2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸衍生物、其製備及應用的製作方法

2023-05-03 10:32:31 3

專利名稱：2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸衍生物、其製備及應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸衍生物，所說衍生物可用作由於各種原因引起的白細胞減少症、由於白細胞降低引起的疾病，從治療觀點看需要增加骨髓細胞或白細胞的疾病的治療劑，及由於各種原因引起的血小板減少症、由於血小板降低引起的疾病、或從治療觀點看需要增加血小板的疾病的治療劑。
在Hoppe-Seyler的Zeitschrift fur Physiologiche Chemie 364第593-606(1983)頁中，披露了一種由E.Coli製備的脂蛋白得到的合成肽，其具有如下結構式
在JPA H4(1992)-046194中披露了WS1279A物質，其具有如下結構式
Achiwa等人曾經合成了作為旋光活性化合物的那些化合物[參見JPA H4(1992)-099796，CHem. Pharm. Bull. 39，第2590(1991)頁和Peptide Chemistry，第361(1991)頁]。
然而，本發明的化合物在這些參考文獻中並沒有描述。
順便說一下，用於本發明的胺基酸、肽等的縮略語是基於根據IUPAC-IUB委員會關於生物化學術語定義的那些縮略語或在相關領域常用的那些縮略語，並且，除非另有說明，胺基酸的可能的旋光異構體是L-異構體。
癌症的化學療法或放射療法引起了嚴重的白細胞減少症或嚴重的血小板減少症。前者導致抵抗感染或其它各種疾病能力的降低而沒有達到足夠的治療效果。後者造成不充分的止血機理也沒有足夠的治療效果。這些在癌症領域中已引起認真的關注。在這樣的情況下，強烈期望研究那些減輕由於這些治療方法引起的造血功能的抑制的藥物和能夠提高恢復白細胞數量或血小板數量的藥物。而且，在骨髓移植治療中，迫切期望提高被移植的骨髓細胞的增殖能力的藥物和迅速恢復白細胞數量的能力的藥物。更進一步地，這些藥物可用作在骨髓移植後的血小板減少症的治療劑或伴隨有血小板減少症如再生障礙性貧血和陣發性血小板減少症紫癜的自體免疫疾病的治療劑。
由於考慮到上述現有的情況，本發明的發明者根據最新觀點，正從事於對具有增加白細胞數量作用的化合物的研究。結果，本發明者發現新的2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸衍生物提高了小鼠骨髓細胞的增殖能力和增加了周圍白細胞的數量。而且，所說化合物也刺激了小鼠骨髓細胞從而促進了巨核細胞的增殖和分化。基於這些發現，本發明者進行了進一步的研究從而完成了本發明。
本發明提供了1)結構式(Ⅰ)的化合物或其鹽
其中R1和R2的每一個是氫或脂肪族醯基，A是可被保護的氨基，X是由1-10個胺基酸殘基構成的胺基酸序列，其中至少含有一個具有增加水溶性基團的胺基酸殘基。
2)根據1)的化合物，其中A是氨基。
3)根據1)的化合物，其中A是可用取代的氧羰基取代的氨基。
4)根據1)的化合物，其中具有增加水溶性基團的胺基酸殘基是酸性胺基酸殘基。
5)根據1)的化合物，其中具有增加水溶性基團的胺基酸殘基是鹼性胺基酸殘基。
6)根據1)的化合物，其中脂肪族醯基是C2-30脂肪族醯基。
7)根據1)的化合物，其中至少R1和R2中的一個是脂肪族醯基。
8)根據1)的化合物，其中R1是脂肪族醯基。
9)根據1)的化合物，其中R2是脂肪族醯基。
10)根據1)的化合物，其中所說化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯氧基)-4-硫雜庚醯-甘氨醯-穀氨醯-穀氨酸。
11)根據1)化合物，其中所說化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯氧基)-4-硫雜庚醯-甘氨醯-甘氨醯-穀氨酸。
12)根據1)化合物，其中所說化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯氧基)-4-硫雜庚醯-穀氨醯-甘氨醯-穀氨酸。
13)根據1)的化合物，其中所說化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯氧基)-4-硫雜庚醯-甘氨醯-D-穀氨酸。
14)一種具有增加白細胞作用的刺激免疫組合物，其含有1)中定義的化合物或其鹽。
15)根據14)的一種刺激免疫組合物，其中至少R1和R2中的一個是脂肪族醯基。
16)一種用於治療血小板減少症的組合物，其中包括1)中所定義的化合物或其鹽。
17)一種製備1)中所定義的化合物或其鹽的方法，其中包括使結構式(Ⅱ)的化合物或其鹽經過脫保護反應
其中R1和R2的每一個是氫或脂肪族醯基，R3是保護基，A是可被保護的氨基，X′是由1-10任意保護的胺基酸殘基構成的胺基酸序列，其至少含有一個具有增加水溶性基團的任意保護的胺基酸殘基。
關於結構式(Ⅰ)和(Ⅱ)，用R1和R2所示的脂肪族醯基包括由脂肪族羧酸衍生得到的脂肪族醯基。所說的脂肪族醯基的例子包括飽和的或不飽和具有最多34個碳原子的脂肪族醯基(例如，甲醯、乙醯、丙醯、丁醯、異丁醯、戊醯、異戊醯、己醯、庚醯、辛醯、癸醯、十二醯、十三醯、十四醯、十五醯、十六醯、十七醯、十八醯、十九醯、二十四醯、二十六醯、二十醯、二十一醯、二十二醯、二十四醯、二十六醯、乙基十二醯、甲基十三醯、乙基十三醯、甲基十四醯、乙基十四醯、甲基十五醯、乙基十五醯、乙基十六醯、乙基十六醯、甲基十七醯、乙基十七醯、甲基十八醯、乙基十八醯、二十八醯、三十醯、三十二醯、三十四醯、丙烯醯、丙炔醯、異丁烯醯、丁烯醯、異丁烯醯、十四油醯、油醯、棕櫚油醯、反油醯、順，順-9，12-十八三烯醯、9，12，15-十八三烯醯、9，11，13-十八三烯醯、5，8，11，14-二十烷四烯醯、順-15-二十四烯醯，等等。)脂肪族醯基的優選例子包括C2-30飽和的或不飽和的脂肪族醯基(例如乙醯、丙醯、丁醯、異丁醯、戊醯、異戊醯、己醯、庚醯、辛醯、癸醯、十二醯、十三醯、十四醯、十五醯、十六醯、十七醯、十八醯、十九醯、二十醯、二十一醯、二十二醯、乙基十二醯、甲基十三醯、乙基十三醯、甲基十四醯、乙基十四醯、甲基十五醯、乙基十五醯、甲基十六醯、乙基十六醯、甲基十七醯、乙基十七醯、甲基十八醯、乙基十八醯、二十四醯、二十六醯、二十八醯、三十醯、十四油醯、油醯、棕櫚油醯、反油醯、順，順-9，12-十八三烯醯、9，12，15-十八三烯醯、9，11，13-十八三烯醯、5，8，11，14-二十烷四烯醯、順-15-二十四烯醯，等等。)用R1和R2所示的脂肪族醯基的特別優選的例子包括C2-16飽和的或不飽和的脂肪族醯基。
優選地，至少R1和R2中的一個是脂肪族醯基。
最好R1和R2都是脂肪族醯基。
在上述結構(Ⅰ)和(Ⅱ)中，用A所示的任意保護的氨基中的保護基的例子包括甲醯基、C7-10芳羰基(例如苯基羰基)，取代的氧羰基[例如C1-6烷氧基羰基(例如甲氧基羰基，乙氧基羰基，等)，C7-10芳氧基羰基(例如苯氧基羰基，等)，9-芴基甲氧基羰基，C7-10芳烷氧基羰基(例如苄氧基羰基，等)，金剛烷基氧羰基等]，C7-10芳烷基羰基(例如苄基羰基，等)，三苯甲基和鄰苯二甲醯基。這些保護基中除甲醯基外都可被取代。所說取代基的例子包括滷原子(例如氟代、氯代、溴代和碘代)，C1-5烷基羰基(例如乙醯，乙基羰基，丁基羰基，等)和硝基。取代基的數量可在1-3範圍內變化。
當R1和R2都是脂肪族醯基時，A優選具有上述意義。
優選地，A是可被取代的氧羰基保護的氨基。A最好是氨基。
在結構式(Ⅰ)中，在由X所示的胺基酸序列中的胺基酸意義為在其分子中具有氨基和酸基(例如羧基、磺酸基)的化合物。胺基酸的優選的例子包括那些在Dr.Munio Kotake管理下編輯的，由日本Asakura Shoten 1960年出版的Dai Yuhki Kagaku(Encyclopedia of Organic Chemistry)第21卷「天然聚合物Ⅲ」中和由J.S.Davies編輯1985年美國出版，Chapman和Hall的「胺基酸和肽」中所述的胺基酸。
為了進一步具體闡明，例如，可以提及組成蛋白質的胺基酸[例如，脂肪一元氨基一元羧酸如甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等，脂肪羥基胺基酸如絲氨酸、蘇氨酸等，酸性胺基酸如門冬氨酸、穀氨酸等;酸性胺基酸醯胺如天冬醯胺、穀氨醯胺等，芳香胺基酸如苯基丙氨酸、酪氨酸、色氨酸等，亞氨基羧酸如脯氨酸、羥基脯氨酸等，鹼性胺基酸如精氨酸、賴氨酸、組氨酸等，和含硫胺基酸如蛋氨酸、胱氨酸、半胱氨酸等]，由天然物質得到的胺基酸，例如微生物的代謝物或動物和植物成分[例如脂肪一元氨基一元羧酸如L-α-氨基丁酸、γ-氨酸丁酸、β-氨基異丁酸、β-丙氨酸、高絲氨酸、α-甲基-D-絲氨酸、O-氨基甲醯-D-絲氨酸、δ-羥基-γ-氧代正纈氨酸等，一元氨基二羧酸如L-α-氨基己二酸、L-β-氨基己二酸、L-茶氨酸、L-γ-亞甲基穀氨酸、L-γ-甲基穀氨酸等，二氨基-羧酸如L-鳥氨酸、β-賴氨酸、α，β-二氨基丙酸、L-α，γ-二氨基丁酸，等，二氨基二羧酸如二氨基庚二酸等，含磺酸一元氨基一元羧酸如磺基丙氨酸等，含磺酸胺基酸如牛磺酸等，芳香胺基酸如犬尿氨酸、3，4-二氧代苯基-L-丙氨酸等，雜環胺基酸如2，3-二羧酸氮丙啶，[S]-2-氨基-3-(異噁唑啉基-5-酮-4-基)丙酸，抗羊膜菌素等，鹼性胺基酸如L-4-噁溶菌素、L-4-oxolysine、[3R，5R]-3，6-二氨基-5-羥基己酸，等，含硫胺基酸如羊毛硫氨酸、S-甲基-L-半胱氨酸等，環狀胺基酸如哌啶酸、氮雜環丁烷-2-羧酸，[1R，2S]-2-氨基環戊烷-1-羧酸等，用特殊官能團取代的胺基酸如瓜氨酸、亞硝基羥基丙氨酸、L-重氮絲氨酸等]，和由有機合成得到的胺基酸[例如6-氨基己酸、8-氨基辛酸、12-氨基十二酸、4-氨基苯甲酸、4-(氨基甲基)苯甲酸、4-(N-羧基甲基)氨基甲基苯甲酸等]。
胺基酸殘基的意義為由胺基酸得到的二價基並具有與氨基和酸基分別相連的鍵。
順便說說，即使該基團作為胺基酸是不穩定的，在氨基被醯化或酸基具有醯胺鍵的情況下，該基團仍可用作氨基殘基。這樣的氨基的例子包括(6-氨基己基)氨基甲酸。
關於結構式(Ⅰ)，在用X表示的胺基酸序列中的具有水溶性增強基的胺基酸的例子包括上述酸性胺基酸和鹼性胺基酸，優選酸性胺基酸。
酸性胺基酸的例子包括除羧基和氨基外還具有一個或多個酸性官能團(例如羧基，磺酸基等)的化合物。優選的酸性胺基酸的例子包括具有一個氨基和兩個或多個羧基的化合物。為了更具體地闡述，例如，可以提及氨基二羧酸(例如，門冬氨酸、穀氨酸、L-α-氨基己二酸、L-β-氨基己二酸、2，3-二羧酸氮丙啶，等)，較優選α-氨基二羧酸(如門冬氨酸、穀氨酸、L-α-氨基己二酸等)，在這些當中，最優選門冬氨酸和穀氨酸。
鹼性胺基酸的例子包括具有一個或多個鹼性官能團(例如氨基、含鹼性氮的雜環基如咪唑基、吲哚基等，胍基，等等)的化合物。鹼性胺基酸的優選的例子包括具有一個氨基，一個羧基和一個或多個所說鹼性官能團的化合物。
為了進一步具體闡明，例如，可以提及組成蛋白質的鹼性胺基酸(如精氨酸、賴氨酸、組氨酸等)和由天然物質如微生物的代謝物或動物和植物成分得到的鹼性胺基酸[例如二氨基羧酸如L-鳥氨酸、β-賴氨酸、α，β-二氨基丙酸、L-α，γ-二氨基丁酸，等，L-4-噁溶菌素、L-4-oxolysine、[3R、5R]-3，6-二氨基-5-羥基己酸，等)，較優選組成蛋白質的鹼性胺基酸(如精氨酸、賴氨酸、組氨酸等)和由天然物質如微生物的代謝物或動物和植物成分得到的鹼性α-胺基酸(例如L-鳥氨酸、β-賴氨酸、α，β-二氨基丙酸、L-α，γ-二氨基丁酸，L-4-噁溶菌素、L-4-oxolysine，等)，在這些當中最優選賴氨酸、精氨酸、組氨酸。
在結構式(Ⅱ)中，由R3表示的保護基優選利用如下所述的羧基保護基。
在結構式(Ⅱ)中，在由Ⅹ′表示的胺基酸序列中的任意保護的胺基酸殘基中的胺基酸與在上述由Ⅹ表示的胺基酸序列中的胺基酸殘基中的胺基酸具有相同的意義。
在結構式(Ⅱ)中，在由Ⅹ′表示的具有增強胺基酸序列的水溶性的基團的任意保護的胺基酸殘基中的胺基酸與在上述由Ⅹ表示的具有增強胺基酸序列的水溶性的基團的胺基酸殘基中的胺基酸具有相同的意義。
在肽合成中使用的保護氨基、羧基或羥基的已知的保護基可提及用作保護基。這些是可被除去的保護基，例如，通過水解、氫解、還原、氨解、或肼解。
氨基保護基的例子包括尿烷-型保護基(例如，苄氧基羰基、叔丁氧基羰基、烯丙氧基羰基、叔戊氧基羰基、異冰片基氧基羰基、4-甲氧基苄氧基羰基、2-氯代苄氧基羰基、金剛烷基氧基羰基、9-芴基甲氧基羰基、2，2，2-三氯代乙氧基羰基)，醯基型保護基(例如，任意地具有象滷素那樣的取代基的C1-6低級脂肪酸殘基，例如甲醯基、乙醯基、丙醯基、三氯代乙醯基、氯代乙醯基，等，鄰苯二甲醯、甲苯磺醯、2-硝基亞氧硫醯、4-甲氧基-2-硝基亞氧硫醯、苯甲醯，等)和烷基型保護基(例如三苯甲基、苄基等)。
在這些當中，最優選尿烷型保護基。
羧基可通過將它們轉化成，例如，醯氨基、醯肼基或酯來保護。優選的醯氨基或醯肼基是用適當取代基取代的那些。優選的醯氨基是用C7-19芳烷基取代的那些，該芳烷基任意地用，例如，烷氧基取代(例如3，4-二甲氧基苄基或雙-(對-甲氧基苯基)-甲基)。優選的醯肼基是用，例如，C1-6烷氧基羰基取代的那些。該烷氧基羰基任意地用滷素(例如，氟、氯、溴，等)，C6-12芳基(例如，苯基、對聯苯基，等)取代(例如，苄氧基羰基、三氯代乙氧基羰基、叔丁氧基羰基、2-(對-聯苯基)-異丙氧基羰基，等)。滷代C2-6鏈烷醯基(例如三氟乙醯基，等)和C7-19芳烷基(例如三苯甲基，等)也在其中。此外，羧基可作為酯用任意取代的低級醇(例如，甲醇、乙醇、氰基甲基醇、苯甲醯甲基醇、叔丁醇，等)，芳烷醇[例如，任意地用，例如，低級烷基、低級烷氧基或滷原子取代的苄基醇或二苯基甲醇(如，二苯基甲醇、對硝基苄基醇、對甲氧基苄基醇、2，4，6-三甲基苄基醇，等)]，任意用吸電子基團取代的酚和苯硫酚(例如，苯硫酚、甲苯硫酚、對硝基苯硫酚，2，4，5-和2，4，6-三氯代苯酚，對氰基苯酚、對甲磺醯苯酚，等)來保護，此外，還可用N-羥基亞胺(例如，N-羥基琥珀醯亞胺、N-羥基苯鄰二甲醯亞胺，等)，N-羥基哌啶、8-羥基喹啉等來保護。
作為特殊的羧基保護基，其可在中性反應條件下被除去，可以提及的有烴基-甲矽烷基-乙基，例如，2-(三甲基甲矽烷基)-乙基(在公開的德國專利號2，706，490中已描述)。
羥基可通過，例如，醯基化或醚化來保護。
在醯基化中特別優選的醯基是用碳酸衍生得到的基(例如，苄氧基羰基或乙氧基羰基)。對於醚化，例如，優選苄基。四氫呋喃或叔丁基。對於羥基的保護，優選使用2，2，2-三氟-1-叔丁氧基羰基氨基乙基或2，2，2-三氟-1-苄氧基羰基氨基乙基[Chem.Ber.，第100(1967)卷，第3838-3849頁]。
在結構式(Ⅰ)中，在氨基殘基可能是光學活性異構體的情況下，其可以是任意的L-，D-和DL-形式。
化合物(Ⅰ)或其鹽的優選的實例包括(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯基氧基)-4-硫雜庚醯-Gly-Glu-Glu-OH(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯基氧基)-4-硫雜庚醯-Gly-Gly-Glu-OH(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯基氧基)-4-硫雜庚醯-Glu-Gly-Glu-OH(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯基氧基)-4-硫雜庚醯-Gly-D-Glu-OH，或其鹽。
下面，描述製備上述化合物的方法。
常常使用的保護基和反應劑在後面的敘述中被縮寫為如下的形式
Fmoc9-芴基甲氧基羰基Z苄氧基羰基tBu叔丁基OtBu叔丁氧基TFA三氟乙酸TEA三乙胺DMFN，N-二甲基甲醯胺DCCN，N′-二環己基碳化二亞胺BOP苯並三唑-1-基氧基三(二甲基氨基)磷鎓·六氟磷酸鹽DICN，N′-二異丙基碳化二亞胺HONBN-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧酸醯亞胺DEPC二乙基偶磷氰酸鹽HOBT1-羥基苯並三唑DCM二氯甲烷MeOH甲醇THF四氫呋喃WSC水溶性碳化二亞胺·鹽酸鹽DMAP4-二甲基氨基吡啶Boc叔丁氧基羰基R-R-構型S-S-構型作為本說明書基本骨架的化合物是2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸
在本說明書中，硫雜庚醯被縮寫成TFT，硫雜庚酸被縮寫成TFT-OH。十八醯基被縮寫成Ste，十六醯被縮寫成Pam，十四醯被縮寫成Myr，和十八醯氧基被縮寫成SteO，十六醯氧基被縮寫成PamO，十四醯氧基被縮寫成MyrO。
用結構式(Ⅰ)表示的化合物或其鹽可通過使用結構式(Ⅱ)表示的化合物或其鹽進行脫保護基反應來製備。
實際上，脫保護基反應可通過用已知的方法來進行，例如，通常用在肽化學領域常用的方法。[參見合成化學叢書，肽合成，作者IZUMIYA Nobuo，UNO Motonori，KATO Tetsuo AOYAGI Haruhiko;由Maruzen有限公司出版，1975，日本]。
用尿烷型保護基保護的氨基上的脫保護反應通過在無溶劑或在溶劑中使氨基與酸接觸來進行，所說溶劑對反應不起副作用。對於所說的溶劑，可使用滷化烴(例如，二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷，等)，醇(例如，甲醇;乙醇，等)，水和這些溶劑的適當比例的混合物。該反應通過使化合物(Ⅱ)或其鹽與一種酸接觸來進行。所說的酸，例如，可使用滷代乙酸(例如三氟乙酸，等)，氫滷酸(例如，氫氯酸、氫溴酸，等)也在其中。N-苄氧基羰基和N-4-甲氧基苄氧基羰基通過催化劑進行催化氫代除去是有利的，所說催化劑，例如，有鈀催化劑(例如，鈀-碳、鈀-硫酸鋇、鈀黑等)或銠催化劑。在這種情況下，可使用已知的溶劑，例如，環狀醚(例如，四氫呋喃，等)，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，或者，根據情況，一種環狀醚和其它惰性溶劑[例如，低級脂肪酸醯胺(例如，二甲基甲醯胺，等)等]的混合物。
N-9-芴基甲氧基羰基可使用有機胺有利地除去，有機胺的例子有二乙胺、哌啶、嗎啉、4-二甲基氨基吡啶或二環己基胺。該反應在對反應不引起副使用的溶劑中進行。作為溶劑，例如，可以使用醯胺(例如，二甲基甲醯胺、乙醯胺等)，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，滷代烴(例如氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷，等)，等，或這些溶劑以適當比例的混合物。
有利的是，N-2，2，2-三氯代乙氧基羰基通過使用金屬(如鋅，等)與有機羧酸(例如，乙酸、丙酸，等)一起來除去。該反應在對反應不引起副作用的溶劑中進行。作為溶劑，例如，可以使用上述羧酸，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，水或這些溶劑以適當比例的混合物。
醯化羥基的脫保護基反應(脫醯化反應)可通過在溶劑中將其與酸接觸來進行，所說溶劑不在反應中起副作用。對於所說的溶劑，可使用滷代烴(例如，二氯甲烷、氯仿、1，2-二氯乙烷，等)，醇(例如，甲醇、乙醇，等)，水和這些溶劑以適當比例的混合物。該反應通過使化合物(Ⅱ)或其鹽與一種酸接觸來進行。所說的酸，例如，使用滷代乙酸(例如三氟乙酸，等)，氫滷酸(例如，氫氯酸、氫溴酸，等)等。
O-苄基的消去優選通過使用催化劑進行催化氫化反應來完成，所說催化劑，例如，有鈀催化劑，例如，鈀-碳、鈀/硫酸鋇和鈀黑等，或銠催化劑，在這種情況下，可使用已知的溶劑，例如，環狀醚(例如，四氫呋喃，等)和其它惰性溶劑[例如，低級脂肪酸醯胺(例如，二甲基甲醯胺，等)等]的混合物。
O-四氫呋喃基或O-叔丁基的消去可通過用酸水解(象上述脫醯化一樣)來完成。
羧酸保護基的消去可通過用酸水解(象上述脫酸化一樣)來完成。苄基酯，例如，可用在象上述O-苄基消去保護基中的情況一樣通過催化氫化反應來脫保護。上述2-(三甲基甲矽烷基)-乙基的消去可在中性條件下和適當溶劑中，例如，通過氫氟酸的一種鹽，如，尤其是季氮鹼與氫氟酸的鹽(例如，四乙胺氟化物，等)的作用來進行。
用於製備上述通式(Ⅰ)或其鹽的起始化合物即用通式(Ⅱ)表示的化合物或其鹽可通過使用在肽合成中常用的方法，使相應於在肽鍵任意位置上斷開的兩個碎片中的一個具有一個活性羧基的物質和相應於另一碎片的具有一個活性氨基的物質進行縮合來製備。
上述作為在肽合成中常用的方法，例如，可使用液相合成方法和固相合成方法中的任意一個。這樣的上述肽合成方法包括，例如，在「肽合成」[由M.Bondosky和M.Ondetti所著，邊緣科學(Interscience)，New York 1966)];「蛋白質」第二卷(由F.M.Finn和K.Hoffmann所著，H.Nenrath和R.L.Hill編輯，Academic Press Inc.New York，1976);「肽合成的基礎和實驗」(由IZUMIYA Nobuo所著，Maruzen Co.Ltd.，1985);「Seikagaku Jikken Koza 1」(由YAJIMA Haruaki，SAKAKIBARA Shunpei等人所著，日本生化學會編輯，Tokyo Kagaku Dojin，1977);「Zoku Seikagaku Jikken Koza 2」(由KIMURA Shun等人所著，日本生化學會編輯，Tokyo Kagaku Dojin 1987);「固相肽合成」(由J.M.Slewart和J.D.Young所著，Pizs化學公司，Illinois，1984)所述的方法，或與這些相類似的方法。上面這些方法的實際例子包括，例如，疊氮化物方法，氯化物方法，酸酐方法，混合酸酐方法，DCC方法，活性酯方法，使用Woodword試劑K的方法，羰基咪唑方法，redoc方法，DCC/HONB方法，DIC/HONB方法，DCC/HONB方法，使用BOP試劑的方法，使用DEPC試劑的方法等等。
對於一個起始碎片的優選的實際的例子，在製備上述化合物(Ⅱ)或其鹽的情況中，可以有，例如，用結構式(Ⅲ)表示的化合物或其鹽
其中，X′和R3具有與上述相同的意義。
化合物(Ⅲ)或其鹽可通過，例如，上述常用的肽合成方法來製備。
化合物(Ⅲ)的優選實例包括如下化合物。
化合物編號結構式P-1 H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBuP-2 H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBuP-3 H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-4 H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBuP-5 H-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-6 H-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-7 H-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBuP-8 H-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBuP-9 H-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-10 H-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBuP-11 H-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBuP-12 H-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBuP-13 H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBuP-14 H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBuP-15 H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBuP-16 H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBuP-17 NH2(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBuP-18 NH2(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu
化合物編號結構式P-19 4－氨基苯甲醯基－Glu(OtBu)-OtBuP-20 4－(甘氨醯氨基)苯甲醯基－Glu(OtBu)-OtBuP-21 NH2(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBuP-22 NH2(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBuP-23 4－(氨基甲基)苯甲醯基－Glu(OtBu)-OtBu氫氯化物P-244-(N-(t-丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲醯基－Glu(OtBu)-OtBuP-25 H-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu作為通過與上述化合物(Ⅲ)化合製備化合物(Ⅱ)的起始碎片，可使用用結構式(Ⅳ)表示的化合物
其中，Y表示氨基保護基;R1和R2與上述具有相同的定義。
在上述通式(Ⅳ)中用Y表示的氨基保護基與上述氨基保護基具有相同的定義。
化合物(Ⅳ)或其鹽，其中R1和R2代表一個且相同的基，可通過適當使用本身已知的方法製備[例如，肽和蛋白質研究國際期刊，38，1991第545-554頁;化學和藥物公報，39第2590-2596頁]。
在R1和R2是相互不同的基團的情況下，最通用的製備方法描述如下。
首先，製備甘油衍生物的一元醯基化合物，例如，縮水甘油或表氯醇。另一方面，胱氨酸的二硫化物鍵(其中氨基和羧基被保護)被還原打開從而得到半胱氨酸衍生物。
通過將該半胱氨酸衍生物與上述一元甘油衍生物進行加成反應，得到2-氨基-6-羥基-7-醯基氧基-4-硫雜庚酸(其中已將氨基和羧基保護)。
在這個反應中，R-(+)-縮水甘油的使用得到了(6R)-2-氨基-6-羥基-7-醯基氧基-4-硫雜庚酸衍生物，而S-(-)-縮水甘油的使用得到了(6S)-2-氨基-6-羥基-7-醯基氧基-4-硫雜庚酸衍生物。
通過上述反應得到的2-氨基-6-羥基-7-醯基氧基-4-硫雜庚酸在6位上的羥基進行常規的醯化，可以得到具有不同O-醯基的2-氨基-6，7-雙(醯基氧基)-4-硫雜庚酸衍生物。
例如，通過直接使用縮水甘油而不是使用醯基甘油衍生物，得到了2-氨基-6，7-二羥基-4-硫雜庚酸衍生物，以及，通過使用常規方法將該產物醯化方便地得到了具有相同O-醯基的2-氨基-6，7-雙(醯基氧基)-4-硫雜庚酸衍生物。
在上述方法中，通過除去如此得到的2-氨基-6，7-雙(醯基氧基)-4-硫雜庚酸衍生物的羧基的保護基，可製備具有保護氨基的2-氨基-6，7-雙(醯基氧基)-4-硫雜庚酸衍生物。
