胰腺癌、卵巢癌和其它癌症的檢測和治療的製作方法

2023-05-15 01:30:01 5

專利名稱：胰腺癌、卵巢癌和其它癌症的檢測和治療的製作方法
胰腺癌、卵巢癌和其它癌症的檢測和治療繼續性本申請要求2008年4月11日提交的美國臨時申請號61/044，457的權益，該申請 的公開通過引用整體併入本文。背景CD70是腫瘤壞死因子(TNF)家族的成員，腫瘤壞死因子是結合細胞膜並且分泌的 分子，其由多種正常和惡性細胞類型表達。CD70是跨膜II型蛋白，其羧基末端暴露給細 胞之外，其氨基末端被發現於質膜的胞質溶膠側(Bowman et al.，1994，J. Immunol. 152 1756-61 ；Goodwin et al.，1993，Cell 73:447-56)。人 CD70 含有 20 個胺基酸的細胞質結 構域、18個胺基酸的跨膜結構域和155個胺基酸的細胞外結構域，具有兩個潛在的N-連接 的糖基化位點(上文的Bowman et al.；上文的Goodwin et al.)。通過抗⑶70抗體對經 放射性標記的表達⑶70的細胞進行的特異性免疫沉澱產生了 ^kDa和50kDa的多肽(上 文的 Goodwin et al. ；Hintzen et al，1994，J. Immunol. 152 :1762-73)。基於其與 TNF-α 和 TNF-β 的同源性，預測 CD70 為三聚體結構(Petsch et al, 1995, Mol. Immunol. 32 761-72)。⑶70在人的正常組織上僅具有有限的表達。這使得⑶70成為有吸引力的癌症治 療靶標。但是，僅在少數癌症(例如腎細胞癌、結腸癌、某些類型的非霍奇金淋巴瘤和多發 性骨髓瘤)上鑑定到了⑶70表達。典型地，使用與天然⑶70結合的抗體，例如通過免疫組 織化學來檢測癌細胞上的CD70表達。由於缺乏針對CD70的足夠特異性的品質不良的抗體， 在被固定的患者樣品上檢測⑶70表達已被證實為是有問題的。具體地，交叉反應性和背景 染色幹擾了在被固定的樣品中CD70的檢測。本發明解決了該問題和其它需求。

發明內容
本發明提供了使用針對CD70的抗體對卵巢癌、胰腺癌和其它癌症進行診斷、預 後、預防和治療以及監測治療的方法。本發明還提供了對肺癌、頭頸癌(喉或咽)、黑素瘤、 成膠質細胞瘤、多發性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(例如濾泡性淋巴瘤)、腎細 胞癌(包括透明細胞和乳突腎細胞癌)、結直腸癌和膀胱癌進行診斷、預後、預防和治療以 及監測治療的方法。在一個方面，本發明提供了相對與天然CD70的結合而言與變性的CD70特異性 結合的抗體。在一些實施方式中，相對與天然CD70的結合而言，抗體與被固定的、卵巢 SK-0V-3或胰腺PANC-I癌細胞系上的變性的CD70特異性結合。抗體可以是單克隆抗體，例 如嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。優選地，抗體特異結合經福馬林固定的石蠟包埋的細 胞或組織上的變性的⑶70，所述結合具有與抗體SG-21. ICl (以分配的保藏號PTA-8733保 藏於ATCC的雜交瘤產生的)或抗體SG-21. 5D12 (以分配的保藏號PTA-8734保藏於ATCC 的雜交瘤產生的)相同或更好的特異性。具體地，抗體的非特異性交叉反應性小於抗體 SG-21. ICl或抗體SG-21. 5D12的非特異性交叉反應性。在一些實施方式中，該抗體可與抗 體SG-21. ICl或與抗體SG-21. 5D12競爭特異結合變性的CD70。
在另一方面，本發明提供了診斷試劑盒，所述試劑盒包含相對於與天然CD70的結 合而言與變性的CD70特異性結合的抗體。在一個相關方面，本發明提供了檢測患者組織樣 品中CD70表達的方法。該組織樣品可以來自患者的胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺、腎、腦、結 腸、血或皮膚。該組織被固定，並且CD70蛋白被變性。將被固定的組織樣品與相對於天然 CD70而言與變性的CD70特異性結合的抗體相接觸，檢測抗體與被固定的組織樣品的結合， 以確定樣品中是否有CD70表達。被固定的組織樣品上CD70的表達表示患者可能患有表達 ⑶70的癌症。在一些實施方式中，用福馬林固定樣品，並將其包埋於石蠟中。在另一方面，本發明提供了對具有胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺或皮膚的癌症的患 者進行診斷、預後、確定治療方案或監測治療的方法。所述方法包括測定來自患者的胰腺、 卵巢、肺、喉、咽、乳腺或皮膚的樣品細胞中CD70的表達，其中，可檢測到的CD70表達的存在 用於患者的診斷、預後、確定治療方案或監測治療中。樣品可以是經福馬林固定的石蠟包 埋的樣品。所述方法還可包括如果測定步驟表明可檢測到的CD70水平，那麼向患者施用 ⑶70抗體或⑶70抗體藥物綴合物的有效劑量方案(regimen)。在另一方面，本發明提供了治療CD70陽性癌症的方法。所述方法包括向患有具有 CD70的可檢測表達的胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺或皮膚的癌症的患者施用CD70的結合試 劑的有效劑量方案，其中，所述結合試劑是抗體、抗體衍生物或抗體藥物綴合物。抗體可具 有效應功能。患者可以之前經歷過通過手術、放療和/或用與CD70無關的試劑進行的化療 所進行的治療，但所述治療沒有誘導癌症減輕。在一些實施方式中，抗體是嵌合抗體、人源 化抗體或人抗體，例如單克隆抗體1F6或2F2的嵌合或人源化形式。抗體藥物綴合物可包 括細胞毒性劑，例如抗微管蛋白劑、DNA小溝結合劑或DNA小溝烷基化劑。抗體藥物綴合物 中的抗體可經由接頭(例如，在細胞內條件下可被切割的接頭)與細胞毒性劑或細胞抑制 劑綴合。在另一方面，提供了組合診斷性和藥物試劑盒，其包含與變性的CD70特異性結合 的用於診斷的抗體，以及與天然CD70的細胞外結構域特異性結合的用於治療的抗體。將參照下文中對示例性實施方式的詳細描述，結合附圖、圖和表，最好地理解本發 明的多個方面。附圖簡述

