttt24210182118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的VL區的CDR340018Phe Gln Leu Tyr Ser Asp Pro Phe1 52101921124212DNA213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8的VL區的CDR340019cagcagcttt cttcttttcc tcct24210202118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8的VL區的CDR340020Gln Gln Leu Ser Ser Phe Pro Pro1 52102121139212DNA213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的VH區的CDR3
40021cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt392102221113212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的VH區的CDR340022Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val1 5 102102321151212DNA213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的VH區的CDR340023ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 512102421117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的VH區的CDR340024Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val2102521145212DNA
213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8的VH區的CDR340025cttctttctc gtggttataa tggttattat cataagtttg atgtt 452102621115212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8的VH區的CDR340026Leu Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Tyr His Lys Phe Asp Val1 5 10 152102721142212PRT213人工序列220
223合成構建物；β-A4肽40027Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr Glu Val His His Gln Lys1 5 10 15Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser Asn Lys Gly Ala Ile Ile20 25 30Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala35 402102821117212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL-正向引物40028gtggtggttc cgatatc172102921143212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL-反向引物40029agcgtcacac tcggtgcggc tttcggctgg ccaagaacgg tta 432103021117212DNA213人工序列220
223合成構建物；控制正向引物40030caggaaacag ctatgac172103121119212DNA213人工序列220
223合成構建物；控制反向引物40031taccgttgct cttcacccc 1921032211360212DNA213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#3.6H5×3.6L240032
caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc60gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg120aagggtctcg agtgggtgag cgctatttct gagtctggta agactaagta ttatgctgat180tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa240atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat300gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca36021033211120212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#3.6H5×3.6L240033Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu1 5 10 15Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met20 25 30Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala35 40 45Ile Ser Glu Ser Gly Lys Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly50 55 60Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln65 70 75 80Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg85 90 95Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val Trp Gly Gln100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 12021034211360212DNA213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#3.6H8×3.6L240034caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc60gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg120aagggtctcg agtgggtgag cgctatttct gagtattcta agtttaagta ttatgctgat180tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa240atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtct tactcattat300gctcgttatt atcgttattt tgatgtttgg ggccaaggca ccctggtgac ggttagctca36021035211120212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#3.6H8×3.6L240035Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu1 5 10 15Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met20 25 30Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala35 40 45Ile Ser Glu Tyr Ser Lys Phe Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly50 55 60
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223合成構建物；VH MS-Roche#7.4H2×7.2L140036caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc60gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg120aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat tataatggtg ctcgtattta ttatgctgat180tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa240atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat300actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg360acggttagct ca37221037211124212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.4H2×7.2L140037
Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu1 5 10 15Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met20 25 30Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala35 40 45Ile Asn Tyr Asn Gly Ala Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly50 55 60Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln65 70 75 80Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg85 90 95Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp100 105 110Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 12021038211372212DNA213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.9H2×7.12L240038caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc60gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg120aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat gctgatggta atcgtaagta ttatgctgat180tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa240atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat300
actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg360acggttagct ca37221039211124212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.9H2×7.12L240039Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu1 5 10 15Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met20 25 30Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala35 40 45Ile Asn Ala Asp Gly Asn Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly50 55 60Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln65 70 75 80Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg85 90 95Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp100 105 110Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 12021040211372212DNA213人工序列
220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.9H4×7.12L240040caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc60gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg120aagggtctcg agtgggtgag cgctattaat gctgttggta tgaagaagtt ttatgctgat180tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa240atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat300actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg360acggttagct ca37221041211124212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.9H4×7.12L240041Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu1 5 10 15Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met20 25 30Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ala35 40 45Ile Asn Ala Val Gly Met Lys Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly50 55 60Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln65 70 75 80Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
85 90 95Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp100 105 110Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 12021042211372212DNA213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.11H1×7.11L140042caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc60gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg120aagggtctcg agtgggtgag cggtattaat gctgctggtt ttcgtactta ttatgctgat180tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa240atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat300actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg360acggttagct ca37221043211124212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.11H1×7.11L140043Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu1 5 10 15Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met20 25 30
Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly35 40 45Ile Asn Ala Ala Gly Phe Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly50 55 60Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln65 70 75 80Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg85 90 95Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp100 105 110Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 12021044211372212DNA213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.11H1×7.2L140044caattggtgg aaagcggcgg cggcctggtg caaccgggcg gcagcctgcg tctgagctgc60gcggcctccg gatttacctt tagcagctat gcgatgagct gggtgcgcca agcccctggg120aagggtctcg agtgggtgag cggtattaat gctgctggtt ttcgtactta ttatgctgat180tctgttaagg gtcgttttac catttcacgt gataattcga aaaacaccct gtatctgcaa240atgaacagcc tgcgtgcgga agatacggcc gtgtattatt gcgcgcgtgg taagggtaat300actcataagc cttatggtta tgttcgttat tttgatgttt ggggccaagg caccctggtg360acggttagct ca37221045
211124212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.11H1×7.2L140045Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu1 5 10 15Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met20 25 30Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Gly35 40 45Ile Asn Ala Ala Gly Phe Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly50 55 60Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln65 70 75 80Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg85 90 95Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp100 105 110Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 12021046211330212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#3.6H5×3.6L240046gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60
