對除草劑具有增加的耐受性的植物的製作方法
2023-04-25 05:26:51 1
對除草劑具有增加的耐受性的植物的製作方法
【專利摘要】本發明涉及用於控制植物栽培位點處不合需要的植被的方法，該方法包括以下步驟：在所述位點處提供包含至少一種核酸的植物，所述核酸包含編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型羥苯基丙酮酸雙加氧酶或突變的羥苯基丙酮酸雙加氧酶(mut-HPPD)的核苷酸序列和/或編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型尿黑酸茄尼基轉移酶或突變的尿黑酸茄尼基轉移酶(mut-HST)的核苷酸序列，然後向所述植物栽培位點處施用有效量的所述除草劑。本發明還涉及包含mut-HPPD的植物及獲得此類植物的方法。
【專利說明】對除草劑具有增加的耐受性的植物
發明領域
[0001]本發明大體上涉及賦予植物對除草劑的農業水平耐受性的方法。特別地，本發明涉及對「香豆酮(coumarone)衍生物」除草劑具有增加的耐受性的植物。更具體地，本發明涉及方法和由誘變及雜交育種及轉化獲得的對「香豆酮衍生物」除草劑具有增加的耐受性的植物。
[0002]發明背景
[0003]自1990年代早期以來，抑制異戊二烯基醌質體醌及生育酚的生物合成中的關鍵酶4-羥苯基丙酮酸雙加氧酶(4-HPH) ；EC1.13.11.27)的除草劑已用於進行選擇性雜草控制。其阻斷生物合成路徑中4-輕苯基丙酮酸轉化成尿黑酸(homogentisate) (Matringe等人,2005, PestManagSc1.,第 61 卷:269-276 ；Mitchell 等人，2001, PestManagSc1.第57卷:120-128)。認為質體醌是類胡蘿蔔素生物合成中八氫蕃爺紅素去飽和酶(Phytoenedesaturase)的必需輔因子(Boeger 及 Sandmann, 1998, Pestic Outlook,第 9 卷:29_35)。其抑制作用會使植物質體醌及維生素E庫耗盡，從而導致漂白症狀。類胡蘿蔔素的損失，特別是其作為對抗光氧化作用的光系統保護劑功能的損失，會導致生長中的苗組織中的葉綠素及光合膜氧化降解。因此，葉綠體合成及功能被破壞Ooeger及Sandmann, 1998)。尿黑酸爺尼基轉移酶(homogentisate solanesyl transferase,HST)催化質體醌生物合成路徑HPH)之後的步驟。HST為異戊二烯基轉移酶，其使尿黑酸脫羧並且將來自茄尼基二磷酸酯的茄尼基轉移至尿黑酸而因此形成2-甲基-6-茄尼基-1，4-苯醌(MSBQ)，一種沿質體醌生物合成路徑的中間物。HST酶為膜結合酶且編碼其的基因包括質體靶向序列。
[0004]商品化4-HPH)抑制性除草劑的最重要化學種類包括吡唑啉酮類(pyrazolone)、三酮類(triketone)及異惡唑類(isoxazole)。抑制劑通過形成穩定離子偶極電荷轉移複合物而模擬底物4-羥苯基丙酮酸與活性位點中的酶結合亞鐵離子的結合。在4-HPH)抑制性除草劑中，三酮磺草酮(triketone sulcotrione)為此組除草劑中首個用於農業中的實例且鑑別了其作用機制(Schulz等人，1993，FEBS Lett.第318卷:162-166)。已報導三酮類是來自瓶刷形分支植物(bottlebrush plant)紅千層屬物種(Callistemon spp)的除草組分的纖精酮(Ieptospermone)的衍生物(Lee 等人 1997, Weed Sc1.第 45 卷，162-166)。
[0005]因為抑制植物中的反應會導致經處理植物的葉變白並且導致所述植物死亡，這些分子中的一些已用作除草劑(Pallett，K.E.等人1997Pestic.Sc1.5083-84)。以HPPD為靶且描述於當前現有技術中的除草劑特別地為異K惡唑類(EP418175、EP470856、EP487352、EP527036、EP560482、EP682659、美國專利號 5，424，276)，特別地異藥氟草(isoxaflutole)，其為玉米選擇性除草劑；二酮腈類(EP496630、EP496631)，特別地2_氛基_3_環丙基-1- (2-S02CH3-4_CF3苯基)丙烷-1，3-二麗及2-氛基-3-環丙基-1- (2-S02CH3-4-2, 3C12 苯基)丙烷-1，3- 二酮；諸如描述於 EP625505、EP625508、美國專利號5，506, 195中的三酮類,特別地磺草酮；或pyrazolinates。