穩定性優異的還原型輔酶q的製作方法
2023-05-18 02:30:16 1
專利名稱：穩定性優異的還原型輔酶q的製作方法
技術領域：
本發明涉及生物體吸收性、氧化穩定性優異的還原型輔酶Q10的結晶以及含有還原型輔酶Q10結晶的組合物。還原型輔酶Q10相比於氧化型輔酶Q10，顯示高的口服吸收性，是優異的作為食品、營養功能食品、特定保健用食品、營養輔助劑、營養劑、動物藥、飲料、飼料、化妝品、醫藥品、治療藥、預防藥等的有用的化合物。
背景技術：
已知輔酶Q是分布於從細菌到哺乳動物的廣泛的生物體中的必須成分，並作為生物體細胞中的線粒體的電子傳遞系統構成成分。輔酶Q除了在線粒體中通過反覆進行氧化和還原來承擔作為電子傳遞系統中的傳遞成分的功能以外，已知還原型輔酶Q還具有抗氧化作用。在人體中，輔酶Q的側鏈具有10個重複結構的輔酶Q10是主要成分，在生物體中，通常40～90％左右是作為還原型存在的。作為輔酶Q的生理作用，可以舉出由於線粒體活化作用而引起的能量生產的活化、心功能的活化、細胞膜的穩定化效果、由於抗氧化作用引起的細胞的保護效果等。
輔酶Q10的氧化型輔酶Q10在歐美作為健康食品使用，在日本作為充血性心力衰竭藥使用，近年，在日本也開始作為營養功能食品使用了。
另一方面，還原型輔酶Q由於其自身具有強的抗氧化作用，通過向血中送入充分量的還原型輔酶Q，可以有效地增加血中的抗氧化作用活性。可以認為增加血中的抗氧化活性對於缺血再回流時的血管障礙、預防動脈硬化的再次狹窄、防止腦梗塞後的再次血管障礙、動脈硬化的預防、糖尿病的併發症的預防等、由於活性氧種類而導致惡化的大量的疾病具有廣泛的有用性。
已知還原型輔酶Q10可以通過例如，合成、發酵、從天然物提取等原本已知的方法得到輔酶Q後，通過濃縮由色譜法的流出液中的還原型輔酶Q10級分的方法而獲得(參照專利文獻1)。此時，可以使用硼氫化鈉、連二亞硫酸鈉(低亞硫酸鈉)等通常的還原劑將上述還原型輔酶Q10中含有的氧化型輔酶Q10還原後，進行色譜法的濃縮，另外，在該專利文獻中還記載了，還原型輔酶Q10還可以通過使上述還原劑作用於已經存在的高純度輔酶Q10的方法而獲得。
另外，本發明者們進行悉心研究的結果，確立了用於得到高品質的還原型輔酶Q10的製造方法，並申請了專利(參照專利文獻2～8)。
可是，還原型輔酶Q10容易被分子氧氧化成氧化型輔酶Q10。上述氧化直接導致了難除去性的氧化型輔酶Q10的產生以及向製品中混入等質量方面的問題。為了得到高純度的還原型輔酶Q10結晶，進而使得到的還原型輔酶Q10的結晶穩定地保持，適當地防護上述氧化是重要的。
專利文獻1特開平10-109933號公報專利文獻2WO03/06408專利文獻3WO03/06409專利文獻4WO03/06410專利文獻5WO03/06411專利文獻6WO03/06412專利文獻7WO03/08363專利文獻8WO03/32967發明內容發明要解決的課題因此，期望穩定性改善的還原型輔酶Q10的結晶和含有還原型輔酶Q10結晶的組合物，以及改善還原型輔酶Q10的穩定性的方法。
解決課題的措施本發明者們鑑於上述問題，進行了悉心研究的結果發現，通過從油脂中將還原型輔酶Q10進行結晶化，可以得到穩定性優異的還原型輔酶Q10結晶，另外，該結晶在Cu-Kα射線的X射線衍射中具有與從通常的溶劑中結晶化的還原型輔酶Q10結晶不同的特徵，從而完成了本發明。
即，本發明的還原型輔酶Q10結晶的特徵在於，在Cu-Kα射線的X射線衍射中，在衍射角(2θ)3.1°具有中間強度的峰，在20.2°、23.0°具有強的峰，在18.7°、19.0°具有特別強的峰。
另外，本發明的組合物是上述還原型輔酶Q10的結晶和油脂共存而形成的含有還原型輔酶Q10結晶的組合物。
另外，本發明的口服給藥劑是含有上述還原型輔酶Q10的結晶或上述組合物而形成的口服給藥劑。
另外，本發明還涉及還原型輔酶Q10的結晶的製造方法，其特徵在於，將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或將加熱熔融的還原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物冷卻，並使還原型輔酶Q10進行結晶化。