ctgagctgca gagcgagcca gtttctttct cgttattatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcggttta ttattgccag cagacttata attatcctcc tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021047211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#3.6H5×3.6L240047Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Leu Ser Arg Tyr20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro85 90 95Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 11021048
211330212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#3.6H8×3.6L240048gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60ctgagctgca gagcgagcca gtttctttct cgttattatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcggttta ttattgccag cagacttata attatcctcc tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021049211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#3.6H8×3.6L240049Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Phe Leu Ser Arg Tyr20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80
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223合成構建物；VL MS-Roche#7.4H2×7.2L140050gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60ctgagctgca gagcgagcca gtatgttgat cgtacttatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagatttatt cttttcctca tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021051211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.4H2×7.2L140051Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Asp Arg Thr20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45
Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro85 90 95His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 11021052211330212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.9H2×7.12L240052gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60ctgagctgca gagcgagcca gcgttttttt tataagtatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttct ggttcttcta accgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcggttta ttattgcctt cagctttata atattcctaa tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021053211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.9H2×7.12L240053Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Phe Phe Tyr Lys20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Ser Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro85 90 95Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 11021054211330212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.9H4×7.12L240054gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60ctgagctgca gagcgagcca gcgttttttt tataagtatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttct ggttcttcta accgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcggttta ttattgcctt cagctttata atattcctaa tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021055211110212PRT
213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.9H4×7.12L240055Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Phe Phe Tyr Lys20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Ser Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro85 90 95Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 11021056211330212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.11H1×7.11L140056gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60ctgagctgca gagcgagcca gcgtattctt cgtatttatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240
cctgaagact ttgcgactta ttattgccag caggtttatt ctcctcctca tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021057211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.11H1×7.11L140057Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Ile Leu Arg Ile20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Val Tyr Ser Pro Pro85 90 95His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 11021058211330212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.11H1×7.2L1
40058gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60ctgagctgca gagcgagcca gtatgttgat cgtacttatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagatttatt cttttcctca tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021059211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.11H1×7.2L140059Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Asp Arg Thr20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro85 90 95His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 110
2106021139212DNA213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#3.6H5×3.6L240060cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt392106121113212PRT213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#3.6H5×3.6L240061Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val1 5 102106221139212DNA213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#3.6H8×3.6L240062cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt392106321113212PRT213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#3.6H8×3.6L240063Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val
1 5102106421151212DNA213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#7.4H2×7.2L140064ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 512106521117212PRT213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#7.4H2×7.2L140065Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val2106621151212DNA213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#7.9H2×7.12L240066ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 512106721117212PRT213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#7.9H2×7.12L240067Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val2106821151212DNA213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#7.9H4×7.12L240068ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 512106921117212PRT213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#7.9H4×7.12L240069Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val2107021151212DNA213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#7.11H1×7.11L140070
ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 512107121117212PRT213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#7.11H1×7.11L140071Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val2107221151212DNA213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#7.11H1×7.2L140072ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 512107321117212PRT213人工序列220
223HCDR3 MS-Roche#7.11H1×7.2L140073Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val
2107421124212DNA213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#3.6H5×3.6L240074cagcagactt ataattatcc tcct24210752118212PRT213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#3.6H5×3.6L240075Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro Pro1 52107621124212DNA213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#3.6H8×3.6L240076cagcagactt ataattatcc tcct24210772118212PRT213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#3.6H8×3.6L240077Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro Pro1 5
2107821124212DNA213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#7.4H2×7.2L140078cagcagattt attcttttcc tcat24210792118212PRT213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#7.4H2×7.2L140079Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His1 52108021124212DNA213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#7.9H2×7.12L240080cttcagcttt ataatattcc taat24210812118212PRT213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#7.9H2×7.12L240081Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn1 5
2108221124212DNA213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#7.9H4×7.12L240082cttcagcttt ataatattcc taat24210832118212PRT213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#7.9H4×7.12L240083Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn1 52108421124212DNA213人工序列220
223LCDR3 MS-Roehe#7.11H1×7.11L140084cagcaggttt attctcctcc tcat24210852118212PRT213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#7.11H1×7.11L140085Gln Gln Val Tyr Ser Pro Pro His
1 52108621124212DNA213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#7.11H1×7.2L140086cagcagattt attcttttcc tcat24210872118212PRT213人工序列220
223LCDR3 MS-Roche#7.11H1×7.2L140087Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His1 521088211378212DNA213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.9H740088caggtgcaat tggtggaaag cggcggcggc ctggtgcaac cgggcggcag cctgcgtctg60agctgcgcgg cctccggatt tacctttagc agctatgcga tgagctgggt gcgccaagcc120cctgggaagg gtctcgagtg ggtgagcgct attaatgctt ctggtactcg tacttattat180gctgattctg ttaagggtcg ttttaccatt tcacgtgata attcgaaaaa caccctgtat240ctgcaaatga acagcctgcg tgcggaagat acggccgtgt attattgcgc gcgtggtaag300ggtaatactc ataagcctta tggttatgtt cgttattttg atgtttgggg ccaaggcacc360ctggtgacgg ttagctca 378
21089211126212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH MS-Roche#7.9H740089Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val35 40 45Ser Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr100 105 110Phe Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120 12521090211330212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.9H7
