用於治療炎性疾病的化合物的製作方法

2023-05-10 05:22:16

專利名稱：用於治療炎性疾病的化合物的製作方法
技術領域：
本發明涉及新的化合物、製備它們的方法、含有它們的藥用製劑以及它們在治療中的用途。
炎症是對組織損傷或微生物侵襲的初始應答並且以白細胞粘附到內皮上、組織中的血細胞滲出和激活為特徵。白細胞激活可以導致毒性有氧物質(例如超氧陰離子)的產生、顆粒體產物(例如過氧化物酶和蛋白水解酶)的釋放。循環的白細胞包括嗜中性粒細胞、嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、單核細胞和淋巴細胞。不同的炎症形式涉及到不同類型的白細胞浸潤、由粘附分子的分布所調節的特有的分布形式、細胞因子和趨化因子在所述組織中的表達。
白細胞的主要功能是保護宿主免受有機體如細菌和寄生蟲的侵襲。一旦組織受到損傷或感染，將發生一系列的事件，使白細胞從循環進入到受損組織發生局部募集。控制白細胞的募集以便有序地破壞併吞噬異物或死亡細胞，隨後是組織修復和分解炎性滲出物。然而，在慢性炎症情況下，募集常常是不適當的，分解沒有得到充分的控制，所述炎症反應引起組織破壞。越來越多的證據表明以哮喘為特徵的支氣管炎症表現為特殊形式的細胞介導免疫性，其中由Th2T淋巴細胞釋放的細胞因子產物如IL-4和IL-5協調粒細胞特別是嗜酸性粒細胞和較少數量的嗜鹼性粒細胞的蓄積和激活。通過細胞毒鹼性蛋白、促炎介質和氧自由基的釋放，嗜酸性粒細胞引起黏膜損傷並啟動引起支氣管機能亢進的機制。因此，阻斷Th2細胞和嗜酸性粒細胞的募集和激活似乎在哮喘中具有抗炎特性。另外，嗜酸性粒細胞也與其它類型疾病如鼻炎、溼疹、過敏性腸症候群和寄生蟲感染有關係。
趨化因子是一大族的小蛋白，它們與白細胞的運輸和募集有關(參見Luster，New Eng.J.Med.，338，436-445(1998))。它們由多種細胞釋放並起到吸引和激活各種細胞類型包括嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞、嗜中性粒細胞、巨噬細胞、T和B淋巴細胞的作用。根據靠近所述趨化因子蛋白氨基末端的兩個被保留的半胱氨酸殘基的間隔分類，有兩種主要的趨化因子家族，即CXC-(α)和CC-(β)趨化因子。趨化因子連接在屬於G-蛋白-偶聯的七跨膜域蛋白家族的特殊細胞表面受體上(參見Luster，1998)。在其它應答反應中，趨化因子受體的激活導致胞內鈣的增加、細胞形狀的改變、增加細胞粘著分子的表達、脫粒和細胞遷移的促進(趨化性)。
到目前為此，已確定了9種CC趨化因子受體(CCR-1到9)。對本發明而言特別重要的是CC-趨化因子受體-3(CCR-3)，CC-趨化因子受體-3主要表達在嗜酸性粒細胞上，也表達在嗜鹼性粒細胞、肥大細胞和Th2細胞上(Luster，1998)。已知在CCR-3上起作用的趨化因子如RANTES、MCP-3和MCP-4可以募集和激活嗜酸性粒細胞。特別重要的是eotaxin和eotaxin-2，其特異性地結合在CCR-3上。CCR-3趨化因子的局部化和功能表明它們在變應性疾病如哮喘的發展中起著重要的作用。因此，CCR-3特異性表達在涉及炎性變應應答的所有主要細胞類型上。在對炎性刺激的應答中產生作用於CCR-3上的趨化因子，所產生的趨化因子募集這些細胞類型到炎症部位，在此引起它們的激活(例如Griffiths等，J.Exp.Med.，179，881-887(1994)，Lloyd等，J.Exp.Med.，191，265-273(2000))。另外，抗-CCR-3單克隆抗體完全抑制eotaxin與嗜酸性粒細胞的相互作用(Heath，H.等，(1997)J.Clin.Invest.99(2)，178-184)，同時CCR-3特異性趨化因子eotaxin的抗體可以在哮喘的動物模型中降低支氣管反應過度和肺嗜曙紅細胞增多(Gonzalo等，J.Exp.Med.，188，157-167(1998))。因此，多方面的證據表明，CCR-3受體的拮抗劑很可能在治療炎性疾病方面具有治療作用。
在本申請遞交日之前，已經公開了許多與CCR-3拮抗劑有關的專利申請。例如，EP 0 903 349、FR 2785902、WO 00/29377、WO00/31032和WO 00/31033(全部以F.Hoffmann-La-Roche AG的名義)公開了以吡咯烷、哌啶和哌嗪為基礎的化合物，這些化合物與本發明的化合物不同。
WO 99/55324、WO 00/04003、WO 00/27800、WO 00/27835、WO00/27843、WO 00/41685和WO 00/53172(全部以SmithKline BeechamCorporation的名義)描述了多種作為CCR-3拮抗劑的化合物，這些化合物與本發明的化合物不相干。
WO 00/34278(Toray Industries Inc.)描述了作為趨化因子抑制劑的稠合三唑並衍生化合物。
WO 00/35449、WO 00/35451、WO 00/35452、WO 00/35453、WO00/35454、WO 00/35876和WO 00/35877(Du Pont PharmaceuticalsCompany)描述了作為CCR-3拮抗劑的N-脲基烷基和雜環哌啶化合物。
WO 00/51607和WO 00/51608(Merck Co.Inc.)描述了一系列趨化因子受體活性的吡咯烷調節劑。
WO 00/53600(Banyu Pharmaceutical Co.Ltd.)描述了作為CCR-3受體抑制劑的哌啶衍生物。
WO 01/14333(AstraZeneca UK Ltd.)描述了作為趨化因子受體活性調節劑的被取代的哌啶化合物。
EP 0 760 362(Nisshin Flour Milling Co.Ltd.)描述了嗎啉基烷基脲衍生物，公開了其可以用於治療消化道疾病。
JP 04208267A(Mitsui Seiyaku Kogyo KK)也描述了嗎啉基烷基脲衍生物，公開了其可以用作止吐藥，促進蠕動並改善胃腸功能。
EP 243959A(Dainippon Pharm KK)描述了用作胃腸能動力增強劑的O-取代的N-嗎啉基-烷基-苯甲醯胺衍生物。
JO 1117-882A(Dainippon Pharm KK)描述了作為止吐藥的雜環嗎啉基亞烷基甲醯胺衍生物。
WO 00/71518(Sepracor Inc)描述了用於治療疼痛、藥癮和耳鳴的嗎啉基烷基醯胺衍生物。
WO 97/48695和WO 97/48397(Klinge Pharma Gmbh)描述了用作細胞生長抑制劑、免疫調節劑或免疫抑制劑的吡啶基烷、烯和/或炔酸醯胺化合物。
Kato等(1992)Chem.Pharm.Bull.40(3)，652-660、Kato等(1991)J.Med.Chem.34(2)，616-624和Kato等(1990)J.Med.Chem.33(5)，1406-1413描述了一系列嗎啉苯甲醯胺，公開了其作為選擇性的和有效的胃動力藥。
現在我們發現了一組新的CCR-3拮抗劑化合物，該化合物可以阻斷嗜酸性粒細胞的遷移/趨化性，從而具有抗炎的特性。所以，這些化合物具有潛在的治療作用，特別是提供免除嗜酸性粒細胞、嗜鹼性粒細胞和Th2-細胞在涉及這類細胞類型的疾病、特別是變應性疾病，包括但不限於支氣管哮喘、變應性鼻炎和特應性皮炎的疾病中所引起的組織損傷。
除了在炎性疾病中起關鍵作用外，趨化因子及其受體還在傳染性疾病中起作用。哺乳動物的巨細胞病毒、皰疹病毒和痘病毒表達趨化因子受體同系物，其可以由人CC趨化因子如RANTES和MCP-3激活(參見Wells和Schwartz，Curr.Opin.Biotech.，8，741-748，1997)。另外，人趨化因子受體如CXCR-4、CCR-5和CCR-3可以作為由微生物如人免疫缺陷病毒(HIV)感染哺乳動物細胞的共同受體。CCR-3作為某些臨床的HIV-1毒株的共同受體並使病毒容易進入(例如Choe，H.等，Cell，1996，85，1135-1148)。CCR-3的關鍵配體eotaxin阻斷HIV進入的過程。因此，趨化因子受體拮抗劑，包括CCR-3拮抗劑可以用於阻斷由HIV引起的CCR-3表達細胞的感染或防止通過病毒如巨細胞病毒的免疫細胞應答的操作。
因此，根據本發明的一個方面，提供式(I)的化合物及其鹽和溶劑合物 其中R1代表C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基-Y1-、雜芳基-Y1-、芳基-(O)t-芳基-Y1-、芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、芳基-SO2-Y1-、C1-6烷基-G-Y1-、雜芳基-G-芳基-Y1-、J1-SO2-Y1-、R17O(CO)-C2-6鏈烯基-Y1-、R17NHCO-Y1-、R17NHSO2-Y1-、C2-6炔基-Y-、C2-6鏈烯基-Y1-、芳基-O-Y1-、雜芳基-O-Y1-、C1-6烷基-SO2-Y1-、M-Y1-、J1-Y1-、J1-CO-Y1-、芳基-CO-Y1-或C3-8環烷基-Y1-或C3-8環烯基-Y1-，所述C2-6炔基和C2-6炔基-Y1可任選被-OR17基團取代，所述C2-6鏈烯基可任選被一個或多個-COOR17基團取代，並且所述環烷基或環烯基可以任選被一個或多個羥基或C1-6烷基取代；R2代表氫或任選被羥基取代的C1-6烷基；R3代表氫或C1-6烷基；或者R1和R2可與它們所連接的氮原子一起形成式J2的基團，其中所述氮原子取代X1或X2；t代表0或1；X代表亞乙基或式CReRf的基團，其中Re和Rf獨立代表氫或C1-4烷基或者Re和Rf可與它們所連接的碳原子一起形成C3-8環烷基；R4和R5獨立代表氫或C1-4烷基；Z代表鍵、CO、SO2、CR10R7(CH2)n、(CH2)nCR10R7、CHR7(CH2)nO、CHR7(CH2)nS、CHR7(CH2)nOCO、CHR7(CH2)nCO、COCHR7(CH2)n或SO2CHR7(CH2)n；R6代表C1-6烷基、C2-6鏈烯基、芳基、雜芳基、芳基-C2-6鏈烯基-、-CN或式-Y2-J3的基團；
R7代表氫、C1-4烷基、CONR8R9或COOC1-6烷基；a和b代表1或者2，從而a+b代表2或者3；G代表-SO2-、-SO2NR18-、-NR18SO2-、-NR18CO-、CO或-CONR18-；n代表0-4的整數；M代表與單環芳基或單環雜芳基稠合的C3-8環烷基或C3-8環烯基；J1、J2和J3獨立代表式(K)的部分 其中X1代表氧、NR11或硫，X2代表CH2、氧、NR12或硫，m1代表1-3的整數，m2代表1-3的整數，條件是m1+m2在3-5的範圍內，還有一個條件是當X1和X2都代表氧、NR11、NR12或硫時，m1和m2不能都小於(equal less than)2，其中K由一個或多個(如1或2個)以下的基團任選取代-Y3-芳基、-Y3-雜芳基、-Y3-CO-芳基、-COC3-8環烷基、-Y3-CO-雜芳基、-C1-6烷基、-Y3-COOC1-6烷基、-Y3-COC1-6烷基、-Y3-W、-Y3-CO-W、-Y3-NR15R16、-Y3-CONR15R16、羥基、氧代基、-Y3-SO2NR15R16、-Y3-SO2C1-6烷基、-Y3-SO2芳基、-Y3-SO2雜芳基、-Y3-NR13C1-6烷基、-Y3-NR13SO2C1-6烷基、-Y3-NR13CONR15R16、-Y3-NR13COOR14或-Y3-OCONR15R16，並任選稠合到單環芳基或雜芳基環上；R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14獨立代表氫或C1-6烷基；R15和R16獨立代表氫或C1-6烷基或R15和R16與它們所連接的氮原子一起形成嗎啉、哌啶或吡咯烷環；R17和R18獨立代表氫或C1-6烷基；W代表飽和或不飽和、非芳族5-7元含有1-3個選自氮、氧或硫的雜原子的環，任選被一個或多個C1-6烷基、滷素或羥基取代；Y1、Y2和Y3獨立代表鍵或式-(CH2)pCRcRd(CH2)q-的基團，其中Rc和Rd獨立代表氫或C1-4烷基或Rc和Rd可以與它們所連接的碳原子一起形成C3-8環烷基，p和q獨立代表0-5的整數，其中p+q是0-5的整數。
可以提及的式(I)化合物的具體的基團是那些以上所定義的基團，條件是所述式(I)的化合物不是式(I)a的化合物 其中R2』代表氫或低級烷基(特別是C1-4烷基)；R3』代表氫；X』代表亞甲基或亞乙基；a』和b』都代表1；R4』和R5』都代表氫；其中-Z』-R6』部分代表滷代苄基(JP 04208267A中描述了式(I)a的化合物)；和/或條件是式(I)的化合物不是式(I)b的化合物 其中R1」代表氫原子、C1-6烷基、C3-6環烷基、C3-6環烷基C1-4烷基、芳基或芳基C1-4烷基(特別是其中芳基代表苯基或萘基)，其中芳基或芳基C1-4烷基的芳基部分可任選被滷原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基羰基或氨基取代；R2」代表氫；R3」代表氫或C1-6烷基；X」代表亞甲基；a」和b」都代表1；R4」和R5」都代表氫；並且其中-Z」-R6」部分代表C1-6烷基、芳基C1-4烷基(特別是其中芳基代表苯基或萘基)、雜芳基C1-4烷基(特別是其中雜芳基代表2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基或1H-吲哚-3-基)；芳氧基C2-5烷基或吡咯烷基羰基C1-4烷基，其中所述基團的芳基部分可任選被滷原子、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷氧基羰基或氨基取代(EP0760362A1中描述了式(I)b的化合物)。
優選的一組化合物包括式(I)的化合物，其中R1代表C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基-Y1-、雜芳基-Y1-、芳基-(O)t-芳基-Y1-、芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、芳基-SO2-Y1-、C1-6烷基-G-Y1-、J1-SO2-Y1-、R17O(CO)-C2-6鏈烯基-Y1-、C2-6炔基-Y1-、C2-6鏈烯基-Y1-、芳基-O-Y1、雜芳基-O-Y1-、C1-6烷基-SO2-Y1-、M-Y1-、J1-Y1-、J1-CO-Y1-、芳基-CO-Y1-或C3-8環烷基Y1-或C3-8環烯基-Y1-，所述C2-6炔基和C2-6炔基-Y1可任選被-OR17基團取代，並且所述環烷基或環烯基可任選被一個或多個羥基或C1-6烷基取代；R2代表氫或C1-6烷基；和J1、J2和J3獨立代表式(K)部分 其中X1代表氧、NR11或硫，X2代表CH2、氧、NR12或硫，m1代表1-3的整數，m2代表1-3的整數，條件是m1+m2在3-5的範圍內，還一個條件是當X1和X2都代表氧、NR11、NR12或硫時，m1和m2不能都小於2，其中K由一個或多個(如1或2個)以下的基團任選取代-Y3-芳基、-Y3-雜芳基、-Y3-CO-芳基、-Y3-CO-雜芳基、-C1-6烷基、-Y3-COOC1-6烷基、-Y3-COC1-6烷基、-Y3-W、Y3-CO-W、-Y3-NR15R16、-Y3-CONR15R16、羥基、氧代基、-Y3-SO2NR15R16、-Y3-SO2C1-6烷基、-Y3-SO2芳基、-Y3-SO2雜芳基、-Y3-NR13C1-6烷基、-Y3-NR13SO2C1-6烷基、-Y3-NR13CONR15R16、-Y3-NR13COOR14或-Y3-OCONR15R16，並任選稠合到單環芳基或雜芳基環上；一個優選子集的化合物包括式(I)化合物，其中R1代表以下基團C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基-Y1-、雜芳基-Y1-、芳基-(O)t-芳基-Y1-、芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、C2-6鏈烯基-Y1-、芳基-O-Y1-、雜芳基-O-Y1-、C1-6烷基-SO2-Y1-、M-Y1-、-Y1-J1、-Y1-CO-J1或C3-8環烷基-Y1-或C3-8環烯基-Y1-，該環烷基或環烯基可任選被一個或多個羥基或C1-6烷基取代；R2代表氫或C1-6烷基；
Z代表鍵、CO、CR10R7(CH2)n、CHR7(CH2)nO、CHR7(CH2)nS、CHR7(CH2)nOCO、CHR7(CH2)nCO；以及J1、J2和J3獨立代表式(K)部分 其中X1代表氧、氮、NR11或硫，X2代表CH2、氧、氮、NR12或硫，m1代表1-3的整數，m2代表1-3的整數，條件是m1+m2在3-5的範圍內，還一個條件是當X2代表氧、氮、NR12或硫時，m1和m2不能都小於2，其中K任選被一個或多個(例如1或2個)以下的基團取代-Y3-芳基、-Y3-雜芳基、-Y3-CO-芳基、-Y3-CO-雜芳基、-C1-6烷基、-Y3-COOC1-6烷基、-Y3-COC1-6烷基、-Y3-W、-Y3-CO-W、-Y3-NR15R16、-Y3-CONR15R16、羥基、氧代基、-Y3-SO2NR15R16、-Y3-SO2C1-6烷基、-Y3-SO2芳基、-Y3-SO2雜芳基、-Y3-NR13C1-6烷基、-Y3-NR13SO2C1-6烷基、-Y3-NR13CONR15R16、-Y3-NR13COOR14或-Y3-OCONR15R16，並任選稠合到單環芳基或雜芳基環上。