按照本發明，可以得到穩定性得到改善了的還原型輔酶Q10的結晶。
以下，詳細地說明本發明。另外，在本說明書中，只記載為輔酶Q10時，是不論氧化型、還原型，表示兩者混合存在時的混合物全體。
本發明的還原型輔酶Q10的結晶，可以通過將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或將加熱熔融的還原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物冷卻，然後使之結晶化而製造。
作為本發明的結晶的還原型輔酶Q10可以通過例如，合成、發酵、從天然物提取等原本已知的方法獲得。還原型輔酶Q10可以是單獨的，或者也可以是與氧化型輔酶Q10的混合物。可以優選通過使用通常的還原劑，例如連二亞硫酸鈉(低亞硫酸鈉)、硼氫化鈉、抗壞血酸等，將已經存在的高純度輔酶Q10等氧化型輔酶Q10、或氧化型輔酶Q10和還原型輔酶Q10的混合物進行還原而得到。
還原型輔酶Q10在輔酶Q10的總量(即，還原型輔酶Q10和氧化型輔酶Q10的總量)中所佔的比例沒有特別限制，通常為20重量％或20重量％以上，優選40重量％或40重量％以上，更加優選60重量％或60重量％以上，進一步優選80重量％或80重量％以上，特別優選90重量％或90重量％以上，最為優選96重量％或96重量％以上。上限為100重量％，雖然沒有特別限定，但通常為99.9重量％或99.9重量％以下。
作為使用的油脂，可以是從動植物中得到的天然油脂，也可以是合成油脂或加工油脂。更加優選的是食用或醫藥用所允許的油脂。例如，作為植物油脂，可以舉出，例如，椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、亞麻仁油、山茶油、粗米胚芽油、菜籽油、米油、花生油、玉米油、小麥胚芽油、大豆油、紫蘇子油、棉籽油、葵花子油、吉貝油、月見草油、牛油樹脂、婆羅雙樹脂(サル脂)、可可脂、芝麻油、紅花油、橄欖油等，作為動物油脂，可以舉出，例如，豬油、乳脂、魚油、牛油等，另外，還可以舉出通過將這些分別進行加氫、酯交換等加工的油脂(例如，硬化油等)。當然，還可以使用中鏈脂肪酸三甘油酯(MCT)、脂肪酸的部分甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、磷脂等。另外，還可以使用這些的混合物。
作為中鏈脂肪酸三甘油酯(MCT)，可以舉出，例如，脂肪酸的碳原子數分別為6～12，優選8～12的三甘油酯等。
作為脂肪酸的部分甘油酯，可以舉出，例如，脂肪酸的碳原子數分別為6～18，優選6～12的單甘油酯或二甘油酯等。
作為丙二醇脂肪酸酯，可以舉出，例如，脂肪酸的碳原子數分別為6～18，優選6～12的單甘油酯或二甘油酯等。
作為磷脂，可以舉出，例如，卵黃卵磷脂、精製大豆卵磷脂、磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、磷脂醯絲氨酸、鞘磷脂、聯十六烷基磷酸、硬脂醯胺、磷脂醯甘油、磷脂酸、磷脂醯肌醇胺、心磷脂、磷酸乙醇胺神經醯胺、磷酸甘油神經醯胺以及它們的混合物等。
上述油脂中，從操作容易度、臭氣等方面看，優選植物油脂、合成油脂或加工油脂、磷脂。這些優選考慮油脂的價格、還原型輔酶Q10的穩定性和輔酶Q10的溶解性等來進行選定。例如，優選椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、菜籽油、米油、大豆油、棉籽油、橄欖油、MCT、磷脂等，特別優選米油、大豆油、菜籽油、MCT、磷脂等。
含有結晶前的還原型輔酶Q10的油脂可以通過將已經存在的還原型輔酶Q10結晶在還原型輔酶Q10的熔點(49℃)或熔點以上加熱·熔融後，加入到加熱的油脂中，或者將已經存在的還原型輔酶Q10結晶加入到油脂中後，進行加熱·溶解，例如，在50～90℃下加熱而得到。另外，也可以使用抗壞血酸等還原劑使含有氧化型輔酶Q10的油脂溶液進行還原，作為含有還原型輔酶Q10的油脂。