40090gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc60ctgagctgca gagcgagcca gagcgtgagc agcagctatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcgactta ttattgcctt cagatttata atatgcctat tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 33021091211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL MS-Roche#7.9H740091Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro85 90 95Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 110
2109221151212DNA213人工序列220
223合成構建物；HCDR3 MS-Roche#7.9H740092ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 512109321117212PRT213人工序列220
223合成構建物；HCDR3 MS-Roche#7.9H740093Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val2109421124212DNA213人工序列220
223合成構建物；LCDR3 MS-Roche#7.9H740094cttcagattt ataatatgcc tatt24210952118212PRT213人工序列220
223合成構建物；LCDR3 MS-Roche#7.9H7
40095Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile1 52109621112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的LCDR140096Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala1 5 10210972117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的LCDR240097Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr1 5210982118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的LCDR340098Gln Gln Val Tyr Asn Pro Pro Val1 52109921110
212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的HCDR140099Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser1 5 1021010021117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的HCDR2400100Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21010121113212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3的HCDR3400101Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val1 5 102101022118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.1的LCDR3
400102Gln Gln Val Tyr Ser Val Pro Pro1 52101032118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.2的LCDR3400103Gln Gln Ile Tyr Ser Tyr Pro Pro1 52101042118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.3的LCDR3400104His Gln Met Ser Ser Tyr Pro Pro1 52101052118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4的LCDR3400105Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro1 52101062118
212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.5的LCDR3400106Gln Gln Ile Tyr Asp Tyr Pro Pro1 52101072118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.6的LCDR3400107Gln Gln Thr Tyr Asn Tyr Pro Pro1 521010821117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.2H1的LCDR2400108Ala Ile Ser Glu His Gly Leu Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21010921117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.2H2的LCDR2
400109Ala Ile Ser Gln Arg Gly Gln Phe Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21011021117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.3H1的LCDR2400110Val Ile Ser Glu Lys Ser Arg Phe Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21011121117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.3H2的LCDR2400111Val Ile Ser Gln Glu Ser Gln Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21011221117212PRT213人工序列
220
223合成構建物；MS-Roche#3.3H3的LCDR2400112Ala Ile Ser Gln Asn Gly Phe His Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21011321117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H1的LCDR2400113Ala Ile Ser Glu Thr Ser Ile Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21011421116212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H2的LCDR2400114Val Ile Asp Met Val Gly His Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly1 5 10 1521011521117212PRT213人工序列
220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H3的LCDR2400115Val Ile Ser Gln Thr Gly Arg Lys Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21011621117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H4的LCDR2400116Ala Ile Ser Glu Thr Gly Met His Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21011721117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H5的LCDR2400117Val Ile Ser Gln Val Gly Ala His Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21011821117
212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H6的LCDR2400118Ala Ile Ser Glu Ser Gly Trp Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21011921117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H7的LCDR2400119Val Ile Ser Glu Thr Gly Lys Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21012021117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H8的LCDR2400120Ala Ile Ser Glu His Gly Arg Phe Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly
21012121117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H9的LCDR2400121Ala Ile Ser Glu Ser Ser Lys Asn Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21012221117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H10的LCDR2400122Ala Ile Ser Glu Ser Gly Arg Gly Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21012321117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H11的LCDR2400123Ala Ile Ser Glu Phe Gly Lys Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15
Gly21012421117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H12的LCDR2400124Val Ile Ser Gln Thr Gly Gln Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21012521117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H13的LCDR2400125Ala Ile Ser Glu Gln Gly Arg Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21012621117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H14的LCDR2400126Ala Ile Ser Glu Ser Gly Gln Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15Gly21012721117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H16的LCDR2400127Ala Ile Ser Glu Ser Gly Val Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21012821117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H17的LCDR2400128Ala Ile Ser Glu Phe Gly Gln Phe Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21012921117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4H18的LCDR2
400129Ala Ile Ser Gln Gln Ser Asn Phe Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21013021112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4L7的LCDR1400130Arg Ala Ser Gln Arg Leu Gly Arg Leu Tyr Leu Ala1 5 1021013121112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4L8的LCDR1400131Arg Ala Ser Gln Trp Ile Thr Lys Ser Tyr Leu Ala1 5 1021013221112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4L9的LCDR1400132Arg Ala Ser Arg Arg Ile His Val Tyr Tyr Leu Ala1 5 10
21013321112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.4L11的LCDR1400133Arg Ala Ser Gln Leu Val Gly Arg Ala Tyr Leu Ala1 5 1021013421117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.6H1的LCDR2400134Val Ile Ser Glu Ser Gly Gln Tyr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21013521117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.6H2的LCDR2400135Val Ile Ser Glu Arg Gly Ile Asn Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly
21013621117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.6H3的LCDR2400136Val Ile Ser Glu Thr Gly Lys Phe Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21013721117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.6H4的LCDR2400137Ala Ile Ser Glu Arg Gly Arg His Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21013821117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.6H5的LCDR2400138Ala Ile Ser Glu Ser Gly Lys Thr Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly
21013921117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.6H6的LCDR2400139Ala Ile Ser Glu His Gly Thr Asn Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21014021117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.6H8的LCDR2400140Ala Ile Ser Glu Tyr Ser Lys Phe Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21014121112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.6L1的LCDR1400141Arg Ala Ser Gln Phe Ile Gln Arg Phe Tyr Leu Ala1 5 10
21014221112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#3.6L2的LCDR1400142Arg Ala Ser Gln Phe Leu Ser Arg Tyr Tyr Leu Ala1 5 1021014321112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的LCDR1400143Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala1 5 102101442117212PRT213人工序列220
223合成構建物；LCDR2 of MS-Roche#7400144Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr1 52101452118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的LCDR3
400145Phe Gln Leu Tyr Ser Asp Pro Phe1 521014621110212PRT213人工序列220
223合成構建物；HCDR1 of MS-Roche#7400146Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser1 5 1021014721117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7的LCDR2400147Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21014821117212PRT213人工序列220
223合成構建物；HCDR3 of MS-Roche#7400148Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15
Val2101492118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.1的LCDR3400149His Gln Leu Tyr Ser Ser Pro Tyr1 52101502118212PRT213人工序列220
223合成構建物；LCDR3 of MS-Roche#7.2400150Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His1 52101512118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.3的LCDR3400151His Gln Val Tyr Ser His Pro Phe1 52101522118212PRT