適用的『芳基』包括單環碳環芳族環(例如苯基)和雙環碳環芳族環(例如萘基)，適用的『雜芳基』包括含有1-3個選自氮、氧和硫的雜原子的單-和雙環雜芳環。適用的『雜芳基』也可以擴大到包括含有4個選自氮、氧和硫的雜原子的單-和雙環雜芳環。單環雜芳環的實例包括例如吡啶基、嘧啶基、噻吩基、呋喃基、吡咯基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、噻唑基、噻二唑基。其它單環雜芳環的實例包括吡嗪基、四唑基或咪唑基。雙環雜芳環的實例包括例如喹啉基或吲哚基。其它雙環雜芳環的實例包括苯並咪唑基。其它雙環雜芳環的實例還包括二氫苯並呋喃基和吡咯並吡啶基。碳環和雜環芳族環可以任選被例如一個或多個以下的基團取代C1-6烷基、C2-6鏈烯基、滷素、C1-6烷氧基、氰基、羥基、硝基、氨基、W、-N(CH3)2、-NHCOC1-6烷基、-OCF3、-CF3、-COOC1-6烷基、-OCHF2、-SCF3、-CONR19R20、-SO2NR19R20(其中R19和R20獨立代表氫、C1-6烷基或C3-8環烷基)、-NHSO2CH3、-SO2CH3或-SCH3基團。碳環和雜環芳族環的另一個取代基可以是-COOH。碳環和雜環芳族環的其它取代基還可以是-CH2N(CH3)2或者一個或多個-SH基團，其中意識到所述基團可互變異構形成＝S基團。
基團M的實例包括四氫萘基。
基團W的實例包括哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基和哌嗪基，它們可以任選被一個或多個C1-6烷基、滷素或羥基取代。
基團J1的實例包括N-(COOCH2CH3)-哌啶-4-基、N-(CH3)-哌啶-4-基、N-(COCH3)-哌啶-4-基、吡咯烷-1-基、四氫吡喃-4-基或N-嗎啉基。基團J1的其它實例包括N-(環丙基羰基)-哌啶-4-基、N-(甲基磺醯基)-哌啶-4-基、噻喃基和四氫噻吩基。
基團J2的實例包括(4-苯基)-哌啶-1-基、(4-COOCH2CH3)-哌嗪-1-基、(2-(3-羥基-吡咯烷-1-基-甲基))-哌啶-1-基、N-嗎啉基、(4-N(CH3)2)-哌啶-1-基、(4-(3-氟苯基))-哌嗪-1-基、(4-(4-氟苯基))-哌嗪-1-基、(4-嘧啶基)-哌嗪-1-基、(4-CH3)-哌嗪-1-基、(4-CONH2)-哌啶-1-基、(3，3-二甲基)-哌啶-1-基、(4-COCH3)-哌嗪-1-基、(4-(1-吡咯烷基-羰基甲基))-哌嗪-1-基、(4-羥基)-哌啶-1-基、(4-甲基)-哌啶-1-基、(4-(2-呋喃基-羰基))-哌嗪-1-基、(4-苄基)-哌嗪-1-基或(3-CH3SO2CH2-)-嗎啉-1-基。基團J2的其它實例包括硫代嗎啉基、吡咯烷基和苯並氮雜基。
基團J3的實例包括可被任選取代的二氫吲哚基。
適用的烷基包括相應烷基的直鏈和支鏈脂族異構體。意識到對適用的亞烷基和烷氧基作類似解釋。
適用的C3-8環烷基包括相應烷基的所有脂環(包括支鏈)異構體。
優選R1代表C1-6烷基(特別是丙基)、C2-6鏈烯基(特別是其中所述C2-6鏈烯基被一個或多個-COOR17基團取代，例如-HC＝CH-COOH)、C2-6炔基、芳基-Y1-、雜芳基-Y1-(特別是其中雜芳基代表噻唑基、吲哚基、呋喃基、二氫苯並呋喃、氧代咪唑基(oxoimidazolyl)、異噁唑基、噻吩基、硫代二氫咪唑基、四唑基、吡嗪基、吡咯並吡啶基)、芳基-(O)t-芳基-Y1-、芳基-(O)t-雜芳基-Y1-(特別是其中芳基代表苯基，雜芳基代表噻二唑基、吡唑基或異噁唑基)、雜芳基-(O)t-芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、C2-6鏈烯基-Y1-、芳基-O-Y1-(特別是其中芳基代表苯基)、雜芳基-O-Y1-、C1-6烷基-SO2-Y1-(特別是其中C1-6烷基代表乙基、丙基、-CH(CH3)2或-C(CH3)3)、M-Y1-、J1-Y1-、J1-CO-Y1-、芳基-SO2-Y1-、C1-6烷基-G-Y1-(特別是其中C1-6烷基代表甲基，G代表NR18CO-、-CONR18-、-NR18SO2-或-SO2NR18-)、雜芳基-G-芳基-Y1-(特別是其中芳基代表苯基，雜芳基代表噻唑基，G代表-NR18SO2-)、J1-SO2-Y1-(特別是其中J1代表1-吡咯烷基)、R17O(CO)-C2-6鏈烯基-Y1-、R17NHCO-Y1-(特別是其中R17代表氫)、C2-6炔基-Y1-(特別是-C≡CH或者其中所述C2-6炔基被-OR17基團取代，例如HOCH2-C≡C-)、芳基-CO-Y1-(特別是其中芳基代表苯基)、C3-8環烷基-Y1-或C3-8環烯基-Y1-，所述環烷基或環烯基可任選被一個或多個羥基或C1-6烷基取代，並且所述C2-6炔基-Y1-可任選被-OR17基團取代。
更優選的R1基團包括C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基-Y1-、雜芳基-Y1-、芳基-(O)t-芳基-Y1-、芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、C2-6鏈烯基-Y1-、芳基-O-Y1-、雜芳基-O-Y1-、C1-6烷基-SO2-Y1-、M-Y1-、J1-Y1-、J1-CO-Y1-或C3-8環烷基-Y1-或C3-8環烯基-Y1-，該環烷基或環烯基可以任選被一個或多個羥基或C1-6烷基取代。
還更優選R1代表芳基-Y1-、雜芳基-Y1、芳基-(O)t-芳基-Y1-、C3-8環烷基-Y1-、C2-6鏈烯基-Y1-或C1-6烷基-SO2-Y1-，特別是其中芳基代表任選被一個或多個C1-6烷基(特別是甲基)、滷素(特別是氯、氟和溴)、CH3O-、CH3S-、F2CHO-、CH3OC(O)-、-CN、-CF3、CF3-S-、CF3-O-或(CF3)2N-基團取代的苯基或萘基，並且其中雜芳基代表任選被一個或多個滷原子(特別是氯)取代的吡啶基，其中環烷基代表環己基。苯基的進一步優選的取代基包括-NHCOCH3和-CONH2。苯基的更進一步優選的取代基包括-SO2NH2、-CONHCH3、-OCH(CH3)2、-OC(CH3)3、-COOH、-CON(CH3)2、-SO2CH3、-CONHCH2CH3、-CONH環丙基和-SO2NH環丙基。還優選R1代表C2-6炔基-Y1-。一系列特別優選的化合物是這樣的化合物其中R1代表芳基-Y1-，其中芳基代表任選被一個或多個C1-6烷基(特別是甲基)、滷素(特別是氯、氟和溴)、CH3O-、CH3S-、F2CHO-、CH3OC(O)-、CN或-CF3基團取代的苯基。苯基的其他最優選的取代基包括-NHCOCH3和CONH2。苯基的另外最優選的取代基包括SO2NH2。最優選R1也代表C2-6鏈烯基-Y1-(特別是CH2＝CH-Y1-)、C3-8環烷基-Y1(特別是環己基-Y1-)和C1-6烷基-SO2Y1-(特別是CH3SO2-Y1-)。還最優選R1代表C2-6炔基-Y1-(特別是HC≡C-Y1)。
特別優選的R1基團為芳基-Y1-和雜芳基-Y1-，最特別優選其中芳基代表苯基，雜芳基代表6元單環雜芳環(最特別優選四唑基)，這些基團都可被上述取代基任選取代。
雜芳基的優選取代基包括-CH3、-CONH2、-CH2N(CH3)2、滷素(特別是氯)、-OCH3、-COOCH3和-NH2。
最特別優選的化合物是那些其中R1代表苯基-Y1-和四唑基-Y1-的化合物，所述苯基被-CONH2或-CONHCH3基團取代，所述四唑基被甲基取代。
優選Y1代表鍵或C1-6亞烷基，更優選鍵、亞甲基、亞乙基、亞丙基、-C(CH3)2-或-CH(CH3)-，特別優選鍵、亞甲基或亞乙基，最優選鍵或亞甲基，特別是亞甲基。
優選Y2代表鍵。
優選Y3代表鍵。
優選R2代表氫、甲基或羥丙基，更優選氫或甲基，特別是氫。
優選R3代表氫或甲基，特別是氫。
還優選R1和R2與它們所連接的氮原子一起形成式J2的基團，其中所述氮原子取代X1或X2。
優選X代表亞甲基。
優選R4和R5獨立代表氫或甲基。最優選R4和R5代表氫。
優選Z代表鍵、CO、CR10R7(CH2)n、CHR7(CH2)nO、CHR7(CH2)nS、CHR7(CH2)nOCO或CHR7(CH2)nCO。
更優選Z代表CO、CHR7(CH2)n、CHR7(CH2)nO、CHR7(CH2)nS、CHR7(CH2)nOCO或CHR7(CH2)nCO，特別是CH2CO、(CH2)2、(CH2)2S、(CH2)2O、(CH2)2OCO、(CH2)3CO、CO、CHR7，尤其是CH2、CHCH3或CH2CO，最特別優選CH2或CH2CO，尤其是CH2。
優選R6代表C1-6烷基、C2-6鏈烯基、CN、芳基、雜芳基或式-Y2-J3的基團，更優選R6代表苯基(任選被一個或多個滷素、苯基或C2-6鏈烯基取代)、萘基、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、CN或者任選被滷素或C1-6烷基取代的含有1-3個選自O、N或S的雜原子的5元芳族雜環。特別優選R6代表苯基(任選被一個或多個滷素(尤其是氯、氟或碘)、苯基或3-CH＝CH2基團取代)、萘基、二氫吲哚基、甲基、-CH＝CH2、-CN或任選被滷素(尤其是氯)取代的噻吩基。最優選R6代表二氫吲哚基(尤其是二氫吲哚-1-基)，或者代表被一個或多個滷素(例如氯或氟)取代的苯基，特別是二氯苯基、3-氯苯基、5-氯噻吩基、4-氟苯基和3，4-二氟苯基，最特別優選二氯苯基，尤其是3，4-二氯苯基。
優選R7代表氫、甲基、COOC1-6烷基或CONR8R9，更優選氫、COOC1-6烷基或CONR8R9，最優選氫、COOEt或CONR8R9，特別是氫。
優選R8和R9代表氫。
優選R10代表氫。
優選R11和R12獨立代表氫或甲基。
優選R13和R14獨立代表氫或甲基。
優選R15和R16獨立代表氫或甲基，或者R15和R16與它們所連接的氮原子一起形成嗎啉、哌啶或吡咯烷環，特別優選氫或甲基。
優選R17代表氫。
優選R18代表氫。
優選R19和R20獨立代表氫、C1-6烷基或C3-8環烷基，尤其優選氫、環丙基或甲基。特別優選R19和R20代表氫。
優選Rc代表氫或甲基，特別是氫。
優選Rd代表氫或甲基，特別是氫。
優選a和b都代表1。
優選n代表0、1或2。
優選p+q等於0-2的整數，更優選p和q獨立代表0或1，從而使p+q等於0-1的整數。
優選t代表0。
優選W代表吡咯烷基或哌啶基，特別優選吡咯烷基。
優選X1代表氧、氮或NR11。
優選X2代表CH2、氧、氮或NR12。
優選m1和m2獨立代表1-2的整數，從而使m1+m2在3-4的範圍內。
優選J1代表任選被一個或兩個-COOCH2CH3、-COOtBu、-CH3、-COCH3、-SO2N(CH3)2、-SO2CH3、-CO苯基或3，5-二甲基異噁唑-4-基磺醯基取代的哌啶基(特別是哌啶-4-基)或四氫吡喃基(特別是四氫吡喃-4-基)。還優選J1代表可任選被如上取代的嗎啉基、噻喃基或四氫噻吩基(特別是二氧代四氫噻吩基(dioxidotetrahydrothienyl))。
J1的優選取代基包括-CH2-芳基(特別是其中芳基代表任選被一個或多個滷原子取代的苯基，例如二氯苯基)、-CO環丙基或-Y3-SO2雜芳基(特別是其中雜芳基代表二甲基異噁唑基)。
優選J2代表任選被一個或兩個苯基、-COOCH2CH3、-N(CH3)2、氟苯基、-CH3、-CONH2、-COCH3、-CH2CO-(N-吡咯烷基)、羥基、-CO-(2-呋喃)、苄基或-CH2SO2CH3取代的哌啶基(特別是哌啶-1-基)、嗎啉基(特別是N-嗎啉基)或哌嗪基(特別是哌嗪-1-基)。優選J2還代表任選以類似方式取代的硫代嗎啉基、吡咯烷基或苯並氮雜基。
J2的其它優選取代基包括滷素(特別是氟)、-COOCH2CH3、-CO-糠醯基、-SO2CH3、-吡啶基-CH3或氧代基。
優選J3代表二氫吲哚基，特別是二氫吲哚-1-基。
所述式(I)化合物的合適的鹽包括生理學上可接受的鹽以及可能不是生理學上可接受的鹽但可以用於製備式(I)化合物和其生理學上可接受的鹽的鹽。如果合適，可以從無機或有機酸中得到酸加成鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、1-羥基-2-萘甲酸鹽、棕櫚酸鹽(palmoate)、甲磺酸鹽、甲酸鹽或三氟乙酸鹽。溶劑合物的實例包括水合物。
當式(I)的化合物含有手性中心時，本發明擴展到對映體的混合物(包括外消旋混合物)和非對映異構體以及擴展到單一的對映體。通常優選使用單一對映體形式的式(I)化合物。
可以由下文所述的工藝製備式(I)的化合物及其鹽和溶劑合物，其內容組成了本發明的另一方面。
一種用於製備式(I)化合物的本發明方法，該方法包括(a)使式(II)的化合物或其被護衍生物 其中R1、R2、R3、R4、R5、X、a和b如上所定義，與式L1-Z-R6的化合物反應，其中Z和R6如上所定義，L1代表適當的離去基團；或(b)形成其中R2代表氫的式(I)化合物，包括使式(III)化合物或其被護衍生物 其中R3、R4、R5、R6、Z、X、a和b如上所定義，與式R1-N＝C＝O的化合物反應，其中R1如上所定義；或(c)使式(IV)的化合物或其被護衍生物 其中R3、R4、R5、R6、Z、X、a和b如上所定義，並且L2代表適當的離去基團，與式(V)的化合物或其被護衍生物反應， 其中R1和R2如上所定義；或(d)使式(VI)的化合物或其被護衍生物 其中R1和R2如上所定義，並且L3代表適當的離去基團；與式(III)的化合物或其被護衍生物反應；或(e)將被護的式(I)化合物脫保護；或(f)互變為其它的式(I)化合物。
我們也提供了根據本發明的用於製備式(I)化合物的其它方法，其包括(g)形成式(I)的化合物，其中R1和R2與它們所連接的氮原子一起形成式J2的基團，其中所述氮原子取代X1或X2，包括使式(IV)的化合物或其被護衍生物與式J2H的化合物反應，條件是式J2H的化合物具有游離的-NH基團；或(h)形成式(I)的化合物，其中Z代表CR10R7(CH2)n，其中R10代表氫，包括使式(II)的化合物或其被護衍生物與式R7CO(CH2)nR6的化合物反應，隨後還原得到的亞胺；或(i)形成式(I)的化合物，其中R1代表C1-6烷基-G-Y1-，其中G代表-NR18CO-，包括使式(VII)的化合物或其被護衍生物 其中R2、R3、R4、R5、R6、Y1、X、Z、a和b如上所定義，與式C1-6烷基-NHR18的化合物反應。
方法(a)可在惰性溶劑例如N，N-二甲基甲醯胺存在下，任選在鹼例如N，N-二異丙基乙基胺存在下，在適當的溫度例如室溫下進行。適當的離去基團(L1)包括滷素，例如氯。
方法(b)可在惰性溶劑例如二氯甲烷存在下，在適當的溫度例如室溫下進行。
方法(c)和(d)通常可在適當的鹼例如吡啶存在下，在適當的溫度例如110℃下進行，其中離去基團L2和L3可代表4-硝基苯氧基。或者，當L2和L3代表4-硝基苯氧基時，適當的條件可包括使用N，N-二異丙基乙基胺作為適當的鹼，並使用二氯甲烷或N，N-二甲基甲醯胺作為適當的溶劑。或者，當L2和L3為Merrifield樹脂結合的4-硫代苯氧基時，方法(c)和(d)可用適當的添加劑例如N-甲基吡咯烷酮，在微波爐內，例如在600W功率進行5分鐘。其它適當的離去基團包括咪唑基。當L2或L3代表咪唑基時，適當的條件包括在適當的溶劑如二氯甲烷和N，N-二甲基甲醯胺中，在適當的溫度如0℃-22℃之間使用1，1』-羰基二咪唑。
在方法(e)中，可以在T.W Greene和P.G.M.Wuts『ProtectiveGroups in Organic Synthesis(有機合成中的保護基)』(J.Wiley和Sons，第三版，1999)中發現保護基的實例和用於除去它們的方法。合適的胺保護基包括磺醯基(例如甲苯磺醯基)、醯基(例如苄氧基羰基或叔丁氧基羰基)和芳基烷基(例如苄基)，這些保護基團可在適當時通過水解或氫解除去。其它合適的胺保護基包括三氟乙醯基(-COCF3)或固相樹脂結合的苄基基團如Merrifield樹脂結合的2，6-二甲氧基苄基基團(Ellman連接基團)或2，6-二甲氧基-4-[2-(聚苯乙烯基甲氧基)乙氧基]苄基基團，所述三氟乙醯基可以通過鹼催化的水解除去，所述固相樹脂結合的苄基基團可以通過酸催化的水解，例如用三氟乙酸除去。
可以使用常規互變方法如差向異構化、氧化、還原、烷基化、親核芳族取代、酯水解或醯胺鍵形成進行方法(f)。對於方法(f)的備選條件包括叔-丁氧基羰基加成或除去以及磺醯化。
方法(g)可以通過與上述方法(c)和(d)中所述條件相同的方法進行。
可在合適的酸如乙酸和合適的還原劑如三乙醯氧基硼氫化鈉存在下，在合適的溶劑如二氯甲烷中，在合適的溫度如室溫下進行方法(h)。
可在合適的偶聯劑如1，1』-羰基二咪唑和適當的溶劑如N，N-二甲基甲醯胺存在下，在合適的溫度如室溫下進行方法(i)。