化合物(Ⅳ)的優選實施例包括具有保護氨基的2-氨基-6，7-雙(醯基氧基)-4-硫雜庚酸衍生物其它的實例表示如下化合物編號 結構式GC-1 (2R,6S)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-OHGC-2 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-OHGC-3 (2S,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-OHGC-4 (2S,6S)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-OHGC-5 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-OHGC-6 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(SteO)-4-THT-OHGC-7 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(MyrO)-4-THT-OH將這樣得到的起始碎片用下列方法縮合，然後，如果需要的話，除去用Y表示的氨基保護基得到化合物(Ⅱ)或其鹽。
至於通過活化起始化合物的羧基得到的化合物，例如，可以使用相應的酸酐，疊氮化物，活性酯[例如，與醇(例如，五氯苯酚、2，4，5-三氯苯酚、2，4-二硝基苯酚、氰甲基醇、對-硝基苯酚、N-羥基-5-降冰片烯-2，3-二羧酸醯亞胺、N-羥基琥珀醯亞胺、N-羥基鄰苯二甲醯亞胺、N-羥基苯並三唑)形成的酯]。對於氨基被活化的起始化合物，例如，可以使用相應的磷酸醯胺。
所說的縮合可在溶劑的存在下進行。所說溶劑選自在肽縮合反應中使用的那些已知的溶劑。所說的溶劑的例子包括醯胺，例如無水或含水甲醯胺、二甲基甲醯胺、N-甲基吡咯烷酮，等，亞碸如二甲基亞碸，等，芳香胺如吡啶，等，滷代烴如氯仿、二氯甲烷，等，醚如四氫呋喃、二噁烷，等，腈如乙腈，等，酯如乙酸乙酯、甲酸乙酯，等，或這些物質以適當比例的混合物。
反應溫度可適當地從用於肽鍵形成反應的已知範圍選擇，尤其是，例如，通常在約-20℃至40℃的範圍內。
反應時間可適當地從用於肽鍵形成反應的所需的已知範圍內選擇，尤其是，例如，在約幾分鐘至48小時的範圍內。
除去用Y表示的氨基保護基基本上用與上述相同的方法進行。
在完成該反應後，這樣得到的化合物(Ⅰ)或其鹽可用分離肽的方法來回收，例如，萃取、分配、再沉澱、結晶、各種色譜方法、高效液相色譜方法，等。
可用本身已知的方法得到本發明化合物(Ⅰ)與一種鹼，尤其是藥物上可接受的鹼的鹽。所說鹼的例子包括鹼金屬如鈉、鉀，等，鹼土金屬如鈣、鎂，等，有機鹼如三乙胺、吡啶。等。可用自身已知的方法得到化合物(Ⅰ)與一種酸，尤其是藥物上可接受的酸的鹽。所說酸的例子包括無機酸(例如，鹽酸、硫酸、磷酸，等)，有機酸(例如，乙酸、丙酸、檸檬酸、酒石酸、馬來酸、草酸，等)等等。
化合物(Ⅱ)至(Ⅳ)的鹽使用那些實際上與化合物(Ⅰ)所用的相同的鹽。
化合物(Ⅰ)或其鹽具有顯著改善造血機能不足的狀態的顯著活性，其可用作在哺乳動物(例如，狗、豬、牛、馬、猴、人，等)中癌的放射治療或化學治療引起的白細胞減少的治療或預防劑，在骨髓移植情況中造血刺激劑，用作具有增加白細胞作用的刺激免疫劑，以及還可作為血小板減少症的治療劑。
化合物(Ⅰ)或其鹽是低毒性的，並可安全地使用。
在將化合物(Ⅰ)或其鹽給藥，例如，給人用藥的情況中，其可安全地單獨口服或非口服給藥，或通過與適當的藥物上可接受的形體，賦形劑或稀釋劑混合作為藥物組合物來使用。
上述藥物組合物的例子包括注射劑、口服給藥組合物(例如，粉末顆粒、膠囊、片劑)，局部藥(例如，transnasal劑，經皮膚的藥劑，等)栓劑(例如，直腸栓劑、陰道栓劑)。
這些藥物組合物一般可用在藥物製備方法中所用的自身已知的方法來製備。
例如，本發明的化合物(Ⅰ)或其鹽可與分散劑[例如，Tween 80(由Atlas Powder公司，U.S.A.製造)，HCO60(由Nikko Chemicals製造)，聚乙二醇、羧甲基纖維素、藻酸鈉等]，防腐劑(例如羥苯甲酸甲酯、羥苯甲酸丙酯、苄基醇、氯代丁醇等]和等滲劑(例如，氯化鈉、甘油、山梨糖醇、葡萄糖等)一起製備成含水注射劑，或通過在植物油(如橄欖油、芝麻油、花生油、棉花籽油、玉米油等)，丙二醇等中溶解、懸浮或乳化製備成含油注射液。
為將本發明的化合物(Ⅰ)或其鹽製備成口服給藥的組合物，根據自身已知的方法，將其與賦形劑(例如乳糖、蔗糖、澱粉等)，崩解劑(例如，澱粉、碳酸鈣等)，粘合劑(例如，澱粉、阿拉伯膠、羧甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮、羥丙基纖維素等)或潤滑劑(例如，滑石、硬脂酯鎂、聚乙二醇6000)等，一起壓縮模塑，接著，如果需要的話，用本身已知的方法隱蔽藥味或覆蓋，從而得到腸溶衣或製備成持續釋放的組合物。包衣劑的例子包括羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基纖維素、聚氧亞乙基二醇、Tween 80、Brulonick F68、鄰苯二甲酸乙酸纖維素酯、鄰苯二甲酸羥丙基甲基纖維素酯、琥珀酸乙酯羥甲基纖維素酯、Eudragit(由德國的Rohm製造，異丁烯酸·丙烯酸共聚物)和色素如二氧化鈦、三氧化二鐵等。根據本身已知的方法可在腸溶及和核之間提供包底衣。
為將化合物(Ⅰ)或其鹽製備成局部應用的固體、半固體或液體組合物，可採用本身已知的方法。例如，為製備固體組合物將化合物(Ⅰ)或其鹽製備成單一的粉末組合物或與賦形劑(例如，乙二醇、甘露糖醇、澱粉、微晶纖維素等)，稠化劑(例如，天然橡膠、纖維素衍生物、丙烯酸聚合物等)摻合。作為上述液體組合物，幾乎與注射液的情況一樣，包括含油或含水懸浮液。作為半固體組合物，優選考慮含水或含油膠狀組合物或軟膏。這些組合物可以添加PH調節劑(例如，碳酸、磷酸、檸檬酸、鹽酸、氫氧化鈉，等)，防腐劑(例如，對羥基苯甲酸酯、氯代丁醇、氯化苯甲烴銨，等)。
在製備栓劑的情況中，例如，本發明的化合物(Ⅰ)或其鹽可製備成含油或水溶性固體、半固體或液體栓劑。作為上述組合物的含油基質，可使用任意一個不溶解化合物(Ⅰ)或其鹽的基質，其例子為高級脂肪酸甘油酯[例如，可可酯、Wittepsols(由Dynamite Nobel，Inc.製造)，等]，中級脂肪酸甘油酯[例如，Migliols(由Dynamite Nobel Inc.製造)，等]或植物油(例如，芝麻油、大豆油、棉花籽油，等)。水溶性鹼的例子包括聚乙二醇和丙二醇，水溶性凝膠基質的例子包括天然橡膠、纖維素衍生物、乙烯基聚合物、丙烯酸聚合物，等。
化合物(Ⅰ)或其鹽作為注射液用於人類治療時其劑量隨疾病，給藥途徑、病人的年齡和疾病情況而變化，在通常成年病人(50Kg體重)的情況中，其有效組分在約0.01μg至20mg，優選0.1μg至0.2mg，最好在約0.5μg至50μg範圍內。通過下面的參考例、加工例、實驗例和製劑例，將更詳細地描述本發明，但不是以任何方法限制本發明。在混合溶劑中，所示的混合比的數量均為每一個溶劑的體積比。百分數(%)意義，除非特殊說明，為重量百分數(W/W%)。
1H-NMR光譜通過使用四甲基矽烷作內標，用Varian Gemini 200(200MHz)型光譜儀來測定，所有的δ值均以ppm表示。
在參考例和加工例中所用的符號具有如下意義。s單峰，d雙重峰，t三重峰，q四重峰，dd二重雙重峰，dt二重三重峰，m多重峰，br寬帶。
參考例1H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thrt(Bu)-COtBu(P-1)的製備將H-Gly-Gly-Gly-OH(10.0g，52.9mmol，由肽研究實驗室製備)溶於4N氫氧化鈉水溶液(13.3ml)中。在冰冷卻下，向該溶液中加入4N氫氧化鈉水溶液(15.9ml)和苄氧基羰基氯(9.31ml)，然後，在20℃下，將該混合物攪拌隔夜。用醚洗滌該反應混合物。在冰冷卻下，向該含水層中加入5M HCl從而調節PH值至3，並在冷的地方，將其靜置隔夜。用過濾收集得到的結晶沉澱。用冷水洗滌並乾燥。這樣得到的晶體不用提純即可使用，產量為13.4g(78.5%)。
將上面得到的Z-Gly-Gly-Gly-OH(3.04g，9.41mmol)溶於DMF(200ml)中。在冰冷卻下，向該溶液中加入HONB(1.86g，10.4mmol)和DCC(2.14g，10.4mmol)。在冰冷卻下，將該混合物攪拌2小時，過濾掉不溶物質。
將Z-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(6.66g，9.41mmol)溶於甲醇(300ml)中。向該溶液中加入10%(W/W，下文同)鈀-碳。在氫氣流下，在常溫常壓下，將該混合物攪拌2小時。過濾掉催化劑，蒸餾掉溶劑，將剩餘物溶於DMF(150ml)。在冰冷卻下，向該溶液中加入二異丙基乙胺(1.80ml，10.4mmol)。將該混合物攪拌，並向其中加入上述製備的溶液，在20℃下將該混合物攪拌隔夜，然後蒸發掉溶劑。向殘餘物中加入氯仿和水，並用氯仿萃取。氯仿層用10%(W/V)檸檬酸的水溶液、水、飽和碳酸氫鈉水溶液和水連續洗滌，然後在無水硫酸鈉上乾燥。蒸餾掉溶劑。殘餘物用矽膠柱色譜法[5%(V/V甲醇-氯仿]純化，接著用乙酸乙酯-乙腈重結晶得到結晶狀的Z-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu。產量是5.74g(75.4%)。
m.p.167.5-168.0℃[α]25D+7.28°(c＝1.03，在DMF中)對C43H70N5O13的元素分析計算值C，58.75;H，8.03;N，9.56實測值C，58.52;H，7.78;N，9.35胺基酸分析[6N HCl，110℃，水解24小時;括號中的值表示理論值]Glu1.00(1);Thr1.81(2);Gly2.84(3)上述得到的Z-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(1.97g，2.24mmol)溶於甲醇(60ml)中。向該溶液中加入10%鈀-碳(120mg)。在氫氣流下，在常溫常壓下，將該混合物攪拌2小時。除去催化劑，蒸餾掉溶劑留下固體產物P-1，產量是1.64g(98%)。
FAB-MS(M+H)＝879(理論值＝879)參考例2H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(P-2)的製備a)將H-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(1.27g，3.05mmol)和Z-Gly-Gly-Gly-OH(0.99g，3.05mmol)溶解在DMF(20ml)中。向該溶液中加入HOBT(453mg，3.35mmol)和WSC(643mg，3.35mmol)。在20℃下，將該混合物攪拌8小時。將該反應混合物濃縮，並將其懸浮在0.2M檸檬酸水溶液(70ml)中，接著用乙酸乙酯(100ml，7.0ml)萃取。合併乙酸乙酯層，並用10%(W/V)氯化銨水溶液、5%(W/V)碳酸氫鈉水溶液、水和飽和食鹽水溶液連續洗滌，然後在無水硫酸鈉上乾燥，並接著濃縮。向該濃縮物中加入醚-己烷。用過濾收集得到的沉澱，從而得到白色粉末產物(1.87g，85%)Z-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(Z-P-2)。23D+6.9°(c＝0.55，在氯仿中)對C35H55N5O11的元素分析計算值C，58.24;H，7.68;N，9.70實測值C，57.87;H，7.64;N，9.97b)將該粉末產物(1.09g)溶解在甲醇(36ml)中，向其中加入10%鈀-碳(109ml)。在氫氣流下，在常溫常壓下，將該混合物攪拌2小時。除去催化劑，蒸餾掉溶劑留下粉末產物P-2(861mg)。23D+9.1°(c＝0.53，在氯仿中)對C27H49N5O9的元素分析計算值C，55.18;H，8.40;N，11.92實測值C，54.88;H，8.57;N，11.68參考例3H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-3)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-3)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH DCC 287mg Z-P-3(568mg) HOBT 188mg (550mg)OMF 25ml2)H-Gly-Glu(OtBu)- 20℃ 16hGly-D-Glu(OtBu)-OtBu(710mg)b)Z-P-3 10%Pd-C 100mg P-3(550mg) MeOH 18mg (470mg)20℃ 4h化合物Z-P-3[α]20D+5.0°(c＝0.54，在氯仿中)對C43H67N5O14的元素分析計算值C，58.82;H，7.69;N，7.98實測值C，58.67;H，7.67;N，8.26化合物P-3[α]20D-6.1°(c＝0.51，在氯仿中)對C35H61N5O12的元素分析計算值C，56.51;H，8.27;N，9.42實測值C，56.66;H，8.30;N，9.63
參考例4H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-4)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Gly-Gly-Gly-Glu-(OtBu)-OtBu(P-4)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Gly-Gly-Gly-OH WSC 548mg Z-P-4(0.84g) HOBT 386mg (0.81g)DMF 15ml2)H-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 18h(0.68g)b)Z-P-4 10%Pd-C 73mg P-4(735mg) MeOH 25mg (543mg)20℃ 2h化合物Z-P-4[α]23D+9.6°(c＝0.56，在氯仿中)對C27H40N4O9的元素分析計算值C，57.43;H，7.14;N，9.92實測值C，57.60;H，7.12;N，9.88化合物P-4[α]23D+13.1°(c＝0.51，在氯仿中)對C19H34N4O7·0.5H2O的元素分析計算值C，51.92;H，8.03;N，12.75實測值C，52.09;H，7.89;N，12.56
參考例5H-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-5)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-5)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Gly-Gly-Gly-OH WSC 1.06g Z-P-5(1.62g) HOBT 744mg (1.93g)DMF 25ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(1.30g)b)Z-P-5 10%Pd-C 192mg P-5(1.92g) MeOH 64mg (1.53g)20℃ 1.3h化合物Z-P-5[α]23D+9.1°(c＝0.54，在氯仿中)對C27H40N4O9的元素分析計算值C，57.43;H，7.14;N，9.92實測值C，57.38;H，7.06;N，10.02化合物P-5[α]23D-13.5°(c＝0.54，在氯仿中)對C19H34N4O7·0.5H2O的元素分析計算值C，51.92;H，8.03;N，12.75實測值C，51.98;H，7.93;N，12.68
參考例6H-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-6)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-6)。
原料 反應條件 產物a)1)Fmoc-Glu(OtBu)-OH WSC 1.24g Fmoc-P-6(2.78g) HOBT 876mg (3.73g)DCM 85ml2)H-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(1.86g)[α]23D-12°(c＝0.54，在氯仿中)對C39H53N3O10的元素分析計算值C，64.71;H，7.38;N，5.80實測值C，64.55;H，7.43;N，6.09c)將該粉末產物(2.10g)溶解在二氯甲烷(63ml)中，並向其中加入哌啶(7.0ml)，在室溫下將該混合物攪拌1小時。向該反應混合物中加入乙酸乙酯(300ml)，並用1N HCl(70ml)和0.03N HCl(100ml×2)萃取。將含水層調節PH值至6.0，並用己烷∶乙醚(1∶1)的混合物洗滌(100ml×5)。然後，將PH值調節至8.6，接著用乙酸乙酯(150ml×2)萃取。然後在無水硫酸鈉上乾燥，濃縮得到無色油狀產物P-6。23D-17°(c＝0.47，在氯仿中)對C24H43N3O8的元素分析計算值C，57.47;H，8.64;N，8.38實測值C，57.40;H，8.73;N，8.60參考例7H-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-7)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-7)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Gly-Gly-OH WSC 1.63g Z-P-7(2.05g) HOBT 1.15g (3.34g)DMF 40ml2)H-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 17h(2.00g)b)Z-P-7 10%Pd-C 200mg P-7(無色油狀產物)(2.00g) MeOH 60mg (1.45g)20℃ 3h化合物Z-P-7對C25H37N3O8·0.5H2O的元素分析計算值C，58.13;H，7.41;N，8.13實測值C，58.44;H，7.37;N，8.33
參考例8H-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(P-8)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(P-8)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Gly-Gly-Gly-OH WSC 3.44g Z-P-8(6.67g) HOBT 2.42g (8.30g)DMF 100ml2)H-Asp(OtBu)-OtBu 20℃ 15h(4.00g)b)Z-P-8 10%Pd-C 187mg P-8(1.87g) MeOH 60mg (1.35g)20℃ 2h化合物Z-P-8對C39H38N4O9的元素分析計算值C，56.72;H，6.96;N，10.18實測值C，56.48;H，6.88;N，10.23化合物P-8對C18H32N4O7的元素分析計算值C，51.91;H，7.74;N，13.45實測值C，51.80;H，8.11;N，13.50
參考例9H-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-9)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-9)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Gly-Gly-OH WSC 569mg Z-P-9(790mg) HOBT 401mg (1.18g)DMF 23ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(700mg)b)Z-P-9 10%Pd-C 110mg P-9(1.10g) MeOH 40ml (850mg)20℃ 2h化合物Z-P-9[α]24D-9.3°(c＝0.53，在氯仿中)對C25H37N3O8·0.5H2O的元素分析計算值C，58.13;H，7.41;N，8.13實測值C，58.31;H，7.42;N，8.24化合物P-9[α]23D-11.9°(c＝0.37，在氯仿中)對C17H31N3O6·0.25H2O的元素分析計算值C，54.02;H，8.40;N，11.12實測值C，53.84;H，8.85;N，11.24
參考例10H-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-10)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Glu-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-10)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Gly-OH WSC 569mg Z-P-10(620mg) HOBT 401mg (1.23g)DCM 23ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(700mg)b)Z-P-10 10%Pd-C 120mg P-10(1.23g) MeOH 40mg (830mg)20℃ 1.5h化合物Z-P-10[α]20D-10.3°(c＝0.52，在氯仿中)對C23H34N2O7·0.25H2O的元素分析計算值C，60.71;H，7.64;N，6.16實測值C，60.79;H，7.68;N，6.28化合物P-10[α]20D-17.9°(c＝0.52，在氯仿中)對C15H28N2O5的元素分析計算值C，56.94;H，8.92;N，8.85實測值C，56.81;H，8.95;N，9.04
參考例11H-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-11)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-11)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Gly-OH WSC 318mg Z-P-11(347mg) HOBT 224mg (930mg)DCM 22ml2)H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(670mg)b)Z-P-11 10%Pd-C 90mg P-11(870mg) MeOH 30mg (650mg)20℃ 2h化合物Z-P-11熔點92.4-92.7℃[α]24D-3.5°(c＝0.51，在氯仿中)對C32H49N3O10·0.25H2O的元素分析計算值C，60.03;H，7.79;N，6.56實測值C，60.18;H，7.81;N，6.26化合物P-11[α]24D-6.8°(c＝0.54，在氯仿中)對C24H43N3O8·0.25H2O的元素分析計算值C，56.95;H，8.66;N，8.30實測值C，56.92;H，8.74;N，8.06
參考例12H-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-12)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-12)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Gly-OH WSC 334mg Z-P-12(364mg) HOBT 235mg (760mg)DCM 23ml20℃ 16h2)H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(700mg)b)Z-P-12 10%Pd-C 70mg P-12(700mg) MeOH 23mg (550mg)20℃ 2h化合物Z-P-12[α]23D-11.5°(c＝0.53，在氯仿中)對C32H49N3O10的元素分析計算值C，60.46;H，7.77;N，6.61實測值C，60.47;H，7.88;N，6.53化合物P-12[α]23D-19.8°(c＝0.51，在氯仿中)對C24H43N3O8·0.5H2O的元素分析
計算值C，56.45;H，8.69;N，8.23實測值C，56.52;H，8.77;N，8.25參考例13H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-13)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(P-13)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 447mg Z-P-13(785mg) HOBT 315mg (1.20g)DCM 22ml2)H-Gly-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(670mg)b)Z-P-13 10%Pd-C 110mg P-13(1.10g) MeOH 40mg (840mg)20℃ 2h化合物Z-P-13[α]24D+4.2°(c＝0.53，在氯仿中)對C32H49N3O10的元素分析計算值C，60.46;H，7.77;N，6.61實測值C，60.48;H，7.78;N，6.88
化合物P-13[α]24D+7.0°(c＝0.52，在氯仿中)對C24H43N3O8·0.25H2O的元素分析計算值C，56.95;H，8.66;N，8.30實測值C，56.94;H，8.60;N，8.04參考例14H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-14)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-14)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 1.06g Z-P-14(1.86g) HOBT 746mg (3.09g)DCM 43ml2)H-D-Glu(OtBu)-OtBu 20℃ 16h(1.30g)b)Z-P-14 10%Pd-C 500mg P-14(3.00g) MeOH 67mg (2.24g)20℃ 3h化合物Z-P-14[α]23D-7.9°(c＝0.56，在氯仿中)對C30H46N2O9的元素分析
計算值C，62.27;H，8.01;N，4.84實測值C，62.49;H，8.14;N，5.07化合物P-14[α]23D+2.3°(c＝0.61，在氯仿中)對C22H40N2O7·1.5H2O的元素分析計算值C，56.03;H，9.19;N，5.94實測值C，56.04;H，8.96;N，5.92參考例15H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-15)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(P-15)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 318mg Z-P-15(559mg) HOBT 224mg (1.06g)DCM 22ml20℃ 16h2)H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(670mg)b)Z-P-15 10%Pd-C 100mg P-15(1.00g) MeOH 33ml (800mg)20℃ 2h
