一種o157∶h7大腸桿菌抗原膠體金檢測試紙條的製作方法
2023-05-14 04:07:21 1
專利名稱：一種o157∶h7大腸桿菌抗原膠體金檢測試紙條的製作方法
技術領域：
本發明屬於生物檢測領域，具體涉及一種O157:H7大腸桿菌抗原檢測試紙條及其應用。
背景技術：
O157:H7大腸桿菌中「O」是指脂多糖的表面抗原性，按其結構可分為173種；「H7」是指鞭毛的抗原，它有57種。這樣單一的檢測「O」抗原或「H」抗原交叉菌都很多，不能確診O157:H7大腸桿菌。同時檢測O157和H7抗原都陽性方可確診。目前O157:H7大腸桿菌的實驗室檢測方法包括生化反應常用山梨醇麥康凱瓊脂、H7抗血清-山梨醇發酵培養基有助於O157:H7菌株的分離與篩選根據96％大腸桿菌具有葡萄糖醛酸酶，故能水解MUG，產生螢光，而O157:H7則為陰性的特徵設計的MUG試驗可提高篩選O157:H7特異性和敏感性。血清學反應方法有試管凝集和玻片法不適合大量流行病學調查。免疫學檢測常用ELISA、IHA(間接血凝試驗)、LAT(乳膠凝集試驗)進行快診。在分子生物學檢測常用基因探針和多聚酶鏈反應(PCR)，但以上方法需在有條件的實驗室內進行，需要昂貴的儀器，操作繁瑣複雜、時間長、需專業人員等問題。
發明內容
(一)、要解決的技術問題本發明的目的是提供一種方便、快捷地同時能夠檢測O157:H7大腸桿菌中含有的O157和H7抗原試紙條。
本發明再一個目的是提供所述試紙條在檢測O157:H7大腸桿菌中的應用。
(二)、技術方案本發明為一種檢測試紙條，它包含(1)同時包被O157抗體、H7抗體和抗鼠IgG三個條帶的硝酸纖維膜；
(2)含有膠體金標記O157單克隆抗體和膠體金標記H7單克隆抗體的玻璃纖維膜。
本發明所述的試紙條中，O157抗體為抗O157抗原的單克隆抗體或多克隆抗體；H7抗體為抗H7抗原的單克隆抗體或多克隆抗體。
本發明所述的試紙條，它還包含(1)反應支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗體保護膜。
本發明所述的試紙條，其中反應支持物選用PVC板。
本發明所述的試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
本發明所述的試紙條，其中金標抗體保護膜同時具有吸水功能，選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
本發明還公開了所述試紙條在檢測O157:H7大腸桿菌中的應用(見圖2)。將0.5克或0.3ml的標本，放入裝有稀釋液的小瓶內，將試紙條「4」處插入瓶內(直至觀察完結果後方可取出試紙條)，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結果如含有O157和/或H7抗原，則與試紙條上膠體金標記的O157和/或H7單克隆抗體形成相應的複合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的O157和/或H7抗體結合，形成紅色線條，即在「A」或「B」處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應的抗原，膠體金標記單克隆抗體繼續向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉澱線，即在「C」處形成紅色條帶。此線是質控線，如膠體金失效，此線就不會出現，說明試紙條失效。
陽性結果會出現2條或3條紅色沉澱線，陰性結果出現1條紅色沉澱線，如不出現線條說明試紙條失效。
本發明的技術方案是採用純化的O157抗體、H7抗體和抗鼠IgG分別固相於硝酸纖維膜上(NC膜)，結合膠體金標記的O157單克隆抗體、H7單克隆抗體，應用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測標本中的O157:H7大腸桿菌。
(三)、有益效果使用本發明，一份標本、一個試紙條同時能檢測O157和H7兩種抗原，一舉三得其一能夠一次性的捕獲出血性大腸桿菌O157:H7；其二單獨的O157陽性表明，所檢測到的是含有O157的大腸桿菌；其三如果單獨H7陽性，表明檢測到的是含H7鞭毛的一類細菌。這為下一步的分離鑑定創造了有利條件，節省了大量人力物力，方便、快速、簡捷，不需特殊儀器設備，不需專業培訓，結果清晰易辨，操作簡單，易於推廣，適合基層，適合於突發事件的大批量現場檢測，適合流行病學調查，對O157:H7的感染診斷起到輔助作用。
圖1A本發明試紙條的正面示意圖；B本發明試紙條的側面示意圖；1吸水墊；2硝酸纖維膜(A包被O157抗體的條帶；B包被H7抗體的條帶；C包被抗鼠IgG的質控條帶)；3含有膠體金標記O157單克隆抗體和膠體金標記H7單克隆抗體的玻璃纖維膜；4金標抗體保護膜；5反應支持物。