可以按照下述方法製備式(II)化合物的R-異構體，其中R2和R3都表示氫，X表示亞甲基，a和b表示1，R4和R5都表示氫 其中R1如上所定義，並且P1為適當的保護基，例如苄基。
式(VIII)的化合物可以按照EP0995746中所述製備。
步驟(i)通常包括在適當的溫度例如室溫下使用惰性溶劑例如二氯甲烷。步驟(ii)通常包括簡單的脫保護反應，例如可包括在甲酸銨和適當的溶劑如乙醇的存在下，使用10％披鈀活性炭。
可以通過類似方法製備式(II)a化合物的S-異構體，其中R1如上所定義。
式(IV)的化合物可按照下述方法製備 其中R3、R4、R5、R6、X、a、b和Z如上所定義，L2代表如上所定義的適當的離去基團，例如4-硝基苯氧基或Merrifield樹脂結合的4-硫代苯氧基，L4代表比L2更不穩定的離去基團，例如氯或4-硝基苯氧基。當L2代表4-硝基苯氧基並且L4代表氯時，步驟(i)可在適當的溶劑例如二氯甲烷中，在鹼如三乙胺存在下，在適當的溫度如室溫下進行。當L2代表Merrifield樹脂結合的4-硫代苯氧基並且L4代表4-硝基苯氧基時，步驟(i)可在適當的溶劑如N，N-二甲基甲醯胺中，在適當的溫度如室溫下進行。或者L2和L4可代表咪唑，此時步驟(i)可在適當的溶劑例如二氯甲烷和N，N』-二甲基甲醯胺的混和物中，在適當的溫度例如0℃-22℃之間，使用1，1』-羰基二咪唑來進行。
式(III)的化合物可以被保護的形式使用，例如其中當R3代表氫時，胺基被保護。適當的保護基可選自上述基團。
可以根據以下方法製備式(III)的化合物 其中R3、R4、R5、R6、X、a、b和Z如上所定義，L1代表合適的離去基團如氯，P2代表合適的保護基，如以上所提及的保護基如-COCF3。步驟(i)包括在合適的試劑如碘化鈉和碳酸鉀存在下，在合適的溫度如室溫下使用合適的溶劑如N，N-二甲基甲醯胺。步驟(ii)包括在適合保護基團的常規條件下脫保護。當P2代表-COCF3時，可以通過使用水和甲醇，在碳酸鉀存在下，在室溫下完成脫保護。也可以通過與以上方法(h)中所述類似的方法，通過式(XI)化合物的還原性胺化製備式(III)的化合物，其中Z代表CR10R7(CH2)n(其中R10代表氫)。
可以根據以下的方法製備式(III)的化合物，其中R3代表氫，X代表亞甲基，a和b代表1，並且R4和R5都連接在嗎啉環的5位上 其中R6和Z如上所定義，L1代表合適的離去基團如氯。步驟(i)包括在溶劑存在下，在50-60℃之間加熱。步驟(ii)包括在80℃、氮氣下與2-(環氧乙烷-2-基甲基)-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮一起加熱，隨後在150℃下與濃硫酸一起攪拌。
可以根據以下方法製備其中R3代表H的式(III)化合物 其中R4、R5、R6、X、a、b和Z如上所定義，並且L1代表合適的離去基團如氯。步驟(i)包括將式(XIV；Merrifield樹脂)化合物與碳酸鈉在合適的溶劑如二甲亞碸中，在合適的溫度如150℃下一起加熱。步驟(ii)包括使式(XV)的化合物與式(XVI)的化合物在合適的溶劑如四氫呋喃存在下，在合適的溫度如室溫下反應。步驟(iii)包括在合適的溫度如70℃下使用合適的溶劑如N，N-二甲基甲醯胺和合適的鹼如N，N-二異丙基乙胺，隨後在適合於Merrifield樹脂保護基團的常規條件下如酸催化的水解進行脫保護。
式(VII)的化合物可按照下述方法製備 其中R2、R3、R4、R5、R6、Y1、Z、X、a和b如上所定義，L2代表合適的離去基團如4-硝基苯氧基，並且P3代表適當的保護基，例如C1-6烷基，優選叔丁基。
步驟(i)通常包括在適當的溫度例如室溫下，使用適當的鹼例如N，N-二異丙基乙基胺和適當的溶劑例如二氯甲烷。
步驟(ii)通常包括在適當的溫度例如室溫下使用適當的酸性試劑例如4M氯化氫的二噁烷溶液。
式(V)、(VI)、(VIII)、(X)、(XI)、(XII)、(XIV)、(XVI)和(XVIII)的化合物是已知的化合物或者可以根據已知的方法製備。
式L1-Z-R6、R1N＝C＝O、R7CO(CH2)nR6、C1-6烷基-NHR18和J2-H的化合物也可以是已知的或可以根據已知的方法製備。
式(II)的化合物可以根據與以上對於式(I)化合物所述的類似方法，使用標準的保護基化學製備，例如，使用適合於嗎啉NH的保護如叔-丁氧基羰基保護。
被護和無保護形式的式(II)、(III)、(IV)和(VII)的化合物及其鹽和溶劑合物也形成本發明的一個方面。
可以根據以下的測定方法檢測本發明的化合物在體外和體內的生物活性。
(a)CCR-3結合測定使用CCR-3競爭性結合SPA(閃爍親近測定法)測定新化合物對於CCR-3的親合力。將由穩定表達CCR-3的K562細胞製備的膜(2.5μg/孔)與0.25mg/孔麥胚凝集素SPA珠(Amersham)混合併在結合緩衝液(HEPES 50mM，CaCl21mM，MgCl25mM，0.5％BSA)中、在4℃下溫育1.5小時。溫育後，加入20pM[125I]eotaxin(Amersham)和逐漸增加濃度的化合物(1pM-30μM)並在96孔板中、在22℃下溫育2小時，然後在Microbeta平板計算器上計數。總測定容量是100μl。通過將所述數據與四參數邏輯斯諦方程擬合分析競爭結合數據。從至少兩個實驗中，以平均pIC50值(50％抑制[125I]eotaxin結合的化合物濃度的負對數)表示數據。
(b)嗜酸性粒細胞趨化性測定評估化合物對嗜酸性粒細胞趨化性的抑制作用。使用Miltenyi細胞分離柱以及磁性Super Macs磁體如以前所述(Motegi Kita，1998；J.Immunology1614340-6)經標準CD16細胞缺失由人外周血提純嗜酸性粒細胞。將細胞重懸浮在RPMI 1640/10％FCS溶液中並與鈣黃綠素-AM(Molecular Probes)在37℃下溫育30分鐘。溫育後，將所述嗜酸性粒細胞以400g離心5分鐘並以2.2百萬/ml重懸浮在RPMI/FCS中。然後，將細胞在逐漸增加濃度的化合物(1pM-30μM)存在下、於37℃下溫育30分鐘。將用於對照應答的細胞僅與RPMI/FCS一起溫育。將激動劑eotaxin(或是濃度反應曲線或是在EC80濃度的功能抑制曲線)加入到96孔趨化性板的下室(5μm濾膜ReceptorTechnologies)。將嗜酸性粒細胞(50μl的2百萬/ml細胞)加入到濾板的上室並在37℃下溫育45分鐘。將留在趨化性濾板的上室中的細胞移出並通過讀取螢光板讀出器上的板將已遷移的嗜酸性粒細胞的數目定量。通過將所得數據與四參數邏輯斯諦方程擬合分析化合物對嗜酸性粒細胞趨化的抑制作用曲線。使用以下方程(Lazareno Birdsall，1995.Br.J.Pharmacol 1091110-9)得出函數pK1值(fpK1)。 (c)豚鼠卵清蛋白模型對豚鼠體內嗜酸性粒細胞浸潤和過度反應性的抑制作用在根據Danahay等1997所述的方法中，給予卵清蛋白致敏的豚鼠美吡拉敏(300mgkg-1ip)以防止過敏性支氣管痙孿。在卵清蛋白攻擊(吸入由0.5％卵清蛋白溶液產生的氣霧劑10分鐘)前30分鐘，經口服給予溶於10％DMSO和90％PEG200中的試驗化合物。在卵清蛋白攻擊不受限制的動物後24小時，使用整體容積描記法(Buxco Ltd.，USA)測定氣道對血栓烷模擬物U46619的過度反應性。然後將豚鼠處死並灌洗肺部。然後，得到支氣管肺泡灌洗液的總的和分類的白細胞計數並測嗜酸性粒細胞累計的百分率的減少(Sanjar等，1992)。以用溶媒對照應答的百分比表示的特定劑量的抑制作用提供數據。
其中本發明化合物可能具有有利抗炎效果的疾病的實例包括呼吸道疾病如支氣管炎(包括慢性支氣管炎)、哮喘(包括過敏原誘導的哮喘反應)、慢性阻塞性肺病(COPD)和鼻炎。其它本發明化合物可能具有有利療效的呼吸道疾病是鼻竇炎。其它有關的疾病包括胃腸道疾病如腸炎性疾病包括炎性腸病(如局限性迴腸炎或潰瘍性結腸炎)以及由放射線照射或過敏原接觸而引起的腸炎性疾病。另外，本發明的化合物可以用於治療腎炎、皮膚病如銀屑病、溼疹、變應性皮炎和超敏性反應以及具有炎性成分的中樞神經系統疾病如阿爾茨海默病、腦膜炎、多發性硬化和AIDS痴呆。本發明化合物也可用於治療鼻息肉、結膜炎或瘙癢症。另外，本發明的化合物可以用於治療病毒性疾病如HIV。
本發明化合物可能具有有利療效的其它疾病實例包括心血管疾病如動脈粥性硬化、外周性血管疾病和特發性嗜酸性粒細胞增多症候群。本發明化合物可能有效的其它疾病是其它的嗜酸性粒細胞增多病如丘-施症候群。此外，由於常常在寄生蟲疾病，尤其是蠕蟲感染中發現嗜酸性粒細胞增多，因此本發明的化合物可以用於治療以下疾病的嗜酸性粒細胞過度增多的炎症棘球蚴(棘球屬種)、絛蟲感染(絛蟲屬種)，血吸蟲(血吸蟲病)和線蟲(蛔蟲)感染如鉤蟲(釣蟲屬種)、蛔蟲、類圓線蟲病、旋毛蟲以及特別是淋巴絲蟲病包括盤尾絲蟲、布氏絲蟲屬、吳策線蟲屬(象皮病)。
本發明的化合物也可以用作免疫抑制劑並由此已用於治療自身免疫病如移植後的同種異體組織移植排斥、類風溼關節炎和糖尿病。
本發明的化合物也可用於抑制轉移。
主要目標疾病包括哮喘、COPD和上呼吸道炎性疾病包括季節性和常年性鼻炎。優選的主要目標疾病包括哮喘和上呼吸道炎性疾病包括季節性和常年性鼻炎。其它主要目標疾病還包括胃腸道炎性疾病如炎性腸病。
本領域技術人員可以理解除治療所有確定的疾病外，可將治療擴展到預防。
正如以上所述，式(I)的化合物用於作為藥物，特別是作為抗炎藥物。
因此，本發明另一方面提供作為藥物，特別是治療患有炎性疾病如哮喘或鼻炎的患者的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
根據本發明的其它方面，提供式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物在製備用於治療患有炎性疾病如哮喘或鼻炎的患者的藥物中的用途。
在另一方面，提供治療患有炎性疾病如哮喘或鼻炎的人或動物個體的方法，所述方法包括給予所述人或動物個體有效量的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
可以將本發明的化合物配製成用於以任何常規方式給藥的形式，因此本發明的範圍也包括用於抗炎症治療的藥用組合物，該藥用組合物包括式(I)化合物或其生理學上可接受的鹽或其溶劑合物，以及(如果需要)一種或多種生理學上可接受的稀釋劑或載體。
本發明也提供製備這種藥用製劑的方法，該方法包括將各種成分進行混合。
可以將本發明的化合物例如配製成用於口服、吸入、鼻內、口腔含化、胃腸外或直腸給藥，特別是用於口服給藥。
用於口服給藥的片劑和膠囊可以含有常規的賦形劑，例如粘合劑如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、澱粉漿、纖維素或聚乙烯吡咯烷酮；填充劑如乳糖、微晶纖維素、蔗糖、玉米澱粉、磷酸鈣或山梨醇；潤滑劑如硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、聚乙二醇或矽石；崩解劑如馬鈴薯澱粉、交聯羧甲基纖維素鈉或羥基乙酸澱粉鈉；或者潤溼劑如十二烷基硫酸鈉。可以根據本領域已知的方法將片劑包衣。口服液體製劑可以是例如水性或油性懸浮劑、溶液劑、乳劑、糖漿或酏劑，或者可以是用於與水或其它合適的溶媒在使用前組合的乾燥產物。這樣的液體配製劑可以含有常規添加劑，如懸浮劑如山梨醇糖漿、甲基纖維素、葡萄糖/蔗糖糖漿、明膠、羥甲基纖維素、羧甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化的食用脂；乳化劑如卵磷脂、脫水山梨糖醇單油酸酯或阿拉伯樹膠；非水性溶媒(其可以包括食用油)如杏仁油、分級的椰子油、油性酯、丙二醇或乙醇；或防腐劑如對羥基苯甲酸甲基或丙基酯或山梨酸。合適時所述製劑也可以包括緩衝鹽、調味劑、著色劑和/或甜味劑(例如甘露糖醇)。
用於口腔含化給藥的所述組合物可以以常規方法製備成片劑或錠劑。
所述化合物也可以製備成栓劑，例如含有常規栓劑基質如可可脂或其它甘油酯。
也可以將本發明的化合物配製成用於經大劑量注射或連續輸入進行胃腸外給藥，並且所述化合物可以是單位劑量形式例如安瓿劑、管形瓶、小容量輸液劑或預灌裝注射器，或含有附加防腐劑的多劑量。所述組合物可以在水性或非水性溶媒中配製成如溶液、懸浮液或乳化劑的形式並且可以含有配製劑如抗氧化劑、緩衝劑、抗菌劑和/或張力調節劑。或者，所述活性成分可以粉末形式用於在使用前與合適的溶媒如無菌、無熱原的水混合。可以通過將無菌粉末無菌裝填到各個無菌容器中或通過將無菌溶液無菌裝填到各個容器中並冷凍乾燥製備成乾燥的固體劑型。
本發明的藥用組合物也可以用於與其它治療藥物如抗炎藥(皮質類固醇(如丙酸氟替卡松、倍氯米松雙丙酸酯、糠酸莫米他松、去炎松縮丙酮或布地奈德)或NSAID(例如色甘酸鈉、奈多羅米鈉、PDE-4抑制劑、白三烯拮抗劑、iNOS抑制劑、類胰蛋白酶以及彈性蛋白酶抑制劑、β-2整聯蛋白拮抗劑和腺苷2a激動劑))或β腎上腺素藥(如沙美特羅、沙丁胺醇、福莫特羅、非諾特羅或特布他林及其鹽)、抗組胺藥(如美沙吡林或氯雷他定)或抗感染藥(如抗菌藥、抗病毒藥)聯合給藥。
可以理解當將本發明的化合物與其它通常經吸入或鼻內給藥的治療藥聯合給藥時，所得到的藥用組合物可以通過吸入或鼻內給藥。
本發明的化合物可以方便地以如0.001-500mg/kg體重、優選0.01-500mg/kg體重、更優選0.01-100mg/kg體重的量每天1-4次給藥。當然實際的劑量將根據患者的年齡和狀況以及所選擇的給藥途徑決定。
本發明的化合物具有以下優勢它們與已知的類似化合物相比可以更有效，可以顯示出更大的選擇性，具有較少的副作用，具有長的有效期，當經口服給藥時具有更大的生物利用率，更容易和經濟地合成或具有更合乎要求的特性。
通過參考以下實施例說明本發明實施例通用實驗方法標準自動製備HPLC柱、條件和洗脫劑使用Supelco+5μm(100mm×22mm內徑)柱進行自動製備高效液相層析(自動製備HPLC)，將該柱以每分鐘4ml的流速用含有i)0.1％三氟乙酸水溶液和ii)0.1％三氟乙酸的乙腈溶液的混合溶劑洗脫，所述洗脫劑以ii)在所述溶劑混合物中的百分比表示。
質量定向的自動製備HPLC柱、條件和洗脫劑使用LCABZ+5μm(5cm×10mm內徑)柱進行質量定向(massdirected)自動製備高效液相層析，將該柱以每分鐘8ml的流速用兩種溶劑系統(A)0.1％甲酸水溶液和(B)95％乙腈和0.5％甲酸的水溶液進行梯度洗脫。使用VG平臺質譜分光光度計與HP1100二極體陣列檢測器以及精確流量分流器進行質譜測量。
LC/MS系統使用三種交替液相色譜質譜(LC/MS)系統系統A本系統使用3μm ABZ+PLUS(3.3cm×4.6mm內徑)柱，將該柱體以每分鐘3ml的流速用溶劑A-0.1％v/v甲酸+0.077％w/v乙酸銨水溶液和B-95∶5乙腈∶水+0.05％v/v甲酸洗脫。隨後使用梯度流程100％A 0.7分鐘；A+B混合物，梯度分布型0-100％B在3.5分鐘內；保持100％B 1.1分鐘；恢復到100％A 0.2分鐘洗脫。
系統B本系統使用3μm ABZ+PLUS(3.3cm×4.6mm內徑)柱，以每分鐘1ml的流速用溶劑A-0.1％v/v甲酸+0.077％w/v乙酸銨水溶液和B-95∶5乙腈∶水+0.05％v/v甲酸洗脫。隨後使用梯度流程100％A1.0分鐘；A+B混合物，梯度分布型0-100％B在9.0分鐘內；保持100％B 3.0分鐘；恢復到100％A 2.0分鐘洗脫。
系統C本系統使用3μmABZ+PLUS(3.3cm×4.6mm內徑)柱，以每分鐘1ml的流速用溶劑A-0.1％v/v甲酸+0.077％w/v乙酸銨水溶液和B-95∶5乙腈∶水+0.05％v/v甲酸洗脫。隨後使用梯度流程100％A 2.0分鐘；A+B混合物，梯度分布型0-100％B在20分鐘內；保持100％B 5.0分鐘；恢復到100％A 2.0分鐘；保持100％A 1.0分鐘洗脫。
所有LC/MS系統使用微量質譜儀，該儀器具有電噴射離子化方式，正極和負極離子轉換，質量範圍80-100a.m.u。
熱噴霧質譜在HP 5989A機動質譜儀上測定熱噴霧質譜，該儀具有+ve熱噴霧，源溫度250℃，探針溫度120℃(杆)，190℃(尖端)，檢出質量範圍100-850a.m.u。以0.7ml/分鐘的流速，將化合物注射進10μl含有65％甲醇和35％0.05M乙酸銨水溶液的溶劑混合物中。
正相自動製備HPLC柱、條件使用Nucleosil矽膠5μm(100mm×20mm內徑)柱進行正相自動製備高效液相層析(正相自動製備HPLC)，將該柱以每分鐘30ml的流速用乙酸乙酯庚烷兩步梯度(i)0％-25％乙酸乙酯7分鐘，隨後(ii)25％-100％乙酸乙酯5.5分鐘洗脫。
正相分析HPLC法使用Nucleosil矽膠3μm(150mm×4.6mm內徑)柱進行正相自動分析高效液體層析(正相分析HPLC)，將該柱以每分鐘2ml的流速用乙酸乙酯庚烷兩步梯度(i)0％-40％乙酸乙酯7分鐘，隨後經(ii)40％-100％乙酸乙酯2.5分鐘洗脫。
標準手性分析用HPLC系統該系統使用250×4.6mm Chiralpak AD 10μm柱，該柱體用無水乙醇∶庚烷混合物以每分鐘1ml的流速洗脫，UV檢出在215nm處。
