C型肝炎三肽抑制劑的製作方法

2023-05-02 22:26:11 3

專利名稱：C型肝炎三肽抑制劑的製作方法
技術領域：
本發明涉及用於治療C型肝炎病毒(HCV)感染的化合物、它們的合成方法、組合物和方法。尤其是，本發明提供了新的肽類似物、含這些類似物的藥物組合物、以及將這些類似物用於治療HCV感染的方法。本發明還提供了合成這些肽類似物的方法和中間體。
背景技術：
C型肝炎病毒(HCV)是輸血後和群體傳染的全球性非A非B肝炎的主要病原物。已證實全球超過150百萬人感染有這種病毒。有較高比例的攜帶者成為慢性感染並且大多數發展為慢性肝病，即所謂的慢性C型肝炎。這些群體隨後有患嚴重肝病的危險，例如肝硬變、肝細胞癌和晚期肝病而導致死亡。
HCV形成病毒存留和導致慢性肝病高發病率的機制還沒有完全得到闡明。還不知道HCV是如何相互作用和離開宿主免疫系統的。另外，細胞免疫應答和體液免疫應答在防止HCV感染和疾病中的作用也還沒有得以確立。據報導免疫球蛋白已用於預防與輸血相關的病毒性肝炎。但是，疾病控制中心目前還沒有推薦用於此目的的免疫球蛋白。
缺乏有效的保護性免疫應答正防礙著對疫苗和照射後的適合預防方法的開發，因此，近期把希望專注於抗病毒方法。
為了確定能有效治療患有慢性C型肝炎患者的HCV感染的藥劑，已經進行了各種臨床研究。這些研究包括α幹擾素的使用，單獨使用和與其它抗病毒劑聯合使用。這類研究表明大多數參與者對這些治療沒有反應，並且發現其中出現有利反應的參與者中，在治療結束後大部分病情復發。
直到最近，人們認為幹擾素(IFN)是唯一能得到的對慢性C型肝炎有認可的確實臨床效果的療法。但是其持續反應速度慢，且幹擾素也可導致嚴重的降低被治療患者的生活質量的副作用(即視網膜病、甲狀腺炎、急性胰腺炎、抑鬱症)。近來，已允許將幹擾素和病毒唑聯合用於對單獨IFN無反應的患者。但是，由IFN導致的這些副作用並沒有隨著這種聯合療法而得以緩解。
因此，要開發有效治療HCV感染的抗病毒劑必須解決現有藥物療法局限性的問題。
HCV是Flaviviridae家族中的有包膜正鏈RNA病毒。單鏈HCV RNA基因組長度約9500個核苷酸、具有單個開放讀框(ORF)，編碼約3000個胺基酸的單個大的多蛋白。在被感染的細胞中，這種多蛋白通過細胞蛋白酶和病毒蛋白酶在多個位點被切割、以產生結構和非結構(NS)蛋白。在HCV情況中，成熟的非結構蛋白(NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B)是通過兩種病毒蛋白酶產生的。第一種蛋白酶，表徵還不清楚，它是在NS2-NS3連接處切割；第二種是包含在NS3的N末端區的絲氨酸蛋白酶(以下稱作NS3蛋白酶)，並介導所有隨後的NS3下遊的切割，該NS3包括順式和反式兩種，順式在NS3-NS4A切割位點，反式是指剩下的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NA5B位點。NA4A蛋白具有多種功能，作為NS3蛋白酶的輔因子、能輔助NS3和其它病毒複製酶成分的膜定位。這種NS3蛋白與NS4複合物的形成對於這些過程似乎是需要的，它增強了所有位點上的蛋白酶解的功效。這種NS3蛋白也具有核苷三磷酸酶和RNA解旋酶活性。NS5B是一種涉及HCV複製的RNA依賴性RNA聚合酶。
開發抗病毒劑的總策略是使病毒複製所必需的病毒性編碼酶失活。為此，專利申請WO97/06804描述了作為抗HCV的核苷類似物胞嘧啶-1,3-氧硫烷(oxathiolane)(也叫做3TC)的(-)對映異構體。此化合物，雖然據報導它在以前的臨床抗HIV和HBV試驗中是安全的，但臨床上還需要證實該化合物具有抗HCV活性，其抗病毒的作用機制也還未見報導。
為找到抑制HCV的NS3蛋白酶或RNA解旋酶的化合物而進行的認真和艱難的嘗試已有了如下發現·美國專利5,633,388描述了用作抗HCV活性劑的雜環取代的羧醯胺和類似物。這些化合物具有抗病毒的NS3蛋白的解旋酶活性，但臨床試驗還沒有報導。
·Chu等報導了(Tet.快報(1996),7229-7232)菲醌具有抗體外HCV NS3蛋白酶活性。未見對該化合物的進一步開發的報導。
·在第9界國際抗病毒研究會議上Urabandai,Fukyshima,Japan(1996)公開的一篇論文(抗病毒研究，30,1,1996；A23，(摘要19))報導了噻唑烷衍生物可抑制HCV蛋白酶。
數項研究報導了抑制其它諸如人白細胞彈性蛋白酶的絲氨酸蛋白酶的化合物。這些化合物的其中一組在WO95/33764(Hoechst Marion Roussel,1995)中有報導。公開在該申請中的肽是嗎啉基羰基-苯甲醯基-肽類似物，該類似物在結構上不同於本發明的肽。
·Vertex藥物公司的WO98/17679公開了絲氨酸蛋白酶、尤其是C型肝炎病毒NS3蛋白酶的抑制劑。這些抑制劑是基於NS5A/5B天然底物的肽類似物。雖然公開了幾種三肽，但所有這些肽類似物均含有C末端活性羰基功能團作為它的基本特徵。還報導了這些類似物具有抗其它絲氨酸蛋白酶活性，因此它對HCV NS3蛋白酶不是特異性的。
Hoffman LaRoche也報導了屬於蛋白酶抑制劑的六肽，它可用作治療HCV感染的抗病毒劑。這些肽在C末端含有醛或硼酸。
Steinkuhla等和Ingallinella等發表了NS4A-4B產物抑制作用(生物化學(1998),37,8899-8905和8906-8914)。但是，其中的肽和肽類似物並不包括也不會導致構思出本發明的肽。
本發明的一大優點是提供了抑制C型肝炎病毒的NS3蛋白酶的三肽。
本發明的另一個優點是在於這些肽特異地抑制NS3蛋白酶，而它對其它絲氨酸蛋白酶在濃度約300μM時沒有顯著的抑制活性，例如對人白細胞彈性蛋白酶(HLE)、豬胰彈性蛋白酶(PPE)、或牛胰凝乳蛋白酶、或諸如人肝組織蛋白酶B(CatB)的半胱氨酸蛋白酶。
本發明還有一個優點是在於提供了一些低分子量的小肽，它能滲透細胞膜，並在細胞培養物中和在體內的活性具有良好的藥物動力學性能。
發明概述包括在本發明範圍內的是式(1)化合物的外消旋體、非對映異構體、旋光異構體、或者其藥學上可接受的鹽或酯 其中B是H、C6或C10的芳基、C7-16的芳烷基；Het或(低級烷基)-Het，所有這些基團均可被C1-6烷基取代或不取代；C1-6烷氧基；C1-6烷醯基；羥基；羥基烷基；滷素；滷烷基；硝基；氰基；氰基烷基；可被C1-6烷基取代或不取代的氨基；醯氨基；或(低級烷基)醯胺；或者B是式R4-C(O)-的醯基衍生物；式R4-O-C(O)-的羧基；式R4-N(R5)-C(O)-的醯胺基；式R-N(R5)-C(S)-的硫醯胺基；或式R4-SO2的硫醯基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基、C3-7環烷氧基、或C4-10烷基環烷基，這些均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代；(ⅲ)可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；R5是H或C1-6烷基；條件是當R4是醯胺基或硫醯胺基時，R4不是(ⅱ)的環烷氧基；以及
Y是H或C1-6烷基；R3是C1-8烷基、C3-7環烷基、或C4-10烷基環烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代；R2是CH2-R20、NH-R20、O-R20或S-R20，其中R20是飽和或不飽和的C3-7環烷基或C4-10的(烷基環烷基)，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，或者R20是C6或C10芳基、或C7-14芳烷基，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，或者R20是Het或(低級烷基)-Het，兩者均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，其中每個R21各自為C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級硫烷基；磺醯基；NO2；OH；SH；滷素；滷烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-14芳烷基、Het或(低級烷基)-Het單取代或二取代的氨基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-14芳烷基、Het或(低級烷基)-Het單取代或二取代的醯氨基；羧基；羧基(低級烷基)；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，所說的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環烷基；C1-6烷氧基；可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代；磺醯基；(低級烷基)磺醯基；NO2；OH；SH；滷素；滷烷基；羧基；醯胺基；(低級烷基)醯胺基；或被C1-6烷基取代或不取代的Het；R1是H、C1-6烷基、C3-7環環烷基、C2-6環烯基、C2-6烷炔基，這些均可被滷素取代或不取代。
包含在本發明範圍內的是一種藥物組合物，該組合物包括病毒學上有效量的抗C型肝炎的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯，以及包括藥學上可接受的載體介質或輔助劑。
本發明的一個重要方面是涉及一種治療哺乳動物C型肝炎病毒感染的方法，即給予哺乳動物病毒學上有效量的抗C型肝炎的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯或上述組合物。
另一重要方面是涉及一種抑制C型肝炎病毒複製的方法，即通過將該病毒暴露於C型肝炎病毒的NS3蛋白酶抑制量的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯、或上述組合物。
還有一方面是涉及一種治療哺乳動物C型肝炎病毒感染的方法，即給該哺乳動物使用病毒學上有效量的抗C型肝炎的式Ⅰ化合物、或其治療可接受的鹽或酯。按照一種實施方式，本發明的藥物組合物含有另一種免疫調變劑。另一種免疫調變劑的實例包括但不限於α-,β-，和δ-幹擾素。
優選實施方式的詳細說明定義除非另有說明，本文使用了下述定義在各種情況中所提及的(R)或(S)用於表示基團的構型，例如式Ⅰ化合物的R1，這種表示是以該化合物而論、不是指單獨的基團。
除了甘氨酸外，天然胺基酸包含手性碳原子。除非另有特別指明，優選的是含L-構型的天然胺基酸的化合物。但是，申請人考慮，在特殊情況時，式Ⅰ的一些胺基酸可以是D-或L-構型、或者可以是D-和L-異構體的混合物，包括外消旋混合物。
本文所用的標記「P1、P2、P3」是指從肽類似物的C末端開始向N末端延伸的胺基酸殘基的位置(即P1指從C末端起的位置1,P2指從C末端起的位置2，等)(見Berger A.和SchechterI.，倫敦皇家學會會報彙編(1970),B257,249-264)。
本申請中用的α-胺基酸的縮寫列在表A中。
表A
本文所用的術語「1-氨基環丙基-羧酸」(Acca)是指下式化合物
本文所用的術語「叔-丁基甘氨酸」(Tbg)是指下式化合物
與胺基酸或胺基酸衍生物相關的術語「殘基」意指通過去除羧基的羥基和α-氨基的一個氫從相應的α-胺基酸產生的基團。例如，術語Gln、Ala、Gly、Ile、Arg、Asp、Phe、Ser、Leu、Cys、Asn、Sar和Tyr分別代表L-穀氨醯胺、L-丙氨酸、甘氨酸、L-異亮氨酸、L-精氨酸、L-天冬氨酸、L-苯丙氨酸、L-絲氨酸、L-亮氨酸、L-半胱氨酸、L-天冬醯胺、肌氨酸和L-酪氨酸。
與胺基酸或胺基酸殘基相關的術語「側鏈」意指與α-胺基酸的α-碳原子相連的基團。例如，甘氨酸的R-基團側鏈是氫，對丙氨酸的是甲基，纈氨酸的是異丙基。對於α-胺基酸的特異性R-基團或側鏈，參考A.L.Lehninger的《生物化學》教科書(見第4章)。
本文的術語「滷」意指選自溴基、氯基、氟基或碘基的滷素基。
本文的術語「C1-6烷基」或「(低級)烷基」，單獨或與另一個基團結合，都是指含1-6個碳原子的無環、直鏈或支鏈烷基基團，包括甲基、乙基、丙基、丁基、叔丁基、己基、1-甲基乙基、1-甲基丙基、2-甲基丙基、1,1-二甲基乙基。
本文的術語「C3-7環烷基」，單獨或與另一個基團結合，都是指含3-7個碳原子的環烷基基團，包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基和環庚基。
該術語也包括「螺」-環基團，如螺-環丙基或螺環丁基 術語「不飽和的環烷基」包括，例如環己烯基 本文的術語「C4-10(烷基環烷基)」意指含3-7個碳原子與烷基基團相連的環烷基基團，被連接的基團含1-10個碳原子；例如，環丙基甲基、環戊基乙基、環己基甲基、環己基乙基或環庚基乙基。
本文的術語「C2-10鏈烯基」，單獨或與另一個基團結合，都是指如上所述的含2-10個碳原子的烷基基團，並且還含至少一個雙鍵。例如鏈烯基包括烯丙基和乙烯基。
本文的術語「C1-6烷醯基」，單獨或與另一個基團結合，都是指含1-6個碳原子的直鏈或支鏈1-氧烷基基團，包括甲醯基、乙醯基、1-氧丙基(丙醯基)、2-甲基-1-氧丙基、1-氧己基，等等。
本文的術語「C1-6烷氧基」，單獨或與另一個基團結合，都是指-O(C1-6烷基)基團，其中烷基如上所述含1-6個碳原子。烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、1-甲基乙氧基、丁氧基和1,1-二甲基乙氧基。後面這一基團通常叫做叔丁氧基。
本文的術語「C3-7環烷氧基」，單獨或與另一個基團結合，都是指與一個氧原子連接的C3-7環烷基基團，例如 本文的術語「C6或C10芳基」，單獨或與另一個基團結合，都是指含6個碳原子的芳族單環基團或含10個碳原子的芳族二環基團。例如，芳基包括苯基、1-萘基或2-萘基。
本文的術語「C7-16芳烷基」，單獨或與另一個基團結合，都是指上述與一個烷基連接的C6或C10芳基，其中烷基如上所述含1-6個碳原子。C7-16芳烷基包括例如苄基、丁基苯基和1-萘基甲基。
本文的術語「氨基芳烷基」，單獨或與另一個基團結合，都是指被C7-16芳烷基取代的氨基基團，例如，氨基芳烷基 本文的術語「(低級烷基)醯胺基」，單獨或與另一個基團結合，都是指被C1-6烷基單取代的醯胺，例如 本文的術語「羧基(低級)烷基」，單獨或與另一個基團結合，都是指通過上述的(低級)烷基連接的羧基(COOH)，包括例如酪酸。
本文的術語「雜環」或「Het」，單獨或與另一個基團結合，都是指通過從含1-4個雜原子的5-、6-或7-節飽和或不飽和(包括芳族)雜環中去掉一個氫而衍生的一價基團，其中的雜原子選自氮、氧和硫。另外，本文的「Het」意指上述與一個或多個可以是雜環或任何其它環的另外的環稠合的雜環。適合的雜環例如包括吡咯烷、四氫呋喃、噻唑烷、吡咯、噻吩、二氮雜草、1H-咪唑、異噁唑、噻唑、四唑、哌啶、1,4-二噁烷、4-嗎啉、吡啶、嘧啶、噻唑[4,5-b]-吡啶、喹啉、或吲哚、或下列雜環 本文的術語「(低級烷基)-Het」，意指通過一種鏈或支鏈烷基連接的上述雜環基團，其中烷基如上所述含1-6個碳原子。(低級烷基)-Het的例子包括 本文的術語「藥學上可接受的酯」，單獨或與另一個基團結合，都是指式Ⅰ化合物的酯，其中分子的任何羧基官能團、但優選羧基末端，被烷氧基羰基官能團代替 其中酯的R部分選自烷基(例如甲基、乙基、正丙基、叔丁基、正丁基)；烷氧基烷基(例如甲氧基甲基)；烷氧基醯基(例如乙氧基甲基)；芳烷基(例如苄基)；芳氧基烷基(例如苯氧基甲基)；芳基(例如苯基)，可用滷素、C1-4烷基或C1-4烷氧基取代或不取代。其它適合的前藥酯可以在此引用的《前藥設計》，Bundgssrd,H.Ed.Elsevier(1985)中找到。當這些藥學上可接受的酯注射在哺乳動物中時它通常在體內水解、並轉化為式Ⅰ化合物的酸形式。
關於上述酯，除非另有說明，任何所出現的烷基部分優選含1-16個碳原子，特別是1-6個碳原子。在這些酯中所出現的任何芳基部分優選包含苯基。
尤其是這些酯可以是C1-16烷基酯，未取代的苄基酯或被至少一種滷素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、硝基或三氟甲基取代的苄基酯。
本文的術語「藥學上可接受的鹽」包括那些從藥學上可接受的鹼衍生的鹽。適合的鹼例如包括膽鹼、乙醇胺和1,2-二乙胺。Na+、K+和Ca++鹽也應包含在本發明範圍內(也參見「藥物鹽」，Birge,S.M.等，《(藥物科學雜誌》(1977),66,1-19，將其在此引作參考)。優選的實施方式包括在本發明範圍內的是式(1)的化合物，其中優選的是，B是C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代；或B優選的是Het或(低級烷基)-Het，這些均可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代。
或者，B優選的是R4-SO2，其中R4優選為C1-6烷基；醯氨基；(低級烷基)醯氨基；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或，這些均可被C1-6烷基取代或不取代。
或者，B優選的是式R4-C(O)-的醯基衍生物，其中R4優選的是(ⅰ)可被羧基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1- 6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代。
或者，B優選的是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4優選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代；
(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代。
或者，B優選的是式R4-N(R5)-C(O)-的醯胺基，其中R4優選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代；(ⅲ)可任意被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代R5是優選H或甲基。
或者，B優選的是式R4-NH-C(S)-的硫醯基，其中R4優選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基或C1-6烷氧基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基或醯氨基取代或不取代。
更優選的是，B是可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C6或C10芳基，因此B的例子如下 或者B更優選的是可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、滷素、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的Het，因此B的例子如下 或者，B更優選的是式R4-SO2，其中R4優選的是C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基取代或不取代，因此B的例子如下 或者，B更優選的是式R4-C(O)-的醯基衍生物，其中R4優選的是(ⅰ)可被羧基、羥基、C1-6烷氧基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基取代或不取代，因此B的例子如下 或R4優選的是(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基取代或不取代，因此B的例子如下 或R4優選的是(ⅴ)可被C1-6烷基、羥基、醯氨基取代或不取代的Het，因此B的例子如下 或者，B更優選的是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4優選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代，因此B的例子如下 或R4優選的是(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、或可被C1-6烷基不取代或單取代的氨基取代或不取代，因此B的例子如下 或者，B優選的是式R4-N(R5)-C(O)-的醯胺基，其中R4優選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、低級烷基)醯胺基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；以及R5是優選H或甲基，因此B的例子如下 或R4優選的是(ⅲ)可任意被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；因此B的例子如下 或R4優選的是
(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基、可被C1-6烷基取代或不取代的醯氨基取代或不取代；或(ⅴ)可被C1-6烷基、羥基、氨基、醯氨基取代或不取代的Het，因此B的例子如下 或者，B優選的是式R4-NH-C(S)-的硫醯基，其中R4優選的是(ⅰ)C1-10烷基；或(ⅱ)C3-7環烷基，因此B的例子如下 B更優選的是式R4-NH-C(O)-的醯胺基，其中R4優選的是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、低級烷基)醯胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代； 或R4優選的是(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基或醯氨基取代或不取代，因此B的例子如下 甚至最優選的是，B是叔丁氧基羧基(Boc)或 優選的是，Y是H或甲基，更優選的是，Y是H。