化合物Z-P-15[α]24D-11.7°(c＝0.53，在氯仿中)對C39H61N3O12的元素分析計算值C，61.32;H，8.05;N，5.50實測值C，61.40;H，8.13;N，5.28化合物P-15[α]24D-13.9°(c＝0.49，在氯仿中)對C31H55N3O10的元素分析計算值C，59.12;H，8.80;N，6.67實測值C，58.96;H，8.91;N，6.80參考例16H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-16)的製備用基本上與參考例2相同的方法，製備H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(P-16)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Glu(OtBu)-OH WSC 334mg Z-P-16(586mg) HOBT 235mg (880mg)DCM 23ml20℃ 16h2)H-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(700mg)
b)Z-P-16 10%Pd-C 80mg P-16(800mg) MeOH 27ml (640mg)20℃ 2h化合物Z-P-16[α]24D-20.6°(c＝0.52，在氯仿中)對C39H61N3O12的元素分析計算值C，61.32;H，8.05;N，5.50實測值C，61.20;H，8.26;N，5.31化合物P-16[α]24D-25.5°(c＝0.54，在氯仿中)對C31H55N3O10·0.25H2O的元素分析計算值C，58.70;H，8.82;N，6.63實測值C，58.76;H，8.91;N，6.45參考例17NH2(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-17)的製備a)向溶於DMF(50ml)中的8-(苄氧基羰基氨基)-辛酸(1.55g)和H-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(1.88g)溶液中加入TEA(1.70ml)和DEPC(1.29g)，在20℃下，將該反應混合物攪拌24小時，向該反應混合物中加入水，並用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%(W/V，下文同)檸檬酸的水溶液、碳酸氫鈉飽和水溶液和飲和食鹽水溶液洗滌，然後在無水硫酸鈉上乾燥。蒸餾掉溶劑。殘餘物用矽膠色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化得到無色油狀產物Z-NH(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(Z-P-17)(2.40g，收率85%)。
IR(純)ν3310，1720，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.10-1.37(8H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.48-2.43(8H，m)，3.18(2H，q，J＝6.6Hz)，4.41-4.54(1H，m)，4.70-4.88(1H，m)，5.10(2H，s)，6.15(1H，d，J＝8.0Hz)，7.27-7.37(5H，m)b)上述得到的化合物Z-P-17(1.19g)的乙醇(20ml)溶液中加入10%鈀-碳(100mg)。在20℃和氫氣流下，將該混合物攪拌2小時。將反應混合物過濾得到無色油狀產物P-17(739mg，收率83%)。
IR(純)ν3280，1720，1660cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.20-1.40(6H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.52-2.38(10H，m)，2.38-2.65(2H，m)，2.73(2H，t，J＝7.0Hz)，4.42-4.55(1H，m)，6.21(1H，d，J＝8.2Hz)參考例18NH2(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-18)的製備用基本上與參考例17相同的方法，製備NH2(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-18)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-NH(CH2)11COOH DEPC 2.45g Z-P-18(3.49g) TEAT 3.5ml (2.32g)DMF 100ml2)H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu).HCl 20℃ 24h
(2.96g)b)Z-P-18 10%Pd-C 230mg P-18(2.31mg) EtOH 50ml (1.78g)20℃ 2h化合物 Z-P-18IR(純)ν3310，1725，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.10-1.41(16H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.41-2.44(8H，m)，3.19(2H，dt，J＝7.0，7.0Hz)，4.42-4.56(1H，m)，5.10(2H，s)，6.13(1H，d，J＝7.6Hz)，7.23-7.40(5H，m)化合物 P-18IR(純)ν3280，1730，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.05-1.40(16H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.55-1.72(4H，m)，1.72-2.50(10H，m)，2.68(2H，t，J＝7.0Hz)，3.19(2H，t，J＝7.6Hz)，4.43-4.57(1H，m)，6.14(1H，d，J＝7.8Hz)參考例194-氨基苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(P-19)的製備向溶於DMF(200ml)中的4-氨基苯甲酸(6.86g)和H-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(14.8g)溶液中加入TEA(17ml)和DEPC(12.2g)。在20℃下將混合物攪拌48小時，向該反應混合物中加入水，並用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%檸檬酸的水溶液，碳酸氫鈉飽和水溶液和飽和食鹽水溶液洗滌，然後在無水硫酸鈉上乾燥。蒸餾掉溶劑。殘餘物用醚洗滌得到白色粉末產物化合物P-19(16.2g，收率86%)。
IR(KBr)ν3450，3390，3370，1715，1625，1610cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.90-2.53(4H，m)，3.99(2H，br s)，4.60-4.73(1H，m)，6.61-6.72(2H，m)，6.76(1H，d，J＝7.6Hz)，7.60-7.71(2H，m)參考例204-(甘氨醯氨基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(P-20)的製備a)向溶於吡啶(2ml)中的在參考例19中得到的化合物P-19的溶液中加入三氯化磷(0.087ml)，在室溫下，將該混合物攪拌2小時。向該混合物中再加入Z-甘氨酸(209mg)，並在20℃攪拌18小時。向該反應混合物中加入水，並用乙酸乙酯萃取，然後在無水硫酸鈉上乾燥。蒸餾掉溶劑。殘餘物用矽膠柱色譜法(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)提純得到白色粉末產物化合物Z-P-20(414mg，收率73%)。
IR(KBr)ν3310，1700，1640，1600cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.95-2.55(4H，m)，4.02(2H，d，J＝5.8Hz)，4.59-4.72(1H，m)，5.17(2H，s)，5.59-5.75(1H，m)，7.09(1H，d，J＝7.8Hz)，7.30-7.42(5H，m)，7.53(2H，d，J＝8.0Hz)，7.77(2H，d，J＝8.0Hz)，8.30-8.50(1H，m)b)向溶於乙醇(4ml)的化合物Z-P-20(414mg)的溶液中加入10%鈀-碳(40mg)。在20℃下和氫氣流中，將該混合物攪拌2小時。將反應混合物過濾得到白色粉末產物P-20(296mg，收率94%)。
IR(KBr)ν3425，3400，1740，1720，1680，1640，1610cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ1.41(9H，s)，1.48(9H，s)，1.90-2.55(4H，m)，3.59(2H，br s)，4.58-4.72(1H，m)，7.02-7.15(1H，m)，7.65(2H，d，J＝8.8Hz)，7.77(2H，d，J＝8.8Hz)，9.65-9.77(1H，m)參考例21NH2(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-21)的製備用基本上與參考例17相同的方法，合成NH2(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(P-21)原料 反應條件 產物a)1)Z-NH(CH2)5COOH DEPC 2.45g Z-P-21(2.92g) TEA 4.9ml (5.30g)DMF 50ml2)H-Glu(OtBu)-OtBu.HCl 0℃ 30min(2.95g)b)Z-P-21 10%Pd/C 0.5g P-21(5.30g) MeOH 100ml (3.89g)20℃ 2h
化合物 P-211H-NMR(CDCl3)δ1.389(2H，m)，1.444(9H，s)，1.50-1.75(4H，m)，1.75-2.15(2H，m)，2.15-2.38(4H，m)，2.796(2H，t，J＝6.6Hz)，3.320(2H，bs)，4.460(1H，m)，6.400(1H，d，J＝7.4Hz)IR(純)ν3270，3040，2970，2920，2855，1725，1645.1540，1470，1450，1390，1360，1320，1290，1250，1220，1150cm-1參考例22NH2(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(P-22)的製備a)將六亞甲基二胺(2.32g，20mmol)溶於甲醇(20ml)中。向該溶液同時加入1N氫氧化鈉水溶液(22ml)和溶於THF(20ml)中的苄酯基氯(3.4g，20mmol)。在20℃下將混合物攪拌1小時。將反應混合物濃縮至乾燥，將濃縮液溶於氯仿(100ml)中。該溶液用水和飽和食鹽水溶液洗滌。將有機相在無水硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮至乾燥。使濃縮液在用氨處理的矽膠柱(20g)上吸收。用氯仿-甲醇-水(65∶25∶4)進行洗脫得到無色油狀產物。將該產物溶於TEA(1.34ml，9.64mmol)和DCM(10ml)中，在冰冷卻下，向該溶液中加入氯甲酸4-硝基苯酯(971mg，4.82mmol)，將該混合物攪拌1小時。向反應混合物中加入氯仿(20ml)，並用水和飽和食鹽水溶液洗滌。有機相在無水硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮至乾燥。用乙酸乙酯洗滌濃縮液得到無色晶體狀的6-苄氧基羰基氨基-1-(對硝基苯氧基羰基)氨基己烷(1.16g，收率14.5%)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.25-2.70(8H，m)，3.225(4H，m)，4.742(1H，br s)，5.099(2H，s)，5.25(1H，br s)，7.284(2H，d，J＝9.0Hz)，8.237(2H，d，J＝9.0Hz)b)將上面得到的化合物(1.16g，2.79mmol)和H-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(825mg，2.79mmol)溶於DCM(10ml)中。向該溶液中加入DMAP(680mg，5.58mmol)和TEA(0.77ml，5.58mmol)，並在20℃下將該混合物攪拌2小時。向該反應混合物中加入氯仿(20ml)。在PH為3.5時用水洗滌該混合物，接著，用碳酸氯鈉的飽和水溶液洗滌。有機相在無水硫酸鈉上乾燥，並在減壓下濃縮。用矽膠柱[20g，乙酸乙酯-正己烷(2∶3)]提純濃縮物得到白色固體產物Z-NH(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(Z-P-22)(1.50g，收率100%)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.20-1.38(8H，m)，1.436(9H，s)，1.453(9H，s)，1.70-2.22(2H，m)，2.326(2H，m)，3.169(4H，m)，4.340(1H，m)，4.626(1H，br s)，4.869(1H，br s)，5.045(1H，d，J＝7.6Hz)，5.103(2H，s)，7.352(5H，s)IR(純)ν3350，2980，2940，2855，1730，1640，1560，1455，1395，1370，1330，1255，1150，1100，1030，850，750，735，700cm-1c)將10%鈀-碳(250mg)懸浮在甲醇(20ml)中。在氫氣流中將懸浮液攪拌30分鐘，並向其中加入化合物Z-P-22(1.50g，2.79mmol)，接著在20℃下和氫氣流中，將其攪拌1.5小時。過濾從反應混合物中除去不溶物質。在減壓下將濾液濃縮至乾燥得到無色固體產物P-22(1.12g，收率100%)。
1H-NMR(CDCl3)δ1.391(10H，m)，1.431(9H，s)，1.451(9H，s)，1.747(2H，m)，1.60-2.15(2H，m)，2.90-3.20(4H，m)，4.321(1H，m)，6.013(2H，m)IR(純)ν3350，2980，2930，2860，1730，1640，1560，1500，1475，1455，1390，1365，1250，1150cm-1參考例23製備4-(氨基甲基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(P-23)a)在冰冷卻的同時，向4-(氨基甲基)苯甲酸(25g)在2N氫氧化鈉水溶液(100ml)中的溶液滴加含苄氧基羰基氯(33.8g)的THF(50ml)溶液，將該混合物攪拌2小時。過濾收集得到的沉澱，該沉澱用水、1N HCl和乙醚洗滌，接著在減壓下乾燥，得到白色粉末狀的4-(乙-氨基甲基)苯甲酸產物(10.5g，收率22%)。
IR(純)ν3313，1684，1612，1529，1430，1322，1292，1253，1054，761，696cm-11H-NMR(CDCl3)δ4.26(2H，d，J＝6.2Hz)，5.05(2H，s)，7.31(2H，d，J＝8.0Hz)，7.36(5H，s)，7.87(2H，d，J＝8.0Hz)b)向在DMF(20ml)中的如上合成的4-(Z-氨基甲基)苯甲酸(1.0g)、H-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(1.15g)和DEPC(860mg)溶液中滴加TEA(1.06g)。將該混合物在20℃攪拌1小時。減壓下蒸去溶劑，剩餘物用矽膠柱(正己烷∶乙酸乙酯＝2∶1)純化，得到無色蠟狀的4-(Z-氨基甲基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu產物(1.86g，收率100%)。
IR(純)ν1720，1700，1640，1530，1500，1360，1250，1145cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.90-2.55(4H，m)，4.43(2H，d，J＝6.0Hz)，4.66(1H，m)，5.15(3H，s)，7.01(1H，d，J＝7.0Hz)，7.30-7.40(7H，m)，7.79(2H，d，J＝8.4Hz)c)使如上得到的化合物(1.85g)和10%鈀-碳(200mg)的甲醇(13ml)懸浮液催化還原，共消耗氫氣80ml。濾去催化劑，向濾液中加入4N HCl乙酸乙酯溶液(0.88ml)。該溶液濃縮得到無定形產物4-(氨基甲基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(P-23)。
IR(純)ν3400，3000，1731，1650，1540，1506，1369，1235，1151cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.41(9H，s)，1.48(9H，s)，1.90-2.40(4H，m)，4.13(2H，s)，4.59(1H，m)，7.48(2H，d，J＝8.0Hz)，7.69(3H，d，J＝8.0Hz)參考例24製備4-(N-(叔丁氧基羰甲基)氨基甲基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(P-24)a)在冰冷卻的同時，向對甲醛基苯甲酸甲酯(3.0g)、H-Gly-OtBu鹽酸鹽(3.0g)、TEA(1.81g)和乙酸(1.08g)的溶液加入氰基硼氫化鈉(1.15g)，將該混合物在20℃下攪拌1小時。濃縮反應混合物，然後使其溶於乙酸乙酯中。溶液用碳酸氫鈉的飽和水溶液洗滌，接著進行乾燥。濃縮得到的混合物，濃縮液用矽膠柱(正己烷∶乙酸乙酯＝9∶1-5∶1)純化，得到4-(N-(叔丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲酸甲酯(1.98g，收率39%)。
IR(純)ν2975，1720，1605，1455，1430，1410，1390，1360，1280，1225，1150，1100cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.47(9H，s)，3.30(2H，s)，3.85(2H，s)，3.91(3H，s)，7.41(2H，d，J＝8.4Hz)，8.00(2H，d，J＝8.4Hz)b)在冰冷卻的同時，向在DCM(20ml)中的如上合成的化合物(1.03g)和TEA(445mg)溶液中加入苄氧基羰基氯(690mg)。將該混合物攪拌2小時。減壓蒸去溶劑，將剩餘物溶解在THF(6ml)-MeOH(10ml)-H2O(1ml)混合物中。向該溶液中加入LiOH·H2O(400mg)，將混合物在20℃下攪拌4小時。減壓蒸去溶劑，用5%的KHSO4水溶液使剩餘物呈酸性，接著用氯仿萃取。乾燥萃取液，然後在減壓下蒸去溶劑，剩餘物用矽膠柱(正己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)純化，得到4-(N-苄氧基羰基-N-(叔丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲酸(337mg，收率23%)。
IR(純)ν1735，1705，1700，1450，1410，1360，1290，1230，1220，1150cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ1.37(1/2x9H，s)，1.45(1/2x9H，s)，3.81(1/2x2H，s)，3.92(1/2x2H，s)，4.60-4.75(2H，m)，5.20(2H，s)，7.25-7.45(7H，m)，8.05(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)，8.08(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)c)將在DMF(8ml)中的如上得到的化合物(335mg)、H-Glu(OtBu)-OtBu鹽酸鹽(273mg)、DEPC(205mg)和TEA(255mg)溶液在20℃下攪拌1小時。減壓蒸去溶劑，剩餘物用矽膠柱(正己烷∶乙酸乙酯＝4∶1)純化，得到4-(N-苄氧基羰基-N-(叔丁氧基羰基甲基)氨基甲基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(504mg，收率94%)。
IR(純)ν3350，2970，1730，1710，1660，1530，1495，1450，1360，1240，1220，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.37(1/2x9H，s)，1.42(9H，s)，1.45(1/2x9H，s)，1.50(9H，s)，1.95-2.50(4H，m)，3.77(1/2x2H，s)，3.88(1/2x2H，s)，4.60-4.75(3H，m)，5.20(2H，s)，7.02(1H，d，J＝7.4Hz)，7.20-7.40(7H，m)，7.77(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)，7.80(1/2x2H，d，J＝8.0Hz)d)對如上得到的化合物(500mg)和10%Pd-C(200mg)在甲醇(8ml)中的溶液進行催化還原，使其消耗20ml氫氣。除去催化劑，然後減壓蒸去溶劑，剩餘物用正己烷∶乙酸乙酯(3∶1)研磨，得到化合物P-24(265mg，收率67%)，為白色粉末狀產物。
IR(純)ν3400，2970，1730，1650，1535，1525，1360，1245，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ1.43(9H，s)，1.47(9H，s)，1.49(9H，s)，1.90-2.50(4H，m)，3.53(2H，s)，4.41(2H，s)，4.65(1H，m)，7.18(1H，d，J＝7.2Hz)，7.70(2H，d，J＝8.0Hz)，7.88(2H，d，J＝8.0Hz)參考例25製備H-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(P-25)按照基本上與參考例2相同的方法製備H-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(P-25)。
原料 反應條件 產物a)1)Z-Gly-OH WSC 745mg Z-P-25(813mg) HOBT 525mg (1.90g)DMF 20ml2)H-Lys(Boc)-Gly-OtBu 20℃ 13h(1.27g)b)Z-P-25 10%Pd/C 154mg P-25(1.54g) MeOH 40ml (1.15g)化合物Z-P-25[α]24D-13.4°(c＝0.58，在氯仿中)對C27H42N4O8·0.5H2O的元素分析計算值C，57.95;H，7.74;N，10.01實測值C，57.73;H，7.44;N，10.03
化合物P-25[α]24D-23.8°(c＝0.58，在氯仿中)對C19H36N4O6·H2O的元素分析計算值C，52.52;H，8.81;N，12.89實測值C，52.72;H，8.81;N，12.86實施例1製備(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)2將D-胱氨酸(5.00g，20.8mmol)溶於60%高氯酸(10.2ml)中，在冰冷卻的同時，向該溶液中加入乙酸叔丁酯(117ml)，將該混合物在20℃攪拌2天。對反應混合物過濾，收集晶體。晶體用乙醚(150ml)洗滌，然後懸浮在碳酸氫鈉的飽和水溶液(100ml)中;該懸浮液用乙酸乙酯(2×150ml)萃取，合併乙酸乙酯層，用水洗滌，並用無水硫酸鈉乾燥，濃縮後得到無色油狀產物(4.16g)。該油狀產物溶解在THF(60ml)中，在冰冷卻的同時，向該溶液中加入N-(9-芴基甲氧基羰氧基)琥珀醯亞胺(8.16g，24.2mmol)和N-乙基嗎啉(3.08ml，24.2mmol)的THF(10ml)溶液，混合物在室溫下攪拌2.5小時。濃縮反應混合物，濃縮物懸浮在檸檬酸的10%水溶液(200ml)中。懸浮液用氯仿(2×200ml)萃取，合併氯仿層，用水洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥，接著濃縮。濃縮物用乙酸乙酯結晶得到無色晶體狀的(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)2(8.68g，收率52%)，m.p.149.5-150℃。23D+5.9°(c＝0.52，在氯仿中)對C44H48N2O8S2的元素分析計算值C，66.31;H，6.07;N，3.51;S，8.05實測值C，66.55;H，6.13;N，3.43;S，7.97實施例2製備(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-1)a)將參考文獻(J.W.Metzger等人，Int.J.Peptide Protein Res.38，P545，1991)所述方法製備的(Fmoc-(R)-Cys-OtBu)2(10.0g，12.5mmol)溶於DCM(80ml)中，在冰冷卻的同時，向該溶液中加入粉末狀鋅(3.27g，50.0mmol)和MeOH-36%HCl-濃H2SO4(100∶7∶1)混合物(下文簡稱為「酸混合物溶液」)(40ml)。將得到的混合物在20℃下攪拌30分鐘。向該反應混合物中加入(S)-(-)-縮水甘油(8.29ml，125mmol)，混合物在40℃下攪拌2小時。濃縮反應混合物直至其體積下降為40ml，然後濾去不溶物。向濾液中加入飽和鹽水溶液(200ml)，混合物用DCM(2×300ml)萃取，合併DCM層，用無水硫酸鈉乾燥，然後濃縮。濃縮物用矽膠柱色譜純化，以乙酸乙酯-己烷(1∶1，2∶1)洗脫，合併含有目標化合物的部分並濃縮得到白色粉末狀產物(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羥基-4-THT-OtBu(GC-1a)(10.9g，收率92%)。21D+6.7°(c＝0.56，在氯仿中)對C25H31NO6·H2O的元素分析計算值C，61.08;H，6.77;N，2.85;S，6.52實測值C，60.95;H，6.62;N，2.70;S，6.31b)將化合物GC-1a(11.0，23.2mmol)溶於THF(200ml)中，向該溶液中加入棕櫚酸(19.1g，74.3mmol)、DIC(11.6ml，74.3mmol)和4-二甲氨基吡啶(DMAP，1.13g，9.26mmol)，將混合物在20℃下攪拌12小時。濃縮反應混合物，濃縮物懸浮在10%(W/V)的檸檬酸水溶液(400ml)中。用乙酸乙酯(800ml)萃取懸浮液，乙酸乙酯層用水洗滌，然後濃縮。濃縮物用矽膠柱色譜純化，連續用乙酸乙酯-己烷(1∶20，1∶10)洗脫，合併含目標化合物的部分並濃縮。濃縮物用己烷結晶得到無色晶體狀的(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-1b(14.4g，收率65%)。m.p.62.5-63.5℃對C57H91NO8S的元素分析計算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37實測值C，71.94;H，9.85;N，1.51;S，3.23c)將化合物GC-1b(14.4g，15.2mmol)溶於TFA(200ml)中，該溶液在20℃下放置30分鐘。濃縮反應混合物，濃縮液溶於乙酸乙酯(500ml)中。該溶液用水洗滌，用無水硫酸鈉乾燥，接著再濃縮。得到的晶體用乙酸乙酯-己烷重結晶，得到了無色晶體狀的GC-1(12.4g，收率91%)。