標準手性製備HPLC系統該系統使用Chiralpak AD柱(2cm×25cm)，該柱體用無水乙醇庚烷混合物(15ml/分鐘，25分鐘內，UV檢出在215nm處)。
固相萃取(離子交換)『SCX』指Isolute Flash SCX-2磺酸固相萃取柱。
使用疏水性玻璃料的有機/水相分離『疏水性玻璃料』指裝有PTFE玻璃料的Whatman聚丙烯濾管，孔大小為5.0μm。
所有溫度都以℃表示。中間體中間體12，2，2-三氟-N-(嗎啉-2-基甲基)乙醯胺在氮氣下，向經攪拌的嗎啉-2-基甲胺(3.1g)的甲醇(70ml)溶液中加入α，α，α-三氟乙酸乙酯的醚溶液(5ml溶於20ml乙醚中)中，所述醚溶液已用飽和碳酸氫鈉水溶液、水和鹽水洗滌並乾燥。將該混合物在22℃下攪拌30分鐘，然後在真空中除去所有揮發物。將殘餘物溶於甲醇(10ml)中並再在真空中除去揮發物，得到白色易碎泡沫狀的題述化合物(4.9g)。熱噴霧質譜m/z213[MH+]。中間體2N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-2，2，2-三氟乙醯胺在氮氣下向經攪拌的中間體1(3.3g)的N，N-二甲基甲醯胺(50ml)溶液中加入碳酸鉀(2.46g)和碘化鈉(2.12g)。將3，4-二氯苄基氯(2ml)的N，N-二甲基甲醯胺(10ml)溶液滴加到所述混合物中。將該混合物在22℃下攪拌18小時，然後在真空中除去揮發性物。將殘餘物分配在二氯甲烷(100ml)和飽和碳酸鈉水溶液(50ml)之間。隨後用另外的飽和碳酸鈉水溶液(2×50ml)和水(50ml)洗滌有機相，然後經硫酸鎂乾燥，過濾並在真空中蒸發溶劑，得到淺黃色油狀物。將該油狀物在90g矽膠柱上經Biotage快速層析提純，用25％乙酸乙酯的環己烷溶液洗脫，得到無色油狀的題述化合物(2.97g)。LC/MS(系統A)Rt2.63分鐘，質譜m/z371[MH+]。中間體3[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲胺向攪拌著的中間體2(2.97g)在甲醇(15ml)和水(5ml)中的溶液中加入碳酸鉀(5.53g)。將該混合物在22℃下攪拌18小時，然後在真空中除去甲醇。加入水(25ml)並將該混合物用乙酸乙酯(3×30ml)萃取。將合併的有機相用水(5ml)和飽和氯化鈉水溶液(10ml)洗滌，然後經硫酸鈉乾燥，過濾並在真空中蒸發溶劑，得到淺黃色油狀物。將該油狀物在90g矽膠柱上經Biotage快速層析提純，用75∶8∶1二氯甲烷/乙醇/0.880氨溶液洗脫。合併所需部分並在真空中蒸發溶劑，得到無色油狀的題述化合物(1.85g)。LC/MS(系統A)Rt1.77分鐘，質譜m/z 275[M+H]+。中間體3[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲胺(備選合成方法)將2-[(3，4-二氯苄基)氨基]乙醇(化學文摘第40172-06-3號，0.980g)和2-(環氧乙烷-2-基甲基)-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮(1.10g)的混合物在80℃、氮氣下加熱3小時。將得到的固體物用濃硫酸(1.5ml)處理，然後在150℃下攪拌24小時，將該混合物用水(100ml)處理，然後用乙酸乙酯(2×100ml)洗滌。將深色含水相用5M氫氧化鈉水溶液鹼化至～pH12，然後用乙酸乙酯(2×100ml)萃取。用水和鹽水洗滌合併的有機萃取液，乾燥(Na2SO4)並在真空下濃縮，得到棕色油狀的題述化合物(1.02g)。LC-MS(系統A)Rt1.6分鐘。中間體3A[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲胺與對甲苯磺酸1∶1的鹽將2-[(3，4-二氯苄基)氨基]乙醇(2.25g)和2-氯丙烯腈(1.0ml)的四氫呋喃(3ml)溶液在40℃下加熱66小時。在真空中蒸發溶劑剩下樹膠狀物。將殘餘物再溶於四氫呋喃(20ml)中並冷卻至0-5℃。用10分鐘將叔丁醇鉀(1.2g)分批加入到所述溶液中並將混合物在0-5℃下再攪拌45分鐘。將該混合物用水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)稀釋，分離各相併將有機相用20％重量氯化鈉水溶液洗滌。有機相經硫酸鈉乾燥並在真空中蒸發溶劑剩下樹膠狀物(2.75g)。
在15-25℃下，將一份該樹膠狀物(0.22g)的四氫呋喃(1ml)溶液用1M硼烷。四氫呋喃絡合物的四氫呋喃(2.44ml)溶液逐滴處理。將該混合物在15-25℃下攪拌16小時，滴加入甲醇(3ml)。將混合物再攪拌5小時並在真空中蒸發溶劑。將殘餘物再溶於乙酸乙酯(4ml)中並加入對甲苯磺酸一水合物(0.123g)。將該混合物在50℃下加熱20分鐘，將懸浮液冷卻至15-25℃並攪拌15分鐘。將混合物過濾，用乙酸乙酯洗滌並乾燥，得到白色固體的題述化合物(0.123g)。LC/MS(系統A)Rt1.75分鐘。質譜m/z275/277[MH+]。中間體42-{[(三氟乙醯基)氨基]甲基}嗎啉-4-羧酸苄基酯在氮氣下，向經攪拌的中間體1(6.37g)的甲醇(250ml)溶液中加入氯甲酸苄基酯(4.7ml)和三乙胺(6.3ml)。將該混合物在22℃攪拌1小時，之後真空除去揮發物。將殘餘物在90g矽膠柱上經Biotage快速層析提純，用33％乙酸乙酯的環己烷溶液洗脫，得到白色固體的(4.4g)題述化合物。
LC/MS(系統A)Rt3.22分鐘，質譜m/z347[MH+]。中間體52-(氨基甲基)嗎啉-4-羧酸苄基酯向經攪拌的中間體4(4.4g)的1∶1甲醇/水(300ml)溶液中加入碳酸鉀(17.5g)。將該混合物在22℃攪拌36小時，之後真空蒸發揮發物。將殘餘物溶於水中，並用二氯甲烷萃取(×3)所得溶液。用飽和氯化鈉水溶液洗滌合併的有機萃取物，經硫酸鎂乾燥，過濾，然後真空蒸發溶劑。將殘餘物溶於甲醇中，並通過固相萃取(Isolute SCX磺酸柱)提純，最初用甲醇洗滌萃取柱，隨後用10％0.880氨的甲醇溶液洗脫，得到無色油狀物的題述化合物(2.27g)。LC/MS(系統A)Rt2.07分鐘，質譜m/z251[MH+]。中間體62-[({[(4-氯苯基)氨基]羰基}氨基)甲基]嗎啉-4羧酸苄基酯向經攪拌的中間體5(2.0g)的二氯甲烷(100ml)溶液中加入異氰酸4-氯苯基酯(1.35g)。將該混合物在22℃攪拌18小時，之後加入10％0.880氨的甲醇(10ml)溶液。再繼續攪拌30分鐘，然後真空除去溶劑。將殘餘物通過矽膠Biotage快速層析提純，用33％乙酸乙酯/環己烷洗脫；進一步通過矽膠Biotage快速層析提純，用500∶8∶1二氯甲烷/乙醇/0.880氨溶液洗脫，得到暗黃色固體的不純題述化合物(3.6g)。LC/MS(系統A)Rt3.41分鐘，質譜m/z404[MH+]。中間體7N-(嗎啉-2-基甲基)-N′-苯基脲在氫氣、1大氣壓、22℃條件下，將10％披鈀碳(1.5g)和中間體6(3.2g)在乙酸乙酯(250ml)中的懸浮液劇烈攪拌20小時。濾除催化劑，真空除去揮發物。用另外一份催化劑(1g)將該步驟再重複進行24小時，然後過濾並真空蒸發溶劑。在90g矽膠柱上通過Biotage快速層析提純殘餘物，用100∶8∶1二氯甲烷/乙醇/0.880氨溶液洗脫，得到無色油狀物的題述化合物(1.6g)。
LC/MS(系統A)Rt1.39分鐘，質譜m/z236[MH+]。中間體82-[({[(4-氯苯基)氨基]羰基}氨基)甲基]嗎啉-4-羧酸叔丁基酯向經攪拌的2-(氨基甲基)嗎啉-4-羧酸叔丁基酯(如EP 0 468231所述製備，2.4g)的二氯甲烷(100ml)溶液中加入異氰酸4-氯苯基酯(1.87g)。將該混合物在22℃攪拌16小時，之後加入10％0.880氨的甲醇溶液。再繼續攪拌30分鐘，然後真空除去溶劑，得到白色泡沫狀的題述化合物(3.98g)。LC/MS(系統A)Rt3.19分鐘，質譜m/z370[MH+]。中間體9N-(4-氯苯基)-N′-(嗎啉-2-基甲基)脲在22℃，將中間體8(1.9g)在4.0M氯化氫的1，4-二噁烷(40ml)溶液中攪拌30分鐘。真空除去溶劑，通過固相萃取(Isolute SCX磺酸柱)提純殘餘物，先用甲醇後用10％0.880 NH3的甲醇溶液洗脫，得到奶油泡沫狀的題述化合物(1.15g)。
LC/MS(系統A)Rt2.03分鐘，質譜m/z270[MH+]。中間體10[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基氨基甲酸4-硝基苯基酯在20℃、氮氣、攪拌條件下，將三乙胺(0.09ml)加入到中間體3(0.150g，0.545mmol)的二氯甲烷(3ml)溶液中。將該溶液冷卻至0℃，並向其中滴加氯甲酸4-硝基苯基酯(0.121g)的二氯甲烷(1ml)溶液。將所得混合物在0℃攪拌4小時。將溶液升溫至20℃，用鹽水(4ml)洗滌，乾燥(MgSO4)，並真空濃縮。通過矽膠Biotage快速層析提純，用35％乙酸乙酯的環己烷溶液洗脫，得到淡黃色固體的題述化合物(0.119g)。LC/MS(系統A)Rt3.01分鐘，質譜m/z441[MH+]。中間體111-[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]-甲胺通過製備手性-HPLC將中間體3(外消旋混合物，8g)分離為它的單一對映體。使用2」×22cm Chiralpak AD 20μm柱體、Merck selfpack DAC系統進行所述分離，用95∶5∶0.1(v/v)庚烷∶無水乙醇∶二乙胺(流速55ml/分鐘，40分鐘，UV檢測225nm)洗脫；試樣載荷製備400mg試樣在20ml的3∶2(v/v)無水乙醇∶系統洗脫劑溶液中。
如下得到題述化合物(2.49g)製備HPLC、保留時間23.0分鐘。中間體11A1-[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]-甲胺與D-酒石酸1∶1的鹽將35％肼的水(1.8ml)溶液加入到中間體42(5g)在工業用甲基化酒精(75ml)中的淤漿中，並將該混合物加熱至回流。加入氯仿(75ml)並將該混合物在回流下加熱65小時。將反應混合物冷卻至0-4℃並放置15分鐘。經真空過濾除去副產物鄰苯二甲醯肼並用氯仿(50ml)洗滌。用水(50ml，25ml)洗滌濾液，乾燥(MgSO4)並在真空中蒸發溶劑得到油狀物。將該油狀物溶於甲醇(20ml)中，將其在真空中蒸發得到油狀物。將該油狀物溶於甲醇(100ml)中並加入D-酒石酸(1.05g)。將該混合物加熱至回流並在回流下保持30分鐘。將所述溶液冷卻至45-50℃，然後接種。將該淤漿保持在該溫度下30分鐘，然後冷卻至0-4℃並保持30分鐘。過濾分離產物，得到白色固體的題述化合物(2.59g)。
將粗製的D-酒石酸鹽樣品(500mg)溶於水(1.4ml)中。加入甲醇(23ml)得到淤漿，將該淤漿加熱至回流得到溶液。將混合物在回流下攪拌30分鐘，然後緩慢冷卻，在55℃下接種。將得到的淤漿冷卻至0-4℃並放置30分鐘。過濾分離產物，得到白色固體的題述化合物(0.355g)。ee91.6％eeLC/MS(系統A)Rt1.75分鐘。質譜m/z275/277[MH+]。
手性分析HPLC(Chiralpak AD柱，4.6×250mm，洗脫劑50∶50∶0.1MeOH∶EtOH∶丁胺，流速0.5ml/分鐘，在220nmUV檢測)，Rt8.9分鐘。中間體11A(備選步驟)1-[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]-甲胺與D-酒石酸1∶1的鹽將中間體3(0.613g)溶於甲醇(12.3ml)中。加入D-酒石酸(0.335g)並將淤漿加熱至回流50分鐘。將該混合物冷卻至0-5℃並過濾分離沉澱物，得到白色固體的題述化合物(0.4g)。ee76％ee。手性分析HPLC(Chiralpak AD柱，4.6×250mm，洗脫劑50∶50∶0.1MeOH∶EtOH∶丁胺，流速0.5ml/分鐘，在220nmUV檢測)，Rt8.9分鐘。中間體121-[(2R)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]-甲胺如下通過與中間體11類似的方法製備中間體12，得到題述化合物(2.24g)製備HPLC，保留時間27.8分鐘。中間體12A1-[(2R)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]-甲胺與L-酒石酸1∶1的鹽將中間體3(0.500g)溶於甲醇(5ml)中。加入L-酒石酸(0.273g)並將該混合物加熱至～65℃得到乳狀淤漿，保持在此溫度下1小時。再加入甲醇(5ml)並使混合物緩慢冷卻至15-25℃，然後再冷卻至0-4℃。將該混合物在此溫度下攪拌30分鐘，過濾分離產物，得到白色固體的題述化合物(0.38g)。ee78％LC/MS(系統A)Rt1.75分鐘。質譜m/z275/277[MH+]。
手性分析HPLC(Chiralpak AD柱，4.6×250mm，洗脫劑50∶50∶0.1MeOH∶EtOH∶丁胺，流速0.5ml/分鐘，在220nmUV檢測)，Rt10.5分鐘。中間體13[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基氨基甲酸4-硝基苯基酯中間體13以類似於中間體10的方式，由中間體11(0.225g)和氯甲酸4-硝基苯基酯(0.182g)製備，得到題述化合物(0.2g)。LC-MS(系統A)Rt3.1分鐘，質譜m/z441[MH+]。中間體14[(2R)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基氨基甲酸4-硝基苯基酯中間體14以類似於中間體10的方式，由中間體12(0.21g)和氯甲酸4-硝基苯基酯(0.17g)製備，得到題述化合物(0.23g)。LC-MS(系統A)Rt3.09分鐘，質譜m/z441[MH+]。中間體154-{[({[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}哌啶-1-羧酸叔丁基酯中間體15以類似於實施例43的方法，用四氫呋喃作溶劑，在沒有鹼的情況下製備，製得白色固體的題述化合物(0.157g)。LC/MS(系統A)Rt2.92分鐘，質譜m/z501[MH+]。中間體16N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-哌啶-4-基脲鹽酸鹽在23℃、氮氣下，將中間體15(0.157g)在含有4.0M氯化氫的二噁烷(0.78ml)溶液的二噁烷(4ml)中攪拌16小時。真空除去溶劑，使之與二氯甲烷(20ml)共沸，在乙醚中研磨，並在真空下乾燥，得到淡黃色固體的題述化合物(0.12g)。LC/MS(系統A)Rt2.02分鐘，質譜m/z401[MH+]。中間體174-({[({[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}甲基)哌啶-1-羧酸叔丁基酯中間體17以類似於實施例57的方法製備。
LC-MS(系統A)Rt2.72分鐘，質譜m/z515[MH+]。中間體18N-{[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(哌啶-4-基甲基)脲二鹽酸鹽在23℃、氮氣下，將中間體17(0.390g)在4.0M氯化氫的二噁烷(4ml)溶液中攪拌2小時。真空除去溶劑，與二氯甲烷(20ml)共沸，並真空乾燥，得到淡黃色體固體的題述化合物(0.33g)。LC/MS(系統A)Rt1.84分鐘，質譜m/z415[MH+]。中間體19[(2S)-4-(3-氯苄基)嗎啉-2-基]甲基胺中間體19以類似於中間體11的方法製備，製備HPLC保留時間26.1分鐘。中間體20[(2S)-4-(2，3-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基胺中間體20以類似於中間體11的方法製備，製備HPLC保留時間25.3分鐘。中間體21[(2S)-4-(3，4-二氟苄基)嗎啉-2-基]甲基胺中間體21以類似於中間體11的方法製備，製備HPLC保留時間28.3分鐘。中間體22丙-2-炔基氨基甲酸4-硝基苯基酯在0℃，將炔丙胺(0.017ml)和三乙胺(0.38ml)的二氯甲烷(2ml)溶液滴加到氯甲酸對硝基苯基酯(0.55g)的二氯甲烷(3ml)溶液中。將所得溶液在該溫度下攪拌1小時，再在23℃攪拌5小時。真空除去溶劑，並將殘餘物通過固相萃取(10g矽膠柱，Varian Bond Elut)提純，用20-60％乙酸乙酯的環己烷溶液洗脫，製得白色固體的題述化合物(0.419g)。
LC/MS(系統A)Rt2.67分鐘，質譜m/z220[MH+]。中間體23{(2S)-4-[(5-氯噻吩-2-基)甲基]嗎啉-2-基}甲基胺中間體23以類似於中間體11的方法製備，手性製備HPLC保留時間25.2分鐘。中間體24[(2R，5R)-4-(3，4-二氯苄基)-5-甲基嗎啉-2-基]甲基胺(與反式異構體的混合物，順式∶反式60∶40)中間體24以類似於中間體31的方法，由(2R)-2-氨基丙-1-醇製備。