213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.4的LCDR3400152Gln Gln Ile Tyr Asn Phe Pro His1 52101532118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.5的LCDR3400153His Gln Val Tyr Ser Ser Pro Phe1 52101542118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.6的LCDR3400154His Gln Leu Tyr Ser Pro Pro Tyr1 52101552118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.7的LCDR3400155His Gln Val Tyr Ser Ala Pro Phe1 5
2101562118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.8的LCDR3400156His Gln Val Tyr Ser Phe Pro Ile1 52101572118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9的LCDR3400157Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile1 52101582118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.10的LCDR3400158Gln Gln Val Tyr Asn Pro Pro His1 52101592118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.11的LCDR3
400159Gln Gln Val Tyr Ser Pro Pro His1 521016021112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12的LCDR1400160Arg Ala Ser Gln Tyr Val Ser Ser Pro Tyr Leu Ala1 5 102101612117212PRT213人工序列220
223合成構建物；LCDR2 of MS-Roche#7.12400161Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr1 52101622118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12的LCDR3400162Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn1 521016321110
212PRT213人工序列220
223合成構建物；HCDR1 of MS-Roche#7.12400163Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser1 5 1021016421117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12的LCDR2400164Asn Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21016521117212PRT213人工序列220
223合成構建物；HCDR3 of MS-Roche#7.12400165Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val2101662118212PRT
213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.13的LCDR3400166His Gln Val Tyr Ser Pro Pro Phe1 521016721117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.2H1的LCDR2400167Ala Ile Asn Ala Asn Gly Leu Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21016821117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.2H2的LCDR2400168Ala Ile Asn Gly Thr Gly Met Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21016921117212PRT213人工序列
220
223合成構建物；MS-Roche#7.2H3的LCDR2400169Ala Ile Asn Ala Asn Gly Tyr Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21017021117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.2H4的LCDR2400170Ala Ile Asn Ser Lys Gly Ser Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21017121117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.2H5的LCDR2400171Ala Ile Asn Ala Thr Gly Arg Ser Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly210172
21117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.2H6的LCDR2400172Ala Ile Asn Ala Arg Gly Asn Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21017321117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.2H7的LCDR2400173Ala Ile Asn Ser Arg Gly Ser Asp Thr His Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21017421117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.2H8的LCDR2400174Ala Ile Asn Ala Ser Gly His Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly
21017521112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.2L1的LCDR1400175Arg Ala Ser Gln Tyr Val Asp Arg Thr Tyr Leu Ala1 5 1021017621112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.2L2的LCDR1400176Arg Ala Ser Gln Tyr Ile Ser Phe Arg Tyr Leu Ala1 5 1021017721112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.2L4的LCDR1400177Arg Ala Ser Gln Phe Ile Arg Arg Ser Tyr Leu Ala1 5 102101782118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.3H1的LCDR3
400178His Gln Val Tyr Ser His Pro Phe1 521017921117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.3H1的LCDR2400179Ala Ile Ser Ala Ile Ser Asn Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21018021112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.3L1的LCDR1400180Arg Ala Ser Gln Tyr Leu His Tyr Gly Tyr Leu Ala1 5 1021018121117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.4H1的LCDR2400181Ala Ile Asn Ala Thr Gly Tyr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15
Gly21018221117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.4H2的LCDR2400182Ala Ile Asn Tyr Asn Gly Ala Arg Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly2101832118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9H1的LCDR3400183Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile1 521018421117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9H1的LCDR2400184Ala Ile Asn Ala Asn Gly Gln Arg Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15
Gly21018521117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9H2的LCDR2400185Ala Ile Asn Ala Asp Gly Asn Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21018621117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9H3的LCDR2400186Ala Ile Asn Tyr Gln Gly Asn Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21018721117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9H4的LCDR2400187
Ala Ile Asn Ala Val Gly Met Lys Lys Phe Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21018821117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9H5的LCDR2400188Ala Ile Asn His Ala Gly Asn Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21018921112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9L1的LCDR1400189Arg Ala Ser Gln Arg Leu Ser Pro Arg Tyr Leu Ala1 5 1021019021112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9L2的LCDR1400190Arg Ala Ser Gln Tyr Leu His Lys Arg Tyr Leu Ala
1 5 1021019121117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9H6的LCDR2400191Ala Ile Asn Ala Ser Gly Arg Leu Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21019221117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9H7的LCDR2400192Ala Ile Asn Ala Ser Gly Thr Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21019321117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9H8的LCDR2400193Ala Ile Asn Ala Ser Gly Ser Lys Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15
Gly21019421117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.9H9的LCDR2400194Ala Ile Asn Gly Lys Gly Asn Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21019521117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.11H1的LCDR2400195Gly Ile Asn Ala Ala Gly Phe Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21019621117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.11H2的LCDR2400196
Ala Ile Asn Ala Asn Gly Tyr Lys Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21019721117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.11H3的LCDR2400197Gly Ile Asn Ala Asn Gly Asn Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21019821117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.11H4的LCDR2400198Ala Ile Asn Ala Asn Gly Tyr Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21019921117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.11H5的LCDR2400199Ala Ile Asn Ala His Gly Gln Arg Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21020021112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.11L1的LCDR1400200Arg Ala Ser Gln Arg Ile Leu Arg Ile Tyr Leu Ala1 5 1021020121112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12H1的LCDR1400201Arg Ala Ser Gln Tyr Val Phe Arg Arg Tyr Leu Ala1 5 102102022118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12H1的LCDR3400202Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn
1 521020321110212PRT213人工序列220
223合成構建物；HCDR1 of MS-Roche#7.12H1400203Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser1 5 1021020421117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12H1的LCDR2400204Asn Ile Asn Gly Asn Gly Asn Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21020521117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12L1的LCDR2400205Asn Ile Ser Gly Ser Gly Ser Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly
21020621112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12L2的LCDR1400206Arg Ala Ser Gln Arg Phe Phe Tyr Lys Tyr Leu Ala1 5 1021020721112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12L3的LCDR1400207Arg Ala Ser Gln Phe Val Arg Arg Gly Phe Leu Ala1 5 1021020821112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12L4的LCDR1400208Arg Ala Ser Gln Arg Leu Lys Arg Ser Tyr Leu Ala1 5 1021020921112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12L6的LCDR1
400209Arg Ala Ser Gln Tyr Leu Trp Tyr Arg Tyr Leu Ala1 5 1021021021112212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#7.12L7的LCDR1400210Arg Ala Ser Gln Trp Ile Arg Lys Thr Tyr Leu Ala1 5 1021021121112212PRT213人工序列220
223合成構建物；的LCDR1MS-Roche#8400211Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Tyr Leu Ala1 5 102102122117212PRT213人工序列220
223合成構建物；LCDR2 of MS-Roche#8400212Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr1 52102132118
212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8的LCDR3400213Gln Gln Leu Ser Ser Phe Pro Pro1 521021421110212PRT213人工序列220
223合成構建物；HCDR1 of MS-Roche#8400214Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Ala Met Ser1 5 1021021521117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8的LCDR2400215Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21021621115212PRT213人工序列220
223合成構建物；HCDR3 of MS-Roche#8