圖1顯示了蛋白質提取物的蛋白質印跡，其中使用抗體SG-21. ICl和SG_21. 5D12 檢測來自786-0、⑶70經轉染細胞和未經轉染細胞的蛋白提取物中的變性 CD70。圖2顯示了經福馬林固定的石蠟包埋的(FFPE)胰腺細胞系PANC-I上⑶70蛋 白的表達，其中使用SG21. ICl抗體。圖3顯示了在卵巢細胞系0vcar-3、SK-0V-3, Ca_0v_3和T0V-21G中CD70蛋白的 表達，其中使用SG21. ICl抗體。圖4顯示了胰腺腫瘤樣品中的⑶70蛋白表達，這是通過抗體SG-21. ICl或 SG-21. 5D12相對於對照mlgG檢測的。圖5顯示了正常胰腺細胞和胰腺腫瘤細胞上的⑶70蛋白表達，這是使用色素原 Fast Red(較深色)通過SG-21. ICl抗體檢測的。圖6顯示了對胰腺癌細胞中⑶70蛋白表達的評估。χ軸表示⑶70染色強度，y軸表示⑶70陽性的面積百分比。圖7顯示了對卵巢腫瘤中⑶70蛋白表達的評估。χ軸表示⑶70染色強度，y軸表 示⑶70陽性的面積百分比。圖8顯示了對多種人源化1F6抗體藥物綴合物針對卵巢癌細胞系SK0V-3的體外 細胞毒性活性的評估。圖9A-C顯示了對人源化1F6抗體藥物綴合物在下述細胞系上的體外細胞毒性活 性的評估(A)經⑶70轉染的胰腺細胞系HPAFII ； (B)經⑶70轉染的PANC-I胰腺細胞系； 和(C)經CD70轉染的MiaPaCa-2細胞系。圖10顯示了對人源化1F6抗體藥物綴合物在裸鼠中經Cd70轉染的MiaPaCa胰腺 癌腫瘤上的體內效力的評估。定義除非另有指明，本文中使用的下述術語和短語旨在具有下述含義。術語「抗體」指(a)免疫球蛋白多肽和免疫球蛋白多肽的免疫活性部分，即，免 疫球蛋白家族的多肽或其含有與特異性抗原(例如CD70)免疫特異性結合的抗原結合位 點的片段，或(b)此類免疫球蛋白多肽或片段的保守取代衍生物，其與抗原(例如CD70) 免疫特異性結合。抗體被一般性描述於例如Harlow & Lane，Antibodies =A Laboratory Manual (ColdSpring Harbor Laboratory Press, 1988)中。除非上下文另有明顯指示，提到 抗體還包括抗體衍生物或藥物綴合物，將在下文中對其進行更詳細地描述。「抗體衍生物」表示經異源分子共價連接(例如通過異源多肽的連接)來修飾或通 過正常情況下不與抗體相關的糖基化、去糖基化、乙醯化或磷酸化等來修飾的如上文定義 的抗體。術語「單克隆抗體」指源於單個細胞克隆(包括任何真核或原核細胞克隆或噬菌 體克隆)並且並非其生產方法的抗體。因此，術語「單克隆抗體」不限於通過雜交瘤技術生 產的抗體。「抗原」是與抗體特異性結合的實體。術語「抑制」或「對......的抑制」表示降低了可測量的量，或者完全阻止。術語「試劑」表示元素、化合物或分子實體，包括例如藥物性、治療性或藥理性化合 物。試劑可以是天然的或合成的或其組合。「治療劑」是單獨或與另外的試劑(例如，前藥 轉化酶組合前藥)組合對癌細胞發揮治療性(例如有益的)效果的試劑。典型地，可用於 本文所述的方法和組合物的治療劑是施加細胞毒性或細胞抑制性效果的那些。在提到試劑對細胞的效果時，「細胞毒性效果」表示殺死細胞。「細胞抑制性效果」表示對細胞增殖的抑制。「細胞毒性劑」指對細胞具有細胞毒性或細胞抑制性效果由此分別減少 (depleting)或抑制細胞群體中細胞生長的試劑。在⑶70抗體對表達⑶70的細胞的作用的上下文中，術語「減少」表示表達⑶70的 細胞的數目減少或消失。在將用於根據本文所述的方法中的抗CD70抗體或其衍生物的上下文中，術語「功 能性」表示抗體或其衍生物(1)能與CD70結合，和/或( 單獨或與細胞毒性劑綴合時， 減少或抑制表達CD70的細胞的增殖。
術語「預防」指在表達CD70的癌症的臨床或診斷症狀發作之前向受試者施用抗 CD70抗體-藥物綴合物(ADC)或ADC衍生物(例如向具有患胰腺癌或卵巢癌的高風險傾 向的個體施用)，以(a)阻斷表達CD70的癌症或其一種或多種臨床或診斷症狀的出現或發 作，(b)抑制表達CD70的癌症的發作嚴重性，或者(c)減少表達CD70的癌症的發作的可能性。術語「治療」表示通過在表達CD70的癌症的臨床或診斷症狀發作之後在任何臨 床階段向受試者施用抗CD70抗體、抗體藥物綴合物或ADC衍生物來減慢、停止或逆轉患者 中表達CD70的癌症的進程，如通過疾病的臨床或診斷症狀的減少或消失來證實。治療可包 括例如減少症狀的嚴重性、症狀的量或復發頻率。術語「可藥用」表示聯邦或州政府管理機構許可的或美國藥典或其它公認藥典中 列出的用於動物的(更特別地，用於人類的)。術語「藥物相容」成分表示與CD70抗體一起 施用的可藥用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或載體。在施用藥物試劑的上下文中，術語「有效量」表示足以在患者中抑制表達⑶70的 胰腺癌或卵巢癌的一種或多種臨床或診斷症狀的出現或減輕所述症狀的試劑的量。根據本 文所述的方法，在「有效劑量方案」中施用試劑的有效量。術語「有效劑量方案」是足以實 現對表達CD70的癌症的治療的試劑的量和給藥頻率的組合。術語「患者」包括接受診斷、預防或治療性治療的人和其它哺乳動物受試者。縮寫「AFP」指二甲基纈氨酸-纈氨酸-dolaisoleuine-dolaproine-苯丙氨酸-對 苯二胺。縮寫「MMAE」 是單甲基 auristatin E。縮寫「AEB」表示通過用auristatin E與對乙醯苯甲酸反應產生的酯。縮寫「AEVB」表示通過用auristatin E與苯甲醯戊酸反應產生的酯。"MMAF" ^^ dovaline- ^MM -dolaisoleunine-dolaproine- ￥MM@I。縮寫「fk」和「phe-lys」表示二肽苯丙氨酸_賴氨酸。縮寫「VC」和「val-cit」表示二肽纈氨酸_瓜氨酸。治療劑典型地可基本不含不想要的汙染物。這意味著試劑典型地至少為大約50% w/w(重量/重量)純度，以及基本上不含幹擾性蛋白質和汙染物。有時試劑至少為大約 80% w/w純，更優選至少90或大約95% w/w純度。但是，使用常規的蛋白純化技術，也可獲 得至少99%純度w/w的同質肽。發明詳述I. 一般性本發明提供了使用針對CD70的抗體對卵巢癌和胰腺癌進行診斷、預後、預防和治 療以及監測治療的方法。本發明還提供了對肺癌、頭頸癌(喉或咽)、黑素瘤、成膠質細胞 瘤、多發性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(例如濾泡性淋巴瘤)、腎細胞癌(包括 透明細胞和乳突腎細胞癌)、結直腸癌和膀胱癌進行診斷、預後、預防和治療以及監測治療 的方法。所述方法部分取決於實施例中示出的結果，其顯示CD70在某些癌症中以升高的水 平表達。使用特異性結合變性的CD70的抗體，在來自卵巢和胰腺癌組織的經福馬林固定 的石蠟包埋的(FFPE)樣品中檢測到升高的表達。此外，還使用針對變性的CD70細胞外結 構域的抗體，在來自其它癌症組織的經福馬林固定的石蠟包埋的(FFPE)樣品中檢測到升高的⑶70表達。雖然本發明的實施不依賴於對機制的理解，但我們相信，在特別是卵巢和胰腺組 織以及一般而言其它癌症中的FFPE樣品中成功檢測到CD70是因為使用了相對於天然CD70 而言優先結合這些樣品中變性的CD70的抗體。雖然在胰腺和卵巢癌中可檢測到的CD70的 頻率和/或其水平沒有CD70此前已關聯的一些其它癌性組織中那麼高，但相對於正常組 織而言，它們對癌性組織仍然是非常特異的。因此，在具有其中可檢測到CD70的卵巢癌或 胰腺癌的患者中，CD70可作為特別有用的靶標，用於將毒性選擇性導向癌細胞。