LC-MS(系統A)Rt1.9分鐘，質譜m/z289[MH+]。中間體254-{[({[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}丁酸叔丁基酯在氮氣下，將4-氨基丁酸叔丁酯鹽酸鹽(0.235g)加入到經攪拌的中間體13(0.440g)和N，N-二異丙基乙基胺(0.42ml)的無水二氯甲烷(20ml)溶液中，並將該混合物在22℃攪拌18小時。用飽和碳酸鉀水溶液(20ml)處理該混合物並攪拌5分鐘。分離各層，將有機層上樣於矽膠柱(10g Varian Bond Elut)。用二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯和丙酮洗脫，得到粗產物(0.357g)。進一步在矽膠(10g Varian Bond Elut)上層析提純，用二氯甲烷(1柱體積)、乙醚(4柱體積)和乙酸乙酯(8柱體積)洗脫，得到膠狀物的題述化合物(0.345g)。
LC-MS(系統A)Rt2.66分鐘，質譜m/z460[MH+]。中間體264-{[({[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}丁酸鹽酸鹽將中間體25(0.345g)溶於4M氯化氫的二噁烷(5ml)溶液中，將該混合物在22℃靜置19.5小時。真空蒸發溶劑，得到白色固體的題述化合物(0.330g)。
LC-MS(系統A)Rt2.16分鐘，質譜m/z404[MH+]。中間體272-[3-(吡咯烷-1-基磺醯基)丙基]-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮在22℃、氮氣下，用N，N-二異丙基乙基胺(0.350ml)和吡咯烷(0.10ml)處理3-(1，3-二氧代-1，3-二氫-2H-異吲哚-2-基)丙烷-1-磺醯氯(0.288g)的無水四氫呋喃(5ml)溶液，並將該混合物在22℃攪拌1小時。在室溫下靜置過夜後，將該混合物在飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)和乙酸乙酯(2×10ml)之間分配。用鹽水洗滌有機層，乾燥(MgSO4)，並真空蒸發，得到白色固體(0.145g)。
LC-MS(系統A)Rt2.81分鐘，質譜m/z323[MH+]。中間體283-(吡咯烷-1-基磺醯基)丙基胺用硼氫化鈉(0.081g)處理中間體27(0.139g)在異丙醇(7.6ml)和水(1.3ml)中的溶液，並將該混合物在室溫、氮氣下攪拌19小時。小心地加入冰醋酸(0.45ml)，並將所得混合物在80℃加熱2小時。真空蒸發溶劑，得到白色固體，將其溶於甲醇中，並上樣於磺酸離子交換柱(10g Isolute SCX)。先用甲醇洗脫，隨後用10％0.880氨的甲醇溶液洗脫，蒸發氨/甲醇流分，得到白色固體的題述化合物(0.027g)。
TLC SiO2(二氯甲烷∶乙醇∶0.880氨89∶10∶1)Rf0.2中間體29[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基氨基甲酸4-硝基苯基酯鹽酸鹽在0℃、氮氣下，將三乙胺(0.101ml)和中間體11(2.0g)在二氯甲烷(20ml)中的混合物滴加到氯甲酸4-硝基苯基酯(1.62g)的二氯甲烷(10ml)溶液中。將所得溶液在0℃攪拌3小時，升溫至20℃，靜置18小時。真空蒸發揮發組分，並將殘餘物通過矽膠(90g柱)Biotage快速層析提純，最初用10％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，隨後用20％甲醇的二氯甲烷溶液洗脫，得到淡褐色固體的題述化合物(2.5g)。
LCMS(系統A)Rt2.89分鐘，質譜m/z441[MH+]中間體301-(2-甲基-2H-四唑-5-基)甲胺鹽酸鹽向中間體37(0.47g)中加入4.0M氯化氫的1，4-二噁烷(5ml)溶液。將該混合物在22℃攪拌3小時，真空除去溶劑。將殘餘物再次溶於4.0M氯化氫的1，4-二噁烷(5ml)溶液中，並將其在22℃靜置18小時。真空蒸發溶劑，得到奶油狀固體的題述化合物(0.319g)。
熱噴霧質譜m/z＝114[MH+]中間體311-[4-(3，4-二氯苄基)-5-甲基嗎啉-2-基]甲胺(順/反比2∶1)將中間體43(0.470g)和2-(環氧乙烷-2-基甲基)-1H-異吲哚-1，3(2H)-二酮(0.410g)的混合物在80℃、氮氣下加熱5小時。用濃硫酸(0.6ml)處理該混合物，然後在150℃攪拌42小時。將該混合物用水(50ml)處理，然後用乙酸乙酯(2×50ml)洗滌。用5M氫氧化鈉水溶液將深色水相鹼化至～pH11，然後用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。將合併的有機萃取液用水和鹽水洗滌，乾燥(Na2SO4)，真空濃縮，得到褐色油狀物的題述化合物(0.42g)。
LC-MS(系統A)Rt1.74分鐘。中間體32{(2S)-4-[1-(3，4-二氯苯基)乙基]嗎啉-2-基}甲基氨基甲酸叔丁酯將(2R)-嗎啉-2-基甲基氨基甲酸叔丁基酯(2.00g)的N，N-二甲基甲醯胺(16ml)溶液先用N，N-二異丙基乙基胺(1.6ml)處理，隨後用4-(1-溴乙基)-1，2-二氯苯(2.58g)處理。在室溫下攪拌5天後，加入另外部分的4-(1-溴乙基)-1，2-二氯苯(2.58g)和N，N-二異丙基乙基胺(1.6ml)，並在室溫下繼續攪拌24小時。用二氯甲烷(70ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(30ml)處理所得溶液，並劇烈振蕩該混合物。分離有機相，並將其同樣地上樣於磺酸離子交換柱(5×10g經甲醇預處理的IsoluteSCX)。各柱分別先用甲醇(1柱體積)後用10％0.880氨的甲醇溶液(1柱體積)洗脫；真空蒸發合併的基本流分，得到澄清無色膠狀物的題述化合物(3.22g)。
LC-MS(系統A)Rt2.74分鐘，質譜m/z389[MH+]。中間體331-{(2S)-4-[1-(3，4-二氯苯基)乙基]嗎啉-2-基}甲胺二鹽酸鹽將中間體32用4M氯化氫的二噁烷(15ml)溶液進行處理，並將該溶液在室溫下攪拌2小時。將所得溶液用甲醇(20ml)處理，並真空濃縮，得到灰白色固體的題述化合物(1.53g)。
LC/MS(系統A)Rt1.86分鐘和1.91分鐘，質譜m/z289[MH+]。中間體34和35{(2S)-4-[1-(3，4-二氯苯基)乙基]嗎啉-2-基}甲基氨基甲酸4-硝基苯基酯(分別為異構體I和II)在0℃、氮氣下，將中間體33(0.724g)的二氯甲烷(5ml)溶液用三乙胺(1.14ml)進行處理，形成淤漿，將該淤漿在5分鐘內分成幾份加入到氯甲酸4-硝基苯基酯(0.444g)的無水二氯甲烷(5ml)溶液中。在2小時內將攪拌的溶液加熱至室溫，然後過濾；將濾液通過矽膠(Biotage90g柱)層析直接提純，用35-40％乙酸乙酯的環己烷溶液洗脫，真空蒸發適當的流分，得到不透明的黃色膜狀題述化合物(異構體I)(0.202g)。
LC/MS(系統A)Rt2.90分鐘，質譜m/z454[MH+]。
分析手性HPLC Rt18.03分鐘(洗脫劑25％EtOH/庚烷)。
合併適當的其它流分，真空濃縮，得到不透明黃色膜狀的另一種題述化合物(異構體II)(0.196g)。
LC/MS(系統A)Rt2.88分鐘，質譜m/z454[MH+]。
手性分析HPLC Rt15.38分鐘(洗脫劑25％EtOH/庚烷)。中間體361H-四唑-5-基甲基氨基甲酸叔丁基酯在22℃，向經攪拌的1-(1H-四唑-5-基)甲胺(6.0g)的水(120ml)溶液中加入氫氧化鈉(4.8g)，然後滴加二碳酸二叔丁酯(13.48g)的甲醇(20ml)溶液。再向所得混合物中加入甲醇(40ml)，並持續攪拌4小時；然後將所得混合物在4℃靜置60小時。真空蒸發甲醇，用2M含水鹽酸將含水殘餘物酸化至大約pH6。用乙酸乙酯(×3)萃取含水該混合物，並用飽和氯化鈉水溶液洗滌合併的有機萃取液，乾燥(MgSO4)，真空蒸發溶劑，得到白色固體的題述化合物(1.50g)。
熱噴霧質譜m/z200[MH+]，217[MNH4+]中間體37(2-甲基-2H-四唑-5-基)甲基氨基甲酸叔丁基酯在22℃、氮氣下，向經攪拌的中間體36(1.0g)在二氯甲烷(35ml)和甲醇(10ml)中的溶液中滴加10％三甲代甲矽烷基重氮甲烷的己烷(12.0ml)溶液。將該混合物在22℃攪拌2小時，之後滴加入乙酸(2ml)，並真空蒸發溶劑。將粗殘餘物通過矽膠(90g柱)Biotage快速柱層析提純，用10％環己烷的乙醚溶液洗脫。合併用於第一洗脫異構體的流分，真空蒸發溶劑，得到淡黃色結晶的題述化合物(0.487g)。
熱噴霧質譜m/z＝214[MH+]TLC(SiO2)，10％環己烷/乙醚)Rf＝0.35，用KMnO4可見中間體383-(乙硫基)丙基氨基甲酸叔丁基酯用乙硫醇(0.104ml)和碳酸鉀(0.29g)處理3-溴丙基氨基甲酸叔丁基酯(0.30g)的N，N-二甲基甲醯胺(5ml)溶液，並將該混合物在室溫下攪拌過夜。將所得混合物在水(20ml)和二氯甲烷(30ml)之間分配，真空蒸發有機層，得到題述化合物(0.236g)。
TLC SiO2(環己烷∶乙酸乙酯4∶1)Rf0.5。中間體393-(乙基磺醯基)丙基氨基甲酸叔丁基酯在22℃，氮氣下，將3-氯過苯甲酸(0.373g)加入到經攪拌的中間體38(0.236g)的無水二氯甲烷(6ml)溶液中，並將該混合物在22℃攪拌18小時。將所得混合物用飽和碳酸鈉水溶液(10ml)處理，攪拌3分鐘，將分離後的有機相真空蒸發，得到題述化合物(0.275g)。
NMR(CDCl3)5.15δ(1H，br.t，NH)，3.25δ(2H，q，CH2)，3.00δ(4H，t+q，2×CH2)，2.03δ(2H，m，CH2)，1.50-1.30δ(12H，s+t，4×CH3)中間體403-(乙基磺醯基)丙-1-胺鹽酸鹽將中間體39(0.275g)溶於4M氯化氫的二噁烷(3ml)溶液中，並將該溶液在22℃靜置2小時。真空蒸發溶劑，得到白色固體的題述化合物(186mg)。
NMR(D4 MeOH)3.25δ(2H，t，CH2)，3.15δ(4H，t+q，2×CH2)，2.18δ(2H，m，CH2)，1.38δ(3H，t，CH3)。中間體41[4-(3，4-二氯苄基)-1，4-氧雜氮雜環庚-2-基]甲基胺在玻璃燒結的肽容器中，用四氫呋喃洗滌甲醯基聚苯乙烯樹脂(1.6g，裝填＝2.95mmol/g)5次。加入1-(1，4-氧雜氮雜環庚-2-基)甲胺(0.619g)的四氫呋喃(20ml)溶液，將該混合物在22℃振蕩18小時。過濾混合物，用四氫呋喃(4×20ml)和甲醇(3×10ml)洗滌樹脂，並乾燥。將一份乾燥後的樹脂(1.2g)懸浮於N，N-二甲基甲醯胺(20ml)中，加入N，N-二異丙基乙基胺(2.04ml)和3，4-二氯苄基氯。將該混合物在70℃輕柔地攪拌22小時。冷卻後，過濾混合物，將樹脂用THF(5×10ml)和二氯甲烷(5×10ml)洗滌，並在熔渣上風乾。將樹脂放進玻璃燒結的肽容器中，並使其懸浮於四氫呋喃(9ml)中；加入濃鹽酸(3ml)，將該容器振蕩2小時。濾掉樹脂，用四氫呋喃(2×10ml)洗滌。真空濃縮合併後的濾液，得到澄清的油，將其上樣於離子交換柱(10g經甲醇預調節的Isolute SCX)。先用甲醇(3柱體積)後用10％0.880氨的甲醇溶液(2柱體積)洗脫，真空蒸發基本流分，得到殘餘物。重複(如上所述)離子交換提純，得到無色膠狀物的題述化合物(0.256g)。
1H NMR(CDCl3)7.46δ(1H，d，芳族CH)，7.38δ(1H，d，芳族CH)，7.19δ(1H，dd，芳族CH)，3.94δ(1H，m，CH)，3.80δ(1H，m，CH)，3.59δ(2H，s，CH2)，3.57δ(1H，m，CH)，2.82-2.53δ(5H，m，5×CH)，2.38δ(1H，dd，CH)，1.98-1.78δ(2H，m，2×CH)，1.49δ(2H+H2O，br.s，NH2)。中間體422-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-1H-異吲哚-1，3-(2H)-二酮在攪拌、氮氣氛下向2-(環氧乙烷-2-基甲基)-1H-異吲哚-1，3-(2H)-二酮(N-(2，3-環氧丙基)-鄰苯二甲醯亞胺)(2g)的四氫呋喃(4ml)溶液中加入2-[(3，4-二氯苄基)氨基]乙醇(2.16g)。將該混合物在66℃下加熱22小時，然後冷卻至0℃。再加入一份四氫呋喃(10ml)，隨後加入三苯膦(2.88g)。然後用10分鐘加入偶氮二羧酸二異丙基酯(2.2g)。將該混合物在0℃下再攪拌30分鐘，並在室溫下攪拌14小時。向該粗製的溶液中加入乙酸乙酯(100ml)，然後加入2M鹽酸水溶液(250ml)。過濾分離得到的白色沉澱，並在真空中乾燥得到題述化合物，其為白色晶狀鹽酸鹽(2.01g)。將該鹽酸鹽分配在8％碳酸氫鈉水溶液(200ml)和乙酸乙酯(50ml)之間。分離有機相，經硫酸鎂乾燥並在真空中蒸發溶劑得到固體。向殘餘物中加入二氯甲烷(20ml)並在真空中再一次蒸發溶劑，得到白色固體的題述化合物(1.1g)。LC/MS(系統A)Rt2.91分鐘。質譜m/z405[MH+]。中間體432-[(3，4-二氯苄基)氨基]丙-1-醇將3，4-二氯苄基氯(0.988g)中加入到2-氨基-1-丙醇(4.10g)中，將該混合物在50℃、氮氣下攪拌2小時。將混合物在飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)和乙酸乙酯(100ml)之間分配，分離各相。用水(4×100ml)和鹽水洗滌有機層，乾燥(Na2SO4)，然後真空濃縮，得到白色固體的題述化合物(0.935g)。
LC-MS(系統A)Rt2.13分鐘。
實施例5N-(3-氰基苯基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例5採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和3-異氰醯苄腈(0.0196g)，製得題述化合物(0.0257g)。LC-MS(系統A)Rt2.29分鐘，質譜m/z419[MH+]。實施例6N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(2-甲基苄基)脲實施例6採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-(異氰醯甲基)-2-甲基苯(0.0201g)，製得題述化合物(0.0269g)。LC-MS(系統A)Rt2.31分鐘，質譜m/z422[MH+]。實施例7N-環己基-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例7採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和異氰醯環己烷(17.4μl)，製得題述化合物(0.0298g)。LC-MS(系統A)Rt2.26分鐘，質譜m/z400[MH+]。實施例8N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(2-苯基乙基)脲實施例8採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和(2-異氰醯乙基)苯(18.9μl)的混合物，製得題述化合物(0.0312g)。LC-MS(系統A)Rt2.29分鐘，質譜m/z422[MH+]。實施例9N-({4-[2-(2，3-二氫-1H-吲哚-1-基)-2-氧代乙基]嗎啉-2-基}甲基)-N′-苯基脲向經攪拌的中間體7(0.01g)的N，N-二甲基甲醯胺(0.5ml)溶液中加入1-(2-氯乙醯基)二氫吲哚(0.0092g)。將該混合物在22℃攪拌17小時，之後加入三(2-氨基乙基)胺聚苯乙烯(Argonaut Technologies，[email protected]/g)和聚苯乙烯異氰酸甲基酯(Argonaut Technologies，[email protected]/g)。再繼續攪拌30分鐘，然後通過固相萃取(1gIsolute SCX磺酸柱)提純該混合物，先用甲醇隨後用10％0.880氨的甲醇溶液進行洗脫。真空蒸發基本流分，得到白色固體的題述化合物(0.012g)。LC/MS(系統A)Rt2.69分鐘，質譜m/z394[MH+]。實施例10N-烯丙基-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例10採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和3-異氰醯丙-1-烯(12.0μl)的混合物，製得題述化合物(0.027g)。