此外,在易感植物物種中，如同前述的4-HPH)抑制性漂白除草劑一般,熟知的除草劑苯吡唑草酮(topramezone)會引發相同類型的植物毒性症狀，伴有生長中的苗組織中的葉綠素損失及壞死。苯吡唑草酮屬於化學種類吡唑啉酮類或苯甲醯基吡唑類且於2006年以商業引進。當萌芽後施用時，化合物選擇性控制玉米中的廣譜一年生草及闊葉雜草。
[0006]植物對「香豆酮衍生物除草劑」的耐受性也已在許多專利中加以報導。國際申請號TO2010/029311 —般性描述HPTO核酸和/或HST核酸在植物中引發除草劑耐受性的用途。W02009/090401、W02009/090402、w02008/071918、W02008/009908 具體公開了某些「香豆酮衍生物除草劑」及「香豆酮衍生物除草劑」耐受性的植物株系。
[0007]3種主要策略可用於使植物耐受除草劑，即(I)用將除草劑或其活性代謝物轉化成無毒產物的酶(諸如對溴苯腈(bromoxynil)或對草銨膦(basta) (EP242236、EP337899)耐受性的酶)去除除草劑毒性；(2)將靶酶突變成對除草劑或其活性代謝物敏感性較小的功能性酶，諸如對草甘膦(glyphosate)耐受性的酶(EP293356、Padgette S.R.等人，J.Biol.Chem.，266，33，1991);或(3)過表達敏感性酶使得鑑於此酶的動力學常數，在植物中生產相對於除草劑足夠的靶酶量，使得具有足夠的功能性酶可用而不管其抑制劑之存在。描述了第三種策略用於成功獲得對HPH)抑制劑具有耐受性的植物(W096/38567)。US2009/0172831公開了編碼胺基酸序列的核苷酸序列，所述胺基酸序列具有使得胺基酸序列對HPro抑制劑除草化學品，特別地對三酮抑制劑特異性HPro突變體具有抗性的酶促活性。
[0008]迄今為止，現有技術尚未描述含有至少一種突變的HPro核酸的香豆酮衍生物除草劑耐受性植物。現有技術也尚未描述在除獲得HPro基因的基因組以外的基因組中含有突變的香豆酮衍生物除草劑耐受性作物植物。因此，本領域需要鑑定來自其他基因組及物種的香豆酮衍生物除草劑耐受基因。本領域也需要作物植物和具有對除草劑(諸如香豆酮衍生物除草劑)增加的耐受性及含有至少一種突變的HPro核酸的作物植物。也需要控制此類作物植物或作物植物附近雜草生長的方法。當向含有作物植物的區域或作物植物施用除草劑時，這些組合物及方法將允許使用噴霧技術。
[0009]發明概述
[0010]通過涉及控制植物栽培位點處不合需要的植被的方法的本發明解決了問題，所述方法包括以下步驟:
[0011]a)在所述位點處提供包含至少一種核酸的植物，所述核酸包含:
[0012](i)編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型羥苯基丙酮酸雙加氧酶或突變的羥苯基丙酮酸雙加氧酶(mut-HPro)的核苷酸序列，和/或
[0013](ii)編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型尿黑酸茄尼基轉移酶或突變的尿黑酸茄尼基轉移酶(mut-HST)的核苷酸序列
[0014]b)向所述位點施用有效量的所述除草劑。
[0015]此外，本發明涉及通過使用由包含SEQ ID NO:1、51、3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、
18、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、52 的核苷酸序列或其變體的核酸編碼的mut-HPPD，和/或通過使用由包含SEQ ID NO:47或49的核苷酸序列或其變體的核酸編碼的mut-HST鑑別香豆酮衍生物除草劑的方法。
[0016]所述方法包括以下步驟: [0017]a)生成包含編碼野生型或mut-HPH)的核酸的轉基因細胞或植物，其中表達野生型或 mut-HPPD ；[0018]b)向a)的轉基因細胞或植物及相同品種的對照細胞或植物施用香豆酮衍生物除草劑；
