用cd20抗體治療痴呆或阿耳茨海默氏病的方法
2023-05-20 03:18:16
專利名稱：：用cd20抗體治療痴呆或阿耳茨海默氏病的方法
技術領域：
：本發明關注使用CD20抗體治療人類受試者中的AD或痴呆的方法及具有供此類用途的說明書的製品。
背景技術：
：阿耳茨海默氏病(Alzheimer'sdisease,AD)是現今保lt方面的重大問題，而且直到前十年還沒有已知的有益治療方法。作為最常見的腦的神經退化性病症，AD佔所有痴呆(dementia)病例的大約70。/。。這種痴呆一4殳表現為記憶、意識錯亂(confiision)、視覺-空間、計算、判斷的問題，及可能的妄想(delusion)和幻覺(hallucination)。在疾病早期，痴呆的行為表現常常過於輕孩i從而未被注意。在疾病的中期，當患者仍能獨立執行任務時，複雜的任務常常需要幫助。在晚期，連普通的身體功能諸如咀嚼和吞咽、排便和排尿控制的能力及呼吸作用都喪失了，而且患者常常變成臥床不起。典型的是，在疾病發作後大約5-10年發生死亡。AD目前排在美國主要死因第4位。在AD中，在多個腦區中發生漸進性神經變性，包括相對選擇性涉及基底核、海馬、杏仁核、內嗅皮質，最終是顳區、額區和頂區的高位(high-order)皮質聯合區。神經元損傷及由此引起的突觸密度損失使得對學習和提取記憶至關重要的若干神經系統失能。AD的最常見形式，稱為散發性AD，佔所有確診病例的大約90%。這種形式的AD—般稱為散發性的，因為它尚未聯繫上家族性AD的遺傳病因。遺傳風險因子可能仍然在這種形式的疾病中發揮作用。Lal和Forster提供了自身免疫性和年齡相關認知減退的綜述，討論了C57BL/6小鼠中腦反應性抗體(BRA)的存在(LalandForster，A^wra6/o/ogyo/jg/"g9:733-742(1988))。Toro等人調查了來自早老素(presenilin)-l基因(PS-1)攜帶E280A突變的阿耳茨海默氏病患者血清的針對心磷脂和(3-澱粉狀蛋白的自身抗體的水平(Toroe^/.，i^v.A^wra/.29(12):1104-7(1999))。其他人已經評估了AD中的自身抗體，包括Tenybenyda/"iVewraZ7/0/0gv^g/"g19(3):205-216(1998);Singh"a/.,iVewra^l丄幼.147(1):25-28(1992);Davydovaea/.,fiw〃￡jc/.醜/oZ,Meaf.134(1):23—25(2002);Capsonida/.,Mo/.Ce〃.7Vewra化/.21(l):15-28(2002);Evseev&a/.，5w〃￡jc/.B/o/.Tkfecf.131(4):305-308(2001);Appel&"/.，WZ^cad5W.747:183-194(1994);D，Andrea,M.，5ra/"982(1):19-30(2003);Mruthintia/,，A^wra^o/.爿g/"g25(8):1023-1032(2004);NathWa/.,A^wrawo/ecw/wAfed3(1):29-39(2003);WekslerandGoodhardt，五;cp.Gerawto/.37:971-979(2002);Furlanda/.，腸/"126(Pt2):285-291(2003)。關於AD療法還可參見Keimowitz,R.,Jrc/zA^wra/.54(4):485-8(1997);Aisen"g/.，iVe,/ogy54(3):588-93(2000);Aisena/.，D隱她7(4):201-6(1996)。美國食品和藥品管理局(FDA)批准了五種處方藥用於治療AD。其中四種批准用於治療輕度-中度AD,它們是膽鹼酯酶抑制劑加蘭他敏(galantamine，REMINYL)、利伐斯的明(rivastigmine，EXELON)、多奈旅齊(donepezil，ARICEPT⑧)和他克林(tacrine,COGNEX)。第五種批准的藥物是D-天冬氨酸N-曱酉旨(NMDA)(N-methylD-aspartate)拮抗劑，叫啦文美金剛(memantine，NAMENDA),批准用於治療中度-重度AD。CD20抗體及使用它的療法淋巴細胞是在造血過程中在骨髓中生成的多種類型白細胞之一。有兩種主要的淋巴細胞群B淋巴細胞(B細胞)和T淋巴細胞(T細胞)。本文特別感興趣的淋巴細胞是B細胞。B細胞在骨髓內成熟，然後離開骨髓並在其細胞表面表達抗原結合抗體。當幼稚B細胞初次遇到其膜結合抗體對之具有特異性的抗原時，細胞開始快速分裂，且其後代分化成為記憶B細胞和稱作"漿細胞，，的效應細胞。記憶B細胞具有較長的壽命並繼續表達與最初的親本細胞具有相同特異性的膜結合抗體。漿細胞不生成膜結合抗體，但改為生成可分泌形式的抗體。分泌型抗體是體液免疫的主要效應分子。CD20抗原(也稱作人B淋巴細胞限制分化抗原，Bp35)是位於前B淋巴細胞(pre-B)和成熟B淋巴細胞上、具有約35kD分子量的疏水性跨膜蛋白質(Valentine"a/"傷o/.Ozem.264(19):11282-11287(1989);Einfeld&a/.，五Affi(9J7(3):711-717(1988))。該抗原還在超過90。/。的B細胞非何杰金氏淋巴瘤(NHL)上表達(Andersonda/.，B/ood63(6):1424-1433(1984))，但在造血幹細胞、原B細胞(pro-B)、正常漿細胞或其它正常組織上沒有發現(Teddere,fl/.，乂/附附ww/.135(2):973-979(1985))。CD20調節細胞周期起始和分化的激活過程中的早期步驟(Tedder"a/.，w/ra),並可能發揮鈣離子通道的功能(Tedderefa/"/.Ce〃.飾c/z綴14D:195(1990》。若CD20在B細胞淋巴瘤中表達，則該抗原可充當"靶向"此類淋巴瘤的候選者。本質上，此靶向可概括如下對患者施用對B細胞CD20表面抗原特異的抗體，這些抗CD20抗體特異結合正常B細胞及惡性B細胞二者的CD20消減。另夕卜，可以將具有破壞腫瘤潛力的化學試劑或放射性標記物與抗CD20抗體偶聯，使得試劑特異"投遞，，至贅生性B細胞。不考慮方法，首要目標用的耙向CD20抗原的方法的變化可以相當大。利妥昔單抗即rituximab(RITUXAN⑧)抗體是針對CD20抗原的遺傳工程嵌合鼠/人單克隆抗體。rituximab就是在1998年4月7日公告的美國專利No.5,736,137(Andersone^/.)中稱為"C2B8"的抗體。rituximab指明用於治療患有復發性或頑固性低級或濾泡性CD20陽性B細胞非何杰金氏淋巴瘤的患者。在體外，已經證明了rituximab介導補體依賴性細胞毒性(CDC)和抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)並誘導凋亡(Reff""/，83(2):435-445(1994);MaloneyWa/.，88:637a(1996);Manchesefgt/"101:949-954(2003))。在實驗中還觀察到rituximab與化療和毒素之間的協同作用。具體而言，rituximab可使耐藥性人B細胞淋巴瘤細胞系對多柔比星、CDDP、VP-16、白喉毒素和蓖麻毒蛋白的細胞毒性作用敏感(Demidem"，OmcerC7zewoAera;^c&Ao^/op/ra〃w"ceMac^y12(3):177-186(1997))。體內臨床前研究顯示rituximab從獼猴的外周血、淋巴結和骨髓中消減B細胞(Reffefa/.，腸W83:435-445(1994))。還在B細胞和自身抗體表現出在疾病病理生理學中發揮作用的多種非惡性自身免疫性病症中研究了rituximab(Edwards"Soc.Trara.30:824-828(2002))。已有報導，rituximab潛在減輕例如類風溼性關節炎(RA)(Leandroa/"i/2ewm.D/s.61:883-888(2002》Edwardsa/.，v4w/z"'"si/2ewm.46(Suppl.9):S46(2002);Stahlda/"Jm7.i/ewm.62(Suppl.1):OP004(2003);Emery&a/"W/zeww.48(9):S439(2003》、狼裔(Eisenberg,jw/zn'to.77^5:157-159(2003》Leandroa/.，JW/zn'toi/7ew附.46:2673-2677(2002);Gormanea/.，13:312-316(2004》、免疫性血小板減少性紫癜(D，Arena&a/.，Zjwp/zoma44:561-562(2003);Stasi&a/.，98:952-957(2001);Saleh&a/.，^m/".O"co/.27(Supp12):99-103(2000);Zaiaa/.，//"emafo/g/ca87:189-195(2002);Ratanatharathorna/.,爿wz.Tkfed133:275-279(2000))、純紅細胞再生障礙(Auner"a/.,乂/foewato/.116:725-728(2002))、自身免疫性貧血(Zaja"87:189-195(2002)(勘誤見i/fl^watofog/ca87:336(2002))、冷凝集素病(Layios"a/.，15:187-8(2001);Berentsen&a/,，103:2925-2928(2004);Berentsena/.，/T/aemato/.115:79-83(2001);Bauduer,5kTTaewafo/.112:1083-1090(2001);DamianiWa/"&J7foe廳to/.114:229-234(2001》、重度胰島素耐受的B型症候群(CollWa/.,iV.乂Med350:310-311(2004))、混合性冷球蛋白血症(DeVitada/.,Jw/znto7/ew肌46(Suppl.9):S206/S469(2002))、重症肌無力(Zaja"7Ve"ra/0gy55:1062-63(2000);Wylam"/.,/Pe&a化143:674-677(2003》、韋格納氏肉芽腫病(Specks"^W/znto&i^ewwatow44:2836-2840(2001))、頑固性尋常型天皰瘡(Dupuy"a/.,」rc/z.Der應to/.140:91-96(2004》、皮肌炎(Levine，^w/z函臉謂.46(Suppl.9):S1299(2002》、斯耶才各倫氏症候群(Somera/.，爿W/zn'"sc&i/zewmatom49:394-398(2003))、活動性II型混合性冷球蛋白血症(Zajada/.,101:3827-3834(2003))、尋常型天皰瘡(Dupay"a/"爿rc/2."em^to/.140:91-95(2004))、自身免疫性神經病(PestronkJ!iVeww/.iVewrawrg.屍^c/z/a^v74:485-489(2003))、瘤外視性眼陣攣-肌陣攣症候群(Pranzatelli"a/.，7VeMra/ogy60(Suppl.l)P05.128:A395(2003))及復發隱糹復和型多發性石更化(RRMS)(Crossa/.,(abstract)"PreliminaryresultsfromaphaseIItrialofrituximabinMS",EighthAnnualMeetingoftheAmericasCommitteesforResearchandTreatmentinMultipleSclerosis(美國多發性石更化研究與治療委員會第八次年會)，20-21(2003))的體徵和症狀。已在類風溼性關節炎(RA)患者中進行了II期研究(WA16291)，提供了有關rituximab的安全性和功效的48周3艮蹤lt據(Emeryda/.，^W/zn'^i/2ewm.48(9):S439(2003);Szczepanskiefa/.,廁函臉誦.48(9):S121(2003);Edwardsefa/.,"EfficacyofB-cell-targetedtherapywithrituximabinpatientswithrheumatoidarthritis",iV,■/M^/.350:2572-82(2004))。將總共161名患者隨機平分為四個治療組曱氨蝶呤、僅用rituximab、rituximab加曱氨蝶呤、以及rituximab加環磷醯胺(CTX)。rituximab的治療方案為第l天和第15天靜脈內施用l克。大多數RA患者對rituximab輸注有很好的耐受，有36%的患者在其初次輸注期間發生至少一例不良事件(與30%接受安慰劑的患者相比)。總之，大多數不良事件在嚴重程度上視為輕度到中度的，而且所有治療組之間^艮均衡。在48周中四個組共有19例重度不良事件，其中rituximab/CTX組稍多一些。所有組之間的感染發生率很均衡。該RA患者群體中重度感染的平均比率為每100患者-年4.66例，低於基於社會的流行病學研究中所報告的RA患者中需要入院治療的感染比率(每100患者-年9.57例)(Doran"a/"^W/zntoi^ewm.46:2287-2293(2002》。所報導的rituximab在少數神經學病症患者中的安全譜，包括自身免疫性神經病(Pestronkda/.,、視性眼陣攣-肌陣攣症候群(opsoclonus-myoclonus)(Pranzatellia/"swpra)和RRMS(Crossfl/"swpra)，與在腫瘤學或RA中所報導的類似。正在RRMS患者中進行的rituximab聯合幹擾素-(3(IFN-P)或醋酸格拉默(glatirameracetate)的研究者發起試驗(IST)(Cross"a/.,wpra)中，10名接受治療的患者中有l人在初次rituximab輸注後發生中度發燒和打寒戰，之後入院徹夜觀察，但其他9名患者完成了四次輸注的方案，沒有報告任何不良事件。關注CD20抗體和CD20結合分子的專利出版物包括美國專利Nos.5,776,456,5,736,137，5,843,439，6，399，061和6,682，734，以及US2002/0197255,US2003/0021781,US2003/0082172,US2003/0095963，US2003/0147885(Anderson&a/.);美國專利No.6,455,043,US2003/0026804和WO2000/09160(Grillo-Lopez，A.);WO2000/27428(Grillo-LopezandWhite);WO2000/27433和US2004/0213784(Grillo-LopezandLeonard);WO2000/44788(Braslawskya/.);WO2001/10462(Rastetter,W.);WO01/10461(RastetterandWhite);WO2001/10460(WhiteandGrillo-Lopez);US2001/0018041，US2003/0180292，WO2001/34194(HannaandHariharan);US2002/0006404和WO2002/04021(HannaandHariharan);US2002/0012665和WO2001〃4388(Hanna，N.);US2002/0058029(Hanna,N.);US2003/0103971(HariharanandHanna);US2002/0009444和WO2001/80884(Grillo-Lopez,A.);WO2001/97858(White,C.);US2002/0128488和WO2002/34790(Reff,M.);WO2002/060955(Braslawsky&a/,);WO2002/096948(Braslawsky"a/.);WO2002/079255(ReffandDavies);美國專利No.6,171,586和WO1998/56418(Lama/.);WO1998/58964(Raju，S.);WO1999/22764(Raju,S.);WO1999/51642,美國專利No.6,194,551，美國專利No.6,242,195，美國專利No.6,528，624和美國專利No.6,538,124(Idusogie""/);WO2000/42072(Presta,L.);WO2000/67796(Curdaa/.);WO2001/03734(Grillo-Lopez"a/.);US2002/0004587和WO2001A77342(MillerandPresta);US2002/0197256(Grewal,I.);US2003/0157108(Presta,L.);WO04/056312(Lowman"a/.);US2004/0202658和WO2004/091657(Benyunes，K.);WO2005/000351(Chan,A.);US2005/0032130A1(Beresini"a/.);US2005/0053602A1(Brunetta,P.);美國專利Nos.6,565,827,6,090,365，6,287,537，6,015,542，5，843,398和5,595,721,(Kaminski"a/.);美國專利Nos.5,500,362,5,677,180，5,721,108,6,120，767和6,652,852(Robinson"a/.);美國專利No.6,410,391(Raubitschek"a/.);美國專利No,6,224,866和W000/20864(Barbera畫Guillem,E.);WO2001/13945(Barbera-Guillem,E.);US2005/0079174Al(Barbera-Guillem"a/.);WO2000/67795(Goldenberg);US2003/0133930和WO2000〃4718(GoldenbergandHansen);US2003/0219433和WO2003/68821(Hansenda/.);WO2004/058298(GoldenbergandHansen);WO2000A76542(Golaya/.);WO2001/72333(WolinandRosenblatt);美國專利No.6,368,596(Ghetiea/.);美國專利No.6,306,393和US2002/0041847(Goldenberg,D.);US2003/0026801(WeinerandHartmann);WO2002/102312(Engleman,E.);US2003/0068664(AlbitarWa/.);WO2003/002607(Leung，S.);WO2003/049694，US2002/0009427和US2003/0185796(WolinWO2003/061694(SingandSiegall);US2003/0219818(BohenUS2003/0219433和WO2003/068821(Hansenda/.);US2003/0219818(Bohena/.);US2002/0136719(Shenoy""/);WO2004/032828(Wahl"/.);WO2002/56910(Hayden-Ledbetter);US2003/0219433Al(Hansenda/.);WO2004/035607(Teelingda/.);US2004/0093621(Shitarada/.);WO2004/103404(Watkinsda/.);WO2005/000901(Teddera/.);US2005/0025764(Watkinsaa/.);WO2005/016969和US2005/0069545Al(Carrda/.);及WO2005/014618(Chang"a/.)