m.p.82.5-83.5℃[α]23D+14.9°(c＝0.55，在氯仿中)對C53H83NO8S的元素分析計算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59實測值C，70.96;H，9.36;N，1.57;S，3.58實施例3製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羥基-4-THT-OtBu(GC-2a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-2b)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-2)。
按照基本上與實施例2相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羥基-4-THT-OtBu(GC-2a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-2b)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-2)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a)(Fmoc-(R)-Cys-OtBu)21)鋅 3.27g GC-2a(10.0) 酸混合物溶液40ml (10.9)DCM 80ml20℃ 20min2)補充R-(+)-縮水甘油8.29ml40℃ 2.5hb)GC-2a 棕櫚酸 6.33g GC-2b(3.90) DIC 3.87ml (4.76)DMAP 402mgTHF 70ml20℃ 13hc)GC-2b TFA 50ml GC-2(2.50) 20℃ 1.5h (2.20)化合物GC-2a[α]21D-8.8°(c＝0.65，在氯仿中)對C25H31NO6S·0.5H2O的元素分析計算值C，62.22;H，6.68;N，2.90;S，6.64實測值C，62.14;H，6.66;N，2.81;S，6.54化合物GC-2bm.p.58.0℃對C57H91NO8S的元素分析
計算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37實測值C，71.94;H，9.58;N，1.43;S，3.36化合物GC-2m.p.90.0℃[α]20D+12.9°(c＝0.73，在氯仿中)對C53H63NO8S的元素分析計算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59實測值C，71.23;H，9.12;N，1.54;S，3.47實施例4製備(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3a)，(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3b)，和(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-3)按照基本上與實施例2相同的方法製備(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3a)，(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-3b)，和(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-3)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a)(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)21)鋅 656mg GC-3a(2.00) 酸混合物溶液8.0ml (2.18)DCM 16ml20℃ 30min2)補充(S)-(-)-縮水甘油0.67ml40℃ 5hb)GC-3a 棕櫚酸 2.60g GC-3b(1.50) DIC 1.59ml (2.44)DMAP 154mgTHF 30ml20℃ 13hc)GC-3b TFA 40ml GC-3(2.00) 20℃ 1.5h (1.80)化合物GC-3a[α]23D-7.6°(c＝0.67，在氯仿中)對C25H31NO6S的元素分析計算值C，63.40;H，6.60;N，2.96;S，6.67實測值C，63.12;H，6.55;N，2.90;S，6.81化合物GC-3bm.p.62.5-63.0℃對C57H91NO8S的元素分析
計算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37實測值C，72.04;H，9.78;N，1.49;S，3.38化合物GC-3m.p.82.5-83.0℃[α]23D-16.0°(c＝0.51，在氯仿中)對C53H83NO8S的元素分析計算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59實測值C，71.20;H，9.38;N，1.45;S，3.53實施例5製備(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羥基-4-THT-OtBu(GC-4a)，(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-4b)，和(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-4)按照基本上與實施例2相同的方法製備(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-二羥基-4-THT-OtBu(GC-4a)，(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OtBu(GC-4b)，和(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-OH(GC-4)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a)(Fmoc-(S)-Cys-OtBu)21)鋅 1.31g GC-4a(4.00) 酸混合物溶液 16ml (4.01)DCM 32ml20℃ 20min2)補充(S)-(-)-縮水甘油3.33ml40℃ 2.5hb)GC-4a 棕櫚酸 4.78g GC-4b(2.94) DIC 2.92ml (4.22)DMAP 303mgTHF 50ml20℃ 15hc)GC-4b TFA 50ml GC-4(2.50) 20℃ 1.5h (2.24)化合物GC-4a[α]23D+8.4°(c＝0.67，在氯仿中)對C25H31NO6S的元素分析計算值C，63.40;H，6.60;N，2.96;S，6.77實測值C，63.15;H，6.47;N，2.88;S，6.67化合物GC-4bm.p.58.0℃對C57H91NO8S的元素分析
計算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37實測值C，72.01;H，9.55;N，1.34;S，3.36化合物GC-4m.p.88.5-89.0℃[α]23D-13.1°(c＝0.56，在氯仿中)對C53H83NO8S的元素分析計算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59實測值C，71.20;H，9.23;N，1.46;S，3.56實施例6製備(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物1)a)將化合物2中合成的化合物GC-1(1.79g)溶於DMF(20ml)中，在冰冷卻的同時，向該溶液中加入HONB(394mg)、DIC(344μl)和參考例1中得到的H-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(P-1)(1.64g)，將混合物在20℃下攪拌24小時。濃縮反應混合物，然後將其溶於氯仿中。該溶液依次用10%(W/V)的檸檬酸水溶液、水、飽和碳酸氫鈉水溶液和水洗滌，氯仿層用無水硫酸鈉乾燥，然後濃縮。向濃縮物中加入乙腈，過濾收集生成的沉澱得到白色粉末狀產物(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(1a)(3.16g，收率97%)。18D+6.5°(c＝0.54，在氯仿中)對C88H145N7O18S的元素分析計算值C，65.20;H，9.02;N，6.05;S，1.98實測值C，64.90;H，8.83;N，5.86;S，1.78胺基酸分析[6N HCl，110℃，水解20小時;括號中的數值表示理論值]Glu1.00(1);Thr1.93(2);Gly2.95(3)FAB-MS(M+Na)＝1643(理論值1643)b)將化合物1a(2.70g)溶於DMF(27ml)中，向該溶液中加入哌啶(2.7ml)，混合物在20℃下攪拌1小時。濃縮反應混合物，並用矽膠柱色譜純化，依次用氯仿-甲醇(50∶1，20∶1)洗脫，合併含有目標化合物的部分，濃縮得到白色粉末狀產物(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(1b)(2.10g，收率90%)。18D+7.1°(c＝0.49，在氯仿中)對C73H135N7O16S的元素分析
計算值C，62.67;H，9.73;N，7.01;S，2.29實測值C，62.55;H，9.85;N，6.95;S，2.21胺基酸分析[6N HCl，110℃，水解20小時;括號中的數值表示理論值]Glu1.00(1);Thr1.92(2);Gly2.95(3)FAB-MS(M+Na)＝1399(理論值1399)c)將化合物1b(200mg)溶於TFA(2.0ml)中，該溶液在20℃下放置1.5小時。濃縮反應混合物，向濃縮中加入乙腈，過濾收集生成的沉澱得到白色粉末狀產物化合物1(164mg)。
對C57H103N7O16S·1.5H2O的元素分析計算值C，56.98;H，8.89;N，8.16;S，2.67實測值C，57.04;H，8.80;N，8.11;S，2.72實施例7製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物2)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(2a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(2b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物2)。
原料(mg) 反應條件 產物(mg)a) GC-2 P-1 458mg 2a(500) HONB 110mg (873)DIC 96μlDMF 5.0ml20℃ 15hb) 2a 哌啶 0.70ml 2b(770) DMF 7.0ml (623)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 2b TFA 1.5ml 2(150) 20℃ 1.5h (125)化合物2a[α]20D+3.4°(c＝0.66，在氯仿中)對C88H145N7O18S·0.5H2O的元素分析計算值C，64.84;H，9.03;N，6.01;S，1.97實測值C，64.88;H，9.18;N，6.08;S，1.95
化合物2b[α]20D+4.9°(c＝0.55，在氯仿中)對C73H135N7O16S·0.5H2O的元素分析計算值C，62.27;H，9.74;N，6.96;S，2.28實測值C，62.31;H，9.73;N，6.99;S，2.19化合物2[α]21D-2.3°(c＝0.58，在5%TFA-氯仿中)對C53H103N7O16S·1.5H2O的元素分析計算值C，56.98;H，8.89;N，8.16;S，2.67實測值C，56.72;H，8.62;N，8.11;S，2.63實施例8製備(2S，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物3)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2S，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(3a)，(2S，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(3b)，和(2S，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物3)。
原料(mg) 反應條件 產物(mg)a) GC-3 P-1 458mg 3a(500) HONB 110mg (885)DIC 96μlDMF 5.0ml20℃ 15hb) 3a 哌啶 0.80ml 3b(830) DMF 8.0ml (624)20℃ 1.5h矽膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 3b TFA 1.6ml 3(160) 20℃ 1.5h (130)化合物3a[α]20D+15.9°(c＝0.51，在氯仿中)對C88H145N7O18S·0.5H2O的元素分析計算值C，64.84;H，9.03;N，6.01;S，1.97實測值C，64.63;H，9.07;N，5.80;S，2.21
化合物3b[α]20D+21.4°(c＝0.64，在氯仿中)對C73H135N7O16S的元素分析計算值C，62.68;H，9.73;N，7.01;S，2.29實測值C，62.75;H，9.41;N，7.05;S，2.40化合物2[α]21D-21.7°(c＝0.63，在5%TFA-氯仿中)對C57H103N7O16S·H2O的元素分析計算值C，57.41;H，8.88;N，8.22;S，2.69實測值C，57.38;H，8.66;N，8.27;S，2.59實施例9製備(2S，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物4)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2S，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(4a)，(2S，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-Thr(tBu)-OtBu(4b)，和(2S，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH(化合物4)。
原料(mg) 反應條件 產物(mg)a) GC-4 P-1 458mg 4a(500) HONB 110mg (879)DIC 96μlDMF 5.0ml20℃ 15hb) 4a 哌啶 0.80ml 4b(820) DMF 8.0ml (651)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 4b TFA 1.6ml 4(160) 20℃ 1.5h (131)化合物4a[α]20D+15.3°(c＝0.65，在氯仿中)對C88H145N7O18S的元素分析計算值C，65.20;H，9.02;N，6.05;S，1.98實測值C，65.05;H，9.05;N，6.07;S，1.86
化合物4b[α]20D+24.4°(c＝0.62，在氯仿中)對C73H135N7O16S的元素分析計算值C，62.68;H，9.73;N，7.01;S，2.29實測值C，62.53;H，9.48;N，6.93;S，2.31化合物4[α]21D-15.6°(c＝0.5，在5%TFA-氯仿中)對C53H103N7O16S·1.5H2O的元素分析計算值C，56.98;H，8.89;N，8.16;S，2.67實測值C，56.74;H，8.57;N，8.03;S，2.72實施例10製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-OH(化合物5)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(5a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-Thr(tBu)-OtBu(5b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-OH(化合物5)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-2 809mg 5a(1.23) HONB 271mg (1.91)DIC 0.24mlDMF 20ml20℃ 19hb) 5a 哌啶 1.3ml 5b(1.30) DCM 13ml (0.99)20℃ 1.3h矽膠(氯仿-甲醇)49:1,19:1,14:1c) 5b TFA 2ml 5(0.49) 20℃ 2h (0.43)化合物5a[α]23D-6.9°(c＝0.51，在氯仿中)對C80H130N6O16S的元素分析計算值C，65.63;H，8.95;N，5.74;S，2.19實測值C，65.59;H，9.16;N，5.94;S，2.27化合物5b[α]23D-6.9°(c＝0.50，在氯仿中)
對C65H120N6O14S的元素分析計算值C，62.87;H，9.74;N，6.77;S，2.58實測值C，62.96;H，9.57;N，6.89;S，2.42化合物5[α]23D+4.9°(c＝0.49，在5%TFA-氯仿中)對C53H96N6O14S·0.5H2O的元素分析計算值C，58.81;H，9.03;N，7.76;S，2.96實測值C，58.94;H，8.82;N，7.70;S，2.99實施例11製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物6)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(6a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(6b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物6)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-3 470mg 6a(0.51) HONB 113mg (0.71)DIC 0.10mlDMF 5ml20℃ 16hb) 6a 哌啶 0.7ml 6b(0.66) DCM 6.3ml (0.56)20℃ 1.0h矽膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 6b TFA 3.0ml 6(0.25) 20℃ 3h (0.20)化合物6a[α]23D+1.8°(c＝0.50，在氯仿中)對C88H142N6O19S的元素分析計算值C，65.24;H，8.83;N，5.19;S，1.98實測值C，65.05;H，8.87;N，5.15;S，1.91化合物6b[α]23D+1.0°(c＝0.50，在氯仿中)對C73H132N6O17S·0.5H2O的元素分析
計算值C，62.32;H，9.53;N，5.97;S，2.28實測值C，62.30;H，9.53;N，5.77;S，2.19化合物6[α]21D+3.8°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)對C50H90N4O13S·H2O的元素分析計算值C，57.46;H，8.63;N，7.05;S，2.69實測值C，57.56;H，8.60;N，7.24;S，2.54實施例12製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物7)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(7a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(7b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物7)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-4 630mg 7a(1.31) HONB 288mg (1.64)DIC 0.25mlDCM 19ml20℃ 15hb) 7a 哌啶 1.2ml 7b(1.18) DCM 12ml (0.92)20℃ 1.3h矽膠(氯仿-甲醇)49:1,19:1,14:1c) 7b TFA 2ml 7(0.45) 20℃ 2h (0.38)化合物7a[α]23D-6.4°(c＝0.50，在氯仿中)對C72H115N5O14S的元素分析計算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45實測值C，66.03;H，8.87;N，5.31;S，2.22化合物7b[α]23D-6.7°(c＝0.63，在氯仿中)對C57H105N5O12S·H2O的元素分析
計算值C，62.09;H，9.78;N，6.35;S，2.91實測值C，62.12;H，9.59;N，6.36;S，2.87化合物7[α]23D+8.3°(c＝0.60，在5%TFA-氯仿中)對C49H89N5O12S·H2O的元素分析計算值C，59.43;H，9.26;N，7.07;S，3.24實測值C，59.19;H，8.96;N，6.96;S，3.26實施例13製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物8)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(8a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(8b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物8)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-5 1.53g 8a(1.92) HONB 684mg (3.93)DIC 0.59mlDMF 33ml20℃ 15hb) 8a 哌啶 0.82ml 8b(0.82) DCM 8.2ml (0.64)20℃ 2h矽膠(氯仿-甲醇)49:1,19:1,14:1c) 8b TFA 2ml 8(0.58) 20℃ 2h (0.45)化合物8a[α]23D-7.1°(c＝0.49，在氯仿中)對C72H115N5O14S的元素分析計算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45實測值C，66.12;H，8.77;N，5.52;S，2.45化合物8b[α]23D-14.5°(c＝0.53，在氯仿中)對C57H105N5O12S的元素分析
計算值C，63.13;H，9.76;N，6.46;S，2.96實測值C，63.10;H，9.83;N，6.44;S，2.77化合物8[α]23D+8.1°(c＝0.62，在5%TFA-氯仿中)對C49H89N5O12S·0.5H2O的元素分析計算值C，59.97;H，9.24;N，7.14;S，3.27實測值C，59.82;H，9.14;N，6.96;S，3.38實施例14製備(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物9)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(9a)，(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(9b)，和(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物9)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-1 P-4 490mg 9a(1.02) HONB 229mg (1.25)DIC 0.20mlDMF 15ml20℃ 18hb) 9a 哌啶 1.10ml 9b(1.10) DCM 11ml (0.777)20℃ 1.5h矽膠(氯仿-甲醇)49:1,19:1,c) 9b TFA 3.0ml 9(0.300) 20℃ 1.5h (0.266)化合物9a[α]24D-3.3°(c＝0.51，在氯仿中)對C72H115N5O14S·H2O的元素分析計算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45實測值C，66.10;H，8.89;N，5.46;S，2.58化合物9b[α]21D-5.5°(c＝0.73，在氯仿中)對C57H105N5O12S的元素分析
計算值C，63.13;H，9.76;N，6.46;S，2.96實測值C，62.84;H，9.61;N，6.42;S，2.96化合物9[α]21D+13.5°(c＝0.67，在5%TFA-氯仿中)對C49H89N5O12S·2.5H2O的元素分析計算值C，57.85;H，9.31;N，6.88;S，3.15實測值C，57.89;H，8.82;N，6.88;S，3.05實施例15製備(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物10)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6S)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(10a)，(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(10b)和(2R，6S)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物10)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-1 P-5 1.61g 10a(2.41) HONB 541mg (3.45)DIC 0.47mlDMF 25ml20℃ 19hb) 10a 哌啶 1.10ml 10b(1.10) DMF 11ml (0.783)20℃ 1.5h矽膠(氯仿-甲醇)49:1,19:1,c) 9b TFA 3.0ml 10(0.300) 20℃ 1.5h (0.262)化合物10a[α]24D-5.1°(c＝0.57，在氯仿中)對C72H115N5O14S·H2O的元素分析計算值C，66.18;H，8.87;N，5.36;S，2.45實測值C，66.07;H，8.94;N，5.48;S，2.49化合物10b[α]21D-10.7°(c＝0.57，在氯仿中)對C57H105N5O12S的元素分析
