用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的引物、探針及晶片的製作方法
2023-04-28 06:13:01 3
專利名稱：用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的引物、探針及晶片的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種引物和探針及晶片，特別是涉及一種用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌 核酸片段的引物、探針及晶片。
背景技術：
傷寒是經傷寒沙門氏桿菌汙染的水或食物傳播的急性傳染病，《中華人民共和國 傳染病防治法》將其列為乙類傳染病。傷寒沙門氏桿菌是水體和食品中的重要汙染源，人通 過食用了受汙染的飲用水和食物，經口感染。臨床特徵為長程發熱、全身中毒症狀、相對緩 脈、肝脾腫大、玫瑰疹及白細胞減少等，主要併發症為腸出血和腸穿孔。除引起腸道病變外， 還能導致其他器官或全身感染，嚴重威脅人民的健康。傷寒遍布於世界各地，以熱帶及亞熱 帶地區為多，而且最近20年間，臨床分離出來的傷寒沙門氏桿菌對抗生素的耐藥性越來越 高，給治療帶來很大難度。傷寒患者和帶菌者是本病的傳染源。病菌隨糞便和尿排出體外，通過汙染飲水、食 物、日常生活接觸等途徑傳播，蟑螂、蒼蠅在本病的傳播上起媒介作用。在傷寒沙門氏桿菌 的傳播過程中，無症狀攜帶者扮演了一個很重要的角色。由於不出現任何症狀，這些無症狀 攜帶者為傷寒桿菌的繁殖和感染其他人提供了一個安全的儲存宿主。而且傷寒桿菌在自然 界中的生活力較強，在水中一般可存活2 3周，在糞便中能維持1 2月，在牛奶中不僅 能生存，且可繁殖，能耐低溫，在冰凍環境中可持續數月。傷寒桿菌的診斷依據主要為臨床症狀及實驗室診斷，主要分為細菌培養技術、 免疫學檢測技術、PCR技術和基因晶片技術。細菌培養和基於免疫學的肥達試驗(Widal reaction)是診斷傷寒桿菌的傳統方法，細菌培養由於特異性高，不出現假陽性而被稱為金 標準，是最常用確診傷寒的診斷依據，但培養結果容易受抗生素等條件的影響，且耗時。肥 達試驗已沿用近100年，60年代曾有人對其特異性提出異議，認為其結果存在著混亂模糊 的情況，非傷寒發熱性疾病肥達試驗也呈陽性結果，如各種急性感染，腫瘤，結締組織病性 疾病，慢性潰瘍性結腸炎，均可出現陽性結果。因此對肥達氏反應結果的判定宜審慎，必須 密切結合臨床資料。近年來隨著輕症和亞臨床病例增多，肥達氏反應的陽性率有下降趨勢， 故對其診斷價值發生了爭論。ELISA的基本原理是用酶促反應的放大作用來顯示初級免疫 學反應，既可檢測抗原，又可檢測抗體，用ELISA法檢測傷寒患者Vi抗原，靈敏性達lng/ml。 國內、外用ELISA檢測過臨床標本中的Vi抗原，V9抗原，LPS，H抗原等，敏感性在62. 5% 93. 1%，因檢測抗原的不同而異。在傷寒的血清免疫學診斷方法中，ELISA方法簡便，快速， 敏感，特異性高，是公認較好的一種診斷方法。PCR反應技術具有較高的特異性和敏感性，且 操作簡單、快速。菌體裂解時可釋放強烈的內毒素，是傷寒桿菌致病的主要因素。目前利用 沙門菌的irwA基因和鞭毛素基因用PCR方法擴增進行分子雜交，可以檢出3 300個活菌 細胞，達到敏感和特異的效果。基因晶片由於具有高通量檢測、簡便快速、敏感性高等特點，可利用微生物的特異 序列製備病原菌的檢測晶片用於微生物的快速檢測，快速大量的鑑定致病相關因子，還可以進行不同微生物之間基因組結構和功能基因的比較，深化對致病機制、耐藥機制的認識， 為防病治病奠定基礎。利用基因晶片還可以進行病原菌及生存環境相互關係的研究，找出 抑制細菌生長的措施，減少病原菌對人類及環境的傷害。隨著生物晶片技術的不斷成熟完 善，試驗和使用成本的降低，生物晶片已經可以用於公共衛生、食品安全等方面的微生物檢 測。沙門氏桿菌的H抗原有兩種，稱為第1相和第2相。第1相特異性高，又稱特異相， 因此可以通過檢測編碼H抗原的基因進行沙門氏菌的檢測鑑定。