。還可參見美國專利No.5，849，898和EP330,191(Seeded/.);EP332,865A2(MeyerandWeiss);美國專利No.4,861,579(MeyerWa/.);US2001/0056066(Bugelski"a/.);及WO1995/03770(Bhat""/.)。還可參見US2005/0079184Al，US2004/0018557Al，WO2005/016241A2，WO2005/009539A2，WO2004/105684A2,WO2004/080387A2,WO2004/074434A2，WO2004/060911A2，WO2004/045512A2,WO2004/032828A2和W02003/043583A2。關注-使用rituximab的療法的出片反物包4舌PerottaandAbuel，"ResponseofchronicrelapsingITPof10yearsdurationtorituximab",Abstract#3360祝ow/lO(l)(part1-2):p.88B(1998);Perottada/""Rituxaninthetreatmentofchronicidiopathicthrombocytopenicpurpura(ITP)"，S/ood94:49(abstract)(1999);Matthews,R.,"MedicalHeretics",iVew5Wew"st(7April,2001);Leandroda/,,"Lymphocytedepletioninrheumatoidarthritis:earlyevidenceforsafety,efficacyanddoseresponse",JwAnY/sawd7/7ewma"'sw44(9):S370(2001);Leandro"a/.,"AnopenstudyofBlymphocytedepletioninsystemiclupuserythematosus",Jr//7hfe朋di/^M/watow46:2673-2677(2002)，其中在2周期間，每名患者接受兩次500mgrituximab輸注、兩次750mg環磷醯胺輸注和高劑量口服皮質類固醇，其中兩名接受治療的患者分別在第7和8個月時復發，且已經用不同方案復治；^Veidea/.，"Successfullong-termtreatmentofsystemiclupuserythematosuswithrituximabmaintenancetherapy",12:779-782(2003),其中一名患者用rituximab治療(375mg/m2x4，以一周為間隔重複)，且每5-6個月再應用rituximab,然後每三個月接受rituximab375mg/m2的維持療法，第二名患有頑固性SLE的患者得到了rituximab的成功治療，且每三個月接受維持療法，兩名患者對rituximab療法都有l交好的響應；EdwardsandCambridge,"SustainedimprovementinrheumatoidarthritisfollowingaprotocoldesignedtodepleteBlymphocytes",i/zewmato/ogy40:205-211(2001);Cambridgeefa/""Blymphocytedepletioninpatientswithrheumatoidarthritis:serialstudiesofimmunologicalparameters",」W/r跑7/ze,.46(Suppl.9):S1350(2002);Edwardsda/.,"Efficacyandsafetyofrituximab,aB誦celltargetedchimericmonoclonalantibody:Arandomized,placebocontrolledtrialinpatientswithrheum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AD受試者使用簡短精神狀態;險查(Mini-MentalStateExamination,MMSE)來鑑定。在本文中，"中度-重度"或"晚期"AD指達到晚期且疾病的徵候或症狀突出的AD。此類受試者可以由有經驗的神經科醫師或臨床醫師來鑑定。此型AD受試者可能不再響應膽鹼酯酶抑制劑療法，而且可能具有顯著降低的乙醯膽鹼水平。在一個實施方案中，中度-重度AD受試者使用簡短精神狀態檢查(MMSE)來鑑定。"簡短精神狀態檢查，，(MiniMentalStateExamination,MMSE)是記憶問題的疾病或考慮痴呆診斷時最常使用的測試。得分12-26點的受試者可以認為患有輕度-中度痴呆或AD。得分低於12點的受試者可以認為是患有重度痴呆或AD。MMSE包含一系列問題和測試，其中每一項若回答正確則給分。若每一項回答都是正確的，則可能得到最高得分30點。患有阿耳茨海默氏病的人一般得分26點或更低。整個測試的拷貝可以從心理學評估資源(PsychologicalAssessmentResources,PAR)網3佔http:〃www.parinc.com獲4尋。"家族性AD"是由遺傳缺陷引起的遺傳形式的AD。"散發性AD"是最常見形式的AD，認為是由環境與遺傳因素例如ApoE4+基因型聯合引起的。所有已診斷的AD患者中幾乎90%患有散發性形式的該病。"標準護理(standard-of-care)"藥療意指一種或多種最常用於治療AD或痴呆的藥物；例如，AD的標準護理可以是膽鹼酯酶抑制劑和/或NMDA拮抗劑。AD或痴呆的"症狀"指受試者所經歷的且指示AD或痴呆的任何病態現象或者結構、功能或感覺偏離正常。"受試者"在本文中指人類受試者。為本發明目的，受試者指AD或痴呆受試者。一般而言，受試者符合接受AD或痴呆治療的條件。為本發明目的，此類符合條件的受試者指正經歷、歷過或有可能經歷AD或痴呆的一種或多種徵候或症狀的受試者。AD或痴呆診斷可包括混合型痴呆(MIX)的診斷，其中AD的體徵和症狀與缺血性血管性痴呆(IVD)的體徵和症狀共存。在一個實施方案中，受試者除AD外未患有自身免疫病。患有或有風險患上AD或痴呆的受試者可任選根據經篩選血清、腦脊液(CSF)和/或老年斑中具有升高的CD20陽性B細胞水平來鑑定。或者/另外，可使用檢測自身抗體的測定法來篩選受試者，所述測定法的評估是定性的，優選定量的。可檢測受試者血清、腦脊液(CSF)和/或老年斑中的此類自身抗體，例如通過ELISA。"自身抗體"指受試者產生的、針對受試者自身抗原的抗體。例示性的(beta-amyloid)、心磷脂(cardiolipin)、微管蛋白(tubulin)、膠質細胞原纖維酸'l"生蛋白(glialfibrillaryacidprotein)、牙申糹至絲蛋白(neurofilamentprotein,NFL)、神經節苦脂(ganglioside)、細胞骨架蛋白(cytoskeletonprotein)、髓磷脂石鹹性蛋白(myelinbasisprotein,MBP)、血清素(serotonin)、多巴胺(dopamine)、早老素(presenilin)、澱4分狀蛋白卩-肽(amyloidbeta-peptide)(Abeta)、高度糖化終產物受體(receptorforadvancedglycationendproduct,RAGE)、神經生長因子(NGF)、等等的抗體。"非典型性(atypical)"自身抗體水平指此類自身抗體的水平超過正常水平。所述正常或典型性自身抗體水平可以是在來自正常受試者或者未患有AD或痴呆的受試者的生物學樣品中發現的水平。所述生物學樣品可以是血清、CSF或老年斑。"腦反應性抗體(brainreactiveantibody)"或"BRA"指受試者的血清、腦脊液(CSF)和/或腦組織中存在的、能以大於與其它正常人組織的特異性與人腦和/或人中樞神經系統(CNS)組織起反應的任何自發生成的人抗體群。"治療"或"處理"受試者在本文中指治療性處理和預防性或防範性措施。需要治療的受試者包括早就患有AD或痴呆的受試者以及要預防AD或痴呆的受試者。因此，受試者可能已經診斷為患有AD或痴呆，或者可能傾向於或易感於AD或痴呆。術語"治療"、"處理"或"處置"在用於本文時包括預防性(例如防範性)、緩解性和治癒性處理。表述"有效量"指抗體(或其它藥物)有效預防、緩解或治療痴呆或AD的量。這樣的有效量一般將導致痴呆或阿耳茨海默氏病的體徵或症狀的改善，諸如維持認知功能(例如記憶、語言、判斷性思考、閱讀和/或書寫技能)；減緩疾病的發展；遲滯其發作或全然預防疾病；控制與疾病有關的行為問題；治療抑鬱和/或情感淡漠；治療諸如攻擊和/或焦慮的行為；減緩曰常生活技能的喪失，諸如穿衣、吃飯和大小便；降低自身抗體水平；及減少CD20陽性B細胞數(例如血清、CNS和/或老年斑中的)。"膽鹼酯酶抑制劑'，指阻斷或幹擾乙醯膽鹼和/或丁醯膽鹼分解的藥劑或組合物。膽鹼酯酶抑制劑的例子包括加蘭他敏(galantamine)(REMINYL⑧)、利伐斯的明(rivastigmine)(EXELON)、多奈哌齊(donepezil)(ARICEPT)、他克林(tacrine)(COGNEX⑧)和HUPRINEXTM。"D-天冬氨酸N-曱酯(NMDA)拮抗劑"在本文中意指阻斷或幹擾NMDA和/或調控過度穀氨酸根和/或穀氨酸4艮活化的藥劑或組合物。例示性的NMDA拮^t劑包^舌美金岡'J(memantine)(NAMENDA⑧)和neramexane。術語"免疫抑制劑，，在本文中用於輔助療法時指起抑制或掩蔽在此所治療受試者的免疫系統作用的物質。這將包括抑制細胞因子生成、下調或抑制自身抗原表達、或掩蔽MHC抗原的物質。此類藥劑的例子包括2-氨基-6-芳基-5-取代的嘧啶(見美國專利No.4,665,077);非類固醇抗炎藥(NSAID)，更昔洛韋(ganciclovir)、他克莫司(tacrolimus);糖皮質激素，諸如皮質醇(cortisol)或醛甾酮(aldosterone);抗炎藥，諸如環加氧酶抑制劑、5-脂加氧酶抑制劑或白三烯受體拮抗劑；嘌呤拮抗劑，諸如硫唑嘌呤(azathioprine)或黴酚酸嗎乙酯(mycophenolatemofetil,MMF);》克化劑，il"如環石粦醯胺(cyclophosphamide)、溴隱亭(bromocryptine)、達那口坐(danazol)、氨苯石風(dapsone)、戊二搭(它掩蔽MHC抗原，如美國專利No.4,120,649中所記載的)；MHC抗原和MHC片段的抗獨特型抗體；環孢黴素；6-巰基噪呤；類固醇，諸如皮質類固醇或糖皮質類固醇或糖皮質激素類似物，例如潑尼松(prednisone)、曱潑尼龍(methylprednisolone)包括SOLU-MEDROL⑧甲潑尼龍琥詢酸鈉、和地塞米松(dexamethasone);二氫葉酸還原酶承卩製劑，il"如曱氨蟲泉p令(methotrexate)(口月良或皮下)；抗痴藥，》者如氯壹(chloroquine)和幾氯會(hydroxycloroquine);柳氮磺吡啶(sulfasalazine);來氟米特(leflunomide);細胞因子或細胞因子受體抗體或拮抗劑，包括抗幹擾素-a、-P或-y抗體，抗腫瘤壞死因子(TNF)-a抗體TNF-a免疫粘附素(依那西普(etanercept))，抗TNF-(3抗體，抗白介素-2(IL-2)抗體和抗IL-2受體抗體，抗LFA-l抗體包括抗CDlla和抗CD18抗體，抗L3T4抗體，異源抗淋巴細胞球蛋白，泛(pan)T抗體，優選抗CD3或抗CD4/CD4a抗體；包含LFA-3結合域的可溶性肽(WO90/08187,公開於90年7月26日)；鏈激酶；轉化生長因子-卩(TGF-卩)；鏈道酶；來自宿主的RNA或DNA;FK506;RS-61443;苯丁酸氮芥(chlorambucil);脫氧精胍菌素(deoxyspergualin);雷帕黴素(rapamycin);T細胞受體(Cohen"a/.，美國專利No.5,114,721);T細胞受體片段(Offnerea/.,&/e"ce251:430-432(1991);WO90/11294;Ianeway,7Va/^e，341:482(1989);WO91/01133);BAFF拮抗劑，諸如BAFF或BR3抗體或免疫粘附素和zTNF4拮抗齊'J(綜述參見MackayandMackay，7>e"A/m附w"o/,23:113-5(2002);還可參見下文定義)；幹擾T輔助細胞信號的生物製劑，諸如抗CD40受體或抗CD40配體(CD154),包括CD40-CD40配體的阻斷性抗體(例^口Duriea/.,Sc/ewce261:1328-30(1993);Mohanda/"//mwwwo/.154:1470-80(1995))和CTLA4-Ig(Finck^a/"<SWe"ce265:1225-7(1994》；及T細胞受體抗體(EP340,109)，諸如T10B9。術語"細胞毒劑"在用於本文時指抑制或阻止細胞功能和/或引起細胞破壞的物質。該術語意圖包括放射性同位素(例如At211、I131、I125、Y90、Re'86、Re188、Sm153、Bi212、P"和Lu的放射性同位素)、化療劑、和毒素諸如小分子毒素或者細菌、真菌、植物或動物起源的酶活毒素或其片段。"化療劑，，指可用於治療癌症的化學化合物。化療劑的例子包括烷化劑類(alkylatingagents)，i者長口塞^齊;泉(thiotepa)禾口;不石粦醯胺(cyclophosphamide)(CYTOXAN);》黃酸烷基酯類(alkylsulfonates),諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和p底泊舒凡(piposulfan);氮丙p定類(aziridines)，i者iD苯佐替派(benzodepa)、卡波醒(carboquone)、美妥替派(meturedepa)禾口烏瑞替派(uredepa);乙撐亞胺類(ethylenimines)和曱基蜜胺類(methylamelamines)，包括六曱蜜胺(altretamine)、三乙撐蜜胺(triethylenemelamine)、三乙撐石粦醯胺(triethylenephosphoramide)、三乙撐石危^f戈》舞醯胺(triethylenethiophosphoramide)和三羥曱蜜胺(trimethylolomelamine);番篇衝支內酯類(acetogenins)(尤其是布拉他辛(bullatacin)和布拉他辛酮(bullatacinone));S-9-四氫大麻酚(tetrahydrocannabinol)(屈大麻酚(dronabinol),MARINOL);(3隱4立帕酉昆(lapachone);4i帕醇(lapachol);^火水仙素類(colchicines);白樺月旨酸(betulinicacid);喜衝對石威(camptothecin)(包4舌合成類4以物4乇泊替康(topotecan)(HYCAMTIN)、CPT-ll(伊立替康(irinotecan)，CAMPTOSAR)、乙醯喜樹鹼、東莨菪亭(scopoletin)和9-氨基喜樹鹼)；苔蘚抑素(bryostatin);callystatin;CC-1065(包括其阿多來新(adozelesin)、卡折來新(carzelesin)和比折來新(bizelesin)合成類似物)；鬼臼毒素(podophyllotoxin);鬼臼酸(podophyllinicacid);替尼泊苦(teniposide);隱-藻素類(cryptophycins)(鬥爭另ll是隱藻素1和隱藻素8);多拉司他汀(dolastatin);duocarmycin(包括合成類似物，KW-2189和CB1-TM1);艾榴塞洛素(eleutherobin);pancratistatin;sarcodictyin;海糹帛抑素(spongistatin);氮芥類(nitrogenmustards),i者如苯丁酉臾氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、月旦石粦醯胺(cholophosphamide)、站參莫司汀(estramustine)、異環石粦醯胺(ifosfamide)、雙氯乙基曱胺(mechlorethamine)、鹽酸氧氮芥(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法侖(melphalan)、新氮芥(novembichin)、苯芥月旦甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲石舞胺(trofosfamide)、尿嘧口定氮芥(uracilmustard);亞硝'脲類(nitrosoureas),丁者如卡莫司汀(carmustine)、氯脲菌素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimustine);抗生素類，諸如烯二炔類抗生素(enediyne)(例如加利車黴素(calicheamicin)，尤其是加利車黴素YlI和加利車黴素coIl(參見例如Agnew，CTzem.