類似地， 在具有其它癌症(例如，肺癌、頭頸癌(喉或咽)、黑素瘤、成膠質細胞瘤、多發性骨髓瘤、霍 奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(例如濾泡性淋巴瘤)、腎細胞癌(包括透明細胞和乳突腎細 胞癌)、結直腸癌和膀胱癌)的患者中，本發明提供了在來自此類患者的經固定樣品中檢測 ⑶70表達的易行方法。II.針對CD70的抗體下述說明首先考慮可應用於檢測卵巢和胰腺癌中的CD70以及對其加以治療的針 對CD70的抗體的性質，然後關注與用於各應用的抗體的優選性質。A.針對⑶70的抗體的一般性描述抗Cd70抗體包括單克隆、嵌合(具有人恆定區和小鼠可變區)、人源化、貼面 (veneered)或人抗體；單鏈抗體等等。免疫球蛋白分子可以是任何類型或類別(例如IgG、 IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)的或亞類(例如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)的。抗CD70抗體可以是結合抗原的抗體片段，例如Fab，F(ab' ),F(ab' )2，Fd鏈，單 鏈Fv (scFv)，單鏈抗體，二硫鍵連接的Fv (sdFv)，包含\或Vh結構域的片段，包括納米抗體 或來自駱駝、美洲駝(llama)等的片段，或Fab表達文庫產生的片段，或上文所述的任何抗 體的CD70結合片段。結合抗原的抗體片段(包括單鏈抗體)可包含單獨的可變區或與下 述全部或部分組合的可變區鉸鏈區、CH1、CH2、CH3和CL結構域。此外，結合抗原的片段還 可包含可變區與鉸鏈區、CH1、CH2、CH3和CL結構域的任何組合。典型地，抗體是人、嚙齒類 (例如小鼠和大鼠)、驢、綿羊、兔、山羊、豚鼠、駝類(camelid)、馬或雞的抗體。抗體可以是單特異性、雙特異性、三特異性或更多特異性的。多特異性抗體可 以是對CD70不同的表位特異的，或者可以對CD70以及異源蛋白兩者均特異(見例如WO 93/17715 ；WO 92/08802 ；WO 91/00360 ；W092/05793；Tutt et al.，1991，J. Immunol. 147 60-69 ；美國專利號 4，474，893 ；4，714，681 ；4，925，648 ；5，573，920 和 5，601，819 ；Kostelny et al.，1992，J. Immunol. 148 :1547-1553.)。可用於實施本文所述的方法的多特異性抗體 (包括雙特異性和三特異性抗體)是與CD70以及第二細胞表面受體或受體複合物(例如， 免疫球蛋白基因超家族成員、TNF受體超家族成員、整聯蛋白、細胞因子受體、趨化因子受 體、主要組織相容性蛋白、凝集素(C型、S型或I型)或補體控制蛋白)二者均免疫特異性 結合的抗體。還可按照它們與CD70 的結合親和力(1(Γ7Μ、5χ1(Γ8Μ、1(Γ8Μ、5Χ1(Γ9Μ、1(Γ9Μ、5Χ10,Μ、 10^ 、5110力]\1、10^]\1、511042]\1、1042]\1、5110力]\1、10^]\1、511044]\1、1044]\1、51104呦或 I(T15M)來 描述抗⑶70抗體。抗CD70抗體可以是嵌合抗體。嵌合抗體是這樣的分子，其中抗體的不同部分源 於不同的動物物種，例如，具有源於鼠單克隆抗體的可變區和人免疫球蛋白恆定區的抗體。用於產生嵌合抗體的方法是本領域已知的(見例如，Morrison, Science, 1985, 229 :1202 ； Oi et al.，1986，BioTechniques4 :214 ；Gillies et al.，1989，J. Immunol. Methods 125 191-202 ；美國專利號 5，807，715 ；4，816，567 和 4，816，397)。抗⑶70抗體還可以是人源化抗體，包括貼面抗體。人源化抗體是這樣的抗體分 子，其結合想要的抗原，並且具有來自非人物種的一個或多個互補決定區(CDRs)和來自人 免疫球蛋白分子的構架和恆定區。通常，人構架區中的構架殘基將被來自CDR供體抗體的 相應殘基取代，以改變，或優選以改善抗原結合。通過本領域公知的方法來鑑定這些構架 取代，例如，通過構建⑶R和構架殘基的相互作用模型來鑑定對於抗原結合來說重要的構 架殘基，以及通過序列比較以鑑定出具體位置上的不尋常的構架殘基(見例如Queen et al.，美國專利號 5，585，089 ；Riecbmann et al.，1988，Nature 332 :323)。可使用本領域 已知的多種技術來對抗體進行人源化，例如⑶R移植(EP 0 239 400 ；WO 91/09967 ；美國 專利號 5，225，539 ;5，530，101 和 5，585，089)、貼面或重塑表面(EP 0 592 106 ；EP 0 519 596 ；Padlan, Molecular Immunology,1991,28(4/5) :489-498 ；Studnicka et al.，1994， Protein Engineering 7(6) :805-814 ；Roguska et al.，1994，PNAS91 :969-973)和鏈改組 (美國專利號5，565，332)(所有這些參考文獻都通過引用併入本文)。抗⑶70抗體還可以是人抗體。可通過本領域已知的多種方法來製造人抗體，例如 噬菌體展示方法(見上文)，其中使用源於人免疫球蛋白序列的抗體文庫。還見例如，美國 專利號 4，444，887 和 4，716，111 ；WO 98/46645, WO 98/50433，WO 98/24893，WO 98/16654， WO 96/34096, WO 96/33735和WO 91/10741。此外，可使用被稱為「引導選擇」的技術，來 產生識別選擇的表位的人抗體，其中，使用選擇的非人單克隆抗體，例如，小鼠抗體，來引導 識別相同表位的完全人抗體的選擇(見例如Jespers et al.，1994，Biotechnology 12: 899-90 。還可使用表達人免疫球蛋白基因的轉基因小鼠來產生人抗體。可使用雜交瘤技 術，從經免疫的轉基因小鼠獲得針對抗原的單克隆抗體。關於產生人抗體的技術的綜述， 見 Lonberg and Huszar，1995，Int. Rev. Immunol. 13 65-930 關於產生人抗體和人單克隆 抗體的該技術以及用於產生此類抗體的方案的詳細討論，見例如PCT公開W098/24893 ；WO 92/01047 ；WO 96/34096 ；WO 96/33735 ；歐洲專利號 0 598，877 和美國專利號 5，413，923 ； 5，625，126 ；5，633，425 ；5，569，825 ；5，661，016 ；5，545，806 ；5，814，318 ；5，885，793 ； 5，916，771 和 5，939，598。可通過已知方法測定抗體與CD70的特異性結合，所述方法例如，競爭性和非競爭 性免疫測定系統，使用諸如蛋白質印跡、放射免疫測定、ELISA(酶聯免疫吸附測定)、「夾層」 免疫測定、免疫沉澱測定、沉澱素反應、凝膠擴散沉澱素反應、免疫擴散測定、凝集測定、補 體固定測定、免疫放射分析測定、螢光免疫測定、蛋白A免疫測定(見例如Ausubel et al.