免疫原性組合物及使用所述組合物誘導體液和細胞免疫反應的方法

2023-05-16 00:48:36 3

免疫原性組合物及使用所述組合物誘導體液和細胞免疫反應的方法【專利摘要】本發明提供用於誘導受試者的免疫反應的改進的雙重免疫策略的組合物和方法，所述免疫反應包括體液免疫反應和細胞免疫反應(均為CD4和CD8T淋巴細胞免疫反應)，從而提供了針對一種或多種抗原的完全適應性免疫反應。所述方法因而用於治療和/或預防(即，減小發生的可能性或風險)不同疾病、障礙和病況例如癌症和感染性疾病，針對所述疾病的體液免疫反應和細胞免疫反應的誘導是非常期望的和有益的。【專利說明】免疫原性組合物及使用所述組合物誘導體液和細胞免疫反應的方法[0001]相關申請的交叉參考[0002]本申請要求2011年4月8日提交的美國臨時申請N0.61/473,660的優先權，將所述美國臨時申請通過引用整體併入本申請。[0003]關於序列表的聲明[0004]以文本格式代替紙質拷貝提供與本申請相關的序列表，該序列表據此通過引用併入說明書中。包括序列表的文本文件的名稱為46441A_SeqListing.txt。該文本文件為163，840位元組，創建於2012年4月6日，並且通過EFS-Web以電子形式提交。【
技術領域：
】[0005]本公開內容總體上涉及通過用至少兩種組合物免疫受試者以誘導對針免疫原的體液和細胞免疫反應來增強針對免疫原的特異性免疫反應的方法。【
背景技術：
】[0006]宿主的免疫系統提供了用於快速和特異性增強針對病原性微生物的保護反應以及還用於促成惡性腫瘤的排斥的方法。免疫反應通常已被描述為包括體液反應，其中對於抗原是特異性的抗體由分化的B淋巴細胞產生，和細胞介導的反應，其中各種類型的T淋巴細胞通過各種機制消除抗原。例如，能夠識別特異性抗原的CD4(也稱為CD4+)輔助T細胞可通過釋放可溶性介質例如細胞因子以招募免疫系統的額外細胞參與免疫反應來作出反應。CD8(也稱為CD8+)細胞毒性T細胞還能夠識別特異性抗原並且可結合和破壞或損傷具有抗原的細胞或顆粒。具體地，包括細胞毒性T淋巴細胞(CTL)反應的細胞介導的免疫反應對於消除腫瘤細胞和被微生物例如病毒、細菌或寄生蟲感染的細胞可以是特別重要的。[0007]癌症包括廣泛的疾病並影響世界上約1/4的個體。CTL反應是有效癌症疫苗的主要特徵；有效CD4T細胞的幫助也可能在生產性CD8T細胞活化中起著關鍵作用，從而提供臨床益處。基於自體樹突細胞(DC)的疫苗Sipuleucel-T(PR0VENGE?)最近被美國食品和藥品管理局(FDA)批准用於治療轉移性、去勢抗性前列腺癌，儘管與該治療相關的存活益處是適中的4.1個月，因此存在對改良的明顯需要(參見，例如，Kantoff等人，NewEngl.J.Med.363(5):411(2010))。基於痘病毒載體的疫苗PrOStVac?VF還在II期顯示顯著的存活益處(參見，例如，Kantoff等人，J.Clin.0ncol.28(7):1099(2010))?活性免疫療法例如Sipuleucel-T和ProstVac?VF通常比包括目前去勢抗性疾病的護理標準的化學治療方案更好地被耐受(參見，例如，Petrylak等人，N.Engl.J.Med.351(15):1513(2004)；Sylwester等人，J.Exp.Med.202(5):673(2005))。這些臨床成功表明免疫反應可被用於癌症背景以提供改善的患者結果和延長的生存期。[0008]關於微生物感染，瘧疾、瘧疾、結核病、HIV-AIDS和其它病毒感染例如單純皰疹病毒(HSV)感染(全球生殖器潰瘍的首要原因)繼續導致全球健康問題。HSV-2流行率以令人擔憂的速度在全球日益增加(參見，例如，Corey等人，J.Acquir.1mmuneDefic.Syndr.35:435(2004))。在美國，總體HSV-2血清流行率超過20%，在發展中國家HSV-2血清流行率估計為30%至50%。除了在成人中存在HSV-2感染的巨大負擔外，新生兒HSV-2感染的發病率也日益增加。即使當得到治療時，來自HSV-2感染的新生兒腦炎具有大於15%的死亡率，在HSV-2感染的嬰兒當中另有30至50%的存活病例患有神經疾病。與HSV-2流行性相伴隨的是HSV-2感染顯著增加了HIV-1獲得和傳播的風險的完全實現。來自非洲的數據顯示HSV-2感染可使HIV傳播的風險增至多達7倍並且多至一半的新獲得的HIV病例由HSV-2感染直接引起(參見，例如，Abu-Raddad等人，PLoS0NE3(5):e2230(2008))。總體上，HIV獲得的相對風險使HSV-2-感染的個體增加2倍以上。[0009]儘管廣泛地使用藥物幹預，但在成人和小兒群體中HSV-2的流行率繼續日益增加。