在代謝物組學分析方法中使用內源參比代謝物進行歸一化的方法
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專利名稱：在代謝物組學分析方法中使用內源參比代謝物進行歸一化的方法
技術領域：
本發明涉及代謝物組學領域。跟具體來說，本發明涉及用於對代謝物測定法中待比較的信號進行歸一化的方法。這種新方法依賴使用內源代謝物濃度作為內標，並允許測定濃度和相對豐度以及在任何樣品之間進行直接比較。因此，本發明涉及代謝物濃度的應用和不同物種、組織之間和不同細胞之間代謝物水平的比較。本發明提供了參比、對照或歸一化代謝物的身份和應用，所述代謝物的水平即使在不同條件下也在個體細胞中以及不同樣品、物種和來源的體液、細胞和組織之間保
持一致。
背景技術：
在代謝物組學中，術語歸一化是指在信號提取與加工之後和數據分發與隨後的統計學處理之前的數據調整步驟(使用流動注射電噴霧質譜代謝物指紋數據進行預處 、分類建t莫禾口特(Preprocessing, classification modeling and feature selection using flow injection electrospray mass spectrometry metabolite fingerprint data)，D. P. Enot, W. Lin, M. Beckmann, D. Parker, D. P. Overy 禾口 J. Draper Nature Protoco 1 s，2008，3，446-470 ；依靠數字的代謝物組學獲取和理解整體代謝物 ^L 據(Metabolomics by numbers-acquiring and understanding global metabolite data), R. Goodacre, S. Vaidyanathan, W. B. Dunn, . G. Harrigan 禾口 D. B. Kell TRENDS in Biotechnology 2004,22(5)245-252)。對代謝物組學數據進行歸一化以比較在不同天、不同機器上、各種稀釋度下等產生的數據的方法仍然有許多爭論，遠遠達不到黃金標準或甚至達不到一致推薦。由於代謝物組學的首要目標是研究代謝物對環境和遺傳改變做出響應而發生的變化，因此歸一化是使測量值可比較的關鍵步驟，其中排除了含糊和不相關的變差來源。典型情況下，樣品間變化性源於樣品濃度和均質性差異、靈敏度的喪失和分析系統的漂移或樣品隨時間的降解。當考慮多個實驗並且當代謝物測量值源於幾個實驗程序和不同分析平臺時，這種變化性變成了真正的挑戰(Enot等，2008)。取決於實驗設計，存在一些用於計算歸一化因子的有用方法。例如，人們可以在化學衍生之前或之後向樣品添加多種增加但等摩爾濃度的對照，並且這些點的強度總和應該相等。可選地，可以添加含有恆定量化合物的混合物或提取物，例如來自於一批血漿的樣品。對於添加的等摩爾對照來說，測量到的強度應該表現相似。更通用的方法利用板上的對照樣品控制整個板質量的變差(例如標準製備物的標準批次和方法)或測量差異。可採用的歸一化策略是基於關於每個實驗所使用的數據和策略的一些潛在假設。 因此必須對這些策略進行調整以反映出所研究的系統和實驗設計這兩方面。首要假設是對於一些添加的對照組來說，在整個組中平均的測定濃度比應該接近單一值。可以將用於對代謝物組學數據進行歸一化的現有技術概括成三個主要類別1-第一類策略包括從數據本身推斷逐個樣品的偏差係數、也稱為稀釋或定標係數(scaling factor)(關於生物流體ID 1H-NMR數據歸一化的意見(A note on normalization of biofluid ID IH-NMR data), R. J. 0. Torgrip, K. M. Aberg 1, E. Aim, I.Schuppe-Koistinen 和 J. Lindberg=Metabolomics,20084(2)，114-121)。這種最簡單的方法是全局歸一化，其中定標係數是跨樣品的所有測量值的和 (或與其相關)(也稱為常和、整和(integrale)、總io計數歸一化(total io count normalisation))。這種初級方法的局限性已被廣泛討論(Torgrip等，2008 ；概率商數歸一化作為說明複雜生物混合物稀釋的強有力方法，在IH NMR代謝物組學中的應用 (Probabilistic quotient normalization as robust method to account for dilution of complex biological mixtures. Application in IH NMR metabolomics)，F. Dieterle，
A.Ross，G. Schlotterbeck, H. Senn :Anal Chem.，2006，78 (13)，4281-90)，並且已提出了通過引入類型信息(Enot等，2008)、峰/信號的次選擇(用於尿樣代謝物組學分析的歸一化策略(Normalization strategies for metabolomic analysis of urine samples),
B.M. Warrack, S. Hnatyshyn, K. -H. Ott, M. D. Reily, M. Sanders, H. Zhang 禾口 D. Μ. Drexler Journal of Chromatography B，2009，877 (5-6)，547-552 ；關於高通量質譜數據中非隨機丟失值的歸一化(Normalization Regarding Non-Random Missing Values in High-Throughput Mass Spectrometry Data), P. Wang, H. Tang, H. Zhang, J. Whiteaker, A. G. Paulovich 禾口 M. Mcintosh :Pacific Symposium on Biocomputing, 2006,11 :315-326) 或通過將強度分布對參比樣品情況進行作圖(Torgrip等，2008，Dieterle等，2006)，來產生更充分的定標係數估算值的可替選方法。許多這樣的方法屬於NMR領域(美國專利號 7, 277,807B2, Dieterle等，2006)。不論所使用的技術的精密性及其解決具體生物學問題的效用如何，產生的數據仍然採取無量綱和實驗依賴性數量的形式，不能在不同實驗設置或應用領域之間有效轉移和比較。2-第二種歸一化類型使用來自生物背景的信息來調整樣品濃度(Warrack等， 2009)。就此而言，在基於尿液的研究中通常使用取樣時的肌酸酐、尿液體積或重量摩爾滲透壓濃度，並且植物提取物或組織重量也可用於標度樣品測量值。除了這樣的信息在實踐中的可用性以及與它們的測量相關的固有誤差之外，當研究致力於可能誘導實驗/臨床參數估算值的急劇變化的生物化學過程(例如腎損傷)時，不能保證這些參數適用於歸一化。3-最後，利用針對單一或多種內標的校準進行化合物濃度的絕對定量，是既能使個體間變差降到最低、又能對源於多個位點和實驗的數據集進行比較的最可靠的方法(使用多種內標的最優選擇對代謝物組學數據進行歸一化的方法(Normalization method for metabolomics data using optimal selection of multiple internal standards)，Μ· Sysi-Aho，M. Katajamaa，L. Yetukuril 禾口 Μ· Oresic BMC Bioinformatics 2007，8:93)。 然而，在高通量代謝物情況分析的情形中，由於化學多樣性，它的執行可能變成令人畏懼的任務i)使用單一內標不保證其對於廣泛收集化合物的效能ii)大量內標的成本和商業可用性，以及iii)需要專用分析步驟的矩陣效應(matrix effect) 0生物樣品的定量代謝物組學情況分析中的其他選項需要分離-分子ID方法，例如氣相色譜-質譜(「GC-MS」)和原始樣品的衍生。(W0/2007/008307)。在原始代謝物衍生後，數據校正和驗證策略提供了代謝物衍生物的權重平均值。在這種情況分析方法中，將樣品與衍生試劑合併以產生衍生物，並在衍生物上執行分離-分子ID和定量方法以獲得相應的峰面積，包含測量衍生物的峰面積。參考文獻依靠數字的代謝物組學獲取和理解整體代謝物數據(Metabolomics by numbers -acquiring and understanding global metabolite data)R. Goodacre, S. Vaidyanathan, W. B. Dunn, . G. Harrigan 禾口 D. B. Kell TRENDS in Biotechnology 2004,22(5)245-252關於高通量質譜數據中非隨機丟失值的歸一化(Normalization Regarding Non-Random Missing Values in High-Throughput Mass Spectrometry Data)P. Wang, H. Tang, H. Zhang, J. Whiteaker, A. G. Paulovich 禾口 Μ· McintoshPacific Symposium on Biocomputing,2006,11 :315-326使用多種內標的最優選擇對代謝物組學數據進行歸一化的方法(Normalization method for metabolomics data using optimal selection of multiple internal standards)M. Sysi-Aho, M. Katajamaa, L. Yetukuril 禾口 Μ· OresicBMC Bioinformatics 2007,8:93大規模人類代謝物組學研究用於數據(預)處理和驗證的策略(Large-Scale Human Metabolomics Studies :A Strategy for Data (Pre-)Processing and Validation)S. Bi jlsma, I. Bobeldi jk, E. R. Verhei j, R. Ramaker, S. Kochhar, I. A. Macdonald, B. van Ommen 禾口 k. K. SmildeAnal. Chem.，2006 78 (2)，567-574關於生物流體ID IH-NMR數據歸一化的意見(A note on normalization of biofluid ID IH-NMR data)R. J. 0. Torgrip, K. M. Aberg 1, E. Aim, I. Schuppe-Koistinen 禾口 J. LindbergMetabolomics,2008 4(2), 114-121用於尿樣代謝物組學分析的歸一化策略(Normalization strategies for metabolomic analysis of urine samples)B. M. ffarrack, S. Hnatyshyn, K. -H. Ott, M. D. Reily, M. Sanders, H. Zhang 禾口 D. Μ. DrexlerJournal of Chromatography B,2009,877 (5-6),547-552