優選的是，R3是C1-8烷基、C3-7環烷基、或C4-10烷基環烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、乙醯氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代，因此B的例子如下 更優選的是，R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Ile、Val、Chg或 的側鏈最優選的是，R3是Tbg、Chg或Val的側鏈包括在本發明範圍內的式1這些化合物中，優選的是，R2是S-R20或O-R20，其中R20優選的是C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或CH2-Het，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，優選的是，R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級硫烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或(低級烷基)-Het單取代或二取代的氨基或醯氨基；NO2；OH；滷素；三氟甲基；羧基；C6或C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所說的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代。更優選的是，R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；氨基；二(低級烷基)氨基；(低級烷基)醯胺基；C6或C10芳基、或Het，所說的芳基或Het均可被R22取代或不取代。
優選的是，R22是C1-6烷基；C3-7環烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級烷基)氨基；(低級烷基)醯氨基；磺醯基烷基；NO2；OH；滷素；三氟甲基；羧基；或Het。更優選的是，R22是C1-6烷基；C3-7環烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級烷基)氨基；(低級烷基)醯胺基；滷素；三氟甲基；或Het。最優選的是，R22是C1-6烷基；C1-6烷氧基；滷素；可不被取代或被低級烷基單-或二-取代的氨基；醯氨基；(低級烷基)醯氨基；或Het。甚至最優選的是，R22是甲基；乙基；異丙基；叔丁基；甲氧基；氯代基；可不被取代或被低級烷基單-或二-取代的氨基；醯氨基；(低級烷基)醯胺基；或低級烷基)2-噻唑基。
或者，R2是優選地選自以下這組基 更優選的是，R2是1-萘基甲氧基；2-萘基甲氧基；苄氧基；1-萘基氧基；2-萘基氧基；如上所述未取代、被R21單取代、或二取代的喹啉氧基。最優選的是，R2是1-萘基甲氧基；或如上所述未取代、被R21單取代、或二取代的喹啉氧基，；因此R2的例子如下 還更優選的是，R2是 更優選的是，R21A是C1-6烷基例如異丙基、叔丁基或環己基；C1-6烷氧基例如甲氧基， 低級硫烷基例如 滷素例如氯；未取代或被C1-6烷基取代的氨基；或C6或C10芳基，因此R21A是例如二甲基氨基，Ph-N(Me)-；未取代的C6或C10芳基、C7-16芳烷，例如苯基或(貼p20第5行)；或R21A更優選的是被R22取代或不取代的Het其中R22C1-6烷基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、不被取代或被C1-6烷基取代的氨基、或Het，因此R21A是例如 最優選的是，R21A是C6、C10芳基或Het，這些均可被如上所述的R22取代或不取代，因此R21A是例如 甚至最優選的是，R2是 其中R22A優選的是C1-6烷基(如甲基)；C1-6烷氧基(如甲氧基)；或滷素(如氯)；R21B是優選的是C1-6烷基、可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基；而R21B是優選的是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級烷基)氨基、(低級烷基)醯氨基、NO2、OH、滷素、三氟甲基、或羧基。更優選的是，R21B是C1-6烷氧基、二(低級烷基)氨基。最優選的是，R21B是甲氧基。
如上所述，式1化合物的P1片段是環丁基或環丙基環，兩者均可被R1取代或不取代。
優選的是，R1是H、C1-3烷基、C3-5環烷基、或可被滷素取代或不取代的C2-4烷烯基。更優選的是，R1是乙基、乙烯基、環丙基、1或2溴乙基、或1或2-溴乙烯基。最優選的是，R1是乙烯基。
當R1不是H時，P1優選的是下式的環丙基體系 其中C1和C2每個代表環丙基環的1和2位上的不對稱碳原子。儘管式1化合物的其它片段上有其它可能的不對稱中心，但這兩種不對稱中心的存在意味著式Ⅰ化合物可以以非對映異構體的外消旋混合物的形式存在。如後面實施例所例證的，可以製備該外消旋混合物、然後將其分離成單個旋光異構體，或者通過手性合成法製備這些旋光異構體。
因此，式Ⅰ化合物可以在碳1位置上以一種非對映異構體的外消旋混合物的形式存在，但其中碳2上的R1與位置1上的羰基以順式定向，以下列基團表示 或者式Ⅰ化合物可以以一種非對映異構體的外消旋混合物的形式存在，其中位置2上的R1與位置1上的羰基以反式定向，以下列基團表示 接下來，可以將該外消旋混合物分離成單個光學異構體。
本發明最有趣的發現是有關在碳2上加R1取代基以及P1片段的立體定向。該發現涉及碳1上的不對稱碳的構型。一種優選的實施方式是其中R1不是H和碳1R構型。 更明確地說，當R1是以使C1具有R構型的方式引入時，取代基R1在C2上的引入就會對位價有影響。例如，化合物901(1R,2S)和203(1R,2S)分別具有25有82nM的活性。當與未取代的環丙基化合物111(475nM)比較時，可觀察到位價有很大提高。而且，正如化合物901和203所示，C1具有R構型時，在環丙基環的碳2上取代基R1(如烷基或烷烯基)的這種構型使HCV NS3蛋白酶的抑制作用進一步提高，例如具有對羧基「順式」的R1的化合物比「反式」外消旋體的位價更大(25nM)。通過比較化合物801(1R,2S)和它相應的(1S,2S)異構體的位價分別為6nM和＞10μM，相差超過1500倍！！我們可以看到R與S構型的不同效果。
因此，最優選的化合物是具有下式絕對構型中順式取代基R1和羰基的光學異構體 例如，在R1是乙基的情況下，在1或2位上的不對稱碳原子具有R,R構型。
包括在本發明範圍內的式1化合是其中B是C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或Het或(低級烷基)-Het，這些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代。或者B是R4-SO2，其中R4優選為醯氨基；(低級烷基)醯胺基；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基取代或不取代。或者
B是式R4-C(O)-的醯基衍生物，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1- 6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代，或者B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可或被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的醯氨基取代或不取代。或者
B是式R4-N(R5)-C(O)-的醯胺基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅲ)可不被取代或被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；和R5是優選H或甲基，或者B是式R4-NH-C(S)-的硫醯胺基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷醯基或C1-6烷氧基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基或醯氨基取代；Y是H或甲基；R3是C1-8烷基、C3-7環烷基、或C4-10烷基環烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、乙醯氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代；R2是S-R20或O-R20，其中R20優選的是C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或CH2-Het，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，其中R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級硫烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或(低級烷基)-Het單取代或二取代的氨基或醯氨基；NO2；OH；滷素；三氟甲基；羧基；C6或C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所說的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級烷基)氨基；(低級烷基)醯胺基；磺醯基烷基；NO2；OH；滷素；三氟甲基；羧基或Het；或者R2是優選地選自以下這組基團 或者R2是1-萘基甲氧基；2-萘基甲氧基；苄氧基；1-萘基氧基；2-萘基氧基；如上所述未取代、被R21單取代、或二取代的喹啉氧基；P1片段是環丁基或環丙基環，兩者均可被R1取代或不取代。其中R1是H、C1-3烷基、C3-5環烷基、或可被滷素取代或不取代的C2-4烷烯基，並且所說的在碳2上的R1對1位上的羰基是順式定向的，由以下基團表示 包括在本發明範圍內的式1化合物是其中B是C6或C10芳基，可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或者B是可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、滷素、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代的Het；或者B是R4-SO2其中R4-是C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基取代或不取代；或者B是式R4-C(O)-的醯基衍生物，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、羥基、C1-6烷氧基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基取代或不取代；或(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基取代或不取代；(ⅴ)Het，可被C1-6烷基、羥基、醯氨基或氨基取代或不取代，或者B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代的氨基取代或不取代；或者B是式R4-N(R5)-C(O)-的醯胺基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代；和R5是H和甲基；或R4是
(ⅲ)可任意被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、可被C1-6烷基取代或不取代的氨基或醯氨基取代或不取代；或(ⅴ)可被C1-6烷基、羥基、氨基或醯氨基取代或不取代的Het；或者B是式R4-NH-C(S)-的硫醯胺基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基；或(ⅱ)C3-7環烷基；或者B是式R4-NH-C(O)-的醯胺基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代；( ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基或醯氨基取代或不取代；Y是H；R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Ile、Val、Chg的側鏈或 R2是1-萘基甲氧基；或被如上所述的R21未取代、單取代或二取代的喹啉氧基；或者R2是 其中R21A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；C6、C10的芳基或Het；低級硫烷基；滷素；可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基；或C6、C10的芳基、C7-16芳烷基或Het，均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基或Het；P1是環丙基環其中碳1具有R構型， 以及R1是乙基、乙烯基、環丙基、1或2-溴乙基或1或2-溴乙烯基。包括在本發明範圍內的式1化合物還有是其中B是叔丁氧基羰基(Boc)或 R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Chg或Val、的側鏈；R2是 其中R22A是C1-6烷基(如甲基)；C1-6烷氧基(如甲氧基)；或滷素(如氯)；R21B是C1-6烷基、可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基；而R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級烷基)氨基、(低級烷基)醯氨基、NO2、OH、滷素、三氟甲基、或羧基；以及P1是
最後，包含在本發明範圍內的是表1-10所列出的每個式Ⅰ化合物。
根據一種可替代的實施方式，本發明的藥物組合物還可以包括另一種抗HCV劑。抗HCV劑的例子包括α或β幹擾素、病毒唑和金剛胺。
根據另一種可替代的實施方式，本發明的藥物組合物還可包括HCV蛋白酶的其它抑制劑。
還根據另一種可替代的實施方式，本發明的藥物組合物還可包括HCV生存期中的其它目標的抑制劑，包括但不限於，例如解旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶或內部核糖體進入位點(IRES)。
本發明的藥物組合物可以口服、非腸道或通過一種植入的貯主給藥。優選口服或注射給藥。本發明的藥物組合物也可含有常規的藥學上可接受的無毒載體、輔助劑或賦形劑。在某些情況中，可以用藥學上可接受的酸、鹼或緩衝液調節製劑的pH，以增強所配製的化合物或其傳送形式的穩定性。本文所用的術語非腸道包括皮下、皮內、靜脈內、肌內、關節內、滑液內、胸骨內、鞘內和損害內注射或輸注技術。
本藥物組合物可以是無菌的可注射製劑形式，例如，無菌的可注射含水懸浮液或油狀懸浮液。可根據本領域已知的技術、使用適合的分散劑或潤溼劑(例如吐溫80)和懸浮劑製備該懸浮液。
本發明的藥物組合物可以以任何口服可接受的劑型進行口服給藥，它包括但不限於，膠囊、片劑以及含水懸浮液和溶液。在口服使用的片劑中，通常使用的載體包括乳糖和玉米澱粉。也可以有代表性地加入諸如硬脂酸鎂之類的潤滑劑。對於膠囊形式的口服給藥，有用的稀釋劑包括乳糖和幹玉米澱粉。當將含水懸浮液口服給藥時，可將活性成分與乳化劑和懸浮液組合使用。如需要，可以加入某些甜味劑和/或調味劑和/或著色劑。
用於上述製劑和組合物的其它適合的賦形劑或載體可以在標準的藥物教科書中找到，例如在《藥學科學和實踐》第19版，Mack出版公司，Easton,Penn.,(1995)的「Remington的藥物科學」中。
劑量為大約0.01-100mg/kg體重/天的本文所述的蛋白酶抑制劑化合物可用於預防和治療HCV介導性疾病的單一療法，其劑量優選約0.5-75mg/kg體重/天。典型的是，本發明藥物組合物可以每天給藥約1-5次，或者連續輸注。這種給藥方法可用於慢性或急性治療。可與載體物質結合而產生單一劑型的活性成分的用量將根據所治療的患者和給藥的特殊方式的不同而改變。典型的製劑包含約5％-約95％的活性化合物(w/w)。這種製劑優選包含約20％-約80％活性化合物。
正如本領域熟練技術人員所共知的，可能需要較上述劑量更低或更高的用量。對任何特殊患者的特定劑量和治療方案是根據各種因素而決定的，該因素包括所用的特定化合物的活性、年齡、體重、一般健康狀況、性別、飲食、給藥時間、排洩速度、聯合用藥、感染的嚴重程度和過程、患者對感染的處置和主治醫生的判斷。一般而言，基本上以小於肽的最佳劑量的小劑量開始治療。此後，按小增量增大劑量直至在該情況下達到最佳效果。總之，最合乎需要的是將該化合物以能達到抗病毒效果而不產生任何有害或造成傷害的副作用的濃度水平進行給藥。
當本發明組合物包括式Ⅰ化合物和一種或多種附加治療劑或預防劑的組合時，該化合物和附加劑兩者應大約佔單一治療方案中的正常給予劑量的10一100％，更優選約10-80％。
當將這些化合物或其藥學上可接受的鹽與藥學上可接受的載體一同進行配製時，所得到的組合物可以對諸如人的哺乳動物體內給藥，以抑制HCV NS3蛋白酶或者治療或預防HCV病毒感染。也可聯合使用本發明化合物與包括但不限於下列試劑達到這種治療免疫調節劑、例如α-、β-、γ-幹擾素；其它抗病毒劑，例如病毒唑、金剛胺；其它HCV NS3蛋白酶抑制劑；HCV生存期的其它目標的抑制劑，它包括但不限於解旋酶、聚合酶、金屬蛋白、或內部核糖體進入位點(IRES)、或其組合。也可將附加劑與本發明化合物組合以形成單一劑型。或者將這些附加劑作為複合劑型的一部分單獨給哺乳動物服用。
因此，本發明的另一個實施方式是提供通過服用式Ⅰ化合物(其中取代基如上所述)而抑制哺乳動物的HCV NS3蛋白酶活性的方法。
在一個優選的實施方式中，這些方法用於降低哺乳動物的HCV NS3蛋白酶活性。如果藥物組合物僅包括本發明化合物作為活性成分，則這些方法可另外包括下列步驟給所述哺乳動物服用選自下列的試劑免疫調節劑，抗病毒劑，HCV蛋白酶抑制劑，或HCV生存期的其它目標的抑制劑，例如解旋酶、聚合酶、金屬蛋白、或IRES。這些附加劑可以在給本發明化合物之前、同時、或之後服用。
在一種替代的優選實施方式中，這些方法用於抑制哺乳動物的病毒複製。這類方法用於治療或預防HCV疾病。如果藥物組合物僅包括本發明化合物作為活性成分，則這些方法可另外包括下列步驟給所述哺乳動物服用選自下列的試劑免疫調節劑，抗病毒劑，HCV蛋白酶抑制劑，或HCV生存期的其它目標的抑制劑。可以在給予本發明化合物之前、同時、或之後服用這些附加劑。
前面所述化合物也可用作實驗室試劑。本發明化合物也可用於治療或預防物質的病毒汙染，因而降低與這些物質(如血液、組織、外科儀器和覆蓋物、實驗室儀器和覆蓋物、以及血液收集裝置和物質)接觸的實驗室人員或醫療人員或患者感染病毒的危險。
前面所述化合物也可用作研究試劑。也可將本發明化合物用作陽性對照以驗證基於細胞的代用品測定或者體外或體內病毒複製測定。方法根據下列合成方案舉例說明的方法合成本發明化合物(其中CPG為羧基保護基團、APG為氨基保護基團)合成方案Ⅰ 簡言之，P1、P2、和P3可通過公知的肽偶聯技術連接。P1、P2、和P3基團可以以任何順序連接在一起，只要最終化合物與式Ⅰ的肽一致。例如，P3可與P2-P1相連；P1可與P3-P2相連。
通常，通過使用上述方法、脫保護N-末端殘基的α氨基、並通過肽連接偶聯下一個適合的N-保護性胺基酸的未保護羧基，從而使肽延長。重複這種脫保護和偶聯過程直至得到所需的序列。這種偶聯可以用如合成方案Ⅰ所述的分段方式中的胺基酸組分來進行，或通過在此引用的Merrifield，《美國化學會雜誌》(1963),85,2149-2154中最初所述的方法的固相肽合成來進行。
可以用標準的偶聯方法進行兩個胺基酸、一個胺基酸和一個肽、或兩個肽片段之間的偶聯，這些標準的偶聯方法例如疊氮化物法、混合碳酸-羧酸酐(氯甲酸異丁酯)法、碳二亞胺(二環己基碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺、或水溶性碳二亞胺)法、活性酯(對硝基苯基酯、N-羥基琥珀亞氨基酯)法、Woodward試劑K方法、羰基二咪唑法、磷試劑法或氧化-還原法。通過加入1-羥基苯並三唑使其中一些方法(尤其是碳二亞胺法)增強。這些偶聯反應可以在溶液(液相)或固相中進行。
更清楚地說，這種偶聯步驟包括在偶聯劑存在下一個反應物的游離羧基與另一個反應物的游離氨基的脫水偶聯、以形成連接醯胺鍵。這些偶聯劑的說明可在有關肽化學的普通教科書中找到，例如，M.Bodanszky，「肽化學」，第二次修訂版，Springer-Verlag，柏林，德國，(1993)。適合的偶聯劑例如有N,N』-二環己基碳二亞胺、N,N』-二環己基碳二亞胺中的1-羥基苯並三唑或N-乙基-N』-[(3-二甲基氨基)丙基]碳二亞胺。非常實際且有用的偶聯劑是單獨形式或存在於1-羥基苯並三唑中的從市售可得到的(苯並三唑-1-基氧)三-(二甲基氨基)六氟磷酸鹽。另一種非常實際且有用的偶聯劑是市售可得到的2-(1H-苯並三唑-1-基)-N,N,N』,N』-四甲基四氟硼酸脲。還有一個非常實際且有用的偶聯劑是市售可得到的O-(7-氮雜苯並三唑-1-基)-N,N,N』,N』-四甲基六氟磷酸脲。
偶聯反應是在惰性溶劑中進行的，該惰性溶劑例如二氯甲烷、乙腈或二甲基甲醯胺。加入過量的叔胺例如二異丙基乙基胺、N-甲基嗎啉或N-甲基吡咯烷以保持反應混合物pH約為8。反應溫度通常是在0℃-50℃的範圍內，反應時間通常為15分鐘至24小時。
當使用固相合成法時，將C末端羧酸與不溶性載體(通常為聚苯乙烯)相連。這些不溶性載體包括與羧基反應形成一種鍵的載體，這種鍵對於延長情況是穩定的、但此後易於裂解。這些載體例如有氯或溴甲基樹脂、羥甲基樹脂、三苯基甲基樹脂和2-甲基-4-烷氧基-苄基醇樹脂。