上述加熱·熔融或加熱·溶解的溫度沒有特別限制，通常為約50℃或50℃以上，優選約55℃或55℃以上，更加優選約60℃或60℃以上。上限通常為約90℃或90℃以下，優選約85℃或85℃以下，更加優選約80℃或80℃以下。通常在約50～90℃、優選在約55～85℃、更加優選在約55～80℃、特別優選在約60～80℃實施。
還原型輔酶Q10的結晶化通過將含有上述還原型輔酶Q10的油脂冷卻來進行。
在還原型輔酶Q10的結晶化之際，除了上述油脂以外，還可以適當添加其他的原料。作為這樣的物質，沒有特別的限制，可以舉出，例如，賦形劑、崩解劑、潤滑劑、粘合劑、抗氧劑、著色劑、防凝聚劑、吸收促進劑、有效成分的助溶劑、穩定化劑、粘度調節劑等。當然，不妨礙使輔酶Q10以外的其他的活性成分共存，上述原料也可以在使還原型輔酶Q10的結晶析出後添加。
作為上述賦形劑，沒有特別限制，可以舉出，例如，白糖、乳糖、葡萄糖、玉米澱粉、甘露糖醇、結晶纖維素、磷酸鈣、硫酸鈣等。
作為上述崩解劑，沒有特別限制，可以舉出，例如，澱粉、瓊脂、檸檬酸鈣、碳酸鈣、碳酸氫鈉、糊精、結晶纖維素、羧甲基纖維素、西黃蓍膠等。
作為上述潤滑劑，沒有特別限制，可以舉出，例如，滑石、硬脂酸鎂、聚乙二醇、二氧化矽等。
作為上述粘合劑，沒有特別限制，可以舉出，例如，乙基纖維素、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、西黃蓍膠、蟲膠、明膠、阿拉伯樹膠、聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚丙烯酸、聚甲基丙烯酸、山梨糖醇等。
作為上述抗氧劑，沒有特別限制，可以舉出，例如，抗壞血酸、生育酚、維生素A、β-胡蘿蔔素、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、檸檬酸等。
作為上著色劑，沒有特別限制，可以舉出，例如，允許在醫藥品、食品中添加的物質等。
作為上述防凝聚劑，沒有特別限制，可以舉出，例如，硬脂酸、滑石、輕質二氧化矽、含水二氧化矽等。
作為上述吸收促進劑，沒有特別限制，可以舉出，例如，高級醇類；高級脂肪酸類；蔗糖脂肪酸酯、山梨糖醇脂肪酸酯、聚氧化乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、聚甘油脂肪酸酯等表面活性劑等。
作為上述有效成分的助溶劑，沒有特別限制，可以舉出，例如，富馬酸、琥珀酸、蘋果酸等有機酸等。
作為上述穩定化劑，沒有特別限制，可以舉出，例如，苯甲酸、苯甲酸酸鈉、對羥基苯甲酸乙酯、蜂蠟等。
作為上述粘度調節劑，沒有特別限制，例如，可以舉出蜂蠟等。
作為上述輔酶Q10以外的活性成分，可以舉出，例如，胺基酸、維生素、礦物、多酚、有機酸、糖類、肽、蛋白質等。
還原型輔酶Q10的結晶化溫度(結晶化時的冷卻溫度)沒有特別限制，但從結晶析出率等觀點看，通常為30℃或30℃以下，優選25℃或25℃以下，更加優選20℃或20℃以下，進一步優選15℃或15℃以下，特別優選10℃或10℃以下。下限為體系的固化溫度。通常優選在0～25℃實施。
結晶化時的還原型輔酶Q10的濃度，相對於使用的油脂的重量，還原型輔酶Q10的重量比例，優選約75重量％或75重量％以下，更加優選約50重量％或50重量％以下，進一步優選約30重量％或30重量％以下，特別優選約20重量％或20重量％以下。下限通常為約0.1重量％，優選約1重量％，更加優選約3重量％。通常在約0.1～75重量％，優選在約1～50重量％，更加優選在約3～30重量％實施。
這樣得到的還原型輔酶Q10結晶可以分離使用，也可以與油脂混合地作為含有還原型輔酶Q10的組合物使用。在結晶化後分離還原型輔酶Q10結晶時，結晶化時的還原型輔酶Q10的濃度，相對於使用的油脂的重量，還原型輔酶Q10的重量比例，通常為約30重量％或30重量％以下，優選約20重量％或20重量％以下，更加優選約15重量％或15重量％以下，進一步優選約12重量％或12重量％以下，特別優選約10重量％或10重量％以下。通過維持上述濃度，即使是工業規模，也能夠合適地進行結晶化和結晶的分離。此時，濃度的下限，從生產性的觀點看，通常為約1重量％，優選約2重量％。通常優選在約1～30重量％實施。
