用於提高抗體穩定性的緩衝液製劑的製作方法
2023-05-11 20:32:56 3
本申請要求2013年10月16日提交的美國臨時申請號61/891,485的優先權，其內容通過引用以其整體結合到本文中並用於所有目的。序列表的引用本申請包括作為創建於2014年10月10日的名稱為BufferedAdalimumabST25.txt的文本文件電子提交的序列表，其大小為16,000位元組。該序列表通過引用結合到本文中。發明領域本發明總體上涉及抗體製劑化學的領域。更具體地，本發明涉及用於抗體貯存的緩衝的製劑，其提高抗體的熱穩定性、構象和膠體穩定性，從而提高抗體的長期貯存。發明背景本說明書全文引用了各種出版物，包括專利、公布的申請、登記號、技術論文和學術論文。這些引用的出版物各自通過引用以其整體結合到本文中並用於所有目的。作為生物製劑價格競爭與創新法案(BPCIA)的一部分，如果數據顯示生物藥物產品(自活的生物體產生或衍生)尤其是與已經批准的生物產品"高度類似的"，則所述生物藥物產品可表示為"生物類似的"。生物類似的產品應至少保留美國食品和藥品管理局(U.S.FoodandDrugAgency)批准的生物產品的生物功能和治療功效。然而，生物類似的產品可與已批准的生物產品不同地配製。該製劑可改善生物藥物產品的穩定性和貯存期，還可改善在治療特定疾病或病況中的功效。該製劑還可改善其它給藥方面，包括減少患者不適，或減少在給予已批准的生物產品時患者可能經歷的其它不利作用。抗體分子可用作生物藥物，並且許多這樣的抗體經批准用於人。抗體分子可作為生物類似物(biosimilar)而產生，從而重新配製。本領域中對高品質的抗體生物類似物仍存在需要。發明簡述本發明特徵在於緩衝的抗體製劑，其包含(a)抗體。所述抗體可特異性結合腫瘤壞死因子α。所述抗體可含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈。除了抗體之外，所述製劑還包含(b)水性緩衝液，其包含約0.7mM-約1.3mM的乙酸鹽，優選乙酸鈉三水合物，約200mM-約206mM的甘露醇，約16mM-約22mM的冰乙酸和約24mM-約28mM的氯化鈉；和(c)約0.07%(v/v)-約0.15%(v/v)的非離子表面活性劑例如聚山梨醇酯80。所述緩衝的抗體製劑具有約5.1-約5.3的pH，優選約5.2。在一些方面，所述製劑包含約30mg-約50mg的所述抗體。在一些優選的方面，所述製劑包含約35mg-約45mg的所述抗體。在一些優選的方面，所述製劑包含約37mg-約43mg的所述抗體。在一些優選的方面，所述製劑包含約40mg的所述抗體。所述緩衝液可包含約0.8mM-約1.2mM的乙酸鈉三水合物，或約0.9mM-約1.1mM的乙酸鈉三水合物，或約1mM的乙酸鈉三水合物。所述緩衝液可包含約201mM-約205mM的甘露醇，或約202mM-約204mM的甘露醇，或約203mM的甘露醇。所述緩衝液可包含約17mM-約21mM的冰乙酸，或約18mM-約20mM的冰乙酸，或約19mM的冰乙酸。所述緩衝液可包含約25mM-約27mM的氯化鈉，或約26mM的氯化鈉，或約27mM的氯化鈉，或約26.35mM的氯化鈉。所述緩衝的抗體製劑包含非離子表面活性劑，其優選是聚山梨醇酯80。在一些方面，所述製劑包含約0.08%(v/v)-約0.12%(v/v)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述製劑包含約0.09%(v/v)-約0.11%(v/v)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述製劑包含約0.1%(v/v)的聚山梨醇酯80。在一個詳細的方面，緩衝的抗體製劑包含(a)約30mg-約50mg的抗體，所述抗體含有包含SEQ.IDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQ.IDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；(b)緩衝液，所述緩衝液包含約1mM的乙酸鹽，優選乙酸鈉三水合物，約203mM的甘露醇，約19mM的冰乙酸和約26.35mM的氯化鈉；和(c)約0.1%(按體積計)的聚山梨醇酯80。所述緩衝的抗體製劑具有約5.1-約5.3的pH，優選約5.2。在一些優選的方面，所述製劑包含約35mg-約45mg的抗體。在一些優選的方面，所述製劑包含約37mg-約43mg的抗體。在一些優選的方面，所述製劑包含約40mg的抗體。所述緩衝的抗體製劑可用作藥物，並可用於治療方法。例如，所述緩衝的抗體製劑可用於治療關節炎。在一些方面，所述緩衝的抗體製劑可用於治療類風溼性關節炎，或幼年性特發性關節炎，或銀屑病關節炎。在一些方面，所述緩衝的抗體製劑可用於治療強直性脊柱炎。在一些方面，所述緩衝的抗體製劑可用於治療克羅恩病。在一些方面，所述緩衝的抗體製劑可用於治療潰瘍性結腸炎。在一些方面，所述緩衝的抗體製劑可用於治療斑塊狀銀屑病。所述治療方法包括用於治療關節炎的方法，所述關節炎包括類風溼性關節炎、幼年性特發性關節炎和銀屑病關節炎。所述治療方法還包括用於治療強直性脊柱炎的方法、用於治療克羅恩病的方法、用於治療斑塊狀銀屑病的方法和用於治療潰瘍性結腸炎的方法。在一些方面，治療方法包括給予關節炎(包括類風溼性關節炎、幼年性特發性關節炎或銀屑病關節炎)患者有效治療患者的關節炎的量的本文所述或舉例說明的緩衝的抗體製劑。在一些方面，治療方法包括給予強直性脊柱炎患者有效治療患者的強直性脊柱炎的量的本文所述或舉例說明的緩衝的抗體製劑。在一些方面，治療方法包括給予克羅恩病患者有效治療患者的克羅恩病的量的本文所述或舉例說明的緩衝的抗體製劑。在一些方面，治療方法包括給予潰瘍性結腸炎患者有效治療患者的潰瘍性結腸炎的量的本文所述或舉例說明的緩衝的抗體製劑。在一些方面，治療方法包括給予斑塊狀銀屑病患者有效治療患者的斑塊狀銀屑病的量的本文所述或舉例說明的緩衝的抗體製劑。所述緩衝的抗體製劑優選經皮下給予患者，例如，通過皮下注射。所述患者優選是人。本發明還提供藥盒，其可例如按照所述治療方法使用。因此，例如，所述藥盒通常包含本文所述或舉例說明的任何緩衝的抗體製劑和在治療方法中使用所述製劑的說明書。所述治療方法可以是用於治療關節炎的方法。所述治療方法可以是用於治療類風溼性關節炎的方法。所述治療方法可以是用於治療幼年性特發性關節炎的方法。所述治療方法可以是用於治療銀屑病關節炎的方法。所述治療方法可以是用於治療強直性脊柱炎的方法。所述治療方法可以是用於治療克羅恩病的方法。所述治療方法可以是用於治療潰瘍性結腸炎的方法。所述治療方法可以是用於治療斑塊狀銀屑病的方法。所述藥盒可包括用於將抗體製劑給予患者的裝置。所述裝置可包含注射器和針頭。所述裝置可包含導管。附圖簡述圖1顯示來自代表性的實驗系列1製劑條件的SE-UPLC色譜圖重疊。圖2顯示SE-UPLC%高分子量物質(HMWS)作為溶液pH的函數的趨勢。圖3顯示代表性的實驗系列1製劑條件的DSC溫譜圖。圖4顯示由緩衝液組成規定的50mg/ml蛋白濃度的製劑溶液的DLS和pH範圍。圖5顯示在應激穩定性實驗(55℃直至14天)的持續時間下阿達木單抗參考製劑的SE-UPLC色譜圖重疊。圖6顯示來自ONS-3010的實驗系列2製劑條件的代表性SE-UPLC色譜圖重疊。圖7顯示在應激條件下SE-UPLC聚集隨時間的趨勢。圖8顯示在應激條件下SE-UPLC片段化隨時間的趨勢。圖9顯示ONS-3010實驗系列3DLS結果。圖10顯示在應激穩定性實驗(55℃直至7天)的持續時間下阿達木單抗參考製劑的SE-UPLC色譜圖重疊。圖11顯示來自實驗系列3ONS-3010製劑條件的代表性SE-UPLC色譜圖重疊。圖12顯示在應激條件下實驗系列3SE-UPLC聚集隨時間的趨勢。圖13顯示在第0、1和2天，阿達木單抗參考製劑的55℃-孵育的樣品的CEX-HPLC色譜圖重疊。圖14顯示55℃-孵育直至2天的樣品的CEX-HPLC主峰百分比。圖15顯示55℃-孵育直至2天的樣品的CEX-HPLC酸性峰百分比。圖16顯示55℃-孵育直至2天的樣品的CEX-HPLC鹼性峰百分比。圖17顯示55℃應激的ONS-3010樣品的肽圖中異構化物質的總百分比(x軸是指製劑條件號)。圖18顯示55℃應激的ONS-3010樣品的肽圖中環化N-端肽的百分比(x軸是指製劑條件號)。圖19顯示55℃應激的ONS-3010樣品的肽圖中氧化甲硫氨酸肽的總百分比(x軸是指製劑條件號)。圖20顯示55℃應激的ONS-3010樣品的肽圖中脫醯胺肽的總百分比(x軸是指製劑條件號)。圖21顯示在37℃下孵育的阿達木單抗參考製劑樣品的SE-UPLC色譜圖重疊，時間為零和第28天。圖22顯示37℃-孵育的第28天樣品的SE-UPLC色譜圖重疊。圖23顯示ONS-3010被迫氧化研究肽圖中氧化甲硫氨酸-256肽的百分比(x軸是指製劑條件號)。上圖=全視圖，下圖=放大圖。圖24顯示ONS-3010被迫氧化研究肽圖中氧化甲硫氨酸-432肽的百分比(x軸是指製劑條件號)。上圖=全視圖，下圖=放大圖。圖25顯示2-8℃-孵育的第28天樣品的SE-UPLC色譜圖重疊。圖26顯示2-8℃-孵育5個月樣品的SE-UPLC色譜圖重疊。圖27顯示2-8℃-孵育12個月樣品的SE-UPLC色譜圖重疊，條件1和3。圖28顯示2-8℃-孵育18個月樣品的SE-UPLC色譜圖重疊，條件1和3。發明詳述涉及本發明各方面的各種術語用於整個說明書和權利要求書。這樣的術語具有其在本領域中的普通含義，除非另外指明。其它具體定義的術語應以與本文提供的定義一致的方式進行解釋。如本文所用，單數形式"一個"、"一種"和"所述"包括複數對象，除非明確另外說明。如本文所用，術語"包含"、"具有"和"包括"涵蓋更限制性的術語"基本上由……組成"和"由……組成"。術語受試者和患者可互換使用，並包括任何動物。受試者包括哺乳動物，包括伴侶和農用哺乳動物，以及齧齒動物，包括小鼠、兔和大鼠和其它齧齒動物。受試者優選為非人靈長類動物。受試者高度優選為人。根據本發明已觀察到，特異性結合腫瘤壞死因子α的ONS-3010的製劑，可用甘露醇和乙酸鹽緩衝，同時將氯化鈉減至最少，其中該緩衝液提高抗體的熱和膠體穩定性，甚至與目前批准用於患者的阿達木單抗的製劑相比更是如此。已觀察到，在用合適的鹽和緩衝液組分建立和維持約5.2的酸性pH中存在細微平衡。已觀察到，例如，高水平的鹽可誘導聚集和降解，這可通過降低鹽水平得到改善。因此，本公開內容的特徵在於用於抗體的緩衝的製劑，所述製劑包括包含緩衝液(包含乙酸鹽和甘露醇)以及非離子表面活性劑的水性載體，但具有最少的氯化鈉。在一些優選的方面，所述抗體特異性結合腫瘤壞死因子α上的表位，和所述表位可以是線性的或構象性的。在一些優選的方面，所述抗體含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈。在一些優選的方面，所述抗體含有包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈。優選地，所述抗體包含重鏈恆定結構域和/或輕鏈恆定結構域。在高度優選的方面，所述抗體含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈，其一個實例為ONS-3010。所述抗體的重鏈和輕鏈胺基酸序列可包含美國專利號6,090,382中的那些。