一種銀杏達莫注射液的製備方法
2023-05-19 20:07:46
專利名稱：一種銀杏達莫注射液的製備方法
技術領域：
本發明屬於藥品製劑製備方法技術領域，具體涉及一種銀杏達莫注射液製備方法，更具體涉及一種以銀杏提取物與雙嘧達莫為主成分的小容量注射劑。
背景技術：
銀杏達莫注射液是銀杏葉提取物於雙嘧達莫共同配製而成的水溶性製劑。銀杏葉是銀杏科植物銀杏的乾燥葉，其為傳統的活血化瘀中藥材，具有良好的治療肺虛咳喘，冠心病，心絞痛，高血脂的藥理作用。銀杏葉提取物中含有總黃酮、總內酯等有效成分，總黃酮為銀杏葉提取物的主要活性成分。總黃酮在銀杏葉提取物中主要以甙形式存在，主要為槲皮素、山奈素與異鼠李素。銀杏提取物可擴張血管，拮抗PAF活性，抑制血小板聚集，降低血液粘稠，增加缺血臟器血流量，改善微循環及血液流度，清除自由基，抑制細胞膜脂質發生過氧化反反應，防止自由基對機體造成血栓、動脈硬化、等損害，保護神經細胞，改善記憶功能，具有活血化瘀、理氣、止痛、通脈舒絡之功效。主要用於缺血性心腦血管疾病，冠心病，心絞痛，血栓塞，腦血管痙攣等。雙嘧達莫又稱潘生丁，具有防止血栓形成，加速冠脈側枝循環，可預防心肌梗死等作用。
目前，國內市場上的銀杏達莫注射液(銀杏葉提取物與雙嘧達莫混合製成的注射液，每1ml含銀杏總黃酮應為0.90-1.10mg，雙嘧達莫(C24H40N8O4)應為0.36-0.44mg)有多家企業生產，均採用傳統工藝配製而成，其存在的產品質量穩定性差，藥液刺激性強，澄明度不合格率高，PH值下降，含量下降，顏色加深，療效不穩定等問題始終無法解決。其主要原因在於銀杏葉提取物在製備過程中部分雜質如蛋白質、鞣質等無效成分未完全去除，本發明銀杏達莫注射液工藝的突破從根本上解決了上述問題。
發明內容
本發明的目的在於提供一種銀杏達莫注射液的製備方法。
本發明所述的製備方法包括如下步驟將銀杏葉進行粉碎，用乙醇回流提取，提取液濃縮過濾，樹脂吸附，乙醇洗脫，回收乙醇注射用水，冷藏，得濾液即為銀杏提取液。取處方中的新鮮注射用水，調節PH值，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，冷藏，超濾，濾液備用。將上述兩種藥液在避光條件下混合，定容，調PH值，中間產品檢驗合格後，經終端過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得銀杏達莫注射液成品。
本發明所述的製備方法具體過程如下
A)銀杏葉提取液的製備將銀杏葉進行粉碎，加入8～15倍量50～80％的乙醇，40～60℃回流提取兩次，每次2～5小時，合併提取液，過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的1/6～1/12，加入1～3倍濃縮液量的蒸餾水，在加入1～3％濃縮液量的助溶劑過濾，濾液經大孔樹脂吸附，並用50～80％乙醇溶液解吸，解吸液加入配製量50～70％的新鮮注射用水，超聲處理20～40分鐘，0～10℃冷藏12～48小時，用截餾分子量1萬的超濾膜超濾，得銀杏葉提取液；B)取配製量10～30％、10～30℃的新鮮注射用水，調節PH值為1.0～2.0，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，0～10℃冷藏12～48小時，用截餾分子量5000～8000的超濾膜超濾，濾液備用；C)將上述兩種藥液避光條件下混合，定容，調PH3.5～5.5，中間產品檢驗合格後，將藥液經終端0.22μm濾膜除菌過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得銀杏達莫注射液成品。
更為優選的製備方法包括如下步驟A)銀杏葉提取液的製備將銀杏葉進行粉碎，加入10倍量70％的乙醇，50℃回流提取兩次，每次3小時，合併提取液，過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的1/8，加入1.5倍濃縮液量的蒸餾水，在加入1.5％濃縮液量的助溶劑過濾，濾液經大孔樹脂吸附，並用70％乙醇溶液解吸，解吸液加入配製量60％的新鮮注射用水，超聲處理30分鐘，4℃冷藏24小時，用截餾分子量1萬的超濾膜超濾，得銀杏葉提取液；B)取配製量20％20℃的新鮮注射用水，調節PH值為1.5，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，4℃冷藏24小時，用截餾分子量5000～8000的超濾膜超濾，濾液備用；C)將上述兩種藥液避光條件下混合，定容，調PH4.0～4.5，中間產品檢驗合格後，將藥液經終端0.22μm濾膜除菌過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得銀杏達莫注射液成品。