￡d33:183-186(1994));蒽環類抗生素(dynemicin)，包括dynemicinA;埃斯波黴素(esperamicin);以及新制癌素(neocarzinostatin)發色團和相關色蛋白烯二炔類抗生素髮色團)、阿克拉黴素(aclacinomycin)、》丈線菌素(actinomycin)、氨茴黴素(anthramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博來黴素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、carabicin、洋紅黴素(carminomycin)、嗜癌黴素(carzinophilin)、色黴素(chromomycin)、放線菌素D(dactinomycin)、柔紅黴素(daunorubicin)、地託比星(detorubicin)、6-二氮-5-氧-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)(包括ADRIAMYCIN⑧、嗎啉代多柔比星、氰基嗎啉代多柔比星、2-吡咯代多柔比星、鹽酸多柔比星脂質體注射劑(DOXIL⑧)和脫氧多柔比星)、表柔比星(epirubicin)、依索比星(esorubicin)、^尹達比星(idarubicin)、麻西羅黴素(marcellomycin)、絲裂黴素類(mitomycins)諸如絲裂黴素C、黴酚酸(mycophenolicacid)、諾拉黴素(nogalamycin)、揪攬黴素(olivomycin)、培洛黴素(peplomycin)、potfiromycin、嘌吟黴素(puromycin)、三鐵P可黴素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、4連黑菌素(streptonigrin)、4連佐星(streptozocin)、殺結牙亥菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、淨司4也丁(zinostatin)、佐柔比星(zorubicin);抗4戈i射物類，諸如甲氨蟲萊p令(methotrexate)、吉西他濱(gemcitabine)(GEMZAR⑧)、替加氟(tegaflir)(UFTORAL)、卡培他濱(capecitabine)(XELODA)、埃坡黴素(epothilone)和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物，諸如二曱葉酸(denopterin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、蝶羅呤(pteropterin)、三曱曲沙(trimetrexate);噪"令類似物，i者如氟達4立濱(fludarabine)、6-巰基噤呤(mercaptopurine)、硫咪噤呤(thiamiprine)、石克鳥噤呤(thioguanine);嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-氮尿芬(azauridine)、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿香(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氟尿苦(floxuridine);抗腎上類，)者如氨魯米特(aminoglutethimide)、米託坦(mitotane)、曲;各司坦(trilostane);葉ir復補充劑，i者如亞葉酸(folinicacid);醋葡醛內酯(aceglatone);醛磷醯胺糖苷(aldophosphamideglycoside);氨基乙醯丙酸(aminolevulinicacid);恩尿嘧卩定(eniluracil);安吖卩定(amsacrine);bestrabucil;t匕生群(bisantrene);依達曲；少(edatraxate);i也石粦醯胺(defosfamide);土也美可辛(demecolcine);i也口丫酉昆(diaziquone);elfornithine;依矛J醋4姿(elliptiniumacetate);依託格魯(etoglucid);硝酸4家；羥脲(hydroxyurea);香菇多糖(lentinan);氯尼達明(lonidamine);美登木素生物石威類(maytansinoids),諸如美登素(maytansine)和安絲菌素(ansamitocin);米^乇脈月宗(mitoguazone);米4乇蒽酉昆(mitoxantrone);莫旅達醇(mopidamol);二胺硝吖卩定(nitracrine);噴司4也丁(pentostatin);蛋氨氮芥(phenamet);p比柔比星(pirarubicin);洛索蒽醌(losoxantrone);2-乙基醯肼(ethylhydrazide);丙卡巴肼(procarbazine);PSK多糖複合物(JHSNaturalProducts,Eugene,OR);雷佐生(razoxane);根黴素(rhizoxin);西佐"南(sizofiran);戈累3走4者(spirogermanium);糹田交鏈孑包菌酉同酸(tenuazonicacid);三亞胺醌(triaziquone);2，2'，2"-三氯三乙胺；單端孑包菌素類(trichothecenes)(尤其是T-2毒素、疾孑包菌素(verrucarin)A、杆孢菌素(roridin)A和蛇行菌素(anguidin));烏拉坦(urethan);長春地辛(vindesine)(ELDISINE,FILDESIN);達卡巴口秦(dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine);二溴甘露醇(mitobronitol);二溴衛矛醇(mitolactol);口底泊溴烷(pipobroman);gacytosine;阿糖胞苷(arabinoside)("Ara-C");塞替派(thiotepa);類紫杉醇類(taxoids)，例如帕利他塞(paclitaxel)(TAXOL)、帕利他塞的清蛋白改造納米顆粒劑型(ABRAXANETM)和多西他塞(doxetaxel)(TAXOTERE));笨丁酸氮芥(chlorambucil);6-石克鳥噪呤(thioguanine);巰基嘌呤(mercaptopurine);曱氨蟲菜p令(methotrexate);粕類似物，il"如順鈿(cisplatin)和卡柏(carboplatin);長春石威(vinblastine)(VELBAN);柏(platinum);依託泊芬(etoposide)(VP-16);異3不石岸醜胺(ifosfamide);米才乇蒽、酉昆(mitoxantrone);長春#斤石威(vincristine)(ONCOVIN);奧沙利鉑(oxaliplatin);亞葉酸(leucovorin);長春瑞濱(vinorelbine)(NAVELBINE);能滅瘤(novantrone);依達曲沙(edatrexate);道諾黴素(daunomycin);氛基蝶呤(aminopterin);伊本膦酸鹽(ibandronate);拓樸異構酶抑制劑RFS2000;二氟曱基鳥氨酸(DMFO);類視黃酸類(retinoids),諸如視黃酸(retinoicacid);任何上述物質的藥劑學可接受的鹽、酸或書於生物；以及兩種或多種上述物質的組合，諸如CHOP(環^粦醯胺、多柔比星、長春新;威和潑尼松龍聯合療法的縮寫)和FOLFOX(奧沙利鉑(ELOXATINTM)聯合5-FU和亞葉酸的治療方案的縮寫)。該定義還包括起調節、降低、阻斷或抑制可促進癌生長的激素效果作用的抗激素劑，且常常是系統或全身治療的形式。它們自身可以是激素。例子包括抗雌激素類和選擇性雌激素受體調節劑類(SERM)，包括例如他莫昔芬(tamoxifen)(包括NOLVADEX⑧他莫昔芬)、雷洛昔芬(raloxifene)(EVISTA)、屈洛昔芬(droloxifene)、4-羥基他莫昔芬、曲沃昔芬(trioxifene)、那洛昔芬(keoxifene)、LY117018、奧那司酮(onapristone)和託瑞米芬(toremifene)(FARESTON);抗孕酮類；雌激素受體下調劑類(ERD);雌激素受體拮抗劑，諸如氟維司群(flilvestrant)(FASLODEX);起抑制或關閉卵巢作用的藥劑，例如促黃體生成激素釋放激素(LHRH)激動劑，諸如醋酸亮丙瑞林(leuprolideacetate)(LUPRON⑧和ELIGARD⑧)、醋酸戈舍瑞林(goserelinacetate)、醋酸布舍瑞林(buserelinacetate)和曲普瑞林(triptorelin);抗雄激素類，諸如氟他米特(flutamide)、尼魯米特(nilutamide)和比卡米特(bicalutamide);及抑制在腎上腺中調節雌激素生成的芳香酶的芳香酶抑制劑，諸如例如4(5)-咪唑、氨魯米特(aminoglutethimide)、醋酸曱地孕酮(megestrolacetate)(MEGASE)、依西美坦(exemestane)(AROMASIN)、福美坦(formestane)、法倔峻(fadrozole)、伏氯唑(vorozole)(RIVISOR)、來曲唑(letrozole)(FEMARA)和阿那曲唑(anastrozoe)(ARIMIDEX)。另外，化療劑的這種定義包括二膦酸鹽類(bisphosphonates),諸如氯膦酸鹽(clodronate)(例如BONEFOS⑧或OSTAC)、依替膦酸鈉(etidronate)(DIDROCAL)、NE-MO95、唑來膦酸/唑來膦酸鹽(zoledronicacid/zoledronate)(ZOMETA)、P可倫膦酸鹽(alendronate)(FOSAMAX)、帕米膦酸鹽(pamidronate)(AREDIA)、替魯膦酸鹽(tiludronate)(SKELID⑧)或利塞膦酸鹽(risedronate)(ACTONEL);以及曲沙他濱(troxacitabine)(1，3-二氧戊環核苷^^嘧，定類似物)；反義寡核苷酸，特別是那些抑制涉及粘著細胞增殖的信號傳導途經中的基因表達的反義寡核苷酸，諸如例如PKC-a、Raf、H-Ras和表皮生長因子受體(EGF-R);疫苗，諸如THERATOPE疫苗和基因療法疫苗，例如ALLOVECTIN疫苗、LEUVECTIN疫苗和VAXID疫苗；拓樸異構酶1抑制劑(例如LURTOTECAN);rmRH(例如ABARELIX⑧)；lapatinibditosylate(ErbB-2和EGFR雙重酪奠J吏激酶小分子抑制劑，也稱為GW572016);及任何上述物質的藥劑學可接受的鹽、酸或衍生物。術語"細胞因子，，是由一種細胞群釋放，作為細胞間介質作用於另一細胞的蛋白質的通稱。此類細胞因子的例子有淋巴因子、單核因子；白介素(IL)，諸如IL-1、IL-la、IL-2、IL畫3、IL-4、IL隱5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-ll、IL-12、IL-15,包括PROLEUKIN⑧rlL-2和人IL-4及人IL-4的突變體，諸如例如在IL-4中涉及結合IL-2Ry的區中包含突變的突變體，例如Arg21變成Glu殘基；腫瘤壞死因子，諸如TNF-a或TNF-p;及其它多肽因子，包括LIF和kit配體(KL)。在用於本文時，術語細胞因子包括來自天然來源或來自重組細胞培養物的蛋白質及天然序列細胞因子的生物學活性等效物，包括通過人工合成產生的小分子實體，及其藥劑學可接受的衍生物和鹽。術語"激素"指多肽激素，一般由具有導管的腺器官分泌。激素包括例如生長激素，諸如人生長激素、N-甲硫氨醯人生長激素和牛生長激素；曱狀旁腺素；曱狀腺素；胰島素；胰島素原；松馳素；雌二醇；激素代替療法；名1M敫素類，i者如卡魯睪酮(calusterone)、丙酸屈4也酮(dromostanolonepropionate)、環石克雄醇(epitiostanol)、美力,烷(mepitiostane)或睪內酉旨(testolactone);松馳素原；糖蛋白激素類，諸如促卵泡激素(FSH)、促曱狀腺激素(TSH)和促黃體激素(LH);促乳素；胎盤催乳激素；小鼠促性腺激素相關肽；抑制素；激活素；穆勒氏(Mullerian)抑制性物質；及血小板生成素。在用於本文時，術語激素包括來自天然來源或來自重組細胞培養物的蛋白質和天然序列激素的生物學活性等效物，包括通過人工合成產生的小分子實體，及其藥劑學可接受的衍生物和鹽。術語"生長因子"指促進生長的蛋白質，包括例如肝生長因子；成纖維細胞生長因子；血管內皮生長因子；神經生長因子，諸如NGF-(3;血小板衍生生長因子；轉化生長因子(TGF),諸如TGF-a和TGF+;胰島素樣生長因子-I和-II;促紅糹田月包生成素(EPO);骨誘導因子(osteoinductivefactor);幹擾素，諸如幹擾素-a、-P和-y;及集落刺激因子(CSF),諸如巨噬細胞CSF(M-CSF)、粒細胞-巨噬細胞CSF(GM-CSF)和粒細胞CSF(G-CSF)。在用於本文時，術語生長因子包括來自天然來源或來自重組細胞培養物的蛋白質和天然序列生長因子的生物學活性等效物，包括通過人工合成產生的小分子實體，及其藥劑學可接受的衍生物和鹽。術語"整聯蛋白"指容許細胞結合和應答胞外基質且涉及多種細胞功能諸如傷口癒合、細胞分化、腫瘤細胞歸巢和凋亡的受體蛋白質。它們是涉及細胞-胞外基質和細胞-細胞相互作用的細胞粘附受體大家族的一部分。功能性整聯蛋白由非共價結合的兩個跨膜糖蛋白亞基組成，稱為oc和P。a亞基彼此都享有一定同源性，P亞基也是如此。受體總是包含一條cc鏈和一條P鏈。例子包括a6pi、a3pi、a7(31、LFA-l等。在用於本文時，術語"整聯蛋白，，包括來自天然來源或來自重組細胞培養物的蛋白質和天然序列整聯蛋白的生物學活性等效物，包括通過人工合成產生的小分子實體，及其藥劑學可接受的衍生物和鹽。為本發明目的，"腫瘤壞死因子a(TNF-a)"指包含如Pennica"a/.,Atow"312:721(1984)或AggarwalWa/"JSC260:2345(1985)中所記載的胺基酸序列的人TNF-a分子。"TNF-a抑制劑"在本文中指在一定程度上抑制TNF-a的生物學功能的藥劑，一般通過結合TNF-a並中和其活性。本文中具體設想的TNF抑制劑的例子有依那西普(etanercept)(ENBREL)、英夫利昔單抗(infliximab)(REMICADE⑧)和阿達木單抗(adalimumab)(HUMIRATM)。"緩解病情的抗風溼藥"或"DMARD"的例子包括羥氯喹(hydroxycloroquine)、柳氮石黃p比咬(sulfasalazine)、曱氨蟲萊p令(methotrexate)、來氟米特(leflunomide)、依那西普(etanercept)、英夫利昔單抗(infliximab)、碌^峻噤呤(azathioprine)、D-青黴胺、金鹽(goldsalt)(口服)、金鹽(肌肉內)、米i若環素(minocycline)、環孑包黴素(cyclosporine)包4舌環孑包黴素A和表面環孑包黴素、葡萄球菌蛋白A(GoodyearandSilverman,■/Med197(9):1125-39(2003))，包括其鹽和衍生物，等等。"非類固醇抗炎藥，，或"NSAID"的例子包括阿司匹林(aspirin)、乙醯水楊酸(acetylsalicylicacid)、布洛芬(ibuprofen)、萘普生(naproxen)、。引。