優選地，所述抗體是全長抗體，包含可變區和恆定區兩者，儘管在一些方面，所述抗體可包含全長抗體的衍生物或片段或部分，其保留抗原結合特異性，和還優選保留全長抗體分子的大部分或全部親和力。所述抗體可包含翻譯後修飾(PTM)或部分，其可影響抗體活性或穩定性。所述抗體可被甲基化、乙醯化、糖基化、硫酸化、磷酸化、羧化和/或醯胺化，和可包含本領域眾所周知的其它部分。對於ONS-3010，常見的PTM包括N-糖基化、C-端變體(例如，賴氨酸的裂解、脯氨酸醯胺化)、N-端焦-E形成、氧化、異構化、脫醯胺化、琥珀醯亞胺形成、甘露糖基化、K98糖化和片段化。所述部分包括自然界通常存在於免疫球蛋白分子上的任何化學基團或基團組合，或通過重組表達系統包括原核和真核表達系統另外添加至抗體的任何化學基團或基團組合。所述製劑優選包含治療有效量的抗體。所述抗體可以是與水性緩衝液製劑相容的任何抗體。優選的抗體包含具有SEQ.IDNO:1的胺基酸序列的重鏈和具有SEQ.IDNO:2的胺基酸序列的輕鏈。治療有效量可改變，這取決於給予所述抗體時所治療的疾病或病況，和/或取決於所述抗體所給予的受試者的特徵，例如年齡、性別、身高、體重、疾病或病況的進展狀態或階段、之前給藥的數量和功效、給予受試者的其它治療劑和從業者已知的或在確定合適劑量時另外考慮的其它特性。優選地，治療有效量是有效治療類風溼性關節炎的量。在一些優選的方面，治療有效量是有效治療幼年性特發性關節炎、銀屑病關節炎、強直性脊柱炎、克羅恩病、斑塊狀銀屑病、潰瘍性結腸炎、炎性腸病、化膿性汗腺炎或難治性哮喘的量。所述製劑可包含約10mg-約70mg的抗體。在一些方面，所述製劑包含約20mg-約60mg的抗體。在一些方面，所述製劑包含約30mg-約50mg的抗體。在一些方面，所述製劑包含約35mg-約45mg的抗體。在一些方面，所述製劑包含約37mg-約43mg的抗體。在一些方面，所述製劑包含約38mg-約42mg的抗體。在一些方面，所述製劑包含約39mg-約41mg的抗體。在一些方面，所述製劑包含約30mg-約60mg的抗體。在一些方面，所述製劑包含約35mg-約55mg的抗體。在一些方面，所述製劑包含約40mg-約60mg的抗體。這些範圍包括限定該範圍的下限量和上限量。在一些方面，所述製劑包含約40mg的抗體。所述抗體優選用緩衝的水性載體配製，和所述載體優選包含水。所述緩衝的抗體製劑優選呈液體形式，和更優選呈適合於皮下給予的液體形式。因此，緩衝的製劑中水的量可按照可注射物(injectablebolus)的所需體積而改變。所述緩衝液包含乙酸鈉三水合物、甘露醇、氯化鈉、冰乙酸和非離子表面活性劑，和保持所述抗體製劑在酸性pH下。當在緩衝的製劑中貯存時，所述抗體在正常的貯存條件下在保質期中是穩定的(shelf-stable)。所述緩衝液可包含約0.1mM-約5mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.3mM-約3mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.5mM-約2mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.5mM-約1.5mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.6mM-約1.4mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.7mM-約1.5mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.7mM-約1.3mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.8mM-約1.2mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.8mM-約1.5mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.8mM-約1.1mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.9mM-約1.2mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.9mM-約1.4mM的乙酸鹽。在一些方面，所述緩衝液可包含約0.9mM-約1.1mM的乙酸鹽。這些範圍包括限定該範圍的下限量和上限量。在一些方面，所述緩衝液包含約1mM的乙酸鹽。乙酸鹽可包含任何合適的乙酸鹽。優選的乙酸鹽的非限制性實例包括乙酸鎂鹽、乙酸鉀鹽、乙酸鈣鹽、乙酸鋅鹽和乙酸鈉鹽。更優選的乙酸鹽包括無水乙酸鈉和乙酸鈉三水合物。乙酸鈉三水合物是高度優選的。所述緩衝液可包含約100mM-約300mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約110mM-約290mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約120mM-約280mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約150mM-約250mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約175mM-約225mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約180mM-約220mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約185mM-約215mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約190mM-約215mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約195mM-約210mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約197mM-約209mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約198mM-約208mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約198mM-約205mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約199mM-約207mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約200mM-約210mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約200mM-約207mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約200mM-約206mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約200mM-約205mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約200mM-約203mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約201mM-約205mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約201mM-約204mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約201mM-約203mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約202mM-約204mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約202mM-約203mM的甘露醇。在一些方面，所述緩衝液可包含約202mM-約206mM的甘露醇。這些範圍包括限定該範圍的下限量和上限量。在一些方面，所述緩衝液包含約203mM的甘露醇。所述緩衝液可包含約9mM-約30mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約10mM-約30mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約9mM-約29mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約10mM-約28mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約11mM-約27mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約12mM-約26mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約13mM-約25mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約14mM-約24mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約15mM-約23mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約15mM-約21mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約15mM-約20mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約16mM-約22mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約16mM-約20mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約17mM-約21mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約17mM-約20mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約18mM-約20mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約18mM-約19mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約18mM-約23mM的冰乙酸。在一些方面，所述緩衝液可包含約19mM-約20mM的冰乙酸。這些範圍包括限定該範圍的下限量和上限量。在一些方面，所述緩衝液包含約19mM的冰乙酸。