在結晶化時，為了抑制過飽和，順利地進行成核化·結晶成長，也可以優選進行添加晶種。
另外，在結晶化之際，還可以在強制流動下實施。為了抑制過飽和，順利地進行成核化·結晶成長，以及從高品質化的觀點看，作為每單位容積的攪拌所需要的動力通常為約0.01kW/m3或0.01kW/m3以上，優選約0.1kW/m3或0.1kW/m3以上，更加優選約0.3kW/m3或0.3kW/m3以上的流動。上述強制流動通常可以通過攪拌翼的旋轉來賦予，但要得到上述流動也未必一定要使用攪拌翼，例如，也可以利用通過液體循環的方法等。
在結晶化時，優選控制每單位時間的結晶的析出量，從而控制過飽和的形成。優選的單位時間的結晶析出量為，例如每單位時間結晶析出全部結晶析出量的約50重量％的量的速度或該速度以下(即，最大為50重量％的量/小時)，優選每單位時間結晶析出全部結晶析出量的約25重量％的量的速度或該速度以下(即，最大為25重量％的量/小時)。
另外，作為冷卻速度，通常為約40℃/小時或40℃/小時以下，優選約20℃/小時或20℃/小時以下。
如上所述結晶化後，視需要，還可以分離、取得還原型輔酶Q10結晶。此時，例如，可以在結晶化後通過離心分離、加壓過濾、減壓過濾等進行固液分離，再視需要進行濾餅的洗淨，作為溼體而獲得。另外，還可以將溼體放入到用不活性氣體對內部進行了置換的減壓乾燥器(真空乾燥器)中，在減壓下乾燥，從而作為幹體而獲得。
可知如上述得到的本發明的還原型輔酶Q10的結晶，在使用Cu-Kα射線的X射線衍射法中，與從通常的溶劑中結晶化的還原型輔酶Q10結晶顯示不同的特徵，並且穩定性優異，另外，具有優異的生物體吸收性。
本發明的還原型輔酶Q10結晶與從通常的溶劑中結晶化的還原型輔酶Q10結晶的區別是，在通過Cu-Kα射線的X射線衍射法中，在衍射角(2θ)3.1°具有中間強度的峰，在20.2°、23.0°具有強峰，在18.7°、19.0°具有特別強的峰。
作為還原型輔酶Q10結晶，優選在通過上述Cu-Kα射線的X射線衍射法中，具有下述(a)～(c)中的至少一個特徵的結晶(a)將19.0°的峰強度作為100，3.1°的峰強度為25或25以下、優選20或20以下，(b)將19.0°的峰強度作為100，18.7°的峰強度為80或80以上、優選85或85以上，(c)20.2°的峰和23.0°的峰的強度比，20.2°的峰強度/23.0°的峰強度，為0.7或0.7以上、優選0.75或0.75以上。
更加優選同時具有上述(a)～(c)中的任意2個特徵的結晶，進一步優選同時具有上述(a)～(c)的3個特徵的結晶。
另外，在衍射角度的表示方面，由於可能有根據使用儀器等所引起的誤差，因此，±0.2°左右的誤差是本發明的範疇。
另外，由於結晶中殘存的非晶質等的影響，當X射線衍射圖的基線紊亂時，優選對基線進行補正，從而排除非晶質等的影響。
還原型輔酶Q10結晶化後，可以直接作為還原型輔酶Q10結晶和油脂共存的組合物使用，也可以將還原型輔酶Q10結晶分離使用。分離的還原型輔酶Q10結晶可以添加到上述所希望的油脂等中，作為含有還原型輔酶Q10結晶的組合物。當然，在該組和物中，除了還原型輔酶Q10結晶和油脂以外，還可以含有前面敘述的賦形劑、崩解劑、潤滑劑、粘合劑、抗氧劑、著色劑、防凝聚劑、吸收促進劑、有效成分的助溶劑、穩定化劑、粘度調節劑、輔酶Q10以外的活性物質。
在含有本發明的還原型輔酶Q10結晶的組合物中，相對於使用的油脂的重量，還原型輔酶Q10的重量比例，優選約75重量％或75重量％以下，更加優選約50重量％或50重量％以下，進一步優選約30重量％或30重量％以下，特別優選約20重量％或20重量％以下。濃度的下限通常為約0.1重量％，優選約1重量％，更加優選約3重量％。通常在約0.1～75重量％，優選在約1～50重量％，更加優選在約3～30重量％實施。
根據本發明，可以得到穩定性優異的還原型輔酶Q10的結晶或含有還原型輔酶Q10結晶的組合物。這樣得到的結晶或含有該結晶的組合物，生物體吸收性也優異。