， eds. , Short Protocols in Molecular Biology (John Wiley & Sons, Inc. , NewYork,4th ed. 1999) ；Harlow & Lane,Using Antibodies :A LaboratoryManual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. ,1999.))。此外，可通過競爭性結合測定法來測定抗體與⑶70的結合親和性以及抗體⑶70 相互作用的解離速率(off-rate)。競爭性結合測定的一個例子是放射免疫測定，包括在 存在增加量的未經標記的⑶70的情況下，將經標記的⑶70 (例如3H或125I)與目的抗體一 起孵育，並且檢測與經標記的⑶70結合的抗體。然後可通過katchard作圖分析，從數據來確定抗體對CD70的親和性和結合解離速率。還可使用放射免疫測定來測定與第二抗體 的競爭。在這種情況下，在存在增加量的未經標記的第二抗體的情況下，將CD70與綴合到 經標記的化合物(例如M或125I)上的目的抗體一起孵育。或者，可通過表面等離振子共振 來測定抗體與CD70的結合親和性以及抗體-CD70相互作用的結合和解離速率。可根據抗體類型，通過標準方法，從CD70蛋白的含有抗原的片段來製備抗 體(見例如，Kohler，et al, Nature, 256 :495, (1975) ；Harlow & Lane，Antibodies, A Laboratory Manual (C. S. H. P. , NY, 1988) ；Queen et al. , Proc. Natl. Acad. Sci USA 86 10029-10033(1989)和 WO 90/07861 ；Dower et al. , WO 91/17271 和 McCafferty et al.， WO 92/01047(每份文獻都為了所有目的通過引用併入本文))。例如，可使用多種技術來 製備單克隆抗體，例如，使用雜交瘤、重組以及噬菌體展示技術或者它們的組合。雜交瘤技 術在例如上文的 Harlow et al.禾口 Hammerling, et al. , In MonoclonalAntibodies and T-Cell Hybridomas, pp. 563-681 (Elsevier, N. Y.，1981)中有一般性討論。可用於製造抗 CD70 抗體的噬菌體展示方法包括，例如 Briinnan et al. , 1995, J. Immunol. Methods 182 41-50 ；Ames et al. ,1995, J. Immunol. Methods 184 :177-186 ；Kettleborough et al., 1994，Eur.J. Immunol. 24 :952-958 ；Persic et al.，1997，Gene 187 :9-18 ；Burton et al.，1994，Advances in Immunology 57 :191-280 ；PCT 申請號 PCT/GB91/01 134 ；PCT 公 開 TO 90/02809 ；WO 91/10737；WO 92/01047；WO 92/18619 ；W093/11236 ；WO 95/15982 ； WO 95/20401 和美國專利號 5，698，426 ；5，223，409 ；5，403，484 ；5，580，717 ；5，427，908 ； 5，750，753 ；5，821，047 ；5，571，698 ；5，427，908 ；5，516，637 ；5，780，225 ；5，658，727 ； 5，733，743和5，969，108中公開的那些(這些文獻的公開內容都通過引用併入本文)。用於產生識別特定表位的抗體片段的技術也是本領域公知的。例如，可通過使 用木瓜蛋白酶(以產生Fab片段)或胃蛋白酶(以產生F(ab' )2片段)，對免疫球蛋 白分子進行蛋白水解切割，來產生Fab和F(ab' )2片段。F(ab' )2片段含有可變區、 輕鏈恆定區和重鏈的ChI結構域。還可使用例如WO 92/22324 ；Mullinax et al.，1992， BioTechniques 12(6) :864-869禾口 Sawai et al.，1995，AJRI 34 :26-34禾口Better et al.， 1988,Science240 :1041-1043 (這些文獻的公開內容都通過引用併入本文)中公開的方法， 使用重組產生!^atKFab'和F(ab' )2片段的技術。可用於生產單鏈Fvs和抗體的技術的例子包括美國專利號4，946，778和 5,258,498 ；Huston et al.，1991，Methods in Enzymology 203:46-88 ；Shuet al.，1993， Proc. Natl. Acad. Sci USA 90 :7995-7999 和 Skerra et al.，1988，Science 240:1038-1040 中描述的那些。還可通過重組表達技術來生產可用於本發明方法中的抗⑶70抗體及其衍生 物。與⑶70結合和/或減少或抑制表達⑶70的細胞增殖的抗體或其衍生物的重組表達 需要構建含有編碼所述抗體或其衍生物的核酸的表達載體。一旦獲得了編碼此類蛋白的 核酸，即可使用本領域公知的技術，通過重組DNA技術，來生產用於生產蛋白質分子的載 體。可使用標準技術，例如 Sambrook and Russell, Molecular Cloning :A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. , 3rd ed., 2001) ；Sambrook et al. ,Molecular Cloning :A Laboratory Manual(ColdSpring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. , 2nd ed. ,1989) ；Ausubel et al. , ShortProtocols in Molecular Biology (John Wiley &Sons,New York, 4th ed. , 1999)禾口Glick & Pasternak, MolecularBiotechnology :Principles and Applications of Recombinant DNA (ASMPress, Washington, D. C, 2nd ed.，1998)中描述的那些技術，用於重組核酸方法、核 酸合成、細胞培養、轉基因摻入和重組蛋白質表達。例如，為重組表達抗⑶70抗體，表達載體可編碼與啟動子有效連接的其重鏈或輕 鏈或重鏈或輕鏈可變區。