在感染早期以高劑量給予的抗病毒藥療法可減少HSV傳播，但這阻止不了潛伏感染(參見，例如，Corey等人,SexTransm.Dis.12:215(1985))。在最近的研究中，儘管進行了早期幹預，但利用伐昔洛韋的連續抑制施用使HSV的傳播減少低於50%(參見，例如，Corey等人，N.Engl.J.Med.350:11(2004))。針對抗病毒藥物的替代藥物例如局部殺微生物劑在臨床上未得到證實。由於這些原因，許多主要權威相信接種疫苗是減小HSV-2疾病的健康影響所必需的。[0010]存在對抗感染性疾病微生物例如人免疫缺陷病毒(HIV)和單純皰疹病毒、瘧疾、抗生素抗性細菌的疫苗(包括改進的疫苗)的需要，對於所述感染性疾病微生物，誘導強勁的體液和/或細胞介導的反應對於成功地預防和治療感染是非常重要的。此外，存在對改善的癌症疫苗效力的相當大的潛能和需要。【
發明內容】[0011]概述[0012]本申請中提供的是免疫原性組合物、這類免疫原性組合物的製劑以及使用所述製劑和組合物誘導對於一種或多種免疫原及相關抗原是特異性的免疫反應的方法。在一個實施方案中，提供了用於誘導受試者的免疫反應的方法，所述方法包括(a)給受試者施用至少一個劑量的包含至少第一免疫原的第一免疫原性組合物，其中至少一種抗原能夠誘導對於第一指定抗原是特異性的免疫反應；和(b)給受試者施用至少一個劑量的包含含有編碼第一免疫原的核苷酸序列的重組表達載體的第二免疫原性組合物，從而誘導對於第一指定抗原是特異性的免疫反應。在具體實施方案中，(i)第一免疫原性組合物還包含佐劑；(ii)第二組合物還包含佐劑；或(iii)第一組合物和第二組合物的每一種還包含佐劑。在某些實施方案中，在施用第一免疫原性組合物後施用第二免疫原性組合物。在其它某些實施方案中，在施用第一免疫原性組合物之前施用第二免疫原性組合物。在其它某些實施方案中，同時施用第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物。在具體實施方案中，施用至少兩個劑量的第一免疫原性組合物或施用至少兩個劑量的第二免疫原性組合物。在其它實施方案中，施用(a)2個劑量；(b)3個劑量；(c)4個劑量或(d)5個劑量的第一免疫原性組合物。在另一個實施方案中，當施用兩個或更多個劑量時，(a)在施用第二免疫原性組合物之前施用每一個劑量的第一免疫原性組合物；(b)在施用第二免疫原性組合物施用至少一個劑量的第一免疫原性組合物；(C)在施用第二免疫原性組合物的同時施用至少一個劑量的第一免疫原性組合物；(d)在施用第二免疫原性組合物之前施用至少一個劑量的第一免疫原性組合物，並且在施用第二免疫原性組合物之後施用任何剩下劑量的每一個劑量的第一免疫原性組合物；或(e)同時施用每一個劑量的第一組合物與第二組合物。關於這些方法和實施方案的每一個，由第一免疫原誘導的免疫反應包括對於第一指定抗原是特異性的CD4T細胞免疫反應，在某些實施方案中，由第一免疫原誘導的免疫反應包括對於第一指定抗原是特異性的CD8T細胞免疫反應；以及在其它某些實施方案中，由第一免疫原誘導的免疫反應包括對於第一指定抗原是特異性的CD4T細胞免疫反應和CD8T細胞免疫反應。[0013]在上文和本申請中描述的方法的某些實施方案中，第一免疫原性組合物還包含第二免疫原，重組表達載體還包含編碼第二免疫原的核苷酸序列，其中第二免疫原誘導對於第二指定抗原是特異性的免疫反應。在某些具體實施方案中，第一指定抗原與第二指定抗原是相同的。在其它某些具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是不同的。在上文和本申請中描述的方法的某些其它實施方案中，重組表達載體還包含編碼能夠誘導對於第二指定抗原是特異性的免疫反應的第二免疫原的核苷酸序列。在某些具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是相同的。在其它某些具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是不同的。在關於此類方法的具體實施方案中，由第一免疫原誘導的免疫反應包括對於第一指定抗原是特異性的CD4T細胞反應。在關於此類方法的具體實施方案中，由第二免疫原誘導的免疫反應包括對於第二指定抗原是特異性的CD8T細胞反應。[0014]在上文和本申請中描述的具體實施方案並且當一種或多種免疫原性組合物包含佐劑時，佐劑是無毒性脂質A相關佐劑。在某些具體實施方案中，無毒性脂質A相關佐劑是吡喃葡萄糖基脂質A(GLA);在更具體實施方案中，在穩定的水包油乳液中配製GLA。