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi)核酸片段的引物、探針及晶片。該引物、探針及晶片能特異性地針對傷寒沙門氏菌進 行檢測。為解決上述技術問題，本發明的一種用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的引 物，其序列包括SEQ ID NO. 2所示的上遊引物序列和SEQ ID NO. 3所示的下遊引物序列組 成的引物對。所述引物進行聚合酶鏈式反應(PCR)所產生的產物的片段大小為159bp。另外，本發明的一種用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針，其序列由兩部 分組成，其組成為5』-k-P-3』，其中，5』端的k是與基因晶片上固定的探針Z互補的序列， 3』端的P是SEQ ID NO. 4所示的傷寒沙門氏菌基因的特異序列。所示Z和k是與所檢測 的物種沒有同源性的人工合成的長度為20-25pb的一對互補序列。本發明的用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的引物和探針，可以用於傷寒沙門 氏菌的聚合酶鏈式反應(PCR)或/和基因晶片，特異性地檢測樣本中的傷寒沙門氏菌。另外，本發明的用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌的基因晶片，包括上述用於檢測鑑定 傷寒沙門氏菌核酸片段的探針和固定在固相載體上的Z探針，其中，用於檢測鑑定傷寒沙 門氏菌核酸片段的探針一端DNA片段末端(5』端)連接有與Z探針互補的k序列。所述用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針可在其DNA末端片段上進行標 記，該標記包括螢光素標記、生物素標記、放射性元素標記、電化學發光標記和酶標記。本發明中所述固相基質可選用本領域周知的基質，只要所述基質與所述反應物相 容，不會影響檢測結果就可以。本發明基因晶片還包括至少一種對照探針，所述對照探針選自陰性對照探針、陽 性對照探針。該基因晶片的製備可按常規方法製備。在本發明的另一方面，提供了一種應用上述基因晶片進行檢測的方法，包括如下 步驟1)使用商業化的DNA抽提試劑盒，按照試劑盒的說明製備樣品DNA模板，通過 PCR反應對目的基因(包括16S基因、傷寒沙門氏菌的Hld基因)進行擴增；所採用的PCR 體系為PCR緩衝液0. 7-1. 2X，dNTP 0. 1-0. 2mM,上下遊引物(包括用於檢測鑑定傷寒沙 門氏菌核酸片段的上下遊引物、16S上下遊引物)各0. 1-0. 4 μ M，酶0. 2-0. 6Χ，DNA模板 20pg-20ng, PCR反應總體積為10_20ul ；PCR的反應條件為95°C變性!Min ；之後在95°C變 性30s，58-65°C退火30s，68°C延伸30s的條件下循環28—35次；68°C延伸5min ；
4
2)取 2-10 μ 1 PCR 擴增產物，使用 1-5U 的蝦鹼酶(Shrimp Alkaline Phosphatase, SAP)和5-15U的外切酶(Exonuclease I，Exo I)進行純化後，加入用於檢 測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針0. 1-0. 4 μ M和0. 1-0. 4 μ M螢光標記的雙脫氧核苷 Cy3-ddATP,進行單鹼基延伸反應，反應中所加入的DNA聚合酶為0. 8-1. 5U，在退火溫度 66-72°C的條件下循環30-35次，產生帶有螢光標記的產物；3)對帶有螢光標記的產物，加入終濃度為6XSSPE或6XSSC(saline sodium citrate，檸檬酸鈉)的雜交液，與已經固定有Z的基因晶片在46_50°C進行雜交1. 5-2. 5小 時，雜交結束後，分別使用含有2 X SSC、1 X SSC、0. 5 X SSC、無SSC的清洗液清洗，乾燥晶片 後，使用晶片掃描儀檢測雜交反應的結果。在本發明的另一方面，還提供了本發明的基因晶片在臨床檢測中的應用。本發明的具體原理是利用靶基因的一對特異性引物和一個特異性探針，採用PCR 的方法實現靶基因的特異性擴增。擴增產物採用凝膠電泳進行檢查，應出現且僅出現一條 大小為159bp的條帶。所產生的PCR產物進行螢光標記，然後與探針雜交，使用雷射掃描儀 檢測雜交信號。有傷寒沙門氏菌存在時，晶片上的傷寒沙門氏菌核酸片段所對應的位點應 該有螢光信號產生，否則無螢光信號。螢光信號強度還應與樣本中的傷寒沙門氏菌核酸片 段的多少成正比，通過螢光信號的強弱程度還可以大致反映出樣本中靶基因片段的含量。本發明的引物、探針及晶片，具有較強特異性，因此能針對傷寒沙門氏菌進行檢 測。