[0019]c)在施用所述測試化合物之後，測定轉基因細胞或植物及對照細胞或植物的生長或生存力，及
[0020]d)選擇使對照細胞或植物生長較之轉基因細胞或植物的生長降低的測試化合物。
[0021]另一目的涉及鑑別編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的mut-HPH)的核苷酸序列的方法，所述方法包括:
[0022]a)生成mut-HPro編碼核酸的文庫，
[0023]b)通過在細胞或植物中表達每種所述核酸並用香豆酮衍生物除草劑處理所述細胞或植物來篩選所得mut-HPH)編碼核酸的群體，
[0024]c)比較由所述mut-HPH)編碼核酸群體提供的香豆酮衍生物除草劑耐受性水平與由對照HPro編碼核酸提供的香豆酮衍生物除草劑耐受性水平，
[0025]d)選擇至少一種mut-HPH)編碼核酸，其提供較之由對照HPTO編碼核酸提供的對香豆酮衍生物除草劑的耐受性水平顯著增加的對香豆酮衍生物除草劑的耐受性水平。
[0026]在優選的實 施方案中，與由對照HPro編碼核酸提供的對香豆酮衍生物除草劑的耐受性比較，步驟d)中選出的mut-HPro編碼核酸提供至少2倍的對香豆酮衍生物除草劑的耐受性。
[0027]抗性或耐受性可通過生成包含步驟a)的文庫的核酸序列的轉基因植物並且比較所述轉基因植物與對照植物加以測定。
[0028]另一目的涉及鑑別含有編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的mut-HPH)或mut-HST的核酸的植物或藻類之方法，該方法包括:
[0029]a)鑑別植物細胞或綠藻的培養物中有效量的香豆酮衍生物除草劑，
[0030]b)用誘變劑處理所述植物細胞或綠藻，
[0031]c)使所述經誘變處理的細胞群體與a)中鑑別出的有效量的香豆酮衍生物除草劑接觸，
[0032]d)選擇在這些測試條件下存活的至少一個細胞，
[0033]e)對來自d)中選出的細胞的HPH)和/或HST基因進行PCR擴增及測序並且將此類序列分別與野生型HPro或HST基因序列比較。
[0034]在優選的實施方案中，誘變劑為甲烷磺酸乙酯。
[0035]另一目的涉及經分離的編碼mut-HPH)的核酸，該核酸優選可通過如上定義的方法鑑別。
[0036]在另一實施方案中，本發明涉及由野生型或mut-HPH)核酸轉化的植物細胞或植物，其已經被突變而獲得表達，優選地過表達野生型或mut-HPH)核酸，其中核酸在該植物細胞中的表達導致較之野生型品種的植物細胞，對香豆酮衍生物除草劑的增加的抗性或耐受性。
[0037]在優選的實施方案中，本發明的植物細胞由包含SEQ ID NO:1、51、3、4、6、7、9、10、
12、13、15、16、18、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、52 的序列或其變體或衍生物的野生型或mut-HPH)核酸轉化。
[0038]在另一實施方案中，本發明涉及包含根據本發明的植物細胞的轉基因植物，其中核酸在植物中的表達導致較之野生型品種的植物，植物對香豆酮衍生物除草劑的增加的抗性。
[0039]本發明的植物可為轉基因或非轉基因植物。
[0040]優選地，核酸在植物中的表達導致較之野生型品種的植物，植物對香豆酮衍生物除草劑的增加的抗性。
[0041]在另一實施方案中，本發明涉及由包含本發明的植物細胞的轉基因植物生產的種子，其中該種子對於較之野生型品種的種子的增加的香豆酮衍生物除草劑的抗性是純育的(true breeding)。
[0042]在另一實施方案中，本發明涉及生產較之野生型品種的植物細胞，具有對香豆酮衍生物除草劑的增加的抗性的轉基因植物細胞的方法，所述方法包括用包含野生型或mut-HPPD核酸的表達盒轉化植物細胞。
[0043]在另一實施方案中，本發明涉及生產轉基因植物的方法，其包括:(a)用包含野生型或mut-HPH)核酸的表達盒轉化植物細胞，及(b)從植物細胞生成具有對香豆酮衍生物除草劑的增加的抗性的植物。
[0044]優選地，表達盒還包含在植物中具有功能的轉錄起始調控區及翻譯起始調控區。