表達載體可包括，例如，編碼抗體分子的恆定區的核苷酸序列(見 例如WO 86/05807 ；WO 89/01036和美國專利號5，122，464)，並且抗體的可變結構域可被克 隆進此類載體，用於表達整條重鏈或輕鏈。通過已知技術將表達載體轉入宿主細胞，然後培 養經轉染的細胞以產生抗CD70抗體。典型地，為表達雙鏈抗體，編碼重鏈和輕鏈的載體可 在宿主細胞中共表達，以表達整個免疫球蛋白分子。可利用多種原核和真核宿主表達載體系統來表達抗⑶70抗體或其衍生物。典型 地，真核細胞(特別是對於整個重組的抗CD70抗體分子而言)被用於表達重組蛋白。例如， 與載體(例如來自人巨細胞病毒的主要中間早期基因啟動子元件或中國倉鼠卵巢EF-I α 啟動子)結合的哺乳動物細胞，例如，中國倉鼠卵巢細胞(CHO)(例如DG44或CH0-S)，是生 產抗CD70抗體及其衍生物的有效表達系統(見例如!decking et al.，1986，Gene45 :101 ； Cockett et al. , 1990, Bio/Technology 8 :2 ;Allison，美國專利號 5，888，809)。其它宿主表達系統包括細菌細胞中的基於質粒的表達系統(見例如Ruther et al.,1983,EMBO 1,2 :1791 ；Inouye & Inouye，1985，Nucleic AcidsRes. 13 :3101-3109 ；Van Heeke & Schuster, 1989, J. Biol. Chem. 24 :5503-5509)；昆蟲表達系統，例如，在草地貪夜 蛾(Spodopterafrugiperda)細胞中使用苜蓿銀紋夜蛾(Autographa californica)核型 多角體病毒(AcNPV)表達載體；以及哺乳動物中的基於病毒的表達系統，例如，基於腺病毒 的系統(見例如 Logan & Shenk，1984，Proc. Natl. Acad. SciUSA 81 :355-359 ；Bittner et al.，1987，Methods in Enzymo1. 153 :51-544)。B.用於檢測⑶70的抗體對用於檢測方法中的針對CD70的抗體的選擇取決於是否通過需要檢測變性的 ⑶70或天然⑶70 (細胞上表達的)的技術來檢測⑶70。在其中靶標⑶70是變性的方法 (例如蛋白質印跡或免疫組織化學檢測)中，優選使用與變性形式的CD70(例如，人或獼猴 CD70)結合的抗體。典型地，較之天然形式(即，自然界中存在的CD70，或者當在沒有暴露 於變性條件(例如，溶劑、去汙劑或升高的溫度(例如超過50°C))下分離的)而言，此類抗 體優先結合變性的形式。可使用變性的CD70免疫原(例如人或獼猴CD70)或其來自細胞 外部分的免疫原性片段，產生此類抗體。可通過用SDS(例如0. 5% )處理免疫原以及任選 地加熱至80 °C來實現變性。還可通過簡單地從用於純化免疫原的SDS凝膠洗脫免疫原來實 現變性。或者，可使用來自CD70的細胞外結構域的合成肽作為免疫原，來生產優先結合變 性CD70的抗體。一些此類肽太短，以至於無法保留天然肽的相應區段的構象。合成肽可以 被變性，但是通常無須變性即可用作為免疫原。針對相對天然⑶70而言優先結合變性的⑶70，來篩選通過這些或其它方法產生 的抗體。可通過相同測定法或通過不同測定法來測定變性的和天然的CD70抗原。特別地， 如果使用後一種方法，可使用已知結合天然CD70的對照抗體，例如下文所述的治療性抗體 (例如，人源化1F6或2F2 ；見美國專利申請公開號2006-0233794和2006—0083736以及國際專利公開WO 06/113909)來進行篩選。如果抗體較之對照抗體的比例顯示出相對天然 CD70來說與變性CD70結合的更高比例的話，該抗體優先與變性CD70結合。用於在胰腺和卵巢癌中檢測CD70的優選抗體是與用福馬林固定並且包埋於石 蠟中的(FFPE)胰腺癌或卵巢癌樣品上的CD70特異性結合的那些抗體。較之未受處理的胰 腺癌或卵巢癌細胞上的天然⑶70抗原而言，這些抗體優先識別被FFPE處理暴露的⑶70上 的表位。此類抗體被稱為FFPE特異性抗CD70抗體。此類抗體缺乏與天然CD70的可檢測到 的特異性結合。優選地，抗體的特異性結合與抗體SG-21. ICl或SG-21. 5D12相同或更好。 特別地，通過蛋白質印跡或對固定細胞的染色進行測定時，在特異性結合條件下，所述抗體 較之抗體SG-21. ICl或SG-21. 5D12而言優選具有相同或更低的可檢測到的與其它細胞蛋 白的交叉反應性。用於在其它癌症(如下文實施例中所述)中檢測CD70的優選抗體是與用福爾馬 林固定並且包埋於石蠟中的(FFPE)這些癌症樣品中的CD70特異性結合的那些抗體。較 之未受處理的胰腺癌或卵巢癌細胞上的天然⑶70抗原而言，這些抗體優先識別被FFPE處 理暴露的⑶70上的表位。此類抗體缺乏與天然⑶70的可檢測到的特異性結合。優選地， 抗體的特異性結合與抗體SG-21. ICl或SG-21. 5D12相同或更好。特別地，通過蛋白質印跡 或對固定細胞的染色進行測定時，在特異性結合條件下，所述抗體較之抗體SG-21. ICl或 SG-21. 5D12而言優選具有相同或更低的可檢測到的與其它細胞蛋白的交叉反應性。一些示例性FFPE特異性抗CD70抗體是mAbs SG-21. ICl (也被稱為 SG-21. 1C1-B3)和 SG-21. 5D12. C3(也被稱為 SG-21. 5D12. C3)。其它一些優選的抗體與 SG-21. 1C1. B3或SG-21. 5D12. C3競爭與變性的CD70的特異性結合。其它一些優選的抗體 包含含有來自SG-21. 1C1. B3的重鏈的三個CDRs的重鏈和含有來自SG-21. 1C1. B3的輕鏈 的三個⑶Rs的輕鏈。其它一些優選的抗體包含含有來自SG-21. 5D12. C3的重鏈的三個 ⑶Rs的重鏈和含有來自SG-21. 5D12. C3的輕鏈的三個⑶Rs的輕鏈。其它一些優選的抗體 包含與SG-21. 1C1. B3的成熟重鏈可變區具有至少90%序列同一性的成熟重鏈可變區和 與SG-21. 1C1. B3的成熟輕鏈可變區具有至少90%序列同一性的成熟輕鏈可變區。其它一 些優選的抗體包含與SG-21. 5D12. C3的成熟重鏈可變區具有至少90%序列同一性的成熟 重鏈可變區和與SG-21. 5D12. C3的成熟輕鏈可變區具有至少90%序列同一性的成熟輕鏈 可變區。C.用於治療性應用的針對⑶70的抗體用於治療性應用的抗體與胰腺癌或卵巢癌細胞上天然CD70抗原的細胞外結構域 特異性結合。用於治療性應用的抗體還可與肺癌、頭頸癌(喉或咽)、黑素瘤、成膠質細胞 瘤、多發性骨髓瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤(例如濾泡性淋巴瘤)、腎細胞癌(包括 透明細胞和乳突腎細胞癌)、結直腸癌和膀胱癌上的天然CD70抗原的細胞外結構域特異性 結合。對於CD70與其配體CD27的結合而言，抗體可以是激動性的、非激動性的或拮抗性的。 