400216Leu Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Tyr His Lys Phe Asp Val1 5 10 152102172118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8.1的LCDR3400217Gln Gln Leu Ser Asn Tyr Pro Pro1 52102182118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8.2的LCDR3400218Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Pro1 521021921117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8.1H1的LCDR2400219Ala Ile Ser Arg Ser Gly Ser Ash Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly
2102202118212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8.2H1的LCDR3400220Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro Pro1 521022121117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8.2H1的LCDR2400221Ala Ile Ser Ile Thr Gly Arg Arg Lys Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly21022221117212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8.2H2的LCDR2400222Ala Ile Ser Arg Thr Gly Ser Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys1 5 10 15Gly
21022321116212PRT213人工序列220
223合成構建物；MS-Roche#8.2H4的LCDR2400223Ala Thr Ser Val Lys Gly Lys Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly1 5 10 1521022421112212PRT213人工序列220
223合成構建物；的LCDR1MS-Roche#8.2L1400224Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Gly Arg Tyr Leu Ala1 5 10210225211109212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL κ1220
221MISC_FEATURE222(96)..(96)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(93)..(93)223Xaa＝Ala，Asp，Gly，His，Leu，Asn或Ser混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE
222(92)..(92)223Xaa＝Asp，Gly，Asn，Ser或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(91)..(91)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(89)..(89)223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Met或Gln混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(85)..(85)223Xaa＝可以是Thr或Val220
221MISC_FEATURE222(94)..(94)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(95)..(95)223Xaa＝Leu，Pro或Ser混合物中的任何胺基酸400225Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly1 5 10 15Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Tyr20 25 30Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile35 40 45Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly50 55 60Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Xaa Tyr Tyr Cys Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa85 90 95Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105210226211114212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL κ2220
221misc_feature222(101)..(101)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(94)..(94)223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Met或Gln混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(96)..(96)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(97)..(97)223Xaa＝Asp，Gly，Asn，Ser或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(98)..(98)223Xaa＝Ala，Asp，Gly，His，Leu，Asn或Ser混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(99)..(99)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸
220
221misc_feature222(100)..(100)223Xaa＝Leu，Pro或Ser混合物中的任何胺基酸400226Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly1 5 10 15Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser20 25 30Asn Gly Tyr Asn Tyr Leu Asp Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser35 40 45Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Gly Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro50 55 60Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile65 70 75 80Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Xaa Gln Xaa85 90 95Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys100 105 110Arg Thr210227211110212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL κ3220
221misc_feature222(97)..(97)
223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(90)..(90)223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Met或Gln混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(86)..(86)223Xaa＝Thr或Val220
221misc_feature222(92)..(92)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(93)..(93)223Xaa＝Asp，Gly，Asn，Ser或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(94)..(94)223Xaa＝Ala，Asp，Gly，His，Leu，Asn或Ser混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(95)..(95)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221misc_feature222(96)..(96)223Xaa＝Leu，Pro或Ser混合物中的任何胺基酸400227Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu
35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Xaa Tyr Tyr Cys Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa85 90 95Xaa Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 110210228211115212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL κ4220
221MISC_FEATURE222(102)..(102)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(95)..(95)223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Met或Gln混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(97)..(97)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(98)..(98)223Xaa＝Asp，Gly，Asn，Ser或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(99)..(99)223Xaa＝Ala，Asp，Gly，His，Leu，Asn或Ser混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(100)..(100)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，His，Ile，Lys，Leu，Met，Asn，Pro，Gln，Arg，Ser，Thr，Val，Trp或Tyr混合物中的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(101)..(101)223Xaa＝Leu，Pro或Ser混合物中的任何胺基酸400228Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Ile Ash Cys Arg Ser Ser Gln Ser Val Leu Tyr Ser20 25 30Ser Asn Asn Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln35 40 45Pro Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val50 55 60Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr65 70 75 80Ile Ser Ser Leu Gln Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Xaa Gln85 90 95Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile100 105 110Lys Arg Thr115210229211111
212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL λ1220
221MISC_FEATURE222(99)..(99)223Xaa＝任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(97)..(98)223Xaa＝除Cys的任何胺基酸或缺失220
221MISC_FEATURE222(94)..(96)223Xaa＝除Cys的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(92)..(92)223Xaa＝Cys，Phe，His，Arg，Trp或Tyr中任何胺基酸400229Asp Ile Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Gly Ala Pro Gly Gln1 5 10 15Arg Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Ser Ser Ser Asn Ile Gly Ser Asn20 25 30Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu35 40 45Ile Tyr Asp Asn Asn Gln Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Ser Leu Ala Ile Thr Gly Leu Gln65 70 75 80Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Xaa Asp Xaa Xaa Xaa85 90 95
Xaa Xaa Xaa Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly100 105 110210230211112212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL λ2220
221MISC_FEATURE222(100)..(100)223Xaa＝任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(93)..(93)223Xaa＝Cys，Phe，His，Arg，Trp或Tyr中任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(95)..(97)223Xaa＝除Cys的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(98)..(99)223Xaa＝除Cys的任何胺基酸或缺失400230Asp Ile Ala Leu Thr Gln Pro Ala Ser Val Ser Gly Ser Pro Gly Gln1 5 10 15Ser Ile Thr Ile Ser Cys Thr Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly Tyr20 25 30Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu35 40 45Met Ile Tyr Asp Val Ser Asn Arg Pro Ser Gly Val Ser Asn Arg Phe50 55 60
Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Ile Ser Gly Leu65 70 75 80Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Xaa Asp Xaa Xaa85 90 95Xaa Xaa Xaa Xaa Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly100 105 110210231211109212PRT213人工序列220
223合成構建物；VL λ3220
221MISC_FEATURE222(97)..(97)223Xaa＝任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(90)..(90)223Xaa＝Cys，Phe，His，Arg，Trp或Tyr中任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(92)..(94)223Xaa＝除Cys的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(95)..(96)223Xaa＝除Cys的任何胺基酸或缺失400231Asp Ile Glu Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Val Ala Pro Gly Gln1 5 10 15Thr Ala Arg Ile Ser Cys Ser Gly Asp Ala Leu Gly Asp Lys Tyr Ala20 25 30
Ser Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Val Leu Val Ile Tyr35 40 45Asp Asp Ser Asp Arg Pro Ser Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ser50 55 60Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Thr Gln Ala Glu65 70 75 80Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa85 90 95Xaa Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu Gly100 105210232211127212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH1A220
221MISC_FEATURE222(99)..(112)223Xaa＝任何胺基酸或缺失220
221MISC_FEATURE222(116)..(116)223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Asn，Pro，Ser，Val，Trp或Tyr混合物外點任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(114)..(114)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val或Tyr混合物外的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(113)..(113)223Xaa＝任何胺基酸
400232Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser1 5 10 15Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met35 40 45Gly Gly Ile Ile Pro Ile Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe50 55 60Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr65 70 75 80Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa100 105 110Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120 125210233211127212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH1B220