[0045]在另一實施方案中，本發明涉及使用本發明的mut-HPH)作為可選擇的標誌物。本發明提供鑑別或選擇經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分的方法，所述方法包括a)提供經轉化的植物細胞 、植物組織、植物或其部分，其中該經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分包含編碼如下文所述的本發明的mut-HPH)多肽的經分離的核酸，其中該多肽用作選擇標誌物，且其中該經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分可任選地包含其他分離的目的核酸山)使經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分與至少一種香豆酮衍生物抑制性化合物接觸；c)確定植物細胞、植物組織、植物或其部分是否受抑制劑或抑制性化合物影響；及(1)鑑別或選擇經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分。
[0046]本發明也體現在含有本文所述的突變的經純化的mut-HPH)蛋白質方面，所述蛋白質在設計對除草劑耐受性的其他改良的分子模造研究中是有用的。蛋白質純化方法為熟知的，且可易於使用市售產品或如例如於Protein Biotechnology, Walsh和Headon(Wiley, 1994)中示出的特別設計的方法達成。
[0047]附圖簡述
[0048]圖1:來自萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii) (Cr_HPPDla> Cr_HPPDlb) >小立碗蘚(Physcomitrella patens) (PP_HPPD1)、稻(Oryza sativa) (Osj—HPFOl)、小麥(Triticum aestivum) (Ta_HPPDl)、玉蜀黍(Zea mays) (Zm_HPPDl)、擬南芥(At_HPPD)、大豆(Glycine max) (Gm_HPPD)及葡萄(Vitis yinifera) (Vv_HPPD)的 HPF1D 酶的胺基酸序列比對及保守區；
[0049]*源於基因組測序計劃的序列。基因座ID:GRMZM2G088396
[0050]* *基於NCBI GenPept登錄號CAG25475的胺基酸序列
[0051]圖2展示用於使用HPHVHST序列所進行的大豆轉化的植物轉化載體的載體圖。
[0052]圖3展示利用表達大麥屬野生型HPro(HvHPPD，Seq ID:1/2)的轉基因擬南芥屬幼苗的萌發測定。使植物在(A)3-[2，4-二氯-3-(3-甲基-4，5-二氫異唑-5-基)苯基]-1-(2, 2- 二氣乙基)-2, 2- 二氧代_吡澱並[3,2-c]唾嚷-4-醇和(B) 1-(2,2- _-氣乙基)-2, 2-二氧代-3-(2,4,6-二氣-3-吡唳基)吡唳並[3,2_c]喔嚷-4-醇上萌發。
[0053]圖4針對表達大麥屬野生型HPH) (Seq ID:2，事件LJ387和AV4553);集胞藍細菌屬 HPPD(SeqID:20，事件 LG6156)和擬南芥屬 HPTO(Seq ID:53)突變 M335H(事件 HT1833)的轉基因TO大豆插條的除草劑噴霧測試。未經轉化的對照植物標記為野生型。所用的香豆酮衍生物除草劑為3-[2，4-二氯-3-(3-甲基_4，5-二氫異$惡唑-5-基)苯基]-1-(2，2-二氣乙基)-2, 2_ 二氧代-吡卩定並[3,2_c]喔嚷-4-醇。
[0054]序列表[0055]表1
[0056]
【權利要求】
1.用於控制植物栽培位點處不合需要的植被的方法，所述方法包括以下步驟: a)在所述位點處提供包含至少一種核酸的植物，所述核酸包含: (i)編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型羥苯基丙酮酸雙加氧酶或突變的羥苯基丙酮酸雙加氧酶(mut-HPro)的核苷酸序列和/或 (?)編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的野生型尿黑酸茄尼基轉移酶或突變的尿黑酸茄尼基轉移酶(mut-HST)的核苷酸序列 b)向所述位點施用有效量的所述除草劑。