雖然本發明的實施並不依賴於對機制的理解，但我們相信，抗體可由於與CD70結合併且內 化於細胞中，或者通過與CD70並且在細胞之外積累，而發揮細胞毒性或細胞抑制效果。在 這兩種事件的任一種中，可通過將抗體與細胞毒性或細胞抑制劑綴合來促進細胞毒性或細 胞抑制效果。與CD70結合的抗體從細胞之外發揮的細胞毒性或細胞抑制性效果可被抗體 恆定(效應)功能額外或替代性促進。抗體恆定結構域介導多種Ig效應功能，例如抗體參與抗體依賴性細胞毒性(ADCC)、補體依賴性細胞毒性(CDC)和/或抗體依賴性細胞吞噬 (ADCP)。任選地，可通過W02006/113909中描述的多種方法，增大⑶70結合試劑的效應功 能。還可通過阻斷⑶70與其配體⑶27的相互作用，來促進抗體發揮的細胞毒性或細胞抑 制性效果。優選的抗CD70抗體是mAb 1F6或2F2或其嵌合或人源化形式，如WO 2004/073656 和公開的美國申請號2006-0233794中和W02006/113909中所述。優選的重鏈成熟可變區 具有SEQ ID NO 1的序列，優選的輕鏈成熟可變區具有SEQ ID NO 2的序列。其它有用的抗體包含分別與SEQ ID NO :1和2具有至少90%以及優選至少95% 或99%序列同一性的成熟重鏈和輕鏈可變區。W02006/113909提供了關於需要哪些可變區 構架殘基用於結合的教導。其它有用的抗CD70抗體或其衍生物可競爭性抑制mAb 1F6或 2F2與CD70的結合，如通過免疫測定法所測定的。競爭性抑制表示，當抗體以至少兩倍以及 優選五倍過量存在時，其將1F6或2F2與⑶70的結合抑制至少50%，更典型地，至少60%， 還更典型地，至少70%，最典型地，至少75%，或者，抗體將1F6或2F2與⑶70的結合競爭 性抑制至少80 %，至少85 %，至少90 %或至少95 %。其它一些優選抗體包含含有來自1F6的重鏈可變區的三個⑶Rs的重鏈和含有來 自1F6的輕鏈可變區的三個⑶Rs的輕鏈。其它一些優選的抗體包含與2F2的成熟重鏈 可變區具有至少90%序列同一性的成熟重鏈可變區和與2F2的成熟輕鏈可變區具有至少 90%序列同一性的成熟輕鏈可變區。其它一些優選的抗體包含與1F6的成熟重鏈可變區 具有至少90、95或99%序列同一性的成熟重鏈可變區和與1F6的成熟輕鏈可變區具有至 少90、95或99%序列同一性的成熟輕鏈可變區。其它一些優選的抗體包含與2F2的成熟 重鏈可變區(SEQ ID NO 3)具有至少90、95或99%序列同一性的成熟重鏈可變區和與2F2 的成熟輕鏈可變區(SEQ ID NO 4)具有至少90、95或99%序列同一性的成熟輕鏈可變區。例如美國專利申請公開號2005-0191299和國際公開號WO 07/038637中描述了大 量其它針對CD70的抗體。可按照下文所述，針對其單獨或作為衍生物和/或綴合物的適合 度，來篩選與CD70的細胞外結構域結合的其它抗體。篩選可使用經標記的抗體來評估向表 達CD70的細胞中的內化。篩選還可評估細胞毒性。還可在胰腺癌或卵巢癌或其它癌症的 動物模型上進行其它篩選。例如，可使用SK0V-3卵巢癌細胞系、AN3CA子宮內膜癌細胞系、 T0V21G卵巢癌細胞。此外，可使用PANCl和MiaPaca2胰腺細胞系。抗CD70抗體的衍生物還可用於實施本發明的方法。典型的修飾包括，例如，糖基 化、去糖基化、乙醯化、peg化、磷酸化、醯胺化、通過已知的保護基團進行的衍生化、蛋白水 解切割、與細胞配體或其它蛋白的連接等等。可進行多種化學修飾中的任一種，例如，通過 特異性化學切割、乙醯化、甲醯化或衣黴素存在下的代謝合成。此外，衍生物可含有一個或 多個非典型胺基酸。抗體衍生物可以是包含一個或多個單體的多聚體，例如二聚體，其中每個單體包 括(i)抗CD70抗體的抗原結合區域或源於其的多肽區域(例如通過一個或多個胺基酸的 保守取代)和(ii)多聚化(例如二聚化)多肽區域，使得抗體衍生物形成與CD70特異性 結合的多聚體(例如同源二聚體)。典型地，抗CD70抗體的抗原結合區域或者源於其的多 肽區域與異源蛋白重組或化學融合，其中所述異源蛋白包含二聚化或多聚化結構域。在為 了治療或預防表達CD70的癌症的目的將抗體衍生物施用給受試者之前，令衍生物經歷允許形成同源二聚體或異源二聚體的條件。異源二聚體可包含相同的二聚化結構域但是包含 不同的CD70抗原結合區域，包含相同的CD70抗原結合區域但是不同的二聚化結構域，或者 包含不同的CD70抗原結合區域和二聚化結構域。可通過將抗⑶70抗體與第二抗體綴合來形成抗⑶70抗體衍生物(「抗體異源綴 合物」)(見例如美國專利號4，676，980)。可用於實施本發明的方法的異源綴合物包含與 CD70結合的抗體(例如具有單克隆抗體1F6或2F2的CDRs和/或重鏈的抗體)以及與表 面受體或受體複合物(例如免疫球蛋白基因超家族成員、TNF受體超家族成員、整聯蛋白、 細胞因子受體、趨化因子受體、主要組織相容性蛋白、凝集素(C型、S型或I型)或補體控 制蛋白)結合的抗體。針對CD70的抗體及其衍生物可與細胞毒性或細胞抑制性部分綴合，形成抗體藥 物綴合物(ADC)。特別適合與抗體或抗體衍生物綴合的部分是化學治療劑、前體藥物轉化 酶、放射性同位素或化合物或者毒素。例如，抗CD70抗體或其衍生物可與細胞毒性劑，例如 化學治療劑或毒素(例如，細胞抑制性或殺細胞性試劑，例如，相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白 A、假單胞菌外毒素或白喉毒素)綴合。抗CD70抗體或其衍生物可與前體藥物轉化酶綴合。可使用已知方法，將前體藥物 轉化酶與抗體或其衍生物重組融合，或者以化學方法綴合。示例性的前體藥物轉化酶是羧 肽酶G2、β -葡糖醛酸糖苷酶、青黴素-V-醯胺酶、青黴素-G-醯胺酶、β -內醯胺酶、β -葡 糖苷酶、硝基還原酶和羧肽酶Α。用於將治療劑與蛋白質(特別是與抗體)綴合的技術是公知的。(見例如， Arnon et al. , Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy(ReisfeIdet al. eds. , Alan R. Liss, Inc.,1985)中的"Monoclonal Antibodies ForImmunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy, 「 ；Hellstrom et al. , Controlled Drug Delivery(Robinson et al. eds. ,Marcel Dekker, Inc. , 2nded. 1987)中的"Antibodies For Drug Delivery,「； Thorpe,MonoclonalAntibodies' 84 :Biological And Clinical Applications(Pinchera et al. eds. , 1985)中的"Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy AReview「 ；Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy(Baldwin et al. eds. , Academic Press, 1985)中的"Analysis, Results, andFuture Prospective of the Therapeutic Use of Radiolabeled Antibody InCancer Therapy,「禾口 Thorpe et al.