221MISC_FEATURE222(99)..(112)223Xaa＝任何胺基酸或缺失220
221MISC_FEATURE
222(113)..(113)223Xaa＝任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(114)..(114)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val或Tyr混合物外的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(116)..(116)223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Asn，Pro，Ser，Val，Trp或Tyr混合物外的任何胺基酸400233Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala1 5 10 15Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr20 25 30Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met35 40 45Gly Trp Ile Asn Pro Asn Ser Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe50 55 60Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Ile Ser Thr Ala Tyr65 70 75 80Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa100 105 110Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120 125210234211128212PRT
213人工序列220
223合成構建物；VH2220
221MISC_FEATURE222(100)..(113)223Xaa＝任何胺基酸或缺失220
221MISC_FEATURE222(114)..(114)223Xaa＝任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(117)..(117)223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Asn，Pro，Ser，Val，Trp或Tyr混合物外的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(115)..(115)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val或Tyr混合物外的任何胺基酸400234Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Ala Leu Val Lys Pro Thr Gln1 5 10 15Thr Leu Thr Leu Thr Cys Thr Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Ser20 25 30Gly Val Gly Val Gly Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Ala Leu Glu35 40 45Trp Leu Ala Leu Ile Asp Trp Asp Asp Asp Lys Tyr Tyr Ser Thr Ser50 55 60Leu Lys Thr Arg Leu Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val65 70 75 80Val Leu Thr Met Thr Asn Met Asp Pro Val Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr85 90 95
Cys Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa100 105 110Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120 125210235211127212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH3220
221MISC_FEATURE222(99)..(112)223Xaa＝任何胺基酸或缺失220
221MISC_FEATURE222(113)..(113)223Xaa＝任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(116)..(116)223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Asn，Pro，Ser，Val，Trp或Tyr混合物外的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(114)..(114)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val或Tyr混合物外的任何胺基酸400235Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly1 5 10 15Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr20 25 30Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val50 55 60Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr65 70 75 80Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa100 105 110Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120 125210236211126212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH4220
221MISC_FEATURE222(98)..(111)223Xaa＝任何胺基酸或缺失220
221MISC_FEATURE222(112)..(112)223Xaa＝任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(113)..(113)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val或Tyr混合物外的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(115)..(115)
223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Asn，Pro，Ser，Val，Trp或Tyr混合物外的任何胺基酸400236Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu1 5 10 15Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Gly Ser Ile Ser Ser Tyr20 25 30Tyr Trp Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile35 40 45Gly Tyr Ile Tyr Tyr Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys50 55 60Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser Leu65 70 75 80Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala85 90 95Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa100 105 110Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120 125210237211127212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH5220
221MISC_FEATURE222(99)..(112)223Xaa＝任何胺基酸或缺失220
221MISC_FEATURE222(113)..(113)223Xaa＝任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(116)..(116)223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Asn，Pro，Ser，Val，Trp或Tyr混合物外的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(114)..(114)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val或Tyr混合物外的任何胺基酸400237Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu1 5 10 15Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr20 25 30Trp Ile Gly Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met35 40 45Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser Phe50 55 60Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr65 70 75 80Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys85 90 95Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa100 105 110Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser115 120 125210238211130
212PRT213人工序列220
223合成構建物；VH6220
221MISC_FEATURE222(102)..(115)223Xaa＝任何胺基酸或缺失220
221MISC_FEATURE222(116)..(116)223Xaa＝任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(119)..(119)223Xaa＝Phe，His，Ile，Leu，Asn，Pro，Ser，Val，Trp或Tyr混合物外的任何胺基酸220
221MISC_FEATURE222(117)..(117)223Xaa＝Ala，Asp，Glu，Phe，Gly，Ile，Leu，Met，Pro，Gln，Ser，Thr，Val或Tyr混合物外的任何胺基酸400238Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln1 5 10 15Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Ile Ser Gly Asp Ser Val Ser Ser Asn20 25 30Ser Ala Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Arg Gly Leu Glu35 40 45Trp Leu Gly Arg Thr Tyr Tyr Arg Ser Lys Trp Tyr Asn Asp Tyr Ala50 55 60Val Ser Val Lys Ser Arg Ile Thr Ile Asn Pro Asp Thr Ser Lys Asn65 70 75 80Gln Phe Ser Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Pro Glu Asp Thr Ala Val
85 90 95Tyr Tyr Cys Ala Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa100 105 110Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Asp Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val115 120 125Ser Ser130210239211327212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL κ1220
221misc_feature222(286)..(288)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(271)..(273)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(265)..(267)223nnn＝TTT，CAT，CTT，ATG或CAG220
221misc_feature222(253)..(256)223nnn＝可以是ACT或GTT220
221misc_feature222(283)..(285)223nnn＝CTT，CCT或TCT
220
221misc_feature222(280)..(282)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(277)..(279)223nnn＝GCT，GAT，GGT，CAT，CTT，AAT或TCT220
221misc_feature222(274)..(276)223nnn＝GAT，GGT，AAT，TCT或TAT400239gatatccaga tgacccagag cccgtctagc ctgagcgcga gcgtgggtga tcgtgtgacc 60attacctgca gagcgagcca gggcattagc agctatctgg cgtggtacca gcagaaacca120ggtaaagcac cgaaactatt aatttatgca gccagcagct tgcaaagcgg ggtcccgtcc180cgttttagcg gctctggatc cggcactgat tttaccctga ccattagcag cctgcaacct240gaagactttg cgnnntatta ttgcnnncag nnnnnnnnnn nnnnnnnnac ctttggccag300ggtacgaaag ttgaaattaa acgtacg327210240211328212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL κ2220
221misc_feature222(289)..(289)223n＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(280)..(280)223n＝TTT，CAT，CTT，ATG或CAG220
221misc_feature222(284)..(284)223n＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(285)..(285)223n＝GAT，GGT，AAT，TCT或TAT220
221misc_feature222(286)..(289)223n＝GCT，GAT，GGT，CAT，CTT，AAT或TCT220
221misc_feature222(287)..(287)223n＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(288)..(288)223n＝CTT，CCT或TCT400240gatatcgtga tgacccagag cccactgagc ctgccagtga ctccgggcga gcctgcgagc 60attagctgca gaagcagcca aagcctgctg catagcaacg gctataacta tctggattgg120taccttcaaa aaccaggtca aagcccgcag ctattaattt atctgggcag caaccgtgcc180agtggggtcc cggatcgttt tagcggctct ggatccggca ccgattttac cctgaaaatt240agccgtgtgg aagctgaaga cgtgggcgtg tattattgcn cagnnnnnna cctttggcca300gggtacgaaa gttgaaatta aacgtacg 328210241211330212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL κ3220
221misc_feature
222(289)..(291)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(256)..(258)223nnn＝可以是ACT或GTT220
221misc_feature222(265)..(276)223nnn＝TTT，CAT，CTT，ATG或CAG220
221misc_feature222(274)..(276)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(277)..(279)223nnn＝GAT，GGT，AAT，TCT或TAT220
221misc_feature222(280)..(282)223nnn＝GCT，GAT，GGT，CAT，CTT，AAT或TCT220
221misc_feature222(283)..(285)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(286)..(288)223nnn＝CTT，CCT或TCT400241gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60ctgagctgca gagcgagcca gagcgtgagc agcagctatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcgnnnta ttattgcnnn cagnnnnnnn nnnnnnnnnn nacctttggc300
cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330210242211345212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL κ4220
221misc_feature222(304)..(306)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(283)..(285)223nnn＝TTT，CAT，CTT，ATG或CAG220
221misc_feature222(289)..(291)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(292)..(294)223nnn＝GAT，GGT，AAT，TCT或TAT220
221misc_feature222(295)..(297)223nnn＝GCT，GAT，GGT，CAT，CTT，AAT或TCT220
221misc_feature222(298)..(300)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(301)..(303)223nnn＝CTT，CCT或TCT