呆美辛(indomethacin)、舒林酸(sulindac)、託美丁(tolmetin)、COX-2抑制劑諸如celecoxib(CELEBREX;4-(5-(4-曱基苯基)-3-(三氟甲基)-lH-吡唑-l-基)苯磺醯胺和valdecoxib(BEXTRA)、及美洛昔康(meloxicam)(MOBIC),包括其鹽和衍生物，等等。本文中"整聯蛋白拮抗劑或抗體"的例子包括LFA-1抗體，諸如可從Genentech購買的efalizumab(RAPTIVA),或a4整聯蛋白抗體，諸如可從Biogen購買的natalizumab(ANTEGREN),或二氮雜環苯丙氨酸書於生物(WO2003/89410)、苯丙氨酸衍生物(WO2003〃0709、WO2002/28830、WO2002A6329和WO2003/53926)、苯基丙酸衍生物(WO2003/10135)、烯胺書亍生物(WO2001/79173)、丙酸衍生物(WO2000/37444)、鏈烷酸衍生物(WO2000/32575)、取代苯基衍生物(美國專利No.6，677，339和6，348，463)、芳香胺衍生物(美國專利No.6,369,229)、ADAM解聯蛋白結構域多肽(US2002/0042368)、avJ33整聯蛋白的抗體(EP633945)、氮橋二環胺基酸書t生物(WO2002/02556)等。"皮質類固醇"指具有類固醇的一般化學結構，模擬或提升天然存在皮質類固醇的效果的數種合成的或天然存在的物質中的任一種。合成的皮質類固醇的例子包括潑尼松(prednisone)、潑尼松龍(prednisolone)(包括曱潑尼龍(methylprednisolone))、地塞米松(dexamethasone)、曲安西龍(triamcinolone)、氬化可的木〉(hydrocortisone)和倍他米+》(betamethasone)。本文中優選的皮質類固醇是潑尼松、曱潑尼龍、氬化可的松或地塞米松。"B細胞"是在骨髓內成熟的淋巴細胞，包括幼稚B細胞、記憶B細胞或效應B細胞(漿細胞)。本文中的B細胞可以是正常的或非惡性的B細胞。"B細胞表面標誌"或"B細胞表面抗原"在本文中指在B細胞表面上表達、可用結合它的拮抗劑或抗體靶向它的抗原。例示性的B細胞表面標誌包括CDIO、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD24、CD37、CD40、CD53、CD72、CD73、CD74、CDw75、CDw76、CD77、CDw78、CD79a、CD79b、CD80、CD81、CD82、CD83、CDw84、CD85和CD86白細胞表面標誌(描述參見77/eLewA:oc,j"餘ewFactoSoo/t,2ndEdition.1997，Barclaye/1"/.編,AcademicPress,HarcourtBrace&Co.,NewYork)。其它B糹田月包表面才示志包才舌RP105、FcRH2、B細胞CR2、CCR6、P2X5、HLA-DOB、CXCR5、FCER2、BR3、Btig、NAG14、SLGC16270、FcRHl、IRTA2、ATWD578、FcRH3、IRTA1、FcRH6、BCMA和239287。特別感興趣的B細胞表面標誌在B細胞上較之受試者的其它非B細胞組織優先表達，且可在前體B細胞和成熟B細胞二者上表達。"CD20"抗原或"CD20"是在超過90。/。來自外周血或淋巴樣器官的B細胞表面上發現的約35kDa非糖基化磷蛋白。CD20存在於正常B細胞以及惡性B細胞二者上，但在幹細胞上不表達。CD20在文獻中的其它名稱包括"B淋巴細胞限制抗原"和"Bp35"。CD20抗原記載於例如Clark"a/.，iVoc.7Vaf/.(m^)82:1766(1985)。"B細胞表面標誌拮抗劑，，指在結合B細胞上的B細胞表面標誌後破壞或消減受試者中的B細胞和/或幹擾一項或多項B細胞功能的分子，例如通過降低或阻止B細胞引發的體液應答。所述拮抗劑優選能夠消減用它治療的受試者中的B細胞(即降低循環中的B細胞水平)。這樣的消減可通過多種機制來實現，諸如抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)和/或補體依賴性細胞毒性(CDC)、抑制B細胞增殖和/或誘導B細胞死亡(例如通過凋亡)。本發明範圍內所包括的拮抗劑包括結合B細胞表面標誌諸如CD20的抗體、合成的或天然序列的肽、免疫粘附素、和小分子拮抗劑，任選偶聯或融合了細胞毒劑。優選的拮抗劑包括抗體。"CD20抗體拮抗劑"在本文中指在結合B細胞上的CD20後破壞或消減受試者中的B細胞和/或幹擾一項或多項B細胞功能的抗體，例如通過降低或阻止B細胞引發的體液應答。所述抗體拮抗劑優選能夠消減用它治療的受試者中的B細胞(即降低循環中的B細胞水平)。這樣的消減可通過多種機制來實現，諸如抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)和/或補體依賴性細胞毒性(CDC)、抑制B細胞增殖和/或誘導B細胞死亡(例如通過凋亡)。術語"抗體"在本文中以最廣義使用，明確覆蓋單克隆抗體、多克隆抗體、由至少兩種完整抗體形成的多特異性抗體(例如雙特異性抗體)、及抗體片段，只要它們展現出期望的生物學活性。"抗體片段"包含完整抗體的一部分，優選包含其抗原結合區。抗體片段的例子包括Fab、Fab'、F(ab'》和Fv片段；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子；及由抗體片段形成的多特異性抗體。"完整抗體"在本文中指包含兩個抗原結合區及Fc區的抗體。優選的是，完整抗體具有功能性Fc區。CD20抗體的例子包括"C2B8"，現在稱作"rituximab"(RITUXAN)(美國專利No.5J36，137);釔[90]標記的2B8鼠抗體，稱作"Y2B8，,或"IbritumomabTiuxetan，，(ZEVALIN),可從IDECPharmaceuticals公司購買(美國專利No.5,736,137;2B8於1993年6月22日保藏於ATCC,編號HB11388);鼠lgG2a"B1"，也稱作"Tositumomab"，任選用1311標記以產生"131I-Bl，，il"碘131tositumomab"抗體(BEXXARtm),可從Corixa購買(還可參見美國專利No.5,595,721);鼠單克隆抗體"1F5"(PressW69(2):584-591(1987))及其變體，包括"框架修補的"或人源化的1F5(WO2003/002607,Leung，S.;ATCC保藏物HB-96450);鼠2H7和嵌合2H7抗體(美國專利No.5，677，180);人源化2H7(WO2004/056312,Lowman"a/.及下文所列)；2F2(HuMax-CD20)，一種完全人的高親和力抗體，輩巴向B細胞細胞膜中的CD20分子(Genmab,Denmark;參見例如GlennieandvandeWinkel,Z>wgD/scove^y7b<ia_y8:503-510(2003);Cragga/"101:1045-1052(2003);WO2004/035607;US2004/0167319);WO2004/035607和US2004/0167319(Teeling"a/.)中所列出的人單克隆抗體；USMO4/0093621(Shitara"a/.)中所記載的Fc區結合有複雜N-糖苷連接的糖鏈的抗體；諸如HB20-3、HB20-4、HB20-25和MB20-11的結合CD20的單克隆抗體和抗原結合片段(WO2005/000901，Tedder"a/.);諸如AME系列抗體的CD20結合分子，例如WO2004/103404和US2005/0025764(Watkins&a/.,EliLilly/AppliedMolecularEvolution,AME)中所列出的AME33抗體；諸如US2005/0025764(Watkinsda/.)中所記載的CD20結合分子；A20抗體或其變體，諸如嵌合的或人源化的A20抗體(分別是cA20和hA20)(US2003/0219433,Immunomedics);CD20結合分子，包括表位消減的Leu-16、1H4或2B8，任選偶聯有IL-2，如US2005/0069545A1和WO2005/16969(Carrda/.)中的；結合CD22和CD20的雙特異性抗體，例如hLL2xhA20(WO2005/14618,Changda/.);單克隆抗體L27、G28-2、93-lB3、B-C1或NU-B2，可從國際白細胞分類研究組(InternationalLeukocyteTypingWorkshop)獲《尋(Valentineefa/.,In:Z^"A:oqyfe7V//"gMcMichael糹扁，p.440，OxfordUniversityPress(1987);1H4(Haisma"a/"腸od92:184(1998》。本文中優選的CD20抗體是人源化的、嵌合的或人的CD20抗體，更優選rituximab、人源化的2H7、2F2(Hu-Max-CD20)人CD20抗體(Genmab)和人源4匕的A20^元體(Immunomedics)。術語"rituximab"或"RITUXAN"在本文中指針對CD20抗原的遺傳工程改造的嵌合鼠/人單克隆抗體，在美國專利No.5，736,137中稱作"C2B8",包括其保持結合CD20能力的片段。純粹為了本發明的目的且除非另有說明，"人源化2H7"抗體指鼠2H7抗體的人源化變體，其中所述抗體在體內有效降低循環中的B細胞。在一個實施方案中，人源化2H7抗體包含一種、兩種、三種、四種、五種或六種以下CDR^列CDRL1序列RASSSVSYXH，其中X是M或L(SEQIDNO.21)，例如SEQIDN0:4(圖1A)、CDRL2序列，如SEQIDNO:5所示的(圖1A)、CDRL3序列QQWXFNPPT,其中X是S或A(SEQIDNO,22)，例如SEQIDNO:6(圖lA)、CDRHl序列，如SEQIDNO:10所示的(圖IB)、CDRH2序列AIYPGNGXTSYNQKFKG，其中X是D或A(SEQIDNO.23)，例如SEQIDNO:11(圖IB)及CDRH3序列VVYYSXXYWYFDV,其中第6位X是N、A、Y、W或D且第7位X是S或R(SEQIDNO.24)，例如SEQIDNO:12(圖IB)。上述CDR序列一般存在於人輕鏈和重鏈可變區框架序列內，諸如基本上為人輕鏈K亞組I(VLKl)的人共有FR殘基和基本上為人重鏈亞組ni(VhIII)的人共有FR殘基。還可參見WO2004/056312(Lowmand"/.)。可以將重鏈可變區連接人IgG鏈恆定區，其中該區可以是例如IgGl或IgG3，包括天然序列的和變異的恆定區。在一個優選的實施方案中，此類抗體包含SEQIDNO:8的重《連可變域序列(vl6,如圖1B所示)，任選還包含SEQIDNO:2的輕鏈可變域序列(vl6，如圖6A所示)，其任選包含重鏈可變域中第56、100和/或100a位處的一處或多處胺基酸替代，例如D56A、N100A或N100Y、和/或S100aR和輕鏈可變域中第32和/或92位的一處或多處胺基酸替代，例如M32L和/或S92A。優選的是，所述抗體是完整抗體，其包含SEQIDNO.13或15的輕鏈胺基酸序列及SEQIDNO.14、16、17或20的重鏈胺基酸序列。4尤選的人源4匕2H7抗體是ocrelizumab(Genentech)。本文抗體還可在Fc區中包含至少一處提高ADCC活性的胺基酸替代，諸如第298、333和334位處的胺基酸替代，優選S298A、E333A和K334A，使用重糹連殘基的EU編號。還可參見美國專利No.6,737，056B1,Presta。任何這些抗體可在Fc區中包含至少一處改進FcRn結合或血清半衰期的替代，例如在重鏈第434位處的替代，諸如N434W。還可參見美國專利No.6,737,056Bl，Presta。任何這些抗體還可在Fc區中包含至少一處提高CDC活性的胺基酸替代，例如在第326位處包含至少一處替代，優選K326A或K326W。還可參見美國專利No.6，528，624Bl，Idusogie"a/.。有些優選的人源化2H7變體是那些包含SEQIDNO:2的輕鏈可變域及SEQIDNO:8的重鏈可變域的抗體，包括那些在Fc區(如果有的話)中具有或沒有替代的抗體，和那些包含在SEQIDNO:8中具有改變N100A;或者D56A及N100A;或者D56A、N100Y及S100aR的重鏈可變域及在SEQIDNO:2中具有改變M32L;或者S92A;或者M32L及S92A的輕鏈可變域的抗體。2H7.vl6重鏈可變區中的M34已經鑑定為抗體穩定性的潛在來源，且是替代的另一個潛在候選位置。在本發明的一些各種優選實施方案的總結中，基於2H7.vl6的變體的可變區包含vl6的胺基酸序列，除了表1所示氨基S交替代的位置。除非另有說明，2H7變體將具有與vl6相同的輕鏈。表l:例示性的人源化2H7抗體變體tableseeoriginaldocumentpage29一種優選的人源化2H7包含2H7.vl6輕鏈可變域序列KVEIKR(SEQIDNO:2);及2H7.vl6重鏈可變域序列:RVVYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:8)。若人源化2H7.vl6抗體是完整抗體，則它可包含輕鏈胺基酸序歹'J:SPVTKSF皿GEC(SEQIDNO:13);及重鏈胺基酸序列SEQIDNO.14或:SLSLSPG(SEQIDNO:17)。另一種優選的人源化2H7抗體包含2H7.v511輕鏈可變域序列:VEIKR(SEQIDNO:18);及2H7.v511重《連可變i或序列VVYYSYRYWYFDVWGQGTLVTVSS(SEQIDNO:19)。若人源化2H7.v51l抗體是完整抗體，則它可包含輕鏈胺基酸序列:PVTKSFNRGEC(SEQIDNO:15);及重鏈胺基酸序列SEQIDNO.16或:KTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAL麗HYTQKSLSLSPG(SEQIDNO:20)。"生長抑制性，，抗體指那些阻止或降低表達抗體所結合的抗原的細胞增殖的抗體。例如，抗體可在體外和/或在體內阻止或降低B細胞增殖。"誘導凋亡"的抗體指根據標準凋亡測定法的測定，誘導程序性細胞死亡的抗體，所述測定法諸如膜聯蛋白V結合、DNA斷裂、細胞收縮、內質網膨脹、細胞破裂、和/或膜嚢(稱作凋亡小體)形成。"天然抗體，，指通常由兩條相同的輕(L)鏈和兩條相同的重(H)鏈構成的約150,000道爾頓的異四聚體糖蛋白。每條輕鏈通過一個共價二硫4建與重鏈連接，而二硫鍵的數目在不同免疫球蛋白同種型的重鏈間有變化。每條重鏈和輕鏈還具有間隔規律的鏈內二硫鍵。每條重鏈在一端具有一個可變域(VH)，接著是多個恆定域。每條輕鏈在一端具有一個可變域(VO，而另一端是一個恆定域。輕鏈的恆定域與重鏈的第一恆定域排列在一起，而輕鏈的可變域與重鏈的可變域排列在一起。認為特定的胺基酸殘基在輕鏈與重鏈可變域之間形成界面。術語"可變的"指可變域中的某些部分在抗體序列間差異廣泛且用於每種特定抗體對其特定抗原的結合和特異性的實情。然而，變異性並非均勻分布於抗體的整個可變域。它集中於輕鏈和重鏈可變域中稱作高變區的三個區段。可變域中更加高度保守的部分稱作框架區(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變域各自包含四個FR,它們大多採取P-摺疊片構象，通過形成環狀連接且在有些情況中形成(3-摺疊片結構一部分的三個高變區連接。每條鏈中的高變區通過FR非常接近的保持在一起，並與另一條鏈的高變區一起促成抗體的抗原結合^(立點的形成(參見Kabatefa/"5"e《wewceso/Prate/m1Tmmwwo/ogica//"terns1/;5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD.(1991))。恆定域不直接參與抗體與抗原的結合，但展現出多種效應器功能，諸如抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)中抗體的參與。用木瓜蛋白酶消化抗體產生兩個相同的抗原結合片段，稱為"Fab"片段，各自具有一個抗原結合位點，及剩餘的"Fc"片段，其名稱反映了它易於結晶的能力。胃蛋白酶處理產生一個F(ab')2片段，它具有兩個抗原結合位點且仍能夠交聯抗原。"Fv"是包含完整抗原識別和抗原結合位點的最小抗體片段。此區由緊密、非共價結合的一個重鏈可變域和一個輕鏈可變域的二聚體組成。正是在這種構造中，各可變域的三個高變區相互作用而在V『VL二聚體表面上確定了抗原結合位點。六個高變區共同賦予抗體以抗原結合特異性。然而，即使是單個可變域(或只包含對抗原特異的三個高變區的半個Fv)也具有識別和結合抗原的能力，只是親和力低於完整結合位點。Fab片段還包含輕鏈的恆定域和重鏈的第一恆定域(CHl)。Fab'片段與Fab片段的不同之處在於重鏈CHl結構域的羧基末端增加了少數殘基，包括來自抗體鉸鏈區的一個或多個半胱氨酸。Fab'-SH是本文中對其中恆定域半胱氨酸殘基攜帶至少一個游離硫醇基的Fab'的稱謂。F(ab')2抗體片段最初是作為在Fab'片段之間有鉸鏈半胱氨酸的成對Fab'片段生成的。還知道抗體片段的其它化學偶聯。根據其恆定域的胺基酸序列，來自任何脊推動物物種的抗體(免疫球蛋白)的"輕鏈"可歸入兩種截然不同的型中的一種，稱作卡巾自(K)和拉姆達(人)。