，1982，Immunol. Rev. 62 :119_58。還見例如 PCT 公開 WO 89/12624.)。治療劑可以以降低其活性的方式綴合，除非從抗體切除(例如通過水解、通過抗 體降解或通過切割試劑)。此類治療劑通過可切割的接頭(其對表達CD70的細胞的細胞內 環境中的切割敏感，但是對細胞外環境基本上不敏感)與抗體或其衍生物連接，使得當它 被表達CD70的癌細胞內化時綴合物被從抗體或其衍生物上切割下來(例如，在內體中，或 者，例如通過PH敏感性或蛋白酶敏感性，在溶酶體環境中或者在胞膜窖環境中)。典型地，ADC包含治療劑和抗⑶70抗體或其衍生物之間的接頭區域。如上文所提 到的，典型地，接頭在細胞內條件下可被切割，從而，在細胞內環境中，接頭的切割從抗體釋 放出治療劑(例如，在溶酶體或內體或胞膜窖內)。接頭可以是例如，被細胞內肽酶或蛋白 酶(包括溶酶體或內體的蛋白酶)切割的肽基接頭。典型地，肽基接頭長度為至少兩個氨 基酸或至少三個胺基酸。切割試劑可包括組織蛋白酶B和D和纖溶酶(見例如Dubowchikand Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123)。最典型的是可被表達 CD70 的細胞 中存在的酶切割的肽基接頭。例如，可使用可被硫醇依賴性蛋白酶——組織蛋白酶B(在癌 性組織中高水平表達的)切割的肽基接頭(例如，包含Phe-Leu或Gly-Phe-Leu-Gly肽的 接頭)。其它此類接頭描述於例如美國專利號6，214，345中。在一些特定的實施方式中， 可被細胞內蛋白酶切割的肽基接頭包含Val-Cit接頭或Wie-Lys 二肽(見例如美國專利 6，214，345，其描述了對具有Val-Cit接頭的阿黴素的合成)。使用細胞內蛋白水解釋放治 療劑的一個優點是所述試劑在綴合時通常被解毒，並且綴合物的血清穩定性通常很高。可切割的接頭可以是pH敏感的，S卩，對某些pH值下的水解敏感。典型地，pH敏 感的接頭是可在酸性條件下水解的。例如，可使用可在溶酶體中水解的酸不穩定接頭(例 如腙、縮氨基脲、縮氨基硫脲、順烏頭醯胺、原酸酯、縮醛、縮酮等等)(見例如美國專利號 5, 122, 368 ；5, 824, 805 ；5, 622, 929 ；Dubowchik and Walker,1999, Pharm. Therapeutics 83 :67-123 ；Neville et al.，1989，Biol. Chem. 264 14653-14661.)。此類接頭在中性 pH 條件下(例如血中)相對穩定，但是它們在低於PH 5.5或？!1 5.0(溶酶體的近似邱)下不 穩定。在某些實施方式中，可水解的接頭是硫醚接頭(例如通過醯基腙鍵與治療劑連接的 硫醚(見例如美國專利號5，622，929))。其它接頭可在還原條件下被切割(例如二硫化物接頭)。二硫化物接頭包括可使 用SATA (N-琥珀醯亞胺基-S-乙醯基硫代乙酸酯)、SPDP (N-琥珀醯亞胺基-3-(2-吡啶基 二硫代)丙酸酯)、SPDB (N-琥珀醯亞胺基-3- (2-吡啶基二硫代)丁酸酯)和SMPT (N-琥 珀醯亞胺基-氧基羰基-α -甲基-α - O-吡啶基-二硫代)甲苯)、SPDB和SMPT形成的 那些(見例如 Thorpe et al.，1987，Cancer Res. 47 :5924-5931 ；Wawrzynczak et al.，In Immunoconjugates :Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer(C. W. Vogel ed.，Oxford U. Press, 1987。還見美國專利號 4，880，935.)。接頭還可以是丙二酸酯接頭(Johnson et al.，1995，Anticancer Res. 15 1387-93)、馬來醯亞胺苯甲醯接頭(Lau et al.，1995，Bioorg-Med-Chem. 3 (10) 1299-1304)或 3，-N-醯胺類似物(Lau et al. , 1995, Bioorg-Med-Chem. 3 (10) :1305-12)。接頭還可以是不可切割的接頭，例如與藥物單元直接連接的馬來醯亞胺基-亞烷 基接頭或馬來醯亞胺-芳基接頭。活性藥物接頭通過抗體的降解而釋放。典型地，接頭對細胞外環境基本上不敏感，這意味著當ADC或ADC衍生物存在 於細胞外環境(例如血漿)中時，ADC樣品中接頭的不超過大約20%，典型地不超過大約 15%,更典型地不超過大約10%，進一步更典型地不超過大約5%，不超過大約3%或者不 超過大約被切割。可例如通過將(a)ADC或ADC衍生物(「ADC樣品」)和(b)等摩爾 量的未經綴合的抗體或治療劑(「對照樣品」)二者與血漿一起獨立孵育預定的時間(例如 2、4、8、16或M小時)，然後將ADC樣品中存在的未經綴合的抗體或治療劑與對照樣品中的 相比(例如通過高效液相色譜來測量)，來確定接頭是否對細胞外環境基本上不敏感。接頭還可促進細胞內化。當接頭與治療劑綴合時(即，在本文所述的ADC或ADC衍 生物的接頭-治療劑部分的環境中)，其可促進細胞內化。或者，當接頭與治療劑或抗CD70 抗體或其衍生物兩者均綴合時(即，在本文所述的ADC或ADC衍生物的環境中)，其可促進 細胞內化。WO 2004-010957中描述了多種可用於本發明組合物的接頭，其具有下述形式
權利要求
1.一種抗體，其相對與天然⑶70的結合而言與被固定的卵巢SK-0V-3或胰腺PANC-I 癌細胞系上變性的CD70特異性結合。
2.權利要求1的抗體，其是嵌合的或人源化抗體。
3.權利要求1的抗體，其以特異性結合結合經福馬林固定的石蠟包埋的細胞或組織 上的變性CD70，所述特異性結合與以指定的保藏號PTA-8733保藏於ATCC的雜交瘤產生的 抗體SG-21. ICl或以指定的保藏號PTA-8734保藏於ATCC的雜交瘤產生的抗體SG-21. 5D12 的相同或更好。
4.權利要求1的抗體，所述抗體與以指定的保藏號PTA-8733保藏於ATCC的雜交瘤 產生的抗體SG-21. ICl或以指定的保藏號PTA-8734保藏於ATCC的雜交瘤產生的抗體 SG-21. 5D12競爭特異性結合變性的CD70。
5.權利要求4的抗體，其是以指定的保藏號PTA-8733保藏於ATCC的雜交瘤產生的抗 體SG-21. ICl或以指定的保藏號PTA-8734保藏於ATCC的雜交瘤產生的抗體SG-21. 5D12。
