混菌好氧發酵秸稈尾菜製備蛋白飼料方法

2023-05-18 04:18:41 2

混菌好氧發酵秸稈尾菜製備蛋白飼料方法
【專利摘要】本發明主要涉及混菌好氧發酵秸稈尾菜製備蛋白飼料方法。一種混菌好氧發酵秸稈尾菜製備蛋白飼料方法，其主要特點是：將秸稈、尾菜、菜粕、糠麩，均勻攪拌，使其含水量達到50—60％；加入相對於乾料總量為2—6％的硫酸銨，相對於乾料總量為1—4％的尿素；用1％石灰水調pH至5.5—6.5；接入相對於乾料總量為8—12％由白地黴菌、乳酸菌、黑麴黴菌混合的菌液，混合菌液的重量比為白地黴菌50—70％，乳酸菌20—25％，黑麴黴菌5—10％；在溫度為28-32℃，通風條件下發酵24-36小時，製成發酵蛋白飼料。本發明利用現代生物技術，優選最佳的組合菌，生產工藝簡便，節省設備和能源，所需投資少。
【專利說明】混菌好氧發酵秸稈尾菜製備蛋白飼料方法

【技術領域】：
[0001] 本發明主要涉及一種混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法。

【背景技術】：
[0002] 我國人口眾多，而蛋白質嚴重缺乏，增產或進口魚粉又有一定的困難，這就嚴重的 影響著我國畜牧業的快速發展。大力發展營養價值高，生產成本低的蛋白飼料，是飼料工業 發展的趨勢。我國農產品下腳料如秸杆、尾菜等原料資源相當豐富，利用這些原料生產畜禽 飼料，是近年來科技工作者關注的問題。但目前所報導的不夠完善，難以形成工業化生產， 主要問題是：
[0003] 傳統的厭氧發酵秸杆的處理方法是將玉米杆、麥草、豆秸、花生秧、紅薯秧、馬鈴薯 秧、稻草經粉碎混和麩皮、豆柏、菜柏、花生柏、無機鹽，加入多種酶製劑和厭氧微生物發酵 齊IJ，經厭氧發酵生產飼料。這種技術的缺點是：（1).在製備厭氧微生物發酵劑時，所需的菌 種種類多，添加的輔料多，特別是要添加價格昂貴的多種酶製劑，操作複雜，能耗和投資都 比較大。（2).厭氧發酵飼料生產周期長，一般需要7 - 30天，菌細胞生長繁殖緩慢，產品細 胞數少，蛋白含量低。（3).飼料生產佔用的廠房面積大，生產周期長，能源耗費大，難以實現 工業化生產。
[0004] 尾菜是指在製備精菜時被切掉的廢菜葉和廢菜幫，約佔精菜的1/3-1/2,這些廢棄 物若不經合理處理，隨意堆積，可造成腐爛變質，每到夏秋季蔬菜收穫季節，這些大量的腐 爛尾菜都會有蚊蠅滋生，臭氣不可聞，對環境產生嚴重汙染。現在處理尾菜的方法是將尾菜 送到價格昂貴的菜餅製作機上，通過清洗打碎壓濾工序，再將濾渣乾燥製成菜餅或飼料，這 種處理方法既浪費了水資源，又流失尾菜的營養元素。因尾菜含水量為70-90%，其中許多 營養元素如維生素、糖分和礦物質都在菜葉中，通過壓濾就將營養成分流失。所製備的菜餅 粉也只剩下纖維素和少量非水溶性礦物質，同時在清洗尾菜時又需大量的水。


【發明內容】
：
[0005] 本發明的目的在於避免現有技術的不足之處而提供一種混菌好氧發酵秸杆尾菜 製備蛋白飼料方法。
[0006] 本發明的目的可以通過採用以下技術方案來實現：一種混菌好氧發酵秸杆尾菜 製備蛋白飼料方法，其主要特點是：將秸杆、尾菜、菜柏、糠麩，均勻攪拌，使其含水量達到 50- 60% ;加入相對於乾料總量為2 - 6%的硫酸銨，相對於乾料總量為1 一4%的尿素；用 1 %石灰水調pH至5. 5 - 6. 5 ;接入相對於乾料總量為8 -12 %由白地黴菌、乳酸菌、黑麴黴 菌混合的菌液，混合菌液的重量比為白地黴菌50- 70%，乳酸菌20- 25%，黑麴黴菌5- 10% ;在溫度為28-32°C，通風條件下發酵24-36小時，製成發酵蛋白飼料。製成的發酵產 品可按比例拌入畜禽混合飼料中直接飼喂，以保持其細胞活性。