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概率商數歸一化作為說明複雜生物混合物稀釋的強有力方法，在IH NMR代謝物組學中的應用(Probabilistic quotient normalization as robust method to account for dilution of complex biological mixtures. Application in IH NMR metabolomics)F. Dieterle, A. Ross, G. Schlotterbeck, H. SennAnal Chem. ,2006,78(13),4281-90使用流動注射電噴霧質譜代謝物指紋數據進行預處理、分類建模和特點選擇(Preprocessing, classification modeling and feature selection using flow injection electrospray mass spectrometry metabolite fingerprint data)D. P. Enot, W. Lin, M. Beckmann, D. Parker, D. P. Overy 禾口 J. DraperNature Protocols,2008，3，446-470 (W0/2007/008307)用於定量高通量代謝物組學情況分析的數據校正、歸一 U 禾口驗 ilE (Data correction, normalization and validation for quantitative high-throughput metabolomic profiling)
發明內容
概括來說，現有技術目前沒有在代謝物組學分析方法中提出可靠的歸一化方法。因此，本發明的目的是為代謝物組學分析方法提供可靠的歸一化。這個目的通過權利要求1的歸一化方法和權利要求13的內源參比代謝物的應用得以實現。具體來說，本發明涉及用於將對應於哺乳動物對象的生物樣品中所選靶代謝物的量和/或濃度的強度數據進行歸一化的方法，其中所述強度數據使用一種或多種內源參比代謝物通過代謝物組學分析方法獲得，所述方法包含對所述生物樣品中的所述所選靶代謝物執行至少一種體外代謝物組學分析方法；同時在同一樣品中執行一種或多種內源參比代謝物或其衍生物的定量分析，其中所述內源參比代謝物是生物樣品中以基本上恆定的水平存在於對象中的化合物；其中所述內源參比代謝物或其衍生物具有小於1500Da的分子質量，並且選自胺基酸，特別是精氨酸、天冬氨酸、瓜氨酸、穀氨酸、穀氨醯胺、亮氨酸、異亮氨酸、 組氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、犬尿氨酸；苯硫基氨甲醯基胺基酸(PTC-胺基酸)，特別是PCT-精氨酸、PTC-穀氨醯胺、 PTC-組氨酸、PTC-甲硫氨酸、PTC-鳥氨酸、PTC-苯丙氨酸、PTC-脯氨酸、PTC-絲氨酸、 PTC-色氨酸、PTC-酪氨酸、PTC-纈氨酸； 二甲基精氨酸，特別是N，N- 二甲基-L-精氨酸；羧酸，即15(S)-羥基- ，8Z，llZ，13E-二十碳四烯酸[(5Z，8Z，llZ，13E， 15S)-15-羥基二十碳-5，8，11，13-四烯酸]、琥珀酸；肉毒鹼類；在醯基殘基中具有1至20個碳原子的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有 3至20個碳原子並且在醯基殘基中具有1至4個雙鍵的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有1 至20個碳原子並且在醯基殘基中具有1至3個OH基的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有3
24至20個碳原子並在醯基殘基中具有1至4個雙鍵和1至3個OH基的醯基肉毒鹼；磷脂類，特別是在醯基殘基中具有1至30個碳原子的溶血磷脂醯膽鹼(單醯基磷脂醯膽鹼)；在醯基殘基中具有3至30個碳原子並在醯基殘基中具有1至6個雙鍵的溶血磷脂醯膽鹼；在醯基殘基中具有總共1至50個碳原子的磷脂醯膽鹼(二醯基磷脂醯膽鹼)；在醯基殘基中具有總共3至50個碳原子並在醯基殘基中具有總共1至8個雙鍵的磷脂醯膽鹼；鞘磷脂類，特別是在醯基鏈中總碳原子數為10至30的神經鞘磷脂；在醯基鏈中總碳原子數為10至 30並具有1至5個雙鍵的神經鞘磷脂；在醯基殘基中總碳原子數為10至30的羥基神經鞘磷脂；在醯基殘基中總碳原子數為10至30並具有1至5個雙鍵的羥基神經鞘磷脂；前列腺素類，即6-酮基-前列腺素Fl α、前列腺素D2 ；腐胺；並且其中每種所述所選靶代謝物的所述檢測到的強度與所述內源參比代謝物的所述強度相關。在本發明的優選方法中，對靶和內源參比代謝物的多個強度進行數學預處理，特別是變換例如使用算法、廣義化算法、冪變換。在本發明的優選實施方案中，將所述內源參比代謝物的多個強度歸併成一個參比值。在後一種情況下，通過計算幾何平均值、算術平均值、中位數值、權重算數平均值將內源參比代謝物的多個強度歸併成一個參比值，可能是優選的。優選情況下，在線性強度的情況下形成靶代謝物的每個強度與測定到的參比值的比率，或者在對數強度的情況下從每個靶代謝物強度中減去測定到的參比值。一般來說，出於本發明的目的，所述代謝物組學分析方法包含通過質譜術(MS)、特別是MS技術例如基質輔助雷射解吸/電離(MALDI)、電噴霧電離(ESI)、大氣壓化學電離 (APCI)、任選與MS偶聯的1H-J3C-和/或31P-核磁共振波譜(NMR)產生用於為內源代謝物定量的強度數據，通過使用與分離技術、特別是液相色譜(LC-MQ、氣相色譜(GC-MQ或毛細管電泳(CE-MQ偶聯的MS技術和/或方法來測定代謝物濃度，所述技術對於專業技術人員來說是公知的。本發明的優選實施方案在於內源參比代謝物，其選自
15 ⑶-羥基-5Z，8Z，11Z，13E- 二十碳四烯酸6-酮基-前列腺素Fl α不對稱二甲基精氨酸精氨酸PTC-精氨酸天冬氨酸肉毒鹼(游離)癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼)
癸烯醯基肉毒鹼癸二烯醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼]十二烯醯基肉毒鹼十二烷二醯基肉毒鹼十四醯基肉毒鹼十四烯醯基肉毒鹼[肉豆蔻醯基肉毒鹼]3-羥基十四烯醯基肉毒鹼[3-羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]3-羥基十四碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十四醯基肉毒鹼[羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]十八碳醯基肉毒鹼[硬脂醯基肉毒鹼]十八碳烯醯基肉毒鹼[油醯肉毒鹼]3-羥基十八碳烯醯基肉毒鹼[3-羥基油醯肉毒鹼]乙醯肉毒鹼丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼丁烯醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼異戊醯基肉毒鹼/2-甲基丁醯肉毒鹼/戊醯基肉毒鹼甲基巴豆醯基肉毒鹼/3-甲基-巴豆醯基肉毒鹼戊二酸單醯基肉毒鹼/羥基己醯基肉毒鹼戊二酸單醯基肉毒鹼/羥基己醯基肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼3-羥基異戊醯基肉毒鹼/3-羥基-2-甲基丁醯基肉毒鹼己醯基肉毒鹼己烯醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼壬醯基肉毒鹼瓜氨酸肌酸酐穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺
穀氨酸組氨酸PTC-組氨酸犬尿氨酸亮氨酸醯基殘基為C14 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C16 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C16 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18 2的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C20 3的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C20 4的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為CM 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以6 0的溶血磷脂醯膽鹼
醯基殘基為以6 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以8 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以8 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C6 0的溶血磷脂醯膽鹼PTC-甲硫氨酸鳥氨酸PTC-鳥氨酸二醯基殘基總和為C24:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為以6 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C28:1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:3的磷脂醯膽鹼
二醯基殘基總和為C36:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40 4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40 6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 0的磷脂醯膽鹼
醯基-烷基殘基總和為C40:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 0的磷脂醯膽鹼
醯基-烷基殘基總和為C42 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44 6的磷脂醯膽鹼前列腺素D2苯丙氨酸PTC-苯丙氨酸脯氨酸PTC-脯氨酸腐胺絲氨酸PTC-絲氨酸醯基殘基總和為C14:1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22 1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22:2的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20 2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22 3的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為以6 0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為以6 1的神經鞘磷脂琥珀酸總二甲基精氨酸ADMA+SDMA的總和色氨酸