下面結合附圖與具體實施方式
對本發明作進一步詳細的說明圖1是利用引物對F-080105和R-080105檢測傷寒沙門氏菌的陽性樣本和陰性樣 本的PCR產物瓊脂糖凝膠電泳圖，圖中每個泳道為不同的細菌DNA，其中，1為沙門乙型副傷 寒血清型，2為沙門菌雞血清型，3為鼠傷寒沙門菌，4為腸炎沙門菌，5為傷寒沙門菌，6為沙 門菌某些亞種，7為大腸埃希菌，M為IOObp Ladder (TaKaRa公司)；圖2是利用引物對F-080105、R-080105和16S引物檢測模擬樣本的多重PCR產物 瓊脂糖凝膠電泳圖，圖中每個泳道為不同的模擬樣本DNA，其中，1為模擬樣本1，2為模擬樣 本2，3為模擬樣本3，4為模擬樣本4，M為IOObp Ladder (TaKaRa公司)；圖3是利用引物對F-080105.R-080105和探針Zc-P-080105以及16S引物和16S 探針檢測傷寒沙門氏菌的晶片排布圖，其中，P為定位探針，N為陰性對照探針，B為空白對 照，C為金黃色葡萄球菌，D為結核分支桿菌，E為志賀氏菌，F為腸出血性大腸桿菌0157，G 為幽門螺旋桿菌，H為霍亂弧菌0139，I為大腸埃希桿菌，J為單核增生李斯特氏菌，K為傷 寒沙門氏菌，L為腸炎沙門氏菌，M為微生物的16S基因；圖4是利用引物對F-080105.R-080105和探針k-P_080105以及16S引物和16S 探針檢測傷寒沙門氏菌的陽性樣本的晶片掃描圖，晶片上含有定位探針、陽性對照探針、陰 性對照探針；圖5、圖6、圖7和圖8分別為模擬樣本1、2、3、4的檢測晶片掃描圖。
具體實施例方式I、引物和探針設計對已有的傷寒沙門氏菌基因組序列進行比較，選擇無二級結構且高度保守的片段傷寒沙門氏菌的Hld基因序列(GenBank X16406. l，2^bp) JnSEQ ID NO. 1所示，設計多對 引物和探針，引物長度一般為20個鹼基左右，探針長度一般為25個鹼基，引物間和引物內無 互補序列，兩條引物的Tm值相差不超過3°C。通過實驗，篩選出最優引物和探針組合如下用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的上遊引物F-080105 (SEQ ID NO. 2所示) 序列AATGGGCGACGATTTCTATG用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的下遊引物R-080105 (SEQ ID NO. 3所示) 序列CCATCGGTAGCAGTAACAACTTC用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針k-P-080105 (DNA型，P-080105序列 如SEQID NO. 4所示)，其序列為Zc-CAGCTCCAGTTTGAGCAACGCCAGT，其中，Zc是與基因晶片 上固定的探針Z互補的序列，Z和^是與所檢測的物種沒有同源性的任意一對互補的人工 合成的長度為20-25pb的序列。本實施例中所選擇的Z序列為ATCGTCACCTGTAGCGTCAA(SEQ ID NO. 5 所示)，Zc 的序列為 TTGACGCTACAGGTGACGAT (SEQID N0. 6 所示)。另外，本實施例中涉及到的公知16S基因(實驗中作為陽性對照)引物序列如下16S 上遊引物 R-080109 (SEQ ID N0. 7 所示):AGGAGGTGATCCAACCGCA16S 下遊引物 F-080109 (SEQ ID N0. 8 所示):AACTGGAGGAAGGTGGGGAT。且設計的基因晶片的陽性對照探針16S探針Zc，-P-080109 (DNA型，P-080109序 列如 SEQID N0. 