[0015]在上文和本申請中描述的方法的其它實施方案中，第一指定抗原是(a)腫瘤相關抗原或(b)來自選自病毒、細菌、真菌和寄生蟲的感染性微生物。在更具體實施方案中，第一指定抗原是選自腎細胞癌抗原、前列腺癌抗原、間皮瘤(mesothelioma)抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原的腫瘤相關抗原。在更具體實施方案中，前列腺癌抗原是前列腺酸性磷酸酶、前列腺特異性抗原、NKX3.1或前列腺特異性膜抗原。在其它具體實施方案中，第一指定抗原來自病毒。在更具體實施方案中，病毒是單純皰疹病毒-2(HSV-2)。在某些具體實施方案中，第一指定抗原是HSV-2UL19多肽或HSV_2gD多肽。[0016]在上文和本申請中描述的方法的其它具體實施方案中，當誘導對於第一指定和第二指定抗原是特異性的免疫反應時，第一指定抗原和第二指定抗原的每一種是腫瘤相關抗原。在更具體的實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一種選自腎細胞癌抗原、前列腺癌抗原、間皮瘤(mesothelioma)抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原。在更具體的實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一種是選自前列腺酸性磷酸酶、前列腺特異性抗原、NKX3.1或前列腺特異性膜抗原的前列腺癌抗原。在其它具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一種是來自選自病毒、細菌、真菌和寄生蟲的感染性微生物的抗原。在更具體實施方案中，感染性疾病生物是病毒，其在更具體的實施方案中是單純皰疹病毒_2(HSV-2)。在某些實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的至少一種是HSV-2UL19多肽，並且第一指定抗原和第二指定抗原的其它抗原是HSV-2gD多肽。[0017]在上文和本申請中描述的方法的其它具體實施方案中，重組表達載體選自慢病毒載體基因組、痘病毒載體基因組、痘苗病毒載體基因組、腺病毒載體基因組、腺病毒相關病毒載體基因組、皰疹病毒載體基因組和a病毒載體基因組。在具體實施方案中，重組表達載體被整合進入載體顆粒，其在某些具體實施方案中將重組表達載體遞送至抗原呈遞細胞。在具體實施方案中，抗原呈遞細胞是樹突細胞。在具體實施方案中，載體顆粒是包含慢病毒載體基因組的慢病毒載體顆粒；包含痘病毒載體基因組的痘病毒載體顆粒；包含痘苗病毒載體基因組的痘苗病毒載體顆粒；包含腺病毒載體基因組的腺病毒載體顆粒；包含腺病毒相關病毒載體基因組的腺病毒相關病毒載體顆粒；包含皰疹病毒載體基因組的皰疹病毒載體顆粒；或包含a病毒載體基因組的a病毒載體顆粒。在更具體實施方案中，載體顆粒是包含慢病毒載體基因組的慢病毒載體顆粒。在更具體實施方案中，慢病毒載體顆粒還包括包含辛德比斯病毒E2糖蛋白的包膜，所述糖蛋白包含相較於SEQIDNO:1具有至少一個胺基酸變化的胺基酸序列，其中SEQIDNO:1的殘基160不存在或為除穀氨酸外的胺基酸，並且其中E2糖蛋白不是包含辛德比斯病毒E3蛋白的融合蛋白的部分。在更具體的實施方案中，E2糖蛋白結合樹突細胞特異性細胞內粘附分子-3-捕捉非整聯蛋白(DC-SIGN)。[0018]在本申請一個實施方案中還提供了製劑，在一個實施方案中，所述製劑包含(a)含有至少一種能夠誘導對於第一指定抗原是特異性的免疫反應的第一免疫原的第一免疫原性組合物；和(b)包含含有編碼第一免疫原的核苷酸序列的重組表達載體的第二免疫原性組合物。在具體實施方案中，由第一免疫原誘導的特異性免疫反應包括對於第一指定抗原是特異性的CD4T細胞反應。在另一個具體實施方案中，由第一免疫原誘導的特異性免疫反應包括對於第一指定抗原是特異性的CD8T細胞反應。在其它具體實施方案中，由第一免疫原誘導的免疫反應包括對於第一指定抗原是特異性的CD4T細胞免疫反應和CD8T細胞免疫反應。在上文和本申請中描述的製劑的另一個實施方案中，這類製劑被提供來用於誘導抗具有(a)第一指定抗原的腫瘤細胞的細胞毒性T淋巴細胞反應。在其它具體實施方案中，上文和本申請中描述的製劑被提供來用於誘導抗具有第一指定抗原的感染性疾病微生物的細胞毒性T淋巴細胞反應。在其它具體實施方案中，上文和本申請中描述的製劑被提供來用於減少包含多個具有腫瘤相關抗原的腫瘤細胞的腫瘤的發生或復發的可能性。在另一個實施方案中，這類製劑被提供來用於預防或治療由感染性微生物引起的感染。