[0007] 所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，所述的白地黴菌或乳酸菌或黑 麴黴菌的菌液培養方法包括有：
[0008] A.斜面菌種的製備：
[0009] a.白地黴菌斜面菌種的製備：葡萄糖1 %、酵母膏1 %、蛋白腖0.5%、瓊脂粉2%、 加水加熱溶解後，用1% NaOH調pH至5. 5 - 6.5,經115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然後分裝於 15 X 2cm滅菌的試管，擺成斜面待凝固後備用；
[0010] b.乳酸菌斜面菌種的製備：
[0011] 番茄汁瓊脂培養基的製備：酵母膏1%、蛋白腖1%、番茄汁20%、CaCO3L 5%、瓊 脂粉2%、加熱溶解後，用1% NaOH調pH至5. 5 - 6.5,經115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然後分 裝於15 X 2cm滅菌的試管，擺成斜面待凝固後備用；
[0012] c.黑麴黴囷斜面囷種的製備：
[0013] 馬鈴薯-蔗糖瓊脂培養基的製備：
[0014] 馬鈴薯20%，蔗糖2%，瓊脂L 8%，加水溶解後，用1 % NaOH調pH至5. 5-6· 5,經 115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然後分裝於15 X 2cm滅菌的試管，擺成斜面待凝固後備用；
[0015] d.分別取上述三種母種斜面菌，在無菌操作條件下，轉種於上述製備的瓊脂斜面 培養基上，經28-32 °C，24-48小時培養，即得斜面菌種，為一級菌種；
[0016] B.液體培養液的製備及液體菌種的培養：
[0017] e.液體培養液的製備：在1升新鮮豆腐漿水或啤酒糟水，或粉絲漿水或尾菜汁中， 加入麩皮1 一3g、玉米粉5- 7. 5g，（NH4) 2S041-2g，磷酸0. 5- 1毫升，用1 %石灰水調pH至 5. 5-6. 5,115°C 20分鐘蒸汽滅菌；
[0018] f.將一級菌種接種於液體培養液，經28-32°C，24-48小時培養，其培養菌液為二 級菌種；
[0019] g.將二級菌種再擴大培養，上搖床振蕩培養經28-32°C，振幅100- 150r/分鐘， 18-24小時培養，其菌液為三級菌種；
[0020] h.將三級菌種再擴大培養，上發酵罐或發酵槽，經28_32°C通氣攪拌發酵培養 18-24小時，其菌液為四級菌種。
[0021] 所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，所述的混合菌液的重量比為白 地黴菌50- 70%，乳酸菌20- 25%，黑麴黴菌5 -10%。
[0022] 所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，還包括有發酵後的蛋白飼料經 低溫乾燥或風乾或晾乾或曬乾後包裝儲存。
[0023] 所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，所述的秸杆為玉米杆、玉米芯、 麥草杆、豆秸秧、花生秧、紅薯秧、馬鈴薯秧、雜草。
[0024] 所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，所述的尾菜包括有白菜、小白 菜、蓮花菜、菠菜、芹菜、花菜、白蘿蔔、紅蘿蔔、花心菜、油菜、韭菜、蔥、蒜苗、娃娃菜的任意 一種或任意組合的菜葉和菜幫。