這些樹脂中有許多是市售可得到的、並已經加入了所需的C末端胺基酸。或者，可以按照Wang,S.-S.，《美國化學會雜誌》(1973),95,1328；Atherton,E.,Shepard,R.C.「固相肽合成；一種實用方法」牛津IRL出版社，(1989)；131-148中的已知方法將胺基酸加在固體載體上。除了上述以外，其它肽合成方法在Stewart和Young，「固相肽合成」，第二版，Pierce化學公司，Rockford,IL(1984)；Gross,Meienhofer,Udenfriend，編輯，「肽分析、合成、生物學」，卷1、2、3、5和9,Academic出版社，紐約，(1980-1987)；Bodansky等，「肽合成實踐」Springer-Verlag，紐約(1984)中有描述，這些公開出版物均為本發明參考文獻。
在偶聯反應過程中通常必須保護組分胺基酸的功能基團、以避免形成不必要的鍵。可以使用的保護基團列在Greene，「有機化學的保護性基團」，JohnWiley和Sons，紐約(1981)和「肽分析、合成、生物學」卷3,Academic出版社，紐約，(1981)中，這些公開出版物均為本發明參考文獻。
通常將C末端殘基的α羧基保護成一種可裂解形成羧酸的酯(CPG)。可以使用的保護性基團包括1)烷基酯，例如甲基酯、三甲基甲矽烷基乙基酯和叔丁基酯，2)芳烷基酯，例如苄基酯和取代的苄基酯，或3)可以通過弱鹼處理或輕度還原方法而被裂解的酯，例如三氯乙基和苯甲醯甲基酯。
必須保護與生長肽鏈偶聯的每個胺基酸的α氨基(APG)。可以使用任何本領域已知的保護性基團。這些基團例如包括1)醯基，例如甲醯基、三氟乙醯基、鄰苯二醯基、和對甲苯磺醯基；2)芳族氨基甲酸酯基團，例如苄氧基羰基(Cbz或Z)和取代的苄氧基羰基，以及9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)；3)脂族氨基甲酸酯基團，例如叔丁氧基羰基(Boc)，乙氧基羰基，二異丙基甲基羰基，和烯丙基羰基；4)環烷基氨基甲酸酯基團，例如環戊氧基羰基和金剛烷氧基羰基；5)烷基，例如三苯基甲基和苄基；6)三烷基甲矽烷基，例如三甲基甲矽烷基；和7)含諸如苯基硫代羰基和二硫琥珀醯基的基團的巰基。優選的α氨基保護基團是Boc或Fmoc。適合用於肽合成保護的許多胺基酸衍生物均可從市售獲得。
新近所加的胺基酸殘基的α氨基保護基團在下一個胺基酸偶聯之前被裂解。當使用Boc基團時，選擇的方法是淨三氟乙酸或二氯甲烷中的三氟乙酸、或二噁烷或乙酸乙酯中的HCl。然後在偶聯之前或在偶聯的當時用鹼性溶液例如含水緩衝液、或二氯甲烷中的叔胺或乙腈或二甲基甲醯胺中和所得到的銨鹽。當使用Fmoc基團時，選擇的試劑是二甲基甲醯胺中的哌啶或取代的哌啶，但是也可使用任何仲胺。脫保護是在0℃-室溫(RT)的溫度下進行的，通常是20-22℃。
具有側鏈官能度的任何胺基酸必須在肽製備過程中用任何上述基團進行保護。本領域熟練技術人員知道用於這些側鏈官能度的適合的保護基團的選擇和使用是根據胺基酸和肽中的其它保護性基團的存在而決定的。對這些保護性基團的選擇的重要性在於該基團在脫保護和α氨基的偶聯過程中必須不被去除。
例如，當Boc用作α氨基保護性基團，下列側鏈保護性基團是適合的可用於保護諸如Lys和Arg的胺基酸的氨基側鏈的對甲苯磺醯基(甲苯磺醯基)部分；可用於保護半胱氨酸的含硫化物側鏈的乙醯氨基甲基、苄基(Bn)、或叔丁基磺醯基部分；可用於保護絲氨酸、蘇氨酸或羥基脯氨酸的含羥基側鏈的苄基(Bn)醚；以及可用於保護含天門冬氨酸和穀氨酸側鏈的羧基的苄基酯。
當選擇Fmoc用於α-氨基保護時，通常基於叔丁基的保護性基團是可以接受的。例如，可用於賴氨酸和精氨酸的Boc，用於絲氨酸、蘇氨酸或羥基脯氨酸的叔丁基醚；和用於天門冬氨酸和穀氨酸的叔丁基酯。三苯基甲基(三苯甲基)部分可用於保護半胱氨酸的含硫化物側鏈。
一旦完成了肽的延長，則去除所有保護性基團。當使用液相合成時，在選擇保護性基團所採取的無論什麼方法中，應將保護性基團去除。這些方法對於本領域熟練技術人員來說是公知的。
當使用固相合成時，肽從樹脂裂解、同時伴有保護性基團的去除。當Boc保護方法用於合成時，用0℃的含HF的無水添加劑例如二甲硫、茴香醚、茴香硫醚或對甲酚進行處理是用於從樹脂裂解肽的優選方法。肽的裂解也可通過其它諸如三氟甲烷磺酸/三氟乙酸混合物的酸性試劑而實現，如果使用Fmoc保護方法，則用較早所述的試劑使N末端Fmoc基團裂解。用三氟乙酸溶液和各種添加劑如茴香醚等使其它保護性基團和肽從樹脂裂解。
1．封端基團B的合成各種不同的封端基團B按以下方式引入1.1)當B是芳基、芳烷基時通過以下三種方法之一製備芳基化的胺基酸a)在氟-硝基芳基部分直接親核取代 簡單地說，4-氟-3-硝基三氟苯甲酸(a)在鹼如氫氧化鉀存在下在80℃下與L-胺基酸(b)反應，產生所需的N-芳基胺基酸(c)；b)按照Ma et.al.(J.Am.Chem.Soc.1998,120,12459)所述的方式進行銅催化偶聯 簡單地說，溴-4-氟苯(d)在鹼如氫氧化鉀和催化量的銅存在下在90℃下與L-胺基酸(b)反應，產生所需的N-芳基胺基酸(e)；或c)三氟苄酸酯(triflate)用苯胺親核取代 簡單地說，鄰甲氧基苯胺(f)在鹼如2,6-二甲基吡啶存在下在90℃下與三氟苄酸酯(triflate)(g)反應,得到苄基酯(h)。用10％Pd/C氫化，產生所需的N-芳基胺基酸(i)。1.2)當B是氨基噻唑衍生物時 a)按照Keamey et al.,1998,J.Org.Chem,63,196，所述的方法製備的Fmoc-N=C=S與保護的P3殘餘片段或全肽或肽片段反應產生硫脲。
b)該硫脲衍生物與合適的溴銅反應產生相應的噻唑衍生物。
1.3)當B是R4-C(O)-,R4-S(O)2時保護的P3殘餘片段或全肽或肽片段分別與合適的醯基氯或磺醯氯偶合，該物質可從市場上買到或用現有技術中已知的方法合成。
1.4)當B是R4O-C(O)-時保護的P3殘餘片段或全肽或肽片段與合適的氯甲酸酯或磺醯氯偶合，該磺醯氯可從市場上買到用現有技術中已知的方法合成。至於Boc-衍生物，使用(Boc)2O。
例如 a)用光氣處理氯丁醇產生相應的苯甲酸酯。
b)該苯甲酸酯用合適的NH2-三肽在鹼如三乙基胺存在下進行處理得到環丁基氨基甲酸酯。
1.5)當B是R4-N(R5)-C(O)-，或R4-NH-C(S)-時保護的P3殘餘片段或全肽或肽片段如SynLett.Feb 1995；(2)；142-144所述用光氣處理接著用胺處理。
2．P2部分的合成
2.1合成母體A)合成滷芳基甲烷衍生物按照K.N.Campbell et al.,JAmer.Chem.Soc.,(1946),68,1844中所述的方法製備滷代甲基-8-喹啉Ⅱd。
合成方案Ⅱ 簡言之，通過相應的醯基滷化物Ⅱb與諸如氫化鋁鋰的還原劑的還原反應將8-喹啉羧酸Ⅱa轉化為相應的醇Ⅱc。用適當的氫滷酸處理醇Ⅱb得到所需的滷衍生物Ⅱd。這種方法的一個特殊實施方式見實施例1。
B)芳基醇衍生物的合成根據Giardina等(《美國化學會雜誌》，(1997),40,1794-1807)所述的方法製備2-苯基-4-羥基喹啉衍生物Ⅲc。
合成方案Ⅲ R22和R21B=烷基、OH、SH、滷、NH2或NO2。
將苯甲醯基乙醯胺(Ⅲa)與適合的苯胺(Ⅲb)縮合、並用聚磷酸使所得到的亞胺環化得到相應的2-苯基-4-羥基喹啉(111c)。這種方法的一個特定實施方式見實施例2。
或者，該方法也可用一種不同的方式進行苯甲醯乙基酯(Ⅲa)在酸存在下與合適的苯胺(Ⅲb)縮合，所得亞胺在260-280℃下環化得到相應的2-苯基-4-羥基喹啉(Ⅲc)。該方法特定的實施方式如實施例3(化合物3e)所述。2.2．P2的合成A)4-取代的脯氨酸(其中R2通過碳原子與環相連)(立體化學如下所示)的合成 根據J.Ezquerra等(《四面體》，(1993),38,8665-8678)和C.Pedregal等(《四面體快報》，(1994),35,2053-2056)所述的方法按合成方案Ⅳ所示。進行。
合成方案Ⅳ 簡言之，將Boc-焦穀氨酸保護為苄基酯。用諸如二異丙基醯胺鋰的強鹼處理、然後加入烷化劑(Br-R20或I-R20)，在醯胺的還原反應和酯的脫保護後，得到所需的化合物Ⅳe。
B)O-芳烷基化4-(R)-羥基脯氨酸的合成 可用以下不同方法進行。
1)當R20為芳基、Het、芳烷基、或(低級烷基)-Het時，根據E.M.Smith等(《醫用化學雜誌》(1988),31,875-885)所述的方法進行該合成過程。簡言之，用如氫化鈉或K-tBuO的鹼處理市售獲得的Boc-4(R)-羥基脯氨酸，所得到的醇化物與滷-R20(Br-R20,I-R20，等)反應生成所需的化合物。這種方法的一個特定實施方式見實施例4,5和7。
2)或者，當R20為芳基、Het時，這些化合物也可通過Mitsunobu反應(Mitsunobu(1981)，合成，1月，1-28；Rano等(1995)，《四面體快報》36(22),3779-3792；Krchnak等，(1995)，《四面體快報》36(5),62193-6196；Richter等，(1994),Tet.快報35(27),4705-4706)來製備。簡言之，即在三苯基膦和二乙基偶氮二羧酸鹽(DEAD)的存在下用適當的芳基醇或硫醇處理Boc-4(S)-羥基脯氨酸甲基酯，將所得到的酯水解成酸。這種方法的特定實施方式見實施例6和8。
合成方案Ⅴ 或者，可在固相中進行Mitsunobu反應(圖解Ⅴ)。將等分樹脂結合化合物(Ⅴa)加入396型合成器(高級Chem Tech)的96孔分塊(block)中，再加入各種芳基醇或硫醇和適當的試劑。培養後，洗滌、乾燥每個樹脂結合產品(Ⅴb)，並使其從樹脂裂解。
Suzuki反應(Miyaura等，(1981)，《工業合成》11,513；Sato等，(1989)，化學快報》1405；Watanabe等，(1992),Syn快報，207；Takayuki等，(1993)，《有機化學雜誌》58,2201；Frenette等，(1994),Tet.快報35(49),9177-9180；Guiles等，(1996)，《有機化學雜誌》61,5169-5171)也可用於進一步使芳基取代基官能化。
3．P1部分的合成3.1 合成2-取代的1-氨基環丙基羧酸的4位上可能的異構體根據合成方案Ⅵ進行合成。
合成方案Ⅵ a)簡言之，即在鹼條件下使二保護性丙二酸鹽Ⅵa和1,2-二滷烷烴Ⅵb或環硫酸鹽Ⅵc(根據K.Burgess和Chun-Yen KE(合成，(1996),1463-1467的方法合成的)反應得到二酯Ⅵd。
b)進行較少受阻酯的區域選擇性水解得到酸Ⅵe。
c)將這種酸Ⅵe進行Curtius重排得到1-氨基環丙基羧酸衍生物Ⅵf的外消旋混合物，其中R1與羧基順式定向。這種合成方法的特定實施方式見實施例9。
d,e)或者，從酸Ⅵe選擇性形成的酯與適合的滷化物(P*Cl)或醇(P*OH)形成二酯Ⅵg，其中P*與P酯的選擇性水解是相容的。P酯的水解得到酸Ⅵh。
f)Ⅵh的Curtius重排得到1-氨基環丙基羧酸衍生物Ⅵi的外消旋混合物，其中R1基團與羧基反向。這種合成方法的特定實施方式見實施例14。
另一種製備衍生物Ⅵf(當R1為乙烯基並與羧基以順式定向時)的合成法如下所述。
合成方案Ⅶ 用鹼中的1,4-二滷丁烯Ⅶb處理市售獲得的亞胺Ⅶa，所得的亞胺Ⅶc水解後得到與羧基同向的丙烯基取代基的Ⅶd，這種方法見實施例15和19。
所有上述碳1(Ⅵe和Ⅶd)上的對映異構混合物可通過以下進行拆分1)酶分離(實施例13,17和20)；2)用手性酸結晶(實施例18)；或3)化學衍生(實施例10)。
拆分後，可按實施例11所示進行絕對立體化學的判定。
可以以同樣的方法對碳1上的對映異構混合物進行拆分和立體化學判定，該混合物中C2上的取代基與羧基反向(Ⅵi)。3.2)合成1-氨基環丁基羧酸按照「Kavin Douglas；Ramaligam Kondareddiar；Woodard Ronald,Synth.Commun.(1985),15(4),267-72」所述的方法合成1,1-氨基環丁烷羧酸。
反應式Ⅷ 簡單地說，在Ⅷb存在下用鹼處理化合物Ⅷa得到相應的環丁基衍生物Ⅷc。式Ⅷc的異氰酸酯和酯在酸性條件下水解產生1-氨基-環丁基羧酸的鹽酸鹽Ⅷd。後者的羧酸在甲醇的HCl溶液中酯化。實施例21中說明了這種酯化的具體實施方式
。3.3合成2-取代的1-氨基環丁基羧酸 a)保護的甘氨酸酯衍生物如亞胺Ⅸa在合適的鹼如金屬氫化物、氫氧化物或烷氧化物的存在下與高烯丙基親電子試劑Ⅸb進行烷基化反應。在Ⅸb中有用的離去基團包括滷素(X=Cl、Br、I)或磺酸酯(甲苯磺酸酯、二甲苯磺酸酯或三甲苯磺酸酯)。Ⅸb中的烯丙醇官能團用本領域已知的羥基保護基(如乙酸酯、甲矽烷基、乙醛)保護。
b)在第二步，將一烷基化衍生物Ⅸc的羥基官能團去保護並轉化成合適的親電子試劑官能團X，如上述的化合物Ⅸb。
c)通過用鹼(金屬氫化物、烷氧化物)處理，接著用含水無機酸，水解以及用弱鹼中和的方法使Ⅸd環化成環丁烷衍生物Ⅸe。在此階段，可用閃蒸色譜法分離Ⅸe的順式和反式-異構體。
d)Ⅸe的雙鍵在標準條件下也可以加氫，生成相應的飽和衍生物Ⅸf。這一步可有可無。
本發明還包括式(Ⅰ)的肽類似物的製備方法，其中P1是取代的氨基環丙基羧酸殘餘部分。該方法包括的步驟有·將選自APG-P3-P2或APG-P2的肽用下式的P1中間體進行偶合， 其中R1是C1-6烷基、環烷基或C2-6鏈烯基，這些均可被滷素取代或不取代，CPG是羧基保護基，以及APG是氨基保護基，P3和P2如上定義。
本發明還包括製備1)或2)的方法1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物，或2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物。該方法包括的步驟有·將(適當保護的)氨基、肽或肽片段與下式的P1中間體偶合， 其中R1是C1-6烷基、C3-7環烷基或C2-6鏈烯基，這些均可被滷素取代或不取代，而CPG是羧基保護基。
本發明因此包括製備1)蛋白酶抑制劑肽類似物或2)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物的方法。該方法包括的步驟有·將(適當保護的)胺基酸、肽或肽片段與下式的中間體偶合， 其中CPG是羧基保護基。
本發明還包括下式的P1中間體的用途， 其中R1是C1-6烷基、環烷基或C2-6鏈烯基，這些均可被滷素取代或不取代，該中間體用於製備1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物，或2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物。
本發明還包括下式中間體的用途， 其中CPG是羧基保護基，該中間體用於製備1)蛋白酶抑制劑肽類似物，或2)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物。
本發明還包括以下各式P1中間體用於製備上面定義的式1化合物的用途， 其中R1是C1-6烷基、環烷基或C2-6鏈烯基，這些均可被滷素取代或不取代。
最後，本發明還包括下式脯氨酸類似物的用途， 其中R21A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級硫烷基；滷素；可被C1-6烷基取代或不取代的氨基；C6、C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所述的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代其中R22是C1-6烷基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、或Her，以及R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級烷基)氨基、(低級烷基)醯氨基、NO2、OH、滷素、三氟甲基、或羧基；1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物，2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物，或3)式1的肽類似物的合成方法均如上述定義。
實施例通過下列非限定性實施例對本發明進一步舉例說明。
將溫度設為攝氏溫度。除非另有說明，溶液百分比表示重量與體積關係，溶液比例表示體積與體積關係。在Bruker 400MHz分光計上記錄核磁共振(NMR)光譜；將化學位移(δ)記作部分/百萬。根據Still的閃光色譜技術(W.C.Still等，《有機化學雜誌》，(1978),43,2923)在矽膠(SiO2)上進行閃光色譜法。
用於本實施例的縮寫包括Bn苄基；Boc叔丁氧基羰基{Me3COC(O)}；BSA牛血清白蛋白；CHAPS:3-[(3-氯醯氨基丙基)-二甲基銨]-1-丙烷磺酸鹽；DBU:1,8-二氮雜二環[5.4.0]十一碳-7-烯；CH2Cl2=DCM二氯甲烷；DEAD二乙基偶氮二羧酸鹽；DIAD二異丙基偶氮二羧酸鹽；DIEA二異丙基乙基胺；DIPEA二異丙基乙胺；DMAP二甲基氨基吡啶；DDC:1,3-二環己基碳二亞胺；DME:1,2-二甲氧乙烷；DMF二甲基甲醯胺；DMSO二甲基亞碸；DTT二硫蘇糖醇或蘇-1,4-二巰基-2,3-丁二醇；DPPA二苯基磷醯基疊氮化物；EDTA乙二胺四乙酸；Et乙基；EtOH乙醇；EtOAc乙酸乙酯；Et2O二乙醚；HATU:[O-7-(氮雜苯並三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸脲]；HPLC高效液相層析；MS質譜(MALDI-TOF基質輔助性雷射解吸(disorption)電離-飛行時間，FAB快速原子轟擊)；LAH氫化鋁鋰；Me甲基；MeOH甲醇；MES:(2-{N-嗎啉代}乙烷-磺酸)；NaHMDS雙(三甲基甲矽烷基)醯胺鈉；NMM:N-甲基嗎啉；NMP:N-甲基吡咯烷；Pr丙基；Succ:3-羧基丙醯基(propanoyl)；PNA:4-硝基苯基氨基或對硝基苯胺；TBAF叔-丁基氟化物銨；TBTU:2-(1H-苯並三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基四氟硼酸脲；TCEP鹽酸三(2-羧乙基)膦；TFA三氟乙酸；THF四氫呋喃；TIS三異丙基矽烷；TLC薄層色譜法；TMSE三甲基甲矽烷基乙基；Tris/HCl鹽酸三(羥甲基)氨基甲烷，P2結構單元實施例1溴甲基-8-喹啉(1)的合成 向市售獲得的8-喹啉羧酸(2.5g,14.4mmol)中加入純亞硫醯氯化物(10ml,144mmol)中。在過量的亞硫醯氯化物在減壓下被蒸餾之前將此混合物在80℃加熱1小時。將在80℃加熱了1小時的無水乙醇(15mL)在真空濃縮之前加入所得到的呈褐色固體中。殘餘物分配在EtOAc和飽和含水NaHCO3之間，並將有機相干燥(MgSO4)、過濾和濃縮得到呈褐色的油(2.8g)。將該物質(約14.4mmol)在35分鐘內滴加到冷卻至-60℃的LAH(0.76g,20.2mmol)/Et2O懸浮液中，反應完成之前，將反應混合物在1.5小時內緩慢升溫至-35℃。在30分鐘內緩慢加入MgSO4·10H2O然後加溼THF使該反應停止。將混合物分配在Et2O和10％含水NaHCO3之間。並將有機相干燥(MgSO4)、過濾和濃縮得到相應的醇呈黃色的固體(2.31g,2步80％)。將該醇(2.3g,11.44mmol)溶解在AcOH/HBr(20Ml,Aldrich的30％溶液)中並在70℃加熱2.5小時。將混合物在真空下濃縮至乾燥，分配在EtOAc(100mL)和飽和含水NaHCO3之間，然後乾燥(MgSO4)、過濾和濃縮得到呈褐色固體(2.54g,100％)的所需化合物(1A)。實施例22-苯基-4-羥基喹啉(2)的合成 將市售可獲得的苯甲醯乙酸乙酯(6.00g,31.2mmol)於85℃(封閉管)在75mL 30％的NH4OH中加熱2小時。冷卻後的固體過濾並在水中回流2小時。用CH2Cl2萃取該溶液三次。合併有機層、經MgSO4乾燥、過濾並濃縮。將黃色殘餘物在矽膠上進行閃光色譜分析、用EtOAc∶己烷(3∶7)洗脫、得到1.60g呈白色固體的相應醯胺，得率31％。