上述得到的還原型輔酶Q10的結晶或含有還原型輔酶Q10結晶的組合物雖然可以直接使用，但可以優選將其進一步加工成膠囊劑(硬膠囊、軟膠囊、微膠囊)、片劑、糖漿、飲料等口服給藥劑的形態使用，也可以進一步加工成用於乳膏劑、栓劑、糊狀牙膏等形態使用。優選口服給藥劑，特別優選膠囊劑，尤其優選軟膠囊。
當然，將溶解在油脂中的還原型輔酶Q10(加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或將加熱熔融的還原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物)以還原型輔酶Q10溶解的狀態進行膠囊化後，通過冷卻使還原型輔酶Q10的結晶析出，含有這樣的還原型輔酶Q10的結晶的膠囊劑也是本發明的範疇。
作為用於製造膠囊劑的基體材料，沒有特別限制，除了可以使用代表性的來自牛骨、牛皮、豬皮、魚皮等的明膠以外，還可以使用其它的基體材料(例如，可以作為食品添加劑使用的角叉菜膠、海藻酸等來自海藻的產品、刺槐豆膠、瓜爾膠等來自植物種子的產品等增粘穩定劑；含有纖維素類的製造用劑等)。
另外，本發明的還原型輔酶Q10的結晶或含有還原型輔酶Q10結晶的組合物或上述膠囊劑可以在烹製例如，麵包、通心粉、菜粥、米飯、洋點心、點心等時適當添加使用。當然，也可以作為其它的食品形態使用。
本發明的還原型輔酶Q10的結晶或含有還原型輔酶Q10結晶的組合物的製造和保管通過在脫氧氛圍氣體下實施，這樣可以提高抗氧化效果。脫氧氛圍氣可以通過不活性氣體的置換、減壓、沸騰或者這些的組合來實現。優選至少進行不活性氣體的置換，即，使用不活性氣體。作為上述不活性氣體，可以舉出，例如，氮氣、氦氣、氬氣、氫氣、二氧化碳氣體等，優選氮氣。
在上述還原型輔酶Q10的結晶、含有還原型輔酶Q10結晶的組合物或口服給藥劑中，規定期間的保存後，希望還原型輔酶Q10/(還原型輔酶Q10+氧化型輔酶Q10)的重量比例，維持還原型輔酶Q10在90重量％或90重量％以上，更加優選維持在95重量％或95重量％以上。上述保存期間為1天或1天以上，優選1周或1周以上，更加優選1個月或1個月以上，進一步優選半年或半年以上，特別優選1年或1年以上，最為優選2年或2年以上。
發明效果按照本發明，可以簡便地製造穩定性優異的還原型輔酶Q10的結晶、含有該結晶的組合物。另外，該還原型輔酶Q10的結晶以及含有該還原型輔酶Q10結晶的組合物，生物體吸收性優異，適合於作為食用或醫藥用等的組合物或口服給藥劑使用等，可在很寬的範圍內使用，具有很多優點。
示出了將還原型輔酶Q10溶解在菜子油中後，冷卻結晶化的還原型輔酶Q10結晶的通過Cu-Kα射線的X射線衍射法測定的X射線衍射圖。
示出了將還原型輔酶Q10溶解在含水6％的乙醇中後，冷卻結晶化的還原型輔酶Q10結晶的通過Cu-Kα射線的X射線衍射法測定的X射線衍射圖。
實施發明的最佳方案以下，舉出實施例來詳細地說明本發明，但本發明不受這些實施例的限定。另外，實施例中的還原型輔酶Q10的純度、還原型輔酶Q10和氧化型輔酶Q10的重量比通過下述HPLC分析求得，但得到的還原型輔酶Q10的純度並不是規定的本發明中的純度的界限值，此外，同樣地，還原型輔酶Q10和氧化型輔酶Q10的重量比也不是規定的其上限制。
(HPLC分析條件)柱SYMMETRY C18(Waters製造)、250mm(長度)、4.6mm(內徑)移動相乙醇/甲醇＝4/3(v/v)檢測波長210nm流速1ml/min還原型輔酶Q10的保留時間9.1min氧化型輔酶Q10的保留時間13.3min另外，實施例中的通過Cu-Kα射線的X射線衍射法，按照如下進行。