9 所示)，其序列為Zc，-GGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGT，其中，Zc，是與基因 晶片上固定的探針Z』互補的序列，Zc』序列為AGCTCACCATGTACGAACTG(SEQ ID NO. 10所 示)，Ζ，序列為:CAGTTCGTACATGGTGAGCT (SEQ ID NO. 11 所示)。II、PCR 擴增使用Qiagen公司商業化的DNA抽提試劑盒，按照說明書上的操作步驟，抽提樣本 DNA,製備DNA模板，用上述設計的引物通過單位點PCR反應或多位點的多重PCR反應對該 模板進行擴增。所採用的PCR體系為PCR緩衝液1 X，dNTP 0. 15mM,上下遊引物(包括上遊引物 F-080105、下遊引物 R-080105U6S 上下遊引物)各 0. 2 μ M，酶 0. 3 X，DNA 模板 IOng (PCR 反應的酶和緩衝液為Clonetech公司生產，dNTP為TaKaRa公司生產)。PCR的反應條件 為95°C變性:3min ；之後在95°C變性30s，62°C退火30s，68°C延伸30s的條件下循環30次； 68°C延伸5min。PCR的反應體系為15ul的總體積。 III、PCR產物凝膠電泳對II步驟所產生的PCR產物採用2. 5% (g/100ml)瓊脂糖凝膠進行電泳，並利用 凝膠成像儀檢測所產生的PCR產物。其中，圖1顯示了僅使用引物對F-080105和R-080105對傷寒沙門氏菌和其他細 菌樣本，如沙門乙型副傷寒血清型、沙門菌雞血清型、鼠傷寒沙門菌、腸炎沙門菌、傷寒沙門 菌、沙門菌某些亞種、大腸埃希菌進行PCR的結果，該圖中，只有傷寒沙門氏菌的PCR擴增產 物出現且僅出現一條大小為159bp的條帶，說明了該引物對用於傷寒沙門氏菌檢測的特異性。
另外，由於較少在實際樣本中檢測到傷寒沙門氏菌，因此，以模擬樣本為例進行傷 寒沙門氏菌的檢測。圖2為使用引物對F-080105、R-080105和16S引物對四個模擬樣本的 多重PCR結果，其中，模擬樣本1和模擬樣本2中含有傷寒沙門氏菌，模擬樣本3和模擬樣 本4中不含有傷寒沙門氏菌，由圖中箭頭所指位置可知，只有含有傷寒沙門氏菌的模擬樣 本1、2在159bp處出現一條亮帶。IV、螢光標記的產物製備取出II步驟所產生的多重PCR產物(引物對F-080105、R-080105和16S引物擴增 產物)5ul，使用3U的SAP和IOU的ExoI在37°C孵育30min，純化去除未參與PCR反應的過 量引物和脫氧核苷(dNTP)，加入0. 2μΜ探針k-P-080105和0. 2μΜ 16S探針以及0. 2μΜ 的結合有螢光分子的雙脫氧核苷(如Cy3-ddATP)，再加入DNA聚合酶1U，在退火溫度70°C 的條件下循環32次，進行單鹼基延伸反應，產生帶有螢光標記的產物。V、基因晶片雜交合成5』端帶有氨基修飾的Z序列，使用點樣儀將20-30ng/ μ 1的Z點制在醛基化 修飾的玻璃片基上，製備成基因晶片。而對Ζ』序列按照對待Z序列相同步驟，也點制在上 述同一塊玻璃片基上，以備陽性監測。將IV步驟所得的帶有螢光標記的產物(含有探針k-P-080105和16S探針)10ul， 加入終濃度為6 X SSPE (或6 X SSC)的雜交液，使總體積為15ul，與已經固定有Z和Z』的基 因晶片在48°C雜交2小時。雜交結束後，分別使用含有2 X SSC、1 X SSC、0. 5 X SSC、無SSC的清洗液清洗未結 合的物質，乾燥晶片後，採用雷射掃描儀進行晶片掃描，獲取晶片雜交的圖像。VI、基因晶片圖像分析對V步驟所得的圖像進行分析，即可得出所檢測樣本中是否存在有所需檢測的傷 寒沙門氏菌。還可進一步對V步驟所得圖像進行分析，根據所得螢光信號的強度，還可以大 概估算出所檢測樣本中傷寒沙門氏菌的含量。其中，利用引物對F-080105和R-080105和探針k-P-080105以及16S引物和 16S探針檢測傷寒沙門氏菌的陽性樣本的晶片掃描圖如圖4所示(樣本晶片排布圖如圖3 所示)，若檢測樣本中含有傷寒沙門氏菌，則晶片上傷寒沙門氏菌探針的對應位置將顯示熒 光，如果檢測樣本中沒有傷寒沙門氏菌，則無螢光信號。