所述緩衝液優選包括最少量的氯化鈉，和在一些方面，不包括氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約15mM-約36mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約16mM-約36mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約18mM-約34mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約20mM-約32mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約22mM-約30mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約23mM-約29mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約23mM-約27mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約24mM-約28mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約24mM-約30mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約25mM-約27mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約25mM-約28mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約25mM-約30mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約25.5mM-約27.5mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約25.3mM-約27.3mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約25.4mM-約27.4mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約25.35mM-約27.35mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約26mM-約30mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約26mM-約28mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約26mM-約27mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約26.3mM-約27.3mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約26.4mM-約27.4mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液可包含約26.3mM-約26.4mM的氯化鈉。這些範圍包括限定該範圍的下限量和上限量。在一些方面，所述緩衝液包含約26mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液包含約27mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液包含約26.3mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液包含約26.4mM的氯化鈉。在一些方面，所述緩衝液包含約26.35mM的氯化鈉。所述抗體製劑優選包含非離子表面活性劑。更優選地，所述非離子表面活性劑包含聚山梨醇酯80。包含抗體和水性緩衝液的所述抗體製劑優選包含約0.01%-約1%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.03%-約0.7%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.05%-約0.4%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.075%-約0.3%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.07%-約0.25%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.07%-約0.2%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.07%-約0.15%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.07%-約0.14%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.08%-約0.3%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.08%-約0.2%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.08%-約0.15%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.08%-約0.12%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.08%-約0.1%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.09%-約0.15%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.09%-約0.2%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.09%-約0.18%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.09%-約0.11%(按體積計)的聚山梨醇酯80。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.09%-約0.1%(按體積計)的聚山梨醇酯80。這些範圍包括限定該範圍的下限量和上限量。在一些方面，所述抗體製劑包含約0.1%(按體積計)的聚山梨醇酯80。所述抗體製劑優選被緩衝至酸性pH。所述製劑優選具有約4.8-約5.6的pH。在一些方面，所述製劑具有約4.9-約5.5的pH。在一些方面，所述製劑具有約5.0-約5.4的pH。在一些優選的方面，所述製劑具有約5.0-約5.3的pH。在一些優選的方面，所述製劑具有約5.0-約5.2的pH。在一些方面，所述製劑具有約5.1-約5.3的pH。在一些方面，所述製劑具有約5.1-約5.5的pH。在一些優選的方面，所述製劑具有約5.1-約5.2的pH。在一些優選的方面，所述製劑具有約5.1-約5.4的pH。在一些方面，所述製劑具有約5.2-約5.4的pH。在一些方面，所述製劑具有約5.2-約5.5的pH。在一些優選的方面，所述製劑具有約5.2-約5.3的pH。這些範圍包括限定該範圍的下限量和上限量。在一些方面，所述製劑具有約5.2的pH。在一些優選的方面，所述抗體製劑包含約35mg-約45mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其包含約0.7mM-約1.3mM的乙酸鈉三水合物、約200mM-約206mM的甘露醇、約16mM-約22mM的冰乙酸和約24mM-約28mM的氯化鈉；和約0.07%-約0.15%(按體積計)的聚山梨醇酯80，並具有約5.1-約5.3的pH。在一些方面，所述抗體製劑基本上由約35mg-約45mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其基本上由約0.7mM-約1.3mM的乙酸鈉三水合物、約200mM-約206mM的甘露醇、約16mM-約22mM的冰乙酸和約24mM-約28mM的氯化鈉組成；和約0.07%-約0.15%(按體積計)的聚山梨醇酯80組成，並具有約5.1-約5.3的pH。在一些方面，所述抗體製劑由約35mg-約45mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其由約0.7mM-約1.3mM的乙酸鈉三水合物、約200mM-約206mM的甘露醇、約16mM-約22mM的冰乙酸和約24mM-約28mM的氯化鈉組成；和約0.07%-約0.15%(按體積計)的聚山梨醇酯80組成，並具有約5.1-約5.3的pH。在任何這樣的實施方案中，所述抗體可以約37mg-約43mg或約38mg-約42mg或約39mg-約41mg或約40mg存在於所述製劑中。在一些優選的方面，所述抗體製劑包含約35mg-約45mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其包含約0.8mM-約1.2mM的乙酸鹽、約201mM-約205mM的甘露醇、約17mM-約21mM的冰乙酸和約25mM-約27mM的氯化鈉；和約0.08%-約0.15%(按體積計)的聚山梨醇酯80，和具有約5.1-約5.3的pH。在一些方面，所述抗體製劑基本上由約35mg-約45mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQ.IDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其基本上由約0.8mM-約1.2mM的乙酸鹽、約201mM-約205mM的甘露醇、約17mM-約21mM的冰乙酸和約25mM-約27mM的氯化鈉組成；和約0.08%-約0.15%(按體積計)的聚山梨醇酯80組成，和具有約5.1-約5.3的pH。在一些方面，所述抗體製劑由約35mg-約45mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其由約0.8mM-約1.2mM的乙酸鹽、約201mM-約205mM的甘露醇、約17mM-約21mM的冰乙酸和約25mM-約27mM的氯化鈉組成；和約0.08%-約0.15%(按體積計)的聚山梨醇酯80組成，和具有約5.1-約5.3的pH。在任何這樣的實施方案中，所述抗體可以約37mg-約43mg或約38mg-約42mg或約39mg-約41mg或約40mg存在於所述製劑中。乙酸鹽可包含任何合適的乙酸鹽。優選的乙酸鹽的非限制性實例包括乙酸鎂鹽、乙酸鉀鹽、乙酸鈣鹽、乙酸鋅鹽和乙酸鈉鹽。更優選的乙酸鹽包括無水乙酸鈉和乙酸鈉三水合物。乙酸鈉三水合物是高度優選的。在一些優選的方面，所述抗體製劑包含約39mg-約41mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其包含約0.9mM-約1.1mM的乙酸鹽、約202mM-約204mM的甘露醇、約18mM-約20mM的冰乙酸和約25.35mM-約26.35mM的氯化鈉；和約0.09%-約0.11%(按體積計)的聚山梨醇酯80，和具有約5.1-約5.3的pH。