根據其"重鏈"恆定域的胺基酸序列，(如果有的話)抗體可歸入不同的類。完整抗體有五大類IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中有些可進一步分為亞類(同種型)，例如IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。將與不同類的抗體對應的重鏈恆定域分別稱作a、s、s、y和P。不同類的免疫球蛋白的亞基結構和三維構造是眾所周知的。除非另有說明，本文中免疫球蛋白重鏈殘基的編號是如Kabatefa/.,iSegwewc&so//Vofe/rn1o/7mm麗o/og7'cfl//"femsf,5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991)中的EU索引的編號，明確收入本文作為參考。"如Kabat中的EU索引，，指人IgGlEU抗體的殘基編號。術語"Fc區，，在本文中用於定義免疫球蛋白重鏈的C-末端區，包括天然序列Fc區和變體Fc區。雖然免疫球蛋白重鏈Fc區的邊界可以變化，但是人IgG重鏈Fc區通常定義為自其Cys226或Pro230位置的胺基酸殘基至羧基末端的區段。Fc區的C-末端賴氨酸(殘基447，依照EU編號系統)可以消除，例如在生產或純化抗體的過程中，或者通過對編碼抗體重鏈的核酸進行重組工程。相應的，完整抗體組合物可包括消除了所有K447殘基的抗體群、沒有消除K447殘基的抗體群、或者混合了有和沒有K447殘基的抗體的抗體群。"功能性Fc區，，擁有天然序列Fc區的"效應器功能"。例示性的"效應器功能"包括Clq結合、補體依賴性細胞毒性、Fc受體結合、抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)、吞噬作用、細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)下調等。此類效應器功能一般要求Fc區與結合域(例如抗體可變域)聯合，而且可4吏用多種測定法來評估，例如本文中所SW.腦90:6444-6448(1993)。術語"單克隆抗體"在用於本文時指從一群基本上同質的抗體獲得的抗體，即構成群體的各個抗體相同和/或結合相同表位，除了生產單克隆抗體的過程中可能產生的可能變體外，此類變體通常以極小量存在。此類單克隆抗體典型的包括包含結合耙物的多肽序列的抗體，其中耙物結合多肽序列是通過包括從眾多多肽序列中選擇單一靶物結合多肽序列在內的過程得到的。例如，選擇過程可以是從眾多克隆諸如雜交瘤克隆、噬菌體克隆或重組DNA克隆的集合中選擇獨特克隆。應當理解，所選擇的靶物結合序列可進一步改變，例如為了提高對靶物的親和力、將靶物結合序列人源化、提高其在細胞培養物中的產量、降低其在體內的免疫原性、創建多特異性抗體等，而且包含改變後的耙物結合序列的抗體也是本發明的單克隆抗體。與典型的包含針對不同決定簇(表位)的不同抗體的多克隆抗體製備物不同，單克隆抗體製備物的每種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。在它們的特異性外，單克隆抗體製備物的優勢在於它們通常未受到其它免疫球蛋白的汙染。修飾語"單克隆"指明抗體從基本上同質的抗體群獲得的特徵，不應解釋為要求通過任何特定方法來生產抗體。例如，將依照本發明使用的單克隆抗體可通過多種技術來生成，包括例如雜交瘤法(例如Kohler&a/.,7V^ww256:495(1975);Harlowefa/"v4"/z'6o(i/esvvl丄o^orato^yMawwa/，ColdSpringHarborLaboratoryPress,2nded.1988;Hammerlinga/.，in:Mowoc/owa/v4w"》o血s710〃//^nVfomay,563-681,Elsevier,N.Y.,1981)、重組DNA法(參見例如美國專利No.4,816,567)、噬菌體展示技術(參見例如Clacksonda/.,A^we352:624-628(1991);MarksWa/.,/Mo/.222:581-597(1991);Sidhu"a/.,/Mo/.338(2):299-310(2004);Leea/.，■/Mo/.編.340(5):1073-1093(2004);Fellouse，Prac.艦加dSC.腦101(34):12467誦12472(2004);Leeda/,，//mm湖o/.Me//zo&284(1-2):119-132(2004))、及用於在具有部分或整個人免疫球蛋白基因座或編碼人免疫球蛋白序列的基因的動物中生成人或人樣抗體的技術(參見例如WO1998/24893;WO1996/34096;WO1996/33735;WO1991/10741;Jakobovitsda/.，屍賜.扁，Jcad,90:2551(1993);Jakobovitsa/.,A^wre362:255-258(1993);Bruggemann/"/mm柳a7:33(1993);美國專利No.5,545,806;5,569,825;5,591,669(都屬於GenPharm);5,545,807;WO1997/17852;美國專利No.5,545,807;5,545,806;5,569,825;5,625,126;5,633,425;5,661,016;Marks"a/"腸/rec/z"o/ogy10:779-783(1992);Lonbergd淑騰368:856-859(1994);Morrison,胸wre368:812-813(1994);Fishwildda/.，胸騰腸tec/z"o/ogy14:845-851(1996);Neuberger,TVa^/reB/otec/zwo/ogy14:826(1996);LonbergandHuszar,/"fer",/附mw"o/.13:65-93(1995))。單克隆抗體在本文中明確包括"嵌合"抗體(免疫球蛋白)，其中重鏈和/或輕鏈的一部分與衍生自特定物種或屬於特定抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，而鏈的剩餘部分與衍生自另一物種或屬於另一抗體類別或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，以及此類抗體的片段，只要它們展現出期望的生物學活性(美國專利No.4,816,567;Morrisona/.，屍rac.JVW/.Jcfld5W.OS^81:6851-6855(1984))。本文中感興趣的嵌合抗體包括包含衍生自非人靈長類(例如舊大陸猴類(OldWorldMonkey),諸如狒狒、恆河猴或獼猴)的可變域抗原結合序列和人恆定區序列的"靈長類化"抗體(美國專利No.5,693,780)。非人(例如鼠)抗體的"人源化"形式指最低限度包含衍生自非人免疫球蛋白的序列的嵌合抗體。在極大程度上，人源化抗體指人免疫球蛋白(受體抗體)中的高變區殘基用具有期望特異性、親和力和能力的非人物種(供體抗體)諸如小鼠、大鼠、兔或非人靈長類的高變區殘基替換的免疫球蛋白。在有些情況中，將人免疫球蛋白的框架區(FR)殘基用相應的非人殘基替換。此外，人源化抗體可包含在受體抗體或供體抗體中沒有找到的殘基。進行這些修飾是為了進一步改進抗體的性能。一般而言，人源化抗體將包含至少一個、通常兩個基本上整個如下的可變域，其中整個或基本上整個高變環對應於非人免疫球蛋白的高變環，且整個或基本上整個FR^人免疫球蛋白序列的FR，除了上文所述FR替代。人源化抗體任選還將包含至少部分免疫球蛋白恆定區，通常是人免疫球蛋白的恆定區。更多細節參見Jones^fl/.,A^wre321:522-525(1986);RiechmannWa/"Atowe332:323-329(1988);Presta，Cwr.編.2:593-596(1992)。術語"高變區"在用於本文時指抗體中負責抗原結合的胺基酸殘基。高變區包含來自"互補決定區"或"CDR"的胺基酸殘基(例如輕鏈可變域中的殘基24-34(Ll)、50-56(L2)和89-97(L3)及重鏈可變域中的殘基31-35(Hl)、50-65(H2)禾口95-l02(H3);Kabat,yo/7mmw"o/，'ca//wtereW，5thEd.PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD，(1991))和/或那些來自"高變環"的殘基(例如輕鏈可變域中的殘基26-32(Ll)、50-52(L2)和91-96(L3)及重鏈可變域中的殘基26-32(Hl)、53-55(H2)和96畫101(H3);ChothiaandLesk,J！Mo/.196:901-917(1987))。"框架區"或"FR"殘基指可變域中那些除此處定義的高變區殘基外的殘基。"棵抗體(棵露的抗體)"為本發明目的指未偶聯細胞毒性部分(moity)或it射性標記物的抗體。"分離的"抗體指已經鑑定且自其天然環境的一種成分分開和/或回收的抗體。其天然環境的汙染性成分指將會干擾該抗體的診斷或治療用途的物質，可包括酶、激素、和其它蛋白質性質或非蛋白質性質的溶質。在優選的實施方案中，將抗體純化至(l)根據Lowry法的測定，抗體重量超過95%,最末端或內部胺基酸序列的程度，或(3)根據還原性或非還原性條件下的SDS-PAGE及使用考馬斯藍或優選的銀染色，達到同質。既然抗體天然環境的至少一種成分不會存在，那麼分離的抗體包括重組細胞內的原位抗體。然而，分離的抗體通常將通過至少一個純化步驟來製備。"親和力成熟的"抗體指在抗體的一個或多個高變區中具有一處或多處改變、導致該抗體對抗原的親和力與沒有這些改變的親本抗體相比有所改進的抗體。優選的親和力成熟的抗體將具有納摩爾或甚至皮摩爾量級的對靶抗原的親和力。親和力成熟的抗體可通過本領域已知方法來生成。Marksefa/.,所o/Tec/zwo/ogy10:779-783(1992)記載了通過VH和VL結構域改組進行的親和力成熟。以下文獻記載了CDR和/或框架殘基的隨機誘變Barbas"，淑爿cfld5W.園91:3809-3813(1994);Schierda/"G麼169:147-155(1995);Yelton"a/"//附ww"o/.155:1994-2004(1995);Jackson&o/.，/mmww/.154(7):3310-9(1995);Hawkins"a/,，《/Mo/.B/o/.226:889-896(1992)。"抗體暴露"指接觸或暴露於在大約1到20天期間裡施用的一劑或多劑本文所述抗體。所述劑量可以一次性給予，或在該暴露期間內以固定的或無規律的間隔給予。正如本文詳述的，初次和稍後(例如第二次或第三次)的抗體暴露;f皮此在時間上隔開。"包裝插頁"用於指通常包括在治療用產品的商品包裝中的說明書，它們包含有關涉及此類治療用產品應用的適應徵、用法、劑量、施用、禁忌症、與該包裝產品聯合的其它治療用產品和/或警告等的信息。II.AD或痴呆的治療本發明提供了在患病的受試者中治療AD或痴呆的方法，包括對受試者施用有效量的結合B細胞表面標誌的拮抗劑(優選抗體)(優選CD20抗體)。本文中待治療的AD或痴呆包括輕度、中度、重度、輕度-中度、中度-重度、散發性、家族性、早發和晚發的AD或痴呆。依照一個例示性的劑量給藥方案，所述方法包括對AD或痴呆受試者施用有效量的棵CD20抗體，以提供約0.5至4克(優選約1.5至2.5克)的初次抗體暴露，隨後是約0.5至4克(優選約1.5至2.5克)的第二次抗體暴露，其中所述第二次抗體暴露是直到距初次抗體暴露約16至60周時才提供的。為本發明目的，第二次抗體暴露指在初次抗體暴露後下次用CD20抗體治療受試者，其中在初次和第二次暴露之間沒有居間的CD20抗體治療或暴露。初次和第二次或後續抗體暴露之間的間隔可以^v初次抗體暴露的第一劑或第二劑測起，但優選從初次抗體暴露的第一劑算起。在本文的優選實施方案中，抗體暴露間隔約24周或6個月；或者間隔約48周或12個月。在一個實施方案中，所述第二次抗體暴露是直至距初次暴露約20至30周時才提供的，任選後續約0.5至4克(優選約1.5至2.5克)的第三次抗體暴露，所述第三次暴露是直至距初次暴露約46至60周(優選約46至54周)時才施用的，然後，優選直至距初次暴露至少約70-75周才提供再次的抗體暴露。在一個替代的實施方案中，所述第二次暴露是直至距初次暴露約46至60周時才提供的，且後續抗體暴露，若有的話，是直至距先前的抗體暴露約46至60周時才提供的。可以作為單劑抗體(singledoseofantibody)或者作為分開的兩劑抗體(twoseparatedosesofantibody)(即包括第一劑和第二劑)給受試者提供本文中的任何一次或多次抗體暴露。每次抗體暴露所採用的具體劑數(無論是一劑或兩劑)取決於例如所治療AD的類型、所採用抗體的類型、是否採用第二藥物或採用哪種類型的第二藥物、及施用的方法和頻率。在施用分開的兩劑時，優選第二劑在距施用第一劑的時間約3-17天、更優選約6-16天、最優選約13-16天時施用。在施用分開的兩劑時，優選第一劑和第二劑抗體為約0.5-1.5克，更優選約0.75-1.3克。在一個實施方案中，給受試者提供至少約3次或至少約4次抗體暴露，例如約3-60次暴露，更特別的是約3-40次暴露，最特別的是約3-20次暴露。優選的是，此類暴露以每個約24周或6個月或者48周或12個月的間隔施用。在一個實施方案中，每次抗體暴露是作為單劑抗體提供的。在一個替代的實施方案中，每次抗體暴露是作為分開的兩劑抗體提供的。然而，不是每次抗體暴露都需要作為單劑或分開的兩劑提供的。在一個優選的實施方案中，所述方法包括施用範圍為約200mg到2000mg、優選約500mg到1500mg、最優選約750mg到1200mg的一劑或多劑。例如，可以施用1到4劑或只有1到2劑。依照此實施方案，可以在約l個月的期間內、優選在約2-3周的期間內、最優選約2周的期間內施用抗體。若施用超過l劑，則後續劑(例如第2劑或第3劑)優選在距施用前一劑約l-20天、更優選約6-16天、最優選約14-16天時施用。分開的劑優選在總共約l天-4周、更優選約l-20天的期間內(例如6-18天的期間內)施用。此類分開的每一劑抗體優選為約200mg到2000mg、優選約500mg到1500mg、最優選約750mg到1200mg。可以用拮抗劑或抗體來治療受試者，通過給予超過一次暴露或一組劑量，諸如至少約兩次拮抗劑或抗體暴露，例如約2-60次暴露，更特別的是約2-40次暴露，最特別的是約2-20次暴露。此類另外的暴露可以間歇施用，例如以上文所述時間間隔。優選的拮抗劑是抗體。在本文所列方法中，所述CD20抗體是棵抗體。優選的是，所述抗體是完整的棵抗體。本文中優選的CD20抗體是嵌合的、人源化的或人的CD20抗體，更優選rituximab、人源化2H7、2F2(HuMax-CD20)人CD20^t體(Genmab)、人源4匕A20^t體(Immunomedics)。仍更Y尤選rituximab或人源化2H7。在一個實施方案中，受試者先前從未用諸如免疫抑制劑等藥物處理以治療AD或痴呆和/或先前,人未用針對B細胞表面標誌的抗體治療過(例如先前從未用CD20抗體治療過)。優選的是，受試者未患有B細胞惡性腫瘤。在一個實施方案中，受試者在AD或痴呆外未患有自身免疫病。所述抗體以任何合適手段施用，包括腸胃外、表面、皮下、腹膜內、肺內、鼻內和/或損傷部位內施用。腸胃外輸注包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內和皮下施用。還設想了鞘內施用(參見例如美國專利申請US2002/0009444，Grillo-Lopez，A,關於CD20抗體的鞘內投遞)，以及腦間隙輸注和只又側趨實體注射(bilateralsterotacticinjection)。優選的是，通過靜月永內、皮下或鞘內，最優選靜脈內輸注進行劑量給藥。在一個實施方案中，所述CD20抗體是為了治療AD或痴呆而施用於受試者的唯一藥物。然而，CD20抗體一般將聯合一種或多種第二藥物。