[0019]提供了製劑的另外的實施方案，其中第一免疫原性組合物還包括第二免疫原，並且其中重組表達載體還包括編碼第二免疫原的核苷酸序列，其中第二免疫原誘導對於第二指定抗原是特異性的免疫反應。在一個具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是相同的。在另一個具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是不同的。在上文和本申請中描述的製劑的其它具體實施方案中，重組表達載體還包括編碼能夠誘導對於第二指定抗原是特異性的免疫反應的第二免疫原的核苷酸序列。在某些具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是相同的，在其它具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原是不同的。在這些實施方案中，由第一免疫原誘導的免疫反應包括對於第一指定抗原是特異性的⑶4T細胞反應。同樣地，關於製劑的這些實施方案，由第二免疫原誘導的免疫反應包括對於第二指定抗原是特異性的CD8T細胞反應。[0020]關於上文和本申請中提供的製劑的實施方案，(a)第一免疫原性組合物還包含佐劑，(b)第二免疫原性組合物還包含佐劑；或(C)第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物各自還包含佐劑。在更具體的實施方案中，佐劑是無毒性脂質A相關佐劑。在更具體的實施方案中，佐劑是無毒性脂質A相關佐劑。在更具體的實施方案中，無毒性脂質A相關佐劑是吡喃葡萄糖基脂質A(GLA)，在具體實施方案中，在穩定的水包油乳液中配製所述佐劑。[0021]關於上文和本申請中提供的製劑的實施方案，第一指定抗原是(a)腫瘤相關抗原或(b)來自選自病毒、細菌、真菌和寄生蟲的感染性微生物。在具體實施方案中，第一指定抗原是選自腎細胞癌抗原、前列腺癌抗原、間皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原的腫瘤相關抗原。在更具體實施方案中，前列腺癌抗原是前列腺酸性磷酸酶、前列腺特異性抗原、NKX3.1或前列腺特異性膜抗原。在其它具體實施方案中，第一指定抗原來自病毒。在更具體實施方案中，病毒是單純皰疹病毒-2(HSV-2)。在另一個具體實施方案中，第一指定抗原是HSV-2UL19多肽或HSV-2gD多肽。[0022]在上文和本申請中描述的製劑的其它實施方案中，當由製劑誘導的免疫反應包括對於第一指定抗原和第二指定抗原是特異性的免疫反應，第一指定抗原和第二指定抗原的每一種是腫瘤相關抗原。在更具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一種選自腎細胞癌抗原、前列腺癌抗原、間皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原。在又一個更具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一種是選自前列腺酸性磷酸酶、前列腺特異性抗原、NKX3.1和前列腺特異性膜抗原的前列腺癌抗原。在其它具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的每一種是來自選自病毒、細菌、真菌和寄生蟲的感染性微生物的抗原。在一個具體實施方案中，感染性疾病生物是病毒。在具體實施方案中，病毒是單純皰疹病毒-2(HSV-2)。在另一個具體實施方案中，第一指定抗原和第二指定抗原的至少一種是HSV-2UL19多肽並且第一指定抗原和第二指定抗原的另一種是HSV-2gD多肽。[0023]在上文和本申請中描述的製劑的其它實施方案中，重組表達載體選自慢病毒載體基因組、痘病毒載體基因組、痘苗病毒載體基因組、腺病毒載體基因組、腺病毒相關病毒載體基因組、皰疹病毒載體基因組和a病毒載體基因組。在一個具體實施方案中，重組表達載體被整合進入載體顆粒。在另一個具體實施方案中，載體顆粒能夠將重組表達載體遞送至抗原呈遞細胞。在更具體的實施方案中，抗原呈遞細胞是樹突細胞。在其它具體實施方案中，載體顆粒是包含慢病毒載體基因組的慢病毒載體顆粒；包含痘病毒載體基因組的痘病毒載體顆粒；包含痘苗病毒載體基因組的痘苗病毒載體顆粒；包含腺病毒載體基因組的腺病毒載體顆粒；包含腺病毒相關病毒載體基因組的腺病毒相關病毒載體顆粒；包含皰疹病毒載體基因組的皰疹病毒載體顆粒；或包含a病毒載體基因組的a病毒載體顆粒。在更具體實施方案中，載體顆粒是包含慢病毒載體基因組的慢病毒載體顆粒。