2.根據權利要求1的方法，其中⑴的核苷酸序列包含SEQID N0:l、51、3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、52 的序列、或其變體或衍生物。
3.根據權利要求1的方法，其中(ii)的核苷酸序列包含SEQID NO:47或49的序列、或其變體或衍生物。
4.根據權利要求1至3中任一項的方法，其中所述植物包含至少一種額外的異源核酸，所述異源核酸包含(iii)編碼除草劑耐受性酶的核苷酸序列。
5.根據權利要求1至4中任一項的方法，其中香豆酮衍生物除草劑連同一種或多種其他HPPD-和/或HST靶向除草劑一起施用。
6.用於鑑別香豆酮衍生物除草劑的方法，所述方法通過使用由包含SEQID NO:U5U3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、52 的核苷酸序列、或其變體或衍生物的核酸編碼的mut-HPPD，和/或通過使用由包含SEQ ID NO:47或49的核苷酸序列、或其變體或衍生物的核酸編碼的mut-HST來進行鑑別。
7.根據權利要求6的方法，包括以下步驟: a)生成包含編碼mut-HPH)的核酸的轉基因細胞或植物，其中表達mut-HPH)； b)向a)的轉基因細胞或植物及向相同品種的對照細胞或植物施用香豆酮衍生物； c)在施用所述測試化合物之後，測定轉基因細胞或植物 及對照細胞或植物的生長或生存力，及 d)較之轉基因細胞或植物的生長，選擇賦予對照細胞或植物降低的生長的測試化合物。
8.鑑別編碼對香豆酮衍生物除草劑具有抗性或耐受性的mut-HPH)的核苷酸序列的方法，所述方法包括: a)生成mut-HPH)編碼核酸的文庫， b)通過在細胞或植物中表達每種所述核酸並用香豆酮衍生物處理所述細胞或植物，來篩選所得mut-HPH)編碼核酸的群體， c)比較由所述mut-HPH)編碼核酸群體提供的「香豆酮衍生物」耐受性水平與由對照HPPD編碼核酸提供的「香豆酮衍生物」耐受性水平， d)較之由對照HPH)編碼核酸提供的對「香豆酮衍生物」的耐受性水平，選擇提供對「香豆酮衍生物」的耐受性水平顯著增加的至少一種mut-HPH)編碼核酸。
9.根據權利要求8的 方法，其中較之由對照HPro編碼核酸所提供的對香豆酮衍生物除草劑的耐受性，在步驟d)中選擇的mut-HPro編碼核酸提供至少2倍的對香豆酮衍生物除草劑的耐受性。
10.根據權利要求8或9的方法，其中通過生成包含步驟a)的文庫的核酸序列的轉基因植物並比較所述轉基因植物與對照植物來測定抗性或耐受性。
11.經分離的編碼mut-HPPD 的核酸，所述mut-HPPD 包含 SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、53、或其變體或衍生物的序列。
12.根據權利要求11的經分離的核酸，其中所述核酸能夠通過如權利要求8至10中任一項所定義的方法鑑別。
13.由野生型或mut-HPH)核酸轉化的轉基因植物細胞，其中所述野生型或mut-HPH)核酸包含選自由以下組成的多核苷酸序列:a)如SEQ ID NO:1、51、3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、52 中所示的多核苷酸、或其變體或衍生物；b)如SEQ ID NO:47或49中所示的多核苷酸、或其變體或衍生物；c)編碼如SEQ IDNO:2、5、8、11、14、17、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、53、或 48、50 中所示的多肽的多核苷酸、或其變體或衍生物；d)包含a)至c)中任一項的至少60個連續核苷酸的多核苷酸；及e)與a)至d)中任一項的多核苷酸互補的多核苷酸。
14.包含如權利要求13中所定義的植物細胞的轉基因植物，其中較之所述植物的野生型品種，所述核酸在所述植物中的表達導致所述植物對香豆酮衍生物除草劑的增加的抗性。