400242gatatcgtga tgacccagag cccggatagc ctggcggtga gcctgggcga acgtgcgacc 60attaactgca gaagcagcca gagcgtgctg tatagcagca acaacaaaaa ctatctggcg120tggtaccagc agaaaccagg tcagccgccg aaactattaa tttattgggc atccacccgt180gaaagcgggg tcccggatcg ttttagcggc tctggatccg gcactgattt taccctgacc240atttcgtccc tgcaagctga agacgtggcg gtgtattatt gcnnncagnn nnnnnnnnnn300nnnnnnacct ttggccaggg tacgaaagtt gaaattaaac gtacg345210243211322212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL λ1220
221misc_feature222(274)..(274)223n＝TGT，TTT，CAT，CGT，TGG或TAT220
221misc_feature222(278)..(280)223n＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(281)..(282)223n＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT或缺失220
221misc_feature222(283)..(283)223n＝GCT，TGT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT400243gatatcgtgc tgacccagcc gccttcagtg agtggcgcac caggtcagcg tgtgaccatc 60tcgtgtagcg gcagcagcag caacattggc agcaactatg tgagctggta ccagcagttg120
cccgggacgg cgccgaaact gctgatttat gataacaacc agcgtccctc aggcgtgccg180gatcgtttta gcggatccaa aagcggcacc agcgcgagcc ttgcgattac gggcctgcaa240agcgaagacg aagcggatta ttattgccag tctngatnnn nnngtgtttg gcggcggcac300gaagttaacc gttcttggcc ag 322210244211336212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL λ2220
221misc_feature222(274)..(276)223nnn＝TGT，TTT，CAT，CGT，TGG或TAT220
221misc_feature222(290)..(295)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT或缺失220
221misc_feature222(296)..(298)223nnn＝GCT，TGT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(280)..(289)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT400244gatatcgcac tgacccagcc agcttcagtg agcggctcac caggtcagag cattaccatc 60tcgtgtacgg gtactagcag cgatgtgggc ggctataact atgtgagctg gtaccagcag120catcccggga aggcgccgaa actgatgatt tatgatgtga gcaaccgtcc ctcaggcgtg180agcaaccgtt ttagcggatc caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccat tagcggcctg240caagcggaag acgaagcgga ttattattgc cagnnngatn nnnnnnnnnn nnnnnnngtg300
tttggcggcg gcacgaagtt aaccgttctt ggccag 336210245211327212DNA213人工序列220
223合成構建物；VL λ3220
221misc_feature222(265)..(267)223nnn＝TGT，TTT，CAT，CGT，TGG或TAT220
221misc_feature222(286)..(288)223nnn＝GCT，TGT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT220
221misc_feature222(280)..(285)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT或缺失220
221misc_feature222(271)..(279)223nnn＝GCT，GAT，GAG，TTT，GGT，CAT，ATT，AAG，CTT，ATG，AAT，CCT，CAG，CGT，TCT，ACT，GTT，TGG或TAT400245gatatcgaac tgacccagcc gccttcagtg agcgttgcac caggtcagac cgcgcgtatc 60tcgtgtagcg gcgatgcgct gggcgataaa tacgcgagct ggtaccagca gaaacccggg120caggcgccag ttctggtgat ttatgatgat tctgaccgtc cctcaggcat cccggaacgc180tttagcggat ccaacagcgg caacaccgcg accctgacca ttagcggcac tcaggcggaa240gacgaagcgg attattattg ccagnnngat nnnnnnnnnn nnnnnnnngt gtttggcggc300ggcacgaagt taaccgttct tggccag327210246
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223合成構建物；pMORPH 18 Fab_5』400253tctagataac gagggcaaaa aatgaaaaag acagctatcg cgattgcagt ggcactggct 60ggtttcgcta ccgtagcgca ggccgatatc gtgctgaccc agagcccggc gaccctgagc120ctgtctccgg gcgaacgtgc gaccctgagc tgcagagcga gccagagcgt gagcagcagc180tatctggcgt ggtaccagca gaaaccaggt caagcaccgc gtctattaat ttatggcgcg240agcagccgtg caactggggt cccggcgcgt tttagcggct ctggatccgg cacggatttt300accctgacca ttagcagcct ggaacctgaa gactttgcgg tgtattattg ccagcagcat360tataccaccc cgccgacctt tggccagggt acgaaagttg aaattaaacg tacggtggct420gctccgagcg tgtttatttt tccgccgagc gatgaacaac tgaaaagcgg cacggcgagc480gtggtgtgcc tgctgaacaa cttttatccg cgtgaagcga aagttcagtg gaaagtagac540aacgcgctgc aaagcggcaa cagccaggaa agcgtgaccg aacaggatag caaagatagc600
acctattctc tgagcagcac cctgaccctg agcaaagcgg attatgaaaa acataaagtg660tatgcgtgcg aagtgaccca tcaaggtctg agcagcccgg tgactaaatc ttttaatcgt720ggcgaggcct gataagcatg cgtaggagaa aataaaatga aacaaagcac tattgcactg780gcactcttac cgttgctctt cacccctgtt accaaagccg aagtgcaatt ggtggaaagc840ggcggcggcc tggtgcaacc gggcggcagc ctgcgtctga gctgcgcggc ctccggattt900acctttagca gctatgcgat gagctgggtg cgccaagccc ctgggaaggg tctcgagtgg960gtgagcgcga ttagcggtag cggcggcagc acctattatg cggatagcgt gaaaggccgt 1020tttaccattt cacgtgataa ttcgaaaaac accctgtatc tgcaaatgaa cagcctgcgt 1080gcggaagata cggccgtgta ttattgcgcg cgttggggcg gcgatggctt ttatgcgatg 1140gattattggg gccaaggcac cctggtgacg gttagctcag cgtcgaccaa aggtccaagc 1200gtgtttccgc tggctccgag cagcaaaagc accagcggcg gcacggctgc cctgggctgc 1260ctggttaaag attatttccc ggaaccagtc accgtgagct ggaacagcgg ggcgctgacc 1320agcggcgtgc atacctttcc ggcggtgctg caaagcagcg gcctgtatag cctgagcagc 1380gttgtgaccg tgccgagcag cagcttaggc actcagacct atatttgcaa cgtgaaccat 1440aaaccgagca acaccaaagt ggataaaaaa gtggaaccga aaagcgaatt cgggggaggg 1500agcgggagcg gtgattttga ttatgaaaag atggcaaacg ctaataaggg ggctatgacc 1560gaaaatgccg atgaaaacgc gctacagtct gacgctaaag gcaaacttga ttctgtcgct 1620actgattacg gtgctgctat cgatggtttc attggtgacg tttccggcct tgctaatggt 1680aatggtgcta ctggtgattt tgctggctct aattcccaaa tggctcaagt cggtgacggt 1740gataattcac ctttaatgaa taatttccgt caatatttac cttccctccc tcaatcggtt 1800gaatgtcgcc cttttgtctt tggcgctggt aaaccatatg aattttctat tgattgtgac 1860aaaataaact tattccgtgg tgtctttgcg tttcttttat atgttgccac ctttatgtat 1920gtattttcta cgtttgctaa catactgcgt aataaggagt cttgataagc ttgacctgtg 1980aagtgaaaaa tggcgcagat tgtgcgacat tttttttgtc tgccgtttaa tgaaattgta 2040aacgttaata ttttgttaaa attcgcgtta aatttttgtt aaatcagctc attttttaac 2100
caataggccg aaatcggcaa aatcccttat aaatcaaaag aatagaccga gatagggttg 2160agtgttgttc cagtttggaa caagagtcca ctattaaaga acgtggactc caacgtcaaa 2220gggcgaaaaa ccgtctatca gggcgatggc ccactacgag aaccatcacc ctaatcaagt 2280tttttggggt cgaggtgccg taaagcacta aatcggaacc ctaaagggag cccccgattt 2340agagcttgac ggggaaagcc ggcgaacgtg gcgagaaagg aagggaagaa agcgaaagga 2400gcgggcgcta gggcgctggc aagtgtagcg gtcacgctgc gcgtaaccac cacacccgcc 2460gcgcttaatg cgccgctaca gggcgcgtgc tagccatgtg agcaaaaggc cagcaaaagg 2520ccaggaaccg taaaaaggcc gcgttgctgg cgtttttcca taggctccgc ccccctgacg 2580agcatcacaa aaatcgacgc tcaagtcaga ggtggcgaaa cccgacagga ctataaagat 2640accaggcgtt tccccctgga agctccctcg tgcgctctcc tgttccgacc ctgccgctta 2700ccggatacct gtccgccttt ctcccttcgg gaagcgtggc gctttctcat agctcacgct 2760gtaggtatct cagttcggtg taggtcgttc gctccaagct gggctgtgtg cacgaacccc 2820ccgttcagtc cgaccgctgc gccttatccg gtaactatcg tcttgagtcc aacccggtaa 2880gacacgactt atcgccactg gcagcagcca ctggtaacag gattagcaga gcgaggtatg 2940taggcggtgc tacagagttc ttgaagtggt ggcctaacta cggctacact agaagaacag 3000tatttggtat ctgcgctctg ctgtagccag ttaccttcgg aaaaagagtt ggtagctctt 3060gatccggcaa acaaaccacc gctggtagcg gtggtttttt tgtttgcaag cagcagatta 3120cgcgcagaaa aaaaggatct caagaagatc ctttgatctt ttctacgggg tctgacgctc 3180agtggaacga aaactcacgt taagggattt tggtcagatc tagcaccagg cgtttaaggg 3240caccaataac tgccttaaaa aaattacgcc ccgccctgcc actcatcgca gtactgttgt 3300aattcattaa gcattctgcc gacatggaag ccatcacaaa cggcatgatg aacctgaatc 3360gccagcggca tcagcacctt gtcgccttgc gtataatatt tgcccatagt gaaaacgggg 3420gcgaagaagt tgtccatatt ggctacgttt aaatcaaaac tggtgaaact cacccaggga 3480ttggctgaga cgaaaaacat attctcaata aaccctttag ggaaataggc caggttttca 3540ccgtaacacg ccacatcttg cgaatatatg tgtagaaact gccggaaatc gtcgtggtat 3600tcactccaga gcgatgaaaa cgtttcagtt tgctcatgga aaacggtgta acaagggtga 3660
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85 90 95Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln100 105 110His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile115 120 125Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp130 135 140Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn145 150 155 160Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu165 170 175Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp180 185 190Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr195 200 205Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser210 215 220Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Ala Met Lys Gln Ser225 230 235 240Thr Ile Ala Leu Ala Leu Leu Pro Leu Leu Phe Thr Pro Val Thr Lys245 250 255Ala Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly260 265 270Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser275 280 285
Tyr Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp290 295 300Val Ser Ala Ile Ser Gly Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser305 310 315 320Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu325 330 335Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr340 345 350Cys Ala Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly355 360 365Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser370 375 380Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala385 390 395 400Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val405 410 415Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala420 425 430Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val435 440 445Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His450 455 460Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Glu465 470 475 480Phe Gly Gly Gly Ser Gly Ser Gly Asp Phe Asp Tyr Glu Lys Met Ala485 490 495
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223合成構建物400345Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Phe Arg Arg20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Ser Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro85 90 95Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 110210346211330212DNA213人工序列220