上述製備方法中，所用的提取溶劑為50～80％乙醇，體積為藥材的8～15倍量，提取溫度為40～60℃，提取次數為兩次，提取時間為2～5小時。
上述製備方法中，採用截流分子量為1萬的超濾膜超濾，是所配製藥液中無效成分的控制步驟，所用超濾膜為市售產品。其生產商應為行業認可的生產單位。
上述製備方法中，避光、通氮氣條件是藥液配製、灌裝過程的關鍵步驟。
上述製備方法中，終端除菌過濾所使用的濾膜孔徑為0.22μm。為使產品質量穩定，濾膜應儘可能由固定生產商供應。
上述製備方法中，冷藏溫度為0～10℃，冷藏時間為12～48小時。
上述製備方法中，為使產品質量穩定，所用PH值調節劑為10％鹽酸溶液。
上述製備方法中，雙嘧達莫配製過程中的注射用水溫度控制在10～30℃，PH值控制在1.0～2.0。
本發明所述之銀杏達莫注射液臨床應用時靜脈滴注，靜脈滴注，成人一次10～25ml，加入0.9％氯化鈉注射液或5％～10％葡萄糖注射液500ml中，一日2次。
本發明所述之銀杏達莫注射液具有調節血管的舒縮，清除自由基，拮抗PAF，保護神經元，可擴張動脈血管、降低血管壁通透性、改善水腫，降低缺血粘度、抑制血小板和紅細胞的高聚集性、增加紅細胞的變形性，減少心肌耗氧量、增強心肌細胞對缺血缺氧的耐受性，穩定細胞膜、維持正常的細胞結構和功能，直接保護神經元，加強神經傳導、加快神經遞質的更新等作用。主要適用於腦血栓、腦血管痙攣、急慢性腦功能不全，缺血性心臟病，缺血性視網膜病變，外周血管疾病等疾病的治療。
本發明中銀杏葉經回流提取、濃縮過濾、樹脂吸附、洗脫、超聲、超濾等技術處理，並有避光、充氮保護，確保了蛋白質、鞣質等無效成分被完全去除，避免了有效成分的降解，減少了製劑中的有關物質，使製成的製劑穩定性好，刺激性小，澄明度改善，療效穩定。
具體實施例方式
下面用實施例進一步描述本發明，但所述實施例僅用於說明本發明而不是限制本發明。
實施例1A)銀杏葉提取液的製備將銀杏葉進行粉碎，加入8倍量60％的乙醇，50℃回流提取兩次，每次3.5小時，合併提取液，過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的1/8，加入3倍濃縮液量的蒸餾水，在加入1％濃縮液量的助溶劑過濾，濾液經大孔樹脂吸附，並用60％乙醇溶液解吸，解吸液加入配製量50％的新鮮注射用水，超聲處理30分鐘，4℃冷藏24小時，用截餾分子量1萬的超濾膜超濾，得銀杏葉提取液。
B)取配製量10％10℃的新鮮注射用水，調節PH值為1.2，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，2℃冷藏48小時，用截餾分子量8000的超濾膜超濾，濾液備用。
C)將上述兩種藥液避光條件下混合，定容，調PH4.2，中間產品檢驗合格後，將藥液經終端0.22μm濾膜除菌過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得銀杏達莫注射液成品。
實施例2
A)銀杏葉提取液的製備將銀杏葉進行粉碎，加入12倍量80％的乙醇，45℃回流提取兩次，每次2小時，合併提取液，過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的1/12，加入1.5倍濃縮液量的蒸餾水，在加入1.5％濃縮液量的助溶劑過濾，濾液經大孔樹脂吸附，並用80％乙醇溶液解吸，解吸液加入配製量65％的新鮮注射用水，超聲處理25分鐘，6℃冷藏36小時，用截餾分子量1萬的超濾膜超濾，得銀杏葉提取液。
B)取配製量25％25℃的新鮮注射用水，調節PH值為1.5，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，5℃冷藏36小時，用截餾分子量6000的超濾膜超濾，濾液備用。
C)將上述兩種藥液避光條件下混合，定容，調PH4.0，中間產品檢驗合格後，將藥液經終端0.22μm濾膜除菌過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得銀杏達莫注射液成品。
實施例3A)銀杏葉提取液的製備將銀杏葉進行粉碎，加入15倍量50％的乙醇，40℃回流提取兩次，每次2.5小時，合併提取液，過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的1/6，加入2倍濃縮液量的蒸餾水，在加入2.5％濃縮液量的助溶劑過濾，濾液經大孔樹脂吸附，並用70％乙醇溶液解吸，解吸液加入配製量60％的新鮮注射用水，超聲處理20分鐘，10℃冷藏12小時，用截餾分子量1萬的超濾膜超濾，得銀杏葉提取液。