計算值C，63.13;H，9.76;N，6.46;S，2.96實測值C，63.13;H，9.51;N，6.46;S，2.96化合物10[α]21D+13.2°(c＝0.67，在5%TFA-氯仿中)對C49H89N5O12S·2H2O的元素分析計算值C，58.36;H，9.29;N，6.95;S，3.18實測值C，58.30;H，8.90;N，6.76;S，3.25實施例16製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物11)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(11a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(11b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物11)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-6 1.31g 11a(2.04) HONB 453mg (2.72)DIC 0.40mlDMF 20ml20℃ 16hb) 11a 哌啶 2.0ml 11b(2.00) DCM 18ml (1.75)20℃ 1h矽膠(乙酸乙酯-甲醇)10:0,9:1,c) 11b TFA 8.0ml(0.80) 20℃ 2h (0.56)化合物11a[α]23D-7.0°(c＝0.56，在氯仿中)對C77H124N4O15S的元素分析計算值C，67.12;H，9.07;N，4.07;S，2.33實測值C，67.01;H，9.19;N，4.01;S，2.31化合物11b[α]23D-18°(c＝0.53，在氯仿中)對C62H114N4O13S的元素分析
計算值C，64.44;H，9.94;N，4.85;S，2.77實測值C，64.23;H，9.95;N，4.94;S，2.64化合物11[α]21D+2.1°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)對C50H90N4O13S·H2O的元素分析計算值C，59.73;H，9.22;N，5.57;S，3.19實測值C，59.56;H，9.05;N，5.48;S，3.15實施例17製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-OH(化合物12)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(12a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(12b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-OH(化合物12)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-7 918mg 12a(2.00) HONB 441mg (1.81)DIC 0.39mlDMF 20ml20℃ 15hb) 12a 哌啶 1.8ml 12b(1.75) DCM 18ml (1.32)20℃ 1.5h矽膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 12b TFA 5ml 12(0.60) 20℃ 2h (0.52)化合物12a[α]23D-5.2°(c＝0.58，在氯仿中)對C70H112N4O13S的元素分析計算值C，67.28;H，9.03;N，4.48;S，2.57實測值C，67.22;H，8.84;N，4.55;S，2.51化合物12b[α]23D-7.9°(c＝0.60，在氯仿中)對C55H102N4O11S·0.5H2O的元素分析
計算值C，63.73;H，10.02;N，5.41;S，3.09實測值C，63.88;H，10.22;N，5.48;S，3.09化合物12[α]23D+14.8°(c＝0.68，在5%TFA-氯仿中)對C47H86N4O11S·2.5H2O的元素分析計算值C，58.78;H，9.55;N，5.83;S，3.34實測值C，58.91;H，8.83;N，5.67;S，3.06實施例18製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OH(化合物13)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OtBu(13a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OtBu(13b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-OH(化合物13)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 H-Gly-Gly-Gly-OtBu 660mg 13a(2.18) HONB 482mg (2.50)DIC 0.42mlDMF 20ml20℃ 17hb) 13a 哌啶 1.8ml 13b(1.80) DCM 18ml (1.30)20℃ 1.3h矽膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 13b TFA 5ml 13(0.60) 20℃ 2h (0.55)化合物13a[α]23D-11.0°(c＝0.60，在氯仿中)對C63H100N4O11S的元素分析計算值C，67.47;H，8.99;N，5.00;S，2.86實測值C，67.47;H，8.86;N，4.92;S，2.89化合物13b[α]23D-14.3°(c＝0.48，在氯仿中)對C48H90N4O9S的元素分析
計算值C，64.11;H，10.09;N，6.23;S，3.57實測值C，63.97;H，10.01;N，6.21;S，3.44化合物13[α]23D+12.2°(c＝0.63，在5%TFA-氯仿中)對C44H82N4O9S·2.5H2O的元素分析計算值C，59.50;H，9.87;N，6.31;S，3.61實測值C，59.21;H，9.17;N，6.16;S，3.34實施例19製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-OH(化合物14)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(14a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(14b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-OH(化合物14)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 H-Gly-Glu(OtBu)-OtBu 777mg 14a(2.03) HONB 441mg (2.20)DIC 0.39mlDMF 20ml20℃ 16hb) 14a 哌啶 1.4ml 14b(1.40) DCM 14ml (0.90)20℃ 1.0h矽膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 14b TFA 4.0ml 14(0.40) 20℃ 2h (0.29)化合物14a[α]23D-2.0°(c＝0.50，在氯仿中)對C68H109N3O12S的元素分析計算值C，68.48;H，9.21;N，3.52;S，2.69實測值C，68.62;H，9.26;N，3.60;S，2.68化合物14b[α]23D-5.6°(c＝0.57，在氯仿中)對C53H99N3O10S的元素分析
計算值C，65.60;H，10.28;N，4.33;S，3.30實測值C，65.51;H，10.31;N，4.20;S，3.25化合物14[α]21D+2.1°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)對C45H83N3O10S·0.5H2O的元素分析計算值C，62.32;H，9.76;N，4.85;S，3.70實測值C，62.16;H，9.64;N，4.61;S，3.67實施例20製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-OH(化合物15)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-OtBu(15a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-OtBu(15b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-OH(化合物15)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 H-Glu(OtBu)-OtBu 1.27g 15a(4.00) HONB 882mg (4.80)DIC 0.77mlDMF 30ml20℃ 17hb) 15a 哌啶 2.3ml 15b(2.30) DCM 23ml (1.14)20℃ 1.3h矽膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 15b TFA 5ml 15(0.48) 20℃ 2h (0.41)化合物15a[α]23D-2.0°(c＝0.58，在氯仿中)對C66H106N2O11S的元素分析計算值C，69.81;H，9.41;N，2.47;S，2.82實測值C，69.79;H，9.26;N，2.44;S，2.74化合物15b[α]23D-10.1°(c＝0.56，在氯仿中)對C51H96N2O9S的元素分析
計算值C，67.06;H，10.59;N，3.07;S，3.51實測值C，67.04;H，10.36;N，3.09;S，3.45化合物15[α]23D+3.7°(c＝0.60，在5%TFA-氯仿中)對C43H80N2O9S·0.5H2O的元素分析計算值C，63.75;H，10.08;N，3.46;S，3.96實測值C，63.70;H，9.75;N，3.31;S，3.88實施例21製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp-OH(化合物6)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(16a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp(OtBu)-OtBu(16b)，和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp-OH(化合物16)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-8 1.17g 16a(2.28) HONB 502mg (3.13)DIC 0.44mlDMF 20ml20℃ 15hb) 16a 哌啶 3.0ml 16b(2.94) DCM 30ml (1.83)20℃ 2h矽膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1,c) 16b TFA 9ml 16(0.83) 20℃ 2h (0.74)化合物16a[α]22D+3.7°(c＝0.61，在氯仿中)對C71H113N5O14S的元素分析計算值C，65.97;H，8.81;N，5.42;S，2.48實測值C，65.61;H，9.13;N，5.90;S，2.24化合物16b[α]22D-1.5°(c＝0.55，在氯仿中)對C56H103N5O12S的元素分析
計算值C，62.83;H，9.70;N，6.54;S，3.00實測值C，62.77;H，9.92;N，6.75;S，3.94化合物16[α]25D+19.2°(c＝0.64，在5%TFA-氯仿中)對C48H87N5O12S·1.5H2O的元素分析計算值C，58.51;H，9.21;N，6.87;S，3.25實測值C，58.68;H，9.00;N，6.87;S，3.25實施例22製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物17)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(17a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(17b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D-Glu-OH(化合物17)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-9 780mg 17a(1.68) HONB 374mg (1.97)DIC 327μlDMF 18ml20℃ 16hb) 17a 哌啶 2.0ml 17b(1.80) DCM 18ml (1.52)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)25:1,c) 17b TFA 10.0ml 17(1.00) 20℃ 3h (0.76)化合物17a[α]24D-10.0°(c＝0.54，在氯仿中)對C70H112N4O13S·0.5H2O的元素分析計算值C，66.79;H，9.05;N，4.45;S，2.55實測值C，66.59;H，8.75;N，4.75;S，2.53化合物17b[α]24D-15.7°(c＝0.49，在氯仿中)對C55H102N4O11S·0.5H2O的元素分析
計算值C，63.73;H，10.02;N，5.41;S，3.09實測值C，63.67;H，10.23;N，5.28;S，3.07化合物17[α]24D+6.0°(c＝0.51，在5%TFA-氯仿中)對C47H86N4O11S·2H2O的元素分析計算值C，59.34;H，9.54;N，5.89;S，3.37實測值C，59.01;H，9.17;N，5.92;S，3.08實施例23製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OH(化合物18)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OtBu(18a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OtBu(18b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OH(化合物18)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 H-Gly-Gly-OtBu 580mg 18a(2.50) HONB 552mg (2.42)DIC 482μlDMF 20ml20℃ 13hb) 18a 哌啶 2.2ml 18b(2.20) DCM 22ml (1.59)20℃ 1.5h矽膠(氯仿-甲醇)20:1,c) 18b TFA 6.0ml 18(0.60) 20℃ 1h (0.56)化合物18a[α]24D-7.6°(c＝0.52，在氯仿中)對C61H97N3O10S的元素分析計算值C，68.83;H，9.18;N，3.95;S，3.01實測值C，69.06;H，9.28;N，4.09;S，2.88化合物18b[α]24D-13.4°(c＝0.52，在氯仿中)對C46H87N3O8S·0.5H2O的元素分析
計算值C，64.90;H，10.42;N，4.94;S，3.77實測值C，64.99;H，10.45;N，4.82;S，3.49化合物18[α]25D+10.7°(c＝0.51，在5%TFA-氯仿中)對C42H79N3O8S·1.5H2O的元素分析計算值C，62.03;H，10.16;N，5.17;S，3.94實測值C，61.80;H，9.97;N，4.85;S，4.04實施例24製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu-OH(化合物19)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(19a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(19b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu-OH(化合物19)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-10 830mg 19a(2.12) HONB 471mg (2.18)DIC 412μlDMF 21ml20℃ 16hb) 19a 哌啶 2.0ml 19b(2.00) DCM 18ml (1.72)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 19b TFA 10ml 19(1.00) 20℃ 3h (0.70)化合物19a[α]24D-12.5°(c＝0.55，在氯仿中)對C68H109N3O12S的元素分析計算值C，68.43;H，9.21;N，3.52;S，2.69實測值C，68.31;H，9.25;N，3.72;S，2.48化合物19b[α]24D-16.4°(c＝0.53，在氯仿中)對C53H99N3O10S·0.8H2O的元素分析
計算值C，64.64;H，10.30;N，4.27;S，3.26實測值C，64.62;H，10.25;N，4.08;S，3.22化合物19[α]24D+14.2°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對C45H83N3O10S·2.2H2O的元素分析計算值C，60.19;H，9.81;N，4.68;S，3.57實測值C，60.05;H，9.44;N，4.35;S，3.61實施例25製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Glu-OH(化合物20)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Glu(OtBu)-OtBu(20a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Glu(OtBu)-OtBu(20b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Glu-OH(化合物20)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 H-D-Glu(OtBu)-OtBu 0.75g 20a(2.35) HONB 518mg (2.35)DIC 0.45mlDMF 20ml20℃ 17hb) 20a 哌啶 2.0ml 20b(2.23) DCM 20ml (1.76)20℃矽膠(己烷-乙酸乙酯)4:1,3:2c) 20b TFA 10ml 20(0.77) 20℃ 2h (0.64)化合物20a[α]22D-7.4°(c＝0.60，在氯仿中)對C66H106N2O11S的元素分析計算值C，69.81;H，9.41;N，2.47;S，2.82實測值C，69.66;H，9.52;N，2.85;S，2.53化合物20b[α]22D-15.9°(c＝0.66，在氯仿中)對C51H96N2O9S·0.5H2O的元素分析
計算值C，66.41;H，10.60;N，3.04;S，3.48實測值C，66.42;H，10.42;N，3.25;S，3.21化合物20[α]25D-1.5°(c＝0.55，在5%TFA-氯仿中)對C43H80N2O9S的元素分析計算值C，64.46;H，10.06;N，3.50;S，4.00實測值C，64.56;H，9.92;N，3.42;S，3.90實施例26製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Asp-OH(化合物21)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Asp(OtBu)-OtBu(21a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Asp(OtBu)-OtBu(21b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Asp-OH(化合物21)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 H-Asp(OtBu)-OtBu 0.69g 21a(2.30) HONB 507mg (2.67)DIC 0.44mlDMF 20ml20℃ 17hb) 21a 哌啶 2.5ml 21b(2.56) DCM 25ml (1.80)20℃ 1h矽膠(己烷-乙酸乙酯)4:1,3:2c) 21b TFA 10ml 21(0.86) 20℃ 2h (0.73)化合物21a[α]22D+5.2°(c＝0.65，在氯仿中)對C65H104N2O11S的元素分析計算值C，69.61;H，9.35;N，2.50;S，2.86實測值C，69.38;H，9.49;N，2.77;S，2.69化合物21b[α]22D-1.1°(c＝0.70，在氯仿中)對C50H94N2O9S的元素分析
計算值C，66.76;H，10.54;N，3.11;S，3.57實測值C，66.87;H，10.55;N，3.36;S，3.30化合物21[α]25D+5.5°(c＝0.63，在5%TFA-氯仿中)對C42H78N2O9S的元素分析計算值C，64.09;H，9.99;N，3.56;S，4.07實測值C，64.23;H，9.74;N，3.44;S，4.02實施例27製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Asp-OH(化合物22)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Asp(OtBu)-OtBu(22a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Asp(OtBu)-OtBu(22b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-D-Asp-OH(化合物22)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 H-D-Asp(OtBu)-OtBu 0.70g 22a(2.32) HONB 511mg (2.84)DIC 0.45mlDMF 20ml20℃ 17hb) 22a 哌啶 2.5ml 22b(2.64) DCM 25ml (1.87)20℃ 1h矽膠(己烷-乙酸乙酯)4:1,3:2c) 22b TFA 10ml 22(0.95) 20℃ 2h (0.82)化合物22a[α]22D-12.7°(c＝0.51，在氯仿中)對C65H104N2O11S的元素分析計算值C，69.61;H，9.35;N，2.50;S，2.86實測值C，69.82;H，9.48;N，2.98;S，2.53化合物22b[α]22D-22.7°(c＝0.67，在氯仿中)對C50H94N2O9S·0.5H2O的元素分析
計算值C，66.11;H，10.54;N，3.08;S，3.53實測值C，65.83;H，10.38;N，2.93;S，3.40化合物22[α]25D-10.8°(c＝0.62，在5%TFA-氯仿中)對C42H78N2O9S的元素分析計算值C，64.09;H，9.99;N，3.56;S，4.07實測值C，64.13;H，9.60;N，3.47;S，4.06實施例28製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物23)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(23a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(23b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物23)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-11 590mg 23a(0.95) HONB 210mg (1.22)DIC 185μlDMF 9.5ml20℃ 16hb) 23a 哌啶 1.1ml 23b(1.10) DCM 9.9ml (0.97)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 23b TFA 4.8ml 23(0.48) 20℃ 3h (0.36)化合物23a[α]24D-7.0°(c＝0.50，在氯仿中)對C77H124N4O15S的元素分析計算值C，67.12;H，9.07;N，4.07;S，2.33實測值C，67.16;H，9.05;N，4.10;S，2.40化合物23b[α]24D-10.6°(c＝0.50，在氯仿中)對C62H114N4O13S·0.5H2O的元素分析
計算值C，63.94;H，9.95;N，4.81;S，2.75實測值C，63.91;H，9.80;N，4.74;S，2.71化合物23[α]21D+13.0°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對C50H90N4O13S·1.5H2O的元素分析計算值C，59.20;H，9.24;N，5.52;S，3.16實測值C，59.15;H，9.09;N，5.50;S，3.41實施例29製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-D-Glu-OH(化合物24)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(24a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(24b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-D-Glu-OH(化合物24)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-12 500mg 24a(0.81) HONB 178mg (0.98)DIC 157μlDMF 8.0ml20℃ 16hb) 24a 哌啶 0.9ml 24b(0.90) DCM 8.1ml (0.80)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 24b TFA 4.0ml 24(0.40) 20℃ 3h (0.29)化合物24a[α]24D-12.3°(c＝0.52，在氯仿中)對C77H124N4O15S·0.5H2O的元素分析計算值C，66.68;H，9.08;N，4.04;S，2.31實測值C，66.82;H，8.83;N，4.34;S，2.33化合物24b[α]24D-15.9°(c＝0.49，在氯仿中)對C62H114N4O13S·0.5H2O的元素分析
計算值C，63.94;H，9.95;N，4.81;S，2.75實測值C，64.04;H，9.84;N，4.86;S，2.76化合物24[α]24D+5.0°(c＝0.47，在5%TFA-氯仿中)對C50H90N4O13S·H2O的元素分析計算值C，59.73;H，9.22;N，5.57;S，3.19實測值C，59.73;H，9.25;N，5.48;S，3.18實施例30製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-OH(化合物25)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(25a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(25b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-OH(化合物25)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-13 770mg 25a(1.24) HONB 274mg (1.63)DIC 241μlDMF 12.0ml20℃ 16hb) 25a 哌啶 1.5ml 25b(1.50) DCM 13.5ml (1.34)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 25b TFA 6.7ml 25(0.67) 20℃ 3h (0.50)化合物25a[α]24D-1.7°(c＝0.51，在氯仿中)對C77H124N4O15S的元素分析計算值C，67.12;H，9.07;N，4.07;S，2.33實測值C，66.97;H，9.12;N，4.06;S，2.25化合物25b[α]24D-9.6°(c＝0.53，在氯仿中)對C62H114N4O13S·H2O的元素分析