例如，可任選施用第二藥物，諸如膽i成酯酶抑制劑cholinesteraseinhibitor(包括^旦不限於加蘭他敏(galantamine)(REMINYL)、利伐斯的明(rivastigmine)(EXELON)包括利伐斯的明透皮貼(rivastigminetransdermalpatch)、多奈咪齊(donepezil)(ARICEPT)、他克林(tacrine)(COGNEX⑧)和HUPRINEX;D-天冬氨酸N-甲酯(N-methylD-aspartate)(NMDA)拮抗劑(例如美金剛(memantine)(NAMENDA⑧)或neramexane);^1/f半卩遺病毒才殳遞NGF(adeno-associatedvirusdeliveryofNGF)(例如CERE-110);(3-阻斷劑(beta-blocker);安定藥(antipsychotic);乙醯月旦減前體(acetylcholineprecursor);煙減(nicotinic)或毒蕈鹼(muscarinic)激動劑(例如XANOMELINE貼)；抗(3-澱粉狀蛋白抗體(anti-beta-amyloidantibody);抗NGF抗體，t者如RA624;疫苗，例如人澱4分狀蛋白疫苗；阻斷酶(3或Y-分泌酶(涉及澱粉狀蛋白的形成)活性的藥劑；抗澱粉狀蛋白療法；血清素(serotonin);去曱腎上腺素(norepinephrine);促生長素抑制素(somatostatin);幹擾APP轉變成澱粉狀蛋白-(3(amyloid-beta)或老年斑及神經原纖維纏結(neurofibrillarytangles)形成的藥劑；(3-位點澱粉狀蛋白前體蛋白士刀割酶(beta-siteamyloid-precursor-proteincleavingenzyme)、P-分泌酶(beta-secretase)(BACE)拮抗劑；BASE1拮抗劑；BASE2拮抗劑；y-分泌酶拮抗劑；早老素(presenilin)-l(PSEN-1)拮抗劑；早老素-2(PSEN-2)#抗劑；APO-E4拮抗劑；抗抑鬱藥(antidepressant);抗驚厥藥(anticonvulsant);血清素攝入抑制劑(serotoninreuptakeinhibitor);舍曲林(sertraline)(ZOLOFT);曲唑酮(trazodone)(DESYREL);雙丙戊酸鈉(divalproex)(DEPAKOTE);加巴噴丁(gabapentin)(NEURONIN);利培酮(risperidone)(RISPERDAL);奧氮平(olanzapine)(ZYPREXATM);會硫平(quetiapine)(SEROQUEL);硫利達嗪(thioridazine)(MELLARIL);降低膽固醇的藥物或他汀類(statin)(例如HMG-CoA還原酶或辛伐他汀(simvastatin));免疫調節劑；抗氧化劑，諸如維生素E(a-生育酚(alpha-tocopherol))、魚油(fishoil)或a-碌b辛酸(lipoicacid);胡蘿蔔素(carotene);尼古丁(nicotine);4艮杏才是取物(ginkgoextract);司來吉蘭(selegiline);甲磺醯雙氫麥角毒(ergoloidmesylate);雌激素；抗炎藥，包括非類固醇抗炎藥(NSAID),諸如阿司匹林(aspirin)、布洛芬(ibuprofen)、cox-2抑制劑、羅非考昔(rofecoxib)(VIOXX⑧)、萘普生(naproxen)(ALEVE)、塞來考昔(celecoxib)(CELEBRIX)或萘普生(naproxen);銀杏製品(ginkgobiloba);PPI-1019;石杉鹼(huperzine)A;維生素，諸如葉酸根(folate)(葉酸(folicacid))、B6、B12、維生素C、維生素E;硒(PREADVISETM);GABA(B)受體拮抗劑，諸如SGS742;NC-758(ALZHEMED);C-1073(MIFEPRISTONE1);FK962;薑黃(curcumin);ONO-2506PO;曱磺醯雷沙吉蘭(rasagilinemesylate);丙戊酸才艮(valproate);SR57746A(XALIPRODEN);NS2330;MPC-7869;幹擾素，諸如幹擾素a、蛋白水解p-澱粉狀蛋白(proteolyticbetaamyloid)輕鏈抗體片段；細胞毒劑(見上文定義)；化療劑(見上文定義)；免疫抑制劑(見上文定義)；TNF-a抑制劑；DMARD;整聯蛋白拮抗劑或抗體；皮質類固醇(corticosteroid);噤呤次黃噤呤衍生物(例如AIT-082)等。優選的是，所述第二藥物是膽鹼酯酶抑制劑(諸如加蘭他敏(galantamine)(REMINYL)、利伐斯的明(rivastigmine)(EXELON⑧)包括利伐斯的明透皮貼、和多奈哌齊(donepezil)(ARICEPT⑧))，尤其在AD或痴呆是輕度-中度時；或D-天冬氨酸N-甲酯(NMDA)拮抗劑(例如美金剛(memantine)(NAMENDA)),尤其在AD或痴呆是中度-重度時。第二藥物可以伴隨著CD20抗體的初次暴露和/或稍後暴露施用，此類聯合施用包括使用分開的配製劑或單一的藥用配製劑的共施用，及任一次序的序貫施用，其中優選有一段時間所有兩種(或多種)活性劑同時發揮其生物學活性。除對受試者施用抗體外，本申請設想了通過基因療法來施用抗體。表述施用"有效量，，的抗體涵蓋編碼抗體的核酸的此類施用。參見例如1996年3月14日公布的WO96/07321,它關注通過基因療法來生成胞內抗體。有兩種主要方法使核酸(任選包含在載體中)進入受試者的細胞，即體內v/w)和回體(exv/vo)。對於體內投遞，通常在需要抗體的部位將核酸直接注射到受試者體內。對於回體治療，取出受試者的細胞，將核酸導入這些分離的細胞，並將經過修飾的細胞或是直接施用於受試者，或是例如裝入多孔膜內並植入受試者體內(參見例如美國專利No.4,892,538和5,283,187)。有多種技術可用於將核酸導入可存活細胞。這些技術根據是將核酸轉移至體外培養細胞還是目的宿主的體內細胞而有所變化。適於在體外將核酸轉移到哺乳動物細胞中的技術包括使用脂質體、電穿孔、顯微注射、細胞融合、DEAE-右旋糖苷、磷酸4丐沉澱法等。常用於回體投遞基因的載體是逆轉錄病毒。目前優選的體內核酸轉移技術包括用病毒載體(諸如腺病毒、I型單純皰瘮病毒或腺伴隨病毒)和基於脂質的系統(可用於脂質介導的基因轉移的脂質有例如DOTMA、DOPE和DC-Chol)進行的轉染。在有些情況中，希望與靶向耙細胞的藥劑一起提供核酸源，所述藥劑諸如對細胞表面膜蛋白或靶細胞特異的抗體、靶細胞上受體的配體等。在採用脂質體時，與胞吞作用相關細胞表面膜蛋白結合的蛋白質可用於靶向和/或促進攝入，例如對特定細胞類型具有向性的衣殼蛋白或其片段、在循環中發生內在化的蛋白質的抗體、及靶向細胞內定位和延長細胞內半衰期的蛋白質。受體介導的胞吞技術記載於例々口Wuda/"S/o/.C/7em,262:4429-4432(1987);^Vagnerda/"Prac.7Va//.JcadSW.87:3410-3414(1990)。關於目前已知的基因標記和基因治療方案的綜述參見Andersonda/.，5We"ce256:808-813(1992)。還可參見WO93/25673及其引用的參考文獻。III.抗體的生產本發明的方法和製品優選使用或摻入結合B細胞表面標誌的抗體，尤其是結合CD20的抗體。因此，本文將描述用於生成此類抗體的方法。溶形式的標誌或其部分。或者/另外，在其細胞表面表達該標誌的細胞可用於生成或篩選抗體。可用於生成抗體的其它形式的B細胞表面標誌對本領域技術人員將是顯而易見的。下面的描述例示了用於生產依照本發明使用的抗體的方法。(i)多克隆抗體多克隆抗體優選通過在動物中多次皮下(sc)或腹膜內(ip)注射相關抗原和佐劑來生成。使用雙功能或衍生化試劑，例如馬來醯亞胺苯曱醯磺基琥珀醯亞胺酯(通過半胱氨酸殘基偶聯)、N-幾基琥珀醯亞胺(通過賴氨酸殘基)、戊二醛、琥珀酸酐、SOCl2、或R^NONR(其中R和Ri是不同的烴基)，將相關抗原與在待免疫物種中有免疫原性的蛋白質偶聯可能是有用的，例如匙孔蟲戚血藍蛋白、血清清蛋白、牛曱狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑。通過將例如100昭或5昭蛋白質或偶聯物(分別用於兔或小鼠)與3倍體積的弗氏完全佐劑混和並將該溶液皮內注射於多個部位，將動物針對抗原、免疫原性偶聯物或衍生物進行免疫。一個月後，通過多個部位的皮下注射，用弗氏完全佐劑中初始量l/5-l/10的肽或偶聯物對動物進行加強免疫。7-14天後，採集動物的血液，並測定血清的抗體滴度。對動物進行加強免疫，直到滴度達到平臺(plateau)。優選的是，將動物用相同抗原但與不同蛋白質和/或通過不同交聯劑偶聯得到的偶聯物進行加強免疫。偶聯物還可在重組細胞培養中作為蛋白質融合物來製備。同樣，適當使用凝聚劑諸如明礬來增強免疫應答。(ii)單克隆抗體單克隆抗體是由一群基本上同質的抗體獲得的，即構成群體的各個抗體相同和/或結合相同表位，除了在生產單克隆抗體的過程中產生的可能變體外，此類變體一般以極小量存在。由此，修飾語"單克隆"指明抗體的特徵，即不是分立的或多克隆的抗體的混合物。例如，單克隆抗體可使用最初由Kohler"a/.,A^mm256:495(1975)記載的雜交瘤方法來製備，或者可以通過重組DNA方法(美國專利No.4,816,567)來製備。在雜交瘤方法中，如上所述免疫小鼠或其它適宜的宿主動物，諸如倉鼠，以引發生成或能夠生成如下抗體的淋巴細胞，所述抗體將特異性結合用於免疫的蛋白質。或者，可以在體外免疫淋巴細胞。然後，使用合適的融合劑諸如聚乙二醇將淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合，以形成雜交瘤細胞(Goding,Mowoc/owa/J""'ZWwPrac/7'ce,pp.59-103，AcademicPress,1986)。將如此製備的雜交瘤細胞在合適的培養基中接種和培養，所述培養基優選含有抑制未融合的親本骨髓瘤細胞生長或存活的一種或多種物質。例如，若親本骨髓瘤細胞缺乏酶次黃。票呤鳥。票呤磷酸核糖轉移酶(HGPRT或HPRT)，則用於雜交瘤的培養基典型地將含有次黃噤呤、氨基蝶呤和胸苦(HAT培養基)，這些物質阻止HGPRT缺陷細胞生長。優選的骨髓瘤細胞是那些高效融合、支持選定抗體生成細胞穩定的高水平生成抗體、並對諸如HAT培養基的培養基^:感的。在這些細胞中，優選的骨髓瘤細胞系是鼠骨髓瘤系，諸如那些可從索爾克研究所細胞分配中心(SalkInstituteCellDistributionCenter,SanDiego,California,USA)獲4尋的MOPC-21和MPC-11小鼠腫瘤及可從美國典型培養物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection,Rockville,Maryland,USA)獲得的SP-2或X63-Ag8-653細胞衍生的。人骨髓瘤和小鼠-人異源骨髓瘤細胞系用於生成人單克隆抗體也已有記載(Kozbor,/T/Wtw"o/.133:3001(1984);BrodeurW/.，M9w0c/0w"/7V。(iw"/cw7fec/zm々Mes々Wc加'om1,pp.51-63,MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987)。可對雜交瘤細胞正在其中生長的培養液測定針對抗原的單克隆抗體的生成。優選的是，通過免疫沉澱或通過體外結合測定法，諸如放射免疫測定法(RIA)或酶聯免疫吸附測定法(ELISA),測定由雜交瘤細胞生成的單克隆抗體的結合特異性。單克隆抗體的結合親和力可通過例如Munsonda/.,S/oc/zew.107:220(1980)的Scatchard分析來測定。在鑑定得到生成具有期望特異性、親和力和/或活性的抗體的雜交瘤細胞後，所述克隆可通過有限稀釋方法進行亞克隆，並通過標準方法進行培養(Goding,M9woc/om/」w/77)0(i/es1../Vz7cz)/e/Va"/ce，pp.59-103,AcademicPress,1986)。適於這一目的的培養基包括例如D-MEM或RPMI-1640培養基。另夕卜，雜交瘤細胞可在動物中作為腹水瘤進行體內培養。可通過常規免疫球蛋白純化方法，諸如例如蛋白A-Sepharose、羥磷灰石層析、凝膠電泳、透析或親和層析，將亞克隆分泌的單克隆抗體與培養液、腹水或血清適當分開。編碼單克隆抗體的DNA易於^f吏用常M^方法分離和測序(例如通過^f吏用能夠特異性結合編碼鼠抗體重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸探針)。以雜交瘤細胞作為此類DNA的優選來源。一旦分離，可將DNA置於表達載體中，然後將該表達載體轉染到原本不生成免疫球蛋白蛋白質的宿主細胞中，諸如大腸桿菌細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞，以在重組宿主細胞中獲得單克隆抗體的合成。關於編碼抗體的DNA在細菌中的重組表達的綜述'l"生"i侖文包4舌Skerraa/.，Cmtt(9//m'owZwwwwo/.5:256-262(1993)和Pliickthim，J/wm/"o/.130:151-188(1992)。在另一個實施方案中，可從使用McCafferty"A^ww348:552-554(1990)所記載的技術構建的噬菌體抗體庫中分離抗體或抗體片段。Clacksona/"Atowre352:624-628(1991)和Marksefa/.,J!Mo/.S/o/.222:581-597(1991)分別記載了使用噬菌體文庫分離鼠和人抗體。後續出版物記載了通過鏈改組(Marks"所0/Tec/7"0/0gv10:779-783(1992))，以及組合感染和體內重組作為構建非常大的p藍菌體文庫的策略(Waterhouseda/.，TVwc.v4c/<*21:2265-2266(1993)),生成高親和力(nM範圍)的人抗體。如此，這些技術是用於分離單克隆抗體的傳統單克隆抗體雜交瘤技術的可行替代方法。還可以修飾DNA，例如通過替代即用人重鏈和輕鏈恆定域的編碼序列代替同源鼠序歹'K美國專利No.4,816,567;Morrison"a/.，戶rac.Ato/.爿cat/.5W.USA81:6851(1984)),或通過將非免疫球蛋白多肽的整個或部分編碼序列與免疫球蛋白編碼序列共價接合。典型的是，用此類非免疫球蛋白多肽替代抗體的恆定域，或者用它們替代抗體的一個抗原結合位點的可變域，以產生嵌合二價抗體，它包含對一種抗原具有特異性的一個抗原結合位點和對不同抗原具有特異性的另一個抗原結合位點。(iii)人源化抗體體具有一個或多個從非人來源引入的胺基酸殘基。這些非人胺基酸殘基常常稱作"輸入"殘基，它們典型的取自"輸入"可變域。人源化可基本上遵循Winter及其同事的方法進行(Jones"a/.,iVa~321:522-525(1986);Riechmannfl/"Atowe332:323-327(1988》Verhoeyen"/.,Sc/ewce239:1534-1536(1988))，通過用高變區序列替代相應的人抗體序列。因此，此類"人源化，，抗體是嵌合抗體(美國專利No.4,816,567)，其中基本上少於整個人可變域用來自非人物種的相應序列替代。在實踐中，人源化抗體典型的是其中一些高變區殘基和可能的一些FR殘基用來自嚙齒類抗體中類似位點的殘基替代的人抗體。用於構建人源化抗體的人可變域的選擇，包括輕鏈和重鏈二者，對於降低抗原性非常重要。依照所謂的"最適"(best-fit)方法，用嚙齒類抗體的可變域序列對已知的人可變域序列的整個文庫進行篩選。然後選擇與嚙齒類最接近的人序列作為人源化抗體的人框架區(FR)(Simsa/.，■//www"o/.151:2296(1993);ChothiaMo/.編.196:901(1987》。另一種方法使用同一框架可用於數種不同的人源化抗體(Cartera/.，戶rac.A^/.Jcadt/SJ89:4285(1992);Presta"a/"J!^wmwo/.151:2623(1993》。更為重要的是，抗體在人源化後保持對抗原的高親和力及其它有利的生物學特性。為了實現這一目標，依照一種優選的方法，通過使用親本和人源化序列的三維模型分析親本序列和各種概念性人源化產物的方法來製備人源化抗體。三維免疫球蛋白模型是公眾可獲得的，且為本領域技術人員所熟悉。可獲得圖解和顯示選定候選免疫^求蛋白序列的可能三維構象結構的電腦程式。檢查這些顯示圖像容許分析殘基在候選免疫球蛋白序列行使功能中的可能作用，即分析影響候選免疫球蛋白結合其抗原的能力的殘基。這樣，可從受體和輸入序列中選出FR殘基並進行組合，從而獲得期望的抗體特徵，諸如對靶抗原的親和力提高。一般而言，高變區殘基直接且最實質的涉及對抗原結合的影響。(iv)人抗體作為人源化的替代方法，可生成人抗體。例如，現在有可能生成在缺乏內源免疫球蛋白生成的情況下能夠在免疫後生成人抗體完整全集的轉基因動物(例如小鼠)。例如，已經記載了嵌合和種系突變小鼠中抗體重鏈連接區(Jh)基因的純合刪除導致內源抗體生成的完全抑制。在此類種系突變小鼠中轉移大量人種系免疫球蛋白基因將導致在抗原攻擊時生成人抗體。參見例^口Jakobovits"a/.,iVoc.7Vaf/.v4ccrd.5W.90:2551(1993);Jakobovitsefa/,，7Vfl/wre362:255-258(1993);Bruggermanna/"Ifecr/-/"7mww肌7:33(1993);及美國專利No.5,591,669、5，589,369和5，545,807。或者，噬菌體展示技術(McCaffertyefa/.，A^we348:552-553(1990))可用於在體外從來自未免疫供體的免疫球蛋白可變(V)域基因全集生成人抗體和抗體片段。依照這種技術，將抗體V結構域基因以符合讀碼框的方式克隆到絲狀噬菌體諸如M13或fd的主要或次要外殼蛋白基因中，並在噬菌體顆粒表面上展示為功能性抗體片段。因為絲狀噬菌體顆粒包含噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，以抗體的功能特性為基礎進行的選擇也導致編碼展示那些特性的抗體的基因的選擇。如此，噬菌體模擬B細胞的一些特性。噬菌體展示可以多種格式進行；有關綜述參見例如Johnson,KevinS.andChiswell,DavidJ.，a/〃e"/Op/m'ow/"5^wcfwra/Aofo^3:564-571(1993)。V基因區段的數種來源可用於噬菌體展示。Clackson"a/.，Atow^352:624-628(1991)從衍生自經免疫小鼠脾的小型V基因隨機組合文庫中分離得到大量不同的抗D惡唑酮抗體。可本質上遵循Marksda/.,JMo/.傷o/.222:581-597(1991)或Griffith"a/.