使用Dean-Stark裝置用苯胺(143mg,1.53mmol)和甲苯(10mL)中的鹽酸苯胺(10mg,0.08mmol)回流此醯胺(250mg,1.53mmol)。濃縮該溶液得到棕色油，將這種油與多磷酸(2g)混合併在135℃加熱20分鐘。將該反應混合物注入水中並用5M NaOH調節pH為8。用乙酸乙酯萃取該含水懸浮液兩次。有機層合併、用鹽水洗滌、經MgSO4乾燥、過濾並濃縮。將殘餘物在矽膠上進行閃光色譜分析、用乙酸乙酯中的3％MeOH洗脫、得到67mg 2-苯基-4-羥基喹啉(2)，得率20％。1HNMR(DMSO-d6)δ8.11(d,J=7Hz,1H),7.86-7.83(m,2H),7.77(d,J=8Hz,1H),7.68(dd,J=8,7Hz,1H),7.61-7.58(m,3H),7.35(dd,J=8,7Hz,1H),6.34(s,1H).實施例34-羥基-2-苯基-7-甲氧喹啉(3)的合成 4-羥基-2-苯基-7-甲氧喹啉(e)將苯甲醯基乙酸乙酯(b)(100.0g,0.52mol)、間茴香胺(a)(128.1g,1.04mmol)和4N HCl/二噁烷(5.2mL)的甲苯(1.0L)溶液在Dean-Stark裝置中回流6.25小時。用含水10％HCl(2×300mL)、1N NaOH(2×300mL)、H2O(300mL)和鹽水(15mL)依次洗滌被冷卻的甲苯溶液。將甲苯相干燥(MgSO4)、過濾並在減壓下濃縮得到1.2:1.0的酯c和醯胺d混合物(144.6g,45％/38％粗製得率)，它是一種深棕色油。將該粗的油加熱80分鐘至280℃、同時蒸餾所產生的乙醇。用CH2Cl2(200mL)研製所得到的冷卻暗色固體。過濾懸浮液、用CH2Cl2洗滌所得到的固體，得到淺褐色固體e(22.6g,由a得到17％):1HNMR(DMSO-d6)δ8.00(d,J=9.0Hz,1H),7.81-7.82(m,2H),7.57-7.59(m,3H),7.20(d,J=2.2Hz,1H),6.94(dd,J=9.0,2.2Hz,1H),6.26(s,1H),3.87(s,3H).4-氯-2-苯基-7-甲氧喹啉(3)將e(8.31g,33.1mmol)的POCl3(90mL)懸浮液加熱回流2小時(加熱後得到的清亮溶液)。在減壓下濃縮該反應混合物。將殘餘物分配在1NNaOH(加入放熱的10N NaOH以保持高pH)和EtOAc(500mL)之間。用H2O(100mL)和鹽水(100mL)洗滌有機層、然後乾燥(MgSO4)、過濾和在減壓下濃縮得到淺黃色固體3(8.60g,96％):1H NMR(DMSO-d6)δ8.28-8.30(m,2H),8.20(s,1H),8.10(d,J=9.1Hz,1H),7.54-7.58(m,3H),7.52(d,J=2.5Hz,1H),7.38(dd,J=9.1,2.5Hz,1H),3.98(s,3H).該反應重複三次，總是得到96-98％的得率，這明顯高於《醫用化學雜誌》1997,40,1794中所報導的68％得率。實施例4Boc-4(R)-(萘-1-基甲氧基)脯氨酸(4)的合成 將市售的Boc-4(R)-羥基脯氨酸(5.00g,21.6mmol)溶解在THF(100mL)中並冷卻至0℃。在10分鐘內分批添加氫化鈉(60％油懸浮液，1.85g,45.4mmol)，將懸浮液在室溫攪拌1小時。然後，加入1-(溴甲基)萘(8.00g,36.2mmol)(如E.A.Dixon等，《(加拿大化學雜誌》(1981),59,2629-2641所述的製備)、將混合物回流加熱18小時。將混合物注入水(300mL)中、用己烷洗滌。用10％含水HCl酸化含水層、並用乙酸乙酯提取兩次。合併有機層並用鹽水洗滌、乾燥(MgSO4)、過濾並濃縮。將殘餘物通過閃蒸色譜法(49∶49∶2己烷∶乙酸乙酯∶乙酸)純化得到為無色油的標題化合物(4.51g,56％得率)。1HNMR(DMSO-d6)顯示存在兩種旋轉異構體
δ8.05(m,1H),7.94(m,1H),7.29(d,J=14Hz,1H),7.55-7.45(m,4H),4.96(m,2H),4.26(br.s,1H),4.12(dd,J=J=8Hz,1H),3.54-3.42(m,2H),2.45-2.34(m,1H),2.07-1.98(m,1H)1.36(s,(3/9)9H),1.34(s,(6/9)9H).實施例5Boc-4(R)-(8-喹啉-甲氧基)脯氨酸(5)的合成 將無水THF(20mL)中的Boc-4(R)-羥基脯氨酸(1.96g,8.5mmol)加入THF(100mL)中的NaH(1.4g,60％油，34mmol)懸浮液中。在將實施例1的甲基-8-喹啉(2.54g,11.44mmol)加入THF(30mL)之前攪拌該混合物30分鐘。在70℃加熱該反應混合物(5小時)後用溼THF仔細去除過量NaH。真空濃縮反應物、並將所得到的物質溶解在EtOAc和水中。分離鹼性含水相併在用EtOAc(150mL)提取之前用10％含水HCl酸化至pH約為5。將有機相干燥(MgSO4)、過濾並濃縮得到一種棕色油。通過閃蒸色譜法(洗脫液10％MeOH/CHCl3)純化得到為淺黃色固體的所需化合物(2.73g,86％得率)。HPLC(97.5％)；1HNMR(DMSO-d6)顯示比例為6:4的旋轉異構體數 δ12-11.4(bs,1H),8.92(2×d,J=4.14 and 4.14Hz,1H),8.38(2×d,J=8.27 and 8.27Hz,1H),7.91(d,J=7.94Hz,1H),7.77(d,J=7.0Hz,1H),7.63-7.54(m,2H),5.14(2×s,2H),4.32-4.29(m,1H),4.14-4.07(m,1H),3.52-3.44(m,2H),2.43-2.27(m,1H),2.13-2.04(m,1H),1.36 and 1.34(2×s,9H).實施例6Boc-4(R)-(7-氯喹啉-4-氧)脯氨酸(6)的製備
將市售可獲得的Boc-4(S)-羥基脯氨酸甲基酯(500mg,2.04mmol)和7-氯-4-羥基喹啉(440mg,2.45mmol)置於0℃的幹THF(10mL)中。加入三苯基膦(641mg,2.95mmol),然後緩慢加入DIAD(642mg,2.45mmol)。將混合物在室溫攪拌20小時。然後，濃縮該反應混合物，將其溶解在乙酸乙酯中，用1N HCl提取三次。用Na2CO3鹼化含水相、並用乙酸乙酯提取兩次。混合有機層、經MgSO4乾燥、過濾並濃縮得到一種黃色油。將這種油通過閃蒸色譜法純化得到498mg為白色固體的化合物(6)甲基酯，58％得率。
用甲醇(4mL)中的1M含水氫氧化鈉(1.7Ml,1.7mmol)在0℃水解這種甲基酯(400mg,0.986mmol)3小時。濃縮該溶液以去除甲醇，並用1M含水HCl中和。濃縮懸浮液至幹、並溶解在甲醇(20mL)中，過濾掉鹽、濃縮濾液得到387mg定量得率的所需化合物(6)，為白色固體。
1HNMR(DMSO-d6)(約1∶1旋光異構體的混合物)1HNMR(DMSO-d6)(ca.1∶1 mixture of rotamers)δ8.74(d,J=5Hz,1H),8.13-8.09(m,1H),7.99 and 7.98(s,1H),7.58(d,J=9Hz,1H),7.02(d,J=5Hz,1H),5.26-5.20(m,1H),4.10-4.01(m,1H),3.81-3.72(m,1H),3.59(dd,J=12,10Hz,1H),2.41-2.31(m,2H),1.34 and 1.31(s,9H).實施例7Boc-4(R)-(2-苯基-7-甲氧基喹啉-4-氧)脯氨酸(7)的合成 Boc-4(R)-(2-苯基-7-甲氧基喹啉-4-氧)脯氨酸(7)將叔丁氧化鉀(8.16g,72.7mmol)在15分鐘內按分小批加入保持在25℃的DMSO(83mL)中的Boc-4(R)-羥基脯氨酸(6.73g,29.1mmol)中，將混合物在25℃攪拌1.5小時。將氯-2-苯基-7-甲氧基喹啉3(8.61g,32.0mmol)分4批加入該反應混合物中(在15分鐘內)。將該反應混合物在25℃攪拌19小時。將所得到的懸浮液注入水(650mL)中、並用Et2O(3×150mL)洗滌混合物以去除過量的氯喹啉(後來發現EtOAc更有效)。用含水1N HCl(約1.5當量、38mL，需要43.6mL)酸化含水層至pH為4-5。通過過濾回收被沉澱的白色固體。在減壓下經P2O5乾燥溼的固體得到為淺褐色固體的脯氨酸衍生物7(12.6g,91％，含2.3％w/w DMSO):1HNMR(DMSO-d6)δ(2∶1旋轉異構體的混合物)8.27(d,J=7.0Hz,2H),8.00,7.98(2d,J=9.2,-9.2Hz,1H),7.48-7.56(m,3H),7.45,7.43(2s,1H),7.39(d,J=2.5Hz,1H),7.17(dd,J=9.2,2.5Hz,1H),5.53-5.59(m,1H),4.34-4.41(m,1H),3.93(s,3H),3.76(broads,2H),2.63-2.73(m,1H),2.32-2.43(m,1H),1.36,1.33(2s,9H).實施例8合成Boc-4(R)-(2-苯基-6-硝基喹啉-4-氧)脯氨酸(8) 將二乙基偶氮二羧酸酯(0.77ml,4.89mmol)滴加到攪拌的三苯基膦(1.28g,4.88mmol)在15ml四氫呋喃的0℃下的溶液中。在氮氣下攪拌30分鐘後，將5ml四氫呋喃中加Boc-4(S)-羥基脯氨酸甲酯(1.00g,4.08mmol),接著加市售的6-硝基-2-苯基-4-喹啉醇(1.30g,4.88mmol)在10ml相同溶劑的懸浮液。將該紅色的混合物在0℃和室溫下攪拌15分鐘。真空蒸發溶劑。剩下的油在醋酸乙酯中稀釋並用碳酸氫鈉洗兩次，一次用水，一次用鹽水。乾燥(MgSO4)有機層，過濾，真空蒸發。殘留物經矽膠色譜70∶30 v/v，己烷-醋酸乙酯)得到所需的甲基酯，為淡黃色固體(1.70g,85％)。1HNMR(CDCl3)旋轉異構體≡3∶7δ9.03(d,J=2.5Hz,1H),8.46(dd,J=9,2.5Hz,1H),8.18(d,J=9Hz,1H),8.14-8.07(m,2H),7.59-7.50(m,3H),7.19(s,1H),5.39-5.30(m,1H),4.67(t,J=8Hz,0.3H),4.61(1,J=8Hz,0.7H),4.07-4.01(m,2H),3.81(s,3H),2.89-2.73(m,1H),2.55-2.47(m,1H),1.49(s,2.7H),1.45(s,6.3H).向上述甲基酯(503mg,1.02mmol)在THF∶H2O(10∶4ml)的混合物中加氫氧化鋰單水合物(85mg,2.05mmol)。加2ml的MeOH以便得到均勻的溶液。在30分鐘內形成白色沉澱。在室溫下將所得的懸浮液再攪拌6小時。該反應混合物用10％檸檬酸的水溶液稀釋並用乙酸乙酯萃取。有機層用MgSO4乾燥，過濾，真空蒸發，得到416mg(85％)所需的酸(8)1HNMR(DMSO-d6):δ8.92-8.87(m,1H),8.47(dd,J=9,3Hz,1H),8.38-8.32(m,2H),8.19(d,J=9Hz,1H),7.77(s,1H),7.62-7.55(m,3H),5.73-5.66(m,1H),4.41(t,J=8Hz,1H),3.89-3.76(m,2H),2.83-2.72(m,1H),2.47-2.35(m,1H),1.38(s,9H).實施例9(1R,2R)/(1S,2R)1-氨基-2-乙基環丙基羧酸的混合物的合成 a)將二叔丁基丙二酸鹽(20.0g,92.47mmol)和1,2-二溴丁烷(30.0g,138.93mmol)依次加入50％NaOH水溶液(185mL H2O中含92.4g)中的苄基三乙基氯化銨(21.0g,92.19mmol)中。在室溫下用力攪拌該反應混合物過夜，然後加入冰和水的混合物。用CH2Cl2(3x)提取粗製品，接著用水(3x)和鹽水洗滌。將有機層乾燥(MgSO4)、過濾並濃縮。將殘餘物通過閃蒸色譜分析(7cm，己烷中含2-4％Et2O)得到所需環丙烷衍生物9c(19.1g,70.7mmol,76％得率)。
1HNMR(CDCl3)δ1.78-1.70(m,1H),1.47(s,9H),1.46(s,9H),1.44-1.39(m,1H),1.26-1.64(m,3H),1.02(1,3H,J=7.6Hz).b)在0℃幹醚(100mL)中的叔丁氧化鉀(6.71g,59.79mmol,4.4當量)懸浮液中加入水(270μL,15.00mmol,1.1當量)。5分鐘後，將醚(10mL)中的二酯5c(3.675g,13.59mmol)加入懸浮液中。在室溫下將反應混合物攪拌過夜，然後加入冰和水的混合物並用醚(3x)洗滌。在0℃用10％檸檬酸水溶液酸化含水層、並用AcOEt(3x)提取。用水(2x)和鹽水連續洗滌混合的有機層。常規處理(Na2SO4，過濾，濃縮)後，分離出為淺黃色油的所需酸9d(1.86g,8.68mmol,64％得率)1HNMR(CDCl3)δ2.09-2.01(m,1H),1.98(dd,J=3.8,9.2Hz,1H),1.81-1.70(m,1H),1.66(dd,J=3.0,J=8.2Hz,1H),1.63-1.56(m,1H),1.51(s,9H),1.0(t,J=7.3Hz,3H).c)在幹苯(32mL)中的酸5d(2.017g,9.414mmol)中依次加入Et3N(1.50mL,10.76mmol,1.14當量)和DPPA(2.20mL,10.21mmol,1.08當量)。將反應混合物回流3.5小時，然後加入2-三甲基甲矽烷基乙醇(2.70mL,18.84mmol,2.0當量)。使回流保持過夜，然後用Et2O稀釋反應混合物，並依次用10％檸檬酸水溶液、水、飽和含水NaHCO3水(2x)和鹽水連續洗滌。常規處理(MgSO4，過濾，濃縮)後，將殘餘物通過閃蒸色譜(5cm,10％AcOEt-己烷)純化得到為淺黃色油的所需氨基甲酸酯9e(2.60g,7.88mmol,84％得率)。MS(FAB)330(MH+)；1HNMR(CDCl3)δ5.1(bs,1H),4.18-4.13(m,2H),1.68-1.38(m,4H),1.45(s,9H),1.24-1.18(m,1H),1.00-0.96(m,5H),0.03(s,9H).d)在氨基甲酸酯5e(258mg,0.783mmol)中加入THF(940ìL,0.94mmol,0.8當量)中的1.0M TBAF溶液。4.5小時後，另外加入(626ìL,0.63mmol,0.8當量)1.0M TBAF。在室溫下將反應混合物攪拌過夜，回流30分鐘，然後用AcOEt稀釋。用水(2x)和鹽水連續洗滌該溶液。常規處理(MgSO4，過濾和濃縮)後，分離出(84mg,0.453mmol,58％得率)為淺黃色液體的所需胺9f。1HNMR(CDCl3)δ1.96(bs,2H),1.60-1.40(m,2H),1.47(s,9H),1.31-1.20(m,1H),1.14(dd,J=4.1,7.3Hz,1H),1.02(dd,J=4.1,9.2Hz,1H),0.94(t,J=7.3Hz,3H).實施例10叔丁基-(1R,2R)/(1S,2R)1-氨基-2-乙基環丙基羧酸鹽(來自實施例9)的化學拆分 用1M TBAF/THF(26mL)回流處理由實施例5得到的混合物9e(8.50g,25.86mmol)45分鐘。用AcOEt稀釋冷卻的反應混合物，用水(3x)和鹽水(1x)洗滌，然後乾燥(MgSO4)、過濾並蒸發得到為淺黃色油的游離胺。將該游離胺溶解在無水CH2Cl2(120mL)中，依次加入NMM(8.5mL,77.57mmol)、化合物4(實施例4)(10.08g,27.15mmol)和HATU(11.79g,31.03mmol)。將反應混合物攪拌過夜，然後按前面所述逐步進行。通過閃蒸色譜(洗脫液-己烷∶Et2O；25∶75)分離粗製非對映異構體混合物得到白色泡沫(4.42g,64％理論得率)的二肽10a(較少極性洗脫斑)和為乳白色泡沫(4g,57％理論得率)的10b(較多極性洗脫斑)。此時分離出兩種異構體，但絕對的立體化學仍是未知的。實施例11通過與已知的叔丁基(1R-氨基-2R-乙基環丙基)羧酸鹽的相互關係確定化合物10a和10b的絕對立體化學 Montreal大學的A.Charette教授提供了具有所示絕對立體化學的化合物11a，它是通過X線結晶學(《(美國化學會雜誌》1995,117,12721)確定的。將化合物11a(13.2mg,0.046mmol)溶解在1M HCl/EtOAc(240ìL)中，並攪拌約48小時。蒸發該混合物至幹得到呈淺黃色膏的化合物11b，再按實施例10所述、使用CH2Cl2中的NMM(20.3ìL,0.185mmol)和HATU(21.1mg,0.056mmol)將該化合物與化合物4(18mg,0.049mmol)偶聯。通過閃蒸色譜(洗脫液-己烷Et2O；50∶50)純化該粗製物質得到二肽11c為一種油(7.7mg,31％)。通過TLC、HPLC和NMR對比，發現二肽11c與實施例10所得到的較低極性化合物10a是相同的，由此確定10a的絕對立體化學為(1R,2R)。實施例12(1R,2R)/(1S,2R)1-Boc-氨基-2-乙基環丙基羧酸(12a)的製備 將實施例9的氨基甲酸酯9e(2.6g,7.88mmol)在TFA中於0℃攪拌40分鐘。然後濃縮該混合物，用THF(10mL)稀釋。加入NaOH水溶液(700mg,8.8mL水中含17.5mmol)、再加入(Boc)2O(2.06g,9.44mmol,1.2當量)的THF(13mL)溶液。在室溫下攪拌該反應混合物過夜(需要時通過加入10％NaOH水溶液保持pH為8)，然後用水稀釋，用Et2O(3X)洗滌，再在0℃用10％檸檬酸水溶液酸化。用EtOAc(3x)提取含水層，再用水(2x)和鹽水連續洗滌。常規處理(MgSO4,過濾和濃縮)後，分離出所需的Boc-保護性胺基酸(12a)(788mg,3.44mmol,44％得率)。1H NMR(CDCl3)δ5.18(bs,1H),1.64-1.58(m,2H),1.55-1.42(m,2H),1.45(s,9H),1.32-1.25(m,1H),0.99(t,3H,J=7.3Hz).(1R,2R)/(1S,2R)1-Boc-氨基-2-乙基環丙基羧酸甲基酯(12b)的製備 將Boc衍生物12a(0.30g,1.31mmol)溶解在Et2O(10mL)中，並在0℃用剛剛製備的Et2O中的二偶氮甲烷處理，直至留下黃色稍過量的二偶氮甲烷。在室溫下攪拌20分鐘後，濃縮該反應混合物至幹得到為澄清無色油的12b(0.32g,100％)。1HNMR(CDCl3)δ5.1(bs,1H),3.71(s,3H),1.62-1.57(m,2H),1.55(s,9H),1.53-1.43(m,1H),1.28-1.21(m,2H),0.95(t,J=7.3Hz,3H).實施例13甲基(1R,2R)/(1S,2R)Boc-1-氨基-2-乙基環丙基羧酸鹽的酶促拆分 *使用ChiralcelOD-H柱的HPLC分析
**也可接受的其它酯(如Et)a)將實施例10的(1R,2R)/(1S,2R)1-Boc-氨基-2-乙基環丙基羧酸甲基酯(0.31g,1.27mmol)的對映異構體混合物溶解在丙酮(3mL)中，然後用水(7mL)稀釋，同時快速攪拌。在加入阿卡酶(Alcalase)[2.4L從NovoNordisk工業公司提取](300mg)之前用0.05M含水NaOH將溶液的pH調至7.5。培養過程中用NaOH穩定pH，設立pH穩定計以監控NaOH溶液的加入。40小時後用EtOAc和水(含5mL飽和NaCO3)稀釋混合物，並分離該相。用10％含水HCl酸化含水相、並用EtOAc提取、乾燥(MgSO4)、過濾並濃縮得到酸13a(48.5mg)。使用實施例10和11所述的相互關係確定絕對立體化學。b)用Et2O中的二偶氮甲烷處理等分酸13a，得到甲基酯，然後通過使用手性柱[ChiralcelOD-H,2.5％異丙醇/己烷，等度]的HPLC分析顯示(S,R)異構體的比例為51∶1。實施例14(1R,2S)/(1S,2S)1-氨基-2-乙基環丙基羧酸的合成 從實施例9所述的酸9d起始c)向CH3CN(25mL)中的9d(1.023g,4.77mmol)中依次加入DBU(860μL,5.75mmol,1.2當量)和烯丙基溴化物(620μL,7.16mmol,1.5當量)。在室溫下攪拌該反應混合物4小時，然後濃縮。用Et2O稀釋殘餘物，並依次用10％檸檬酸水溶液(2X)、水、飽和含水NaHCO3、水(2x)和鹽水洗滌。常規處理(MgSO4，過濾和濃縮)後，分離出為無色油的所需酯14a(1.106g,3.35mmol,91％得率)。MS(FAB)255(MH+)；1HNMR(CDCl3)δ5.96-5.86(m,1H),5.37-5.22(m,2H),4.70-4.65(m,1H),4.57-4.52(m,1H),1.87-1.79(m,1H),1.47(s,9H),1.45-1.40(m,1H),1.33-1.24(m,3H),1.03(t,J=7.3Hz,3H).d)將TFA(5mL)加入室溫的幹CH2Cl2(5mL)中的酯14a(1.106g,4.349mmol)中。攪拌該反應混合物1小時,然後濃縮得到14b(854mg,4.308mmol,99％得率)。MS(FAB)199(MH+)；1HNMR(CDCl3)δ5.99-5.79(m,1H),5.40-5.30(m,2H),4.71-4.62(m,2H),2.22-2.00(m,2H),1.95-1.88(m,1H),1.84-1.57(m,2H),0.98(t,J=7.3Hz,3H).e)在幹苯(14.8mL)中的酸14b(853mg,4.30mmol)中依次加入Et3N(684μL,4.91mmol,1.14當量)和DPPA(992μL,4.60mmol,1.07當量)。將反應混合物回流4.5小時，然後加入2-三甲基甲矽烷基乙醇(1.23mL,8.58mmol,2.0當量)。使回流保持過夜，然後用Et2O稀釋反應混合物，並依次用10％檸檬酸水溶液、水、飽和含水NaHCO3、水(2x)和鹽水連續洗滌。常規處理(MgSO4，過濾，濃縮)後，將殘餘物通過閃蒸色譜(5cm,10-15％AcOEt-己烷)純化得到為淺黃色油的所需氨基甲酸酯14c(1.212g,3.866mmol,90％得率)。MS(FAB)314(MH+)；1HNMR(CDCl3)δ5.93-5.84(m,1H),5.32-5.20(m,2H),5.05(bs,1H),4.60-4.56(m.2H),4.20-4.11(m,2H),1.71-1.60(m,3H),1.39-1.22(m,1H),1.03(t,J=7.6Hz,3H),0.96-0.86(m,1H),0.04(s,9H).f)在氨基甲酸酯14c(267mg,0.810mmol)中加入THF(1.62mL,1.62mmol,2.0當量)中的1.0M TBAF溶液。在室溫下將反應混合物攪拌過夜，回流30分鐘，然後用AcOEt稀釋。用水(2x)和鹽水依次洗滌該溶液。常規處理(MgSO4,過濾和濃縮)後，分離出(122mg,0.721mmol,89％得率)為淺黃色液體的所需胺14d。
1HNMR(CDCl3)δ5.94-5.86(m,1H),5.31-5.22(m,2H),4.58(d,J=5.7Hz,2H),1.75(bs,2H),1.61-1.53(m,2H),1.51-1.42(m,2H),1.00(t,J=7.3Hz,3H),0.70-0.62(m,1H).實施例15乙基-(1R,2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙基羧酸鹽的合成 a)將市售可獲得的THF(45mL)中的亞胺15a(10.0g,37.41mmol)加到-78℃的叔丁氧化鉀(4.62g,41.17mmol,1.1當量)的THF溶液(180mL)中。將反應混合物升溫至0℃，並在此溫度下攪拌40分鐘。然後加入1,4-二溴丁烯15b(8.0g,37.40mmol)將混合物冷卻至-78℃，再在0℃攪拌1小時，加入叔丁氧化鉀(4.62g,41.17mmol,1.1當量)使之冷卻回到-78℃。最後再在0℃將反應混合物攪拌1小時、並濃縮得到化合物15c。b,c,d)將15c溶解在Et2O(265mL)中、並用1N HCl水溶液(106mL)處理。在室溫下3.5小時後，分離各層，用Et2O(2X)洗滌含水層，並用飽和NaHCO3水溶液使之鹼化。用Et2O(3X)提取所需的胺，並用鹽水洗滌混合的有機提取物。常規處理(MgSO4、過濾並濃縮)後，用二噁烷(187mL,748mmol)中的4N HCl溶液處理殘餘物。濃縮後，分離出棕色固體的鹽酸鹽15d(2.467g,12.87mmol,34％得率)。