223合成構建物400346gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60ctgagctgca gagcgagcca gtatgttgat cgtacttatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180
gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagatttatt cttttcctca tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330210347211110212PRT213人工序列220
223合成構建物400347Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Asp Arg Thr20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro85 90 95His Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 110210348211330212DNA213人工序列
220
223合成構建物400348gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60ctgagctgca gagcgagcca gcgtctttct cctcgttatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcgactta ttattgcctt cagatttata atatgcctat tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330210349211110212PRT213人工序列220
223合成構建物400349Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Leu Ser Pro Arg20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro85 90 95
Ile Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 110210350211330212DNA213人工序列220
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223合成構建物400351Asp IIe Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Tyr Val Phe Arg Arg20 25 30Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Ser Gly Ser Ser Asn Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60
Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro85 90 95Asn Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 110210352211330212DNA213人工序列220
223合成構建物400352gatatcgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctgt ctccgggcga acgtgcgacc 60ctgagctgca gagcgagcca gcgtgtttct ggtcgttatc tggcgtggta ccagcagaaa120ccaggtcaag caccgcgtct attaatttat ggcgcgagca gccgtgcaac tggggtcccg180gcgcgtttta gcggctctgg atccggcacg gattttaccc tgaccattag cagcctggaa240cctgaagact ttgcgactta ttattgccag cagctttctt cttatcctcc tacctttggc300cagggtacga aagttgaaat taaacgtacg 330210353211110212PRT213人工序列220
223合成構建物400353Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly1 5 10 15Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Arg Val Ser Gly Arg20 25 30
Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu35 40 45Ile Tyr Gly Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser50 55 60Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu65 70 75 80Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Leu Ser Ser Tyr Pro85 90 95Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr100 105 11021035421139212DNA213人工序列220
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223合成構建物400366cttactcatt atgctcgtta ttatcgttat tttgatgtt3921036721113212PRT213人工序列220
223合成構建物400367Leu Thr His Tyr Ala Arg Tyr Tyr Arg Tyr Phe Asp Val1 5 10
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223合成構建物400371
Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val21037221151212DNA213人工序列220
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223合成構建物400373Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val21037421151212DNA213人工序列220
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223合成構建物400375Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val21037621151212DNA213人工序列220
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223合成構建物400378ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 5121037921117212PRT213人工序列220
223合成構建物400379Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15Val21038021151212DNA213人工序列220
223合成構建物400380ggtaagggta atactcataa gccttatggt tatgttcgtt attttgatgt t 5121038121117212PRT213人工序列220
223合成構建物400381Gly Lys Gly Asn Thr His Lys Pro Tyr Gly Tyr Val Arg Tyr Phe Asp1 5 10 15
Val21038221145212DNA213人工序列220
223合成構建物400382cttctttctc gtggttataa tggttattat cataagtttg atgtt 4521038321115212PRT213人工序列220
223合成構建物400383Leu Leu Ser Arg Gly Tyr Asn Gly Tyr Tyr His Lys Phe Asp Val1 5 10 1521038421124212DNA213人工序列220
223合成構建物400384cagcagactt atgattatcc tcct242103852118212PRT213人工序列220
223合成構建物
400385Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro1 521038621124212DNA213人工序列220
223合成構建物400386cagcagactt atgattatcc tcct242103872118212PRT213人工序列220
223合成構建物400387Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro1 521038821124212DNA213人工序列220
223合成構建物400388cagcagactt atgattatcc tcct242103892118212PRT213人工序列220
223合成構建物400389Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro1 521039021124212DNA213人工序列220
223合成構建物400390cagcagactt atgattatcc tcct242103912118212PRT213人工序列220
223合成構建物400391Gln Gln Thr Tyr Asp Tyr Pro Pro1 521039221124212DNA213人工序列220
223合成構建物400392cagcagactt atgattatcc tcct242103932118212PRT213人工序列
220
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220
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223合成構建物400398cagcagattt attcttttcc tcat242103992118212PRT213人工序列220
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213人工序列220
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223合成構建物400402cagcagattt attcttttcc tcat 242104032118212PRT213人工序列220
223合成構建物400403Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His1 521040421124212DNA213人工序列220
223合成構建物400404cttcagcttt ataatattcc taat242104052118
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223合成構建物400405Leu Gln Leu Tyr Asn Ile Pro Asn1 521040621124212DNA213人工序列220
223合成構建物400406cagcagattt attcttttcc tcat242104072118212PRT213人工序列220
223合成構建物400407Gln Gln Ile Tyr Ser Phe Pro His1 521040821124212DNA213人工序列220
223合成構建物400408cagcagattt attcttttcc tcat 24210409
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223合成構建物400409Leu Gln Ile Tyr Asn Met Pro Ile1 521041021124212DNA213人工序列220
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223合成構建物400412cagcagcttt cttcttatcc tcct24
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223合成構建物400414Ile Ser Glu Val Lys Met Asp Ala Glu Phe Arg His Asp Ser Gly Tyr1 5 10 15Glu Val His His Gln Lys Leu Val Phe Phe Ala Glu Asp Val Gly Ser20 25 30Asn Lys Gly Ala Ile Ile Gly Leu Met Val Gly Gly Val Val Ile Ala35 40 45Thr Val Ile Val50
權利要求
1.一種能特異識別β-A4肽/Aβ4的2個區域的抗體分子，其特徵在於，第一個區域包括SEQ ID NO1所示的胺基酸序列AEFRHDSGY或其片斷且第二個區域包括SEQ ID NO2所示的胺基酸序列VHHQKLVFFAEDVG或其片斷。
2.如權利要求1所述的抗體分子，其特徵在於，所述抗體分子識別β-A4的2個區域內至少2個連續胺基酸。
3.如權利要求1或2所述的抗體分子，其特徵在於，所述抗體分子識別第一個區域和第二個區域中的胺基酸序列，第一個區域中的胺基酸序列包括AEFRHD、EF、EFR、FR、EFRHDSG、EFRHD或HDSG且第二個區域中的胺基酸序列包括HHQKL、LV、LVFFAE、VFFAED、VFFA或FFAEDV。
4.如權利要求1到3中任一項所述的抗體分子，其特徵在於，所述抗體分子包括由選自SEQ ID NO3、5或7的SEQ ID NO所示核酸分子編碼的可變VH-區，或選自SEQ ID NOs4、6和8的SEQ ID NO所示可變VH-區。
5.如權利要求1到3中任一項所述的抗體分子，其特徵在於，所述抗體分子包括由選自SEQ ID NO9、11和13的SEQ ID NO所示核酸分子編碼的可變VL-區，或選自SEQ ID NOs10、12和14的SEQ ID NO所示可變VL-區。
6.如權利要求1到5中任一項所述的抗體分子，其特徵在於，所述抗體分子包括至少1個由SEQ ID NOs15、17或19所示核酸分子編碼的VL-區的CDR3或至少1個由SEQ ID NOs16、18或20所示VL-區的CDR3胺基酸序列和/或其中所述抗體分子包括至少1個由SEQ ID NOs21、23或25所示核酸分子編碼的VH-區的CDR3或至少1個由SEQ ID NOs22、24或26所示VH-區的CDR3胺基酸序列。
7.如權利要求1到6中任一項所述的抗體分子，其特徵在於，所述抗體分子選自MSR-3、-7和-8或MSR-3、-7和-8的親和力成熟形式。
8.如權利要求1到7中任一項所述的抗體分子，其特徵在於，所述抗體分子是完整抗體(免疫球蛋白)、F(ab)-片斷、F(ab)2-片段、單鏈抗體、嵌合抗體、CDR-移植抗體、二價抗體-構建物、合成抗體或交叉克隆抗體。
9.如權利要求1到8中任一項所述的抗體分子，其特徵在於，所述β-A4的至少2個區域來自構象表位或不連續表位。
10.如權利要求8或9所述的抗體分子，其特徵在於，所述交叉克隆抗體選自MS-R#3.3H1×3.4L9；MS-R#3.6H5×3.6L2；MS-R#3.6H8×3.6L2；MS-R#7.4H2×7.2L1；MS-R#7.9H2×7.12L2；MS-R#7.9H4×7.12L2；MS-R#7.11H1×7.11L1；MS-R#7.11H1×7.2L1；MS-R#3.4H1×3.4L9；MS-R#3.4H3×3.4L7；MS-R#3.4H3×3.4L9；MS-R#3.4H7×3.4L9；MS-R#3.4H7×3.4L7；MS-R#3.6H5×3.6L1；MS-R#7.2H2×7.2L1；MS-R#7.4H2×7.12L2；MS-R#7.9H2×7.2L1；MS-R#7.9H2×7.12L1；MS-R#7.11H2×7.2L1；MS-R#7.11H2×7.9L1；MS-R#7.11H2×7.12L1或MS-R#8.1H1×8.2L1。
11.一種核酸分子，其特徵在於，所述核酸分子編碼權利要求1到10中任一項所述的抗體分子。
12.一種載體，其特徵在於，所述載體包括權利要求11所述的核酸分子。
13.一種宿主細胞，其特徵在於，所述細胞包括權利要求12所述的載體。
14.一種製備權利要求1到10中任一項所述抗體分子的方法，其特徵在於，所述方法包括在能合成所述抗體分子和從所述培養物中回收所述抗體分子的條件下，培養權利要求13所述的宿主細胞。
15.一種組合物，其特徵在於，所述組合物包括權利要求1到10中任一項所述抗體分子或由權利要求14所述方法產生的抗體分子。
16.如權利要求15所述的組合物，其特徵在於，所述組合物是藥物或診斷組合物。
17.使用權利要求1到10中任一項所述的抗體分子或由權利要求14所述方法產生的抗體分子、權利要求11所述的核酸分子、權利要求12所述的載體或權利要求13所述的宿主，其特徵在於，用於製備藥物組合物以預防和/或治療與澱粉樣生成和/或澱粉樣斑形成相關的疾病。
18.使用權利要求1到10中任一項所述的抗體分子或由權利要求14所述方法產生的抗體分子，其特徵在於，用於製備診斷組合物以檢測與澱粉樣生成和/或澱粉樣斑形成相關的疾病。
19.使用權利要求1到10中任一項所述的抗體分子或由權利要求14所述方法產生的抗體分子，其特徵在於，用於製備藥物組合物以分解β-澱粉樣斑。
20.使用權利要求1到10中任一項所述的抗體分子或由權利要求14所述方法產生的抗體分子，其特徵在於，用於製備藥物組合物以被動免疫抗β-澱粉樣斑形成。
21.如權利要求17或18所述的用途，其特徵在於，所述疾病是痴呆、阿爾茨海默氏病、運動神經病、唐氏綜合症、克-雅氏病、澱粉樣變病荷蘭型的遺傳性腦出血、帕金森氏病、HIV-相關痴呆、ALS或與衰老相關的神經元疾病。
22.一種試劑盒，其特徵在於，所述試劑盒包括權利要求1到10中任一項所述的抗體分子、權利要求16所述的核酸分子、權利要求17所述的載體或權利要求18所述的宿主細胞。
23.一種權利要求1到10中任一項所定義抗體分子的最優化方法，其特徵在於，所述方法包括步驟(a)構建多種獲得自抗體的Fab抗體片段文庫，包含至少1個由SEQ IDNOs21、23或25所示核酸分子編碼的VH-區的CDR3或至少1個由SEQ ID NOs22、24或26所示VH-區的CDR3胺基酸序列；(b)通過抗Aβ/Aβ4淘洗測試所得Fab最優化文庫；(c)鑑定最佳化克隆；和(d)表達選擇的最佳化克隆。
24.如權利要求23所述的方法，其特徵在於，所述方法進一步包括步驟(ca)由此最佳化克隆通過盒誘變進一步最優化。
25.如權利要求23或24所述的方法，其特徵在於，步驟(b)中所述Aβ/Aβ4是聚集的Aβ/Aβ4。
26.如權利要求23到25中任一項所述的方法，其特徵在於，步驟(c)中所述鑑定是通過koff-排列完成的。
27.一種製備藥物組合物的方法，其特徵在於，所述方法包括步驟(a)根據權利要求23到26中任一項所述的方法最優化抗體；(b)用生理上可接受載體製成最佳化抗體/抗體分子。
28.一種藥物組合物，其特徵在於，所述組合物用權利要求27所述的方法製備。
全文摘要
本發明涉及能特異識別β－A4肽的2個區域的抗體分子，其中第一個區域包括SEQ ID NO1所示的胺基酸序列AEFRHDSGY或其片斷且第二個區域包括SEQ ID NO2所示的胺基酸序列VHHQKLVFFAEDVG或其片斷。此外，揭示了編碼發明抗體分子的核酸分子和載體及含所述核酸分子的宿主。另外，本發明提供組合物，優選藥物或診斷組合物，包括發明化合物以及發明抗體分子、核酸分子、載體或宿主的特定用途。
文檔編號C12N1/15GK1630665SQ03804033
公開日2005年6月22日 申請日期2003年2月20日 優先權日2002年2月20日
發明者M·巴德羅夫, B·寶曼, M·布洛克豪斯, W·休伯, T·克萊茨克馬, C·勞寧, H·洛茨西爾, C·諾德斯泰特, C·羅斯 申請人:豪夫邁·羅氏有限公司, 莫弗西斯股份公司