裝置旋轉對陰極型X射線衍射裝置ガイガ一フレツクスRAD-rA[理學電氣(株)]使用X射線Cu·Kα射線X射線強度40kV、100mA角度範圍2θ＝2～60°掃描速度2°/分取樣間隔0.02秒發散狹縫1°接受狹縫0.60°散射狹縫1°(參考例1)在1000g乙醇中加入100g氧化型輔酶Q10、60g的L-抗壞血酸，在78℃下攪拌，進行還原反應。30小時後，冷卻到50℃，邊保持相同的溫度邊添加400g乙醇、100g水。一邊攪拌該乙醇溶液(攪拌所要的動力為0.3kW/m3)，一邊以10℃/小時的速度冷卻到2℃，得到白色的漿液。將得到的漿液減壓過濾，並將溼結晶以冷乙醇、冷水、冷乙醇的順序洗淨，再將溼結晶進行減壓乾燥(20～35℃，1～30mmHg)，由此，得到白色的乾燥結晶95g(表觀收率(有姿收率)95摩爾％)。另外，除了減壓乾燥以外的所有的操作都是在氮氣氛圍氣體下進行的。得到的結晶的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5。
(實施例1)將參考例1中得到的10g還原型輔酶Q10(還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5)在25℃添加到190g的菜子油中，一邊在60℃攪拌(攪拌所要的動力為0.3kW/m3)一邊使還原型輔酶Q10完全溶解。一邊攪拌(攪拌所要的動力為0.3kW/m3)，一邊以10℃/小時的冷卻速度使結晶析出。另外，以上的所有操作都是在氮氣氛圍下進行的。將得到的漿液減壓過濾，用己烷充分洗淨後，將溼結晶進行減壓乾燥(20～35℃，1～30mmHg)，由此，得到通過Cu-Kα射線的X射線衍射法測定的X射線衍射圖如圖1所示的還原型輔酶Q10結晶8.7g。該結晶在上述X射線衍射圖中，在衍射角(2θ)3.1°具有中間強度的峰，在20.2°、23.0°具有強峰，在18.7°、19.0°具有特別強的峰。得到的結晶的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.3/0.7。
(實施例2)將參考例1中得到的10g還原型輔酶Q10(還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5)在25℃添加到190g的中鏈脂肪酸三甘油酯(MCT，碳原子數8∶碳原子數10＝6∶4)中，一邊在60℃攪拌(攪拌所要的動力為0.3kW/m3)一邊使還原型輔酶Q10完全溶解。一邊攪拌(攪拌所要的動力為0.3kW/m3)，一邊以10℃/小時的冷卻速度冷卻到5℃，使結晶析出。另外，以上的所有操作都是在氮氣氛圍下進行的。將得到的漿液減壓過濾，用己烷充分洗淨後，將溼結晶進行減壓乾燥(20～35℃，1～30mmHg)，由此，得到6.5g還原型輔酶Q10結晶。得到的結晶的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.3/0.7。
(比較例1)將參考例1中得到的10g還原型輔酶Q10(還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5)在25℃添加到150g的含水6％的乙醇中，一邊在60℃攪拌，一邊使還原型輔酶Q10完全溶解。一邊攪拌(攪拌所要的動力為0.3kW/m3)，一邊以10℃/小時的冷卻速度冷卻到5℃，使結晶析出。另外，以上的所有操作都是在氮氣氛圍下進行的。將得到的漿液減壓過濾，並以乙醇、水、乙醇的順序洗淨後，將溼結晶進行減壓乾燥(20～35℃，1～30mmHg)，由此，得到通過Cu-Kα射線的X射線衍射法測定的X射線衍射圖如圖2所示的還原型輔酶Q10結晶9.6g。得到的結晶的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.3/0.7。
(實施例3)將實施例1、實施例2以及比較例1中得到的還原型輔酶Q10結晶在30℃、空氣中、遮光條件下保存4天。測定4天後的還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比，其結果示於表1中。
R還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比由此結果可知，從油脂中結晶化還原型輔酶Q10而得到的本發明的還原型輔酶Q10結晶與從通常的溶劑中結晶化的還原型輔酶Q10結晶相比，穩定性優異。