在一些方面，所述抗體製劑基本上由約39mg-約41mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQ.IDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其基本上由約0.9mM-約1.1mM的乙酸鹽、約202mM-約204mM的甘露醇、約18mM-約20mM的冰乙酸和約25.35mM-約26.35mM的氯化鈉組成；和約0.09%-約0.11%(按體積計)的聚山梨醇酯80組成，和具有約5.1-約5.3的pH。在一些方面，所述抗體製劑由約39mg-約41mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其由約0.9mM-約1.1mM的乙酸鹽、約202mM-約204mM的甘露醇、約18mM-約20mM的冰乙酸和約25.35mM-約26.35mM的氯化鈉組成；和約0.09%-約0.11%(按體積計)的聚山梨醇酯80組成，和具有約5.1-約5.3的pH。在任何這樣的實施方案中，所述抗體可以約37mg-約43mg或約38mg-約42mg或約39mg-約41mg或約40mg存在於所述製劑中。乙酸鹽可包含任何合適的乙酸鹽。優選的乙酸鹽的非限制性實例包括乙酸鎂鹽、乙酸鉀鹽、乙酸鈣鹽、乙酸鋅鹽和乙酸鈉鹽。更優選的乙酸鹽包括無水乙酸鈉和乙酸鈉三水合物。乙酸鈉三水合物是高度優選的。在一些優選的方面，所述抗體製劑包含約40mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其包含約1mM的乙酸鹽、約203mM的甘露醇、約19mM的冰乙酸和約26.35mM的氯化鈉；和約0.1%(按體積計)的聚山梨醇酯80，和具有約5.2的pH。在一些方面，所述抗體製劑基本上由約40mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其基本上由約1mM的乙酸鹽、約203mM的甘露醇、約19mM的冰乙酸和約26.35mM的氯化鈉組成；和約0.1%(按體積計)的聚山梨醇酯80組成，和具有約5.2的pH。在一些方面，所述抗體製劑由約40mg的抗體，其特異性結合腫瘤壞死因子α和含有包含SEQIDNO:1的胺基酸序列的重鏈和包含SEQIDNO:2的胺基酸序列的輕鏈；緩衝液，其由約1mM的乙酸鹽、約203mM的甘露醇、約19mM的冰乙酸和約26.35mM的氯化鈉組成；和約0.1%(按體積計)的聚山梨醇酯80組成，和具有約5.2的pH。乙酸鹽可包含任何合適的乙酸鹽。優選的乙酸鹽的非限制性實例包括乙酸鎂鹽、乙酸鉀鹽、乙酸鈣鹽、乙酸鋅鹽和乙酸鈉鹽。更優選的乙酸鹽包括無水乙酸鈉和乙酸鈉三水合物。乙酸鈉三水合物是高度優選的。所述製劑將抗體穩定以改善保質期貯存，特別是數月至數年的一段時間。當在所述製劑中貯存時，在貯存期間所述抗體保持熱和膠體穩定性。例如，當在所述製劑中貯存時，所述抗體是穩定的和顯示最小的聚集、絮凝、片段化和變性，和所述抗體保留其腫瘤壞死因子α結合活性。優選的是，所述抗體製劑在冷藏條件下貯存，優選在約2℃-約8℃的溫度下，包括約2℃-約6℃，並且包括約2℃、約3℃、約4℃、約5℃、約6℃、約7℃或約8℃。所述抗體製劑可貯存在這樣的溫度下至少約3個月。在一些方面，所述抗體製劑可貯存在這樣的溫度下至少約6個月。在一些方面，所述抗體製劑可貯存在這樣的溫度下至少約9個月。在一些方面，所述抗體製劑可貯存在這樣的溫度下至少約12個月。在一些方面，所述抗體製劑可貯存在這樣的溫度下至少約15個月。在一些方面，所述抗體製劑可貯存在這樣的溫度下至少約18個月。在貯存期間，所述抗體是穩定的和顯示最小的聚集、絮凝、片段化和變性，並且所述抗體保留其腫瘤壞死因子α結合活性，以致所述抗體製劑可從貯存中移出，給予患者並仍顯示針對所述製劑所給予的病況的治療功效。所述製劑包含約10mg-約70mg的抗體。該抗體蛋白量中有呈活性的天然形式的抗體單體的百分比以及具有降低的腫瘤壞死結合活性或沒有腫瘤壞死結合活性的抗體片段、抗體聚集體和變性或部分變性的抗體的百分比。高度優選的是，所述製劑包括最大量的功能性抗體單體和最少量的具有降低的結合活性和/或治療功效(相對於未改變的單體)的抗體片段、聚集體和結構改變形式的抗體。例如，當在約2℃-約8℃下貯存至少約6個月時，所述抗體製劑優選包含至少約85%重量的抗體單體，和少於約15%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約6個月時，所述抗體製劑包含至少約90%重量的抗體單體和少於約10%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約6個月時，所述抗體製劑包含至少約93%重量的抗體單體和少於約7%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約6個月時，所述抗體製劑包含至少約95%重量的抗體單體和少於約5%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約6個月時，所述抗體製劑包含至少約96%重量的抗體單體和少於約4%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約6個月時，所述抗體製劑包含至少約97%重量的抗體單體和少於約3%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約6個月時，所述抗體製劑包含至少約98%重量的抗體單體和少於約2%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約6個月時，所述抗體製劑包含至少約99%重量的抗體單體和少於約1%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。可根據本領域合適的任何技術，包括本文描述或舉例說明的那些技術，測定抗體單體和抗體片段、聚集體和結構改變形式的量，所述技術包括以下的任一種或其組合：動態光散射(DLS)、差示掃描量熱法(DSC)、尺寸排阻色譜法(SE-UPLC)、非還原和還原毛細管電泳SDS(NRCE-SDS和RCE-SDS)、肽作圖和粒子計數(PC)。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約12個月時，所述抗體製劑包含至少約90%重量的抗體單體和少於約10%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約12個月時，所述抗體製劑包含至少約93%重量的抗體單體和少於約7%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約12個月時，所述抗體製劑包含至少約95%重量的抗體單體和少於約5%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約12個月時，所述抗體製劑包含至少約96%重量的抗體單體和少於約4%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約12個月時，所述抗體製劑包含至少約97%重量的抗體單體和少於約3%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約12個月時，所述抗體製劑包含至少約98%重量的抗體單體和少於約2%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約12個月時，所述抗體製劑包含至少約99%重量的抗體單體和少於約1%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。可按照本領域合適的任何技術，包括本文描述或舉例說明的那些技術，測定抗體單體和抗體片段、聚集體和結構改變形式的量，所述技術包括以下的任一種或其組合：動態光散射(DLS)、差示掃描量熱法(DSC)、尺寸排阻色譜法(SE-UPLC)、非還原和還原毛細管電泳SDS(NRCE-SDS和RCE-SDS)、肽作圖和粒子計數(PC)。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約18個月時，所述抗體製劑包含至少約90%重量的抗體單體和少於約10%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約18個月時，所述抗體製劑包含至少約93%重量的抗體單體和少於約7%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約18個月時，所述抗體製劑包含至少約95%重量的抗體單體和少於約5%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約18個月時，所述抗體製劑包含至少約96%重量的抗體單體和少於約4%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約18個月時，所述抗體製劑包含至少約97%重量的抗體單體和少於約3%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約18個月時，所述抗體製劑包含至少約98%重量的抗體單體和少於約2%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。在一些方面，當在約2℃-約8℃下貯存至少約18個月時，所述抗體製劑包含至少約99%重量的抗體單體和少於約1%重量的具有降低的腫瘤壞死因子α結合活性和/或治療功效的抗體片段、聚集體和結構改變形式。可按照本領域合適的任何技術，包括本文描述或舉例說明的那些技術，測定抗體單體和抗體片段、聚集體和結構改變形式的量，所述技術包括以下的任一種或其組合：動態光散射(DLS)、差示掃描量熱法(DSC)、尺寸排阻色譜法(SE-UPLC)、非還原和還原毛細管電泳SDS(NRCE-SDS和RCE-SDS)、肽作圖和粒子計數(PC)。本發明的特徵還在於通過給予治療有效量的本文所述或舉例說明的任何抗體製劑，用於治療有需要的受試者的類風溼性關節炎的方法。本發明的特徵還在於通過給予治療有效量的本文所述或舉例說明的任何抗體製劑，用於治療幼年性特發性關節炎、銀屑病關節炎、強直性脊柱炎、克羅恩病、斑塊狀銀屑病、潰瘍性結腸炎、炎性腸病、化膿性汗腺炎或難治性哮喘的方法。通過例如給予的製劑中存在的ONS-3010抗體獲得治療功效。所述抗體製劑的給予可按照任何合適的途徑進行，優選通過注射，更優選通過皮下注射。可在醫學從業者的指導或監督下進行給藥。本文所述或舉例說明的抗體製劑可用作藥物。本文所述或舉例說明的抗體製劑可用於製備藥物。所述製劑可用於治療類風溼性關節炎。所述製劑可用於治療幼年性特發性關節炎。所述製劑可用於治療銀屑病關節炎。所述製劑可用於治療強直性脊柱炎。所述製劑可用於治療克羅恩病。所述製劑可用於治療斑塊狀銀屑病。所述製劑可用於治療潰瘍性結腸炎。所述製劑可用於治療炎性腸病。所述製劑可用於治療化膿性汗腺炎。所述製劑可用於治療難治性哮喘。本發明的特徵還在於藥盒。所述藥盒可用於，例如實施本文所述或舉例說明的任何方法。在一些方面，藥盒包含本文所述或舉例說明的任何抗體製劑，和在本文所述或舉例說明的任何方法或用途中使用所述抗體製劑的說明書。