LC-MS(系統A)Rt1.93分鐘，質譜m/z358[MH+]。實施例11N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(3-氟苯基)脲實施例11採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-氟-3-異氰醯苯(15.6μl)的混合物，製得題述化合物(0.019g)。LC-MS(系統A)Rt2.35分鐘，質譜m/z412[MH+]。實施例12N-(3-溴苯基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例12採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-溴-3-異氰醯苯(17.0μl)的混合物，製得題述化合物(0.03g)。LC-MS(系統A)Rt2.50分鐘，質譜m/z472[MH+]。實施例13N-(3-氯苯基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例13採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-氯-3-異氰醯苯(16.6μl)的混合物，製得題述化合物(0.0247g)。LC-MS(系統A)Rt2.46分鐘，質譜m/z428[MH+]。實施例14N-(4-氯苯基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例14採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-氯-4-異氰醯苯(17.4μl)的混合物，製得題述化合物(0.0275g)。LC-MS(系統A)Rt2.45分鐘，質譜m/z428[MH+]。實施例153-{[({[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}苯甲酸甲酯實施例15採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和3-異氰醯苯甲酸甲酯(0.0241g)的混合物，製得題述化合物(0.037g)。LC-MS(系統A)Rt2.32分鐘，質譜m/z452[MH+]。實施例16N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-[4-(二氟甲氧基)苯基]脲實施例16採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-(二氟甲氧基)-4-異氰醯苯(19.1μl)的混合物，製得題述化合物(0.0252g)。LC-MS(系統A)Rt2.41分鐘，質譜m/z460[MH+]。實施例17N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(4-氟苯基)脲實施例17採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-氟-4-異氰醯苯(15.5μl)的混合物，製得題述化合物(0.0311g)。LC-MS(系統A)Rt2.30分鐘，質譜m/z421[MH+]。實施例18N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-[3-(甲硫基)苯基]脲實施例18採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-異氰醯-3-(甲硫基)苯(18.8μl)的混合物，製得題述化合物(0.0352g)。LC-MS(系統A)Rt2.41分鐘，質譜m/z440[MH+]。實施例19N-(4-氯苯基)-N′-{[4-(1-萘基甲基)嗎啉-2-基]甲基}脲向經攪拌的中間體9(0.01g)的N，N-二甲基甲醯胺(1ml)溶液中加入1-(氯甲基)萘(6.1μl)。將該混合物在22℃攪拌24小時，之後加入三-(2-氨基乙基)胺聚苯乙烯(Argonaut Technologies，[email protected]/g)和聚苯乙烯異氰酸甲基酯(Argonaut Technologies，[email protected]/g)。再繼續攪拌2小時，然後通過固相萃取(Isolute SCX磺酸柱)提純該混合物，先用甲醇隨後用10％0.880氨的甲醇溶液進行洗脫。真空蒸發基本流分，得到題述化合物(0.003g)。LC/MS(系統A)Rt2.82分鐘，質譜m/z410[MH+]。實施例20N-(4-溴苯基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例20採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-溴-4-異氰醯苯(0.027g)的混合物，製得題述化合物(0.033g)。LC-MS(系統A)Rt2.49分鐘，質譜m/z472[MH+]。實施例21N-(4-氯苯基)-N′-{[4-(3-碘苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例21採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和1-(溴甲基)-3-碘苯(0.0121g)的混合物，製得題述化合物(0.0087g)。LC-MS(系統A)Rt2.83分鐘，質譜m/z486[MH+]。實施例22N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-[3-(三氟甲基)苯基]脲實施例22採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-異氰醯-3-(三氟甲基)苯(18.8μl)的混合物，製得題述化合物(0.0112g)。LC-MS(系統A)Rt2.56分鐘，質譜m/z462[MH+]。實施例23N-(4-氯苯基)-N′-{[4-(2-萘基甲基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例23採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和2-(溴甲基)萘(0.009g)的混合物，製得題述化合物(0.0052g)。LC-MS(系統A)Rt2.81分鐘，質譜m/z410[MH+]。實施例24N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(2，6-二氯吡啶-4-基)脲實施例24採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和2，6-二氯-4-異氰醯吡啶(0.0258g)的混合物，製得題述化合物(0.0165g)。LC-MS(系統A)Rt2.46分鐘，質譜m/z463[MH+]。實施例25N-(4-氰基苯基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例25採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和4-異氰醯苄腈(0.0196g)的混合物，製得題述化合物(0.0325g)。LC-MS(系統A)Rt2.29分鐘，質譜m/z419[MH+]。實施例26N-{[4-(3-氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(4-氯苯基)脲實施例26採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和1-(溴甲基)-3-氯苯(5.4μl)的混合物，製得題述化合物(0.0023g)。LC-MS(系統A)Rt2.72分鐘，質譜m/z394[MH+]。實施例27N-[(4-丁-3-烯基嗎啉-2-基)甲基]-N′-(4-氯苯基)脲實施例27採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和4-溴丁-1-烯(4.1μl)的混合物，製得題述化合物(0.0027g)。LC-MS(系統A)Rt2.34分鐘，質譜m/z324[MH+]。實施例28N-(4-氯苯基)-N′-({4-[2-(苯硫基)乙基]嗎啉-2-基}甲基)脲實施例28採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和[(2-溴乙基)硫代]苯(0.0089g)的混合物，製得題述化合物(0.0023g)。LC-MS(系統A)Rt2.77分鐘，質譜m/z406[MH+]。實施例29N-(4-氯苯基)-N′-{[4-(2-甲氧基乙基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例29採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和1-溴-2-甲氧基乙烷(3.8μl)的混合物，製得題述化合物(0.0041g)。LC-MS(系統A)Rt2.22分鐘，質譜m/z328[MH+]。實施例30N-{[4-(1，1′-聯苯-4-基甲基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(4-氯苯基)脲實施例30採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和4-(氯甲基)-1，1′-聯苯(0.0083g)的混合物，製得題述化合物(0.0052g)。LC-MS(系統A)Rt2.95分鐘，質譜m/z436[MH+]。LC-MS(系統A)Rt2.95分鐘，質譜m/z436[MH+]。實施例31N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(1-萘基)脲實施例31採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-異氰醯萘(19.6μl)的混合物，製得題述化合物(0.0304g)。LC-MS(系統A)Rt2.43分鐘，質譜m/z444[MH+]。實施例32N-(1，1′-聯苯-4-基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例32採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和4-異氰醯-1，1′-聯苯(0.0266g)的混合物，製得題述化合物(0.0314g)。LC-MS(系統A)Rt2.65分鐘，質譜m/z470[MH+]。實施例33N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(4-苯氧基苯基)脲實施例33採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-異氰醯-4-苯氧基苯(24.6μl)的混合物，製得題述化合物(0.0171g)。LC-MS(系統A)Rt2.62分鐘，質譜m/z486[MH+]。實施例34N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-{4-[(三氟甲基)硫代]苯基}脲實施例34採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-異氰醯-4-[(三氟甲基)硫代]苯(21.9μl)的混合物，製得題述化合物(0.0122g)。LC-MS(系統A)Rt2.70分鐘，質譜m/z494[MH+]。實施例35N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-[4-(三氟甲氧基)苯基]脲實施例35採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-異氰醯-4-(三氟甲氧基)苯(20.6μl)的混合物，製得題述化合物(0.0371g)。LC-MS(系統A)Rt2.57分鐘，質譜m/z478[MH+]。實施例36N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-[4-(二甲基氨基)苯基]脲實施例36採用與實施例1類似的方法，用中間體3(0.025g)和4-異氰醯-N，N-二甲基苯胺(0.0221g)的混合物，製得題述化合物(0.031g)。LC-MS(系統A)Rt1.68分鐘，質譜m/z437[MH+]。實施例37N-(4-氯苯基)-N′-({4-[(5-氯噻吩-2-基)甲基]嗎啉-2-基}甲基)脲實施例37採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和2-氯-5-(氯甲基)噻吩(0.0068g)的混合物，製得題述化合物(0.0098g)。LC-MS(系統A)Rt2.84分鐘，質譜m/z400[MH+]。實施例38N-(4-氯苯基)-N′-{[4-(4-乙烯基苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例38採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和1-(氯甲基)-4-乙烯基苯(0.0062g)的混合物，製得題述化合物(0.0071g)。LC-MS(系統A)Rt2.72分鐘，質譜m/z386[MH+]。實施例39苯甲酸2-{2-[({[(4-氯苯基)氨基]羰基}氨基)甲基]嗎啉-4-基}乙酯實施例39採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和苯甲酸2-溴乙酯(6.5μl)的混合物，製得題述化合物(0.007g)。LC-MS(系統A)Rt2.69分鐘，質譜m/z418[MH+]。實施例40N-(4-氯苯基)-N′-({4-[2-(4-氟苯氧基)乙基]嗎啉-2-基}甲基)脲實施例40採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和1-(2-溴乙氧基)-4-氟苯(0.0089g)的混合物，製得題述化合物(0.007g)。LC-MS(系統A)Rt2.69分鐘，質譜m/z408[MH+]。實施例41N-(4-氯苯基)-N′-({4-[4-(4-氯苯基)-4-氧代丁基]嗎啉-2-基}甲基)脲實施例41採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和4-氯-1-(4-氯苯基)丁-1-酮(0.0089g)的混合物，製得題述化合物(0.0043g)。LC-MS(系統A)Rt2.83分鐘，質譜m/z450[MH+]。實施例42N-(4-氯苯基)-N′-{[4-(3，4-二氯苯甲醯基)嗎啉-2-基]甲基}脲向經攪拌的中間體9(0.05g)的溶液中加入3，4-二氯苯甲醯氯(42.7mg)的N，N-二甲基甲醯胺(7ml)溶液。將該混合物在22℃攪拌15小時，之後真空蒸發溶劑。通過用1g二氧化矽固相萃取柱(VarianBondelut)洗脫來提純殘餘物，用二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、乙腈和甲醇順序洗脫，得到白色固體的題述化合物(0.080g)。LC/MS(系統A)Rt3.10分鐘，質譜m/z442[MH+]。實施例43N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N-(4-氟苯基)-N-甲基脲將4-氟-N-甲基苯胺(0.007ml)加入到中間體10(0.025g)的無水吡啶(1ml)溶液中。將該混合物在110℃、厚壁玻璃小瓶(Reactivial)中加熱20小時。蒸發該混合物以除去吡啶，並在乙酸乙酯(10ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(10ml)之間分配。再用碳酸氫鈉(10ml×5)、鹽水(10ml)洗滌有機層，乾燥(MgSO4)並真空濃縮。將殘餘物通過矽膠(Trikonex快速層析管2002，2g)層析提純，用70％乙酸乙酯的環己烷溶液洗脫，得到0.014g淡黃色膠狀的題述化合物。LCMS(系統A)Rt2.52分鐘，質譜m/z426[MH+]。實施例44{2-[({[(4-氯苯基)氨基]羰基}氨基)甲基]嗎啉-4-基}(苯基)乙酸乙酯實施例44採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和溴(苯基)乙酸乙酯(0.029g)的混合物，製得題述化合物(0.0372g)。LC-MS(系統A)Rt3.43分鐘，質譜m/z432[MH+]。實施例452-{2-[({[(4-氯苯基)氨基]羰基}氨基)甲基]嗎啉-4-基}-2-苯基乙醯胺實施例45採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和2-溴-2-苯基乙醯胺(0.028g)的混合物，製得題述化合物(0.0296g)。