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PTC-色氨酸酪氨酸纈氨酸PTC-纈氨酸亮氨酸+異亮氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。此外，特別優選情況下使用這樣的代謝物作為根據統計學穩定性量度顯示出穩定性的內源參比代謝物，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)ο此外，使用這樣的代謝物作為根據至少2種統計學穩定性量度顯示出穩定性的內源參比代謝物，可能是優選的，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、 對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說選自PTC-精氨酸肉毒鹼(游離)癸烯醯基肉毒鹼癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼)十二烯醯基肉毒鹼十二烷二醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼]十四醯基肉毒鹼3-羥基十四醯基肉毒鹼[羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]3-羥基十八碳烯醯基肉毒鹼[3-羥基油醯肉毒鹼]丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼3-羥基異戊醯基肉毒鹼/3-羥基-2-甲基丁醯基己烯醯基肉毒鹼己醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼
穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺PTC-組氨酸醯基殘基為C14 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以6 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以6 1的溶血磷脂醯膽鹼
醯基殘基為以8 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以8 1的溶血磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C24:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為以6 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44 6的磷脂醯膽鹼苯丙氨酸PTC-苯丙氨酸脯氨酸
醯基殘基總和為C16 0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20 2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C14:1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22:2的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:1的羥基神經鞘磷脂琥珀酸PTC-色氨酸纈氨酸PTC-纈氨酸亮氨酸+異亮氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。在本發明的另一個優選實施方案中，所述所選內源參比代謝物根據至少3種統計學穩定性量度顯示出穩定性，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、 對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說選自肉毒鹼(游離)癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼)十二烷二醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼己醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺
PTC-組氨酸醯基殘基為C14 0的溶血磷脂醯膽鹼
醯基殘基為以6 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以6 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以8 1的溶血磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為以6 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44 6的磷脂醯膽鹼醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20 2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:1的羥基神經鞘磷脂纈氨酸PTC-纈氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。本發明的另一個優選方法使用根據所有統計學穩定性量度顯示出穩定性的內源參比代謝物，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geN0rm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)， 和/或這樣的內源參比代謝物具體來說是二醯基殘基總和為C42:6的磷脂醯膽鹼，其中名稱「C42:6」表示醯基殘基的鏈長，42表示醯基殘基中的總碳原子數，6表示殘基中的總雙鍵數。在本發明的範圍內，所述多種內源參比代謝物包含2至80種、特別是2至60種、 優選2至50種、優選2至30種、更優選2至10種、特別優選2至10種、優選3至5種內源參比代謝物。本發明的另一個實施方案是一種或多種化合物或其衍生物在代謝物組學分析方法中作為內源參比代謝物的應用，其中所述化合物具有小於1500Da的分子質量，其中所述內源參比代謝物選自胺基酸，特別是精氨酸、天冬氨酸、瓜氨酸、穀氨酸、穀氨醯胺、亮氨酸、異亮氨酸、組氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、犬尿氨酸；苯硫基氨甲醯基胺基酸(PTC-胺基酸)，特別是PCT-精氨酸、PTC-穀氨醯胺、 PTC-組氨酸、PTC-甲硫氨酸、PTC-鳥氨酸、PTC-苯丙氨酸、PTC-脯氨酸、PTC-絲氨酸、 PTC-色氨酸、PTC-酪氨酸、PTC-纈氨酸；二甲基精氨酸，特別是N，N- 二甲基-L-精氨酸；羧酸，即15(S)-羥基- ，8Z，llZ，13E-二十碳四烯酸[(5Z，8Z，llZ，13E， 15S)-15-羥基二十碳-5，8，11，13-四烯酸]、琥珀酸；肉毒鹼類；在醯基殘基中具有1至20個碳原子的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有 3至20個碳原子並且在醯基殘基中具有1至4個雙鍵的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有1 至20個碳原子並且在醯基殘基中具有1至3個OH基的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有3 至20個碳原子並在醯基殘基中具有1至4個雙鍵和1至3個OH基的醯基肉毒鹼；磷脂類，特別是在醯基殘基中具有1至30個碳原子的溶血磷脂醯膽鹼(單醯基磷脂醯膽鹼)；在醯基殘基中具有3至30個碳原子並在醯基殘基中具有1至6個雙鍵的溶血磷脂醯膽鹼；在醯基殘基中具有總共1至50個碳原子的磷脂醯膽鹼(二醯基磷脂醯膽鹼)；在醯基殘基中具有總共3至50個碳原子並在醯基殘基中具有總共1至8個雙鍵的磷脂醯膽鹼；鞘磷脂類，特別是在醯基鏈中總碳原子數為10至30的神經鞘磷脂；在醯基鏈中總碳原子數為10至 30並具有1至5個雙鍵的神經鞘磷脂；在醯基殘基中總碳原子數為10至30的羥基神經鞘磷脂；在醯基殘基中總碳原子數為10至30並具有1至5個雙鍵的羥基神經鞘磷脂；前列腺素類，即6-酮基-前列腺素Fl α、前列腺素D2 ；腐胺。正如前面提到的，所述代謝物組學分析方法包含通過質譜術(MQ、特別是MS技術例如基質輔助雷射解吸/電離(MALDI)、電噴霧電離(ESI)、大氣壓化學電離(APCI)、任選與 MS偶聯的1H-J3C-和/或Mp-核磁共振波譜(NMR)對內源靶和參比代謝物進行定量，通過使用與分離技術，特別是液相色譜(LC-MQ、氣相色譜(GC-MQ或毛細管電泳(CE-MQ偶聯的MS技術和/或方法來測定代謝物濃度。可以用作本發明的內源參比代謝物的特別優選的化合物選自15 (S)-羥基-5Ζ， 8Ζ，11Ζ，13Ε-二十碳四烯酸6-酮基-前列腺素Fl α不對稱二甲基精氨酸精氨酸PTC-精氨酸天冬氨酸肉毒鹼(游離)癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼)癸烯醯基肉毒鹼癸二烯醯基肉毒鹼
34
十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼]十二烯醯基肉毒鹼十二烷二醯基肉毒鹼十四醯基肉毒鹼十四烯醯基肉毒鹼[肉豆蔻醯基肉毒鹼]3-羥基十四烯醯基肉毒鹼[3-羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]3-羥基十四碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十四醯基肉毒鹼[羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]十八碳醯基肉毒鹼[硬脂醯基肉毒鹼]十八碳烯醯基肉毒鹼[油醯肉毒鹼]3-羥基十八碳烯醯基肉毒鹼[3-羥基油醯肉毒鹼]乙醯肉毒鹼丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼丁烯醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼異戊醯基肉毒鹼/2-甲基丁醯肉毒鹼/戊醯基肉毒鹼甲基巴豆醯基肉毒鹼/3-甲基-巴豆醯基肉毒鹼戊二酸單醯基肉毒鹼/羥基己醯基肉毒鹼戊二酸單醯基肉毒鹼/羥基己醯基肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒
3-羥基異戊醯基肉毒鹼/3-羥基-2-甲基丁醯基己醯基肉毒鹼己烯醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼壬醯基肉毒鹼瓜氨酸肌酸酐穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺穀氨酸組氨酸
PTC-組氨酸犬尿氨酸亮氨酸醯基殘基為C14 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C16 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C16 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18 2的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C20 3的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C20 4的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為CM 0的溶血磷脂醯膽鹼
醯基殘基為以6 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以6 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以8 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以8 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C6 0的溶血磷脂醯膽鹼PTC-甲硫氨酸鳥氨酸PTC-鳥氨酸二醯基殘基總和為CM 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為以6 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C28:1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32 3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34 3的磷脂醯膽鹼
二醯基殘基總和為C34 4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 5的磷脂醯膽鹼
二醯基殘基總和為C36 6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40 3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40 4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40 5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40 6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 0的磷脂醯膽鹼
二醯基殘基總和為C42 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34 2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 3的磷脂醯膽鹼
醯基-烷基殘基總和為C38 4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 2的磷脂醯膽鹼
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醯基-烷基殘基總和為C40 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44 6的磷脂醯膽鹼前列腺素D2苯丙氨酸PTC-苯丙氨酸脯氨酸PTC-脯氨酸腐胺絲氨酸PTC-絲氨酸醯基殘基總和為C14:1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22 1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22 2的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20 2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22 3的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為以6 0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為以6 1的神經鞘磷脂琥珀酸總二甲基精氨酸ADMA+SDMA的總和色氨酸PTC-色氨酸酪氨酸
纈氨酸PTC-纈氨酸亮氨酸+異亮氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。本發明的另一個有利實施方案是使用這樣的化合物作為根據統計學穩定性量度顯示出穩定性的內源參比代謝物，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數 (CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geN0rm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)。優選情況下，這樣的化合物可以用作根據至少2種統計學穩定性量度顯示出穩定性的內源參比代謝物，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說選自PTC-精氨酸肉毒鹼(游離)癸烯醯基肉毒鹼癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼)十二烯醯基肉毒鹼十二烷二醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼]十四醯基肉毒鹼3-羥基十四醯基肉毒鹼[羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]3-羥基十八碳烯醯基肉毒鹼[3-羥基油醯肉毒鹼]丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼3-羥基異戊醯基肉毒鹼/3-羥基-2-甲基丁醯基己烯醯基肉毒鹼己醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺
PTC-組氨酸醯基殘基為C14 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以6 0的溶血磷脂醯膽鹼
醯基殘基為以6 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以8 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以8 1的溶血磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為CM 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為以6 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 0的磷脂醯膽鹼
二醯基殘基總和為C36 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44 6的磷脂醯膽鹼苯丙氨酸PTC-苯丙氨酸脯氨酸醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:1的神經鞘磷脂
醯基殘基總和為C18:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20:2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C14:1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:1的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22 2的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:1的羥基神經鞘磷脂琥珀酸PTC-色氨酸纈氨酸PTC-纈氨酸亮氨酸+異亮氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。本發明的另一種有利應用是使用這種根據至少3種統計學穩定性量度顯示出穩定性的內源參比代謝物，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說選自肉毒鹼(游離)癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼)十二烷二醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼己醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺PTC-組氨酸醯基殘基為C14 0的溶血磷脂醯膽鹼
醯基殘基為以6 0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以6 1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為以8 1的溶血磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為以6 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32 2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38 0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 1的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼
二醯基殘基總和為C42 6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44 6的磷脂醯膽鹼醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:1的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20 2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:1的羥基神經鞘磷脂纈氨酸PTC-纈氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。本發明的另一個優選實施方案使用這樣的化合物作為根據所有統計學穩定性量度顯示出穩定性的內源參比代謝物，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數 (CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說是二醯基殘基總和為C42 6 的磷脂醯膽鹼，其中名稱「C42:6」表示醯基殘基的鏈長，42表示醯基殘基中的總碳原子數， 6表示殘基中的總雙鍵數。此外，優選使用2至80種、特別是2至60種、優選2至50種、優選2至30種、更優選2至10種、特別優選2至10種、優選3至5種化合物作為內源參比代謝物。對用於代謝物組學數據歸一化的好方法的需求再怎麼強調也不為過，並且這種方法是需要定量數據或與參比值進行比較的應用、例如診斷學中所需的先決條件。存在大量技術性變差的來源，例如試劑的裝載影響、批次影響、稀釋影響、內標在向組織添加後的不可重現的分布以及實驗條件中被忽視的變化。理想情況下，歸一化也應該允許對從不同樣品類型、不同物種獲得的以及在不同測定平臺上和由不同實驗室測定的數據進行直接比較。此外，更具體來說，與質譜相關的未解決問題包括對數據的跨矩陣、跨組織和跨物種比較來說有害的矩陣特異性信號抑制或離子抑制。
42
必須執行上述步驟來轉變原始信號信息，以適合於隨後的數據分析和解釋的格式提呈數據。然而，即使使用對照點或外部對照樣品，不希望得到的實驗變差仍能汙染數據。 在實驗中也可能遺漏一些或所有物理歸一化技術，在這種情況下發現其他歸一化手段甚至更加重要。理論上說，用於代謝物組學的理想內源標準品是一種化合物或一組化合物，其濃度水平在細胞周期中、細胞類型之間、各種疾病狀態之間、各種健康狀態之間或對人們希望檢驗的實驗性治療做出響應而不發生變化。此外，對於在代謝物組學中有效的內源標準品 (其是內源代謝物)來說，關鍵是它應該與代謝物測定法中的測試和參比(或靶)代謝物具有相似的相對豐度。到目前為止還沒有描述過這樣的分子，也沒有描述過在定量多參數代謝物組學和使用質譜或產生定量或相對濃度數據的任何其他方法進行代謝物水平測定的情形中利用這些分子的方法。使用外源添加的標準品，具有使用戶對照超過所添加的化合物量的優點，導致樣品間變差低。然而，使用外源標準品不能控制用於開始工作並隨後進行分析的起始材料或組織的質量的差異。如果在其他方面都一致的樣品之間存在代謝物完整性水平的差異，提取得率將反映出這種變差，儘管外部標準品仍將表現一致。在理論上，內源標準品——其不能與也是從外部添加的內標混淆——可以避開許多上面列出的代謝物組學實驗中的問題。然而，儘管在基因表達和轉錄組學的背景下內源持家基因的概念是已知的，但持家代謝物或組合的產生、鑑定和應用以及它們的組合使用， 在代謝物組學中是未知的，並且儘管存在大量描述代謝數據在各種情形中的應用的研究， 但在代謝物組學中使用對照、持家或內源參比代謝物尚未被描述。然而，由於營養狀況或食物攝取量的變差，物種間代謝物濃度對生理和環境條件做出響應而發生顯著變化，因此鑑定和使用內源化合物或代謝物作為歸一化工具已被評估為高度不可能。鑑定在不同組織、不同物種之間、更不用說各種健康狀態之間或在患有不同疾病的對象中變差有限的內源化合物，甚至更加不可能，並且在任何情況下都不明顯。具體來說，對於本技術領域的普通專業人員來說，令人吃驚的是在本申請中鑑定到的化合物可以用作內源參比代謝物。在下面的實施例中描述的實驗結果進一步顯示，在代謝物組學中獲得了明顯提高的預測力，正如在使用內源參比代謝物與不使用內源參比代謝物歸一化的實施例的比較中所顯示的。儘管存在現有技術中的障礙，本發明人仍調查了是否有可能鑑定具有最小濃度變化或「恆定」水平的多種代謝物，其可用於歸一化，因此是用於鑑定、測定、定量和應用其他可變代謝物的疾病相關的濃度變化，以及將這些參比或對照代謝物與可變代謝物的測定相結合應用於診斷工具中的先決條件。在本發明的方法中，本發明顯示出內源參比代謝物或持家代謝物的子集確實存在，並且對於這些代謝物來說，水平的分布在確定限度內保持恆定，或具有令人吃驚地不依賴於任何具體樣品、對象的生理狀況、樣品建立和組織的某些平均值和標準偏差。因此，本發明為歸一化代謝物數據的難題提供了通用方法和新的解決方案，提供了產生內源參比代謝物的通用方法，提供了使用內源參比代謝物的方法以及內源參比化合物和代謝物的名單。本發明的另一個目的，是通過產生並提供用於對代謝物和代謝物組學測定中的相對信號強度進行歸一化的新的內源標準品的名單，提供用於將這些標準品應用於歸一化並因此應用於代謝物定量測定和診斷的方法，以致力於並解決上面概述的代謝物組學數據歸一化和數據應用中的問題。本發明提供了對代謝物組學數據進行比較、定量和歸一化以及因此應用它們的解決方案，所述代謝物組學數據的產生是通過使用包括但不限於質譜術(MQ、特別是MS技術例如MALDI、ESI、大氣壓化學電離(APCI)和其他方法來定量內源代謝物，使用MS技術或與分離(LC-MS、LC-NMR、GC-MS, CE-MS)偶聯的可選方法來確定代謝物濃度，隨後進行特徵選擇和/或特徵到分類物的組合，包括至少兩種分子或相同或不同分子的至少兩種被分析物的分子數據，以及對從不同對象、不同物種、不同取樣時間點、由不同人處理和在不同實驗條件下獲得的這些數據進行比較。我們證實了內源參比代謝物組在來自不同物種、不同組織和建立條件的樣品間令人吃驚地顯示出濃度的最小變差。我們還演示了在疾病狀態表徵或診斷中的應用。因此，本發明提供了強有力的對照代謝物，其在各種物種、動物模型、健康狀況、樣品類型、樣品建立和實驗設置、組織類型或體液、樣品處理和測定條件以及內含物分析測定中令人吃驚地顯示出幾乎不變的水平，允許對代謝物特徵進行歸一化、鑑定並應用於不同的生物學狀態，或與不同疾病、這些疾病相應的等級及其在人類或哺乳動物模型系統中療法的響應相關聯，而不論使用何種實驗設置和測定平臺。本發明還涉及將代謝物測量值用於例如診斷、分類或鑑定疾病，對將來的發展預後，辨別各種疾病狀態，控制治療方式或治療的時間長度，控制藥物攝取的結果或不同內源藥物濃度的結果或由實驗條件引起的對內源代謝物水平的任何結果。它提供了參比點和適合的基礎值，用於鑑定和識別與疾病相關的代謝變化，並因此可應用於診斷和治療檢測。代謝物測量值的使用依賴於在體液、細胞和組織中檢測或測量代謝物的差異濃度的能力。被分析的代謝物包括以與目標生物表型相關的方式被差異檢測的代謝物。在樣品或對象的細胞、組織或體液中測定一種或多種濃度有差異的代謝物的代謝物水平，然後直接使用一種或多種被分析物的代謝物濃度水平，或者在測定多種被分析物的情況下，對它們進行相互比較來使用。後一種情況的一個非限制性實例是測定兩個樣品的代謝物濃度水平，然後使用一種與另一種的比率。當將水平針對參比值進行歸一化時，細胞、組織、體液中以及不同樣品和/或來源的樣本之間和跨實驗或實驗測量日期的代謝物水平的比較得到改進。這可以被視為歸一化至單一標度。例如但不限於當使用代謝物組學或具有多個探針的代謝物組學試劑盒測定代謝物水平時，歸一化的使用允許直接進行測定之間的比較，或者在多孔板上測定的情況下進行板之間的比較。「質譜術」(MQ是用於測量和分析分子的技術，其涉及將靶分子片段化，然後根據片段的質量/電荷比分析片段，以產生用作「分子指紋」的質譜圖。通過測定物體吸收電磁能的波長的手段來進行物體的質量/電荷比的確定。有幾種常用於測定離子的質量電荷比的方法，其中一些測量離子軌道與電磁波的相互作用，其他的測量離子通過給定距離所花費的時間，或二者的組合。來自這些片段質量測量的數據可以針對資料庫進行搜索，以獲得靶分子的決定性鑑定。質譜術也廣泛用於其他化學領域，例如石油化學或藥物質量控制等寸。
「離子」是通過向原子添加電子或從原子移除電子而形成的帶電物體。「質譜圖」是由質譜儀產生的數據圖，典型包含χ-軸上的m/z值和y_軸上的強度值。術語「m/z」是指用離子的質量數除以其絕對電荷數而形成的無量綱的數量值。長期以來，它被稱為「質荷」比。當在本文中使用時，術語「代謝物」是指細胞、生物體、組織的，或存在於體液中和從上面提到的來源獲得的提取物中的內源有機化合物，其具有典型低於1500道爾頓的分子量。代謝物的典型實例是糖類、脂類、磷脂、鞘脂類和鞘磷脂、胺基酸、膽留醇、留類激素和氧化留醇，以及其他化合物例如收集在人類代謝物資料庫[Wishart DS等，HMDB 人類代謝 ^1 (HMDB :the Human Metabolome Database), Nucleic Acids Res. 2007 Jan ；35(^ 據庫版):D521-6 (參見httD: //www, hmdb. ca/) 1和其他資料庫和文獻中的化合物。這包括通過代謝或通過代謝過程產生的任何物質和參與代謝的任何物質。術語「代謝」是指在生物體的組織內發生的化學變化，包括「合成代謝」和「分解代射」。合成代謝是指分子的生物合成或形成，分解代射是指分子的分解。在本發明的範圍內所理解的「代謝物組學」是指通過多種方法對幾種(兩千種)代謝物進行的全面定量測量，所述方法例如但不限於質譜術，液相色譜、氣相色譜和其他分離方法與質譜術或核磁共振(NMR)的偶聯。基質是指用於分析或樣品建立的樣品類型，例如體液(血漿、血液)、不同組織(例如腦和肝臟)、來自生物體的不同部分例如從植物等獲得的葉與根的比較。不同的基質也可以包括同樣的組織或體液類型，但是來自於不同物種，例如大鼠血漿與人類血漿的比較。在本發明的情形中，生物標誌物是特徵，包含至少一種被測量和評估的代謝物的數據，其可用作生物過程、病理過程或對與疾病狀態相關的治療幹預或相關治療的響應的指示物。當在本文中使用時，組合生物標誌物可以選自至少兩種小的內源分子和代謝物。被分析物是指被分析的化學實體或化合物的混合物。受限於技術(質譜術)對雙鍵位置、構型不同的結構異構體(例如磷脂或甘油三酯中脂肪酸殘基的位置)的結構解析力，因此一種被分析物可能在形式上包括一種以上代謝物。術語持家代謝物或被分析物、參比或對照代謝物在本發明中可以互換，並且是指當對具有各種生理狀況、各種健康狀態或療法或先期治療的不同對象的不同樣品進行比較時，在幾種樣品間量和濃度水平變差小的代謝物和被分析物。因此，對照、參比或持家代謝物是在幾種樣品中濃度變化最小並因此可用作內源參比代謝物的代謝物。因此，這些內源參比代謝物能夠補償與代謝物組學中的技術設置、樣品操作、實驗建立和隨機波動相關的可變性。內源參比代謝物優選不以統計學顯著的水平(例如ρ-值小於0. 05和/或q_值小於0. 05)差異存在。示例性的窒息特異性內源參比代謝物描述在下面的詳細說明和實驗部分中。當在本文中使用時，術語「疾病特異性內源參比代謝物」是指與未患病生物體相比，不差異存在或差異濃縮在患病生物體中的代謝物。例如術語「窒息特異性內源參比代謝物」是指在窒息生物體與未窒息生物體中相比具有低變化性的相同濃度水平的代謝物。當在本文中使用時，術語「靶代謝物」是指在不同條件或不同治療下，例如患病生物體與未患病生物體相比、在治療的生物體與未治療生物體中相比等，差異存在或差異濃