所述藥盒可包含用於注射所述抗體製劑至受試者的裝置，包括但不限於注射器和針頭，或導管。藥盒中包括的說明書可包括在用於治療類風溼性關節炎的方法中用於給予所述抗體製劑的說明書，包括用於注射所述抗體製劑至有需要的類風溼性關節炎患者的說明書。在一些方面，藥盒中包括的說明書可包括在用於治療幼年性特發性關節炎的方法中用於給予所述抗體製劑的說明書，包括用於注射所述抗體製劑至有需要的幼年性特發性關節炎患者的說明書。在一些方面，藥盒中包括的說明書可包括在用於治療銀屑病關節炎的方法中用於給予所述抗體製劑的說明書，包括用於注射所述抗體製劑至有需要的銀屑病關節炎患者的說明書。在一些方面，藥盒中包括的說明書可包括在用於治療強直性脊柱炎的方法中用於給予所述抗體製劑的說明書，包括用於注射所述抗體製劑至有需要的強直性脊柱炎患者的說明書。在一些方面，藥盒中包括的說明書可包括在用於治療克羅恩病的方法中用於給予所述抗體製劑的說明書，包括用於注射所述抗體製劑至有需要的克羅恩病患者的說明書。在一些方面，藥盒中包括的說明書可包括在用於治療斑塊狀銀屑病的方法中用於給予所述抗體製劑的說明書，包括用於注射所述抗體製劑至有需要的斑塊狀銀屑病患者的說明書。在一些方面，藥盒中包括的說明書可包括在用於治療潰瘍性結腸炎的方法中用於給予所述抗體製劑的說明書，包括用於注射所述抗體製劑至有需要的潰瘍性結腸炎患者的說明書。在一些方面，藥盒中包括的說明書可包括在用於治療炎性腸病的方法中用於給予所述抗體製劑的說明書，包括用於注射所述抗體製劑至有需要的炎性腸病患者的說明書。在一些方面，藥盒中包括的說明書可包括在用於治療化膿性汗腺炎的方法中用於給予所述抗體製劑的說明書，包括用於注射所述抗體製劑至有需要的化膿性汗腺炎患者的說明書。在一些方面，藥盒中包括的說明書可包括在用於治療難治性哮喘的方法中用於給予所述抗體製劑的說明書，包括用於注射所述抗體製劑至有需要的難治性哮喘患者的說明書。提供以下實施例以更詳細地描述本發明。它們意欲說明而非限制本發明。實施例1材料和方法引言。抗體ONS-3010代表阿達木單抗的生物類似物，並已被重新配製以提高貯存穩定性。認為對製劑組合物的緩衝液的改變可減少注射-部位反應的發生率，包括自皮下給予阿達木單抗觀察到的注射疼痛和灼燒感(KaiserC等(2012)Rheumatol.Int.32:295-9,和FranssonJ等(1996)J.Pharm.Pharmacol.48:1012-5)。當前的阿達木單抗製劑包括(除了抗體之外)氯化鈉、一鹼式磷酸鈉二水合物、二鹼式磷酸鈉二水合物、檸檬酸鈉、檸檬酸一水合物、甘露醇、聚山梨醇酯80和無菌注射用水。下文描述的實驗方法包括三個實驗系列的開發工作以重新配製阿達木單抗用於治療性給藥。第一個實驗系列的研究集中在緩衝液組成、濃度和實現約5.2的所需pH的能力上。第二個實驗系列的實驗利用應激穩定性研究與根據實驗系列1的結果的一組精細的製劑條件。在實驗系列2中探查氯化鈉濃度。第三個實驗系列的製劑開發研究比較了三種條件，包括阿達木單抗參考產品緩衝液的對照(每0.8ml：40mg阿達木單抗、4.93mg氯化鈉、0.69mg一鹼式磷酸鈉二水合物、1.22mg二鹼式磷酸鈉二水合物、0.24mg檸檬酸鈉、1.04mg檸檬酸一水合物、9.6mg甘露醇、0.8mg聚山梨醇酯80和適量無菌注射用水，pH5.2)。對於各緩衝液系統，對於NaCI和甘露醇的阿達木單抗參考製劑水平存在一種條件，和其中這些水平相對於阿達木單抗參考製劑而被改變的一種條件(較低的NaCI、較高的甘露醇(LS/HM))。這些改變產生具有與阿達木單抗參考製劑相當的摩爾滲透壓濃度同時保持等滲性的製劑。動態光散射(DLS)。DLS試驗方法使用WyattDynaPro™PlateReader以提供關於溶液中蛋白大小分布和總體膠體穩定性的信息。流體動力學半徑提供關於溶液中聚集存在情況的信息和分子結構的確認。DLS試驗提供在非變性條件下在溶液中大小分布的正交度量。差示掃描量熱法(DSC)。差示掃描量熱法測量蛋白的熔化轉變，因此提供關於溶液中蛋白熱穩定性的信息。使用GEVPCapillaryDSC系統進行量熱法。以在蛋白解摺疊的同時允許熔化轉變(Tm)發生的最佳掃描速率將蛋白自25℃加熱至95℃。緩衝液對照與樣品並行加熱，用於計算熔化溫度和轉變。DSC特徵是抗體特有的，證明蛋白摺疊成不同的結構域。尺寸排阻色譜法(SE-UPLC)。SE-UPLC用於監測ONS-3010尺寸變體分布。SE-UPLC試驗方法基於尺寸而分離蛋白。所述方法是用磷酸鈉運行緩衝液等度的，使用WatersAcquityUPLCBEH200SEC柱(1.7μιη,4.6x150mm)。使用280nm的吸光度監測峰。單體峰之前洗脫的物質是聚集體(HMWS)和單體峰之後洗脫的峰是降解物(LMWS)。非還原和還原毛細管電泳SDS(NRCE-SDS和RCE-SDS)。CE-SDS分析用於在變性條件下，以非還原和還原條件兩者，使用BeckmanPA800plus儀器比較ONS-3010尺寸變體。毛細管凝膠電泳提供通過尺寸的還原和非還原蛋白的自動分析，以確定蛋白純度和/或異質性。用烷基化劑或還原劑處理樣品，並將SDS與所有蛋白通過樣品緩衝液進行結合。將聚合物基質填充到毛細管中，然後進行樣品分析。將樣品通過施加的電壓電動引入毛細管，然後通過施用恆定電壓至毛細管進行電泳。SDS處理的蛋白具有與蛋白重量成比例的質量:電荷性質，這允許通過分子量的差異分開SDS-結合的蛋白。試驗物蛋白通過220nm的UV檢測而定量。TNF-α活性的調節：基於L929細胞的生物測定法。阿達木單抗的主要作用機制是中和循環TNF-α。基於L929細胞的生物測定法測量細胞死亡/成活力。TNF-α在L929細胞中誘導細胞毒性；阿達木單抗的相對效力通過經由發光標籤監測活細胞來測量。肽作圖。使用肽作圖LC-MS方法測量N-端序列變體、C-端序列變體、氧化、脫醯胺化、琥珀醯亞胺形成、異構化。粒子計數。聚集體和微粒的水平是有助於評價液體蛋白製劑的關鍵品質。聚集體和微粒的存在可負面影響產品品質。實施例2結果實驗系列1。第一個實驗系列的研究集中在緩衝液組成、濃度和實現5.2的所需pH的能力上。測試的緩衝液包括檸檬酸鹽和磷酸鹽(其用於參考產品製劑)和乙酸鹽(表1)。在整個實驗系列1實驗中，將氯化鈉和甘露醇濃度(等於阿達木單抗參考製劑中的濃度)加入至各條件中。根據該實驗系列的實驗，發現在實現和維持範圍4.9-5.5(阿達木單抗參考製劑之外0.3pH單位)的所需pH上，一些緩衝液比其它更好。具體而言，SE-UPLC純度與pH高度相關，並且使用乙酸鹽緩衝液產生更好的特徵(圖1和2)。表1.第1輪製劑條件描述檸檬酸鹽磷酸鹽乙酸鹽NaCl甘露醇靶pH4.9靶pH5.2靶pH5.5阿達木單抗參考YYYYYY檸檬酸鹽低10mMYYYYY檸檬酸鹽高20mMYYYYY乙酸鹽低10mMYYYYY乙酸鹽高20mMYYYYYY：阿達木單抗參考緩衝液中包括的NaCl和甘露醇濃度分別為4.93mg/0.08mL和9.6mg/0.8mL。DSC溫譜圖有助於評價產品對熱變性的穩定性。所有跡線顯示兩個主要的熱轉變：72℃後較大的一個，和80℃後較小的一個。在某些條件下，在60℃後觀察到另外的肩狀部分，認為這表示在這些配製條件下開始解摺疊過程(圖3)。後面的這些製劑從隨後的篩選實驗系列中排除。動態光散射(DLS)用於監測溶液中蛋白分子的流體動力學半徑Rh(大小)。在較低(約1mg/mL)蛋白濃度下在5–6納米範圍內的流體動力學半徑大小是單體單克隆抗體(約140kDa大小)所特有的；該大小隨蛋白濃度而增加，可能是由於擁擠的自締合或聚集。在配製條件下通常應避免這樣的較高的大小，因為較高的大小指示固有不穩定的狀況。為了更完全描繪膠體穩定性，實驗系列1配製條件中ONS-3010的流體動力學半徑以兩個蛋白濃度進行監測。Rh不受pH控制(圖4)：存在顯著的Rh變化，甚至在相對狹窄的pH範圍內，這強調了緩衝液組成對膠體穩定性的影響。選擇Rh≤阿達木單抗參考製劑的8.0nm的條件用於進一步在實驗系列2中評價。實驗系列2。基於實驗系列1的結果，第二個實驗系列以一組精細的配製條件，利用應激的穩定性研究。20mM水平的乙酸鹽緩衝液是特別關注的。還評價了氯化鈉濃度。一些條件匹配了阿達木單抗參考製劑NaCl水平，而其它條件不包含NaCl(表2)。表2.實驗系列2配製條件描述檸檬酸鹽磷酸鹽乙酸鹽NaCl甘露醇阿達木單抗參考YYYY乙酸鹽高，含NaCl20mMYY乙酸鹽高，不含NaCl20mMNYY：阿達木單抗參考(AR)緩衝液中包括的NaCl和甘露醇濃度(分別為4.93mg/0.8mL和9.6mg/0.8mL)。N：未加入NaCl。與不含NaCl的緩衝液相比，含有NaCl的實驗系列2製劑緩衝液在55℃孵育多達14天時更不穩定。如圖5中所示，升高溫度下的時間引起聚集(增加SE-UPLC高分子量物質或HMWS)以及降解和片段化(增加低分子量物質或LMWS)。相對於阿達木單抗參考製劑，在這些實驗中含有NaCl的配製條件顯示相當的聚集和片段化速率。然而，對聚集和降解兩種機制，缺少NaCl的製劑顯示改善的穩定性。這在圖6中示出，其顯示用阿達木單抗參考緩衝液配製的、用含NaCl的乙酸鹽緩衝液配製的和用不含NaCl的乙酸鹽緩衝液配製的ONS-3010的重疊的色譜圖。圖7和圖8分別突出了SE-UPLC聚集和片段化的趨勢。除去NaCl顯示還與改善的膠體穩定性相關，如通過DLS測量的，和在CEX-HPLC中與改善的穩定性有關。對於實驗系列3，設計較低NaCl條件，其降低(但未消除)NaCl水平，同時調整甘露醇濃度以得到接近參考產品製劑的摩爾滲透壓濃度水平。下文的表3概述了實驗系列2條件和它們的分析結果，突出了它們包括到實驗系列3研究中或從實驗系列3研究中排除的原因。一般而言，實驗系列3選擇的條件顯示對熱和化學變性相當的或改善的穩定性，如通過各種正交技術(SE-UPLC、CEX-HPLC、CE-SDS)監測的。還使用基於L929細胞的效力測定法評價了相對效力，和用DLS監測膠體穩定性。最後，所有樣品在整個研究中進行目測監測(並且在用於測試的稀釋時的霧度(haziness)成為排除標準)。表3.實驗系列2數據概述實驗系列3。最後實驗系列的製劑開發研究比較三種條件，包括阿達木單抗參考製劑作為對照(表4)。其它兩種再配製條件使用乙酸鹽緩衝液。存在一種乙酸鹽緩衝液，其匹配NaCl和甘露醇的阿達木單抗參考水平，和一種乙酸鹽緩衝液，其中所述水平相對於阿達木單抗參考(AR)製劑而修改(較低NaCl、較高甘露醇(LS/HM))。這些修改產生具有與阿達木單抗參考相當的摩爾滲透壓濃度的製劑，保持等滲性。表4.實驗系列3配製條件條件號描述檸檬酸鹽磷酸鹽乙酸鹽NaCl甘露醇聚山梨醇酯801阿達木單抗參考(AR)YYYYY2乙酸鹽20mMAR水平AR水平AR水平3乙酸鹽LS/HM20mM較低較高AR水平Y：阿達木單抗參考(AR)緩衝液中包括的NaCl和甘露醇濃度(分別為4.93mg/0.8mL和9.6mg/0.8mL)。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。綜合系列的應激、加速和實時穩定性研究作為實驗系列3製劑開發的一部分(表5)進行。實時研究在玻璃管中進行，以同時提供類似於最終藥物產品包裝(1型硼矽酸鹽玻璃)的容器接觸和利於產品外觀和粒子形成的評價。除了在不同溫度下作為液體孵育ONS-3010之外，還將產品貯存在冷凍條件下(-20℃和-80℃兩者)以及暴露於冷凍至液體轉變的重複循環。