在更具體實施方案中，慢病毒載體顆粒還包含含有辛德比斯病毒E2糖蛋白的包膜，所述糖蛋白包含相較於SEQIDNO:1具有至少一個胺基酸變化的胺基酸序列，其中SEQIDN0:1的殘基160不存在或為除穀氨酸外的胺基酸，並且其中E2糖蛋白不是包含辛德比斯病毒E3蛋白的融合蛋白的部分。在更具體的實施方案中，E2糖蛋白結合樹突細胞特異性細胞內粘附分子-3-捕捉非整聯蛋白(DC-SIGN)。[0024]在上文和本申請中描述的製劑的另一個實施方案中，這類製劑被提供來用於誘導抗具有(a)第一指定抗原；(b)第二指定抗原；或(C)第一指定抗原和第二指定抗原的腫瘤細胞的細胞毒性T淋巴細胞反應。在其它具體實施方案中，上文和本申請中描述的製劑被提供用於誘導抗具有(a)第一指定抗原；(b)第二指定抗原；或(C)第一指定抗原和第二指定抗原的細胞毒性T淋巴細胞反應。在其它具體實施方案中，上文和本申請中描述的製劑被提供來用於減少包含多個具有腫瘤相關抗原的腫瘤細胞的腫瘤的發生或復發的可能性。在另一個實施方案中，這類製劑被提供來用於預防或治療由感染性微生物引起的感染。[0025]如本申請中所用，術語「分離的」意指從其原始環境(例如，如果其是天然存在的，則是天然環境)取出的材料。例如，存在於活的動物中的天然存在的核酸或多肽不是分離的，但與一些或全部存在於天然系統中的共存材料分離的相同核酸或多肽是分離的。這樣的核酸可以是載體的部分。可以為載體的部分的核酸可以仍然是分離的，因為核酸不是核酸的天然環境的部分。分離的多肽或蛋白質或其片段可以是組合物的組分，並且仍然是分離的，因為組合物不是多肽的天然環境的部分。術語「基因」意指參與產生多肽鏈的DNA的區段；基因包括在編碼區之前和之後的區域「前導序列和非轉錄尾區」以及單個編碼區段(外顯子)之間的間插序列(內含子)。胺基酸可在本申請中按照單字母和三字母代碼提及，所述代碼在本領域中是共有的教科書知識，從而為本領域技術人員所熟知。本申請中所用的術語「融合多肽」還可與「融合蛋白」互換使用，並且除非明確地另有所指，否則兩個術語無意表示具有可區別的性質或特徵的分子。[0026]如本申請中和所附權利要求中所用，除非上下文中明確地另有所指，否則單數形式「一個/一種(a)」、「一個/一種(an)」以及「該(the)」包括複數形式。因此，例如，提及「一個/一種抗原」包括多個/多種此類抗原，提及「一個/一種細胞」或「該細胞(thecell)」包括提及一個/一種或多個/多種細胞及對於本領域技術人員來說是已知的其等同物(例如，多個/多種細胞)等等。類似地，除非明確地另有所指，否則提及「一個/和一種化合物(acompound)」和「一個/一種組合物(acomposition)」包括多個/多種此類化合物或組合物，和分別提及一個/一種或多個/多種化合物或組合物。當描述或聲明方法的步驟，並且步驟被描述為以特定的順序發生時，如果改寫以聲明:第二步驟在第一步驟「之後」進行(或執行)，則在第二步驟「之前」(即，在……前)進行(或執行)第一步驟的描述具有相同的含義。當提及數字或數值域時，術語「約」意指提及的數字或數值域是實驗變異性內(或統計實驗誤差內)的·近似值，從而數字或數值域可在1%與15%的所述數字或數值域之間變化。術語「包含」(和相關術語例如「含有」或「擁有」或「具有」或「包括」)無意排除在其它某些實施方案中，例如，本申請中描述的物質、組合物、方法或過程等的任意組合成的實施方案可由所述特徵「組成」或「基本由所述特徵組成」。【專利附圖】【附圖說明】[0027]圖1描述了對於HSV-2UL19蛋白是特異性的⑶4免疫反應。通過初免/加強免疫方案(d0初免/d21加強)免疫利用與5μg於穩定的水包油乳液中配製的吡喃葡萄糖基脂質A(GLA)(GLA-SE)、穩定的水包油乳液(SE)或PBS(無)組合的5ug重組HSV-2UL19免疫成組的5隻小鼠。在利用含有UL19T細胞表位的肽離體再刺激後測量脾CD4T細胞反應。IFN-Y、TNF-α和IL-2的水平通過細胞內細胞因子染色(ICS)，隨後進行螢光激活細胞分選(FACS)來進行測定。描述了每一組的細胞因子陽性CD4T細胞的百分比。[0028]圖2舉例說明針對HSV-2UL19蛋白的免疫反應。GLA-SE-佐劑化的rUL19蛋白(重組蛋白(rProtein)+GLA/SE)或利用編碼HSV-2多肽UL19(Lentivector)的慢病毒載體(DC-NILV)(ImmuneDesignCorporation,Seattle,WA)免疫成組的5隻小鼠。測試抗體滴度(右)，通過ICS分析脾UL19-特異性⑶4和⑶8T細胞的IFN-Y和TNF-α的產量(左)。加框的區域中的數字表示為IFN-Y+和TNF-α+的⑶4或⑶8細胞的百分比。