45縮的代謝物。例如，術語「窒息特異性代謝物」是指在窒息生物體與未窒息生物體中相比差異存在或差異濃縮的代謝物。在本說明書和權利要求書中的術語「樣品」以其最廣泛的意義使用。一方面，它意味著包括樣本或培養物。有兩方面，它意味著包括生物和環境樣品兩者。樣品可以包括合成來源的樣本。生物樣品可以是動物包括人類的流體、固體(例如糞便)或組織，以及液體和固體食品和飼料製品和成分，例如乳製品、蔬菜、肉類和肉類副產品和垃圾。生物樣品可以從所有各種不同類型的馴養動物以及未馴養或野生動物獲得，包括但不限於例如有蹄類、熊類、 魚類、嚙齒類動物等。生物樣品可以包含適合於檢測所需生物標誌物的任何生物材料，並可以包含來自對象的細胞和/或非細胞材料。樣品可以從任何適合的生物組織或流體例如組織、血液、血漿、尿液或腦脊液(CSF)、植物提取物或加工過的生物材料(例如食品)來分離。當在本文中使用時，術語「細胞」是指任何真核或原核細胞(例如細菌細胞例如大腸桿菌、酵母細胞、哺乳動物細胞、鳥類細胞、兩棲動物細胞、植物細胞、魚類細胞和昆蟲細胞)，無論位於體外還是體內。當在本文中使用時，術語「檢測可以描述發現或察覺或特異性觀察可檢測標記或未標記成分的一般性行動。歸一化在本發明的背景中理解的歸一化是指通過減少或消除技術變異性使不同測定的代謝物組學數據可比的此方法。在這種比較性分析中，歸一化對於補償分離技術的變差、初始定量誤差、先前化學或酶修飾中的試管間變差和其他實驗變差來說，是必需的。本發明的方法的示意圖顯示如下
步驟1: 生物樣品獲得步驟 2:
原始數據(生物分子的濃度)的測量和在資料庫中的存放
步驟3:
來自資料庫的原始數據的預處理
權利要求
1.一種用於將對應於哺乳動物對象的生物樣品中所選靶代謝物的量和/或濃度的強度數據進行歸一化的方法，其中所述強度數據使用多種內源參比代謝物通過代謝物組學分析方法獲得，所述方法包含對所述生物樣品中的所述所選靶代謝物執行至少一種體外代謝物組學分析方法； 同時在同一樣品中執行多種內源參比代謝物或其衍生物的定量分析，其中所述內源參比代謝物是生物樣品中以基本上恆定的水平存在於對象中的化合物；其中所述內源參比代謝物或其衍生物具有小於1500Da的分子質量，並且選自胺基酸，特別是精氨酸、天冬氨酸、瓜氨酸、穀氨酸、穀氨醯胺、亮氨酸、異亮氨酸、組氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、犬尿氨酸；苯硫基氨甲醯基胺基酸(PTC-胺基酸)，特別是PCT-精氨酸、PTC-穀氨醯胺、PTC-組氨酸、PTC-甲硫氨酸、PTC-鳥氨酸、PTC-苯丙氨酸、PTC-脯氨酸、PTC-絲氨酸、PTC-色氨酸、PTC-酪氨酸、PTC-纈氨酸；二甲基精氨酸，特別是N，N- 二甲基-L-精氨酸；羧酸，即 15 (S)-羥基-5Z，8Z，11Z，13E- 二十碳四烯酸[(5Z,8Z, 11Z，13E，15 -15-羥基二十碳-5，8，11，13-四烯酸]、琥珀酸；肉毒鹼類；在醯基殘基中具有1至20個碳原子的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有3至 20個碳原子並且在醯基殘基中具有1至4個雙鍵的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有1至20 個碳原子並且在醯基殘基中具有1至3個OH基的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有3至20 個碳原子並在醯基殘基中具有1至4個雙鍵和1至3個OH基的醯基肉毒鹼； 磷脂類，特別是在醯基殘基中具有1至30個碳原子的溶血磷脂醯膽鹼(單醯基磷脂醯膽鹼)；在醯基殘基中具有3至30個碳原子並在醯基殘基中具有1至6個雙鍵的溶血磷脂醯膽鹼；在醯基殘基中具有總共1至50個碳原子的磷脂醯膽鹼(二醯基磷脂醯膽鹼)；在醯基殘基中具有總共3至50個碳原子並在醯基殘基中具有總共1至8個雙鍵的磷脂醯膽鹼； 鞘磷脂類，特別是在醯基鏈中總碳原子數為10至30的神經鞘磷脂；在醯基鏈中總碳原子數為10至30 並具有1至5個雙鍵的神經鞘磷脂；在醯基殘基中總碳原子數為10至30的羥基神經鞘磷脂；在醯基殘基中總碳原子數為10至30並具有1至5個雙鍵的羥基神經鞘磷脂； 前列腺素類，即6-酮基-前列腺素Fl α、前列腺素D2 ； 腐胺； 並且其中每種所述所選靶代謝物的所述檢測到的強度與所述內源參比代謝物的所述強度相關。
2.權利要求1的方法，其中對靶和內源參比代謝物的多個強度進行數學預處理，特別是變換例如使用算法、廣義化算法、冪變換。
3.權利要求1或2的方法，其中將內源參比代謝物的多個強度歸併成一個參比值。
4.權利要求3的方法，其中通過計算幾何平均值、算術平均值、中位數值、權重算數平均值將內源參比代謝物的多個強度歸併成一個參比值。
5.權利要求1至4任一項的方法，其中在線性強度的情況下形成靶代謝物的每個強度與測定到的參比值的比率，或者在對數強度的情況下從每個靶代謝物強度中減去測定到的參比值。
6.權利要求1至5任一項的方法，其中所述代謝物組學分析方法包含通過質譜術 (MS)、特別是MS技術例如基質輔助雷射解吸/電離(MALDI)、電噴霧電離(ESI)、大氣壓化學電離(APCI)、任選與MS偶聯的1H-J3C-和/或31P-核磁共振波譜(NMR)產生用於為內源代謝物定量的強度數據，通過使用與分離技術，特別是液相色譜(LC-MQ、氣相色譜 (GC-MS)或毛細管電泳(CE-MQ偶聯的MS技術和/或方法來測定代謝物濃度。
7.權利要求1至6任一項的方法，其中所述內源參比代謝物選自 15 (S)-羥基-5Z,8Z,11Z,13E- 二十碳四烯酸6-酮基-前列腺素Fl α 不對稱二甲基精氨酸精氨酸 PTC-精氨酸天冬氨酸肉毒鹼(游離)癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼)癸烯醯基肉毒鹼癸二烯醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼]十二烯醯基肉毒鹼十二烷二醯基肉毒鹼十四醯基肉毒鹼十四烯醯基肉毒鹼[肉豆蔻醯基肉毒鹼]3-羥基十四烯醯基肉毒鹼[3-羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]3-羥基十四碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十四醯基肉毒鹼[羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]十八碳醯基肉毒鹼[硬脂醯基肉毒鹼]十八碳烯醯基肉毒鹼[油醯肉毒鹼]3-羥基十八碳烯醯基肉毒鹼[3-羥基油醯肉毒鹼]乙醯肉毒鹼丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼丁烯醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼異戊醯基肉毒鹼/2-甲基丁醯肉毒鹼/戊醯基肉毒鹼甲基巴豆醯基肉毒鹼/3-甲基-巴豆醯基肉毒鹼戊二酸單醯基肉毒鹼/羥基己醯基肉毒鹼戊二酸單醯基肉毒鹼/羥基己醯基肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼3-羥基異戊醯基肉毒鹼/3-羥基-2-甲基丁醯基肉毒鹼己醯基肉毒鹼己烯醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼壬醯基肉毒鹼瓜氨酸肌酸酐穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺穀氨酸組氨酸PTC-組氨酸犬尿氨酸亮氨酸醯基殘基為C14:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C16:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C16:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18:2的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C20:3的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C20:4的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C24:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C28:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C28:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C6:0的溶血磷脂醯膽鹼 PTC-甲硫氨酸鳥氨酸 PTC-鳥氨酸二醯基殘基總和為C24:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C26:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C28:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40:6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44:6的磷脂醯膽鹼前列腺素D2 苯丙氨酸 PTC-苯丙氨酸脯氨酸 PTC-脯氨酸腐胺絲氨酸 PTC-絲氨酸醯基殘基總和為C14:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22:2的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20:2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22:3的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C26:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C26:l的神經鞘磷脂琥珀酸總二甲基精氨酸ADMA+SDMA的總和色氨酸PTC-色氨酸酪氨酸纈氨酸PTC-纈氨酸亮氨酸+異亮氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/ 烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。
8.權利要求1至7任一項的方法，其中這樣的代謝物被用作根據統計學穩定性量度顯示出穩定性的內源參比代謝物，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數 (CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geN0rm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)。