1NMR(CDCl3)δ9.17(bs,3H),5.75-5.66(m,1H),5.39(d,J=17.2Hz,1H),5.21(d,J=10.2Hz,1H),4.35-4.21(m,2H),2.77-2.70(m,1H),2.05(dd,J=6.4,10.2Hz,1H),1.75(dd,J=6.4,8.3Hz,1H),1.33(t,J=7.0Hz,3H).實施例16(1R,2R)/(1S,2R)-1-Boc-氨基-2-乙烯基環丙基羧酸乙基酯的製備 將鹽酸鹽15d(1.0g,5.2mmol)和(Boc)2O(1.2g,5.7mmol)溶解在THF(30mL)中，並用DMAP(0.13g,1.04mmol,0.2當量)和二異丙基乙基胺(2.8mL,15.6mmol)處理。在用EtOAc(40mL)稀釋前攪拌該反應化合物24小時，依次用飽和NaHCO3(含水)、5％含水HCl和飽和鹽水洗滌。將有機相干燥(MgSO4)、過濾和濃縮，通過閃蒸色譜(15％EtOAc/己烷)得到16a(0.29g,23％)。1HNMR(CDCl3)δ5.80-5.72(m,1H)5.29-5.25(dd,J=17.2,17.2Hz,1H),5.24-5.1(bs,1H),5.10(dd,J=9.2,9.2 Hz,1H),4.22-4.13(m,2H),2.15-2.04(m,1H),1.85-1.73(bs,1H),1.55-1.5(m,1H),1.49(s,9H),1.26(t,J=7.3Hz,3H).實施例17(1R-25)/(1S,2S)1-氨基-2-乙烯基環丙基羧酸乙酯的酶促拆分 a)將外消旋衍生物17a(0.29g,1.14mmol)溶解在丙酮(5mL)中，再用水(10mL)稀釋。在加入Alcalase(300mg)之前用0.2N含水NaOH將pH調至7.2。為了在培養過程中保持pH恆定，通過pH穩定滴定計加入NaOH溶液9天以上，直至加入了理論數量的鹼。接著按實施例13所述進行酸/鹼提取，分離出未水解酯(0.15g,100％)和水解物質(0.139g,95％)。通過使用手性柱的HPLC對未水解酯分析顯示所需化合物17c的比例為43∶1，其(R,S)立體化學排布是基於如實施例10和11所述的化學上相互關係。
HPLC分析的條件ChiralcelOD-H(4.6mm×25cm)，使用2.5％異丙醇/己烷流動相的等度條件。實施例18用二苯甲醯基-D-酒石酸結晶對(1R-2S)/(1S,2S)1-氨基-2-乙烯基環丙基羧酸鹽進行拆分 將二苯甲醯基-D-酒石酸(33.5g,93.5mmol)加到EtOAc(800mL)中的粗製外消旋(1S,2S和1R,2S)1-氨基-2-乙烯基環丙基羧酸乙酯[按實施例15所述從N-(二苯基亞甲基)甘氨酸乙基乙酯(25.0g,93.5mmol)獲得]溶液中。將混合物加熱回流，在室溫下放置15分鐘，然後冷卻至0℃。30分鐘後得到白色固體。過濾該固體，用EtOAc(100mL)洗滌並風乾。將固體懸浮在丙酮(70mL)中，超聲(sonicated)並過濾(3x)。在熱丙酮中將該固體再結晶兩次(A批)。濃縮母液、在熱丙酮中將該殘餘物再結晶三次(B批)。混合(5.53g)二苯甲醯基-D-酒石酸鹽的兩批無水白色固體，並將其懸浮在Et2O(250mL)和飽和NaHCO3溶液(150mL)的混合物中。用鹽水洗滌有機層，乾燥(MgSO4)並過濾。用1N HCl/Et2O(100mL)稀釋濾液，並在減壓下濃縮。用CCl4蒸髮油性殘餘物得到為白色吸溼性固體的鹽酸1(R)-氨基-2(R)-乙烯基環丙烷羧酸乙酯(940mg,11％得率)。D25+39.5℃(c1.14 MeOH)；[α]36.525+88.5℃(c1.14 MeOH)；1HNMR(DMSO-d6)δ9.07(broad s,2H),5.64(ddd,J=17.2,10.4,8.7Hz,1H),5.36(dd,J=17.2,1.6Hz,1H),5.19(dd,J=10.4,1.6Hz,1H),4.24-4.16(m,2H),2.51-2.45(m,peakshindered by DMSO,1H),1.84(dd,J=10.0,6.0Hz,1H),1.64(dd,J=8.3,6.0Hz,1H),1.23(t,J=7.1Hz,3H)；MS(ESI)m/z 156(MH)+；通過Boc衍生物的HPLC分析(CHIRALPAK AS Column,-Hex:I-PrOH)確定對映體的純度約為91％。實施例19製備(1R,2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸甲基-鹽酸化物(19f) 製備亞胺19b將甘氨酸乙基酯鹽酸化物19a(1519.2g,10.88mol,1.0當量)懸浮在叔丁基甲基醚(8L)中。加苯甲醛(1155g,10.88mol,1當量)和無水硫酸鈉(773g,5.44mole,0.5當量)，將該混合物在冰-水浴中冷卻到5℃。在15分鐘內滴加三乙胺(2275ml,16.32mol,1.5當量)(用0.5L叔丁基甲基醚漂洗)並在室溫下將該混合物攪拌40小時。然後加冰冷水(5L)使反應停止，分離有機層。水相用叔丁基甲基醚(1L)萃取，合併的有機相用飽和NaHCO3(400ml)和水(1.6L)混合物洗滌，然後漂洗。溶液經MgSO4乾燥，減壓濃縮，將殘留的黃色油狀物真空乾燥至恆重。得到的亞胺19b為深黃色油，在-20℃下固化(2001g，產率96％):1HNMR(CDCl3,400MHz)δ8.30(s,1H),7.79(m,2H),7.48-7.39(m,3H),4.40(d,J=1.3Hz,2H),4.24(q,J=7Hz,2H),1.31(t,J=7Hz,3H).製備外消旋的N-Boc-(1R,2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸乙基-酯鹽酸化物19e將叔丁氧基鋰懸浮在無水甲苯(60ml)中。在無水甲苯(30ml)中溶解亞胺19b(5.020g,26.3mmol,1.05當量)和二溴醯胺19c(5.348g,25mmol,1當量)，並將該溶液在30分鐘內滴加到室溫攪拌的LiOtBu溶液中。滴完後，將該深紅色混合物再攪拌10分鐘，加水(50ml)和叔丁基甲基醚(TBME,50ml)驟冷。水相分出，用TBME(50ml)萃取兩次。合併有機相，加1N HCl(60ml)，並將該混合物在室溫下攪拌2小時。分離有機相，用水(40ml)萃取。然後合併水相，用鹽(35g)飽和，並加TBME(50ml)。然後將該攪拌的混合物小心加10N NaOH使其呈鹼性至pH13-14。用TBME(2×50ml)分離有機相併萃取水相。將含游離胺19d的有機萃取物合併，並加二叔丁基二碳酸酯(5.46g,25mmol,1當量)。室溫下攪拌過夜後，TLC表明有些未反應的游離胺存在。再加二叔丁基二碳酸酯(1.09g,5mmol,0.2當量)並在該溫度下回流2小時，TLC分析顯示19d已完全轉化為氨基甲酸酯19e。將溶液冷卻到室溫，經MgSO4乾燥，減壓濃縮。剩留物用10％再用20％EtOAc/己烷作稀釋劑通過閃蒸色譜法純化。純的19e是在真空下經緩慢固化得到清亮的黃色油狀物(4.014g，產率63％)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ5.77(ddd,J=17,10,9Hz,1H),5.28(dd,J=17,1.5Hz,1H),5.18(broad s,1H),5.11(dd J=10,1.5Hz,1H),4.24-4.09(m,2H),2.13(q,J=8.5Hz,1H),1.79(broad m,1H),1.46(m,1H),1.45(s,9H),1.26(t,J=7Hz,3H)19e經過酯轉移而製備標題化合物19f將乙酯19e(10.807g,42.35mmol)溶解在無水甲醇中，並加甲醇鈉在MeOH(25％w/w,9.7ml,42mmol,1當量)中的溶液。混合物在50℃下加熱2小時，此時的TLC分析表明已完成酯轉移(19e,Rf0.38,19f Rf0.34，在20％EtOAc/己烷中)。反應混合物冷卻到室溫，並用4N HCl的二噁烷溶液酸化至pH4。過濾除去沉澱的NaCl(用叔丁基甲基醚洗滌)並減壓蒸發除去。在殘留物中加叔丁基甲基醚(100ml)，過濾除去固體。濾液在減壓下蒸發並真空乾燥，得到純的甲基醚19f(10.11g，產率99％)。1HNMR(CDCl3,400MHz)δ5.75(ddd,J=17,10,9Hz,1H),5.28(dd,J=17,1Hz,1H),5.18(broad s,1H),5.11(ddd,J=10,1.5,0.5Hz,1H),3.71(s.3H),2.14(q,J=9Hz,1H),1.79(broad m,1H),1.50(broad m,1H),1.46(s,9H).實施例20(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸甲基-酯鹽酸化物的酶催化拆分 製備N-Boc-(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙烷羧酸甲基酯20a將外消旋的酯19f(0.200g,0.83mmol)溶解在丙酮(3ml)中，加水(7ml)。加0.05M NaOH(1滴)使溶液的pH至～8，然後加Alcalase2.4L(NovoNordisk Biochem,0.3g在1ml水中)。在室溫下強烈攪拌該混合物，用自動滴定器使溶液pH維持在8。在此pH下攪拌的開始4天和5天時再加(2×0.3g)酶溶液。5天後，共消耗8.3ml的0.05M NaOH。將此反應混合物用EtOAc和水稀釋，分離有機相。用鹽水洗滌後，用MgSO4乾燥有機萃取物，並真空濃縮。得到的化合物20a(0.059g,30％產率)為清亮的油1HNMR與化合物19f相同。HPLC(手性的細胞ODH,4.6×250mm，在已烷中無梯度洗脫，流速0.8mL/min)(1R,2S)-2 Rt19.3min(97％)；(1S,2R)-Rt17.0min(3％)。製備(1R,2S)-1-氨基-2-乙烯基丙烷羧酸甲酯鹽酸化物20b將化合物20a(39.36g,165.7mmol)溶於二噁烷(25ml)中，將該溶液滴加到攪拌的4NHCl的二噁烷(Aldrich,250ml)中。45分鐘後，TLC分析表明已完全去保護。減壓下除去蒸發物，殘留物用MeOH(2×100ml)共蒸發兩次。在棕色的油狀殘留物中加乙醚(300ml)和MeOH(10ml)，該混合物在室溫下攪拌過夜，形成半固體沉澱。再加MeOH(15ml)並繼續攪拌6分鐘，此時過濾收集黃色固體。產物用5％MeOH的乙醚(50ml)清洗再用乙醚(2×50ml)洗，然後真空乾燥，得到的化合物20b為黃色固體(22.60g,產率76％)。濾液(包括洗滌液)在真空下蒸發得到另外的20b為棕色油(7.82g，產率26％)。這兩部分產物的純度對於用在合成HCV蛋白抑制劑上是足夠的。[α]D25+38.2°(c1.0,MeOH)。1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.15(broad s,3H),5.65(add,J=17,10,9Hz,1H),5.36(dd,J=17,1.5Hz,1H),5.19(dd.J=10,1.5Hz,1H),3.74(s,3H),2.50(q,overlap with DMSO signal,J=9Hz,1H),1.86(dd,J=10,6Hz,1H),1.64(dd,J=8,6Hz,1H).實施例21合成1-氨基環丁基羧酸甲酯 按照Kavin Douglas；Ramaligam Konareddiar；Woodard Ronald,Synth.Commun.(1985),15(4),267-72的方法製備1,1-氨基環丁基羧酸。將胺基酸鹽(21a)(1.00g,6.6mmol)在-20℃的無水甲醇中攪拌並將混合物用無水鹽酸飽和，生成21b。將此混合物繼續攪拌4小時。過濾熱的溶液並將濾液濃縮(Rotavap,30℃)，殘留物在乙醚中研製，在過濾和乾燥後得到白色粉末(0.907g,83％)。1HNMR(400MHz,D2)δCH3O(3H,s,3.97ppm)；CH2(2H,m,2.70-2.77ppm)；CH2(2H,m,2.45-2.53ppm)and CH2(2H,m,2.14-2.29ppm).
三肽實施22在固相載體上進行偶合反應的一般方法該合成是在一個有96孔板的由Advanced Chem Tech出品的平行合成器模型中進行的。通常，用標準固相技術平行合成24肽。原料(Fmoc-氨基)環丙基(取代或不取代的)羧酸-Wang樹脂是通過DCC/DMAP偶合方法製備的(Atherton,E；Scheppard,R.C.Solid Phase Peptide Synthesis,a PracticalApproach；IRL Press:Oxford(1989)；pp131-148)。
每孔裝有100mg原料樹脂(大約0.05mmol)。該樹脂相繼用1.5ml NMP洗一次，再用1.5ml DMF洗3次。用1.5ml,25％v/v的哌啶在DMF中的溶液處理20分鐘除去Fmoc保護基。再用1.5ml DMF(4X)、MeOH(3X)和DMF(3X)清洗。在DMF(350μl)中進行偶合，使用的是400μl(0.2mmol)Fmoc-胺基酸/HOBt水合物在DMF中的0.5M溶液、400μl(0.4mmol)DIPEA在DMF中的1M溶液、和400μl(0.2mmol)TBTU在DMF中的0.5M溶液。振搖1小時後，取出孔中的樹脂，用1.5ml DMF清洗，在相同條件下將該偶合重複一次。然後如上所述清洗樹脂，用下一批胺基酸重複這樣的循環。
用兩種方法引入端基1．羧酸形式的端基，用上面所述的方法(如乙酸)，或
2．用醯化劑如酸酐或酸性氯化物。下面的例子說明用琥珀酸酐封端在Fmoc脫保護並接著洗滌後，加DMF(350μl)，接著每次用400μl琥珀酸酐的DMF溶液(0.5M,0.2mmol)和DIPEA的DMF溶液(1.0M,0.4mmol)。將樹脂攪拌2小時，再進行偶合。在合成結束時，用1.5ml分次洗滌該樹脂DCM(3X)、MeOH(3X)、DCM(3X)，並在真空下乾燥2小時。加1.5ml的TFA、H2O、DTT和TIS(92.5∶2.5∶2.5∶2.5)混合物使樹脂裂解並使伴隨產生的側鏈脫保護。振動2.5小時後，將樹脂過濾，用1.5ml DCM清洗。合併濾液並通過真空離心方法濃縮。通過製備反相HPLC，用C18柱(22mm×500mm)純化每種化合物。用MALD1-TOF質譜鑑定每種含產物的餾份，合併和凍幹。實施例23在溶液中進行偶合反應的一般方法(亦見R.Knorr et al.,TetrahedronLetters,(1989),30,1927.)將反應試劑，即游離胺(1當量)(或它的鹽酸鹽)和游離羧酸(1當量)溶解在CH2Cl2,CH3CN或DMF中。在氮氣氛下向該攪拌的溶液中加4當量N-甲基嗎啉和1.05當量偶合劑。20分鐘後，加1當量第二種反應試劑，即游離羧酸。常用和有效的偶合劑為此目的用的是(苯並三唑-1-基氧)三(二甲基氨基)磷鎓六氟磷酸鹽(HOBT)或優選的是2-(1H-苯並三唑-1-基)-N,N,N』,N』-四甲基尿四氟硼酸鹽(TBTU)或0-(7-氮雜苯並三唑-1-基)-N,N,N』,N』-四甲基尿四氟硼酸鹽(HATU)。該反應用TLC控制。反應完成後，減壓蒸發溶劑。殘留物溶於EtOAc。用10％檸檬酸水溶液，飽和NaHCO3水溶液和鹽水相繼清洗上述溶液。將有機相用MgSO4乾燥、過濾及減壓濃縮。純化殘留物是用上述的閃蒸色譜方法進行。實施例24合成化合物304 a)將酶催化拆分所得的(實施例13)(R,R)異構體Boc-Et-Acca-Ome13c(0.12g,0.49mmol)用4N HCl/二烷處理45分鐘後真空濃縮得到白色固體。在該HCl鹽(約0.49mmol)中加TBTU(0.17g,0.54mmol),Boc-4(R)-(8-喹啉-甲氧)脯氨酸5(實施例5製得)(0.18g,0.49mmol)和DIPEA(0.3ml,1.7mmol)的10ml MeCN。該混合物在室溫下攪拌3.5小時後真空濃縮。將所得物質溶於EtOAc並用飽和NaHCO3水溶液和鹽水清洗。乾燥(MgSO4)過濾和濃縮，得到24b白色固體(0.122g,50％)。
b)在室溫下用4N HCl/二烷處理24b(0.12g,0.25mmol)(30分鐘)，然後真空濃縮。所得的鹽酸鹽(大約0.25mmol)用Boc-Chg-OH·H2O(75mg,0.27mmol)和MeCN(10ml)中的TBTU(87mg,0.27mmol)，最後在0℃用DIPEA(0.15ml,0.87mmol)處理。殘留物用EtOAc稀釋，接著用飽和NaHCO3水溶液和鹽水清洗，乾燥(MgSO4)，過濾和濃縮，得到24c是灰白色固體(0.2g)。將該物質(0.14g)溶於DMSO並用製備HPLC純化凍幹後得到24c為白色固體(35mg,33％)。HPLC(98％)；MS(FAB)m/z:637.8(MH+)；HRMS的C35H48N4O7(MH+)計算值637.36011；實測值637.36250；1H-NMR(DMSO-d6)表示旋轉異構體的總體，δ8.91(2×d,J=4.1和4.1Hz,1H), δ8.91(2×d,J=4.1 and 4.1Hz,1H),8.40-8.36(m,2H),7.90(d,J=7.6Hz,1H),7.77(d,J=7.0Hz,1H),7.6-7.54(m,2H),6.80(d,J=8.6Hz,1H),5.18 and 5.16(2×s,2H),4.40(bs,1H),4.31(t,J=8.3Hz,1H),4.12(d,J=11.44Hz,1H),4.03(t,J=7.9Hz,1H),3.78-3.72(m,1H),3.56(s,3H),2.35-2.27(m,1H),2.06-1.97(m,1H),1.71-1.55(m,10H),1.53-1.38(m,2H),1.26(s,9H),1.18-1.06(m,2H),1.02-0.93(m,2H),0.89(t,J=7.3Hz,3H).化合物304
c)向24c(30mg,大約0.047mmol)中加MeOH(1ml)、THF(1ml)、和1ml水中的氫氧化鋰一水合物(12mg,0.29mmol)。將此清亮的溶液快速攪拌48小時，然後真空濃縮。將粗肽溶於DMSO中並用製備HPLC純化，凍幹後得到化合物304為白色固體(21mg,72％)。HPLC(99％)；MS(FAB)m/z:(MH+)623.3；HRMS的C34H46N4O7(MH+)計算值623.3448，實測值623.34630,1HNMR(DMSO-d6)表示旋轉異構體總體為1∶1,δ8.90(2×d,J=4.1Hz,1H),8.37(d,J=8.3Hz,1H),8.26(s,1H),7.89(d,J=8.3Hz,1H),7.77(d,J=6.7Hz,1H),7.6-7.53(m,2H),6.88 and 6.79(2×d,J=8.6 and 7.9Hz,1H),5.17 and 5.16(2×s,2H),4.43-4.35(bs,1H),4.29(t.J=8.3Hz,1H),3.82-3.71(m,1H),2.35-2.27(m,1H),2.06-1.97(m,1H),1.72-1.53(m,10H),1.52-1.44(m,2H),1.37 and 1.29(2×s,9H),1.18-1.05(m,3H),1.0-0.94(m,1H),0.91(t,J=7.3Hz,3H).實施例25合成化合物301 a)將化合物25a(=12a)(282mg,1.23mmol)懸浮於無水CH3CN(6ml)中。相繼加DBU(221μl,1.48mmol)和苄基溴化物(161μl,1.35mmol)並將該反應混合物在室溫下攪拌過夜。將混合物濃縮，用EtOAc和10％含水檸檬酸稀釋所得的油，並相繼用10％檸檬酸(2X)、飽和NaHCO3水溶液(2X)、水(2X)和鹽水(1X)清洗。用MgSO4乾燥EtOAc層，過濾和蒸乾。無色油粗產品用閃蒸色譜純化(洗脫液∶EtOAc；95∶5-90∶10)，得到無色油MS(FAB)318.2 MH-320.2 MH+342.2(M+Na)+1HNMR(CDCl3)δ7.37-7.28(m,5H),5.22-5.10(m,1H),5.19(d,J=12Hz,1H),5.16(d,J=12Hz,1H),1.60-1.40(m,4H),1.39(s,9H),1.31-1.22(m,1H),0.91(t,J=7.5,14.5Hz,3H).
b)化合物25b(368mg,1.15mmol)用4N HCl/二噁烷(6ml)按前面所述的方法處理。粗的鹽酸鹽用CH2Cl2(6ml)中的NMM(507μl,4.61mmol)和HATU(代替TBTU,525.6mg,1.38mmol)與化合物4(實施例4)(470.8mg,1.27mmol)偶合(如實施例22所述)，得到橙色油狀的外消旋二肽。該粗產物用閃蒸色譜(洗脫液-己烷∶Et2O=50∶50)得到純的二肽25c(無極性洗脫斑)白色泡沫(223mg；68％理論產率)。MS571.4 MH-573.3 MH+595.3 (M+Na)+1H NMR(CDCl3),ca.1∶1旋轉異構體混合物，δ8.03(bd,J=8Hz,1H),7.86(bd,J=7.5Hz,1H),7.82(bd,J=6.5Hz,1H),7.61(bs,0.5H),7.57-7.40(m,4H),7.31-7.21(m,5H),6.48(bs,0.5H),5.22-5.11(m,1H),5.08-4.81(m,3H),4.41-3.74(m,3H),3.49-3.18(m,1H),2.76-1.90(m,2H),1.69-1.48(m,3H),1.40(s,9H),1.40-1.23(m,2H),0.92(t,J=7.5,15Hz,3H).