[0029]圖3描述了在利用編碼卵白蛋白(LV)的DC-NILV初次免疫，隨後利用PBS、單獨的GLA/SE、與SE組合的重組卵白蛋白(rP+SE)或GLA-SE-佐劑化的卵白蛋白(rP+GLA/SE)加強的小鼠中誘導的免疫反應。在加強免疫後4天從動物分離脾細胞。通過ICS分析脾卵白蛋白特異性⑶8T細胞的IFN-Y和TNF-α的產量。每一個象限中的數字代表為IFN-Y+和TNF-α+的⑶8細胞的百分比。[0030]圖4Α和4Β舉例說明利用用GLA-SE配製的重組HSV-2UL19蛋白免疫的和利用編碼UL19的DC-NILV免疫的動物的免疫反應。利用GLA-SE-佐劑化的rUL19蛋白(rP+GLA/SE)或PBS免疫成組的5隻C57BL/6小鼠，利用GLA-SE-佐劑化的rUL19蛋白或含有編碼UL19(LV)的多核苷酸的DC-NILV進行加強。在加強免疫後10天從動物分離脾細胞。在利用單次含CD4或CD8UL19表位的15聚體肽進行離體刺激後，通過ICS分析脾UL19-特異性⑶4和⑶8T細胞的IFN-Y,TNF-α和IL-2的產量。圖4Α(左)描述了每組一隻代表性小鼠的細胞因子產量。圖4Α的右側舉例說明通過兩種不同的CD8UL19表位的每一種刺激的細胞因子陽性⑶8Τ細胞的百分比。圖4Β顯示在來自每一個免疫的組的動物中測量的總IgG。GLA-SE佐劑化的rUL19蛋白在圖4B中以「rP」表示。BLD:低於檢測的水平。[0031]圖5A和5B描述了用利用佐劑GLA/SE配製的重組蛋白免疫的，隨後利用佐劑化的重組蛋白和編碼所述蛋白質的慢病毒載體加強的動物的免疫反應。利用GLA-SE-佐劑化的rUL19蛋白(rP+GLA/SE)或PBS免疫成組的5隻C57BL/6小鼠，利用GLA-SE-佐劑化的rUL19蛋白(rP+GLA/SE)和含有編碼UL19(LV)的多核苷酸的DC-NILV進行加強。在加強免疫後10天從動物分離脾細胞。在利用單次含有CD4或CD8UL19表位的15聚體肽離體刺激後，通過ICS分析脾UL19特異性⑶4和⑶8T細胞的IFN-y,TNF-α和IL-2的產量。圖5Α(左)描述了每組一隻代表性小鼠的細胞因子產量。圖5Α的右側舉例說明了利用兩種不同的CD4UL19表位的每一種刺激的細胞因子陽性CD4T細胞的百分比和利用兩種不同的⑶8UL19表位的每一種刺激的細胞因子陽性⑶8Τ細胞的百分比。[0032]在加強後5天和加強後10天從動物獲得血清，檢測特異性IgG抗體。圖5Β顯示了在來自每一個免疫的組的動物中測量的總IgG。GLA-SE佐劑化的rUL19蛋白在圖5B中由「rP」表示。從左至右，4個數據集代表接受(I)PBS(初免組合物，1°)，隨後利用GLA-SE佐劑化的rUL19蛋白和編碼UL19(rP+LV)的DC-NILV(加強組合物，2°)(在加強後5天獲得的血清)免疫的；(2)PBS(初免組合物，1°)，隨後利用rP+LV(加強組合物，2°)(在加強後10天獲得的血清)免疫的；(3)GLA-SE佐劑化的rUL19蛋白(rP)(初免組合物，1°)，隨後利用rP+LV(加強組合物，2°)(加強後5天獲得的血清)免疫的；(4)rP(初免組合物，1°)，隨後用rP+LV(加強組合物，2°)(加強後10天獲得的血清)免疫的動物的IgG滴度。[0033]圖6舉例說明可使用本申請中描述的用於誘導特異性CD4T細胞反應、特異性CD8T細胞反應和特異性抗體反應的免疫原性組合物進行應用的幾個示例性免疫方案。免疫原:目標重組或分離多肽；編碼免疫原的載體；含有編碼目標多肽的多核苷酸的重組表達載體。[0034]圖7顯示DC-NILV產生強勁的Gag-特異性CD8T細胞反應。[0035]圖8顯示GLA是在利用SIV-Gag重組蛋白免疫後產生強勁的Thl⑶4T細胞所需的。[0036]圖9顯示利用SIV-Gag重組蛋白+GLA-SE和表達SIV-Gag的DC-NILV的異源性初免、加強、加強接種產生CD8和CD4抗原特異性T細胞反應。[0037]圖10顯示由異源性接種產生的CD8和TH1CD4T細胞反應可利用rSIV-Gag+GLA-SE來進行加強。[0038]圖11舉例說明由DC-NILV產生⑶8T細胞反應可利用合成的長肽+GLA-SE來進行加強。顯示了SIV-Gag的胺基酸289-333(GPKEPFQSYVDRFYKSLRAEQTDAAVKNWMTQTLLIQNANPDCKL；SEQIDNO:42)。【具體實施方式】[0039]針對疾病和病況例如感染性疾病的接種包括其中利用一種組合物(初免組合物)免疫受試者，隨後利用不同的組合物(加強組合物)加強受試者的免疫的策略。然而，迄今為止雙重接種策略不足以同時誘導CD4和CD8T細胞反應以及提供充足的抗許多疾病和病況的保護作用的體液免疫。