LC-MS(系統A)Rt2.75分鐘，質譜m/z401[MH+]。實施例46N-(4-氯苯基)-N′-{[4-(氰基甲基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例46採用與實施例19類似的方法，用中間體9(0.01g)和溴乙腈(2.8μl)的混合物，製得題述化合物(0.0039g)。LC-MS(系統A)Rt2.79分鐘，質譜m/z309[MH+]。實施例47N-(4-氯苄基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲將4-{[(聚苯乙烯樹脂)甲基]硫代}苯基4-硝基苯基碳酸酯(按照Tetrahedron Lett.(1998)，39(22)，3631-3634中所述製備而得，[email protected]/g)的N，N-二甲基甲醯胺(15ml)懸浮液與中間體3(0.80g)一起在22℃振蕩1小時，過濾樹脂，用N，N-二甲基甲醯胺(×2)、二氯甲烷(×3)和N，N-二甲基甲醯胺進行洗滌。將該樹脂再次與N，N-二甲基甲醯胺(15ml)和中間體3(0.80g)一起在22℃振蕩1小時。然後過濾，並用N，N-二甲基甲醯胺(×2)、二氯甲烷(×3)和乙醚(×2)洗滌，真空乾燥，得到橙色珠狀的中間體樹脂[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基氨基甲酸4-{[(聚苯乙烯樹脂)甲基]硫代}苯基酯。向裝在試管中的該樹脂樣品(50mg)中加入4-氯苄基胺(9.6μl)和1滴1-甲基-2-吡咯烷酮，將該混合物放進微波爐內在滿功率(600W)加熱5分鐘。加入二氯甲烷(2ml)和甲醯基聚苯乙烯樹脂，並將該混合物在22℃振蕩18小時。將該懸浮液倒在1g固相萃取(Isolute SCX磺酸)柱上，然後用甲醇洗滌，之後用10％0.880氨的甲醇溶液洗脫。真空蒸發基本流分，得到奶油狀固體，將其通過1g二氧化矽固相萃取柱(Varian Bondelut)洗脫進一步提純，用二氯甲烷、乙醚、乙酸乙酯、丙酮、乙腈和甲醇順序洗脫，得到白色固體的題述化合物(4.7mg)。LC/MS(系統A)Rt2.70分鐘，質譜m/z442[MH+]。實施例48N-(3-氯苄基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例48採用與實施例47類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-(3-氯苯基)甲胺(9.6μl)的混合物，製得題述化合物(0.0092g)。LC-MS(系統A)Rt2.73分鐘，質譜m/z442[MH+]。實施例49N-(2-氯苄基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲實施例49採用與實施例47類似的方法，用中間體3(0.025g)和1-(2-氯苯基)甲胺(9.6μl)的混合物，製得題述化合物(0.008g)。LC-MS(系統A)Rt2.74分鐘，質譜m/z442[MH+]。實施例50N-(4-氯苯基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲(異構體1)從實施例14的外消旋混合物手性分離通過手性製備HPLC系統將實施例14(外消旋混合物，0.040g)分離成其未知構型的單一對映體。所述分離用Chiralpak AD柱(2cm×25cm)進行，用60％乙醇的庚烷溶液(15ml/分鐘，25分鐘，UV檢測λ＝215nm)洗脫，得到白色固體的題述化合物(0.012g)。製備HPLC保留時間7.5分鐘。實施例51N-(4-氯苯基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲(異構體2)實施例51採用與實施例50類似的方法，製得白色固體的題述化合物(0.012g)。製備HPLC保留時間11分鐘。實施例52N-[3-({[({[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}甲基)苯基]乙醯胺甲酸鹽實施例52採用與實施例43類似的方法，以中間體10(0.04g)和3-乙醯氨基苄基胺(0.022g)為原料，並經質量定向的自動製備HPLC提純，製得題述化合物(0.008g)。
LC-MS(系統A)Rt2.47分鐘，質譜m/z465[MH+]。實施例534-({[{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}甲基)苯甲醯胺實施例53採用類似於實施例47的方法，由中間體3(0.025g)和4-氨基甲基苯甲醯胺(0.016g)製得題述化合物(0.0083g)。
LC-MS(系統A)Rt2.16分鐘，質譜m/z451，453[MH+]。實施例544-({[({[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}甲基)苯甲醯胺實施例54採用類似於實施例43的方法，由中間體13(0.079g)和4-氨基甲基苯甲醯胺(0.032g)，用N，N-二甲基甲醯胺作溶劑，製得題述化合物(0.0837g)。
LC-MS(系統A)Rt2.27分鐘，質譜m/z451，453[MH+]。
手性分析HPLC，用15％EtOH/正庚烷洗脫Rt41.8分鐘實施例554-({[({[(2R)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}甲基)苯甲醯胺實施例55採用類似於實施例43的方法，由中間體14(0.109g)和4-氨基甲基苯甲醯胺(0.045g)，用N，N-二甲基甲醯胺作溶劑，製得題述化合物(0.0828g)。
LC-MS(系統A)Rt2.27分鐘，質譜m/z451，453[MH+]。
手性分析HPLC，用15％EtOH/正庚烷洗脫Rt36.7分鐘實施例56N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-丙-2-炔基脲實施例56採用類似於實施例43的方法，由中間體10(0.040g)和炔丙基胺(0.006g)，用二氯甲烷和三乙胺在22℃製得題述化合物(0.028g)。LC-MS(系統A)Rt2.22分鐘，質譜m/z356[MH+]。
手性分析HPLC，用15％EtOH/正庚烷洗脫Rt12.25分鐘和14.1分鐘實施例57N-{[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-丙-2-炔基脲實施例57採用類似於實施例43的方法，由中間體13(0.1g)和炔丙基胺(0.014g)，用二氯甲烷和三乙胺在22℃製得題述化合物(0.064g)。LC-MS(系統A)Rt2.40分鐘，質譜m/z356[MH+]。
手性分析HPLC，用15％EtOH/正庚烷洗脫Rt14.14分鐘實施例58N-{[(2R)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-丙-2-炔基脲實施例58採用類似於實施例43的方法，由中間體14(0.12g)和炔丙基胺(0.014g)，用二氯甲烷和三乙胺在22℃製得題述化合物(0.057g)。LC-MS(系統A)Rt2.37分鐘，質譜m/z356[MH+]。
手性分析HPLC，用15％EtOH/正庚烷洗脫Rt12.26分鐘實施例59-122
實施例1234-({[({[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}甲基)苯甲酸化合物與N，N，N-三乙胺(1∶1)在20℃，將氫氧化鈉(0.09g)加入到經攪拌的實施例105(0.522g)在水(5ml)和甲醇(5ml)的混合物中的溶液中，並在20℃繼續攪拌18小時。通過加入2M氫氧化鈉水溶液將該混合物的pH調節至6左右，將該混合物以兩等份上樣於離子交換柱(10g經甲醇預調節的IsoluteSCX)。先用甲醇(3柱體積)，然後用10％三乙胺的甲醇溶液(2柱體積)洗脫，真空蒸發第一基本流分，得到為黃褐色固體的題述化合物(0.468g)。
LCMS(系統A)Rt2.60分鐘，質譜m/z452[MH+]。實施例1244-({[({[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}甲基)苯甲醯胺鹽酸鹽將4.0M氯化氫的1，4-二噁烷(2.0ml)溶液加入到經攪拌的實施例54(0.100g)的甲醇(10ml)溶液中，並在22℃持續攪拌1小時。在氮氣流下蒸發溶劑，並將殘餘物重新溶解於甲醇(4ml)。加入甲苯(4ml)，再次在氮氣流下蒸發溶劑。將殘餘物重新溶於甲醇(4ml)中，加入甲苯(4ml)，再次在氮氣流下蒸發溶劑。將白色殘餘物在乙醚中研磨，並在氮氣流下蒸發溶劑，然後真空乾燥，得到為白色固體的題述化合物(0.117g)。
LCMS(系統A)Rt2.25分鐘，質譜m/z451[MH+]。1H NMR(D6 DMSO)11.45δ(1H，br.s，NH+)，7.97-7.92δ(2Hd+br.s，芳族CH+NH)7.82δ(2H，AA′BB′，2x芳族CH)，7.76δ(1H，d，芳族CH)，7.59δ(1H，dd，芳族CH)，7.32δ(1H，br.s，NH)7.28δ(2H，AA′BB′，2x芳族CH)，6.62，6.28δ(2H，2xv.br.s，CONH2)，4.35δ(2H，AB，CH2)，4.25δ(2H，s，CH2)， 3.95δ(1H，dd，CH)，3.88-3.79δ(2H，m，2xCH)，3.28δ(1H，br.d，CH)，3.25-3.18δ(2H，br.m，2xCH)，3.09δ(1H，dd，CH)，3.00δ(1H，br.m，CH)，2.78δ(1H，m，CH)實施例125N-{[(2S)-4-(2，3-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-丙-2-炔基脲將中間體22(0.024g)的二氯甲烷(1ml)溶液與中間體20(0.033g)和N，N-二異丙基乙基胺(0.022ml)一起在23℃攪拌3小時。真空除去溶劑，將殘餘物通過固相萃取(Isolute SCX磺酸柱)提純，先用甲醇然後用10％0.880氨的甲醇溶液洗脫。真空濃縮基本流分，將殘餘物溶於二氯甲烷(5ml)中，用苯乙烯異氰酸甲酯樹脂(Argonaut technologies，0.256g，1.43mmol/g)振蕩該溶液16小時。排出溶液，留下樹脂，用二氯甲烷(8ml)洗滌樹脂，將合併的濾液和洗滌液真空濃縮，得到淡黃色膠狀物題述化合物(0.02g)。
LC/MS(系統A)Rt2.17分鐘，質譜m/z356[MH+]。實施例126N-({(2S)-4-[(5-氯噻吩-2-基)甲基]嗎啉-2-基}甲基)-N′-丙-2-炔基脲實施例126以類似於實施例125的方式由中間體23(0.030g)製備。進一步通過矽膠固相萃取柱(1g Varian Bond Elut)進行提純，用0-5％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫，得到為澄清膠狀物的題述化合物(0.025g)。
LC/MS(系統A)Rt1.95分鐘，質譜m/z328[MH+]。實施例127N-{[(2S)-4-(3-氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-丙-2-炔基脲實施例127以類似於實施例125的方式由中間體19(0.029g)製備。進一步通過矽膠固相萃取柱(1g Varian Bond Elut)進行提純，用0-5％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫，得到為澄清膠狀物的題述化合物(0.021g)。
LC/MS(系統A)Rt1.93分鐘，質譜m/z322[MH+]。
LCMS(系統A)Rt2.22分鐘，質譜m/z465[MH+]。
手性分析HPLC，洗脫劑15％乙醇的正庚烷溶液，Rt24.0分鐘和27.7分鐘。
LC/MS(系統A)Rt2.19分鐘，質譜m/z414[MH+]。
手性分析HPLC，洗脫劑30％乙醇/0.1％三氟乙酸的正庚烷溶液，Rt10.1分鐘。
LC-MS(系統A)Rt2.22分鐘，質譜m/z452[MH+]。
LC/MS(系統A)Rt2.5分鐘，質譜m/z479[MH+]。實施例161N-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-{1-[(3，5-二甲基異噁唑-4-基)磺醯基]哌啶-4-基}脲實施例161以類似於實施例160的方法進行製備。
LC-MS(系統A)Rt2.86分鐘，質譜m/z561[MH+]。實施例162N-(1-苯甲醯基哌啶-4-基)-N′-{[4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}脲將苯甲醯氯(0.014ml)加入到中間體16(0.04g)和N，N二異丙基乙基胺(0.048ml)的二氯甲烷(3ml)溶液中。將該溶液在23℃攪拌5小時。真空除去溶劑，將殘餘物通過固相萃取(Isolute SCX磺酸柱)提純，先用甲醇洗脫，隨後用10％0.880氨的甲醇溶液洗脫。真空濃縮基本流分，用矽膠固相萃取柱(1g Varian Bond Elut)進一步提純殘餘物，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、丙酮、乙腈和甲醇洗脫，得到為澄清膠狀物的題述化合物(0.024g)。
LC/MS(系統A)Rt2.63分鐘，質譜m/z506[MH+]。
LCMS(系統A)Rt2.55分鐘，質譜m/z404[MH+]。
LC/MS(系統A)Rt2.34分鐘，質譜m/z436[MH+]。
LC/MS(系統A)Rt2.35分鐘，質譜m/z483[MH+]。實施例183N-{[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-{[1-(甲基磺醯基)哌啶-4-基]甲基}脲將甲磺醯氯(0.013ml)加入到中間體18(0.054g)和N，N-二異丙基乙基胺(0.063ml)的二氯甲烷(2ml)溶液中。將該溶液在23℃攪拌16小時。真空除去溶劑，通過固相萃取(Isolute SCX磺酸柱)提純殘餘物，先用甲醇後用10％0.880氨的甲醇溶液洗脫，得到澄清膠狀物的題述化合物(0.035g)。
LC/MS(系統A)Rt2.34分鐘，質譜m/z493[MH+]。實施例1844-({[({[4-(3，4-二氯苄基)-1，4-氧雜氮雜環庚-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}甲基)苯甲醯胺在0℃，向1，1′-羰基二咪唑(0.041g)的二氯甲烷(2ml)溶液中滴加入中間體41(0.079g)的二氯甲烷(2ml)溶液。將該混合物在0℃攪拌1小時，在22℃攪拌1小時，再冷卻至大約0℃，滴加4-氨基甲基苯甲醯胺(0.041g)在二氯甲烷和N，N-二甲基甲醯胺的1∶1混合物(4ml)中的溶液。將該混合物在0℃攪拌1小時，在22℃攪拌1小時，並以兩等份上樣於離子交換柱(2g經甲醇預調節的Isolute SCX)。先用甲醇(3柱體積)洗脫，隨後用10％0.880氨的甲醇溶液(2柱體積)洗脫，真空蒸發基本流分，得到粗產物。通過在矽膠柱(8g)上的Biotage快速層析提純，用150∶8∶1二氯甲烷/乙醇/0.880氨洗脫，得到白色固體的題述化合物(0.0186g)。
LCMS(系統A)Rt2.22分鐘，質譜m/z465[MH+]實施例1854-[({[({(2S)-4-[1-(3，4-二氯苯基)乙基]嗎啉-2-基}甲基)氨基]羰基}氨基)甲基]苯甲醯胺，異構體II在5ml管形瓶(Pierce Reacti-VialTM)中，用N，N-二異丙基乙基胺(0.021ml)處理中間體35(0.045g)的二氯甲烷(1ml)溶液，隨後用4-氨基甲基苯甲醯胺(0.017g)進行處理。將該混合物在氮氣下密封，並在室溫下攪拌18小時。然後將該溶液上樣用於經甲醇預處理過的磺酸離子交換柱(2g Isolute SCX)。該柱用甲醇(7柱體積)洗脫，隨後用10％0.880氨的甲醇溶液(3柱體積)洗脫，合併基本流分，並真空濃縮，得到黃色膠狀物。進一步通過矽膠(Varian Bond Elut 1g柱)層析提純，用10％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫，得到黃色膠狀物的題述化合物(0.036g)。
LC/MS(系統A)Rt2.25分鐘，質譜m/z465[MH+]實施例1864-[({[({(2S)-4-[1-(3，4-二氯苯基)乙基]嗎啉-2-基}甲基)氨基]羰基}氨基)甲基]苯甲醯胺，異構體I在5ml管形瓶(Pierce Reacti-VialTM)中，用N，N-二異丙基乙基胺(0.021ml)處理中間體34(0.045g)的二氯甲烷(1ml)溶液，隨後用4-氨基甲基苯甲醯胺(0.017g)進行處理。將該混合物在氮氣下密封，並在室溫下攪拌18小時。然後將該溶液上樣於經甲醇預處理過的磺酸離子交換柱(2g Isolute SCX)。該柱用甲醇(7柱體積)洗脫，隨後用10％0.880氨的甲醇溶液(3柱體積)洗脫，合併基本流分，並真空濃縮，得到黃色膠狀物。進一步通過矽膠(Varian Bond Elut 1g柱)層析提純，用10％甲醇的乙酸乙酯溶液洗脫，得到黃色膠狀物的題述化合物(0.036g)。