圖2檢測結果示意圖；從左至右依次為O157:H7陽性A、B、C三條線顯色；O157陽性A、C兩條線顯色；H7陽性B、C兩條線顯色；陰性C一條線顯色；無效三條線均不顯色。
具體實施例方式
以下實施例用於說明本發明，但不用來限制本發明的範圍。
實施例1 O157:H7抗原聯合檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG，O157抗體、H7抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的O157單克隆抗體、H7單克隆抗體玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的聚脂膜；即形成了O157:H7大腸桿菌抗原聯合檢測試紙條。
實施例2 O157:H7抗原聯合檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG，O157抗體、H7抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的O157單克隆抗體、H7單克隆抗體玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的玻璃纖維；即形成了O157:H7大腸桿菌抗原聯合檢測試紙條。
實施例3 O157:H7抗原聯合檢測試紙條(參見圖1)反應支持物為6.5cm×0.4cm PCV板；吸水墊為2cm×0.4cm的濾油紙；1.8cm×0.4cm的硝酸纖維膜依次包被抗鼠IgG，O157抗體、H7抗體；含有0.4cm×0.4cm膠體金標記的O157、H7單克隆抗體玻璃纖維膜；金標抗體保護膜為2.7cm×0.4cm的濾紙纖維；即形成了O157:H7大腸桿菌抗原聯合檢測試紙條。
實施例4 檢測方法(參見圖2)將0.5克或0.3ml的標本，放入裝有稀釋液的小瓶內，將實施例1試紙條「4」處插入瓶內(直至觀察完結果後方可取出試紙條)，樣品中的液體吸起上行，10-15分鐘判讀結果如含有O157和/或H7抗原，則與試紙條上膠體金標記的O157和/或H7單克隆抗體形成相應的複合物，上行與包被在硝酸纖維膜上的O157和/或H7單克隆抗體結合，形成紅色線條，即在「A」或「B」處形成紅色條帶。
無論是否含有相對應的抗原，膠體金標記單克隆抗體繼續向上爬行與包被在膜上的抗鼠IgG形成紅色沉澱線，即在「C」處形成紅色條帶。此線是質控線，如膠體金失效，此線就不會出現，說明試紙條失效。
陽性結果會出現2條或3條紅色沉澱線，陰性結果出現1條紅色沉澱線，如不出現線條說明試紙條失效。
實驗例1 臨床標本檢測檢測可疑陽性標本52例，在用試紙條(T2法)檢測的同時，以傳統的細菌培養法和生化鑑定(T1法)為對照，結果見下表細菌培養法(T1)與試紙條法(T2)對比實驗統計表
權利要求
1.一種檢測試紙條，其特徵在於，它包含(1)同時包被O157抗體、H7抗體和抗鼠IgG三個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記O157單克隆抗體和膠體金標記H7克隆抗體的玻璃纖維膜。
2.根據權利要求1所述的試紙條，其特徵在於O157抗體為抗O157的單克隆抗體或多克隆抗體；H7抗體為抗H7的單克隆抗體或多克隆抗體。
3.根據權利要求1所述試紙條，它還包含(1)反應支持物；(2)吸水墊；(3)金標抗體保護膜。
4.根據權利要求3所述試紙條，其中反應支持物選用PVC板。
5.根據權利要求3所述試紙條，其中吸水墊選用濾油紙。
6.根據權利要求3所述試紙條，其中金標抗體保護膜選用聚脂膜、玻璃纖維或濾紙纖維。
7.權利要求1-6之任一所述試紙條在檢測O157:H7大腸桿菌中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種檢測試紙條，它包含(1)同時包被O157抗體、H7抗體和質控抗鼠IgG三個條帶的硝酸纖維膜；(2)含有膠體金標記O157單克隆抗體和膠體金標記H7單克隆抗體的玻璃纖維膜。應用膜層析雙抗體夾心法的原理檢測標本中的O157∶H7大腸桿菌。應用本發明試紙條檢測，減少了許多繁瑣的程序，且方便快捷，特異準確，10－15分鐘判讀結果，不需特殊儀器也不需專業培訓，適合醫院等基層單位，適合大規模的流行病學調查及應對突發事件。
文檔編號G01N33/569GK1963518SQ20051008685
公開日2007年5月16日 申請日期2005年11月10日 優先權日2005年11月10日
發明者劉明 申請人:北京莊笛浩禾生物醫學科技有限公司