(參考例2)使用實施例1中取得的還原型輔酶Q10和比較例1中取得的還原型輔酶Q10，測定對大鼠口服給藥時的輔酶Q10血中濃度。
各樣品是將這些還原型輔酶Q10按還原型輔酶Q10∶菜子油＝1∶2的重量比加入到0.2％Tween80水溶液中，使懸浮，並使用胃探(胃ゾンデ)對1組6隻的SD大鼠(雄性)進行強制口服給藥，以使達到30mg(還原型輔酶Q10)/kg(大鼠體重)。此後，隨時採取血液，用HPLC測定血漿中的輔酶Q10濃度。血漿中輔酶Q10濃度的測定結果示於表2。
Cmax(mg/ml)…最高血漿中濃度
Tmax(hr)…達到最高血漿中濃度的時間AUC(0-24)(mg/ml·hr)…血漿中濃度-時間曲線下的面積如表2所示，在測定並比較將實施例1中取得的還原型輔酶Q10結晶和比較例1中取得的還原型輔酶Q10結晶給藥到動物時的輔酶Q10的血漿中濃度時，本發明的還原型輔酶Q10的生物體利用能力明顯高於在溶劑中結晶析出的還原型輔酶Q10。因此，可以明確，如果使用本發明的還原型輔酶Q10，顯示極高的生物體吸收性。
(實施例4)將160g菜子油、10g硬化油、5g卵磷脂、5g蜂蠟在70℃下混合。在相同溫度下，添加參考例1中得到的20g還原型輔酶Q10(還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5)，一邊攪拌(攪拌所要的動力為0.3kW/m3)一邊使還原型輔酶Q10完全溶解。另外，以上的所有操作都是在氮氣氛圍下進行的。將含有該還原型輔酶Q10結晶的組合物返回到20℃後，按照規定的方法，將含有還原型輔酶Q10結晶的組合物作成每1個膠囊中為300mg(相當於30mg還原型輔酶Q10)的明膠軟膠囊製劑。
(實施例5)將160g菜子油、10g硬化油、5g卵磷脂、5g蜂蠟在70℃下混合。在相同溫度下，添加參考例1中得到的20g還原型輔酶Q10(還原型輔酶Q10/氧化型輔酶Q10的重量比為99.5/0.5)，一邊攪拌(攪拌所要的動力為0.3kW/m3)一邊使還原型輔酶Q10完全溶解。溶解後，一邊維持上述攪拌一邊以10℃/小時的冷卻速度冷卻到5℃，使結晶析出。另外，以上的所有操作都是在氮氣氛圍下進行的。將含有該還原型輔酶Q10結晶的組合物返回到20℃後，按照規定的方法，將含有還原型輔酶Q10結晶的組合物作成每1個膠囊中為300mg(相當於30mg還原型輔酶Q10)的明膠軟膠囊製劑。如果將該軟膠囊製劑在5℃下靜置24小時，在軟膠囊內析出還原型輔酶Q10的結晶。
工業實用性按照本發明，可以簡便地製造穩定性優異的還原型輔酶Q10的結晶、含有該結晶的組合物。另外，該還原型輔酶Q10的結晶以及含有該還原型輔酶Q10結晶的組合物，生物體吸收性優異，適合於作為食用或醫藥用等的組合物或口服給藥劑使用等，可在很寬的範圍內使用，具有很多優點。
權利要求
1.一種還原型輔酶Q10的結晶，其特徵在於，在Cu-Kα射線的X射線衍射法中，在衍射角(2θ)3.1°具有中間強度的峰，在20.2°、23.0°具有強峰，在18.7°、19.0°具有特別強的峰。
2.按照權利要求1記載的還原型輔酶Q10的結晶，其在Cu-Kα射線的X射線衍射法中，具有下述(a)～(c)中的至少一個特徵(a)將19.0°的峰強度作為100，3.1°的峰強度為25或25以下；(b)將19.0°的峰強度作為100，18.7°的峰強度為80或80以上；(c)20.2°的峰和23.0°的峰的強度比，20.2°的峰強度/23.0°的峰強度，為0.7或0.7以上。
3.按照權利要求1或2記載的還原型輔酶Q10的結晶，該結晶是通過將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或將加熱熔融的還原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物冷卻後，分離還原型輔酶Q10而得到的。
4.按照權利要求3記載的還原型輔酶Q10的結晶，其中，在結晶化時，還原型輔酶Q10與油脂重量的重量比例為1～30重量％。