LC/MS(系統A)Rt2.27分鐘，質譜m/z465[MH+]。實施例1874-{[({[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}-N-甲基丁醯胺將N，N′-羰基二咪唑(0.0132g)加入到經攪拌的中間體26(0.030g)的N，N-二甲基甲醯胺(2ml)溶液中，將該混合物在22℃、氮氣下攪拌40分鐘。加入甲胺(2.0M的四氫呋喃溶液，0.102ml)，在22℃繼續攪拌17小時。將該混合物直接上樣於磺酸離子交換柱(2g Isolute SCX)，用甲醇洗脫，隨後用10％0.880氨的甲醇溶液洗脫，得到膠狀物(0.042g)。通過矽膠(1g Varian Bond Elut柱)層析提純，用氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮和甲醇洗脫，得到膠狀物(0.025g)，將其進一步通過質量定向的製備HPLC提純，得到無色膠狀物的題述化合物(7.2mg)。
LC-MS(系統A)Rt2.11分鐘，質譜m/z417[MH+]。實施例1883-{[({[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}-N-甲基丙烷-1-磺醯胺實施例188以類似於實施例189的方法製備。
LC-MS(系統A)Rt2.20分鐘，質譜m/z453[MH+]。實施例189N-{[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-(3-(吡咯烷-1-基磺醯基)丙基]脲在室溫、氮氣下，將中間體28(0.027g)在N，N-二甲基甲醯胺(1ml)和二氯甲烷(2ml)中的含有N，N-二異丙基乙基胺(0.041ml)的溶液加入到經攪拌的中間體13(0.051g)的無水二氯甲烷(2ml)溶液中，將該混合物在室溫下攪拌21小時。將所得混合物直接上樣於磺酸離子交換柱(2g Isolute SCX)，並先用甲醇(6柱體積)洗脫，隨後用10％880氨的甲醇溶液(3柱體積)洗脫；蒸發甲醇/氨部分，得到粗產物(0.063g)。通過矽膠(2g Varian Bond Elut柱)層析提純，用氯仿、乙醚、乙酸乙酯、丙酮和甲醇洗脫，得到膠狀物的題述化合物(0.036g)。
LC-MS(系統A)Rt2.41分鐘，質譜m/z493[MH+]。生物學數據在CCR-3結合和/或嗜酸性粒細胞趨化性測定(測定(a)和(b))中測試所述實施例化合物，得出以下結果
還在CCR-3結合測定(測定(a))中測試了實施例1、6-7、9-12、15、17、20、24、27-33、35-36、39-43、45-46、49-51、53、55-56、58-135、137-148和150-189的化合物並且得到大於5.0的pIC50值。
當在卵清蛋白致敏的豚鼠體內模型(測定(c)；0.2-20mg/kg)中進行測試時，實施例14顯示出對肺嗜曙紅細胞增多和支氣管反應過度的抑制性。
在整個說明書和隨後的權利要求書中，除非本文另外要求，措詞「包含」和類似的說法如「包括」和「含有」可以理解為意味著包括一個指定的整數或者步驟或者一組整數但是不排除任何其它的整數或者步驟或者一組整數或者步驟。
權利要求
1.一種式(I)的化合物及其鹽和溶劑合物， 其中R1代表C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基-Y1-、雜芳基-Y1-、芳基-(O)t-芳基-Y1-、芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、芳基-SO2-Y1-、C1-6烷基-G-Y1-、雜芳基-G-芳基-Y1-、J1-SO2-Y1-、R17O(CO)-C2-6鏈烯基-Y1-、R17NHCO-Y1-、R17NHSO2-Y1-、C2-6炔基-Y1-、C2-6鏈烯基-Y1-、芳基-O-Y1-、雜芳基-O-Y1-、C1-6烷基-SO2-Y1-、M-Y1-、J1-Y1-、J1-CO-Y1-、芳基-CO-Y1-或C3-8環烷基-Y1-或C3-8環烯基-Y1-，所述C2-6炔基和C2-6炔基-Y1可任選被-OR17基團取代，所述C2-6鏈烯基可任選被一個或多個-COOR17基團取代，並且所述環烷基或環烯基可以任選被一個或多個羥基或C1-6烷基取代；R2代表氫或任選被羥基取代的C1-6烷基；R3代表氫或C1-6烷基；或者R1和R2可與它們所連接的氮原子一起形成式J2的基團，其中所述氮原子取代X1或X2；t代表0或1。X代表亞乙基或式CReRf的基團，其中Re和Rf獨立代表氫或C1- 4烷基或者Re和Rf可與它們所連接的碳原子一起形成C3-8環烷基；R4和R5獨立代表氫或C1-4烷基；Z代表鍵、CO、SO2、CR10R7(CH2)n、(CH2)nCR10R7、CHR7(CH2)nO、CHR7(CH2)nS、CHR7(CH2)nOCO、CHR7(CH2)nCO、COCHR7(CH2)n或SO2CHR7(CH2)n；R6代表C1-6烷基、C2-6鏈烯基、芳基、雜芳基、芳基-C2-6鏈烯基、-CN或式-Y2-J3的基團；R7代表氫、C1-4烷基、CONR8R9或COOC1-6烷基；a和b代表1或者2，從而a+b代表2或者3；G代表-SO2-、-SO2NR18-、-NR18SO2-、-NR18CO-、CO或-CONR18-；n代表0-4的整數；M代表與單環芳基或單環雜芳基稠合的C3-8環烷基或C3-8環烯基；J1、J2和J3獨立代表式(K)的部分 其中X1代表氧、NR11或硫，X2代表CH2、氧、NR12或硫，m1代表1-3的整數，m2代表1-3的整數，條件是m1+m2在3-5的範圍內，還有一個條件是當X1和X2都代表氧、NR11、NR12或硫時，m1和m2不能都小於2，其中K由一個或多個以下的基團任選取代-Y3-芳基、-Y3-雜芳基、-Y3-CO-芳基、-COC3-8環烷基、-Y3-CO-雜芳基、-C1-6烷基、-Y3-COOC1-6烷基、-Y3-COC1-6烷基、-Y3-W、-Y3-CO-W、-Y3-NR15R16、-Y3-CONR15R16、羥基、氧代基、-Y3-SO2NR15R16、-Y3-SO2C1-6烷基、-Y3-SO2芳基、-Y3-SO2雜芳基、-Y3-NR13C1-6烷基、-Y3-NR13SO2C1-6烷基、-Y3-NR13CONR15R16、-Y3-NR13COOR14或-Y3-OCONR15R16，並任選稠合到單環芳基或雜芳基環上；R8、R9、R10、R11、R12、R13和R14獨立代表氫或C1-6烷基；R15和R16獨立代表氫或C1-6烷基或者R15和R16與它們所連接的氮原子一起形成嗎啉、哌啶或吡咯烷環；R17和R18獨立代表氫或C1-6烷基；W代表飽和或不飽和、非芳族5-7元含有1-3個選自氮、氧或硫的雜原子的環，任選被一個或多個C1-6烷基、滷素或羥基取代；Y1、Y2和Y3獨立代表鍵或式-(CH2)pCRcRd(CH2)q-的基團，其中Rc和Rd獨立代表氫或C1-4烷基或者Rc和Rd可以與它們所連接的碳原子一起形成C3-8環烷基，p和q獨立代表0-5的整數，其中p+q是0-5的整數。
2.權利要求1的式(I)化合物，其中R1代表C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基-Y1-、雜芳基-Y1-、芳基-(O)t-芳基-Y1-、芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、芳基-SO2-Y1-、C1-6烷基-G-Y1-、J1-SO2-Y1-、R17O(CO)-C2-6鏈烯基-Y1-、C2-6炔基-Y1-、C2-6鏈烯基-Y1-、芳基-O-Y1-、雜芳基-O-Y1-、C1-6烷基-SO2-Y1-、M-Y1-、J1-Y1-、J1-CO-Y1-、芳基-CO-Y1-或C3-8環烷基-Y1-或C3-8環烯基-Y1-，所述C2-6炔基和C2-6炔基-Y1可任選被-OR17基團取代，並且所述環烷基或環烯基可任選被一個或多個羥基或C1-6烷基取代；R2代表氫或C1-6烷基；和J1、J2和J3獨立代表式(K)部分 其中X1代表氧、NR11或硫，X2代表CH2、氧、NR12或硫，m1代表1-3的整數，m2代表1-3的整數，條件是m1+m2在3-5的範圍內，還有一個條件是當X1和X2都代表氧、NR11、NR12或硫時，m1和m2不能都小於2，其中K由一個或多個以下的基團任選取代-Y3-芳基、-Y3-雜芳基、-Y3-CO-芳基、-Y3-CO-雜芳基、-C1-6烷基、-Y3-COOC1-6烷基、-Y3-COC1-6烷基、-Y3-W、-Y3-CO-W、-Y3-NR15R16、-Y3-CONR15R16、羥基、氧代基、-Y3-SO2NR15R16、-Y3-SO2C1-6烷基、-Y3-SO2芳基、-Y3-SO2雜芳基、-Y3-NR13C1-6烷基、-Y3-NR13SO2C1-6烷基、-Y3-NR13CONR15R16、-Y3-NR13COOR14或-Y3-OCONR15R16，並任選稠合到單環芳基或雜芳基環上。
3.權利要求1的式(I)化合物，其中R1代表C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、芳基-Y1-、雜芳基-Y1-、芳基-(O)t-芳基-Y1-、芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-芳基-Y1-、雜芳基-(O)t-雜芳基-Y1-、C2-6鏈烯基-Y1-、芳基-O-Y1-、雜芳基-O-Y1-、C1-6烷基-SO2-Y1-、M-Y1-、-Y1-J1、-Y1-CO-J1或C3-8環烷基-Y1-或C3-8環烯基-Y1-，該環烷基或環烯基可任選被一個或多個羥基或C1-6烷基取代；R2代表氫或C1-6烷基；Z代表鍵、CO、CR10R7(CH2)n、CHR7(CH2)nO、CHR7(CH2)nS、CHR7(CH2)nOCO、CHR7(CH2)nCO；以及J1、J2和J3獨立代表式(K)部分 其中X1代表氧、氮、NR11或硫，X2代表CH2、氧、氮、NR12或硫，m1代表1-3的整數，m2代表1-3的整數，條件是m1+m2在3-5的範圍內，還有一個條件是當X2代表氧、氮、NR12或硫時，m1和m2不能都小於2，其中K任選被一個或多個以下的基團取代-Y3-芳基、-Y3-雜芳基、-Y3-CO-芳基、-Y3-CO-雜芳基、-C1-6烷基、-Y3-COOC1-6烷基、-Y3-COC1-6烷基、-Y3-W、-Y3-CO-W、-Y3-NR15R16、-Y3-CONR15R16、羥基、氧代基、-Y3-SO2NR15R16、-Y3-SO2C1-6烷基、-Y3-SO2芳基、-Y3-SO2雜芳基、-Y3-NR13C1-6烷基、-Y3-NR13SO2C1-6烷基、-Y3-NR13CONR15R16、-Y3-NR13COOR14或-Y3-OCONR15R16，並任選稠合到單環芳基或雜芳基環上。
4.權利要求1-3中任一項的式(I)化合物，其中R1代表芳基-Y1-或雜芳基-Y1-。
5.權利要求4的式(I)化合物，其中R1代表任選取代的苯基-Y1-或四唑基-Y1-，所述苯基和四唑基可被任選取代。
6.權利要求1-5中任一項的式(I)化合物，其中Y1代表-CH2-。
7.權利要求1的式(I)化合物，其中X代表亞甲基。
8.權利要求1的式(I)化合物，其中a和b都代表1。
9.權利要求1或3的式(I)化合物，其中Z代表CO、CHR7(CH2)n、CHR7(CH2)nO、CHR7(CH2)nS、CHR7(CH2)nOCO或CHR7(CH2)nCO。
10.權利要求9的式(I)化合物，其中Z代表CH2。
11.權利要求1的式(I)化合物，其中R6代表任選被一個或多個滷原子取代的苯基。
12.權利要求11的式(I)化合物，其中R6代表3，4-二氯苯基。
13.如實施例1-189中所述的權利要求1-12中任一項的式(I)化合物或其任一種的鹽或溶劑合物。
14.權利要求13的式(I)化合物，該化合物為4-({[({[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}甲基)苯甲醯胺或其鹽或溶劑合物。
15.權利要求13的式(I)化合物，該化合物為N-{[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}-N′-[(2-甲基-2H-四唑-5-基)甲基]脲或其鹽或溶劑合物。
16.權利要求13的式(I)化合物，該化合物為4-({[({[(2S)-4-(3，4-二氯苄基)嗎啉-2-基]甲基}氨基)羰基]氨基}甲基)-N-甲基苯甲醯胺或其鹽或溶劑合物。
17.一種藥用組合物，該組合物包含與一種或多種藥學上可接受的稀釋劑或載體相混合的權利要求1-16中任一項所定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
18.用作藥物的權利要求1-16中任一項所定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
19.權利要求1-16中任一項所定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物在製造用於治療炎性疾病的藥物中的用途。
20.一種治療或預防炎性疾病例如哮喘的方法，該方法包括給予患者有效量的權利要求1-16中任一項所定義的式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
21.一種製備權利要求1-16中任一項所定義的式(I)化合物的方法，該方法包括(a)使式(II)的化合物或其被護衍生物 其中R1、R2、R3、R4、R5、X、a和b如權利要求1中所定義，與式L1-Z-R6的化合物反應，其中Z和R6如權利要求1中所定義，L1代表適當的離去基團；或(b)形成其中R2代表氫的式(I)化合物，包括使式(III)化合物或其被護衍生物 其中R3、R4、R5、R6、Z、X、a和b如權利要求1中所定義，與式R1-N＝C＝O的化合物反應，其中R1如權利要求1中所定義；或(c)使式(IV)的化合物或其被護衍生物 其中R3、R4、R5、R6、Z、X、a和b如權利要求1中所定義，並且L2代表適當的離去基團，與式(V)的化合物或其被護衍生物反應， 其中R1和R2如權利要求1中所定義；或(d)使式(VI)的化合物或其被護衍生物 其中R1和R2如權利要求1中所定義，並且L3代表適當的離去基團；與式(III)的化合物或其被護衍生物反應；或(e)將被護的式(I)化合物脫保護；或(f)互變為其它的式(I)化合物。
22.一種製備權利要求1-16中任一項所定義的式(I)化合物的方法，該方法包括(g)形成式(I)的化合物，其中R1和R2與它們所連接的氮原子一起形成式J2的基團，其中所述氮原子取代X1或X2，包括使式(IV)的化合物或其被護衍生物與式J2H的化合物反應，條件是式J2H的化合物具有游離的-NH基團；或(h)形成式(I)的化合物，其中Z代表CR10R7(CH2)n，其中R10代表氫，其包括使式(II)的化合物或其被護衍生物與式R7CO(CH2)nR6的化合物反應，隨後還原得到的亞胺；或(i)形成式(I)的化合物，其中R1代表C1-6烷基-G-Y1-，其中G代表-NR18CO-，包括使式(VII)的化合物或其被護衍生物 其中R2、R3、R4、R5、R6、Y1、X、Z、a和b如權利要求1中所定義，與式C1-6烷基-NHR18的化合物反應。
23.一種式(II)的化合物或其被護衍生物或其鹽或溶劑合物， 其中R1、R2、R3、R4、R5、X、a和b如權利要求1中所定義。
24.一種式(III)的化合物或其被護衍生物或其鹽或溶劑合物， 其中R3、R4、R5、R6、Z、X、a和b如權利要求1中所定義。
25.一種式(IV)的化合物或其被護衍生物或其鹽或溶劑合物， 其中R3、R4、R5、R6、Z、X、a和b如權利要求1中所定義，並且L2代表適當的離去基團。
26.一種式(VII)的化合物或其被護衍生物或其鹽或溶劑合物， 其中、R2、R3、R4、R5、R6、Y1、X、Z、a和b如權利要求1中所定義。
全文摘要
本發明提供新的式(I)化合物、其製備方法、含有該化合物的製劑及其用於治療炎性疾病的治療用途，式(I)中R
文檔編號C07D265/30GK1478084SQ01819648
公開日2004年2月25日 申請日期2001年9月28日 優先權日2000年9月29日
發明者R·A·安克利夫, R A 安克利夫, C·M·庫克, 庫克, C·D·埃爾德雷, 埃爾德雷, P·M·戈雷, 戈雷, L·A·哈裡森, 哈裡森, S·T·霍奇森, 霍奇森, D·B·朱德, 朱德, S·E·凱林, 凱林, X·Q·萊維爾, 萊維爾, G·M·羅伯森, 羅伯森, S·斯萬森, 蟶 申請人:葛蘭素集團有限公司