，12:725-734(1993)所記載的技術，自未免疫人供體構建V基因全集和分離針對大量不同抗原(包括自身抗原)的抗體。還可參見美國專利No.5，565，332和5,573，905。如上所述，還可以由體外激活的B細胞來生成人抗體(參見美國專利No.5,567，610和5，229，275)。(v)抗體片段已經開發了用於生成抗體片段的多種技術。傳統上，通過蛋白水解消化完整抗體來衍生這些片段(參見例如Morimotoa/"Jowr"a/o/S/oc/zew/ca/5——/ca/Mef/zoA24:107-117(1992);Brennanefa/"5Wewce229:81(1985))。然而，現在可直接由重組宿主細胞生成這些片段。例如，可從上文討論的噬菌體抗體庫中分離抗體片段。或者，可直接從大腸桿菌回收Fab'-SH片段並化學偶聯以形成F(ab')2片段(Carterda/.，所o/Tec/z"o/ogy10:163-167(1992))。依照另一種方法，可直接從重組宿主細胞培養物分離F(ab')2片段。方案中，選擇的抗體是單鏈Fv片段(scFv)。參見WO93/16185;美國專利No.5,571,894;和美國專利No.5,587,458。抗體片段還可以是"線性抗體，，，例如如美國專利No.5,641，870中所記載的。此類線性抗體片段可以是單特異性的或雙特異性的。(vi)雙特異性抗體雙特異性抗體指具有對至少兩種不同表位的結合特異性的抗體。例示性的雙特異性抗體可結合B細胞表面標誌的兩種不同表位。其它此類抗體可以結合B細胞表面標誌並進一步結合第二種不同的B細胞表面標誌。或者，可將抗B細胞表面標誌結合臂與結合白細胞上觸發分子諸如T細胞受體分子(例如CD2或CD3)或IgG的Fc受體(FcyR)(諸如FcYRI(CD64)、FcyRII(CD32)和FcyRIII(CD16))的臂組合在一起，使得細胞防禦機制聚焦於B細胞。雙特異性抗體還可用於將細胞毒劑定位於B細胞。這些抗體具有B細胞表面標誌結合臂和結合細胞毒劑(例如肥皂草毒蛋白(saporin)、抗幹擾素-a、長春花生物鹼類(vincaalkaloid)、蓖麻毒蛋白(ricin)A鏈、曱氨蝶呤或放射性同位素半抗原)的臂。可將雙特異性抗體製備成全長抗體或抗體片段(例如F(ab')2雙特異性抗體)。用於構建雙特異性抗體的方法是本領域已知的。全長雙特異性抗體的傳統生成基於兩對免疫球蛋白重鏈-輕鏈的共表達，其中兩種鏈具有不同的特異性(Millstein"a/.,7Vcm^e305:537-539(1983))。由於免疫^求蛋白重鏈和輕4連的隨機分配，這些雜交瘤(四源雜交瘤(quadroma))生成10種不同抗體分子的潛在混合物，其中只有一種具有正確的雙特異性結構。通常通過親和層析Tmunecker"a/.，五MSO乂10:3655-3659(1991)中披露了類似的方法。依照一種不同的方法，將具有期望結合特異性(抗體-抗原結合位點)的抗體可變域與免疫球蛋白恆定域序列融合。融合優選使用包含至少部分鉸鏈、CH2和CH3區的免疫球蛋白重鏈恆定域。優選的是，在至少一種融合物中，重鏈第一恆定區(CHl)包含輕鏈結合所必需的位點。將編碼免疫球蛋白重鏈融合物和(如果需要)免疫球蛋白輕鏈的DNA插入分開的表達載體，並共轉染到合適的宿主生物體中。在用於構建的三種多肽鏈比例不等時提供最佳產量的實施方案中，這為調整三種多肽片段的相互比例提供了極大的靈活性。然而，在至少兩種多肽鏈以相同比率表達導致高產量時或在該比率沒有特別意義時，有可能將兩種或所有三種多肽鏈的編碼序列插入同一個表達載體。在該方法的一個優選實施方案中，雙特異性抗體由一個臂上具有第一結合特異性的雜合免疫球蛋白重鏈和另一個臂上的雜合免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(提供第二結合特異性)構成。由於免疫球蛋白輕鏈僅在半個雙特異性分子中的存在提供了分離的便利途徑，因此發現這種不對稱結構便於將期望的雙特異性複合物與不想要的免疫球蛋白鏈組合分開。該方法披露於WO94/04690。關於生成雙特異性抗體的進一步詳情參見例如Sureshda/.,謝/20&121:210(1986)。依照美國專利No.5,731，168中記載的另一種方法，可改造一對抗體分子之間的界面，以將從重組細胞培養物回收的異二聚體的百分比最大化。優選的界面包含至少部分抗體恆定域的CH3結構域。在該方法中，將第一抗體分子的界面的一個或多個小胺基酸側鏈用較大側鏈(例如酪氨酸或色氨酸)替換。通過將大胺基酸側鏈用較小胺基酸側鏈(例如丙氨酸或蘇氨酸)替換，腔"。這提供了較之其它不想要的終產物諸如同二聚體提高異二聚體產量的機制。雙特異性抗體包括交聯的或"異源偶聯的"抗體。例如，異源偶聯物中的一種抗體可與親合素偶聯，另一種抗體與生物素偶聯。例如，此類抗體建議用於將免疫系統細胞靶向不想要的細胞(美國專利No.4,676,980)，及用於治療HIV感染(WO91/00360、WO92/200373和EP03089)。可使用任何Y更利的交聯方法來製備異源偶聯抗體。合適的交聯劑是本領域眾所周知的，並且連同許多交聯技術一起披露於美國專利No.4,676,980。文獻中還記載了自抗體片段生成雙特異性抗體的技術。例如，可使用化學連接來製備雙特異性抗體。Brennan"a/.，229:81(1985)記載了通過蛋白水解切割完整抗體以生成F(ab')2片段的方法。將這些片段在存在二硫醇絡合劑亞砷酸鈉時還原，以穩定鄰近的二碌^醇並防止分子間二碌4定的形成。然後將產生的Fab，片段轉變為硫代硝基苯曱酸酯(TNB)衍生物。然後將Fab'-TNB衍生物之一通過巰基乙胺的還原重新恢復成Fab'-硫醇，並與等摩爾量的另一種Fab'-TNB衍生物混合，以形成雙特異性抗體。產生的雙特異性抗體可用作酶的選擇性固定化試劑。還已記載了直接從重組細胞培養物製備和分離雙特異性抗體片段的多種技術。例如，已使用亮氨酸拉鏈來生成雙特異性抗體。Kostelny"a/.,J//wm朋o/.148(5):1547-1553(1992)。將來自Fos和Jun蛋白的亮氨酸拉鏈肽通過基因融合與兩種不同抗體的Fab'部分連接。抗體同二聚體在鉸鏈區還原而形成單體，然後重新氧化而形成抗體異二聚體。這種方法也可用於生成抗體同二聚體。由Hollingere/a/.,Ato/.v4cadt7&490:6444-6448(1993)記載的"雙抗體"技術提供了構建雙特異性抗體片段的替代機制。該片段包含通過接頭相連的重鏈可變域(VH)和輕鏈可變域(vo，所述接頭太短使得同一條鏈上的兩個結構域之間不能配對。因此，迫使一個片段上的VH和V^吉構域與另一個片段上的互補VL和VH結構域配對，由此形成兩個抗原結合位點。還已報導了通過使用單鏈Fv(sFv)二聚體構建雙特異性抗體片段的另一種策略。參見Gruber//m附wwo/.152:5368(1994)。設想了具有超過兩個效價的抗體。例如，可製備三特異性抗體。Tutt"a/.，J/畫畫/.147:60(1991)。IV.抗體的其它修飾設想了抗體的胺基酸序列修飾。例如，可能希望改進抗體的結合親和力和/或其它生物學特性。通過將適宜的核苷酸變化引入抗體核酸或者通過肽合成來製備抗體的胺基酸序列變體。此類修飾包括例如抗體胺基酸序列內的殘基刪除和/或插入和/或替代。只要最終的構建物具有期望的特性，可進行刪除、插入和替代的任意組合以獲得最終的構建物。胺基酸變化還可改變抗體的翻譯後加工，諸如改變糖基化位點的數目或位置。可用於鑑定抗體中作為優選誘變位置的某些殘基或區域的一種方法稱作"丙氨酸掃描誘變，，，如CunninghamandWells，5We"ce244:1081-1085(1989)所記載的。這裡，鑑定了一個殘基或一組靶殘基(例如帶電荷的殘基，諸如精氨酸、天冬氨酸、組氨酸、賴氨酸和穀氨酸)，並用中性或帶負電荷的胺基酸(最優選丙氨酸或聚丙氨酸)替換，以影響胺基酸與抗原的相互作用。然後通過在或對替代位點引入更多或其它變體，推敲那些對替f^現出功能敏感性的胺基酸位置。如此，雖然引入胺基酸序列變異的位點是預先決定的，但是突變本身的性質不需要預先決定。例如，為了分析在給定位點處的突變的後果，在耙密碼子或區域進行丙氨酸掃描或隨機誘變，並根據期望的活性對所表達的抗體變體進行篩選。胺基酸序列插入包括氨基和/或羧基末端的融合，長度範圍從一個殘基至包含上百個或更多殘基的多肽，以及單個或多個胺基酸殘基的序列內插入。末端插入的例子包括具有N-末端曱硫氨醯殘基的抗體或與細胞毒性多肽融合的抗體。抗體分子的其它插入變體包括在抗體的N-或C-末端融合酶或提高抗體血清半衰期的多肽。另一類變體是胺基酸替代變體。這些變體在抗體分子中有至少一個胺基酸殘基用不同殘基替換。抗體中最感興趣進行替代誘變的位點包括高變區，但也設想了FR改變。保守替代在表1中顯示在表2中標題"優選替代，，下。如果此類替代導致生物學活性的改變，那麼可以引入表2中稱為"例示替代，，的更多實質性改變，或如下文中關於胺基酸種類的進一步描述，並篩選產物。表2tableseeoriginaldocumentpage50tableseeoriginaldocumentpage51著不同的替代來完成(a)替代區域的多肽主鏈的結構，例如作為摺疊片或螺旋構象，(b)靶位點處分子的電荷或疏水性，或(c)側鏈的體積。根據其側鏈特性的相似性，可將胺基酸如下分組(A.L.Lehninger,in:^oc/zew^^y,第2版，pp.73-75,WorthPublishers,NewYork,(1975)):(1)非才及性的Ala(A)、Val(V)、Leu(L)、lie(1)、Pro(P)、Phe(F)、Trp(W)、Met(M)(2)不帶電荷的、極性的Gly(G)、Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)(3)酸性的Asp(D)、Glu(E)(4)石威性的Lys(K)、Arg(R)、His(H)或者，基於共同的側鏈特性，可將天然存在殘基如下分組(1)疏水性的正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、lie;(2)中性、親水性的Cys、Ser、Thr、Asn、Gin;(3)酸性的Asp、Glu;(4)》威性的:His、Lys、Arg;(5)影響《連取向的殘基Gly、Pro;(6)芳香族的Trp、Tyr、Phe。非保守替代將需要用這些類別之一的一個成員替換另一個類別的。任何不涉及保持抗體正確構象的半胱氨酸殘基也可替代，一般用絲氨酸，以改進分子的氧化穩定性和防止異常交聯。相反，可向抗體中添加半胱氨酸鍵以改進其穩定性(特別是當抗體是抗體片段諸如Fv片段時)。特別優選的一類替代變體涉及替代親本抗體(例如人源化或人抗體)的一個或多個高變區殘基。通常，選擇用於進一步開發的所得變體相對於產生它們的親本抗體將具有改良的生物學特性。用於產生此類替代變體的一種便利方法是使用噬菌體展示的親和力成熟。簡單的說，將數個高變區位點(例如6-7個位點)突變，在每個位點產生所有可能的胺基酸替代。如此產生的抗體變體以單價形式展示在絲狀噬菌體顆粒上，作為與每個顆粒內包裝的M13基因III產物的融合物。然後如本文所公開的對噬菌體展示的變體篩選其生物學活性(例如結合親和力)。為了鑑定用於修飾的候選高變區位點，可進行丙氨酸掃描誘變以鑑定對抗原結合具有重要貢獻的高變區殘基。或者/另外，分析抗原-抗體複合物的晶體結構，以鑑定抗體與抗原之間的接觸點可能是有益的。此類接觸殘基及鄰近殘基是依照本文詳述的技術進行替代的候選位點。一旦產生此類變體，就如本文所述對該組變體進行篩選，可選擇抗體的另一類胺基酸變體改變了抗體的原始糖基化樣式。此類改變包括刪除在抗體中發現的一個或多個碳水化合物部分，和/或添加抗體中不存在的一個或多個糖基化位點。多肽的糖基化典型的或是N-連接的或是O-連接的。N-連接指碳水化合物部分附著於天冬醯胺殘基的側鏈。三肽序列天冬醯胺-X-絲氨酸和天冬醯胺-X-蘇氨酸(其中X是除脯氨酸外的任何胺基酸)是將碳水化合物部分酶促附著於天冬醯胺側鏈的識別序列。如此，多肽中這兩種三肽序列任一的存在產生了潛在的糖基化位點。O-連接的糖基化指將糖類N-乙醯半乳糖胺、半乳糖或木糖之一附著於羥基胺基酸，最常見的是絲氨酸或蘇氨酸，但也可使用5-羥脯氨酸或5-羥賴氨酸。向抗體中添加糖基化位點可通過改變胺基酸序列使其包含一個或多個上述三肽序列而便利的完成(用於N-連接的糖基化位點)。所述改變還可通過向原始抗體的序列中添加或替代一個或多個絲氨酸或蘇氨酸殘基來進行(用於O-連接的糖基化位點)。若抗體包含Fc區，則可改變附著其上的碳水化合物。例如，美國專利申請US2003/0157108Al(Presta,L.)中記載了有缺乏巖藻糖的成熟碳水化合物結構附著於抗體Fc區的抗體。還可參見US2004/0093621Al(KyowaHakkoKogyoCo"Ltd.),它關注CD20抗體組合物。WO03/011878(Jean-Mairet"a/.)和美國專利No.6,602,684(Umana"a/.)中提到了在附著於抗體Fc區的碳水化合物中有等分(bisecting)N-乙醯葡糖胺(GlcNAc)的抗體。WO97/30087(Patel"a/.)中報告了在附著於抗體Fc區的寡糖中有至少一個半乳糖殘基的抗體。關於有更改的碳水化合物附著於其Fc區的抗體還可參見WO98/58964(Raju,S.)和WO99/22764(Raju,S.)。編碼抗體胺基酸序列變體的核酸分子可通過本領域已知的多種方法來製備。這些方法包括但不限於從天然來源分離(在天然存在胺基酸序列變體介導的(或定點)誘變、PCR誘變和盒式誘變來製備。可能希望在效應器功能方面4'務飾本發明的抗體，例如增強抗體的抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)和/或補體依賴性細胞毒性(CDC)。這可通過在抗體Fc區中引入一處或多處胺基酸替代來實現。或者/另外，可在Fc區中引入半胱氨酸殘基，從而容許在該區中形成鏈間二硫鍵。如此產生的同二聚體抗體可具有改良的內在化能力和/或提高的補體介導的細胞殺傷和抗體依賴性細胞的細胞毒性(ADCC)。參見Caron"a/.，/~.MM176:1191-1195(1992)和Shopes，B.,/mmimo/.148:2918-2922(1992)。具有增強的抗腫瘤活性的同二聚體抗體還可使用如Wolff"Ca"cerAeseaw/z53:2560-2565(1993)中記載的異雙功能交聯劑來製備。或者，抗體可改造成具有雙重Fc區，由此可具有增強的補體溶胞和ADCC能力。參見Stevenson"爿""-C朋cwi>wgDeWg"3:219-230(1989)。WO00/42072(Presta，L.)記載了在存在人效應細胞時具有改良的ADCC功能的抗體，其中所述抗體在其Fc區中包含胺基酸替代。優選的是，具有改良的ADCC的抗體在Fc區的第298、333和/或334位包含替代。優選的是，改變的Fc區是在這些位置中的一個、兩個或三個位置包含替代或由這些位置中的一個、兩個或三個位置發生的替代組成的人IgGlFc區。WO99/51642、美國專利No.6，194，551Bl、美國專利No.6,242,195Bl、美國專利No.6,528,624Bl和美國專利No.6,538,124(Idusogie"fir/.)中記載了具有改變的C1q結合和/和補體依賴性細胞毒性(CDC)的抗體。所述抗體在其Fc區的第270、322、326、327、329、313、333和/或334位胺基酸中的一個或多個位置處包含胺基酸替代。為了延長抗體的血清半衰期，可將補救受體結合表位摻入抗體(尤其是抗體片段)，如例如美國專利No.5,739，277中所記載的。在用於本文時，術語"補救受體結合表位"指IgG分子(例如IgGi、IgG2、IgG3或IgGj的Fc區中負責延長IgG分子體內血清半衰期的表位。WO00/42072(Presta,L.)中也記載了在其Fc區中具有替代且具有延長的血清半衰期的抗體。還設想了具有三個或更多(優選四個)功能性抗原結合位點的工程化抗體(美國專利申請US2002/0004587Al,Millere/a/.)。V.藥用配製劑任選的藥劑學可接受的載體、賦形劑或穩定劑(iew/wgto"i屍/rarmacewf/ca/Sc/e"ce5,第16版，Osol，A.編(1980))混合，以凍幹配製劑或水溶液的形式製備供貯存。可接受的載體、賦形劑或穩定劑在所採用的劑量和濃度對接受者是無毒的，包括緩沖劑，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其它有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和曱硫氨酸；防腐劑(諸如氯化十八烷基二曱基苄基銨；氯化己烷雙胺；苯扎氯銨、苯索氯銨；酚、丁醇或苯曱醇；對羥基苯曱酸烷基酯，諸如對羥基苯曱酸曱酯或丙酯；鄰苯二酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和間曱酚)；低分子量(少於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清清蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮；胺基酸，諸如甘氨酸、穀氨醯胺、天冬醯胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA;糖類，諸如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨醇；成鹽反離子，諸如鈉；金屬複合物(例如Zn-蛋白質複合物)；和/或非離子表面活性劑，諸如TWEENTM、PLURONICStm或聚乙二醇(PEG)。