[0025] 所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，所述的尾菜的含水量為70- 90% ;粉碎小於10mm。
[0026] 所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，所述的秸杆粉碎後，經0.5- 1. 5%的硫酸進行酸化和蒸煮處理。
[0027] 所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，其特徵是所述的秸杆、尾菜、菜 柏、糖鼓的重量比為1 一3 ：2一6:1 -3 ：0. 2一1。
[0028] 本發明採用的白地黴菌是一種很粗生的營養價值類似產骯假絲酵母的微生物，能 在碳水化合物豐富的秸杆上迅速生長，細胞富含蛋白質、脂肪、維生素和核酸。可同化利用 硫酸銨、尿素等非蛋白氮；而配伍菌乳酸菌和黑麴黴菌，黑麴黴菌具有很強的澱粉糖化能 力，能將秸杆中的纖維素和澱粉物質轉化為被白地黴菌和乳酸菌吸收利用的單糖或雙糖， 這樣就能將有機物中的非氮物質轉化為蛋白質。乳酸菌是一類微需氧菌或厭氧菌，在秸杆 發酵開始初期就繁殖，到發酵結束後，因密封缺氧仍能繁殖，能分解秸杆原料中的糖等碳水 化合物形成乳酸，引起乳酸發酵。能產生一系列酶系，將秸杆中的纖維素、半纖維素和抗營 養因子進行生物分解。乳酸本身既是營養物質，又抑制秸杆中有害微生物生長的作用，而且 在結杆微生物發酵中，可提高結杆的適口性，營養性和耐儲性。三菌在同一條件下、同一發 酵時間，完成各自的發酵功能，起到菌種間的互補作用，有效地利用秸杆尾菜原料，提高飼 料的營養價值。
[0029] 本發明是採用液固態發酵技術，它的可行性在於液態培養菌種，優點是：一是液體 培養液是利用食品、飲料行業產生的廢液和尾菜汁液如豆腐漿水，粉絲漿水，啤（白）酒糟 液，尾菜汁液加無機鹽，調整PH值，因為這些廢液營養豐富，適於混菌種的快速生長繁殖。 二是新鮮漿水或廢水或尾菜汁液可以不滅菌，添加無機鹽調整PH值後，可直接接入白地黴 菌、乳酸菌，黑麴黴菌進行液體發酵培養。這樣節省了設備和能源，三是液體培養菌種，菌細 胞繁殖快，菌液細胞濃度高，加入固體原料的菌量大可抵抗雜菌汙染。
[0030] 本發明的有益效果是：本發明利用現代生物技術，優選最佳的組合菌，利用混菌 好氧菌液固態發酵技術，對秸杆原料不經氨化處理，將粉碎的尾菜直接拌入秸杆粉，接入菌 齊U，周期僅需18 - 24小時。發酵料可風乾、曬乾或直接拌入混合飼料，飼餵畜禽。本發明產 品活性細胞數多達100- 200億/克，粗蛋白含量高達20- 26. 3%。
[0031] 本發明成本低,可做蛋白源配置奶牛、羊、豬、雞、鴨、魚飼料,用量可達飼料總量 的5-30%，可代替部分玉米、豆柏和魚粉，經飼餵試驗證明，奶牛每頭每天可多增產牛奶 I. 73Kg，奶脂提高0. 14%，飼餵育肥豬每頭每天可多增重100克，而瘦肉率高，味香；飼餵肉 鴨除每隻每天多增重10克外，鴨表現活潑有神，羽毛滑潤。
[0032] 本發明的飼料飼餵畜禽，一方面改善畜禽胃腸道環境和菌群結構，以調節胃腸發 酵，減少乳酸的產生，提高PH值的穩定性，促進乳酸菌，纖維素菌為主體的有益菌群繁殖及 活力提高，增加整個腸道酵母菌、乳酸菌、纖維素菌等有益菌的有效濃度，促進畜禽胃腸對 飼料的分解、合成，消化吸收利用，從而增加採食量，提高畜禽對飼料的利用率，促進生產性 能的發揮。
[0033] 本發明的發酵飼料作為活性的細胞前體進入畜禽胃腸道後，繁殖和生長活力增 強，能有效的抑制病原微生物的繁殖，參與病原微生物的生存競爭，排斥病原菌在胃腸黏膜 表面的附著。協助機體消除毒素及其代謝產物，防止毒素和廢物的吸收，增強機體免疫和抗 病能力，對防止畜禽消化系統疾病起到保健作用，同時對幼年畜禽可刺激胃腸發育。