5.按照權利要求3或4記載的還原型輔酶Q10的結晶，其中，油脂為選自椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、亞麻仁油、山茶油、粗米胚芽油、菜籽油、米油、花生油、玉米油、小麥胚芽油、大豆油、紫蘇子油、棉籽油、葵花子油、吉貝油、月見草油、牛油樹脂、婆羅雙樹脂、可可脂、芝麻油、紅花油、橄欖油、豬油、乳脂、魚油、牛油、通過將這些分別進行加氫、和/或酯交換等加工的油脂、中鏈脂肪酸三甘油酯、脂肪酸的部分甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、磷脂中的至少1種。
6.一種組合物，該組合物是使權利要求1～5的任一項記載的還原型輔酶Q10的結晶與油脂共存而形成的含有還原型輔酶Q10結晶的組合物。
7.按照權利要求6記載的組合物，該組合物是將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或將加熱熔融的還原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物冷卻而得到的。
8.按照權利要求6記載的組合物，該組合物是通過將權利要求1記載的還原型輔酶Q10的結晶添加到油脂中而得到的。
9.按照權利要求6～8中的任一項記載的組合物，其中，還原型輔酶Q10與油脂重量的重量比例為0.1～75重量％。
10.按照權利要求6～9中的任一項記載的組合物，其中，油脂為選自椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、亞麻仁油、山茶油、粗米胚芽油、菜籽油、米油、花生油、玉米油、小麥胚芽油、大豆油、紫蘇子油、棉籽油、葵花子油、吉貝油、月見草油、牛油樹脂、婆羅雙樹脂、可可脂、芝麻油、紅花油、橄欖油、豬油、乳脂、魚油、牛油、通過將這些分別進行加氫、和/或酯交換等加工的油脂、中鏈脂肪酸三甘油酯、脂肪酸的部分甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、磷脂中的至少1種。
11.一種口服給藥劑，其是含有權利要求1～5的任一項記載的還原型輔酶Q10的結晶或權利要求6～9中的任一項記載的組合物而形成的。
12.按照權利要求11記載的口服給藥劑，其是膠囊劑。
13.按照權利要求12記載的口服給藥劑，其是將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或將加熱熔融的還原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物，以還原型輔酶Q10溶解的狀態膠囊化後，冷卻，並使還原型輔酶Q10結晶化而得到的膠囊劑。
14.一種還原型輔酶Q10結晶的製造方法，其特徵在於，將加熱添加了還原型輔酶Q10的油脂而使還原型輔酶Q10溶解的還原型輔酶Q10和油脂的混合物、和/或將加熱熔融的還原型輔酶Q10添加到加熱的油脂中的還原型輔酶Q10和油脂的混合物冷卻，使還原型輔酶Q10結晶化。
15.按照權利要求14記載的製造方法，其中，在結晶化時，還原型輔酶Q10與油脂重量的重量比例為0.1～75重量％。
16.按照權利要求14或15記載的製造方法，其中，油脂為選自椰子油、棕櫚油、棕櫚仁油、亞麻仁油、山茶油、粗米胚芽油、菜籽油、米油、花生油、玉米油、小麥胚芽油、大豆油、紫蘇子油、棉籽油、葵花子油、吉貝油、月見草油、牛油樹脂、婆羅雙樹脂、可可脂、芝麻油、紅花油、橄欖油、豬油、乳脂、魚油、牛油、通過將這些分別進行加氫、和/或酯交換等加工的油脂、中鏈脂肪酸三甘油酯、脂肪酸的部分甘油酯、丙二醇脂肪酸酯、磷脂中的至少1種。
17.按照權利要求14～16中的任一項記載的製造方法，該製造方法是在脫氧氛圍氣體下製造還原型輔酶Q10的結晶的方法。
全文摘要
本發明的目的在於提供穩定性優異的還原型輔酶Q
文檔編號A61P9/10GK1849287SQ20048002615
公開日2006年10月18日 申請日期2004年9月9日 優先權日2003年9月10日
發明者植田尚宏, 北村志郎, 川辺泰三, 岸田秀之, 上田恭義 申請人:株式會社鍾化