B)取配製量15％30℃的新鮮注射用水，調節PH值為1.4，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，8℃冷藏12小時，用截餾分子量5000的超濾膜超濾，濾液備用。
C)將上述兩種藥液避光條件下混合，定容，調PH4.3，中間產品檢驗合格後，將藥液經終端0.22μm濾膜除菌過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得銀杏達莫注射液成品。
實施例4A)銀杏葉提取液的製備將銀杏葉進行粉碎，加入14倍量70％的乙醇，55℃回流提取兩次，每次4小時，合併提取液，過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的1/7，加入2倍濃縮液量的蒸餾水，在加入3％濃縮液量的助溶劑過濾，濾液經大孔樹脂吸附，並用50％乙醇溶液解吸，解吸液加入配製量55％的新鮮注射用水，超聲處理35分鐘，7℃冷藏24小時，用截餾分子量1萬的超濾膜超濾，得銀杏葉提取液。
B)取配製量30％20℃的新鮮注射用水，調節PH值為1.0，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，4℃冷藏24小時，用截餾分子量8000的超濾膜超濾，濾液備用。
C)將上述兩種藥液避光條件下混合，定容，調PH4.4，中間產品檢驗合格後，將藥液經終端0.22μm濾膜除菌過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得銀杏達莫注射液成品。
實施例5A)銀杏葉提取液的製備將銀杏葉進行粉碎，加入10倍量70％的乙醇，50℃回流提取兩次，每次3小時，合併提取液，過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的1/8，加入1.5倍濃縮液量的蒸餾水，在加入1.5％濃縮液量的助溶劑過濾，濾液經大孔樹脂吸附，並用70％乙醇溶液解吸，解吸液加入配製量60％的新鮮注射用水，超聲處理30分鐘，4℃冷藏24小時，用截餾分子量1萬的超濾膜超濾，得銀杏葉提取液。
B)取配製量20％20℃的新鮮注射用水，調節PH值為1.5，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，4℃冷藏24小時，用截餾分子量6000的超濾膜超濾，濾液備用。
C)將上述兩種藥液避光條件下混合，定容，調PH4.5，中間產品檢驗合格後，將藥液經終端0.22μm濾膜除菌過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得銀杏達莫注射液成品。
實驗例1本實驗例為本發明實施例1～5所製備的銀杏達莫注射液的性狀、PH值、重金屬及注射劑項下有關的各項規定項目的檢測。
性狀本品為黃色至棕黃色澄明液體，符合規定。
PH值取本品，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄VIH)，PH值為3.5～5.5，符合規定。
重金屬精密量取本品2ml，置坩鍋中，水浴蒸乾，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄VIIIH第二法)，含重金屬未超過百萬分之五，符合規定。
其他符合注射劑項下有關的各項規定(中國藥典2000年版二部附錄IB)。
實驗例2本實驗例為本發明實施例1～5所製備的銀杏達莫注射液的定性測定。
鑑別(1)取本品2ml，加鎂粉少許，加濃鹽酸數滴，放置後漸顯紅色，符合規定。
(2)取本品2ml，乙醇10ml，即顯綠色螢光，加稀鹽酸後螢光消失，符合規定。
(3)在雙嘧達莫和銀杏總黃酮含量測定項下記錄的圖譜中，供試品峰的保留時間應與對照品相對應的峰保留時間一致，符合規定。
以下實驗說明本發明所製備的銀杏達莫注射液中含有確定的組分。
實驗例3本實驗例為本發明實施例1～3所製備的銀杏達莫注射液的含量測定。
雙嘧達莫 照高相液效色譜法(中國藥典2000版二部附錄VD)測定。
色譜條件與系統適用性實驗 用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以0.1％磷酸二氫鈉溶液〔用(1→3)磷酸溶液調節PH值至4.6〕-甲醇(25∶75)為流動相；流速為0.1ml/min；檢測波長為290nm。理論板數按雙嘧達莫峰計算應不低於2000重複進樣5次，相對標準偏差(RSD)不大於2.0％。