計算值C，63.45;H，9.96;N，4.77;S，2.73實測值C，63.31;H，9.81;N，4.82;S，2.65化合物25[α]24D+8.7°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對C50H90N4O13S·1.5H2O的元素分析計算值C，59.20;H，9.24;N，5.52;S，3.16實測值C，59.34;H，9.13;N，5.53;S，3.21實施例31製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-OH(化合物26)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(26a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(26b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-OH(化合物26)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 H-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu 26a(1.20) 660mg (1.63)HONB 265mgDIC 233μlDMF 12.0ml20℃ 16hb) 26a 哌啶 1.5ml 26b(1.50) DCM 13.5ml (1.32)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 26b TFA 6.6ml 26(0.66) 20℃ 3h (0.47)化合物26a[α]24D-7.4°(c＝0.51，在氯仿中)對C75H121N4O14S的元素分析計算值C，68.20;H，9.23;N，3.18;S，2.43實測值C，68.26;H，9.09;N，2.95;S，2.57化合物26b[α]24D-17.7°(c＝0.53，在氯仿中)對C60H111N3O12S·0.5H2O的元素分析
計算值C，65.06;H，10.19;N，3.79;S，2.89實測值C，64.88;H，10.29;N，3.81;S，2.95化合物26[α]24D-0.9°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對C48H87N3O12S·H2O的元素分析計算值C，60.79;H，9.46;N，4.43;S，3.38實測值C，60.89;H，9.40;N，4.41;S，3.38實施例32製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(Pam0)-4-THT-Glu-D-Glu-OH(化合物27)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(27a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(27b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-D-Glu-OH(化合物27)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-14 700mg 27a(1.27) HONB 282mg (1.45)DIC 247μlDMF 12.7ml20℃ 16hb) 27a 哌啶 1.4ml 27b(1.33) DCM 12.6ml (1.12)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 27b TFA 5.5ml 27(0.55) 20℃ 3h (0.45)化合物27a[α]24D-12.6°(c＝0.52，在氯仿中)對C75H121N3O14S的元素分析計算值C，68.20;H，9.23;N，3.18;S，2.43實測值C，68.27;H，9.46;N，3.14;S，2.30化合物27b[α]24D-21.3°(c＝0.51，在氯仿中)對C60H111N3O12S·0.5H2O的元素分析
計算值C，65.06;H，10.19;N，3.79;S，2.89實測值C，65.05;H，10.33;N，3.65;S，2.88化合物27[α]24D-5.9°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)對C48H87N3O12S·H2O的元素分析計算值C，60.79;H，9.46;N，4.43;S，3.38實測值C，60.88;H，9.25;N，4.43;S，3.19實施例33製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-Glu-OH(化合物28)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(28a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(28b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-Glu-OH(化合物28)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-15 715mg 28a(0.91) HONB 201mg (1.48)DIC 177μlDMF 9.1ml20℃ 16hb) 28a 哌啶 1.3ml 28b(1.35) DCM 11.7ml (1.20)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 28b TFA 6.0ml 28(0.60) 20℃ 3h (0.44)化合物28a[α]24D-13.2°(c＝0.52，在氯仿中)對C84H136N4O17S的元素分析計算值C，66.99;H，9.10;N，3.72;S，2.18實測值C，67.08;H，9.14;N，3.78;S，2.16化合物28b[α]24D-19.5°(c＝0.53，在氯仿中)對C69H126N4O15S·0.5H2O的元素分析
計算值C，64.10;H，9.90;N，4.33;S，2.48實測值C，64.28;H，9.92;N，4.21;S，2.47化合物28[α]24D-5.1°(c＝0.53，在5%TFA-氯仿中)對C53H94N4O15S·0.5H2O的元素分析計算值C，59.58;H，8.96;N，5.24;S，3.00實測值C，59.36;H，8.91;N，5.20;S，2.95實施例34製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-D-Glu-OH(化合物29)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(29a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-D-Glu(OtBu)-OtBu(29b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-D-Glu-OH(化合物29)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-16 590mg 29a(0.75) HONB 166mg (1.27)DIC 146μlDMF 7.5ml20℃ 16hb) 29a 哌啶 1.2ml 29b(1.15) DCM 10.8ml (0.99)20℃ 1h矽膠(氯仿-甲醇)97:3,c) 29b TFA 5.0ml 29(0.50) 20℃ 3h (0.36)化合物29a[α]24D-12.7°(c＝0.49，在氯仿中)對C84H136N4O17S的元素分析計算值C，66.99;H，9.10;N，3.72;S，2.13實測值C，66.80;H，9.15;N，3.65;S，2.15化合物29b[α]24D-20.7°(c＝0.51，在氯仿中)對C69H126N4O15S·H2O的元素分析
計算值C，63.66;H，9.91;N，4.30;S，2.46實測值C，63.67;H，9.88;N，4.26;S，2.48化合物29[α]24D-16.1°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對C53H94N4O15S·H2O的元素分析計算值C，59.08;H，8.98;N，5.20;S，2.98實測值C，58.85;H，8.90;N，5.17;S，2.81實施例35製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-羥基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5b)和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-OH(GC-5)按照基本上與實施例2相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-羥基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5a)，(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-OtBu(GC-5b)和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-OH(GC-5)
原料(g) 反應條件 產物(g)a) (Fmoc-(R)-Cys-OtBu)21)鋅 1.25g GC-5a(3.83) 酸混合物 13ml (5.07)溶液DCM 25ml20℃ 30min2)補充的(S)-O-棕櫚醯基縮水甘油12.0g50℃ 8hb) GC-5a 己酸 1.96g GC-5b(4.80) DIC 2.64ml (5.23)DMAP 329mgTHF 90ml20℃ 17hc) GC-5b TFA 20ml GC-5(5.08) 20℃ 1.5h (4.72)化合物GC-5am.p.57.5-58.8℃[α]20D-2.9°(c＝0.55，在氯仿中)對C41H61N4O7S的元素分析計算值C，69.16;H，8.64;N，1.97;S，4.50實測值C，68.95;H，8.67;N，1.83;S，4.48
化合物GC-5b[α]20D+1.1°(c＝0.52，在氯仿中)對C47H71N4O8S的元素分析計算值C，69.68;H，8.83;N，1.73;S，3.96實測值C，69.78;H，8.90;N，1.78;S，3.80化合物GC-5[α]20D+14.0°(c＝0.56，在氯仿中)對C43H63N4O8S的元素分析計算值C，68.49;H，8.42;N，1.86;S，4.25實測值C，68.27;H，8.34;N，1.83;S，4.26實施例36製備(2R，6R)-2-氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物30)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(30a)，(2R，6R)-2-氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(30b)and(2R，6R)-2-氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物30)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-5 P-4 1.88g 30a(3.00) HONB 784mg (3.32)DIC 0.69mlDMF 25ml20℃ 16hb) 30a 哌啶 3.0ml 30b(3.20) DCM 30ml (2.26)20℃ 2h矽膠(氯仿-甲醇)50:1,20:1c) 30b TFA 5ml 30(0.53) 20℃ 2h (0.46)化合物30a[α]22D-6.4°(c＝0.53，在氯仿中)對C62H95N5O14S的元素分析計算值C，63.84;H，8.21;N，6.00;S，2.75實測值C，63.67;H，8.09;N，5.89;S，2.84
化合物30b[α]22D-8.2°(c＝0.56，在氯仿中)對C47H85N5O12S的元素分析計算值C，59.78;H，9.07;N，7.42;S，3.40實測值C，59.64;H，8.87;N，7.42;S，3.37化合物30[α]22D+9.5°(c＝0.57，在5%TFA-氯仿中)對C39H69N5O12S·1.5H2O的元素分析計算值C，54.53;H，8.45;N，8.15;S，3.73實測值C，54.56;H，8.09;N，8.21;S，3.69實施例37製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物31)將化合物11a(600mg)溶於TFA(6.0ml)中，該溶液在20℃下放置2小時。濃縮反應混合物，濃縮物懸浮在乙腈中，過濾懸浮液，收集到白色粉末狀化合物31，(517mg，收率98%)。25D-16.5°(c＝0.58，在5%TFA-氯仿中)對C65H100N4O15S·H2O的元素分析
計算值C，63.60;H，8.38;N，4.56;S，2.61實測值C，63.83;H，8.47;N，4.46;S，2.52實施例38製備(2R，6R)-2-乙醯氨基-6，7-雙(Pamo)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物32)以化合物11b為起始物，通過(2R，6R)-2-乙醯氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu(OtBu)-Gly-D-Glu(OtBu)-OtBu(32a)製得了(2R，6R)-2-乙醯氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH(化合物32)。
a)將化合物11b(700mg)溶於DCM(7.0ml)中，向該溶液中加入乙酸酐(86μl)，所得混合物在20℃下攪拌1小時。濃縮反應混合物，濃縮物懸浮在乙腈中，過濾懸浮液，收集到白色粉末狀產物化合物32a(580mg)。24D-12.8°(c＝0.49，在氯仿中)對C64H116N4O14S·0.5H2O的元素分析計算值C，63.70;H，9.77;N，4.64;S，2.66實測值C，63.80;H，9.79;N，4.54;S，2.55b)按照基本上與實施例37中的去保護基反應相同的方法處理化合物32a(530mg)的TFA溶液(5.3ml)，得到白色粉本狀產物化合物32(455mg)。25D-16.6°(c＝0.52，在5%TFA-氯仿中)對C52H92N4O14S·H2O的元素分析計算值C，59.63;H，9.05;N，5.35;S，3.06實測值C，59.59;H，8.99;N，5.15;S，2.91實施例39製備(2R，6R)-2-己醯氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物33)以化合物30b為起始物，通過(2R，6R)-2-己醯氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(33a)製得了(2R，6R)-2-己醯氨基-6-己醯氨基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH(化合物33)。
a)將化合物30b(550mg)溶於DCM(10ml)中，在冰冷卻同時，向該溶液中加入HOBT(87mg)、WSC(123mg)和己酸(80μl)。將混合物在20℃下攪拌18小時。濃縮反應混合物，濃縮物溶於乙酸乙酯中，接著依次用10%氯化銨水溶液、2%碳酸氫鈉水溶液和水洗滌。乙酸乙酯層用無水硫酸鈉乾燥，然後再濃縮。將濃縮物懸浮在乙腈中，過濾懸浮液，收集到白色粉末狀產物(2R，6R)-2-己醯氧基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu(OtBu)-OtBu(33a)(534mg，收率88%)。
化合物33a[α]22D-8.0°(c＝0.56，在氯仿中)對C53H95N5O13S的元素分析計算值C，61.07;H，9.19;N，6.72;S，3.08實測值C，61.02;H，9.10;N，6.71;S，3.05b)將化合物33a(480mg)溶於TFA(5.0ml)中，將該溶液在20℃下攪拌2小時。濃縮反應混合物，將濃縮物懸浮在乙腈中，過濾懸浮液，收集化合物33(408mg，收率95%)。
化合物33[α]22D-12.7°(c＝0.64，在5%TFA-氯仿中)對C45H79N5O13S·0.5H2O的元素分析計算值C，57.55;H，8.59;N，7.46;S，3.41實測值C，57.74;H，8.54;N，7.41;S，3.43實施例40製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-OtBu(GC-6a)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-OH(GC-6)
按照基本上與實施例2相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-OtBu(GC-6a)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-OH(GC-6)。
原料 反應條件 產物a) GC-2a 硬脂酸 5.58g GC-6a(2.65g) DIC 3.07mg (3.20g)DMAP 275mgTHF 45ml20℃ 14hb) GC-6a TFA 15ml GC6(3.00g) 20℃ 2.0ml (2.75g)化合物GC-6am.p.64.2-65.9℃[α]22D+0.2°(c＝0.92，在氯仿中)對C61H99NO8S的元素分析計算值C，72.79;H，9.91;N，1.39;S，3.19實測值C，72.60;H，10.10;N，1.66;S，3.37化合物GC-6m.p.92.0-92.8℃[α]24D+11.0°(c＝0.67，在氯仿中)對C57H91NO8S的元素分析
計算值C，72.03;H，9.65;N，1.47;S，3.37實測值C，72.21;H，10.05;N，1.57;S，3.24實施例41製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-OtBu(GC-7a)，和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-OH(GC-7)按照基本上與實施例2相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-OtBu(GC-7a)和(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-OH(GC-7)。
原料 反應條件 產物a) GC-2a 肉豆蔻酸 4.22g GC-7a(2.50g) DIC 2.89ml (2.58g)DMAP 258mgTHF 45ml20℃ 14hb) GC-7a TFA 20ml GC-7(3.00g) 20℃ 2.0h (1.93g)化合物GC-7am.p.49.2-50.9℃[α]22D+0.5°(c＝0.83，在氯仿中)對C53H83NO8S的元素分析
計算值C，71.18;H，9.35;N，1.57;S，3.59實測值C，70.97;H，9.24;N，1.62;S，3.52化合物GC-7m.p.82.8-83.5℃[α]22D+12.7°(c＝0.58，在氯仿中)對C49H75NO8S·0.25H2O元素分析計算值C，69.84;H，9.03;N，1.66;S，3.81實測值C，69.85;H，9.09;N，1.62;S，3.78實施例42製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物34)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(34a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(34b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(SteO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-Glu-OH(化合物34)。
原料 反應條件 產物a) GC-6 P-11 1.47g 34a(2.53g) HONB 525mg (3.75g)DIC 459μlDMF 20ml20℃ 16hb) 34a 哌啶 3.6ml 34b(3.56g) DCM 30ml (2.78g)20℃ 2.0h (1.93g)矽膠(氯仿-甲醇)20:1c) 34b TFA 6.0ml 34(0.59g) 20℃ 2.0h (0.51g)化合物34a[α]24D-6.6°(c＝0.62，在氯仿中)對C81H132N4O15S的元素分析計算值C，67.84;H，9.28;N，3.91;S，2.24實測值C，67.59;H，9.54;N，4.27;S，2.46化合物34b[α]24D-10.7°(c＝0.75，在氯仿中)對C66H122N4O13S·H2O元素分析
計算值C，64.46;H，10.16;N，4.56;S，2.61實測值C，64.46;H，10.07;N，4.83;S，2.64化合物34[α]24D+10.8°(c＝0.65，在5%TFA-氯仿中)對C54H98N4O13S·4H2O的元素分析計算值C，58.14;H，9.58;N，5.02;S，2.87實測值C，58.48;H，9.20;N，5.20;S，2.72實施例43製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物35)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(35a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-Gly-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-OtBu(35b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(MyrO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH(化合物35)。
原料 反應條件 產物a) GC-7 P-11 1.21g 35a(1.83g) HONB 432mg (2.22g)DIC 378μgDMF 20ml20℃ 18hb) 35a 哌啶 3.6ml 35b(2.10g) DCM 30ml (1.58g)20℃ 2.0h矽膠(氯仿-甲醇)20:1c) 35b TFA 10ml 35(1.00g) 20℃ 2.0h (0.85g)化合物35a[α]22D-7.6°(c＝0.71，在氯仿中)對C73H116N4O15S的元素分析計算值C，66.33;H，8.85;N，4.24;S，2.43實測值C，66.30;H，8.97;N，4.38;S，2.42化合物35b[α]22D-12.0°(c＝1.11，在氯仿中)對C58H106N4O13S元素分析
計算值C，63.36;H，9.72;N，5.10;S，2.92實測值C，63.14;H，9.69;N，5.21;S，2.81化合物35[α]22D+10.9°(c＝0.86，在5%TFA-氯仿中)對C46H82N4O13S·4H2O的元素分析計算值C，55.07;H，9.04;N，5.58;S，3.20實測值C，54.96;H，9.12;N，5.25;S，2.94實施例44製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(Pamo)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu-OH鹽酸鹽(化合物36)a)向在DMF(4ml)中的實施例3中全合成的GC-2(179mg)和參考例17中合成的P-17(80mg)溶液中加入TEA(0.033ml)和DEPC(49mg)，將混合物在20℃下攪拌90分鐘。向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水溶液洗滌，接著用無水硫酸鈉乾燥。蒸去溶劑，剩餘物用矽膠柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1)純化，得到無色蠟狀化合物(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(36a)(105mg，收率41%)，。
IR(KBr)ν3300，1730，1685，1660，1645cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，1.03-1.38(56H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.49-2.40(12H，m)，2.79(2H，d，J＝5.2Hz)，2.93(2H，d，J＝7.0Hz)，3.17-3.32(2H，m)，4.00-4.56(7H，m)，5.17-5.32(1H，m)，5.78-5.90(1H，m)，6.19(1H，d，J＝8.0Hz)，6.44-6.56(1H，m)，7.26-7.46(4H，m)，7.61(2H，d，J＝7.4Hz)，7.78(2H，d，J＝7.4Hz)b)向如上獲得的化合物36a(104mg)中加入哌啶(2ml)，將混合物在室溫下攪拌30分鐘，然後濃縮反應混合物。濃縮物用矽膠柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝1∶1～氯仿∶甲醇＝19∶1)純化，得到無色蠟狀化合物(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu(OtBu)-OtBu(36b)(80mg，收率93%)。
IR(KBr)ν3320，1735，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.03-1.38(52H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.49-2.43(12H，m)，2.20(2H，t，H＝7.8Hz)，2.31(2H，t，J＝7.8Hz)，2.33(2H，t，J＝7.4Hz)，2.72(1H，dd，J＝8.8，13.6Hz)，2.75(2H，d，J＝6.0Hz)，3.12(1H，dd，J＝3.8，13.6Hz)，3.15-3.29(2H，m)，3.48(1H，dd，J＝3.8，8.8Hz)，4.14(1H，dd，J＝6.0，11.8Hz)，4.35(1H，dd，J＝3.6，11.8Hz)，4.41-4.55(1H，m)，5.09-5.22(1H，m)，6.15(1H，d，J＝8.0Hz)，7.40(1H，t，J＝5.8Hz).