[0040]本申請中提供的是用於誘導受試者的免疫反應的改進的雙重免疫策略的組合物和方法，所述免疫反應包括體液免疫反應和細胞免疫反應(均為CD4和CD8T淋巴細胞免疫反應)，從而提供針對一種或多種抗原的完全適應性免疫反應。因此，本申請中描述的組合物可被開發和配製為疫苗。描述的方法因而用於治療和預防(即，以生物學、臨床和/或統計上顯著的方式減少發生或復發的可能性或風險)不同的疾病、障礙和病況例如癌症和感染性疾病，針對所述疾病的體液免疫反應和細胞免疫反應的誘導改善臨床結果或是最佳益處所必需的。[0041]本申請中提供了同時或以任一順序相繼地給有此需要的受試者施用的兩種不同的免疫原性組合物。免疫原性組合物的至少一種誘導針對免疫原的特異性體液(即，抗體反應)和/或特異性CD4T細胞反應(其可包括記憶CD4T細胞反應)，並且免疫原性組合物的至少一種誘導特異性CD8T細胞反應，其可包括對於免疫原是特異性的細胞毒性T細胞(CTL)反應。在某些實施方案中，兩種免疫原性組合物之一對於誘導特異性體液和/或特異性CD4T細胞反應是更有效，並且兩種免疫原性組合物的另一種對於誘導特異性CD8T細胞反應可以是更有效的。[0042]一種免疫原性組合物包含至少一種能夠誘導對於指定的目標抗原是特異性的免疫反應的免疫原。該免疫原性組合物還可包括佐劑，所述佐劑增強對於免疫原和指定抗原是特異性的免疫反應，或可以是誘導所述免疫反應所需的。第二免疫原性組合物包含含有編碼免疫原的核苷酸序列的重組表達載體。重組表達載體還包含至少一個有效地連接至編碼免疫原的核苷酸的調控序列，從而重組表達載體能夠指導免疫原的表達。在某些具體實施方案中，將重組表達載體整合進入載體顆粒(例如，病毒載體顆粒)。如本申請中進一步描述的，免疫原可以是指定抗原的免疫原性片段或可以是全長指定抗原(或其免疫原性變體)，或包含一個或多個免疫原性片段或包含全長指定抗原(或其免疫原性變體)的融合蛋白。[0043]因此，術語「免疫原」在本申請中的任何用途是指整個組的多肽，所述多肽是:(a)全長抗原，(2)抗原的免疫原性片段，(3)全長抗原的免疫原性變體或免疫原性片段，(4)包含不同多肽的部分的其嵌合融合物以及(5)其綴合物。因此，「免疫原」表示包含⑴第一指定抗原，(ii)其免疫原性片段或(iii)能夠誘導對於第一指定抗原是特異性的免疫反應的其變體的任一種的多肽。[0044]例如，此類免疫原性變體在抗原的至少10個連續胺基酸上保持至少90%的胺基酸同一性，或在抗原(例如，包膜蛋白或腫瘤相關抗原)的至少15個連續胺基酸上保持至少85%的胺基酸同一性。作為另一個實例，此類免疫原性片段包含抗原的至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、48或50個連續胺基酸。其它實例包括在抗原的至少50個連續胺基酸上，或在抗原的至少100個連續胺基酸上至少70%、75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99%的同一性。[0045]應當理解，在本申請中的方法中，當提及包含免疫原的第一免疫原性組合物和包含編碼「免疫原」的核苷酸序列的第二免疫原性組合物時，第二免疫原性組合物的編碼的免疫原多肽不必具有與第一免疫原性組合物的多肽免疫原相同的胺基酸序列。因此，本申請中描述的方法和組合物涉及第一免疫原性組合物包含抗原(包膜蛋白或腫瘤相關抗原)的至少一個、二個、三個或更多個小片段，以及第二免疫原性組合物包含編碼全長抗原或其更大的片段的核苷酸序列，或反之亦然。例如，第一多肽是在長度上具有約50個或更少的胺基酸的抗原的小免疫原性片段，並且第二多肽是全長抗原或在長度上具有約50個或更多的胺基酸的其更大的片段，所述片段任選地與全長抗原具有至少80%、85%、90%或95%的同一性。[0046]在本申請中提供的其它具體實施方案中，將第二免疫原包含在任一免疫原性組合物中。第二免疫原能夠誘導針對指定抗原的免疫反應，所述指定抗原可與第一免疫原誘導針對其的特異性免疫反應的指定抗原相同或不同。在另一個具體實施方案中，第一免疫原誘導特異性CD4T細胞免疫反應並且還可誘導特異性抗體反應，第二免疫原誘導至少CD8T細胞免疫反應。某些具體實施方案中，待免疫的受試者期望僅通過用重組表達載體表達第二免疫原來利用第二免疫原進行免疫。因此，包含第一免疫原(以及還可包含佐劑)的免疫原性組合物不存在第二免疫原，重組表達載體包含編碼第一免疫原和編碼第二免疫原的核苷酸序列。[0047]本申請中描述的免疫原性組合物和方法可用於預防或治療感染性疾病，特別地對於其未獲得滿意的疫苗或感染後治療的感染性疾病(例如，病毒感染例如HIV和HSV-2，以及寄生蟲感染例如瘧疾)。