[0034] 本發明的發酵飼料含有未知生長因子促進劑，能增強畜禽的生長，特別是對增加 幼年畜禽的生長發育有明顯效果。
[0035] 本發明適用飼料工業，畜牧業和禽類、魚類養殖業；食品、飲料、澱粉發酵工業的廢 水廢渣處理。最適合大型養殖場自產自用，獲利更多；也適用於有出口任務的豬場應用（肉 質滑嫩無腥味）。

【具體實施方式】：
[0036] 以下通過所示之最佳實施例作進一步詳述：
[0037] 實施例1 :經0.5% H2SO4處理的玉米芯粉，白菜尾菜，菜柏，麩皮，其中玉米芯粉： 白菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為1 :3 :2 :0. 5,並加入相對於乾料總量硫酸銨為4%，尿素 3%，充分混勻後，調固體發酵料含水分50%，用1 %的石灰水調pH值到5. 5,然後加入相對 於乾料總量為12%的白地黴菌、乳酸菌、黑麴黴菌混合的菌液，白地黴菌、乳酸菌、黑麴黴 菌的重量比為白地黴菌65%，乳酸菌25 %，黑麴黴菌10 %。充分攪拌混合均勻後，堆放待 溫度至32°C時，鋪於地面上，厚度10cm，經室溫32°C發酵培養24小時，其產品粗蛋白可達 21. 99%，胺基酸佔粗蛋白81. 52%。
[0038] 實施例2 :經1% H2SO4處理的麥秸粉，蓮花菜尾菜，菜柏，麩皮，其中麥秸粉：蓮花 菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為1 :3 :3 :1，並加入相對於乾料總量硫酸銨為2%，尿素1%， 調固體發酵料含水分55 %，充分混勻後，用1 %的石灰水調pH值到6. 5,然後加入相對於幹 料總量為8%的白地黴菌、乳酸菌、黑麴黴菌混合的菌液，白地黴菌、乳酸菌、黑麴黴菌的重 量比為白地黴菌70%，乳酸菌25%，黑麴黴菌5%。充分攪拌混合均勻後，堆放待溫度至 30°C時，鋪於地面上，厚度10cm，經室溫30°C發酵培養24小時，其產品粗蛋白可達20. 5%， 氣基酸佔粗蛋白80. 25 %。
[0039] 實施例3 :經I. 5% H2SO4處理的玉米杆粉，並蒸煮處理，加入芹菜尾菜、菜柏、麩皮， 其中玉米杆粉：芹菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為2 :4 :3 :1，並加入相對於乾料總量硫酸銨 為4%、尿素3 %，調固體發酵料含水分55 %，用1 %的石灰水調pH至5. 5，然後加入相對於 乾料總量為9%的白地黴菌、乳酸菌和黑麴黴菌混合的菌液，白地黴菌、乳酸菌和黑麴黴菌 的重量比為白地黴菌65 %，乳酸菌20 %，黑麴黴菌15 %，充分攪拌混合均勻後，堆放待溫度 上升至35°C時，鋪於地面上，厚度10cm，經室溫32°C發酵培養20小時，其產品粗蛋白可達 21. 58%，胺基酸佔粗蛋白79. 82%。
[0040] 實施例4 :經I. 5% H2SO4處理的玉米杆粉，並蒸煮處理，加入菠菜尾菜、菜柏、麩 皮，其中玉米杆粉：菠菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為2 :4 :2 :1，並加入相對於乾料總量硫 酸銨為4%、尿素2 %，調固體發酵料含水分50 %，用1 %的石灰水調pH至5. 5，然後加入相 對於乾料總量為10%的白地黴菌、乳酸菌和黑麴黴菌混合的菌液，白地黴菌、乳酸菌和黑曲 黴菌的重量比為白地黴菌65%，乳酸菌25%，黑麴黴菌10%，充分攪拌混合均勻後，堆放待 溫度至28°C時，鋪於地面上，厚度10cm，經室溫28°C發酵培養24小時，其產品粗蛋白可達 20. 48 %，胺基酸佔粗蛋白78. 25 %。