c)將二肽25c(170.1mg,0.297mmol)用4N HCl/二噁烷(2ml)按前面所述的方法處理。在室溫下用NMM(130μl,1.19mmol)和HATU(代替TBTU,135.5mg；0.356mmol)在CH2Cl2(2ml)中的溶液將粗的鹽酸鹽與Boc-Chg-OH(84.1mg,0.327mmol)偶合2.75小時，然後按前面所述處理得到粗的三肽25d為象牙色泡沫(約211.4mg；100％)。MS(FAB)712.5MH+化合物301d)將粗的三肽25d(約15.4mg,0.022mmol)溶於無水乙醇(2ml)中，加10％Pd/C催化劑和乙酸鋁(兩者均估計為刮勺尖的量)。將該混合物在室溫和大氣壓下的充氫氣球形瓶中氫化過夜。反應混合物通過一個0.45μMMillex過濾器過濾，蒸乾，然後用EtOAc和10％含水檸檬酸稀釋，再用10％含水檸檬酸(1X)、水(2X)和鹽水(1X)清洗。有機層用MgSO4乾燥，過濾，蒸乾及凍幹，得到三肽301白色無水固體(11.0mg；82％)。MS(FAB)622.5 MH+644.5(M+Na)+1HNMR(DMSO),ca.1∶4旋轉異構體混合物，δ8.54 8.27(s,1H),8.06-7.99(m,1H),7.96-7.91(m,1H),7.87(d,J=8Hz,1H),7.57-7.42(m,4H),6.81(d,J=8Hz,1H),4.99(d,J=12Hz,1H),4.88(d,J=12Hz,1H),4.46-4.19(m,2H),4.17-4.02(m,2H),3.88-3.67(m,1H),2.28-2.19(m,1H),2.05-1.93(m,1H),1.73-1.43(m,8H),1.32-1.07(m,6H),1.28(s,9H),1.03-0.85(m,2H),0.91(t,J=7.5,15Hz,3H)實施例26合成化合物306 a)酸26a(180mg,0.500mmol)與胺15d(96mg,0.500mmol)用CH2Cl2(10ml)中的TBTU(192mg,0.600mmol)和DIPEA(226mg,1.75mmol)偶合20小時。濃縮該反應混合物，放入乙酸乙酯，用飽和NaHCO3洗兩次，鹽水洗一次。有機層在MgSO4上乾燥，過濾，濃縮，得到26c棕色油，不純化用於下一步。
b,c)粗的化合物26c(約0.500mmol)在HCl 4N/二噁烷(4ml)中攪拌30分鐘並濃縮至乾燥。將該固體物放入CH2Cl2(10ml)中，加DIPEA(226mg,175mmol)，接著加Boc-Chg-OH的一水合物(138mg,0.500mmol)和TBTU(192mg,0.600mmol)。在室溫攪拌溶液5小時。濃縮反應混合物，放入乙酸乙酯，用飽和NaHCO3洗兩次，鹽水洗一次。有機層在MgSO4上乾燥，過濾和濃縮，得到棕色油，用閃蒸色譜純化得到26d黃色油，204mg,64％(兩種偶合)。1HNMR(CDCl3)δ8.77-8.74(m,1H),8.14(d,J=8Hz,1H),8.02(d,J=9Hz,1H),7.69(dd,J=9,7Hz,1H),7.52(d,J=5Hz,1H),7.47(dd,J=8,7Hz,1H),6.78(d,J=5Hz,1H),5.80-5.70(m,1H),5.35-5.27(m,2H),5.14-5.07(m,2H),4.89-4.83(m,1H),4.39-4.32(m,1H),4.30-4.24(m,1H),4.20-4.07(m,2H),4.00-3.92(m,1H),3.04-2.92(m,1H),2.39-2.29(m,1H),2.16-2.04(m,1H),1.91-1.83(m,1H),1.82-1.62(m,7H),1.45-1.35(m,9H),1.27-1.07(m,8H).
d)將26d(136mg,0.214mmol)溶於THF(4ml)和MeOH(2ml)中。加LiOH水合物(72mg,1.72mmol)的含水溶液(2ml)，在室溫下將該反應混合物攪拌20小時。溶液經濃縮和製備HPLC純化，得到化合物306(無極性異構體)白色固體(25mg)。
化合物306:MS(FAB)607.4(MH+)1HNMR(DMSO-d6)δ9.16(d,J=6Hz,1H),8.55(s,1H),8.35(d,J=8Hz,1H),8.12(d,J=9Hz,1H),8.05(dd,J=8,7Hz,1H),7.76(dd,J=8,7Hz,1H),7.59(d,J=6Hz,1H),7.02(d,J=8Hz,1H),5.75-5.66(m,2H),5.19(d,J=18Hz,1H),5.07(d,J=10Hz,1H),4.55(d,J=12Hz,1H),4.43(dd,J=10,8Hz,1H),4.03(d,J=10Hz,1H),3.87-3.83(m,1H),2.66-2.59(m,1H),2.36-2.30(m,1H),1.98(dd,J=18,9Hz,1H),1.75-1.56(m,8H),1.38-1.35(m,1H),1.25-1.22(m,1H),1.09(s,9H),1.12-0.95(m,3H).實施例27合成化合物307 c)從實施8得到的酸8(505mg,105mmol)在5ml二氯甲烷中的溶液，用TBTU(376mg,1.17mmol)處理。將在7ml含(0.60ml,5.46mmol)N-甲基嗎啉的二氯甲烷中該(R,S)乙烯基AccaOEt(18)(實施例18)(279mg,1.46mmol)的HCl鹽加到前述的活化酯溶液中。所得溶液在室溫下攪拌過夜。真空蒸發溶劑。殘留物用乙酸乙酯清洗，用飽和的碳酸氫鈉溶液洗兩次，用鹽水洗一次。有機層在MgSO4上乾燥，真空蒸發。殘留物經矽膠色譜純化(60∶40v/v，己烷-乙酸乙酯)得到173mg(27％)二肽27c。
d,e)將二肽27c(70mg,0.114mmol)在3ml鹽酸在1,4-二噁烷中的4.0M溶液中的溶液在室溫下攪拌1小時(10分鐘後從反應中取出沉澱)。真空除去溶劑。將1.5ml乙腈中稀釋的胺的鹽酸鹽(0.114mmol)通過加65μl(0.591mmol)N-甲基嗎啉使其中和。將該Boc Chg·H2O(39mg,0.142mmol)在1.5ml乙腈中的溶液用TBTU(46mg,0.143mmol)處理，然後將其加到前面的胺溶液中。所得溶液在室溫下攪拌(2天)。真空除去溶劑。用乙酸乙酯稀釋的殘留物，用飽和的碳酸氫鈉溶液洗兩次，鹽水洗一次。有機層在MgSO4上乾燥，過濾並真空蒸發。得到86mg(100％)三肽27e。該粗化合物不經進一步處理用於下一步。
f)向三肽27e(86mg,0.114mmol)在5ml THF∶H2O(2.5∶1)混合物的溶液中加氫氧化鋰一水合物(22mg,0.524mmol)。再加0.25ml MeOH，得到均勻的溶液。將所得溶液在室溫下攪拌過夜，然後真空蒸發溶劑。殘留物在水和EtOAc之間分配。含水層用1MHCl酸化，然後用乙酸乙酯萃取兩次。從第一次萃取出來的乙酸乙酯中已檢查出有所需的化合物。將該有機層乾燥(MgSO4)，過濾和真空蒸發，得到69mg粗酸，用製備HPLC方法將它純化。將該化合物溶於MeOH(4ml)並注射在平衡的Whatman Partisil 10-ODS-3(2.2×50cm)C18反相柱上(λ=230nm，溶劑A=0.06％ TFA/H2O，溶劑B=0.06％TFA/CH3CN)。純化程序20％-70％溶劑B,60分鐘。用分析的HPLC分析各級份。收集所需的級份，凍幹得到50mg(60％)所需的三肽307，白色非晶形固體。
化合物307:1HNMR(DMSO-d6)旋轉異構體～2∶8δ8.86(d,J=2.5Hz,1H),8.85(s,0.2H),8.64(s,0.8H),8.49(dd,J=9.5,3Hz,0.2H),8.45(dd,J=9.2Hz,0.8H),8.39-8.33(m,2H),8.20(d,J=9.5Hz,0.2H),8.18(d,J=9.5Hz,0.8H),7.81(s,0.2H),7.78(s,0.8H),7.64-7.56(m,3H),6.87(d,J=8Hz,0.8H),6.36(d,J=9Hz,0.2H),5.82-5.67(m,2H),5.27-5.17(m,1H),5.09-5.03(m,1H),4.73(t,J=8Hz,0.2H),4.55(dd,J=10,7.5Hz,0.8H),4.49-4.40(m,1H),4.00-3.95(m,1H),3.83-3.76(m,1H),2.87-2.80(m,0.2H),2.69-2.62(m,0.8H),2.39-2.26(m,1H),2.08-2.00(m,1H),1.75-1.41(m,7H),1.37(s,1.8H),1.32-1.27(m,1H),1.17-0.82(m,5H),0.94(s,7.2H).實施例28合成化合物311 化合物311是用實施例24的方法、用相應的結構單元製備的。化合物3101HNMR(DMSO-d6)δ8.98(d,J=6Hz,1H),8.52(s,1H),8.24(d,J=9Hz,1H),8.08(d,J=2Hz,1H),7.63(d,J=9Hz,1H),7.37(d,J=6Hz,1H),6.98(d,J=8Hz,1H),5.75-5.66(m,1H),5.57(brs,1H),5.24-5.19(m,1H),5.08-5.01(m,1H).4.57-4.40(m,2H),4.00-3.96(m,1H),3.82(dd,J=9.8Hz,1H),2.59-2.54(m,1H),2.32-2.26(m,1H),1.99(dd,J=17,9Hz,1H),1.74-1.55(m,8H),1.37(s,1H),1.26-1.22(m,1H),1.14-1.08(m,9H),1.02-0.91(m,3H).實施例29合成化合物302 化合物302是用實施例27的方法，用相應的結構單元製備的。1HNMR(DMSO-d6)δ8.34(s,1H),8.04-8.01(m,1H),7.94-7.92(m,1H),7.87(d,J=8Hz,1H),7.54-7.50(m,3H),7.45(dd,J=17,8Hz,1H),7.22(d,J=8Hz,1H),4.94(dd,J=55,12Hz,2H),4.34(s,1H),4.27(dd,J=8,8Hz,1H),4.16(d,J=11Hz,1H),4.07(dd,J=8,8Hz,1H),3.72-3.65(m,2H),3.59-3.54(m,1H),2.24-2.18(m,1H),2.02-1.95(m,2H),1.75-1.70(m,1H),1.53-1.44(m,2H),1.32-1.27(m,1H),1.21-1.17(m,1H),0.96-0.85(m,10H),0.80-0.77(m,5H),0.62-0.57(m,1H).實施例30合成化合物308 化合物308是用實施例27方法,用相應的結構單元製備的。1HNMR(DMSO-d6)旋轉異構體≡2∶8δ8.77(s,0.2H),8.45(s,0.8H),8.13(d,J=8.5Hz,0.8H),8.03(d,J=8.5Hz,0.2H),7.89-7.83(m,1H),7.55-7.37(m,4H),7.05-6.59(m,1H),6.95(d,J=8 Hz,0.8H),6.26(d,J=8.5Hz,0.2H),5.81-5.64(m,1H),5.33-5.28(m,1H),5.26-5.15(m,1H),5.08-5.02(m,1H),4.60(t,J=7.5Hz,0.2H),4.38-4.27(m,1.8H),4.09-3.91(m,1.8H),3.74(dd,J=12.5,4Hz,0.2H),2.69-2.60(m,0.2H),2.50-2.40(m,1H),2.36-2.28(m.0.2H),2.23-2.14(m,0.8H),2.05-1.97(m,0.8H),1.76-1.44(m,7H),1.37(s,1.8H),1.29(s,7.2H),1.28-1.20(m,1H),1.16-0.88(m,5H).實施例31合成化合物309 化合物309是用實施例27方法,用相應的結構單元製備的。1HNMR(DMSO-d6)旋轉異構體≡2∶8δ8.75(s,0.2H),8.50(s,0.8H),7.89-7.78(m,3H),7.50-7.44(m,1H),7.42-7.32(m,2H),7.17-7.09(m,0.8H)7.08-7.03(m,0.2H),6.79(d,J=8.5Hz,0.8H),6.33(d,J=9Hz,0.2H),5.81-5.65(m,1H),5.30-5.16(m,2H),5.10-5.02(m,1H),4.56(t,J=7.5Hz,0.2H),4.33(t,J=8Hz,0.8H),4.10-3.90(m,2.8H),3.74-3.68(m,0.2H),2.45-2.37(m,1H),2.34-2.17(m,1H),2.05-1.97(m,1H),1.76-1.48(m,7H),1.37(s,1.8H),1.23(s,7.2H),1.21-0.88(m,6H).實施例32合成化合物305 化合物305是用實施例27方法,用相應的結構單元製備的。1HNMR(DMSO-d6)旋轉異構體(1∶9)δ8.68(s,0.1H),8.43(s,0.9H),8.04-8.00(m,1H),7.95-7.91(m,1H),7.87(d,J=8.5Hz.1H),7.57-7.49(m,3H),7.47-7.42(m,1H),6.82(d,J=8.5Hz,0.9H),6.21(d,J=8.5Hz,0.1H),5.80-5.64(m,1H),5.21(dd,J=17,2Hz,0.1H),5.18(dd,J=17,2Hz,0.9H),5,06(dd,J=10.5,2Hz,1H),5.02-4.85(m,2H),4.43(t,J=7.5Hz,0.1H),4.34(brs,1H),4.23(t,J=8.5Hz,0.9H),4.16-4.05(m,1.8H),3.89-3.82(m,0.2H),3.74(dd,J=11,3.5Hz,0.9H),3.53(dd,J=12.5,4Hz,0.1H),2.30-2.21(m,1H),2.02-1.94(m,2H),1.74-1.38(m,7H),1.36(s,0.9H),1.28(s,8.1H),1.25-0.87(m,6H).實施例33合成化合物303 化合物303是用實施例27方法，用相應的結構單元製備的。1HNMR(DMSO-d6)δ8.29(s,1H),8.04-8.01(m,1H),7.94-7.92(m,1H),7.87(d,J=8Hz,1H),7.56-7.52(m,3H),7.46(dd,J=8,7Hz,1H),7.19(d,J=9Hz,1H),5.01(d,J=12Hz,1H),4.86(d,J=12Hz,1H),4.34(br.s,1H),4.24(t,J=8Hz,1H),4.18-4.09(m,2H),3.74-3.53(m,3H),2.24-2.18(m,1H),2.04-1.95(m,1H),1.74-1.45(m,10H),1.31-1.13(m,4H),0.96-0.86(m,7H),0.79-0.76(m,5H).實施例34合成化合物403 a)P2與P1偶合將7(34a)(170mg,0.355mmol)的甲基酯衍生物在50％THF甲醇(4ml)和含水LiOH(1M,1ml)在室溫下攪拌1小時。濃縮該溶液(旋轉蒸發，30℃)，將殘留物酸化到pH6，凍幹溶液。所得的粉末在無水DMF(3ml)在DIEA(0.4ml)存在下攪拌，接著依次加1,1-氨基環丁基羧酸甲酯鹽酸化物(34b)(140mg,0.845mmol)和TBTU(134mg,0.417mmol)。室溫下攪拌18小時後，通過閃蒸色譜，在矽膠(230-400目)上用1∶2乙酸乙酯-己烷進行，得到橙色油(98mg，經HPLC後純度90％)。
b)P1-P2與P3偶合 將二肽34b(97mg,90％,0.155mmol)在室溫下在4N HCl-二噁烷(5ml)中攪拌1小時。然後將溶液濃縮到幹(旋轉蒸發，高真空)得到米黃色固體。將該物質在室溫乾燥DMF(2ml)中在DIEA(0.4ml)存在下攪拌，接著加L-Boc-Tbg(80mg,0.35mmol)和TBTU(112mg,0.35mmol)。室溫下攪拌2天後，將溶液倒在乙酸乙酯中，用5％含水碳酸鉀產生游離鹼。處理有機相得到黃色油狀殘留物。將此物質在矽膠柱(230-400目)上用1∶2 3∶1 v/v乙酸乙酯∶己烷的閃蒸色譜純化，得到40mg油，經HPLC勻化。
最後，將該甲基酯(40mg)在1N氫氧化鉀(2ml)的甲醇(4ml)中在RT下攪拌3小時。混合物濃縮(旋轉蒸發，30℃)，酸化至pH4(用2N鹽酸)。在C18柱上用梯度為0-50％含水乙腈(0.1％TFA)在220nm上通過製備HPLC進行純化。收集各級份，濃縮至一半體積，凍幹，得到403化合物，白色鬆散的固體(10mg)。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ旋轉異構體混合物NH+(1H,s,8.6ppm),CH(3H,m,8.2ppm),Ph(5H,寬s,7.66 7.53ppm),CH(1H，寬，7.22ppm),NH(1H,d,J=7.6Hz.6.71ppm),CHO(1H，寬s,5.76ppm),CH(2H,m,4.58-4.49ppm),CH(1H,m,4.04ppm),CH3O(3H,s,3.97ppm),CH(1H,d,3.86ppm),CH(7H，非常寬，1.8-2.6ppm),Boc基(9H,s,1.25ppm) 和叔丁基(9H,s,0.97ppm).