圖4所示晶片為傷寒沙門氏菌標準 菌株的檢測結果。對步驟III中使用過的模擬樣本1、2、3、4進行晶片檢測，其晶片檢測結果分別如 圖5、圖6、圖7和圖8所示，其中，圖5、圖6、圖7和圖8中的定位探針、陰性對照探針、空白 對照及微生物的16S基因在晶片上的排布位置與圖3 —樣。晶片上的16S作為陽性對照， 在進行任何細菌檢測時，16S都應顯示出螢光信號。模擬樣本的晶片檢測結果表明，模擬樣 本1和模擬樣本2確實含有傷寒沙門氏菌，模擬樣本3和模擬樣本4不含有傷寒沙門氏菌。 在進行多樣本檢測時，還可以根據螢光信號強度的大小，估算每個樣本中傷寒沙門氏菌的 多少。綜上所述，本發明的引物、探針及基因晶片，具有較強特異性，因此，能針對傷寒沙 門氏菌進行特異性檢測。序列表上海生物晶片有限公司
用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的引物、探針及晶片
NP-09-13615
11
PatentIn version 3.3
1
228
DNA
傷寒沙門氏菌(Salmonella typhi) 1
aaactatcgt ttgaggataa aaacggtaag gttattgatg ggcgacgatt tctatgccgc tacatatgat gagaaaacag actacttata cagatggtac tggcgttgct caaactggag aatggtaaat ctgaagttgt tactgctacc gatggtaaaa 2 20 DNA 人工序列
misc_feature 引物 2
aatgggcgac gatttctatg 20
3
23
DNA
人工序列
misc_feature 引物 3
ccatcggtag cagtaacaac ttc 23
4
25
DNA
人工序列
misc_feature 探針
gtggctatgc gtgcaattac ctgtgaaatt cttactta
agtgaaaatg 60 tgctaaaacc 120 tggtggcgca 180 2284
cagctccagt ttgagcaacgccagt
5
20
DNA
人工序列
misc_feature
探針
5
atcgtcacct gtagcgtcaa20
6
20
DNA
人工序列
misc_feature
探針
6
ttgacgctac aggtgacgat20
7
19
DNA
人工序列
misc_feature
引物
7
aggaggtgat ccaaccgca19
8
20
DNA
人工序列
misc_feature
引物
8
aactggagga aggtggggat20
9
24
DNA
人工序列
misc_feature
探針
9
ggtgaatacg ttcccgggcc ttgt
10
20
DNA
人工序列
misc_feature
探針
10
agctcaccat gtacgaactg
11
20
DNA
人工序列
misc_feature
探針
11
cagttcgtac atggtgagct
10
權利要求
1.一種用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的引物，其特徵在於，其序列包括SEQ ID NO. 2所示的上遊引物序列和SEQ ID NO. 3所示的下遊引物序列組成的引物對序列。
2.如權利要求1所述的用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的引物，其特徵在於所 述引物進行聚合酶鏈式反應所產生的產物的片段大小為159bp。
3.如權利要求1所述的用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的引物用於傷寒沙門氏 菌的聚合酶鏈式反應或基因晶片，特異性地檢測樣本中的傷寒沙門氏菌。
4.一種用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針，其特徵在於該探針序列由兩部 分組成，其組成為5』-k-P-3』，其中，5』端的k是與基因晶片上固定的探針Z互補的序列， 3』端的P是SEQ ID NO. 4所示的傷寒沙門氏菌基因的特異序列。