15.表達包含SEQID NO:2的經誘變的或重組mut-HPH)的植物，其中所述胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置處不同於相應野生型植物的HPI3D的胺基酸序列，其中位置236處的胺基酸不為丙氨酸；位置411處的胺基酸不為穀氨酸；位置320處的胺基酸不為亮氨酸；位置403處的胺基酸不為甘氨酸；位置334處的胺基酸不為亮氨酸；位置353處的胺基酸不為亮氨酸；位置321 處的胺基酸不為脯氨酸；位置212處的胺基酸不為纈氨酸；和/或位置407處的胺基酸不為甘氨酸，且其中所述HPH)在植物中表達時，賦予植物較之相應野生型品種植物的增加的除草劑耐受性。
16.由包含如權利要求13所定義的植物細胞的轉基因植物，或由權利要求14或15的植物所生產的種子，其中所述種子對於較之野生型品種的種子的增加的對香豆酮衍生物除草劑的抗性而言是純育的。
17.生產轉基因植物細胞的方法，所述轉基因植物細胞與野生型品種的植物細胞比較，具有增加的對香豆酮衍生物除草劑的抗性，所述方法包括:(a)用包含野生型或mut-HPH)核酸的表達盒轉化植物細胞，及(b)從該植物細胞生成具有對香豆酮衍生物除草劑的增加的抗性的植物， 其中野生型或mut-HPH)核酸包含選自由以下組成的多核苷酸序列:a)如SEQ ID NO:1、51、3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、52中所示的多核苷酸、或其變體或衍生物山)如SEQ ID NO:47或49中所示的多核苷酸、或其變體或衍生物；c)編碼如 SEQ ID NO:2、5、8、11、14、17、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、42、44、46、53、48、50中所示的多肽的多核苷酸、或其變體或衍生物；d)包含a)至c)中任一項的至少60個連續核苷酸的多核苷酸 '及e)與a)至d)中任一項的多核苷酸互補的多核苷酸。
18.權利要求17的方法，其中所述表達盒還包含在所述植物中有功能的轉錄起始調控區及翻譯起始調控區。
19.鑑別或選擇經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分的方法，所述方法包括:i)提供經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分，其中所述經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分包含如 SEQ ID NO:1、51、3、4、6、7、9、10、12、13、15、16、18、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、45、52中所示的多核苷酸、或其變體或衍生物，其中多核苷酸編碼用作選擇標誌物的mut-HPH)多肽，且其中所述經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分可包含其他的經分離的多核苷酸；ii)將經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分與至少一種香豆酮衍生物化合物接觸；iii)確定植物細胞、植物組織、植物或其部分是否受抑制性化合物影響；及iv)鑑別或選擇經轉化的植物細胞、植物組織、植物或其部分。
20.表達包含SEQID NO:53的經誘變的或重組mut-HPH)的植物，其中所述胺基酸序列在一個或多個胺基酸位置處不同於相應野生型植物的HPI3D的胺基酸序列，其中位置293處的胺基酸不為穀氨醯胺；位置335處的胺基酸不為甲硫氨酸；位置336處的胺基酸不為脯氨酸；位置337處的胺基酸不為絲氨酸；位置363處的胺基酸不為穀氨酸；位置422處的胺基酸不為甘氨酸；位置385處的胺基酸不為亮氨酸；位置393處的胺基酸不為異亮氨酸，位置368處的胺基酸不為亮氨酸；和/或位置421處的胺基酸不為賴氨酸,且其中所述HPF1D在植物中表達時，賦予植物較之 相應野生型品種植物的增加的除草劑耐受性。
【文檔編號】A01H5/00GK103906841SQ201280054097
【公開日】2014年7月2日 申請日期:2012年10月31日 優先權日:2011年11月2日
【發明者】J·赫茨勒, S·特雷施, T·米茨納, M·維切爾, J·萊爾希爾, R·阿朋特, L·帕爾拉帕多, J·M·保利克 申請人:巴斯夫歐洲公司