MS在m/e 675處顯示M+H+(100％)。
HPLC在18.9分鐘時峰值為98％。實施例35合成化合物333(表3) 將間甲氧基苯胺(35a)(9.15ml,81.4mmol)和二甲基乙炔基二羧酸酯(35b)(10.0ml,81.3mmol)在160ml甲醇中的溶液回流加熱2小時。真空除去溶劑，殘留物用閃蒸柱色譜(90∶10己烷-乙酸乙酯)純化。得到化合物35c(17.0g,79％產率)，橙色油。1HNMR(CDCl3)δ9.62(broad s,1H),7.17(dd,J=7 and 8.5Hz,1H),6.66-6.62(m,1H),6.49-6.45(m,2H),5.38(s,1H),3.77(s,3H),3.74(s,3H),3.71(s,3H). 將二苯基醚(50ml)在砂浴中加熱至內部溫度約250℃。將二醚加成物(35c)(7.5g,28.3mmol)(溶在5ml二苯醚中)在2分鐘內加到沸騰的溶劑中。加熱維持5分鐘，然後使反應混合物冷卻到室溫。迅速沉澱出米黃色固體。將該固體過濾，用甲醇研製，得到4.1g(62％產率)的所需化合物35d。1HNMR(DMSO-d6)δ7.97(d,J=9Hz,1H),7.40(d,J=2Hz,1H),6.96(dd,J=9和2Hz,1H),6.55(s,1H),3.95(s,3H),3.84(s,3H). 將順式4-羥基-左旋-脯氨酸衍生物(35e)(1.71g,5.33mmol)、4-羥基喹啉衍生物(35f)(1.25g,5.36mmol)和三苯基膦(2.8g,10.68mmol)在75ml THF中的溶液冷卻至0℃，滴加(約用1小時)DEAD(1.70ml,10.80mmol)。然後將該反應混合物緩慢溫熱至室溫並連續攪拌過夜。真空蒸去溶劑，殘留物用閃蒸色譜(70∶30乙酸乙酯-己烷)純化。得到化合物35g(0.7純的化合物35g和1.8g沾汙了大約50％三苯基磷酸鹽氧化物的化合物35g)，白色固體。1H NMR(CDCl3)旋轉異構體(4∶6)δ8.04(d,J=9Hz,1H),7.54(d,J=2.5Hz,1H),7.40-7.32(m,6H),7.23(dd,J=9和2.5Hz,1H),5.33-5.13(m,3H),4.66(t,J=7.5Hz,0.4H),4.54(t.J=8Hz,0.6H),4.07(s,3H),3.94(s,3H),4.04=3.80(m,2H),2.78-2.65(m,1H),2.47-2.34(m,1H),1.45(s,3.6H),1.37(s,5.4H). 向脯氨酸苄基酯衍生物(35g)(0.70g,1.31mmol)在甲醇-乙酸乙酯(10ml-10ml)昆合物溶液中加100mg的10％Pd/C。所得懸浮液在室溫下和氫氣氛下攪拌11/2小時。然後在Millex-Hv Millipore(0.45μm過濾器單元)上過濾，真空蒸發溶劑。得到所需化合物酸35h(0.59g)的定量產率。1HNMR:(CDCl3)旋轉異構體70∶30δ8.06(d,J=9.5Hz,0.3H),8.01(d,J=9Hz,0.7H),7.56(d,J=2Hz,1H),7.44(寬s,0.7H),7.41(寬s,0.3H),7.24(dd,J=9and 2.5Hz,1H),5.31-5.25(m,1H),4.67(t,J=7.5Hz,0.7H),4.55(t,J=7.5Hz,0.3H),4.08(s,3H),3.95(s,3H),4.04-3.80(m,2H),2.83-2.72(m,1H),2.71-2.47(m,1H),1.46(s,9H). 將胺35i(215mg,1.21mmol)在7ml乙腈中的鹽用0.95ml DIEA(5.45mmol)處理。然後將該溶液加到酸35h(590mg,1.32mmol)和TBTU(389mg,1.21mmol)在5ml CH3CN的溶液中，在室溫下將所得溶液攪拌過夜。真空蒸發溶劑，殘留物用乙酸乙酯稀釋，用飽和碳酸氫鈉溶液洗兩次，用鹽水洗一次，然後用MgSO4乾燥。真空除去溶劑，殘留物通過閃蒸柱色譜(75∶25AcOEt-己烷)純化，得到527mg(70％產率)所需的二肽(35j)。1HNMR:(CDCl3)δ8.01(d,J=9Hz,1H),7.55(d,J=2.5Hz,1H),7.45(s,1H),7.22(dd,J=9 and 2.5Hz,1H),5.81-5.71(m,1H),5.36-5.28(m,2H),5.18-5.12(m,1H),4.61-4.45(m,1H),4.07(s,3H),3.94(s,3H),3.91-3.74(m,2H),3.72(s,3H),2.99-2.84(m,1H),2.49-2.34(m,1H),2.20-2.08(m,1H),1.97-1.84(m,1H),1.58-1.52(m,1H),1.44(s,9H). 將雙酯35j(716mg,1.25mmol)在THF∶MeOH=1.5ml∶1.5ml混合物中的溶液冷卻至0℃，然後用NaOH水溶液1M(1.25ml,1.25mmol)處理。0℃下攪拌1小時後，加三滴冰醋酸中和NaOH。真空蒸發溶劑，在泵上乾燥幾小時。 將酸35k的鈉鹽(1.25mmol)和Et3N(0.19ml,1.36mmol)在8ml THF中的溶液冷卻到0℃，加異丁酸氯甲酸酯(0.18ml,1.39mmol)。40分鐘後，加重氮甲烷(9ml,6.30mmol)並將所得溶液在0℃攪拌30分鐘，在室溫攪拌2小時。真空除去溶劑，殘留物用乙酸乙酯稀釋，用飽和NaHCO3洗兩次，鹽水洗一次，用MgSO4乾燥，真空蒸去溶劑，殘留物經閃蒸柱色譜(50∶50己烷/AcOEt)純化得到378mg(52％產率)所需的重氮丙酮351。1HNMR:(CDCl3)δ8.00(d,J=9Hz,1H),7.42(s,1H),7.35(d,J=2.5Hz,1H),7.20(dd,J=9 and 2.5Hz,1H),6.92(s,1H),5.81-5.71(m,1H),5.35-5.28(m,3H),5.17-5.13(m,1H).4.61-4.40(m,1H),3.97(s,3H),3.96-3.74(m,2H),3.72(s,3H),2.94-238(m,2H),2.18-2.06(m,1H),1.98-1.84(m,1H),1.57-1.52(m,1H),1.42(s,9H). 向冷卻(0°)的重氮酮35l(0.37g,0.642mmol)在15ml THF溶液中加0.25ml HBr 48％。所得黃色溶液在0°攪拌1小時。反應混合物在乙酸乙酯與飽和NaHCO3之間分配。有機相用NaHCO3洗一次以上，用MgSO4乾燥。真空蒸發溶劑後，分離0.36g(90％產率)α-溴酮35m。 將上述α-溴酮35m(170mg,0.271mmol)在10ml異丙醇的倍液用1-乙醯基-2-硫脲(64mg,0.542mmol)。所得溶液在75℃下加熱1小時。真空除去溶劑。殘留物用乙酸乙酯稀釋並用NaHCO3飽和溶液洗兩次，用鹽水洗一次，用MgSO4乾燥。真空蒸發溶劑，得到182mg(＞100％)粗物質35n。 將二肽35n(145mg,0.223mmol)用3ml的HCl在二噁烷中溶液處理。所得溶液在室溫下攪拌1小時。真空除去溶劑，殘留物用泵乾燥。
將胺35O在5ml CH3CN中的鹽用195μl(1.12mmol)DIEA處理。然後將此溶液加到Boc-叔丁基甘氨酸(103mg,0.446mmol)和HATU(186mg,0.489mmol)在3ml CH3CN中的溶液中。反應混合物在室溫中攪拌過夜。真空蒸發CH3CN。殘留物用乙酸乙酯稀釋，用飽和NaHCO3溶液洗兩次，鹽水洗一次，用MgSO4乾燥。除去溶劑後，得到274mg粗的三肽35P(＞100％)。 將三肽35P(56mg,0.0733mmol)在4ml的4M HCl的二噁烷溶液攪拌2小時。真空除去溶劑，殘留物用泵抽乾。
得到的胺鹽溶於4ml CH2Cl2中，用0.13ml DIEA(0.746mmol)處理接看用26mg三光氣(0.0876mmol)處理。孵育3小時後，加1,2,2-三甲基丙基胺(20mg,0.146mmol)(用Moss N.,Gauthier J.,Ferland J.M.,Feb.1995,Synlett.(2),142-144所述方法合成)。移去冰浴，在室溫下將反應混合物攪拌過夜。真空除去CH2Cl2。殘留物用乙酸乙酯稀釋，用NaHO3飽和溶液洗兩次，鹽水洗一次，MgSO4乾燥，得到60mg(≈100％)所需脲35g。 將甲基酯35g(57mg,0.0721mmol)在THF∶H2O(2.5ml∶1ml)混合物中的溶液用固體LiOH·H2O(25mg,0.595mmol)處理並加1ml MeOH使溶液澄清。室溫下攪拌4小時後，加1M HCl溶液使反應中和。真空除去溶劑，殘留物用製備色譜純化。該化合物溶於2.5ml MeOH，注射到平衡的Whatman Partisil 10-ODS-3(2.2×50cm)C18反相柱。純化程序20ml/nm線性梯度，λ220nm，在10％A注射至60％A,60分鐘，A:0.06％TFA/CH3CN；B:0.06％；TFA/H2O。各級份用分析HPLC進行了分析。將收集的產物凍幹，得到15mg化合物333，灰白色固體(27％產率)。1HNMR:(DMSO-d6)δ8.88(s,0.2H),8.84(d,J=4.5Hz,0.2H),8.68(d,J=8.5Hz,0.H),8.56(s,0.8H),8.40-8.13(m,1,5H),7.96(d,J=9.0Hz,0.2H),7.72-7.44(m,2.4H),7.35-7.09(m,1.2H),6.98(d,J=9Hz,0.2H),6.15(d,J=9Hz,0.2H),6.06(d,J=9Hz,0.8H),5.93(d,J=9.5Hz,0.24H),5.86(d,J=9Hz,0.8H),5.79-5.67(m,1H),5.69-5.44(m,1H),5.24-5.14(m,1H),5.09-5.01(m,1H),4.50-4.35(m,2H),4.24(d,J=9.0Hz,0.2H),4.20(d,J=9.0Hz,0.8H),4.06-3.98(m,2H),3.95(s,3H),3.77-3.60(m,2H),2.58-2.50(m,1H),2.33-2.28(m,1H),2.22(s,2.4H),2.21(s,0.6H),2.02(q,J-9Hz,1H),1.56-1.38(m,1H),1.28-1.22(m,1H),0.97(s,9H),0.83(d,J=6Hz,3H),0.72(s,9H).MS(FAB)778.3(m+H)+,776.3(M-H)-.實施例36重組HCV NS3蛋白酶1b型的克隆、表達和純化通過外部合作(Bernard Willems MD,Hópital St-Luc,Montr殫1,Canada和Dr.Donald Murphy,Laboratoire de SantéPublique du Qu bec,Ste-Anna deBellevue,Canada)獲得感染HCV的患者的血清。從通過血清RNA的逆轉錄-PCR(RT-PCR)獲得的DNA片段並使用根據其它1b系基因型之間的同源性所選擇的特異性引物，構建HCV基因組的基因工程全長cDNA模板。由整個基因組序列的確定，根據Simmonds等(《臨床微生物學雜誌》(1993),31,1493-1503)的分類將1b基因型排布於HCV分離物。非結構區域NS2-NS4B的胺基酸序列顯示93％以上與HCV 1b基因型(BK、JK和483分離物)相同，88％與HCV 1a基因型(HCV-1分離物)相同。通過PCR產生編碼多蛋白前體(NS3/NS4A/NS4B/NS5A/NS/5B)DNA片段，並將其引入真核生物表達載體。瞬時轉染後，通過成熟NS3蛋白的存在、使用蛋白質印跡分析說明由HCV NS3蛋白酶介導的多蛋白加工。沒有觀察到成熟NS3蛋白伴有含突變S1165A的多蛋白前體的表達，其中的突變S1165A可使NS3蛋白酶失活，這一發現進一步證實了HCV NS3蛋白酶的功能。
在pET11的細菌表達載體中克隆編碼重組HCV NS3蛋白酶(胺基酸1027-1206)的DNA片段。通過在20℃用1mM IPTG培養3小時誘導大腸桿菌BL21(DE3)pLys中的NS3蛋白酶表達。典型的發酵(18L)得到約100g溼細胞糊。將該細胞再懸浮在由25mM磷酸鈉、pH7.5 10％甘油(v/v)、1mM EDTA、0.01％NP-40的裂解緩衝液(3.0mL/g)中、並於-80℃儲藏。加入5mM DTT使細胞解凍和均化。然後在最後濃度分別為20mM和20μg/mL勻漿中加入氯化鎂和DN酶。在4℃培養25分鐘後，將勻漿在4℃超聲並以15000xg離心30分鐘。然後用1M磷酸鈉溶液調節上清液的pH至6.5。
將另外一種凝膠過濾層析步驟加到WO95/22985(本發明參考文獻)所述的2步純化方法中。簡言之，即將從細菌提取物得到的上清液載在SPHiTrap柱(Pharmacia)上，此柱在緩衝液A(50mM磷酸鈉、pH6.5 10％甘油、1mM EDTA、0.01％NP-40)中以2mL/分鐘的流速預先進行了平衡。然後用含0.15M NaCl的緩衝液A洗滌該柱，通過使用10柱體積的線性0.15-0.3M NaCl梯度洗脫蛋白酶。合併含蛋白酶的NS3組分並稀釋至0.1M的最終NaCl濃度。將酶在HiTrap肝素柱(Pharmacia)上進一步純化，該柱在緩衝液B(25mM磷酸鈉、pH7.5 10％甘油、5mM DTT、0.01％NP-40)中進行了平衡。以3mL/分鐘的流速加樣。然後用含0.15M NaCl的緩衝液B以1.5mL/分鐘的流速洗滌該柱。兩步洗滌是在含0.3或1M NaCl的緩衝液B存在時進行的。在0.3M NaCl洗滌中回收蛋白酶，並用緩衝液B稀釋3倍，再將其用於HiTrap肝素柱上、並用含0.4M NaCl的緩衝液B洗脫。最後，將含蛋白酶的NS3組分用於Superdex 75 HiLoad 16/60柱(Pharmacia)上，該柱在含0.3M NaCl的緩衝液B中進行了平衡。通過SDS-PAGE、再通過光密度測定分析判定從混合組分獲得的HCV NS3蛋白酶的純度大於95％。
該酶在-80℃下貯存並在冰上凍幹，在使用前稀釋。實施例37重組HCV NS3蛋白酶/NS4A輔因子肽放射分析測定。
根據實施例30所述的方案對酶進行克隆、表達和製備。將酶儲藏在-80℃，在用於含NS4A輔因子肽的測定緩衝液中之前將其在冰上解凍並稀釋。
將用於NS3蛋白酶/NS4A輔因子肽放射測定的底物，DDIVPC-SMSYTW，在半胱氨酸和絲氨酸殘基之間通過酶進行裂解。序列DDIVPC-SMSYTW相應於NS5A/NS5B天然裂解位點，其中P2中的半胱氨酸殘基取代了脯氨酸。在有或無抑制劑時，用重組NS3蛋白酶和NS4A肽輔因子KKGSVVIVGRIILSGRK(酶與輔因子的摩爾比1∶100)培養肽底物DDIVPC-SMSYTW和示蹤生物素-DDIVPC-SMS[125I-Y]TW。通過在過濾後的測定混合物中加入包覆親和素的瓊脂糖珠而從產品分離底物。在濾液中出現的SMS[125I-Y]TW產品數量可用於計算底物轉化的百分比和抑制百分比。A．試劑從Gibco-BRL.獲得Tris和Tris-HCl(超純的)。甘油(超純的)、MES和BSA是從Sigma購得。從Pierce獲得TCEP,DMSO來自Aldrich,NaOH來自Anachemia。
測定緩衝液50mM Tris HCl,pH7.5,30％(w/v)甘油，1mg/mL BSA,1mM TCEP(使用前所加入的TCEP是來自水中的1M貯存液)。
底物DDIVPCSMSYTW，最終濃度25μM(來自儲藏在-20℃的DMSO中的2mM貯存液，以避免氧化)。
示蹤物還原的單碘化底物生物素DDIVPC SMS[125I-Y]TW(終濃度約1nM)。
HCV NS3蛋白酶1b型，最終濃度25nM(來自50mM磷酸鈉、pH7.510％甘油、300mM NaOH,5mM DTT、0.01％NP-40中的貯存液)。
NS4A輔因子肽KKGSVVIVGRIILSGRK，最終濃度2.5μM(來自儲藏於-20℃的DMSO中的2mM貯存液)。B．方法測定是在Coster的96孔聚丙烯平板上進行的，每個孔包含測定緩衝液中的20μL底物/示蹤物；10μL±20％DMSO/測定緩衝液中的抑制劑；10μLNS3蛋白酶1b/NS4輔因子肽(摩爾比例1∶100)。
空白(無抑制劑和酶)和對照(無抑制劑)在同樣的測定平板上進行製備。
通過加入酶/NS4A肽溶液開始酶促反應，將測定混合物在23℃在溫和的振蕩下培養40分鐘。加入10μL 0.5 NaOH，再加入10μL MES pH5.8以使酶促反應猝停。
在Millipore MADP N65過濾板上加入20μL包覆親和素的瓊脂糖珠(從Pierce購得)。將猝停的測定混合物轉移至過濾板，並在23℃在溫和的振蕩下培養60分鐘。
用Milipore Multiscreen Vacuum Manifold過濾裝置過濾該平板，將40μL濾液轉移在不透明的96孔平板上，每孔含60μL閃爍液。
用125I液體方法在Packard TopCount儀對濾液進行計數1分鐘。
採用下列等式計算抑制％100-[(抑制數-空白數)/(對照數-空白數)×100]將與希爾模型擬合的非線性曲線用於抑制-濃度數據，通過使用SAS軟體(數據軟體系統；SAS協會,Inc.Cary,N.C.)計算50％有效濃度(IC50)。實施例38全長NS3-NS4A異二聚體蛋白測定使用從HCV 1b基因型感染個體的血清(由Dr.Bernard Wilems,HōpitalSt-Luc,Montr ēal,Quēbec,Canada提供)提取的RNA、通過RT-PCR將NS2-NS5B-3』非編碼區克隆在pCR3載體(Invitrogen)上。然後通過PCR將NS3-NS4A DNA區亞克隆在pFastBacTMHTa杆狀病毒表達載體(Gibol/BRL)上。該載體序列包括編碼含六組氨酸tag的28-殘基N-末端序列的區域。將Bac-to-BacTM杆狀病毒表達系統(Gibol/BRL)用於製備重組杆狀病毒。通過在27℃以0.1-0.2感染複數用重組杆狀病毒感染106Sf21細胞/mL，來對全長成熟NS3和NS4A異二聚體蛋白(His-NS3-NS4AFL)進行表達。收穫感染的培養物48～64小時後在4℃離心。在蛋白酶抑制劑混合物存在下，將細胞粒狀沉澱在50mM NaPO4、pH7.5、40％甘油(w/v)、2mM β-氫硫基乙醇中勻漿。然後用1.5％NP-40、0.5％Triton X-100、0.5M NaCl和DN酶處理從細胞裂解物中提取His-NS3-NS4AFL。超離心後，將可溶性提取物稀釋4倍，並結合在Pharmacia Hi-Trap Ni-螯合柱上。使用50-400mM咪唑梯度，將His-NS3-NS4AFL在＞90％純形式(如SDS～PAGE所判定)中洗脫。將His-NS3-NS4AFL在-80℃貯存在50mM磷酸鈉、pH7.5、10％(w/v)甘油、0.5M NaCl、0.25M咪唑、0.1％NP-40中。將其在冰上解凍、並在使用前稀釋。
在50mM Tris-HCl、pH8.0、0.25M檸檬酸鈉、0.01％(w/v)n-十二烷基-β-D-麥芽糖甙、1mM TCEP中測定His-NS3-NS4AFL的蛋白酶活性。在23℃用1.5nM His-NS3-NS4AFL對各種濃度的抑制劑中的內部驟冷的底物氨茴內酐基-DDIVPAbu[C(O)-O]-AMY(3-NO2)TW-OH進行培養45分鐘。最終的DMSO濃度沒有超過5.25％。加入pH5.8的1M MES使反應終止。在裝有96孔平板讀數器的Perkin-Elmer LS-50B螢光計(激發波長325nm；發射波長423nm)上監測N-末端產品的螢光。
採用下列等式計算抑制％100-[(抑制數-空白數)/(對照數-空白數)×100]將與希爾模型擬合的非線性曲線用於抑制-濃度數據，通過使用SAS軟體(數據軟體系統；SAS協會，Inc.Cary,N.C.)計算50％有效濃度(IC50)。實施例39基於NS3蛋白酶細胞的測定用Huh-7細胞進行該測定，此細胞來源於肝癌的人細胞系，用2DNA構件共轉染-一種表達多蛋白的構件(叫做NS3)，該蛋白包含與按下列順序NS3-NS4A-NS4B-NS5A-tTA的tTA融合的HCV非結構蛋白；-另一種在tTA控制下表達報導蛋白、分泌鹼性磷酸酶的構件(叫做SEAP)。
必須通過用於成熟蛋白酶釋放的NS3蛋白酶使多蛋白裂解。在成熟蛋白釋放時，一般認為病毒蛋白會在內質網的膜上形成一種複合體，同時tTA將向核遷移並反式激活SEAP基因。因此，NS3蛋白酶解活性的降低將導致成熟tTA水平下降和伴隨SEAP活性降低。
為了控制化合物的其它作用，進行了平行轉染，而將僅表達tTA的構件(叫做tTA)與SEAP構件共轉染以便SEAP活性不依賴於NS3蛋白酶解活性。
測定方法使用FuGene方法(Boehringer Mannheim)將Huh-7細胞(生長在CHO-SFMII+10％FCS(胎牛血清)中)與NS3和SEAP或者與tTA和SEAP共轉染。在37℃放置5小時後，洗滌細胞，進行胰蛋白酶消化、並在含一定濃度範圍的試驗化合物的96孔平板中制板(80000細胞/孔)。為期24小時的培養後，抽取等份培養基，並用Phospha-Light試劑盒(Ttopix)測定此等份中的SEAP活性。
用SAS軟體分析關於化合物濃度的SEAP活性的百分抑制得到EC50。
然後用下列MTT測定法測定化合物的毒性(TC50)。
每孔中加入20μL MTT溶液(5mg/ml培養基)並在37℃培養4小時；去除培養基，並加入50μL 0.01N HCl+10％Triton X-100；在室溫下搖動至少1小時後在595nm波長處讀取每個孔的OD。
按與EC50同樣的方法計算TC50。實施例40特異性測定測定化合物對抗各種絲氨酸蛋白酶的特異性，這些蛋白酶為人白細胞彈性蛋白酶、豬胰腺彈性蛋白酶和牛胰腺α糜蛋白酶和一種半胱氨酸蛋白酶人肝臟B組織蛋白酶。在所有情況下均使用對每種酶特異的比色的對硝基苯胺(pNA)底物的96孔平板式方法，每種測定包括1小時於30℃的酶抑制劑預培養、然後加入底物並水解至UV Thermomax微板讀數器所測定的約30％轉化。儘可能使底物濃度保持可與KM相比的低水平、以減少底物的競爭。根據化合物的效價，其濃度可在300-0.06μM不等。每種測定的最終條件如下
·50mM Tris-HCl pH8,0.5M Na2SO4,50mM NaCl,0.1mM EDTA,3％DMSO,0.01％Tween-20與；·[100mM Succ-AAPF-pNA和250pMα糜蛋白酶]，[133μM Succ-AAA-pNA和8nM豬彈性蛋白酶]，[133μM Succ-AAA-pNA和8nM白細胞彈性蛋白酶]；或·[100mM NaHPO4pH6,0.1mM EDTA,3％DMSO,1mM TCEP,0.01％Tween-20,30μM Z-FR-pNA和5nM B組織蛋白酶(使用前在含20mMTCEP的緩衝液中激活貯存酶)]。
有關豬胰腺彈性蛋白酶的代表性例子總結如下用Biomek液體操作器(handler)(Beckman)在聚苯乙烯平底96孔平板中加入·40μL測定緩衝液(50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mM EDTA)·20μL酶溶液(50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mMEDTA,0.02％Tween-20,40nM豬胰腺彈性蛋白酶)；和·20μL抑制劑溶液(50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mMEDTA,0.02％Tween-20,1.5mM-0.3μM抑制劑，15％v/v DMSO)。
在30℃預培養60分鐘後，在每孔中加入20μL底物溶液(50mMTris/HCl pH8,0.5M Na2SO4,50mM NaCl,0.1mM EDTA,655μM Succ-AAA-pNA)，並將該反應在30℃進一步培養60分鐘，然後在UVThermomax板讀數器上讀取吸光度。將各排孔分配為對照(無抑制劑)和空白(無抑制劑和酶)。
通過液體操作器、用50mM Tris-HCl pH8,50mM NaCl,0.1mMEDTA,0.02％Tween-20,15％DMSO在分離平板上對抑制劑溶液依序進行的2倍稀釋。所有其它特異性測定按同樣方式進行。
採用下式計算抑制百分比[1-((UV抑制-UV空白)/(UV對照-UV空白)×100]將與希爾模型擬合的非線性曲線用於抑制-濃度數據，通過使用SAS軟體(數據軟體系統；SAS協會，Inc.Cary,N.C.)計算50％有效濃度(IC50)。
化合物表下表列出了本發明的代表性化合物。在實施例37測定法和實施例38測定法之一或兩者中對本發明化合物進行了測定，發現本發明化合物小於50μM(A)、5μM(B)或0.5μM(C)的IC50具有活性。
細胞中的活性和特異性本發明的一些有代表性化合物也在實施例39的基於替代細胞測定法和實施例40的一種或幾種測定法中進行了測試。例如，發現表6的化合物601的IC50在實施例37的測定法中測得50nM和實施例38的測定法中測得30nM。通過實施例39的測定法所測定的EC50為8.2μM。在實施例40的特異性測定中，發現同一化合物具有下列活性HLE＞75μM；PPE＞75μM；α-Chym.＞75μM；Cat.B＞75μM.