對照品溶液的製備 精密稱取雙嘧達莫對照品適量，加80％甲醇溶液製成每1ml中含15μg的溶液。
供試品溶液的製備 精密量取本品2ml，置50ml容量瓶中，加80％甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。
測定法 精密量取對照品溶液及供試品溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算。
銀杏總黃酮 照高效液相色譜法(中國藥典2000版二部附錄VD)測定。
色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以0.4％磷酸溶液-甲醇(50∶50)為流動相；流速為1.2ml/min；檢測波長為360nm；理論板數按槲皮素峰計算應不低於1500，相對標準偏差(RSD)應不大於2.0％。
對照品溶液的製備 精密稱取槲皮素對照品約12mg，置200ml容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。
供試品溶液的製備 精密量取本品25ml，加硫酸溶液(5→100)15ml，加甲醇20ml，置水浴上回流4小時，移入100ml容量瓶中，加甲醇衝洗並至刻度，搖勻經濾膜(孔徑不得大於0.45μm)濾過。
測定法 分別精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20μl，注入高效液相色譜儀，測定，記錄色譜圖，其中最大的三個峰，按保留時間依次為槲皮素(Q)、山柰素(K)、異鼠李素(I)，按外標法計算Q、K、I，以下式計算總黃酮的含量Q×2.50+K×2.59+I×2.44標準規定每1ml中含銀杏總黃酮應為0.90～1.10mg，雙嘧達莫(C24H40N8O4)應為0.36～0.44mg。
實施例1～3的含量測定，結果見下表
實驗例4本實驗例為本發明實施例1～3所製備的銀杏達莫注射液的安全性檢查。
無菌取本品，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XIH)，符合規定。
熱原取本品用10％葡萄糖注射液稀釋1倍，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XID)，劑量按家兔體重每1kg緩緩注射稀釋液3ml，符合規定。
長期毒性測定連續給藥三個月觀察血尿檢查、病理檢查均未見異常。
通過以上實驗說明本發明所製備的銀杏達莫注射液的安全性符合注射劑要求，無任何毒性作用，應用人體安全。
比較例1本比較例說明本發明實施例1～3所製備的銀杏達莫注射液的澄明度優於用常規製備方法生產的。
澄明度判斷標準(1)未發現有異物或僅帶微量白點者，作合格論。
(2)每瓶含短於0.5cm的毛和0.1～0.2mm的白點、白塊或色點總數未超過5個者，作合格論。
(3)不合格率未超過5％，該批產品作合格論。
有關概念白塊係指用規定的檢查方法，能看到有明顯的平面或稜角的白色物質。
白點不能辨清平面或稜角的按白點計。
微量白點在規定的時間內僅見到3個或3個以下白點者。
異物包括玻璃屑、纖維、色點、色塊及其它外來異物。
檢查方法分別取採用本發明實施例1所製備的銀杏達莫注射液和採用常規工藝製備的產品各200支，按《澄明度檢查細則和判斷標準》和以上標準檢查，結果見下表。
通過以上實驗說明本發明所製備的銀杏達莫注射液的澄明度明顯優於用常規製備方法生產的。
比較例2本比較例說明本發明實施例2所製備的銀杏達莫注射液在臨床應用時刺激性較小。
比較例3本比較例說明採用本發明實施例5所製備的銀杏達莫注射液與採用常規製備方法生產的銀杏達莫注射液通過六個月加速實驗的穩性比較，結果見下表。
標準規定含量每1ml中含銀杏總黃酮應為0.90～1.10mg，雙嘧達莫(C24H40N8O4)應為0.36～0.44mg。
PH值應為3.5～5.5澄明度合格率應不低於95％顏色本品為黃色至棕黃色澄明液體。
通過以上實驗可以看出，發明組在經過加速實驗六個月後，其含量、PH值、澄明度、顏色並未發生明顯變化，而常規組的含量、PH值均有明顯降低，澄明度、顏色均不符合規定，表明本發明所製備的銀杏達莫注射液明顯優於採用常規製備方法生產的。
權利要求