6.權利要求4的抗體，其包含與抗體SG-21.ICl的重鏈可變區具有至少90%序列同一 性的重鏈可變區和與抗體SG-21. ICl的輕鏈可變區具有至少90%序列同一性的輕鏈可變 區。
7.權利要求4的抗體，其包含與抗體SG-21.5D12的重鏈可變區具有至少90%序列同 一性的重鏈可變區和與抗體SG-21. 5D12的輕鏈可變區具有至少90%序列同一性的輕鏈可變區。
8.權利要求4的抗體，其包含具有抗體SG-21.ICl的重鏈可變區的⑶Rs的胺基酸序列 的重鏈可變區互補決定區(CDRs)和具有抗體SG-21. ICl的輕鏈可變區的CDRs的胺基酸序 列的輕鏈可變區CDRs。
9.權利要求4的抗體，其包含具有抗體SG-21.5D12的重鏈可變區的⑶Rs的胺基酸序 列的重鏈可變區CDRs和具有抗體SG-21. 5D12的輕鏈可變區的CDRs的胺基酸序列的輕鏈 可變區⑶Rs。
10.診斷試劑盒，其包含權利要求1-9中任意一項的抗體和使用所述抗體輔助對胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺或 皮膚的癌症進行診斷、預後或監測的說明書。
11.在患者的組織樣品中檢測CD70表達的方法，所述方法包括從所述患者獲得胰腺、 卵巢、肺、喉、咽、乳腺或皮膚的組織樣品；固定所述組織樣品，並且對所述組織樣品中的⑶70進行變性；將被固定的組織樣品與權利要求1-9中任意一項的抗體接觸；並檢測所述抗體與所述被固定的組織樣品的結合，以確定CD70是否在所述樣品中表達；其中，所述被固定的組織樣品上CD70的表達表明所述患者可能患有表達CD70的癌症。
12.權利要求11的方法，還包括相對於對照組織樣品而言，基於CD70在所述樣品中的 表達診斷癌症患者。
13.權利要求11的方法，還包括相對於對照組織樣品而言，基於CD70的表達對所述患 者中癌症的存在進行預後。
14.權利要求11的方法，還包括確定所述患者的治療方案，其中CD70的可檢測到的表 達表明所述治療方案包括用CD70抗體或抗體藥物綴合物進行治療。
15.權利要求11的方法，其中所述樣品經福馬林固定並且包埋於石蠟中。
16.對具有胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺或皮膚的癌症的患者進行診斷、預後、確定治療 方案或監測治療的方法，所述方法包括測定在來自所述患者的胰腺、卵巢、肺、喉、咽、乳腺 或皮膚的樣品的細胞中CD70的表達，其中可檢測到的CD70表達的存在用於所述患者的診 斷、預後、確定治療方案或監測治療。
17.權利要求16的方法，其中測定在經福馬林固定的石蠟包埋的樣品中細胞上的 ⑶70表達。
18.權利要求16的方法，其中通過與針對編碼CD70的核酸的探針的雜交測定CD70表達。
19.權利要求16的方法，還包括如果所述測定步驟表明可檢測到的CD70水平，那麼 向所述患者施用CD70抗體或CD70抗體藥物綴合物的有效劑量方案。
20.權利要求19的方法，其中施用⑶70抗體。
21.權利要求19的方法，其中施用CD70抗體藥物綴合物。
22.權利要求16的方法，其中⑶70的表達作為所述樣品中表達可檢測到的⑶70的細 胞的百分比來測定。
23.權利要求16的方法，其中CD70的表達作為所述樣品中細胞的平均表達水平來測定。
24.治療CD70陽性癌症的方法，所述方法包括向具有CD70的可檢測表達的胰腺、卵巢、 肺、喉、咽、乳腺或皮膚的癌症的患者施用CD70結合試劑的有效劑量方案，其中所述結合試 劑是抗體、抗體衍生物或抗體藥物綴合物。
25.權利要求對的方法，其中所述結合試劑是具有效應功能的抗體。
26.權利要求對的方法，其中所述結合試劑是抗體藥物綴合物。
27.權利要求M的方法，其中所述患者已經歷過通過手術、放療和/或用與CD70無關 的試劑化療而沒有導致癌症減輕的治療。
28.權利要求M的方法，其中所述抗體是單克隆抗體1F6或2F2或其嵌合或人源化形 式。
29.權利要求M的方法，其中所述抗體是嵌合抗體、人源化抗體或人抗體。
30.權利要求沈的方法，其中所述抗體藥物綴合物包含選自由抗微管蛋白試劑、DNA小 溝結合試劑和DNA小溝烷基化試劑組成的組的細胞毒性劑。
31.權利要求沈的方法，其中所述抗體藥物綴合物包含選自由auristatins、烯二炔 類、lexitropsin、多卡米星、紫杉烷、嘌呤黴素、多拉司他汀、美登木素生物鹼和長春花生物 鹼組成的組的細胞毒性劑。
32.權利要求30的方法，其中所述抗體藥物綴合物包含抗微管蛋白試劑。
33.權利要求32的方法，其中所述抗微管蛋白試劑是auristatins、長春花生物鹼、鬼 臼毒素、紫杉烷、漿果赤黴素衍生物、cryptophysin、美登木素生物鹼或考布他汀。
34.權利要求33的方法，其中所述抗微管蛋白試劑是AFP、MMAP、MMAE、AEB、AEVB、 au r i s t a t i η E、長春新鹼、長春鹼、長春地辛、長春烯鹼、VP -16、喜樹鹼、紫杉醇、多西 他賽、埃坡黴素Α、埃坡黴素B、洛可達唑、秋水仙素、colcimid、雌莫司汀、西馬多丁、 discodermolide、美登素、DM-I 或 eleutherobin。
35.權利要求沈的方法，其中所述抗體通過接頭與所述細胞毒性或細胞抑制劑綴合。
36.權利要求35的方法，其中所述接頭在細胞內條件下是可切割的。
37.權利要求36的方法，其中所述可切割的接頭包含可被細胞內蛋白酶切割的肽。
38.權利要求37的方法，其中所述肽是二肽。
39.權利要求38的方法，其中所述二肽是val-cit接頭或phe-lys接頭。
40.權利要求36的方法，其中所述可切割的接頭在低於5.5的pH下是可水解的。
41.權利要求40的方法，其中所述可水解的接頭是腙接頭。
42.權利要求36的方法，其中所述可切割的接頭是二硫化物接頭。
43.權利要求對的方法，其中所述患者具有胰腺癌，並且所述胰腺癌是腺癌。
44.權利要求對的方法，其中所述患者具有卵巢癌，並且所述卵巢癌是上皮細胞的卵 巢癌。
45.權利要求M的方法，其中所述患者是人。
46.組合診斷和藥物試劑盒，所述試劑盒包含用於診斷的權利要求1-9任意一項的抗 體，以及用於治療的與天然CD70的細胞外結構域特異性結合的抗體。
47.在患者的組織樣品中檢測⑶70表達的方法，所述方法包括 獲得腎、腦或血液的組織樣品；固定所述組織樣品，並且將所述組織樣品中的⑶70蛋白質變性；將被固定的組織樣品與權利要求1-9任意一項的抗體接觸；以及檢測所述抗體與所述被固定的組織樣品的結合，以確定CD70是否在所述樣品中表達；其中所述被固定的組織樣品上CD70的表達表明所述患者可能患有表達CD70的癌症。
全文摘要
本申請提供了使用特異性結合變性的CD70的抗體診斷、預後、預防和治療卵巢癌、胰腺癌和其它癌症的方法。
文檔編號A61K39/395GK102056626SQ200980121463
公開日2011年5月11日 申請日期2009年4月10日 優先權日2008年4月11日
發明者M·L·史密斯, M·賴安 申請人:西雅圖遺傳學公司