這些結果顯示此化合物族對NS3蛋白酶具有高度特異性並且該族化合物中某些化合物在替代細胞基測定中具有活性。
下表列出了本發明的代表性化合物。使用了下列縮寫MS質譜數據；Ac乙醯基；Bn苄基；Boc叔丁氧羰基；cHex環己基；Chg環己基甘氨酸(2-氨基-2-環己基-乙酸)；iPr異丙基；O-Bn苄氧基；Ph苯基；t-Bu叔丁基；Tbg叔丁基甘氨酸。1-or2-Np:1-或2-萘基；1-or2-NpcH2O:1-或2-萘甲氧基。 表2
表3
表4
表5
表6
表7
表8
表9
表10
權利要求
1．式(Ⅰ)化合物是外消旋體、非對映異構體、旋光異構體、或者其藥學上可接受的鹽或酯 其中B是H、C6或C10的芳基、C7-16的芳烷基；Het或(低級烷基)-Het，所有這些基團均可被C1-6基取代或不取代；C1-6烷氧基；C1-6烷醯基；羥基；羥基烷基；滷素；滷烷基；硝基；氰基；氰基烷基；可被C1-6烷基取代或不取代的氨基；醯氨基；或(低級烷基)醯胺；或者B是式R4-C(O)-的醯基衍生物；式R4-O-C(O)-的羧基；式R4-N(R5)-C(O)-的醯胺基；式R-N(R5)-C(S)-的硫醯胺基；或式R4-SO2的硫醯基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基、C3-7環烷氧基、或C4-10烷基環烷基，這些均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代；(ⅲ)可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基；(ⅳ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；R5是H或C1-6烷基；條件是當R4是醯胺基或硫醯胺基時，R4不是(ⅱ)的環烷氧基；以及Y是H或C1-6烷基；R3是C1-8烷基、C3-7環烷基、或C4-10烷基環烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代；R2是CH2-R20、NH-R20、O-R20或S-R20，其中R20是飽和或不飽和的C3-7環烷基或C4-10的(烷基環烷基)，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，或者R20是C6或C10芳基、或C7-14芳烷基，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，或者R20是Het或(低級烷基)-Het，兩者均可可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，其中每個R21各自為C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級硫烷基；磺醯基；NO2；OH；SH；滷素；滷烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-14芳烷基、Het或(低級烷基)-Het單取代或二取代的氨基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-14芳烷基、Het或(低級烷基)-Het單取代或二取代的醯氨基；羧基；羧基(低級烷基)；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，所說的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環烷基；C1-6烷氧基；可不被取代或被C1-6烷基的氨基；磺醯基；(低級烷基)磺醯基；NO2；OH；SH；滷素；滷烷基；羧基；醯胺基；(低級烷基)醯胺基；或被C1-6烷基取代或不取代的Het；R1是H、C1-6烷基、C3-7環烷基、C2-6環烯基、C2-6烷炔基，這些均可被滷素取代或不取代。
2．權利要求1的式1化合物，其中B是C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或B是Het或(低級烷基)-Het，這些均可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代。
3．權利要求1的式1化合物，其中B是R4-SO2，其中R4為C1-6烷基；醯氨基；(低級烷基)醯氨基；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基取代或不取代。
4．權利要求1的式1化合物，其中B是式R4-C(O)-的醯基衍生物，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代；(ⅳ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代。
5．權利要求1的式1化合物，其中B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基，可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代。
6．權利要求1的式1化合物，其中B是式R4-N(R5)-C(O)-的醯胺基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代；(ⅲ)可任意被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；和R5是優選H或甲基。
7．權利要求1的式1化合物，其中B是式R4-NH-C(S)-的硫醯基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基或C1-6烷氧基取代或不取代的C1- 10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基或醯氨基取代或不取代。
8．權利要求2的式1化合物，其中B是C6或C10芳基，可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代。
9．權利要求2的式1化合物，其中B是Het，可不被取代或被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、滷素、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代。
10．權利要求4的式1化合物，其中B是式R4-C(O)-的醯基衍生物，其中R4是(ⅰ)可被羧基、羥基、C1-6烷氧基取代或不取代的C1-6烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基取代或不取代；(ⅳ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基取代或不取代；或(ⅴ)Het，可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、氨基取代或不取代。
11．權利要求5的式1化合物，其中B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、醯氨基、或可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基取代。
12．權利要求6的式1化合物，其中B是式R4-N(R5)-C(O)-的醯胺基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1- 6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代；(ⅲ)可不被取代或被C1-3烷基單取代或二取代的氨基；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基、或可不被取代或被C1-6烷基取代或不取代的醯氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het，可被C1-6烷基、羥基、氨基或醯氨取代或不取代，和R5是H。
13．權利要求7的式1化合物，其中B是式R4-NH-C(S)-的硫代醯氨基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基。
14．權利要求12的式1化合物，其中B是式R4-NH-C(O)-的醯氨基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基或醯氨基取代或不取代。
15．權利要求1的式1化合物，其中B是 叔丁氧基羰基(Boc)或
16．權利要求1的式1化合物，其中Y是H或甲基。
17．權利要求16的式1化合物，其中Y是H。
18．權利要求1的式1化合物，其中R3是C1-8烷基、C3-7環烷基、或C4-10烷基環烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、乙醯氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代。
19．權利要求18的式1化合物，其中R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Ile、Val、Chg或下式的側鏈
20．權利要求19的式1化合物，其中R3是Tbg、Chg或Val的側鏈。
21．權利要求1的式1化合物，其中R2是S-R20或O-R20，其中R20是C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或CH2-Het，這些均可不被取代或被R21單取代、二取代或三取代，其中R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級硫烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或(低級烷基)-Het單取代或二取代的氨基或醯氨基；NO2；OH；滷素；三氟甲基；羧基；C6或C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所說的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級烷基)氨基；(低級烷基)醯胺基；磺醯基烷基；NO2；OH；滷素；三氟甲基；羧基或Het。
22．權利要求21的式1化合物，其中R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；氨基；二(低級烷基)氨基；(低級烷基)醯胺基；C6或C10芳基、或Het，所說的芳基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級烷基)氨基；醯氨基；(低級烷基)醯胺基；滷素；三氟甲基或Het。
23．權利要求22的式1化合物，其中R22是C1-6烷基；C1-6烷氧基；滷素；可不被取代或被低級烷基單取代或二取代的氨基；醯氨基；(低級烷基)醯胺基；或Het。
24．權利要求23的式1化合物，其中R22是甲基；乙基；異丙基；叔丁基；甲氧基；氯代基；可不被取代或被低級烷基單取代或二取代的氨基；醯氨基；(低級烷基)醯胺基；或(低級烷基)2-噻唑基。
25．權利要求21的式1化合物，其中R2選取自以下這組基團
26．權利要求21的式1化合物，其中R2是1-萘基甲氧基；2-萘基甲氧基；苄氧基；1-萘基氧基；2-萘基氧基；或可以被權利要求21所定義的R21不取代、單取代或二取代的喹啉氧基。
27．權利要求26的式1化合物，其中R2是1-萘基甲氧基；或可以被權利要求26所定義的R21不取代、單取代或二取代的喹啉氧基。
28．權利要求27的式1化合物，其中R2選自以下這組基團
29．權利要求26的式1化合物，其中R2是 其中R21A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級硫烷基；滷素；可被C1-6烷基烷基取代或不取代的氨基；或C6或C10芳基、C7-16芳烷基、或Het，所說的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C1-6烷氧基；醯氨基；(低級烷基)醯氨基；被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基；或Het；以及R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級烷基)氨基、(低級烷基)醯氨基、NO2、OH、滷素、三氟甲基、或羧基。
30．權利要求29的式1化合物，其中R21A是C6或C10芳基或Het，這些均能被權利要求30所定義的R22取代或不取代。
31．權利要求30的式1化合物，其中R21A選自以下這組基團
32．權利要求29的式1化合物，其中R2是 其中R22A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；或滷素；以及R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級烷基)氨基、(低級烷基)醯氨基、NO2、OH、滷素、三氟甲基、或羧基。
33．權利要求29的式1化合物，其中R2是 其中R22B是C1-6烷基、可被C1-6烷基取代或不取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯氨基；而R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級烷基)氨基、(低級烷基)醯氨基、NO2、OH、滷素、三氟甲基、或羧基。
34．權利要求32或33的式1化合物，其中R21B是C1-6烷氧基、或二(低級烷基)氨基。
35．權利要求32或33的式1化合物，其中R21B是甲氧基。
36．權利要求1的式1化合物，其中P1是環丁基或環丙基環，兩者均能被R1取代或不取代，其中R1是H、C1-3烷基、C3-5環烷基、或C2-4鏈烯基，這些均能被滷素取代或不取代。
37．權利要求36的式1化合物，其中P1是環丙基，以及R1是乙基、乙烯基、環丙基、1或2-溴代乙基或1或2-溴代乙烯基。
38．權利要求37的式1化合物，其中R1是乙烯基。
39．權利要求37的式1化合物，其中在碳2上的R1對1位上的羰基為順式定向，由下式代表
40．權利要求37的式1化合物，其中在碳2上的R1對1位上的羰基為反式定向，由下式代表
41．權利要求37的式1化合物，其中碳1具有R構型
42．權利要求41的式1化合物，其中所說的R1取代基和順式定向的羰基具有以下絕對構型
43．權利要求42的式1化合物，其中R1是乙基，因此在1和2位上的不對稱碳原子具有R,R構型。
44．權利要求42的式1化合物，其中R1是乙烯基，因此在1和2位上的不對稱碳原子具有R,S構型。
45．權利要求1的式1化合物或其藥學上可接受的鹽或酯，其中B是C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或Het或(低級烷基)-Het，這些均可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代，或者B是R4-SO2，其中R4為醯氨基；(低級烷基)醯氨基；C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基取代或不取代，或B是式R4-C(O)-的醯基衍生物，其中R4是(ⅰ)C1-6烷基，可被羧基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，兩者均可被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、可被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代，或者B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基取代或不取代；(ⅳ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代，或者B是式R4-N(R5)-C(O)-的醯胺基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、可被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基取代；(ⅲ)可被C1-3烷基不取代、單取代或二取代的氨基；(ⅳ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可被C1-6烷基、羥基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；以及R5是優選H或甲基，或者B是式R4-NH-C(S)-的硫醯基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基或C1-6烷氧基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、氨基或醯氨基取代；Y是H或甲基；R3是C1-8烷基、C3-7環烷基、或C4-10烷基環烷基，這些均可被羥基、C1-6烷氧基、C1-6硫烷基、乙醯氨基、C6或C10芳基、或C7-16芳烷基取代或不取代；R2是S-R20或O-R20其中R20是C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或CH2-Het，這些均可不被取代或被R21單取代或二取代，其中R21是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級硫烷基；可不被取代或被C1-6烷基、C6或C10芳基、C7-16芳烷基、Het或(低級烷基)-Het單取代或二取代的氨基或醯氨基；NO2；OH；滷素；三氟甲基；羧基；C6或C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所說的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C3-7環烷基；C1-6烷氧基；氨基；單-或二(低級烷基)氨基；(低級烷基)醯胺基；磺醯基烷基；NO2；OH；滷素；三氟甲基；羧基或Het；或R2可選自以下這組基團 或者R2是可以被上述所定義的R21不取代、單取代或二取代的1-萘基甲氧基；2-萘基甲氧基；苄氧基；1-萘基氧基；2-萘基氧基；或喹啉氧基；以及P1片段是環已基環，可被R1取代或不取代，其中R1是C1-3烷基、C3-5環烷基、或C2-4鏈烯基，這些均能被滷素取代或不取代，並且在碳2上的所述R1對於1位上的羰基為順式定向，由以下基團表示
46．權利要求45的式1化合物，其中B是C6或C10芳基，可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、羥烷基、滷素、滷烷基、硝基、氰基、氰烷基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；或B是Het，可被C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷醯基、羥基、滷素、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、或可不被取代或被C1- 6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代，或者B是R4-SO2，其中R4為C6或C10芳基、C7-14芳烷基或Het，這些均可被C1-6烷基取代或不取代；醯氨基、(低級烷基)醯氨基；或者B是式R4-C(O)-的醯基衍生物，其中R4是(ⅰ)可被羧基、羥基或C1-6烷氧基取代或不取代的C1-10烷基；或(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，兩者均可不被取代或被羥基、羧基、(C1-6烷氧基)羰基取代；或(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基取代或不取代；或(ⅴ)Het，可被C1-6烷基、羥基、醯氨基或氨基取代或不取代；或B是式R4-O-C(O)-的羧基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、或可被C1-6烷基取代或不取代的氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het或(低級烷基)-Het，兩者均可不被取代或被C1-6烷基、羥基、醯氨基、或可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基取代，或B是式R4-N(R5)-C(O)-的醯胺基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可不被取代或被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯氨基、可被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基取代；和R5是H或甲基；或R4是(ⅲ)可被C1-3烷基不取代、單取代或二取代的氨基；或(ⅲ )C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基或可被C1-6烷基取代或不取代的醯氨基取代或不取代；或(ⅴ)Het，可被C1-6烷基、羥基、氨基或醯氨基取代或不取代；或B是式R4-NH-C(S)-的硫醯基，其中R4是(ⅰ)C1-10烷基；或(ⅱ)C3-7環烷基；或Y是H；R3是叔丁基甘氨酸(Tbg)、Ile、Val、Chg或下式基的側鏈 R2是1-萘基甲氧基；或被上述定義的R21不取代、單取代或二取代的喹啉氧基，或R2是R2是 其中R21A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；C6、C10芳基或Het；低級硫烷基；滷素；可不被取代或被C1-6烷基單取代的氨基；或C6、C10芳基、C7-16芳烷基或Het，所說的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基、或Het；P1是環丙基環，其中碳1具有R構型， R1是乙基、乙烯基、環丙基、1或2-溴代乙基或1或2-溴代乙烯基。
47．權利要求46的式1化合物，其中B是式R4-NH-C(O)-的醯氨基，其中R4是(ⅰ)可被羧基、C1-6烷醯基、羥基、C1-6烷氧基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代的C1-10烷基；(ⅱ)C3-7環烷基或C4-10烷基環烷基，這些均可被羧基、(C1-6烷氧基)羰基、醯氨基、(低級烷基)醯胺基、或可不被取代或被C1-6烷基單取代或二取代的氨基取代或不取代；(ⅳ)C6或C10芳基或C7-16芳烷基，這些均可被C1-6烷基、羥基、氨基或醯氨基取代或不取代；R3是Tbg、Chg或Val的側鏈；R2是 其中R22A是C1-6烷基(如甲基)；C1-6烷氧基(如甲氧基)；或滷素(如氯)；R21B是C1-6烷基、可被C1-6烷基單取代或不取代的氨基、醯氨基、或(低級烷基)醯胺基；而R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級烷基)氨基、(低級烷基)醯氨基、NO2、OH、滷素、三氟甲基、或羧基；以及P1是
48．權利要求45的式1化合物，由下式表示 其中B,R3,R2的定義如下
49.權利要求48的化合物#111。
50.權利要求45的化合物，由下式表示 其中B,R3,R2,R1的定義如下
51.權利要求49的化合物#203。
52.權利要求45的化合物，由下式表示 其中B,R3,R2和R1的定義如下
53.權利要求52的化合物，選自化合物#307,314,317,319,321,324,325,326,327,329,331,332,333和334。
54.權利要求45的化合物，由下式表示 其中B,R3,R2和R1的定義如下
55.權利要求54的化合物，選白化合物#403,405和406。
56.權利要求45的化合物，由下式表示 其中R3的定義如下
57.權利要求56的化合物，選自化合物#501,509和510。
58.權利要求46的化合物，由下式表示 其中R3,R21A和R21B的定義如下
59.權利要求58的化合物，選自化合物#601,602,603,604,605606,607,610,611,612,615,616,617,620,621,622,625,626,627,628,629和630。
60.權利要求46的化合物,由下式表示 其中R3和R21A的定義如下
61.權利要求60的化合物，選自化合物#701,702,703,704,705,706,707,708,709和711至737。
62.權利要求45的化合物，由下式表示 其中B,R3和R22的定義如下
63.權利要求62的化合物，選自化合物#801至825,827至858,和860至873。
64.權利要求45的化合物，由下式表示 其中B的定義如下
65.權利要求45的化合物，由下式表示 其中B,X,R3,z和R21B的定義如下
66．一種藥物組合物，包含病毒學上有效量的抗C型肝炎的權利要求1的式Ⅰ化合物，或其治療上可接受的鹽或酯，並與藥學上可接受的載體介質或助劑混合。
67．一種治療哺乳動物C型肝炎病毒感染的方法，包括給該哺乳動物服用病毒學上有效量的抗C型肝炎的權利要求1的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯。
68．一種治療哺乳動物C型肝炎病毒感染的方法，包括給該哺乳動物服用病毒學上有效量的抗C型肝炎的權利要求67的組合物。
69．一種抑制C型肝炎病毒複製的方法，即將該病毒暴露於C型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制量的權利要求1的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯。
70．一種治療哺乳動物C型肝炎病毒感染的方法，即給該哺乳動物服用病毒學上有效量的抗C型肝炎的權利要求1的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯與另一種抗-HCV劑的組合物。
71．權利要求70的方法，其中所述的另一種抗-HCV劑是選自α-或β-幹擾素、病毒唑和金剛胺。
72．權利要求70的方法，其中所述的另一種抗-HCV劑包括HCV生存期中的其它目標的抑制劑，選自解旋酶、聚合酶、金屬蛋白酶或IRES。
73．一種製備式(1)的肽類似物的方法，其中P1是取代的氨基環丙基羧酸殘基，該方法包括一個選自APG-P3-P2或APG-P2的肽與下式P1中間體偶聯的步驟， 其中R1是C1-6烷基、環烷基或C2-6鏈烷基，這些均可被氫取代或不取代，CPG是羧基保護基，APG是氨基保護基，以及P3和P2均如上所定義。
74．一種製備1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物或者2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物的方法，該方法包括(適當保護的)氨基、肽或肽片段與下式的P1中間體偶聯的步驟。 其中R1是C1-6烷基、環烷基或C2-6鏈烷基，這些均可被氫取代或不取代，以及CPG是羧基保護基。
75．一種製備1)蛋白酶抑制劑肽類似物或者2)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物的方法，該方法包括(適當保護的)氨基、肽或肽片段與下式中間體偶合的步驟。 其中CPG是羧基保護基。
76．下式P1中間體的用途， 其中R1是C1-6烷基、環烷基或C2-6鏈烷基，這些均可被氫取代或不取代，以及CPG是羧基保護基，用於製備1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物或者2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物。
77．下式中間體的用途， 其中CPG是羧基保護基，用於製備1)蛋白酶抑制劑肽類似物或者2)絲氨酸HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物。
78．下式P1中間體的用途， 其中R1是C1-6烷基、環烷基或C2-6鏈烷基，這些均可被氫取代或不取代，以及CPG是羧基保護基，用於製備如上定義的式1化合物。
79．一種胺基酸類似化合物，選自下式這組
80．權利要求73、74或75的方法，其中所述的氨基保護基(CPG)選自烷基酯、芳烷基酯、和經弱鹼處理或輕度還原方法而可被裂解的酯。
81．權利要求73、74或75的方法，其中所述的氨基保護基(APG)選自醯基、芳族氨基甲酸酯基、脂族氨基甲酸酯基、環烷基氨基甲酸酯基、烷基、三烷基甲矽烷基、和含硫羥基的基團。
82．一種從(1R-2S)/(1S,2S)-1-氨基-2-乙烯基環丙基羧酸甲酯的混合物拆分對映異構體的方法，包括用酯酶處理所述的混合物得到相應的(1R-2S)對映異構體。
83．權利要求82的方法，其中所述的酯酶是阿卡酶
84．下式脯氨酸類似物的用途， 其中R21A是C1-6烷基；C1-6烷氧基；低級硫烷基；滷素；可被C1-6烷基烷基取代或不取代的氨基；C6或C10芳基、C7-16芳烷基、或Het，所說的芳基、芳烷基或Het均可被R22取代或不取代，其中R22是C1-6烷基；C1-6烷氧基；醯氨基；(低級烷基)醯胺；被C1-6烷基不取代、單取代或二取代的氨基；或Het；以及R21B是C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、二(低級烷基)氨基、(低級烷基)醯胺、NO2、OH、滷素、三氟甲基、或羧基。用於合成1)絲氨酸蛋白酶抑制劑肽類似物，2)HCV NS3蛋白酶抑制劑肽類似物，或3)式1的肽類似物。
85．一種病毒學上有效量的抗C型肝炎的權利要求1的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯在製備用於治療哺乳動物C型肝炎病毒感染的組合物中的用途。
86．一種C型肝炎病毒NS3蛋白酶抑制量的權利要求1的式Ⅰ化合物、或其治療上可接受的鹽或酯在製備用於抑制該C型肝炎病毒複製的組合物中的用途。
87．一種病毒學上有效量的抗C型肝炎的權利要求1的式Ⅰ化合物或其治療上可接受的鹽或酯與幹擾素結合在製備用於治療哺乳動物C型肝炎病毒感染的組合物中的用途。
全文摘要
式(1)化合物是外消旋體、非對映異構體、旋光異構體、或者其藥學上可接受的鹽或酯。其中B是H、C
文檔編號A61K31/13GK1323316SQ99810550
公開日2001年11月21日 申請日期1999年8月9日 優先權日1998年8月10日
發明者蒙特斯·林納斯-布魯內特, 默裡·D·貝利, 戴爾·卡梅倫, 安妮-瑪麗·福徹, 埃莉斯·吉羅, 納塔利·古德若, 特迪·哈爾莫斯, 馬克-安德烈·波帕特, 瓊·蘭考特, 揚拉·S·桑特雷佐斯, 多米尼克·M·沃尼克 申請人:貝林格爾·英格海姆加拿大有限公司