例示性的抗CD20抗體配製劑記載於WO98/56418中。此出版物記載了一種液體多劑配製劑，包含40mg/mLrituximab,25mM乙酸鹽，150mM海藻糖，0.9%苯曱醇，0.02%聚山梨醇酯20pH5.0，最小保存期是在2-8。C保存兩年。另一種感興趣的抗CD20配製劑在9.0mg/mL氯化鈉，7.35mg/mL二水合檸檬酸鈉，0.7mg/mL聚山梨醇酯80,和注射用無菌水pH6.5中包含10mg/mLrituximab。適於皮下施用的凍幹配製劑記載於美國專利No.6,267,958(Andya^此類凍幹配製劑可以用合適的稀釋劑重建至高蛋白質濃度，重建的配製劑可皮下施用於本文中待治療的哺乳動物。還設想了結晶形式的抗體。參見例如US2002/0136719Al(ShenoyW"/.)。本文中的配製劑還可含有超過一種所治療具體適應症所必需的活性化合物，優選那些活性互補且彼此沒有不利影響的化合物。例如，可能希望進一步提供第二藥物，諸如上文治療部分II中所討論的。此類其它藥劑的類型和有效量取決於例如配製劑中存在的抗體的量、所治療AD或痴呆的類型、及受試者的臨床參數。這些一般是以與上文所述相同的劑量，以上文所述施用路徑而使用的，或是迄今所採用的劑量的大約1-99%。活性成分還可包載於例如通過凝聚技術或通過界面聚合製備的微膠嚢中(例如分別是鞋曱基纖維素或明膠微膠嚢和聚(曱基丙烯酸曱酯)微膠嚢)，在膠狀藥物投遞系統中(例如脂質體、清蛋白微球體、微乳劑、納米顆粒和納米"交嚢)，或在^且滴乳狀液中。此類#支術糹皮露於例如7e柳Vzgto"'5P/iarmacei^cfit/5We"cas，第16版,Osol,A.編(1980)。可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑的合適例子包括含有抗體的固體疏水性聚合物半透性基質，該基質是定型產品的形式，例如薄膜或微膠嚢。持續釋放基質的例子包括聚酯、水凝膠(例如聚(2-羥乙基-曱基丙烯酸酉旨)或聚(乙烯醇))、聚交酯(美國專利No.3，773，919)、L-穀氨酸與L-穀氨酸y乙酯的共聚物、不可降解的乙烯-乙酸乙烯共聚物、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物諸如LUPRONDEPOT(由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林構成的可注射微球體)及聚-D-(-)-3-羥基丁酸。儘管AD或痴呆中的血腦屏障在其通透性或運輸方面可能遭到破壞或改變，但是提高治療劑穿越的通透性和/或運輸的藥劑或方法可以與抗體一起配製或使用。例如，親脂性載體諸如丙卡巴肼(procarbazine)可用於使血腦屏障通透和/或將治療劑運載至腦。免疫脂質體、抗體導向的脂質體和生物分子親脂性複合物也可用作穿越血腦屏障的載體。這些優選包括脂肪酸，諸如co-3系列或此系列的脂質衍生物。別的親脂性分子包括但不限於其它脂肪酸、溶血磷脂、二醯基磷脂、二醯基甘油、膽固醇、類固醇包括那些攜帶18-46個碳原子的多不飽和烴基的。可以使用別的生物聚合物。這些包括但不限於聚(a)-胺基酸、人血清清蛋白或結合和連接至人清蛋白的藥劑、氨基右旋糖苷、和酪蛋白。優選的是，此類載體具有適於用作投遞系統的生物相容性和藥動學，參見例如美國專利No.5,716,614。可提高血腦屏障通透性的藥劑的另一個例子是運鐵蛋白受體抗體。運鐵蛋白受體在腦的毛細管內皮細胞上可檢測到。此類抗體的一些例子包括B3/25、OKT-9、OX-26、Tf6/14、L5.1、5E-9、T58/30和RI7217,參見美國專利No.5,182,107。另夕卜，可以通過滲透來破壞血腦屏障。用於體內施用的配製劑必須是無菌的。這可容易的通過使用無菌濾膜過濾來實現。VI.製品在本發明的另一個實施方案中，提供了包含可用於治療上文所述AD或痴呆的物質的製品。優選的是，所述製品包括(a)裝有包含B細胞表面抗原拮抗劑(例如CD20抗體)和藥劑學可接受載體或稀釋劑的組合物的容器；和(b)附有對AD或痴呆患者施用所述組合物的說明書的包裝插頁。所述製品包括容器和貼在所述容器上或與其相連的標籤或包裝插頁。合適的容器包括例如藥瓶、藥管、注射器等。所述容器可以用各種材料諸如玻璃或塑料製成。所述容器裝有有效治療AD或痴呆的組合物，可具有無菌存取口(例如所述容器可以是具有皮下注射針可刺穿的塞子的靜脈內溶液袋或藥管)。所述組合物中的至少一種活性劑是抗體。所述標籤或包裝插頁指明所述組合物用於在患病的受試者中治療AD或痴呆，及關於所提供的抗體和任何其它藥物的給藥量和間隔的具體指示。所述製品還可包括第二容器，其中裝有藥劑學可接受的稀釋緩衝液，諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏(Ringer)溶液和右旋糖溶液。所述製品還可包括商業和用戶立場上所需的其它物質，包括其它緩衝劑、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。任選的是，本文中的製品還包括第二容器，其中裝有抗體以外用於治療的藥劑，還包括關於用此類藥劑治療哺乳動物的說明書，例示性的這樣的第二藥物在上文治療部分II中已描述。下面的非限制性實施例例示了本發明的進一步細節。將說明書中所有引用的公開內容明確收入本文作為參考。實施例l:輕度-中度阿耳茨海默氏病的治療在本實施例中用CD20抗體治療輕度-中度AD患者。在此治療根據NINCDS/ADRDA標準(McKhannC"/.,"ClinicaldiagnosisofAlzheimer'sdisease:reportoftheNINCDS-ADRDAWorkGroupundertheauspicesofDepartmentofHealthandHumanServicesTaskForceonAlzheimer'sDisease",A^ewra/ogy34:939-944(1984))的判定患有阿耳茨海默氏病的50-80歲男性或女性受試者。根據微型心理狀態測驗(Mini-MentalStateExam,MMSE)的判定，這些受試者患有輕度-中度AD,例如MMSE得分在16到24的範圍內。優選的是，受試者在CD20抗體療法前接受AD的標準護理藥療(standard-of-caremedication)(即乙醯膽鹼酯酶抑制劑)達3個月。此外，受試者具有適度的視覺和聽覺敏度，從而能夠進行神經心理學測試。將可自健泰科公司(Genentech)購買的rituximab配製成9.0mg/mL氯化鈉，0.7mg/mL聚山梨醇酯80，7.35mg/mL脫水檸檬酸鈉，和無菌注射用水(pH6.5)中的無菌產品供IV施用。或者，施用包含完整人源化2H7.vl6或完整人源化2H7.v511的配製劑。第一個療程的組成如下在第l天和第15天各施用l劑lg靜脈內(IV)CD20抗體。受試者在每次輸注開始前30-60分鐘口服醋氨酚(acetaminophen)(lg)和鹽酸苯海拉明(diphenhydramineHC1)(50mg)。後續療程自第24周(第169天)、第48周(第337天)和第72周(第505天)開始實施。後續療程的第二次輸注在第一次輸注後14士1天進行。如本文所述施用CD20抗體導致認知功能得到維持，疾病進展減緩，與疾病有關的行為問題得到控制，日常生活技能的喪失減緩，自身抗體或BRA水平降低，和/或循環中的CD20陽性B細胞減少。例如，施用CD20抗體導致MMSE得分保持相同或降低^4點(在未治療的輕度-中度AD中，MMSE得分預期每年降低2-4點)。這些改善結果優於單用標準護理藥療所實現的。實施例2:中度-重度阿耳茨海默氏病的治療本實施例描述了使用CD20抗體的中度-重度AD療法。在本實施例中治療患有中度-重度AD的250歲的男性和女性受試者。這些受試者患有中度-重度AD，NPI激動/攻擊域(agitation/aggressiondomain)的得分大於或等於4。受試者已經接受穩定劑量的美金剛達至少3個月。將可自健泰科公司(Genentech)購買的rituximab配製成9.0mg/mL氯化鈉，0.7mg/mL聚山梨醇酯80，7.35mg/mL脫水檸檬酸鈉，和無菌注射用水(pH6.5)中的無菌產品供IV施用。或者，施用包含完整人源化2H7.vl6或完整人源化2H7.v511的配製劑。第一個療程的組成如下在第1天和第15天各施用l劑lg靜脈內(IV)CD20抗體。受試者在每次輸注開始前30-60分鐘口服醋氨酚(lg)和鹽酸苯海拉明(50mg)。後續療程自第24周(第169天)、第48周(第337天)和第72周(第505天)開始實施。後續療程的第二次輸注在第一次輸注後14土1天進行。可使用日常活動(ActivitiesofDailyLiving,ADL)清單來評估逐日作用，包括用來測量受試者功能性能力(functionalcapacity)的綜合性ADL問巻表。每項ADL的評級自最高水平的獨立執行至完全喪失。臨床醫師通過詢問熟悉受試者行為的護理人員來進行清查。認知表現(cognitiveperformance)可使用批准用於評估中度-重度痴呆患者認知功能的多項儀器(multi-iteminstrument)來評估。例如，該儀器可測驗^人知表現的選定方面，包4舌注意(attention)、定向(orientation)、語言(language)、記憶(memory)、碎見覺空間能力(visuospatialability)、造句(construction),4亍為(praxis)禾口3土交(socialinteraction),例濁口，可^吏用重度損、傷表(SevereImpairmentBattery,SIB),評分範圍0到100，得分越低表明認知損害越大。如本文所迷施用CD20抗體導致認知功能(cognitiveflmction)得到維持，疾病進展減緩，與疾病有關的行為問題得到控制，日常生活技能的喪失減緩，自身抗體或BRA水平降低，和/或循環中的CD20陽性B細胞減少。施用CD20抗體導致ADL得分優於用安慰劑所實現的，或在CD20抗體聯合美金剛時優於單用美金剛所實現的。權利要求1.用於治療受試者中的阿耳茨海默氏病的方法，包括對受試者施用有效治療阿爾茨海默氏病的量的裸CD20抗體。10203040Q工VLSQSPA工LSASPGEKVTMTC[RASSSVS-YMH]WYQQKPhu2H7.v16D工QMTQSPSSLSASVGDRVT工TC[RASSSVS-YMH]WYQQKPhumK工D工QMTQSPSSLiSASVGDRVT工TC[RASQS工SNY1jA]WYQQKP2H7FR2CDR250GSSPKPW工Y[APSNLAS]I-FR3-607080GVPARFSGSGSGTSYSLTISWEAhu2H7.v16GKAPKPL工Y[APSNLAS]GVPSRFSGSGSGTDFTLT工SS!LQPh確KIGKAPKLL工Y[AASSIjES]GVPSRFSGSGSGTDFTLT工SSLQP2H7CDR390100FR4'EDAATYYC[QQWSFNPPT]FGAGTKLELKRhu2H7.v16EDFATYYC[QQWSFNPPT]FGQGTKVE工KRhumK工EDFATYYC[QQYNSIjPWT]"FGQGTKVE工KR圖1A重鏈可變域的序列對比2H7FR11020QAYLQQSGAELVRPGASVKMSCKASCDR13040[GYTFTSYNMH]WVKQThu2H7.v16EVQIA/ESGGGLVQPGGSIjRLSCAAS[GYTFTSYNMH]WVRQAhum工工工EVQLVESGGGLVQPGGSLiRLSCAAS[GFTFSSYAMS]WVRQA2H7-FR2CDR250a60PRQGLEW工G[A工YPGNGDTSYNQKFKG〗■FR37080KATLTVDKSSSTAYMhu2H7.v16PGKGLEWVG[A工YPGNGDTSYNQKFKG]RFT工SYDKSKNTIiYLihum工工工pgkg!jEwva[v工sgdggstyyadsvkg;irft工srdisisknt:ltl2H7abc90QLSSLTSEDSAVYFCARCDR31Q0abcde'FR4-1110[WYYSNSYWYFDV]WGTGTTVTVSShu2H7.v16QMNSLRAEDTAVYYCAR[WYYSNSYWYFDV]WGQGTLVTVSShum工工工QMNSIjRAEDTAVYYCAR[GRVGYSJLY——DY]WGQGTLVTVSS圖IB輕鏈對比hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511132D工QMTQSPSSL/SASVGDRVT工TCRASSSVSYMHWYQQKPGKAPKPLIYAP女***女*大*頭******;^*,D工QMTQSPSSLSASVGDRVT工TCRASSSVSYLHWYQQKPGKAPKPL工YAP52SNLASGVPSRFSGSGSGTDFTIjT工SS:LQPEDFATYYCQQWSFNPPTFGQGSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTIjTISSLjQPEDFATYYCQQWAF]SIPPTFGQG102TKVE工KRWAAPSVF工FPPSDEQIjKSGTASWCJLLNNFYPREAKVQWKVD**頭頭**********頭**女**"**"***女**頭**頭****女***女**+女*女女*1(:TKVE工KRTVAAPSVF工FPPSDEQLKSGTASWCLL麗FYPREAKVQWKVD152NALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTIiTrjSKADYEKHKVYACEVTHQGLNAIjQSGNSQESVTEQDSKDSTYSIjSSTIjTLSKADYEKHKVyACEVTHQGLi202214SSPVTKSFNRGECSSPVTKSFNRGEC圖2重鏈對比hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7hu2H7v16v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.v16hu2H7.v511hu2H7.vlShu2H7.v511EVQIjVESGGG:LVQPGGS1jRIjSCAASGYTFTSYNMHWEVQLVESGGGLVQPGGSURIjSCAASGYTFTSYNMHW3752a82abcVRQAPGKGLEWVGAIYPGNGDTSYNQKFKGRFT工SVDKSKNTLYLQMNSLVRQAPGKGLEWVGA工YPGM3ATSYNQKFKGRFTISVDKSKNTLYLQMNSL83100abcde113RAEDTAVYYCARWYYSNSYWYFDVWGQGTLVTVSSRAEDTAVYYCARWYYSYRYWYFDVWGQGTUVTVSS118ASTKGPSVFPLAPSASTKGPSVFPLAPS132SKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVS麗SGALTSGVHTFPAVLQSSGLYS182lsswtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpalsswtvpsss:lgtqty工cnvnhk:psntkvdkkvepkscdkthtcppcpa232PELLGGPSVFLFPPKPKDTLM工SRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDGPEIAGGPSVFIjFPPKPKDTIjMISRTPEVTCVWDVSHEDPEVKFNWYVDG282VEVHNAKTKPREEQYNSTYRWSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPVEVHNAKTKPREEGYNATYRWSVLTVLHGDWUNGKEYKCKVSNAALPAP332工EKT工SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSD工AVEW工AAT工SKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNgVSLTCLVKGFYPSD工AVEW382ESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEAESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKIjTYDKSRWQQGNVFSCSVMHEA432447IjHnhytqks:lsls]gkMNHYTQKS]LSLiSPGK圖全文摘要本發明描述了使用CD20抗體治療阿耳茨海默氏病(AD)或痴呆患者的方法，所述患者未患B細胞惡性腫瘤或除阿耳茨海默氏病外的任何其它自身免疫病。本發明還描述了供此類方法中使用的製品。文檔編號A61K39/395GK101203242SQ200680022682公開日2008年6月18日申請日期2006年4月20日優先權日2005年4月22日發明者馬丁·E·桑德斯申請人:健泰科生物技術公司