1.一種銀杏達莫注射液的製備方法，所述的製備方法具體過程如下A)銀杏葉提取液的製備將銀杏葉進行粉碎，用乙醇回流提取，提取液濃縮過濾，樹脂吸附，乙醇洗脫，回收乙醇注射用水，冷藏，得濾液即為銀杏提取液；B)取處方中的新鮮注射用水，調節PH值，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，冷藏，超濾，濾液備用；C)將上述兩種藥液在避光條件下混合，定容，調PH值，中間產品檢驗合格後，經終端過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得雙嘧達莫注射液成品。
2.根據權利要求書1所述的製備方法，其特徵在於包括如下步驟A)銀杏葉提取液的製備將銀杏葉進行粉碎，加入8～15倍量50～80％的乙醇，40～60℃回流提取兩次，每次2～5小時，合併提取液，過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的1/6～1/12，加入1～3倍濃縮液量的蒸餾水，在加入1～3％濃縮液量的助溶劑過濾，濾液經大孔樹脂吸附，並用50～80％乙醇溶液解吸，解吸液加入配製量50～70％的新鮮注射用水，超聲處理20～40分鐘，0～10℃冷藏12～48小時，用截餾分子量1萬的超濾膜超濾，得銀杏葉提取液；B)取配製量10～30％10～30℃的新鮮注射用水，調節PH值為1.0～2.0，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，0～10℃冷藏12～48小時，用截餾分子量5000～8000的超濾膜超濾，濾液備用；C)將上述兩種藥液避光條件下混合，定容，調PH3.5～5.5，中間產品檢驗合格後，將藥液經終端0.22μm濾膜除菌過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得銀杏達莫注射液成品。
3.根據權利要求書1所述的製備方法，其特徵在於包括如下步驟A)銀杏葉提取液的製備將銀杏葉進行粉碎，加入10倍量70％的乙醇，50℃回流提取兩次，每次3小時，合併提取液，過濾，濾液減壓濃縮至提取液體積的1/8，加入1.5倍濃縮液量的蒸餾水，在加入1.5％濃縮液量的助溶劑過濾，濾液經大孔樹脂吸附，並用70％乙醇溶液解吸，解吸液加入配製量60％的新鮮注射用水，超聲處理30分鐘，4℃冷藏24小時，用截餾分子量1萬的超濾膜超濾，得銀杏葉提取液；B)取配製量20％20℃的新鮮注射用水，調節PH值為1.5，在避光條件下加入處方中的雙嘧達莫攪拌溶解，4℃冷藏24小時，用截餾分子量5000～8000的超濾膜超濾，濾液備用；C)將上述兩種藥液避光條件下混合，定容，調PH4.0～4.5，中間產品檢驗合格後，將藥液經終端0.22μm濾膜除菌過濾，充氮灌裝，滅菌，燈檢，包裝，即得銀杏達莫注射液成品。
4.根據權利要求書1～3之一所述的製備方法，其特徵在於所述的助溶劑可為鈉沸石或滑石粉，其體積為濃縮液量的1～3％。
5.根據權利要求書1～3之一所述的製備方法，其特徵在於所述的大孔樹脂可為D101型樹脂或HP-20型樹脂。
6.根據權利要求書1～3之一所述的製備方法，其特徵在於所述的提取溶劑為50～80％乙醇，體積為藥材的8～15倍量，提取溫度為40～60℃，提取次數為兩次，提取時間為2～5小時。
7.根據權利要求書1～3之一所述的製備方法，其特徵在於銀杏葉提取時超濾所使用的超濾膜為截留分子量為1萬的超濾膜。
8.根據權利要求書1～3之一所述的製備方法，其特徵在於所述的冷藏溫度為0～10℃，冷藏時間為12～48小時。
9.根據權利要求書1～3之一所述的製備方法，其特徵在於雙嘧達莫配製過程中的注射用水溫度控制在10～30℃，PH值控制在1.0～2.0，PH調節劑為10％鹽酸溶液。
10.根據權利要求書1～3之一所述的製備方法，其特徵在於配製、灌裝過程中的條件為避光、充氮。
全文摘要
本發明屬於醫用製劑領域，具體公開了一種抗血小板聚集，冠狀動脈擴張藥物銀杏達莫注射液的製備方法。本發明方法將銀杏葉粉碎後，經乙醇回流提取、濃縮過濾、樹脂吸附、乙醇洗脫等技術處理，得到銀杏葉提取液，在避光條件下與雙嘧達莫共同配製、充氮灌裝，再經滅菌、燈檢、包裝後製成銀杏達莫小容量注射劑。本發明方法確保了蛋白質、鞣質等無效成分被完全去除，避免了有效成分的降解，減少了製劑中的有關物質，使製成的製劑穩定性好，刺激性小，澄明度改善，療效穩定。經臨床證明本品可靜脈滴注，主要適用於腦血栓、腦血管痙攣、急慢性腦功能不全，缺血性心臟病，缺血性視網膜病變，外周血管疾病等疾病的治療。
文檔編號A61P7/00GK1939357SQ20051010487
公開日2007年4月4日 申請日期2005年9月27日 優先權日2005年9月27日
發明者張玉梅 申請人:巴裡莫爾製藥(通化)有限公司