5.如權利要求4所述的用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針，其特徵在於所 述Z和k是與所檢測的物種沒有同源性的人工合成的長度為20-25pb的一對互補序列。
6.如權利要求4所述的用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針用於傷寒沙門氏 菌的基因晶片，特異性地檢測樣本中的傷寒沙門氏菌。
7.如權利要求4所述的用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌的基因晶片，其特徵在於包括如 權利要求4所述的用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針和固定在固相載體上的Z探 針，其中，如權利要求4所述的探針5』端連接有與Z探針互補的^序列。
8.如權利要求7所述的用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌的基因晶片，其特徵在於所述用 於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針能在其DNA末端片段上進行標記，該標記包括 螢光素標記、生物素標記、放射性元素標記、電化學發光標記和酶標記。
9.一種應用權利要求7所述的基因晶片進行檢測的方法，其特徵在於，包括如下步驟1)使用商業化的DNA抽提試劑盒，按照試劑盒的說明製備樣品DNA模板，通過PCR反應 對目的基因進行擴增；2)取2-10μ 1 PCR擴增產物，使用1-5U的蝦鹼酶SAP和5-15U的外切酶Exo I進行 純化後，加入如權利要求4所述的用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針0. 1-0. 4μ M 和0. 1-0. 4 μ M螢光標記的雙脫氧核苷Cy3-ddATP，進行單鹼基延伸反應，反應中所加入的 DNA聚合酶為0. 8-1. 5U，在退火溫度66-72°C的條件下循環30-35次，產生帶有螢光標記的 產物；3)對帶有螢光標記的產物，加入終濃度為6X SSPE或6 X SSC的雜交液，與已經固定有 Z的基因晶片在46-50°C雜交1. 5-2. 5小時，雜交結束後，分別使用含有2XSSC、1XSSC、 0. 5XSSC、無SSC的清洗液清洗，乾燥晶片後，使用晶片掃描儀檢測雜交反應的結果。
10.如權利要求9所述的基因晶片進行檢測的方法，其特徵在於，所述步驟(1)中的目 的基因包括16S基因、傷寒沙門氏菌的Hld基因，其PCR反應體系為PCR緩衝液0. 7_1. 2X， dNTP 0. 1-0. 2mM，上下遊引物各0. 1_0. 4 μ M，該上下遊引物包括用於檢測鑑定傷寒沙門氏 菌核酸片段的上下遊引物及16S基因的上下遊引物，酶0. 2-0. 6 X，DNA模板20pg-20ng，PCR 反應總體積為10-20ul ；PCR反應條件為95°C變性!Min ；之後在95°C變性30s，58_65°C退 火30s，68°C延伸30s的條件下，循環沘_；35次；68°C延伸5min。
全文摘要
本發明公開了一種用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的引物、探針及晶片，該引物序列包括SEQ ID NO.2所示的上遊引物序列和SEQ ID NO.3所示的下遊引物序列組成的引物對序列；該探針序列的組成為5』-Zc-P-3』，其中，5』端的Zc是與基因晶片上固定的探針Z互補的序列，3』端的P是SEQ ID NO.4所示的傷寒沙門氏菌基因的特異序列；該基因晶片，包括用於檢測鑑定傷寒沙門氏菌核酸片段的探針和固定在固相載體上的Z探針。本發明的引物、探針及晶片能特異性地針對傷寒沙門氏菌進行檢測。
文檔編號C12Q1/68GK102080125SQ20091025287
公開日2011年6月1日 申請日期2009年11月30日 優先權日2009年11月30日
發明者張春秀, 曹歡, 肖華勝, 邵祥強, 陳金絲, 黃曉衛 申請人:上海生物晶片有限公司