9.權利要求1至8任一項的方法，其中所述內源參比代謝物根據至少2種統計學穩定性量度顯示出穩定性，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說選自PTC-精氨酸肉毒鹼(游離) 癸烯醯基肉毒鹼癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼) 十二烯醯基肉毒鹼十二烷二醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼] 十四醯基肉毒鹼3-羥基十四醯基肉毒鹼[羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]3-羥基十八碳烯醯基肉毒鹼[3-羥基油醯肉毒鹼]丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼3-羥基異戊醯基肉毒鹼/3-羥基-2-甲基丁醯基己烯醯基肉毒鹼己醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺PTC-組氨酸醯基殘基為C14:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C28:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C28:1的溶血磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C24:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C26:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44:6的磷脂醯膽鹼苯丙氨酸 PTC-苯丙氨酸脯氨酸醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20:2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C14:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22:2的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:l的羥基神經鞘磷脂琥珀酸 PTC-色氨酸纈氨酸 PTC-纈氨酸亮氨酸+異亮氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/ 烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。
10.權利要求1至8任一項的方法，其中所述內源參比代謝物根據至少3種統計學穩定性量度顯示出穩定性，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說選自 肉毒鹼(游離)癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼)十二烷二醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼己醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺PTC-組氨酸醯基殘基為C14:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C28:1的溶血磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C26:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44:6的磷脂醯膽鹼醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20:2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:l的羥基神經鞘磷脂纈氨酸 PTC-纈氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/ 烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。
11.權利要求1至8任一項的方法，其中所述內源參比代謝物根據所有統計學穩定性量度顯示出穩定性，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值 (rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說是二醯基殘基總和為C42:6的磷脂醯膽鹼， 其中名稱「C42 6」表示醯基殘基的鏈長，42表示醯基殘基中的總碳原子數，且6表示殘基中的總雙鍵數。
12.權利要求1至11任一項的方法，其中所述多種內源代謝物包含2至80種、特別是 2至60種、優選2至50種、優選2至30種、更優選2至10種、特別優選2至10種、優選3 至5種內源代謝物。
13.多種化合物或其衍生物在代謝物組學分析方法中作為內源參比代謝物的應用，其中所述化合物具有小於1500Da的分子質量，其中所述內源參比代謝物選自胺基酸，特別是精氨酸、天冬氨酸、瓜氨酸、穀氨酸、穀氨醯胺、亮氨酸、異亮氨酸、組氨酸、鳥氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、絲氨酸、色氨酸、酪氨酸、纈氨酸、犬尿氨酸；苯硫基氨甲醯基胺基酸(PTC-胺基酸)，特別是PCT-精氨酸、PTC-穀氨醯胺、PTC-組氨酸、PTC-甲硫氨酸、PTC-鳥氨酸、PTC-苯丙氨酸、PTC-脯氨酸、PTC-絲氨酸、PTC-色氨酸、PTC-酪氨酸、PTC-纈氨酸；二甲基精氨酸，特別是N，N- 二甲基-L-精氨酸；羧酸，即 15 (S)-羥基-5Z，8Z，11Z，13E- 二十碳四烯酸[(5Z,8Z, 11Z，13E，15 -15-羥基二十碳-5，8，11，13-四烯酸]、琥珀酸；肉毒鹼類；在醯基殘基中具有1至20個碳原子的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有3至 20個碳原子並且在醯基殘基中具有1至4個雙鍵的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有1至20 個碳原子並且在醯基殘基中具有1至3個OH基的醯基肉毒鹼；在醯基殘基中具有3至20 個碳原子並在醯基殘基中具有1至4個雙鍵和1至3個OH基的醯基肉毒鹼； 磷脂類，特別是在醯基殘基中具有1至30個碳原子的溶血磷脂醯膽鹼(單醯基磷脂醯膽鹼)；在醯基殘基中具有3至30個碳原子並在醯基殘基中具有1至6個雙鍵的溶血磷脂醯膽鹼；在醯基殘基中具有總共1至50個碳原子的磷脂醯膽鹼(二醯基磷脂醯膽鹼)；在醯基殘基中具有總共3至50個碳原子並在醯基殘基中具有總共1至8個雙鍵的磷脂醯膽鹼； 鞘磷脂類，特別是在醯基鏈中總碳原子數為10至30的神經鞘磷脂；在醯基鏈中總碳原子數為10至30 並具有1至5個雙鍵的神經鞘磷脂；在醯基殘基中總碳原子數為10至30的羥基神經鞘磷脂；在醯基殘基中總碳原子數為10至30並具有1至5個雙鍵的羥基神經鞘磷脂； 前列腺素類，即6-酮基-前列腺素Fl α、前列腺素D2 ； 腐胺。
14.權利要求13的應用，其中所述代謝物組學分析方法包含通過質譜術(MQ、特別是MS技術例如基質輔助雷射解吸/電離(MALDI)、電噴霧電離(ESI)、大氣壓化學電離 (APCI)、任選與MS偶聯的1H-J3C-和/或Mp-核磁共振波譜(NMR)對內源靶和內源參比代謝物進行定量，通過使用與分離技術，特別是液相色譜(LC-MQ、氣相色譜(GC-MQ或毛細管電泳(CE-MQ偶聯的MS技術和/或方法來測定代謝物濃度。
15.權利要求13或14的應用，其中所述內源參比代謝物選自 15 (S)-羥基-5Z,8Z,11Z,13E- 二十碳四烯酸 6-酮基-前列腺素Fl α 不對稱二甲基精氨酸精氨酸 PTC-精氨酸天冬氨酸肉毒鹼(游離)癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼)癸烯醯基肉毒鹼癸二烯醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼]十二烯醯基肉毒鹼十二烷二醯基肉毒鹼十四醯基肉毒鹼十四烯醯基肉毒鹼[肉豆蔻醯基肉毒鹼]3-羥基十四烯醯基肉毒鹼[3-羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]3-羥基十四碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十四醯基肉毒鹼[羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]十八碳醯基肉毒鹼[硬脂醯基肉毒鹼]十八碳烯醯基肉毒鹼[油醯肉毒鹼]3-羥基十八碳烯醯基肉毒鹼[3-羥基油醯肉毒鹼]乙醯肉毒鹼丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼丁烯醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼異戊醯基肉毒鹼/2-甲基丁醯肉毒鹼/戊醯基肉毒鹼甲基巴豆醯基肉毒鹼/3-甲基-巴豆醯基肉毒鹼戊二酸單醯基肉毒鹼/羥基己醯基肉毒鹼戊二酸單醯基肉毒鹼/羥基己醯基肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼3-羥基異戊醯基肉毒鹼/3-羥基-2-甲基丁醯基己醯基肉毒鹼己烯醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼壬醯基肉毒鹼瓜氨酸肌酸酐穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺穀氨酸組氨酸PTC-組氨酸犬尿氨酸亮氨酸醯基殘基為C14:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C16:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C16:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C18:2的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C20:3的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C20:4的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C24:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C28:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C28:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C6:0的溶血磷脂醯膽鹼 PTC-甲硫氨酸鳥氨酸 