c)向如上獲得的化合物36b(80mg)中加入4N HCl乙酸乙酯溶液(4ml)，將所得混合物在20℃下攪拌4小時。蒸去溶劑得到(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu-OH鹽酸鹽(36)(74mg，收率100%)，其為白色粉末狀產物，m.p.53-56℃。23D-6.0°(c＝0.50，在氯仿中)對C52H89N4O11SCl·2H2O元素分析計算值C，59.49;H，8.93;N，5.34;S，3.05實測值C，59.62;H，8.77;N，5.37;S，3.14IR(KBr)ν3250，1740，1715，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.03-1.50(56H，m)，1.50-1.80(6H，m)，1.80-3.55(16H，m)，4.03-4.70(4H，m)，5.10-5.35(1H，m)實施例45製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu-OH鹽酸鹽(化合物37)按照基本上與實施例44相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(37a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu(OtBu)-OtBu(37b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu-OH鹽酸鹽(化合物37)。
原料 反應條件 產物a) GC-2 P-18 91mg 37a(179mg) DEPC 49mg (52mg)TEA 33μlDMF 4ml20℃ 90minb) 37a 哌啶 2ml 37b(104mg) 20℃ 30min (31mg)c) 37b 4N HCl乙酸乙酯 37(31mg) 4ml (29mg)20℃ 4.0h化合物 37aIR(KBr)ν3280，1730，1685，1645cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，0.95-1.38(64H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.50-2.40(12H，m)，2.79(2H，d，J＝5.2Hz)，2.86-2.96(1H，m)，3.18-3.32(2H，m)，4.08-4.55(6H，m)，5.18-5.33(1H，m)，5.73-5.85(1H，m)，6.14(1H，d，J＝7.8Hz)，6.40-6.53(1H，m)，7.25-7.45(4H，m)，7.61(2H，d，J＝7.4Hz)，7.78(2H，d，J＝7.0Hz)
化合物 37bIR(KBr)ν3360，3310，1730，1650cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.4Hz)，1.03-1.39(56H，m)，1.44(9H，s)，1.47(9H，s)，1.52-1.72(12H，m)，1.72-2.43(2H，m)，2.20(2H，t，J＝8.0Hz)，2.31(2H，t，J＝7.8Hz)，2.33(2H，t，J＝7.6Hz)，2.73(1H，dd，J＝8.7，13.0Hz)，2.75(2H，d，J＝7.4Hz)，3.11(1H，dd，J＝3.7，13.0Hz)，3.23(2H，dt，J＝7.4，7.4Hz)，3.48(1H，dd，J＝3.7，8.7Hz)，4.14(1H，dd，J＝6.2，12.0Hz)，4.35(1H，dd，J＝3.2，12.0Hz)，4.42-4.56(1H，m)，5.08-5.22(1H，m)，6.15(1H，d，J＝7.8Hz)，7.39(1H，t，J＝7.4Hz)化合物37m.p.61-64℃[α]23+4.2°(c＝0.50，在氯仿中)對C55H104N3O10SCl·2H2O的元素分析計算值C，61.68;H，10.16;N，3.92;S，2.99實測值C，62.02;H，9.33;N，3.73;S，2.64IR(KBr)ν3250，1740，1720，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.03-1.50(64H，m)，1.50-1.80(6H，m)，1.80-3.55(16H，m)，4.03-4.70(4H，m)，5.10-5.35(1H，m)實施例46製備(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨基)苯甲醯基-Glu-OH鹽酸鹽(化合物38)a)向化合物P-19(85mg)的哌啶(1.5ml)溶液中加入三氯化磷(0.01ml)。混合物在20℃下攪拌2小時，再加入化合物GC-2(100mg)，接著在20℃下攪拌3小時。向反應混合物中加入水，用乙酸乙酯萃取。萃取液用5%的檸檬酸水溶液、飽和碳酸氫鈉水溶液和飽和鹽水溶液洗滌，然後用無水硫酸鈉乾燥。蒸去溶劑，剩餘物用矽膠柱色譜(氯仿∶己烷＝7∶1)純化，得到無色蠟狀化合物(2R，6R)-4-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(38a)(107mg，收率84%)。
IR(KBr)ν3300，1730，1685，1660，1640，1600cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，1.10-1.38(48H，m)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.55-1.83(4H，m)，1.90-2.58(8H，m)，2.75-2.86(2H，m)，3.02(2H，d，J＝6.6Hz)，4.21-4.72(8H，m)，5.24-5.49(1H，m)，5.74-5.86(1H，m)，7.01(2H，d，J＝7.6Hz)，7.32(2H，d，J＝7.6Hz)，7.35-7.87(8H，m)，8.70(1H，br s)b)向如上獲得的化合物38a(107mg)中加入哌啶(2ml)，混合物在20℃下攪拌3小時，然後濃縮反應混合物。濃縮物用矽膠柱色譜(己烷∶乙酸乙酯＝1∶7)純化，得到無色蠟狀產物(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(38b)(66mg，收率68%)。
IR(KBr)ν3430，3380，1735，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.6Hz)，1.05-1.37(48H，m)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.52-1.82(4H，m)，1.93-2.53(8H，m)，2.70-4.00(5H，m)，4.05-4.72(3H，m)，5.10-5.24(1H，m)，7.23-7.95(4H，m)，9.71(1H，br s)c)向如上獲得的化合物38b(66mg)中加入4N HCl乙酸乙酯溶液(3ml)，將所得混合物在20℃下攪拌4小時。蒸去溶劑，得到無色粉末狀產物化合物38(61mg，收率100%)，m.p.94.0-96.0℃。23D+6.2°(c＝0.50，在氯仿中)對C50H86N3O10SCl·2H2O的元素分析計算值C，60.49;H，9.14;N，4.23;S，3.23實測值C，60.39;H，8.98;N，4.19，S，3.18IR(KBr)ν3400，1750，1630，1610cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.02-1.48(48H，m)，1.48-1.68(4H，m)，2.00-2.85(13H，m)，4.05-5.32(4H，m)，7.40-8.00(4H，m)實施例47製備(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲醯基-Glu-OH鹽酸鹽(化合物39)按照基本上與實施例44相同的方法製備(2R，6R)-4-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(39a)，(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(39b)和(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲醯基-Glu-OH鹽酸鹽(化合物39)。
原料 反應條件 產物a) GC-2 P-20 87mg 39a(179mg) DEPC 49mg (146mg)TEA 33μlDMF 4ml20℃ 90minb) 39a 哌啶 3ml 39b(146mg) 20℃ 4.5h (87mg)c) 39b 4N HCl乙酸乙酯(87mg) 4ml 3920℃ 4.0h (78mg)化合物 39aIR(KBr)ν3300，1735，1730，1700，1655，1640cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.6Hz)，1.02-1.84(64H，m)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.84-3.15(13H，m)，4.00-4.73(9H，m)，5.15-5.28(1H，m)，5.80-5.92(1H，m)，6.92-7.13(2H，m)，7.26-7.83(12H，m)，8.53(1H，br s)
化合物 39bIR(KBr)ν3350，1735，1650，1600cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝7.0Hz)，1.52-1.76(4H，m)，1.95-2.53(8H，m)，2.75(2H，d，J＝6.6Hz)，2.92(1H，dd，J＝7.8，13.6Hz)，3.11(1H，dd，J＝4.2，13.6Hz)，3.66(1H，dd，J＝4.2，7.8Hz)，4.01-4.24(3H，m)，4.37(1H，dd，J＝3.4，11.8Hz)，4.57-4.62(1H，m)，5.08-5.22(1H，m)，7.00(1H，d，J＝7.6Hz)，7.59(2H，d，J＝8.8Hz)，7.79(2H，d，J＝8.8Hz)，8.19(1H，t，J＝5.6Hz)，8.63(1H，s)化合物 39m.p.100-101℃IR(KBr)ν3400，1735cm-1對C51H96N3O10SCl·H2O的元素分析計算值C，61.44;H，9.91;N，4.41;S，3.22實測值C，61.17;H，9.81;N，4.26;S，3.211H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，0.93-1.47(48H，m)，1.47-1.70(4H，m)，1.70-3.32(16H，m)，3.70-4.60(4H，m)，4.60-4.78(1H，m)，5.17-5.32(1H，m)，7.47-7.90(4H，m)實施例48製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu-OH TFA鹽(化合物40)按照基本上與實施例44相同的方法合成(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(40a)，然後製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu(OtBu)-OtBu(40b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu-OH TFA鹽(化合物40)。
原料 反應條件 產物a) GC-2 P-21 64mg 40a(150mg) DEPC 35mg (112mg)TEA 44mgDMF 3ml0℃ 1h化合物 40a1H-NMR(CDCl3)δ0.878(6H，t，J＝6.0Hz)，1.247(52H，s)，1.433(9H，s)，1.463(9H，s)，1.465-1.720(6H，m)，1.72-2.15(2H，m)，2.15-2.40(16H，m)，2.785(2H，d，J＝5.8Hz)，2.927(2H，d，J＝6.2Hz)，3.265(2H，m)，4.05-4.55(7H，m)，5.232(1H，br s)，5.825(1H，d，J＝8.2Hz)，6.236(1H，d，J＝8.2Hz)，6.595(1H，br s)，7.366(4H，m)，7.600(2H，d，J＝7.0Hz)，7.766(2H，d，J＝7.0Hz)IR(純)ν3300，2920，2850，1735，1650，1530，1440，1370，1255，1245，1225，1155cm-1b)將化合物40a(112mg)溶於DCM(0.2ml)中，向該溶液中加入哌啶(2ml)，混合物在20℃下攪拌2小時。減壓濃縮反應混合物，使濃縮物吸附在用氨處理的矽膠柱(5g)上，用氯仿洗脫得到無色油狀產物化合物40b(83mg，收率89.8%)。
1H-NMR(CDCl3)δ0.878(6H，t，J＝6.0Hz)，1.254(52H，s)，1.467(9H，s)，1.499(9H，s)，1.47-1.75(6H，m)，1.72-2.15(2H，m)，2.15-2.40(10H，m)，2.60-2.80(3H，m)，3.107(1H，dd，J＝3.8Hz，13.6Hz)，3.242(2H，q，J＝6.2Hz)，3.475(1H，dd，J＝4.0Hz，6.8Hz)，4.142(1H，dd，J＝6.0Hz，12.0Hz)，4.358(1H，dd，J＝3.4Hz，11.8Hz)，4.472(2H，m)，5.154(1H，m)，6.90(1H，d，J＝7.6Hz)，7.424(1H，t，J＝7.2Hz)IR(純)ν3300，2920，2850，1735，1650，1530，1440，1370，1255，1245，1225，1155cm-1c)將化合物40b(83mg)溶於DCM(0.2ml)中，向該溶液中加入TFA(1ml)，混合物在20℃攪拌2小時。向反應混合物中加入甲苯(1ml)，減壓下濃縮該混合物。重複該操作得到白色粉末狀產物化合物40(83mg，收率100%)，m.p.62-63℃[α]23D+3.4°(c＝0.16，在氯仿中);
1H-NMR(CDCl3-TFA)δ0.879(6H，t，J＝6.6Hz)，1.256(52H，s)，1.567(6H，m)，1.90-2.20(2H，m)，2.374(8H，m)，2.597(2H，t，J＝6.4Hz)，2.744(2H，d，J＝7.0Hz)，3.100(2H，m)，4.130(1H，dd，J＝6.0Hz，12.0Hz)，4.28-4.50(2H，m)，4.650(1H，m)，5.170(1H，m)，7.080(1H，d，J＝7.5Hz)，7.420(1H，br s)IR(KBr)ν3320，3100，2920，2850，1740，1665，1550，1465，1200cm-1
對C51H92N3O12SF3·H2O的元素分析計算值C，58.54;H，9.05;N，4.02;S，3.06實測值C，58.35;H，8.91;N，4.06;S，2.76實施例49製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5NHCO-Glu-OH TFA鹽(化合物41)按照基本上與實施例48相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(41a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu(OtBu)-OtBu(41b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu-OH TFA鹽(化合物41)。
原料 反應條件 產物a) GC-2 P-22 83mg 41a(150mg) DEPC 35mg (203mg)TEA 44mgDMF 3ml0℃ 1hb) 41a 哌啶 2ml 41b(203mg) DCM 0.2ml (137mg)20℃ 1.5hc) 41b TFA 1ml 41(137mg) 20℃ 2h (136mg)化合物 41a1H-NMR(CDCl3)δ0.879(6H，t，J＝7.0Hz)，1.254(52H，s)，1.430(9H，s)，1.448(9H，s)，1.727(8H，m)，1.75-2.20(2H，m)，2.325(6H，m)，2.780(2H，d，J＝5.0Hz)，2.944(2H，d，J＝5.2Hz)，3.05-3.50(4H，m)，4.00-4.50(9H，m)，4.860(1H，t，J＝6.0Hz)，5.249(2H，d，J＝8.2Hz)，6.08(1H，br s)，6.710(1H，br s)，7.260-7.55(4H，m)，7.612(2H，d，J＝8.0Hz)，7.767(2H，d，J＝8.0Hz)IR(純)ν3300，2920，2850，1730，1685，1640，1560，1550，1530，1460，1445，1360，1250，1150，1100，1030cm-1化合物 41b1H-NMR(CDCl3)δ0.879(6H，t，J＝6.2Hz)，1.254(52H，s)，1.439(9H，s)，1.461(9H，s)，1.597(8H，m)，1.75-2.20(2H，m)，2.311(6H，m)，2.745(2H，m)，3.00-3.45(4H，m)，3.483(1H，m)，4.136(1H，dd，J＝6.4Hz，12.4Hz)，4.353(2H，m)，4.700(1H，t，J＝5.2Hz)，5.078(1H，d，J＝7.6Hz)，5.162(1H，br s)，7.440(1H，br s)
IR(純)ν3350，2920，2850，1730，1640，1560，1460，1450，1390，1360，1250，1260，1150，1100，750，730cm-1化合物 41m.p.44-46℃[α]23D-2.9°(c＝0.415，在氯仿中);
1H-NMR(CDCl3)δ0.880(6H，t，J＝6.2Hz)，1.255(52H，s)，1.591(8H，m)，2.0-2.20(2H，m)，2.302(6H，m)，2.779(2H，m)，3.00-3.45(3H，m)，3.516(2H，m)，3.80-4.25(6H，m)，4.340(2H，m)，5.200(1H，br s)，7.57(1H，br s)，7.710(1H，br s)IR(KBr)ν3400，2920，2850，1740(sh.)，1700，1670(sh.)，1460，1420，1280，1260，1240，1200，1175，1130cm-1對C50H95N4O12SF3的元素分析計算值C，58.11;H，9.27;N，5.42;S，3.10實測值C，58.19;H，8.77;N，5.24;S，2.78實施例50製備(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲醯基-Glu-OH鹽酸鹽(化合物42)按照基本上與實施例44相同的方法製備(2R，6R)-4-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(42a)，(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(42b)和(2R，6R)-4-(2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲醯基-Glu-OH鹽酸鹽(化合物42)。
原料 反應條件 產物a) GC-2 P-23 106mg 42a(200mg) DEPC 55mg (247mg)TEA 70mgDMF 10ml20℃ 30minb) 42a 哌啶 2ml 42b(243mg) DCM 0.5ml (195mg)20℃ 30minc) 42b 4N HCl乙酸乙酯 4ml 42(112mg) 20℃ 2h (88mg)化合物 42aIR(純)ν3300，2920，2850，1730，1660，1530，1500，1445，1360，1240，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.40-1.65(4H，m)，1.95-2.50(8H，m)，2.77(2H，d，J＝6.6Hz)，2.90-3.00(2H，m)，4.05-4.55(8H，m)，4.66(1H，m)，5.24(1H，m)，5.78(1H，br)，6.98(1H，br)，7.02(1H，d，J＝7.4Hz)，7.25-7.45(6H，m)，7.58(2H，d，J＝7.4Hz)，7.76(2H，d，J＝7.2Hz)，7.78(2H，d，J＝8.4Hz)化合物 42bIR(純)ν3350，2920，2850，1730，1650，1535，1520，1500，1460，1450，1360，1250，1150cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.42(9H，s)，1.49(9H，s)，1.45-1.65(4H，m)，1.73(2H，br s)，1.90-2.50(8H，m)，2.75(2H，d，J＝6.4Hz)，2.81(1H，dd，J＝13.4，8.4Hz)，3.14(1H，dd，J＝13.4，3.8Hz)，3.57(1H，dd，J＝8.4，4.0Hz)，4.14(1H，dd，J＝12.0，6.2Hz)，4.36(1H，dd，J＝12.0，3.2Hz)，4.49(2H，d，J＝6.2Hz)，4.66(1H，m)，5.16(1H，m)，7.02(1H，d，J＝7.4Hz)，7.35(2H，d，J＝8.2Hz)，7.79(2H，d，J＝8.2Hz)，7.83(1H，br)化合物 42m.p.79-80℃[α]20D+15.1°(c＝0.305，在氯仿中);
IR(KBr)ν3450，2920，2850，1730，1710，1690，1670，1640，1630，1620，1560，1540，1500，1460cm-11H-NMR(CDCl3-TFA)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.40-1.65(4H，m)，2.00-3.30(12H，m)，4.00-4.80(6H，m)，5.22(1H，m)，7.00-8.10(6H，m).