被迫氧化研究和搖動/剪切力研究提供另外的信息以有助於提供最終的製劑選擇。表5.第3輪實驗的組分和範圍實施例3材料的表徵動態光散射。動態光散射用於測量四種不同蛋白濃度的ONS-3010的流體動力學半徑(Rh)(對於圖形表示的結果參見圖9)。50mg/ml的阿達木單抗參考製劑具有8.0nm的平均流體動力學半徑。在完全的50mg/ml濃度下，條件2(乙酸鹽)顯示類似的值，而具有較低鹽的條件3(乙酸鹽LS/HM)顯示較小的Rh值，與較高蛋白濃度下自締合的更好控制有關。用於條件3的較低量的氯化鈉足以破壞在通常配製條件下使用的50mg/mL時發生的擁擠/締合。在較低的濃度時，Rh值集中在單體單克隆抗體所特有的5-6nm範圍的值。條件3(乙酸鹽LS/HM)在測量的整個蛋白濃度範圍中產生最低的Rh值。在50mg/mL的高蛋白濃度下，緩衝的製劑中存在較少量的氯化鈉(26.35mM氯化鈉對比105.45mM氯化鈉)防止個體抗體分子的擁擠。對於含有低氯化鈉的緩衝的製劑，這種現象通過較低的流體動力學半徑進一步證實(圖9乙酸鹽LS/HM緩衝液條件350mg/mL)。這是氯化鈉(較低濃度)與乙酸鹽緩衝液的獨特的協同作用，其防止擁擠和減少聚集(HMWS)(圖11和12)。認為所述製劑中較低濃度的氯化鈉和缺少檸檬酸鹽可能與較好的患者可接受性有關(在注射部位處刺激和疼痛減少)。緩衝液組分的改變(特別是，較低濃度或除去檸檬酸鹽)可在皮下給予藥物時減少注射-部位反應(例如，"灼燒感")的發生率。在約50mg/mL時在2-8℃下在玻璃管(I型硼矽酸鹽)中貯存17個月後，測試來自200L試驗規模的另一種這樣的ONS-3010材料的膠體性質。將測試的批次配製成乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑(BDS-O)和阿達木單抗參考製劑(BDS-H)兩者，如表6中所示，BDS-O的流體動力學半徑是約5.5nm，其明顯低於BDS-H(7.9nm)。流體動力學半徑(Rh)的這種差異指示與阿達木單抗參考製劑相比，在緩衝的製劑中膠體穩定性增加。此外，這種重要的膠體性質(Rh)在2-8℃下在17個月的貯存期間保持不變，指示緩衝的製劑的更大的貯存穩定性。表6.ONS-3010DLS結果樣品蛋白濃度(mg/mL)平均Rh(nm)BDS-O49.95.5阿達木單抗參考(BDS-H)53.77.9摩爾滲透壓濃度。三種條件的摩爾滲透壓濃度值使用NovaFlex儀器測量。所有條件彼此類似，並且與阿達木單抗參考製劑類似，並且在290-340mOsm/kg的等滲範圍內(表7)。表7.ONS-3010實驗系列3摩爾滲透壓濃度值條件號描述摩爾滲透壓濃度(mOsm/kg)1阿達木單抗參考3302乙酸鹽3203乙酸鹽LS/HM324對於緩衝液組分，參考表4。LS/HM：較低的NaCI和較高的甘露醇水平。粒子計數。粒子分析使用HIACModel9703+系統按改良的USP方法(允許檢測小至2μm的粒子)進行。所有大小範圍的累積結果顯示在表8中，其中計數/容器基於0.8ml預填裝注射器包裝計算。10和25μm大小組(bin)特別按照USP方法進行跟蹤。對於>25微米粒子，所有條件的值都完全低於≤600累積計數/容器的限值，和對於>10微米粒子，所有條件的值都完全低於≤6000累積計數/容器的限值。相對於阿達木單抗參考製劑和較高鹽製劑，較低鹽(配製條件3)顯示進一步減少2-10微米的粒子(表8)。表8.實驗系列3時間零和第28天樣品的粒子計數結果對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。應激穩定性(55℃)。為探查ONS-3010對升高溫度的應激條件的行為，將樣品在55℃孵育直至7天，然後通過多種分析方法測試。儘管55℃遠高於貯存條件和臨床中將遇到的任何預期的短期操作條件，但應激穩定性配備(arm)在突出製劑保護免於在較高溫度下佔主導的許多被迫降解事件的能力中非常有用。對於阿達木單抗和ONS-3010兩者，55℃低於熱變性的開始發生，如通過差示掃描量熱法所監測的。SE-UPLC。將ONS-3010暴露於55℃產生較高和較低分子量物質(HMWS和LMWS)(表9)，這兩者可通過SE-UPLC監測。從時間零至第7天，在二聚體(保留時間為大約3.1分鐘)和大於二聚體的物質(具有更早的保留時間)中有顯著增加，這兩者都作為HMWS計數。對於片段化，在偏離約3.9分鐘的單體峰的背部，形成不同的峰，加上4.5分鐘的另外的峰(圖10)。7天孵育後，在各配製條件的SE-UPLC色譜圖之間存在明顯差異(圖11)。具體而言，相對於阿達木單抗參考製劑和其它配製條件，乙酸鹽LS/HM條件顯示對HMWS形成的保護。這也顯示在圖12中。表9.第1天至第7天應激穩定性(55℃)的SE-UPLC數據對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。CEX-HPLC。在55℃處理的樣品的陽離子交換色譜提供許多物理化學變化的廣泛視角，其可將自身顯示為分子電荷變化。這包括基於特定電荷的修飾，例如脫醯胺化、異構化和焦穀氨醯胺形成，但也可揭示更加精細構象變化，其可在升高溫度下開始發生。對於時間零至第2天的樣品，監測CEX-HPLC特徵(表10)。表10.對於應激穩定性(55℃)的CEX數據樣品描述%酸性物質%主要物質%鹼性物質%極度鹼性物質阿達木單抗參考T=02-8℃15.564.418.51.7乙酸鹽T=02-8℃15.764.118.81.5乙酸鹽LS/HMT=02-8℃15.564.018.61.8阿達木單抗參考55℃第1天19.658.521.00.9乙酸鹽55℃第1天19.458.820.81.1乙酸鹽LS/HM55℃第1天20.458.119.62.0阿達木單抗參考55℃第2天24.953.720.80.6乙酸鹽55℃第2天24.454.320.50.9乙酸鹽LS/HM55℃第2天26.253.519.40.9對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。阿達木單抗參考製劑中樣品的代表性色譜圖顯示在圖13中，具有55℃第2天的樣品的重疊。CEX%主要、酸性和鹼性物質的趨勢顯示在圖14、圖15和圖16。在55℃處理2天後，乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑具有與阿達木單抗參考製劑類似的CEX特徵。較小的差異在測定法可變性之內。CE-SDSR/NR。為提供大小變體的正交視圖(變性對比非變性SE-UPLC方法)，在非還原和還原兩種條件下使用CE-SDS。用SE-UPLC觀察到的在配製條件之間的強烈區別在通過變性技術的分析下不可見，表示形成的大小變體在性質上大部分是非共價的。生物測定法。一般而言，所有測試的樣品在生物測定法中顯示在方法可變性內的相當的相對效力。在55℃7天處理後沒有可測量的效力變化，證實對熱變性的穩定性。肽圖。肽作圖允許對ONS-3010中修飾的更具體視圖。55℃孵育溫度促進某些化學修飾，其通常在較低溫度下不可見，例如N-端重鏈的焦穀氨酸形成和特定的異構化事件。條件3(乙酸鹽LS/HM)顯示具有針對該類型的化學修飾的最大保護(圖17、圖18、圖19、圖20和表11)。例如，在條件3第7天應激樣品中CH2結構域的甲硫氨酸256的氧化保持在未應激範圍內的水平。C-端變體和糖基化水平在整個處理中保持恆定。表11.在應激穩定性樣品中通過肽作圖監測的選擇的ONS-3010翻譯後修飾對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。加速穩定性(37℃和25℃)。加速(37℃和25℃)和實時穩定性研究在玻璃管中進行。將樣品取出用於通過SE-UPLC、CEX-HPLC、CE-SDS、外觀、生物測定和肽作圖(在選定時間點)進行分析。在25℃直至28天，對於CEX-HPLC、SE-UPLC、CE-SDS、肽圖和生物測定，乙酸鹽製劑與阿達木單抗參考製劑相當。SE-UPLC。對於阿達木單抗參考製劑，37℃孵育色譜圖的重疊顯示在圖21中，在第28天所有三種條件的局部放大重疊顯示在圖22。在37℃28天後，所有三種條件具有類似的SE-UPLC特徵，其中主峰/單體純度水平為約96%。在單體峰上(4分鐘保留時間)背肩的形成在所有配製條件中觀察到，並且對於一些較早時間點，它處於積分閾值(導致在定量LMWS時的一些變化，對於數值參見表12，注意強調的在第21天和第28天之間的增加)。表12.對於37℃加速穩定性樣品的SE-UPLC對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。CEX-HPLC。在37℃處理14天、21天和28天的加速穩定性樣品的CEX-HPLC分析(表13)顯示乙酸鹽條件與阿達木單抗參考製劑相當。表13.對於應激穩定性(37℃)的CEX-HPLC數據樣品描述%酸性物質%主要物質%鹼性物質%極度鹼性物質阿達木單抗參考37℃第14天22.456.419.91.4乙酸鹽37℃第14天21.857.519.51.1乙酸鹽LS/HM37℃第14天22.357.419.50.8阿達木單抗參考37℃第21天25.753.320.20.9乙酸鹽37℃第21天24.354.320.21.2乙酸鹽LS/HM37℃第21天26.252.719.61.5阿達木單抗參考37℃第28天29.049.720.11.1乙酸鹽37℃第28天27.550.920.11.5乙酸鹽LS/HM37℃第28天30.449.019.31.3對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。CE-SDS(R/NR)。對於37℃孵育的樣品，28天後在三種條件之間，CE-SDS測試揭示在NR變性大小變體中類似的趨勢。對於37℃RCE-SDS，相對於阿達木單抗參考製劑，28天後所有條件是相當的。生物測定。37℃28天孵育後，所有配製條件在L929生物測定法中顯示完全效力。外觀。對於加速和實時穩定性樣品進行常規目測檢查。具體地，在顏色、透明度和粒子存在情況(蛋白性或非蛋白性的)方面，監測樣品的任何變化。一般而言，ONS-3010樣品顯示對於蛋白產品所需的視覺外觀。在37℃孵育的樣品中，除了條件3之外所有製劑到第20天顯示一些粒子形成，而條件3(乙酸鹽LS/HM)在第28天保持沒有粒子(表14)。所有製劑在2-8℃26天時顯示一些可見粒子(表30)。表14.對於應激穩定性(37℃)的外觀數據天阿達木單抗參考乙酸鹽乙酸鹽LS/HM0CCC1CCC4CCC5CCC6CCC7CCC8CCC11CCC12CCC13CCC14CCC15CCC18CCC19CCC201PCC211P1PC221P1PC251P1PC261P1PC271P1PC281P1PCC=澄清，1P-5P標度：1P=可見粒子，5P=可見許多粒子對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。被迫氧化。被迫氧化研究利用1%叔丁基過氧化氫處理以在ONS-3010製劑候選物中誘導氧化。SE-UPLC、CEX-HPLC和胰蛋白酶肽圖方法用於監測產品品質屬性和易受氧化影響的特定胺基酸殘基的變化。氧化修飾是主要的化學降解途徑之一。在主鏈或側鏈上氧化破壞的位點可改變蛋白表面的疏水性。通過使用LC-MS肽作圖的氧化指紋使得快速和可靠的製劑選擇方法成為可能。