[0041] 實施例5 :經1% H2SO4處理的豆秸秧粉，並蒸煮處理，加入花菜尾菜、菜柏、麩皮， 其中豆秸秧粉：花菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為2 :4 :3 :0. 5,並加入相對於乾物質為4% 的硫酸銨，尿素3 %，充分攪拌均勻後，調固體發酵料含水分55 %，用1 %的石灰水調pH至 6. 0,然後加入相對於乾料總量為10%的白地黴囷、乳Ife囷和黑麴黴囷混合的囷液，白地黴 菌、乳酸菌和黑麴黴菌的重量比為白地黴菌65 %，乳酸菌25 %，黑麴黴菌10 %，充分攪拌混 合均勻後，送發酵架上，發酵培養，厚度8cm，經室溫28°C發酵培養18小時，其產品粗蛋白可 達24. 52 %，胺基酸佔粗蛋白80. 66 %。
[0042] 實施例6 :經I^H2SO4處理的豆秸秧粉，並蒸煮處理，加入小白菜尾菜、菜柏、麩皮， 其中豆秸秧粉：小白菜尾菜：菜柏：麩皮的重量比為2 :5 :3 :2,並加入相對於乾物質為4% 的硫酸銨，尿素3 %，充分攪拌均勻後，調固體發酵料含水分50 %，用1 %的石灰水調pH至 6. 0,然後加入相對於乾料總量為11 %的白地黴囷、乳Ife囷和黑麴黴囷混合的囷液，白地黴 菌、乳酸菌和黑麴黴菌的重量比為白地黴菌70 %，乳酸菌20 %，黑麴黴菌10 %，充分攪拌混 合均勻後，送發酵架上，發酵培養，厚度8cm，經室溫32°C發酵培養24小時，其產品粗蛋白可 達24. 72 %，胺基酸佔粗蛋白78. 66 %。
[0043] 實施例7 :經I^H2SO4處理的花生秧粉，並蒸煮處理，加入娃娃菜尾菜、菜柏、麩皮， 其中花生秧粉：娃娃菜尾菜：菜柏：米糠的重量比為2 :5 :2 :3,並加入相對於乾物質為2% 的硫酸銨，尿素1 %，充分攪拌均勻後，調固體發酵料含水分50 %，用1 %的石灰水調pH至 6. 0,然後加入相對於乾料總量為11 %的白地黴囷、乳Ife囷和黑麴黴囷混合的囷液，白地黴 菌、乳酸菌和黑麴黴菌的重量比為白地黴菌65 %，乳酸菌25 %，黑麴黴菌10 %，充分攪拌混 合均勻後，送發酵架上，發酵培養，厚度8cm，經室溫32°C發酵培養24小時，其產品粗蛋白可 達21. 03%，胺基酸佔粗蛋白86. 62%。
[0044] 實施例8 :經1%H2S04&理的花生秧粉，並蒸煮處理，加入白蘿蔔尾菜、菜柏、麩皮， 其中花生秧粉：白蘿蔔尾菜：菜柏：米糠的重量比為2 :5 :2 :2,並加入相對於乾物質為3% 的硫酸銨，尿素2 %，充分攪拌均勻後，調固體發酵料含水分55 %，用1 %的石灰水調pH至 6. 5,然後加入相對於乾料總量為10 %的白地黴囷、乳Ife囷和黑麴黴囷混合的囷液，白地黴 菌、乳酸菌和黑麴黴菌的重量比為白地黴菌70%，乳酸菌25%，黑麴黴菌5%，充分攪拌混 合均勻後，送發酵架上，發酵培養，厚度l〇cm，經室溫30°C發酵培養18小時，其產品粗蛋白 可達21. 13%，胺基酸佔粗蛋白85.86%。
[0045] 實施例9 :紅薯秧粉、紅蘿蔔尾菜、菜柏、米糠，其中紅薯秧粉：紅蘿蔔尾菜：菜柏： 米糠的重量比為1 :4 :2 :1，並加入相對於乾物質為4%的硫酸銨，尿素3%，充分攪拌均勻 後，調固體發酵料含水分50%，用1 %的石灰水調pH至6. 0,然後加入相對於乾料總量為 10%的白地黴菌、乳酸菌和黑麴黴菌混合的菌液，白地黴菌、乳酸菌和黑麴黴菌的重量比為 白地黴菌65 %，乳酸菌25 %，黑麴黴菌10 %，充分攪拌混合均勻後，充分攪拌混合均勻後， 堆放待溫度上升至32°C時，鋪於地面發酵，厚度10cm，經室溫28°C發酵培養24小時，發酵結 束後，其廣品粗蛋白可達21. 3%，氣基酸佔粗蛋白81. 0%。