對C51H87N3O10S·HCl·H2O的元素分析計算值C，61.95;H，9.17;N，4.25;S，3.24;Cl，3.59實測值C，61.66;H，8.93;N，4.24;S，3.44;Cl，3.79實施例51製備(2R，6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT)-N-(羧甲基)氨甲基)苯甲醯基-Glu-OH(化合物43)按照基本上與實施例44相同的方法製備
(2R，6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT)-N-(t-丁氧基羰基甲基)氨甲基)苯甲醯基-Glu(OtBu)-OtBu(43a)，和(2R，6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT)-N-(羧甲基)氨甲基)苯甲醯基-Glu-OH(化合物43)。
原料 反應條件 產物a) GC-2 P-24 62mg 43a(100mg) DEPC 30mg (134mg)TEA 48mgDMF 6ml20℃ 1hb) 43a TFA 1ml 43(110mg) DCM 0.5ml (70mg)化合物 43aIR(純)ν2920，2850，1730，1650，1360，1250，1150cm-11H-NMR(CDCl3)δ0.88(6H，t，J＝6.8Hz)，1.25(48H，s)，1.40(1/2x9H，s)，1.42(9H，s)，1.44(1/2x9H，s)，1.49(9H，s)，1.45-1.70(4H，m)，2.00-2.50(8H，m)，2.65-3.20(4H，m)，3.70-4.50(8H，m)，4.60-4.80(3H，m)，5.17(1H，m)，5.70-5.80(1H，m)，7.00-7.10(1H，m)，7.25-7.45(6H，m)，7.61(2H，d，J＝7.4Hz)，7.75-7.90(4H，m)化合物 .43m.p.58-59℃[α]20D-12.6°(c＝0.25，在氯仿中);
IR(KBr)ν2921，2852，1739，1640，1540，1465，1450，1250，1220，1160cm-1
1H-NMR(CDCl3)δ0.87(6H，t，J＝6.6Hz)，1.25(48H，s)，1.40-1.70(4H，m)，2.00-2.50(8H，m)，2.60-3.00(4H，m)，3.90-4.50(8H，m)，5.17(1H，m)，6.27(1H，m)，7.15-7.45(6H，m)，7.50-7.85(6H，m)對C68H100N3O14S·H2O的元素分析計算值C，66.21;H，8.33;N，3.41;S，2.60實測值C，66.44;H，8.32;N，3.21;S，2.66實施例52製備(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Lys-Gly-OH 2TFA鹽(化合物44)按照基本上與實施例6相同的方法製備(2R，6R)-2-Fmoc-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(44a)，(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Lys(Boc)-Gly-OtBu(44b)和(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Lys-Gly-OH2TFA鹽(化合物44)。
原料(g) 反應條件 產物(g)a) GC-2 P-25 1.01mg 44a(1.97) HONB 435mg (2.24)DIC 380μlDMF 30ml20℃ 13hb) 44a 哌啶 2.0ml 44b(2.00) DCM 20ml (1.23)20℃ 2h矽膠(氯仿-甲醇)50:1c) 44b TFA 6.0ml 44(0.25) 20℃ 2h (0.23)化合物44a[α]25D-10.0°(c＝0.66，在氯仿中)對C72H117N5O13S的元素分析計算值C，66.89;H，9.12;N，5.42;S，2.48實測值C，67.10;H，9.37;N，5.18;S，2.49化合物44b[α]25D-15.2°(c＝0.56，在氯仿中)對C57H107N5O11S的元素分析
計算值C，63.95;H，10.07;N，6.54;S，3.00實測值C，63.70;H，10.20;N，6.50;S，2.99化合物44[α]25D+5.5°(c＝0.62，在5%TFA-氯仿中)對C48H91N5O9S·2TFA的元素分析計算值C，54.67;H，8.21;N，6.13;S，2.81實測值C，54.29;H，8.19;N，6.47;S，3.06實施例53製備鈉鹽1)在40℃下將化合物12(5.0g)溶於20%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氫鈉水溶液(5L)中，在溶液的PH值調節為9.5後，溶液在Diaion HP-20(1.0L，Mitsubishi Kasei公司，日本)上進行色譜分離，其中Diaion HP-20已事先用20%(v/v)含水乙腈溶液使其膨脹。樹脂用20%(v/v)含水乙腈溶液(5L)洗滌，接著用40%(v/v)含水乙腈溶液(4L)和60%(v/v)含水乙腈溶液(5L)展開。濃縮洗脫液，然後冷凍乾燥得到粉末狀產物。將粉末狀產物懸浮在丙酮(150ml)中，過濾收集不溶物質，得到為白色粉末狀物質化合物12的二鈉鹽(4.5g)
FAB-MS(M+H)＝959對C47H84N4O11SNa2·3H2O的元素分析計算值C，55.71;H，8.95;N，5.53;S，3.16Na，4.54實測值C，55.90;H，9.39;N，5.34;S，3.16;Na，4.782)在40℃將化合物19(11.0g)溶於15%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氫鈉水溶液(5L)中，在溶液的PH值調節為9.5後，在Diaion HP-20(1.0L，Mitsubish Kasei公司，日本)上對溶液進行色譜分離，其中Diaion HP-20已事先用15%(v/v)含水乙腈溶液膨脹。樹脂用15%(v/v)含水乙腈溶液(5L)洗滌，接著用40%(v/v)含水乙腈溶液(12L)展開。濃縮洗脫液，然後冷凍乾燥得到粉末狀產物。將該產物懸浮在丙酮(200ml)中，過濾收集不溶物，得到化合物23的二鈉鹽(9.9g)，其為白色粉末狀物質。
FAB-MS(M+H)＝902對C45H81N3O10SNa2·3H2O的元素分析計算值C，56.52;H，9.17;N，4.39;S，3.35;Na，4.81實測值C，56.61;H，9.14;N，4.26;S，3.35;Na，5.253)在40℃下將化合物23(14.0g)溶於5%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氫鈉水溶液(7L)中。將溶液的PH值調節為9.5後，在Diaion HP-20(1.4L，Mitsubishi Kasei公司，日本)上進行色譜分離，其中Diaion HP-20已事先用5%(v/v)含水乙腈溶液使其膨脹。樹脂用5%(v/v)含水乙腈溶液(7L)洗滌，接著用40%(v/v)含水乙腈溶液(8.5L)展開。濃縮洗脫液，然後冷凍乾燥得到粉末狀產物。將該產物懸浮在丙酮(600ml)中，過濾收集不溶物得到化合物23的三鈉鹽(11.5g)，其為白色粉末狀物質。
FAB-MS(M+H)＝1053對C50H87N4O13SNa3·4H2O的元素分析計算值C，53.37;H，8.51;N，4.98;S，2.85;Na，6.13實測值C，53.48;H，8.81;N，4.89;S，3.03;Na，6.04)在40℃將化合物25(8.0g)溶於5%(v/v)乙腈-0.5%(w/v)碳酸氫鈉水溶液(4L)中，在溶液的PH值調節為9.5後，在Diaion HP-20(1.5L，Mitsubishi Kasei公司，日本)上對溶液進行色譜分離，其中Diaion HP-20事先已用5%(v/v)含水乙腈溶液使其膨脹。樹脂用5%(v/v)含水乙腈溶液(7.5L)洗滌，接著用40%(v/v)含水乙腈溶液(6L)展開。濃縮洗脫液，然後冷凍乾燥得到白色粉末狀產物。將該產物懸浮在丙酮(200ml)中，過濾收集不溶物質，得到化合物25的三鈉鹽(7.0g)，其為白色粉末狀物質。
FAB-MS(M+H)＝1053對C50H87N4O13SNa3·2.5H2O的元素分析
計算值C，54.68;H，8.44;N，5.10;S，2.92;Na，6.28實測值C，54.48;H，8.64;N，5.09;S，2.79;Na，6.135)在40℃下將化合物7(200mg)溶於30%(v/v)甲醇-0.5%(w/v)碳酸氫鈉水溶液(300ml)中，在溶液的PH值調節為9.5後，在Diaion HP-20(50ml，Mitsubishi Kasei公司，日本)上對溶液進行色譜分離，其中Diaion HP-20事先已用30%(v/v)含水甲醇溶液膨脹。樹脂用30%(v/v)含水甲醇溶液(200ml)和50%(v/v)含水甲醇溶液(200ml)洗滌，接著用80%(v/v)含水甲醇溶液(600ml)展開。濃縮洗脫液，然後冷凍乾燥得到白色粉末狀產物。將該粉末狀產物懸浮在丙酮(8ml)中，過濾收集不溶物，得到化合物7的二鈉鹽(75mg)，其為白色粉末狀物質。
對C49H87N5O12SNa2·2.5H2O的元素分析計算值C，55.45;H，8.74;N，6.60;S，3.02;
實測值C，55.47;H，8.55;N，6.48;S，3.11;
上面實施例中所得到的化合物的結構式列在表1中。
表1化合物 實施例 結構式編號 編號1 6 (2R,6S)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH2 7 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Thr-Thr-OH3 8 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH4 9 (2S,6S)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-Thr-OH5 10 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-Thr-OH6 11 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-Gly-D-Glu-OH7 12 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-
Glu-OH8 13 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH9 14 (2R,6S)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH10 15 (2R,6S)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-D-Glu-OH11 16 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D--Glu-OH12 17 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Glu-OH13 18 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly--OH14 19 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-OH15 20 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-OH16 21 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙
(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Asp-OH17 22 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-D--Glu-OH18 23 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Gly-OH19 24 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-D-Glu--OH20 25 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-D-Glu-OH21 26 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Asp-OH22 27 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-D-Asp-OH23 28 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH24 29 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Glu-D--Glu-OH25 30 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-Glu-
OH26 31 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-OH27 32 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-D-Glu-OH28 33 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-Glu-OH29 34 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Glu-D-Glu-OH30 36 (2R,6R)-2-氨基-6-己醯氧基-7-PamO-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH31 37 (2R,6R)-2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D-Glu-OH32 38 (2R,6R)-2-乙醯氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Glu-Gly-D--Glu-OH33 39 (2R,6R)-2-己醯氨基-6-己醯氧基-7-(PamO)-4-THT-Gly-Gly-Gly-Glu-OH
34 42 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙-(SetO)-4-THT-Gly-Glu-GluOH35 43 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(MyrO)-4-THT-Gly-Glu-Glu-OH36 44 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)7CO-Glu-OH鹽酸鹽37 45 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)11CO-Glu-OH鹽酸鹽38 46 (2R,6R)-4-(2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-氨基)苯甲醯基-Glu-OH鹽酸鹽39 47 (2R,6R)-4-(2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-氨基)苯甲醯基-Glu-OH鹽酸鹽40 48 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)5CO-Glu-OH TFA 鹽41 49 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-NH(CH2)6NHCO-Glu-OH TFA 鹽
42 50 (2R,6R)-4-(2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-氨甲基)苯甲醯基-Glu-OH 鹽酸鹽43 51 (2R,6R)-4-(N-(2-Fmoc-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT)-N-(羧甲基)氨甲基)苯甲醯基-Glu-OH44 52 (2R,6R)-2-氨基-6,7-雙(PamO)-4-THT-Gly-Lys-Gly-OH 2TFA 鹽化合物1-15在高效液相色譜中的保留時間在下面給出柱YMC-Pack A-602 NH2(Yamamura Chemical Laboratories，日本)流動相85%甲醇/0.02M磷酸鹽緩衝液(PH4.8)流速1.0ml/min.
檢測方法UV，214nm保留時間(分鐘)化合物2，17.1; 化合物1，17.3;
化合物4，15.8; 化合物3，15.9化合物7，20.7; 化合物5，18.5化合物9，20.7; 化合物8，19.7化合物12，19.4; 化合物10，19.8化合物15，18.4; 化合物14，9.4
化合物(Ⅰ)的生物活性在下面描述。
實施例1前述實施例中製備的化合物(Ⅰ)對小鼠骨髓細胞增生的促進作用見表2。
表 2對小鼠骨髓細胞增生的促進作用化合物 最小有效濃度編號 (MEC,ng/ml)*11 0.6252 0.1568 0.15612 0.15614 0.15636 0.15644 0.156＊1 假定沒有加入實驗化合物的實驗組的骨髓增生為1，當觀察到骨髓增生為原來的1.3倍或更多時，記錄下此時的化合物濃度。
測定方法向含有2×106/ml BALB/c小鼠骨髓細胞、2mML-穀氨醯胺、20μg/ml慶大黴素(Flow Laboratories Inc.，蘇格蘭)、10%胎兒腓腸血清(BW，USA)的RPMI1640培養介質[Bio-Wittaker Inc.，(簡稱BW)，USA]中加入適當濃度的實驗化合物，該培養物在含有5%二氧化碳的空氣中於37℃下保溫3天，接著用MTT歸納法[Tada等人，Journal of Jmmunological Methods vol.93.P，157，1986]測定骨髓細胞的增生情況。
實施例2化合物(Ⅰ)增加小鼠脾細胞數目的作用見表3。
表 3增加脾細胞數目的作用藥物劑量(mg/Kg/天) 脾細胞數(%)*1僅有環磷醯胺 33.4環磷醯胺+(化合物8) 0.1 78.6＊1 在腹膜內施以生理鹽水溶液(含有2%阿拉伯樹膠)的小鼠的脾細胞數定為100%。
測定方法以200mg/Kg的劑量用溶解在生理鹽水溶液中的環磷醯胺對BALB/C小鼠進行腹膜內注射。從第三天開始，連續4天用懸浮在含有2%阿拉伯樹膠的生理鹽水溶液中實驗化合物對小鼠進行腹膜內給藥。在完成給藥的第二天，數出脾的錐蟲藍發色細胞的數目。
實施例3化合物(Ⅰ)對增加小鼠白細胞數目的作用見表4。
表 4增加白細胞數目的作用化合物劑量(mg/Kg/天) 白細胞數(%)*1編號2 0.063 1027 0.031 12914 0.13 118＊1 給出的數值是相對於下面小鼠白細胞(假定為100%)的百分數，這些小鼠以相對於20g體重0.2ml的劑量口服生理鹽水溶液(代替環磷醯胺)，然後從口服的第二天開始，連續5天、每天一次用5%葡萄糖皮下給藥。順便提一下，本實驗自始至終，小鼠白細胞數目的平均值和標準偏差為41±11%，這些小鼠以150mg/Kg的劑量口服環磷醯胺，然後從第二天開始，連續5天、每天一次用相對於20g體重0.2ml5%葡萄糖的劑量皮下給藥。
測定方法年齡為六周的雌CDF1/Crj小鼠(5隻/組)用於該實驗。以150mg/Kg的劑量使每隻小鼠口服溶解在生理鹽水溶液中的環磷醯胺。從第二天起，以下列劑量用懸浮在5%葡萄糖中的化合物每天一次(共5天)對每隻小鼠皮下給藥。完成給藥的第二天，用EDTA處理的玻璃毛細管從周靜脈中取出100μl外圍血液，然後用自動細胞分析儀(Sysmex K-2000，Toa Medical Electronics，日本)數出白細胞數目。
實驗例4前述實施例中製備的化合物(Ⅰ)促進巨核細胞群生長的作用見表5。
表 5實驗化合物 濃度 巨核細胞群形成編號 (ng/ml) 的程度*112 0.4 1.824 2.01＊1 沒有加入化合物(Ⅰ)的實驗組的巨核細胞的數目定為1。
測定方法根據血漿凝塊方法[Mizoguti等人，ExperimentalHematology Vol.7，PP，345-351，1979]研究巨核細胞群的形成。
以適當的濃度向含有5×106/ml BALB/c小鼠骨髓細胞、20%胎兒腓腸血清(BW，USA)、1%血清白蛋白、0.026mg/mlCaCl2、0.02mg/mlL一天冬醯胺、10%檸檬酸鈉牛血漿的NCTC-109培養介質(Gibco BRL Inc.USA)中加入實驗化合物，然後徹底混合。將0.4ml上述培養液的等分試樣放置在35×10mm塑料盤(A/S Nunc，丹麥)的中央使其結塊。向培養盤中加入0.6ml含有10%胎兒腓腸血清的α-MEM培養介質(BW，USA)，然後使培養液在含有5%CO2的空氣中於37℃下保溫7天。保溫後，除去血漿結塊周圍的培養介質，向血漿結塊表面放置一小塊濾紙使其除去水分。然後，將1-2滴5%戊二醛滴在血塊上面的濾紙上。10分鐘後，撤去濾紙，並用0.1M磷酸鹽緩衝液(PH6.0)洗滌血塊。用乙醯膽鹼酯酶(下文縮寫為AchE)使血塊染色。向含有碘化乙醯硫膽鹼(30mg)的0.1M磷酸鹽緩衝液(45ml)中依次加入30mM硫酸銅水溶液(6ml)和0.1M檸檬酸鈉水溶液(3ml)以及5mM鐵氰化鉀水溶液(6ml)。每次得到的溶液都取出2ml加入盤中。在33℃下放置4-6小時後，數出巨核細胞群的數目。
實驗例5前述實施例中製備的化合物(Ⅰ)促進AchE陽性細胞生長的作用見表6。
表 6實驗化合物濃度(ng/ml) AchE陽性細胞活性程度*1編號7 0.1 1.5112 0.1 1.4323 0.1 1.67＊1沒有加入實驗化合物(Ⅰ)的實驗組的AchE活性定為1。
測定方法根據螢光法(Ishibashi等人，Proceedings of the National Academy of Science U.S.A.，Vol.86，PP.5953-5957，1989)研究AchE活性。
將沒有粘連的BALB c小鼠骨髓細胞(1×106細胞/ml)懸浮在含有1% Neutridoma-SP(Boheringer Mannhaim，德國)的Dulbecco介質(Gibco BRL Inc，USA)的Iscove變體中。25μl適當濃度的實驗化合物溶液在96孔的平板中接種，向每個穴中的實驗化合物溶液加入100μl非粘連骨髓細胞懸浮液。在37℃下保溫5天後，向穴中加入25μl6%戊二醛水溶液。在4℃下靜置30分鐘後，該混合物在5℃下離心(850×g)，並棄去上清液。用100μl磷酸鹽緩衝鹽水洗滌孔中的沉澱後，向沉澱加入含有0.2%聚氧乙烯-10-辛基苯基醚(POPE)、1mM乙二胺四乙酸鹽(EDTA)、0.12M氯化鈉和50mMN-2-羥基乙基哌啶-N′-2-乙磺酸(HEPES)的100μl緩衝液(PH7.5)。再加入10μl碘化乙醯硫膽鹼水溶液(濃度1.6mg/ml)。在33℃下保溫3小時後，分出10μl得到的溶液。向該溶液中加入10μl10.4mM7-二乙氨基-3-(4′-馬來醯亞氨基苯基)-4-甲基香豆素水溶液和含有0.2%POPE、1mMEDTA和50mM乙酸鈉的100μl緩衝液(PH5.0)，並用螢光計測定螢光發射(激發波長365nm，螢光波長450nm)。
實驗例6毒性實驗沒有發現以100mg/Kg劑量用化合物3腹膜內給藥的小鼠死亡。
實施例7毒性實驗沒有發現以100mg/Kg劑量用化合物7的二鈉鹽皮下給藥的小鼠死亡。
化合物(Ⅰ)或其鹽是低毒性的，可以完全使用。
從前面的實驗例可以清楚地看出，化合物(Ⅰ)或其鹽對改善造血機能具有出色的活性，可用作治療或預防由於放射治療或化學治療哺乳動物(如狗、貓、牛、馬、猴、人等)的癌症引起的白細胞減少症的藥物，可在骨髓移植情況下用作刺激造血的試劑，可用作具有增加白細胞作用的增強免疫試劑，以及用作血小板減少症的治療試劑。
製劑例1將實施例8製得的化合物2(4g)和甘露醇(50g)溶於含有聚乙二醇400(30%w/w)的無菌蒸餾水(1l)中，在無菌條件下過濾上述溶液。然後將1ml該溶液裝在一隻安瓿(每隻裝1ml)中，從而製得每隻安瓿含有4mg化合物2的靜脈注射針劑。
製劑例2將實施例53製得的化合物23的三鈉鹽(40mg)和甘露醇(50g)溶於含有聚乙二醇400(30%w/w)的無菌蒸餾水(1l)，在無菌條件下過濾上述溶液，然後將1ml該溶液裝在一隻安瓿(每隻裝1ml)中，從而製得每隻安瓿含有40μg化合物23的三鈉鹽的靜脈注射針劑。
權利要求
1.下列通式的化合物或其鹽
其中每個R1和R2是氫或脂醯基，A是可被保護的氨基，X是由1-10個胺基酸殘基組成的胺基酸序列，這些胺基酸殘基中至少有一個胺基酸殘基帶有增加水溶性的基團。
2.根據權利要求1的化合物，其中A是氨基。
3.根據權利要求1的化合物，其中A是可被取代氧羰基取代的氨基。
4.根據權利要求1的化合物，其中帶有增加水溶性基團的胺基酸殘基是酸性胺基酸殘基。
5.根據權利要求1的化合物，其中帶有增加水溶性基團的胺基酸殘基是鹼性胺基酸殘基。
6.根據權利要求1的化合物，其中脂醯基是C2-30脂醯基。
7.根據權利要求1的化合物，其中R1和R2中的至少一個基團是脂醯基。
8.根據權利要求1的化合物，其中R1是脂醯基。
9.根據權利要求1的化合物，其中R2是脂醯基。
10.根據權利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯氧基)-4-硫雜庚醯基-甘氨醯-穀氨醯-穀氨酸。
11.根據權利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯氧基)-4-硫雜庚醯基-甘氨醯-甘氨醯-穀氨酸。
12.根據權利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯氧基)-4-硫雜庚醯基-穀氨醯-甘氨醯-穀氨酸。
13.根據權利要求1的化合物，其中化合物是(2R，6R)-2-氨基-6，7-雙(十六烷醯氧基)-4-硫雜庚醯基-甘氨醯-D-穀氨酸。
14.一種具有增加白細胞作用的刺激免疫組合物，其包括權利要求1所要求保護的化合物或其鹽。
15.根據權利要求14的刺激免疫組合物，其中R1和R2中的至少一個基團是脂醯基。
16.治療血小板減少症的組合物，其包括權利要求1中所要求保護的化合物或其鹽。
17.一種製備權利要求1所要求保護的化合物或其鹽的方法，包括使下式的化合物或其鹽進行去保護基反應
其中每個R1和R2是氫或脂醯基，R3是保護基，A是可被保護的氨基，X′是由1-10個任意保護的胺基酸殘基組成的胺基酸序列，這些殘基中至少有一個任意保護的胺基酸殘基帶有增加水溶性基團。
全文摘要
上式的化合物或其鹽。具有出色的改善造血機能失調的活性並可用作刺激免疫試劑或治療血小板減少症的藥劑。通式中每個R
文檔編號C07K5/103GK1094731SQ9312175
公開日1994年11月9日 申請日期1993年12月28日 優先權日1992年12月28日
發明者谷田清一, 飛田恆明, 脅舛光廣, 原田節夫, 幸重浩一 申請人:武田藥品工業株式會社