沿ONS-3010序列分布有5個甲硫氨酸殘基：輕鏈中的殘基M4，和重鏈中的殘基M34、M83、M256和M432。M34在CDR內。根據肽作圖數據，Fc區甲硫氨酸殘基M256和M432是氧化修飾的主要殘基(圖23和圖24)。配製條件#3提供總體上對氧化的最大保護。殘基M4和M83的氧化的物質在方法LOQ之下，甚至在應激條件中。在應激時，氧化的M34處於LOQ，其中三種條件在方法可變性內是相當的。對於CEX-HPLC，氧化應激處理導致主峰降低和鹼性峰百分比相應增加數個百分點(表15)。與其它條件相比，條件3(乙酸鹽LS/HM)顯示對氧化更具保護性。SE-UPLC值在處理時基本上未改變。表15.對於被迫氧化37℃的CEX-HPLC數據樣品描述%酸性物質%主要物質%鹼性物質%極度鹼性物質阿達木單抗參考T=02-8oC15.365.218.60.8乙酸鹽T=02-8oC15.165.418.70.8乙酸鹽LS/HMT=02-8oC15.565.118.60.8阿達木單抗參考1%TBHP14.063.420.91.7乙酸鹽1%TBHP14.264.120.51.3乙酸鹽LS/HM1%TBHP14.664.619.90.9對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。凍融循環。在兩個溫度下對候選製劑中的樣品進行凍融循環：-20℃和-80℃。將樣品置於設定在合適溫度的冰箱中，允許充分冷凍(至少1小時)。然後將樣品從冰箱中取出，允許在25℃融化(大約1小時)。該冷凍步驟加融化步驟構成一個單次循環。樣品經過至多5個凍融循環，然後通過SE-UPLC一起分析，其中樣品亞組還通過NRCE-SDS測試。所有配製條件顯示對在-80℃多次凍融循環是穩定的，其中5次循環後主峰純度值等於時間零的值。用-20℃循環，觀察到%HMWS的一些增加，在較高的甘露醇配製條件3中更加明顯(表16)。認為這可能表示在該較低冷凍溫度下促成的甘露醇結晶。阿達木單抗參考製劑和條件3在循環時顯示類似的模式，如通過NRCE-SDS所監測。表16.對於冷凍/融化的SE-UPLC數據("C"=冷凍/融化循環1-5)樣品名%聚集總面積%單體面積%降解總面積阿達木單抗參考F/TC125/-20℃0.7199.210.07乙酸鹽F/TC125/-20℃0.6899.280.04乙酸鹽LS/HMF/TC125/-20℃0.6699.220.13阿達木單抗參考F/TC125/-80℃0.7299.180.09乙酸鹽F/TC125/-80℃0.6999.250.05乙酸鹽LS/HMF/TC125/-80℃0.6599.280.07阿達木單抗參考F/TC225/-20℃0.7199.220.07乙酸鹽F/TC225/-20℃0.7199.140.14乙酸鹽LS/HMF/TC225/-20℃1.4298.440.14阿達木單抗參考F/TC225/-80℃0.7399.160.1乙酸鹽F/TC225/-80℃0.7099.180.12乙酸鹽LS/HMF/TC225/-80℃0.6699.200.14阿達木單抗參考F/TC325/-20℃0.7399.150.1乙酸鹽F/TC325/-20℃0.7299.130.15乙酸鹽LS/HMF/TC325/-20℃1.4098.480.12阿達木單抗參考F/TC325/-80℃0.7399.150.13乙酸鹽F/TC325/-80℃0.7099.150.14乙酸鹽LS/HMF/TC325/-80℃0.6599.260.09阿達木單抗參考F/TC425/-20℃0.7399.170.11乙酸鹽F/TC425/-20℃0.7199.140.14乙酸鹽LS/HMF/TC425/-20℃1.3798.560.06阿達木單抗參考F/TC425/-80℃0.7399.140.12乙酸鹽F/TC425/-80℃0.6999.240.07乙酸鹽LS/HMF/TC425/-80℃0.6599.210.14阿達木單抗參考F/TC525/-20℃0.7299.170.11乙酸鹽F/TC525/-20℃0.7099.150.14乙酸鹽LS/HMF/TC525/-20℃1.3798.570.06阿達木單抗參考F/TC525/-80℃0.7299.160.12乙酸鹽F/TC525/-80℃0.7099.150.15乙酸鹽LS/HMF/TC525/-80℃0.6499.240.12對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。搖動研究。為了評價所述製劑對剪切力的保護能力，在玻璃管(0.5mL填充物)中進行搖動研究，所述玻璃管置於設定在37℃150rpm的軌道搖動孵育箱中。第二組(arm)包含未加入聚山梨醇酯80的製劑。樣品用以下方法進行測試：SE-UPLC、CEX-HPLC、CE-SDS(R/NR)、L929生物測定、肽圖和外觀。對於含和不含聚山梨醇酯80的兩種搖動研究，根據SE-UPLC，條件2和3(其中在第28天主峰純度為約96%)與阿達木單抗參考製劑相當或略微好於阿達木單抗參考製劑(表17-24)。CEX-HPLC結果顯示與阿達木單抗參考製劑相比在乙酸鹽製劑中無顯著差異(表25-27)。第28天樣品在L929生物測定中顯示完全的效力，和CE-SDS(R/NR)值在各條件間類似。在第28天，所有條件顯示一定的可見微粒形成：條件3顯示比其它條件更具保護性(表28和29)。表17.對於含聚山梨醇酯80的搖動研究的SE-UPLC數據–第7天樣品名%聚集總面積%單體面積%降解總面積阿達木單抗參考搖動D71.0298.710.26乙酸鹽搖動D71.0898.650.26乙酸鹽LS/HM搖動D70.9298.780.3對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表18.對於含聚山梨醇酯80的搖動研究的SE-UPLC數據–第14天樣品名%聚集總面積%單體面積%降解總面積阿達木單抗參考搖動D141.2198.360.42乙酸鹽搖動D141.3098.300.40乙酸鹽LS/HM搖動D141.0998.560.34對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表19.對於含聚山梨醇酯80的搖動研究的SE-UPLC數據–第21天樣品名%聚集總面積%單體面積%降解總面積阿達木單抗參考搖動D211.3096.751.96乙酸鹽搖動D211.4798.050.49乙酸鹽LS/HM搖動D211.3698.160.48對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表20.對於含聚山梨醇酯80的搖動研究的SE-UPLC數據–第28天樣品名%聚集總面積%單體面積%降解總面積阿達木單抗參考搖動D281.5195.942.56乙酸鹽搖動D281.7895.812.41乙酸鹽LS/HM搖動D281.5896.072.35對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表21.對於不含聚山梨醇酯80的搖動研究的SE-UPLC數據–第6天不含聚山梨醇酯80(Tw)樣品名%聚集總面積%單體面積%降解總面積阿達木單抗參考搖動w/oTwD60.9798.770.25乙酸鹽搖動w/oTwD60.9998.800.20乙酸鹽LS/HM搖動w/oTwD60.8698.940.20對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表22.對於不含聚山梨醇酯80的搖動研究的SE-UPLC數據(Tw)–第13天樣品名%聚集總面積%單體面積%降解總面積阿達木單抗參考搖動w/oTwD131.1798.460.37乙酸鹽搖動w/oTwD131.2198.410.39乙酸鹽LS/HM搖動w/oTwD131.0098.680.32對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表23.對於不含聚山梨醇酯80的搖動研究的SE-UPLC數據(Tw)–第20天樣品名%聚集總面積%單體面積%降解總面積阿達木單抗參考搖動w/oTwD201.3596.751.90乙酸鹽搖動w/oTwD201.3898.100.51乙酸鹽LS/HM搖動w/oTwD201.1498.390.47對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表24.對於不含聚山梨醇酯80的搖動研究的SE-UPLC數據–第28天樣品名%聚集總面積%單體面積%降解總面積阿達木單抗參考搖動w/oTwD281.5695.842.60乙酸鹽搖動w/oTwD281.5496.032.42乙酸鹽LS/HM搖動w/oTwD281.4496.182.39對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表25.對於含聚山梨醇酯80的搖動研究的CEX-HPLC數據–第14天樣品描述%酸性物質%主要物質%鹼性物質%極度鹼性物質阿達木單抗參考搖動D1422.456.920.20.5乙酸鹽搖動D1421.558.119.70.7乙酸鹽LS/HM搖動D1422.557.219.60.7對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表26.對於含聚山梨醇酯80的搖動研究的CEX-HPLC數據–第28天樣品描述%酸性物質%主要物質%鹼性物質%極度鹼性物質阿達木單抗參考搖動D2829.051.219.50.4乙酸鹽搖動D2827.053.319.20.6乙酸鹽LS/HM搖動D2829.151.018.31.6對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表27.對於不含聚山梨醇酯80(Tw)的搖動研究的CEX-HPLC數據–第28天樣品描述%酸性物質%主要物質%鹼性物質%極度鹼性物質阿達木單抗參考搖動D28w/oTw27.849.620.52.2乙酸鹽搖動D28w/oTw27.051.219.91.9乙酸鹽LS/HM搖動D28w/oTw28.451.819.20.6對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表28.對於含聚山梨醇酯80的搖動研究的外觀數據天阿達木單抗參考乙酸鹽乙酸鹽LS/HM0CCC1CCC2CCC3CCC41PCC72P1P1P82P1P1P92P1P1P102P1P1P112P1P1P142P2P1P152P2P1P162P2P1P172P2P1P182P2P1P212P2P1P222P2P1P232P2P1P242P2P1P252P2P1P282P2P1PC=澄清，1P-5P標度：1P=可見粒子，5P=可見許多粒子。對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表29.對於不含聚山梨醇酯80的搖動研究的外觀數據天阿達木單抗參考乙酸鹽乙酸鹽LS/HM0CCC1CCC2CCC3CCC6CC1P7CC1P8CC1P9CC1P10CC1P13CC1P14CC1P15CC1P16CC1P17CC1P20CC1P21CC1P22CC1P23CC1P24CC1P27CC1P28CC1PC=澄清，1P-5P標度：1P=可見粒子，5P=可見許多粒子。