[0046] 實施例10 :取馬鈴薯秧粉、油菜尾菜，菜柏、麩皮，其中馬鈴薯秧粉：油菜尾菜：菜 柏：米糠的重量比為1 :2 :2 :0. 5,並加入相對於乾物質為3%的硫酸銨，尿素2%，充分攪拌 均勻後，調固體發酵料含水分55%，用1 %的石灰水調pH至6. 0,然後加入相對於乾料總量 為12%的白地黴菌、乳酸菌和黑麴黴菌混合的菌液，白地黴菌、乳酸菌和黑麴黴菌的重量 比為白地黴菌70 %，乳酸菌20 %，黑麴黴菌10 %，充分攪拌混合均勻後，充分攪拌混合均勻 後，堆放待溫度上升至35°C時，鋪於地面發酵，厚度10cm，經室溫32°C發酵培養18小時，發 酵結束後，其廣品粗蛋白可達21. 0%，氣基酸佔粗蛋白81. 02%。
[0047] 實施例11 :培養白地黴菌、乳酸菌和黑麴黴菌混合菌液100kg。
[0048] 白地黴菌、乳酸菌和黑麴黴菌分別按下述方法培養。
[0049] 白地黴菌菌液培養70公斤：
[0050] A.斜面菌種的製備：
[0051] a.葡萄糖lg、酵母膏lg、蛋白腖0· 5g、瓊脂粉2g、加水IOOml後，經115? 20分鐘 蒸汽滅菌，然後分裝於15 X 2cm滅菌的試管，每管分裝3ml，擺成斜面待凝固後備用。
[0052] b.取母種斜面菌，在無菌操作條件下，轉種於上述製備的瓊脂斜面培養基上，經 28 °C，24小時培養，即得菌種斜面菌，一級菌種。
[0053] B.液體種子培養液的製備及液體菌種的培養：
[0054] a.液體培養液的製備；在1升新鮮豆腐漿水或啤酒糟水，或粉絲漿水中或尾菜汁 中，加入麩皮lg，玉米粉5g，（NH4) 2SO4Ig,磷酸0. 5毫升，用1 %的石灰水調pH至6. 0,經 115 °C 20分鐘蒸汽滅菌。
[0055] b.挑取兩接種環一級菌種接種於IOOml液體培養液中，經32°C，24小時培養，其培 養菌液為二級菌種。
[0056] c.將二級菌種IOOml接種於IOOOml液體培養液中，上搖床振蕩培養32 °C，振幅 IOOr/分鐘，18小時，其培養菌液為三級菌種。
[0057] d.將三級菌種IOOOml接種於10000ml液體培養液中，上發酵罐或發酵槽，在32°C 通氣攪拌情況下發酵培養24小時，其菌液為四級菌種。
[0058] e.將四級菌種7000ml接種於70000ml液體培養液中，上發酵罐或發酵槽，在32 °C 通氣攪拌情況下發酵培養24小時，其白地黴菌液為70公斤。
[0059] 乳酸菌液培養20公斤：
[0060] A.斜面菌種的製備：
[0061] a.酵母膏1 %、蛋白腖1 %、番茄汁20%、CaCO3L 5%、瓊脂粉2%、加熱溶解後，用 1 % NaOH調pH至5. 5 - 6. 5,經115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然後分裝於15 X 2cm滅菌的試管， 擺成斜面待凝固後備用；
[0062] b.取母種斜面菌，在無菌操作條件下，轉種於上述製備的番茄汁瓊脂斜面培養基 上，經32°C，24小時培養，即得菌種斜面菌，為一級菌種。
[0063] B.液體種子培養液的製備及液體菌種的培養：
[0064] a.液體培養液的製備：在1升新鮮豆腐漿水或啤酒糟水，或粉絲漿水或尾菜汁 中，加入麩皮lg，玉米粉5g，（NH4) 2SO4Ig,磷酸0. 5毫升，用1 %的石灰水調pH至6. 0,經 115 °C 20分鐘蒸汽滅菌。
[0065] b.挑取兩接種環一級菌種接種於IOOml液體培養液中，經32°C，24小時培養，其培 養液為二級菌種。