PTC-鳥氨酸二醯基殘基總和為C24:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C26:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C28:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40:3的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C40:6的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 2的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 3的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44:6的磷脂醯膽鹼前列腺素D2 苯丙氨酸 PTC-苯丙氨酸脯氨酸 PTC-脯氨酸腐胺絲氨酸 PTC-絲氨酸醯基殘基總和為C14:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22:2的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20:2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22:3的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C26:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C26:l的神經鞘磷脂琥珀酸總二甲基精氨酸ADMA+SDMA的總和色氨酸PTC-色氨酸酪氨酸纈氨酸PTC-纈氨酸亮氨酸+異亮氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/ 烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。
16.權利要求13至15任一項的應用，其中所述內源參比代謝物根據統計學穩定性量度顯示出穩定性，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值 (rho)ο
17.權利要求13至16任一項的應用，其中所述內源參比代謝物根據至少2種統計學穩定性量度顯示出穩定性，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說選自PTC-精氨酸肉毒鹼(游離) 癸烯醯基肉毒鹼癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼) 十二烯醯基肉毒鹼十二烷二醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼] 十四醯基肉毒鹼3-羥基十四醯基肉毒鹼[羥基肉豆蔻醯基肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六碳二烯醯基肉毒鹼3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼]3-羥基十八碳烯醯基肉毒鹼[3-羥基油醯肉毒鹼] 丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼3-羥基異戊醯基肉毒鹼/3-羥基-2-甲基丁醯基己烯醯基肉毒鹼己醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺PTC-組氨酸醯基殘基為C14:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C28:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C28:1的溶血磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C24:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C26:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C30:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C34:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:4的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C30:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C34:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:1的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44:6的磷脂醯膽鹼苯丙氨酸 PTC-苯丙氨酸脯氨酸醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C18:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20:2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C14:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:l的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C22:2的羥基神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:l的羥基神經鞘磷脂琥珀酸 PTC-色氨酸纈氨酸 PTC-纈氨酸亮氨酸+異亮氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/ 烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。
18.權利要求13至17任一項的應用，其中所述內源參比代謝物根據至少3種統計學穩定性量度顯示出穩定性，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值(rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說選自 肉毒鹼(游離)癸醯基肉毒鹼(反丁烯二醯基肉毒鹼)十二烷二醯基肉毒鹼十二醯基肉毒鹼[月桂醯肉毒鹼]十六烯醯基肉毒鹼[棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六烯醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚油醯基肉毒鹼]3-羥基十六碳醯基肉毒鹼[3-羥基棕櫚醯基肉毒鹼] 丙烯醯肉毒鹼羥基丙醯肉毒鹼3-羥基丁醯肉毒鹼/丙二酸單醯肉毒鹼甲基戊二酸單醯基肉毒鹼己醯基肉毒鹼庚二醯基肉毒鹼辛烯醯基肉毒鹼辛醯基肉毒鹼穀氨醯胺PTC-穀氨醯胺PTC-組氨酸醯基殘基為C14:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:0的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C26:1的溶血磷脂醯膽鹼醯基殘基為C28:1的溶血磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C26:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C32:2的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C36:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C38:0的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:l的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:5的磷脂醯膽鹼二醯基殘基總和為C42:6的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C38:4的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C40:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42:0的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C42 5的磷脂醯膽鹼醯基-烷基殘基總和為C44:6的磷脂醯膽鹼醯基殘基總和為C16:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C16:l的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C20:2的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:0的神經鞘磷脂醯基殘基總和為C24:l的羥基神經鞘磷脂纈氨酸 PTC-纈氨酸其中名稱「殘基Cn:m」或「殘基總和Cn:m」表示醯基/烷基殘基的鏈長，η表示醯基/ 烷基殘基中的總碳原子數，且m表示殘基中的總雙鍵數。
19.權利要求13至18任一項的應用，其中所述內源參比代謝物根據所有統計學穩定性量度顯示出穩定性，所述統計學穩定性量度選自原始強度數據的變差係數(CV)、對數強度數據的標準偏差(SD)、geNorm算法的穩定性量度(M)或NormFinder算法的穩定性量度值 (rho)，和/或這樣的內源參比代謝物具體來說是二醯基殘基總和為C42:6的磷脂醯膽鹼， 其中名稱「C42 6」表示醯基殘基的鏈長，42表示醯基殘基中的總碳原子數，且6表示殘基中的總雙鍵數。
20.權利要求13至19任一項的應用，其中所述多種內源代謝物包含2至80種、特別是 2至60種、優選2至50種、優選2至30種、更優選2至10種、特別優選2至10種、優選3 至5種內源代謝物。
全文摘要
本發明涉及內源參比代謝物的應用，以及將對應於哺乳動物對象的生物樣品中所選靶代謝物的量和/或濃度的強度數據進行歸一化的方法，其中所述強度數據使用一種或多種內源參比代謝物通過代謝物組學分析方法獲得，所述方法包含對所述生物樣品中的所述所選靶代謝物執行至少一種體外代謝物組學分析方法，同時在同一樣品中執行一種或多種內源參比代謝物或其衍生物的定量分析，其中所述內源參比代謝物是生物樣品中以基本上恆定的水平存在於對象中的化合物；並且其中所述內源參比代謝物或其衍生物具有小於1500Da的分子質量。
文檔編號G06F19/24GK102473208SQ201080030109
公開日2012年5月23日 申請日期2010年6月23日 優先權日2009年7月2日
發明者戴維·伊諾特, 漢斯-彼得·迪格內, 特雷瑟·考爾, 瑪緹亞斯·克爾, 瑪緹亞斯·科勒 申請人:百奧科瑞茨生命科學公司