對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。在2-8℃和-80℃下的實時穩定性。在長期實時穩定性研究之前，已經進行了包括應激和加速溫度、被迫氧化、暴露於高剪切和凍融的製劑研究，以評價製劑候選物。作為這些處理的結果，已經觀察到熱穩定性、聚集、片段化、降解途徑和效力之間的關係。在測試的幾種極端條件中，實驗系列3，條件3(乙酸鹽LS/HM)已經證明比其它條件更具保護性。對於ONS-3010藥物產品，預期在2-8℃和-80℃下貯存。已經以以下時間點在2-8℃和-80℃下進行長期實時穩定性研究：1個月、5個月、12個月和18個月。用以下方法測試樣品：SE-UPLC(表32-34)、CEX-HPLC(表35-37)、CE-SDS(R/NR)(表38-42)、L929生物測定(表43)、肽圖(表44-46)、粒子計數(第28天2-8℃表8)和外觀(表30-31)。根據SE-UPLC(圖25-28)，對用三種不同條件配製的ONS-3010樣品的測試結果顯示無顯著的生物化學變化，並且生物測定結果是等同的且在方法可變性內。對於配製條件1和3在視覺外觀上沒有顯著差異(表30和31)。對於第28天時間點的顯微粒子(subvisibleparticle)計數記錄在表8中。在第28天時間點，相對於阿達木單抗參考製劑和較高鹽製劑，較低鹽(配製條件3乙酸鹽LS/HM)顯示進一步減少2-10微米的粒子。條件2的穩定性評價在5月時間點後被中斷，如果需要的話，穩定性樣品隨後在-80℃被冷凍用於後續測試。表30.對於2-8℃實時孵育的外觀天阿達木單抗參考乙酸鹽乙酸鹽LS/HM0CCC1CCC4CCC5CCC6CCC7CCC8CCC11CCC12CCC13CCC14CCC15CCC18CCC19CCC20CCC21CCC22CCC25CCC261P1P1P271P1P1P281P1P1P5個月1P1P1P12個月1P2P1P18個月1P2P1PC=澄清，1P-5P標度：1P=可見粒子，5P=可見許多粒子對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表31.對於-80℃實時孵育的外觀月條件1條件2條件351P2P1P121P未測試1P181P未測試1PC=澄清，1P-5P標度：1P=可見粒子，5P=可見許多粒子對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表32.對於2-8℃和-80℃孵育的SE-UPLC%HMWS對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表33.對於2-8℃和-80℃孵育的SE-UPLC%單體對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表34.對於2-8℃和-80℃孵育的SE-UPLC%LMWS對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表35.對於2-8℃和-80℃孵育的CEX-HPLC%酸性物質對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表36.對於2-8℃和-80℃孵育的CEX-HPLC%主要物質對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表37.對於2-8℃和-80℃孵育的CEX-HPLC%鹼性物質對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表38.對於2-8℃和-80℃孵育的CE-SDS還原輕鏈%面積對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表39.對於2-8℃和-80℃孵育的CE-SDS還原重鏈%面積對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表40.對於2-8℃和-80℃孵育的CE-SDS還原中間物質%面積對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表41.對於2-8℃和-80℃孵育的CE-SDS非還原主峰%面積對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表42.對於2-8℃和-80℃孵育的CE-SDS非還原的主峰前物質%面積對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表43.對於2-8℃和-80℃孵育的生物測定L929對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表44.對於2-8℃和-80℃孵育的N-端焦E*在2–8℃28天的樣品與在時間零的一組單獨的樣品一起測試。對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表45.對於2-8℃和-80℃孵育的氧化對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。表46.對於2-8℃和-80℃孵育的異構化對於緩衝液組分參考表4。LS/HM：較低的NaCl和較高的甘露醇水平。實施例4被迫降解評價本實施例提供的數據源自被迫降解測試，說明了用乙酸鹽LS/HM緩衝液組成，ONS-3010的穩定性提高。試驗樣品如下：A.51.0mg/mL(乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑)和52.6mg/mL(阿達木單抗參考製劑)B.48.5mg/mL(乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑)和50.3mg/mL(阿達木單抗參考製劑)純度SE-UPLC：SE-UPLC監測在非變性條件下的ONS-3010大小同質性。SE-UPLC測試方法基於大小分開蛋白。該方法是用磷酸鈉運行緩衝液等度的，使用WatersAcquityUPLCBEH200SEC柱(1.7μm,4.6x150mm)。使用280nm的吸光度監測峰。單體峰之前洗脫的物質是聚集體(HMWS)而單體峰之後洗脫的峰是降解物(LMWS)。純度CE-SDS(NR)：CE-SDS分析用於監測在變性條件下的ONS-3010大小同質性，用非還原條件，使用BeckmanPA800plus儀器。樣品用烷基化劑處理，和SDS與所有蛋白通過樣品緩衝液結合。將聚合物基質填充至毛細管，然後進行樣品分析。通過施加的電壓將樣品電動引入毛細管，然後通過施用恆定電壓至毛細管進行電泳。SDS處理的蛋白具有與蛋白重量成比例的質量:電荷性質，其允許通過分子量差異分開SDS-結合的蛋白。測試物蛋白通過220nm的UV檢測來定量。肽圖：UPLC肽作圖用於表徵蛋白的一級結構。ONS-3010用胰蛋白酶消化，並將得到的肽通過RP-UPLC分開。對於峰相對保留時間和總體峰模式，與參考比較，分析特徵性肽圖指紋。55℃處理：在2個批次的ONS-3010中在溶液中進行55℃研究。結果表明，在乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑中ONS-3010抗體顯示與在阿達木單抗參考製劑中的相同抗體相比較慢的降解速率，顯示了在非還原CE以及肽圖上對於聚集和%完整蛋白，在55℃下穩定性提高。由於阿達木單抗參考緩衝液中的抗體通過10天的處理變成乳色，與乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑中的抗體(在整個10天的處理中保持澄清)相比也存在目測差異。表48-50顯示具有顯著差異的最長的時間點。然而，在整個處理中存在一致的趨勢。表47.對於ONS-3010在55℃10天的被迫溫度試驗的概述注意：在兩種製劑中對於處理的樣品沒有效力變化表48.對於ONS-3010和阿達木單抗在55℃10天的被迫溫度試驗的概述注意：在兩種製劑中對於處理的樣品沒有效力變化pH3.0處理：在2個批次的ONS-3010抗體中進行在pH3.0下的處理。根據與阿達木單抗參考製劑中的相同抗體相比的聚集，在乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑中的ONS-3010BDS顯示較高水平的穩定性。還存在視覺差異，其中與乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑中的抗體(其在pH3的整個12小時處理中保持澄清)相比，阿達木單抗參考緩衝液中的抗體在12小時處理後變得混濁。表49.對於ONS-3010在pH3至多12小時的低pH試驗的概述*注意：在兩種製劑中對於處理的樣品沒有效力變化*在經1-3小時在pH3.0下阿達木單抗參考(檸檬酸鹽-磷酸鹽緩衝液)對比乙酸鹽LS/HM緩衝液中形成的聚集體的量上存在2-3倍的差異。這些數據表明在pH3.0下乙酸鹽LS/HM緩衝液提供針對聚集的更大穩定性。在低pH下與阿達木單抗參考製劑相比，乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑顯示更大的保護。實施例5概述根據應激和加速穩定性研究的結果表明有前景的再配製條件，相對於在阿達木單抗參考製劑中的抗體，其具有相當的和/或改善的降解速率。相對於阿達木單抗參考緩衝液，用於實驗系列3的配製條件#3(乙酸鹽LS/HM)提供對ONS-3010的保護作用。該觀察結果在被迫氧化和搖動研究中以及在升高溫度下是一致的。乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑對ONS-3010提供提高的熱穩定性、構象穩定性和膠體穩定性，這事實上轉變為相當的保質期和/或提高的產品質量。在2–8℃和-80℃下貯存18個月後，條件1(阿達木單抗參考)和條件3(乙酸鹽LS/HM緩衝液製劑)是穩定的，並顯示沒有明顯變化。阿達木單抗參考製劑緩衝液組分：105.45mM氯化鈉5.53mM磷酸鈉，一鹼式二水合物8.57mM磷酸鈉，二鹼式二水合物1.02mM檸檬酸鈉，二水合物6.19mM檸檬酸，一水合物65.87mM甘露醇0.1%聚山梨醇酯-80pH5.20(按需要用氫氧化鈉調整)適量無菌注射用水ONS-3010乙酸鹽LS/HM製劑緩衝液組分：26.35mM氯化鈉1.00mM乙酸鈉三水合物19.00mM冰乙酸203.00mM甘露醇0.1%聚山梨醇酯-80pH5.20(按需要用氫氧化鈉調整)適量無菌注射用水錶50.比較阿達木單抗參考和ONS-3010製劑組分組分阿達木單抗參考製劑緩衝液中的濃度(每0.8mL)ONS-3010製劑緩衝液中的濃度(每0.8mL)活性物40mg40mg氯化鈉4.93mg1.23mg一鹼式磷酸鈉二水合物0.69mg------二鹼式磷酸鈉二水合物1.22mg------檸檬酸鈉二水合物0.24mg------檸檬酸一水合物1.04mg------乙酸鈉三水合物------0.11mg冰乙酸------0.91mg甘露醇9.6mg29.58mg聚山梨醇酯800.8mg0.8mgpH5.25.2本發明不限於上文所述和舉例說明的實施方案，而是在隨附權利要求的範圍內能夠進行改變和修飾。當前第1頁1 2 3 當前第1頁1 2 3