[0066] c.將二級菌種IOOml接種於IOOOml液體培養液中，上搖床振蕩培養，經28°C，24 小時，其培養液為三級菌種。
[0067] d.將三級菌種IOOOml接種於10000ml液體培養液中，上發酵罐或發酵槽，在28°C 通氣攪拌情況下發酵培養24小時，其菌液為四級菌種。
[0068] e.將四級菌種2000ml接種於20000ml液體培養液中，上發酵罐或發酵槽，在28 °C 通氣攪拌情況下發酵培養24小時，其乳酸菌液為20公斤。
[0069] 黑麴黴囷囷液培養10公斤：
[0070] A.斜面菌種的製備：
[0071] a.葡萄糖lg、酵母膏lg、蛋白腖0. 5g、麥芽汁lml、瓊脂粉2g、加水IOOml後，經 115°C 20分鐘蒸汽滅菌，然後分裝於15 X 2cm滅菌的試管，每管分裝3ml，擺成斜面待凝固 後備用。
[0072] b.取母種斜面菌，在無菌操作條件下，轉種於上述製備的瓊脂斜面培養基上，經 32 °C，24小時培養，即得菌種斜面菌，一級菌種。
[0073] B.液體種子培養液的製備及液體菌種的培養：
[0074] a.液體培養液的製備；在0. 5升新鮮豆腐漿水或啤酒糟水，或粉絲漿水中，加入玉 米粉3. 5g，（NH4) 2S040. 5g，磷酸0· 25毫升，用1 %的石灰水調pH至6. 0,經115°C 20分鐘蒸 汽滅菌。
[0075] b.挑取兩接種環一級菌種接種於IOOml液體培養液中，經28°C，48小時培養，其培 養菌液為二級菌種。
[0076] c.將二級菌種IOOml接種於IOOOml液體培養液中，上搖床振蕩培養28°C，振幅 IOOr/分鐘，18小時，其培養菌液為三級菌種。
[0077] d.將三級菌種IOOOml接種於10000ml液體培養液中，上發酵罐或發酵槽，在28°C 通氣攪拌情況下發酵培養24小時，即為10公斤黑麴黴菌菌液。
[0078] 用同樣的方法培養白地黴菌液65公斤，乳酸菌菌液25公斤和黑麴黴菌10公斤， 然後將菌液混合，即為固體發酵原料的混合菌液。
[0079] 本發明營養成份分析及有關實驗：
[0080] 1.分析樣品：本發明發酵產品。
[0081] 2.分析方法；見表1。
[0082] 表1菌體蛋白飼料主要成分分析方法

【權利要求】
1. 一種混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，其特徵是：將秸杆、尾菜、菜柏、糠 麩，均勻攪拌，使其含水量達到50- 60% ;加入相對於乾料總量為2 - 6%的硫酸銨，相對於 乾料總量為1 一4%的尿素；用1 %石灰水調pH至5. 5 -6. 5 ;接入相對於乾料總量為8- 12 %由白地黴菌、乳酸菌、黑麴黴菌混合的菌液，混合菌液的重量比為白地黴菌50- 70 %， 乳酸菌20- 25%，黑麴黴菌5 -10%;在溫度為28-32°C，通風條件下發酵24-36小時，製成 發酵蛋白飼料。
2. 權利要求1所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，其特徵是所述的白地 黴菌或乳酸菌或黑麴黴菌的菌液培養方法包括有： A. 斜面菌種的製備： a. 白地黴菌斜面菌種的製備：葡萄糖1 %、酵母膏1 %、蛋白腖0.5%、瓊脂粉2%、加水 加熱溶解後，用1 % NaOH調pH至5. 5-6. 5,經115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然後分裝於15 X 2cm 滅菌的試管，擺成斜面待凝固後備用； b. 乳酸菌斜面菌種的製備： 番茄汁瓊脂培養基的製備：酵母膏1 %、蛋白腖1 %、番茄汁20%、CaC03l. 5%、瓊脂粉 2%、加熱溶解後，用1% NaOH調pH至5. 5 - 6.5,經115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然後分裝於 15 X 2cm滅菌的試管，擺成斜面待凝固後備用； c. 黑麴黴囷斜面囷種的製備： 馬鈴薯-蔗糖瓊脂培養基的製備： 馬鈴薯20%，蔗糖2%，瓊脂1.8%，加水溶解後，用1% NaOH調pH至5.5-6. 5,經 115°C，20分鐘蒸汽滅菌，然後分裝於15 X 2cm滅菌的試管，擺成斜面待凝固後備用； d. 分別取上述三種母種斜面菌，在無菌操作條件下，轉種於上述製備的瓊脂斜面培養 基上，經28-32 °C，24-48小時培養，即得斜面菌種，為一級菌種； B. 液體培養液的製備及液體菌種的培養： a. 液體培養液的製備：在1升新鮮豆腐漿水或啤酒糟水，或粉絲漿水或尾菜汁中，力口 入麩皮1 一3g、玉米粉5 -7. 5g，（NH4)2S041 -2g，磷酸0. 5- 1毫升，用1%石灰水調pH至 5. 5-6. 5,115°C 20分鐘蒸汽滅菌； b. 將一級菌種接種於液體培養液，經28-32°C，24-48小時培養，其培養菌液為二級菌 種； c. 將二級菌種再擴大培養，上搖床振蕩培養經28-32°C，振幅100- 150r/分鐘，18-24 小時培養，其菌液為三級菌種； d. 將三級菌種再擴大培養，上發酵罐或發酵槽，經28-32°C通氣攪拌發酵培養18-24小 時，其菌液為四級菌種。
3. 如權利要求1或2所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，其特徵是所述 的混合菌液的重量比為白地黴菌50- 70%，乳酸菌20- 25%，黑麴黴菌5 -10%。
4. 如權利要求1或2所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，其特徵是還包 括有發酵後的蛋白飼料經低溫乾燥或風乾或晾乾或曬乾後包裝儲存。
5. 如權利要求1所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，其特徵是所述的秸 杆為玉米杆、玉米芯、麥草杆、豆秸秧、花生秧、紅薯秧、馬鈴薯秧、雜草。
6. 如權利要求1所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，其特徵是所述的尾 菜包括有白菜、小白菜、蓮花菜、菠菜、芹菜、花菜、白蘿蔔、紅蘿蔔、花心菜、油菜、韭菜、蔥、 蒜苗、娃娃菜的任意一種或任意組合的菜葉和菜幫。
7. 如權利要求1所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，其特徵是所述的尾 菜的含水量為70- 90% ;粉碎小於10mm。
8. 如權利要求1所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，其特徵是所述的秸 杆粉碎後，經〇. 5 - 1. 5%的硫酸進行酸化和蒸煮處理。
9. 如權利要求1至7所述的混菌好氧發酵秸杆尾菜製備蛋白飼料方法，其特徵是所述 的稻軒、尾菜、菜柏、糖鼓的重量比為1 一3:2 -6:1 -3 :0. 2 -1。
【文檔編號】C12R1/645GK104286400SQ201410529202
【公開日】2015年1月21日 申請日期:2014年10月9日 優先權日:2014年10月9日
【發明者】孫榮高, 代積文, 代鳳雷, 曾學平, 高小青 申請人:甘肅長業生態生物科技有限公司