在其它實施方案中，本申請中描述的免疫原性組合物和方法可用於治療和/或減少癌症和惡性腫瘤發生的可能性。[0048]在下文中詳細地描述了免疫原性組合物、包含免疫原性組合物的製劑以及使用製劑和組合物的方法的各種實施方案。[0049]免疫原性組合物[0050]當用於協調免疫策略時，本申請中描述的不同免疫原性組合物用於誘導特異性的適應性免疫反應。一種免疫原性組合物包含至少一種免疫原，並且還可包含生理上適當的(即，藥學上可接受的或適當的)佐劑。該第一免疫原性組合物中包含的免疫原通常是分離的免疫原，所述免疫原可從其天然環境分離或可重組地產生。為了容易參考，存在於第一免疫原性組合物中的免疫原在本申請中稱為分離的/重組的免疫原。第二不同的組合物包含含有編碼免疫原的核苷酸序列的重組表達載體。第二免疫原性組合物還可進一步包含佐劑。如果第一組合物和第二組合物包含佐劑，則每一種組合物中包含的佐劑可以相同或不同。[0051]給受試者施用兩種不同的組合物可誘導針對至少一種免疫原和針對各自目標抗原(在本申請中也稱為指定抗原)的特異性免疫反應。特異性免疫反應包括特異性體液免疫反應(即，特異性抗體反應)和特異性細胞免疫反應(包括CD4T細胞反應和CD8T細胞反應)，每一種對於免疫原是特異性的並因而對於指定的目標抗原是特異性的反應。本申請中提及的免疫原性製劑包括這兩種免疫原性組合物，所述組合物在本申請中為方便起見可稱為第一免疫原性組合物和第二免疫原性組合物。因此，在一個實施方案中，免疫原性製劑包含(a)至少一種包含至少一種能夠引發對於指定抗原是特異性的免疫反應的免疫原性組合物；和(b)至少一種包含含有編碼至少一種免疫原的核苷酸序列的重組表達載體的第二免疫原性組合物。可將製劑的免疫原性組合物同時或以任一順序相繼地施用至受試者以誘導對於免疫原和對於各自的指定抗原是特異性的免疫反應。用於組合物的免疫原性組合物的每一種更詳細地描述於本申請中。[0052]每一種免疫原性組合物還可包含至少一種生理上(或藥學上)可接受的或適當的賦形劑。本領域技術人員已知的用於藥物組合物的任何生理上或藥學上適當的賦形劑或載體(g卩，不幹擾活性成分的活性的無毒性材料)可用於本申請中描述的免疫原性組合物。示例性賦形劑包括維持蛋白質的穩定性和完整性的稀釋劑和載體。用於治療劑的賦形劑是公知的，並且描述於例如Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(Gennaro,第21版，MackPub.C0.，Easton,PA(2005))，和更詳細地描述於本申請中。[0053]免疫原可與指定抗原相同，即，免疫原包含指定抗原的示例性全長胺基酸序列，或可包括與示例性全長指定抗原共有高度百分比同一性並且保持指定抗原的功能特徵，例如誘導特定免疫反應的能力的其變體。或者，免疫原可以是指定抗原的免疫原性片段。作為指定抗原的變體或片段的免疫原顯示以統計上、臨床上和/或生物學上顯著的方式誘導受試者的免疫反應(例如，體液反`應(即，B細胞反應)或細胞介導的反應(即，T細胞反應(包括細胞毒性T淋巴細胞反應))或體液和細胞介導的反應的能力。指定的目標抗原以及其指定抗原的免疫原性片段和免疫原性變體更詳細地描述於本申請中。[0054]關於包含至少一種分離的/重組的免疫原的免疫原性組合物，免疫原可以是已按照分子生物學和蛋白質分離領域中常規實施的方法在宿主細胞中重組地產生，隨後從宿主細胞分離或從宿主細胞培養物分離(即，從其原始宿主細胞環境取出)的多肽或肽。當按照本申請中和本領域中描述的並且本領域技術人員熟悉的方法重組產生免疫原時，免疫原可稱為重組免疫原。或者，免疫原可從天然來源例如病毒、細菌、寄生蟲、真菌或腫瘤細胞分離或取出。用於從天然來源分離一種或多種免疫原和抗原的方法描述於本領域中，並且還可由本領域技術人員使用本領域中常規實施的方法和技術來容易地憑經驗進行測定。[0055]如本申請中所述，包含在第二免疫原性組合物的重組表達載體包含編碼至少一種免疫原的核苷酸序列(在本申請中也稱為多肽序列)。重組表達載體還包含至少一個有效地連接至編碼核苷酸序列的調控序列，以便載體能夠指導免疫原的表達。通過重組表達載體編碼和表達的免疫原可與指定抗原相同，即，免疫原包含指定抗原的示例性全長胺基酸序列，或可包括與示例性全長指定抗原共有高百分比的同一性並且保持指定抗原的功能性特徵，例如誘導特定免疫反應的能力的其變體。或者，編碼的免疫原可以是指定抗原的免疫原性片段。為指定抗原的變體或片段的免疫原顯示以統計學上、臨床上和/或生物學上顯著的方式誘導受試者的免疫反應(例如，體液反應(即，B細胞反應)或細胞介導的反應(即，T細胞反應(包括細胞毒性T淋巴細胞反應))或體液和細胞介導的反應的能力。指定的目標抗原以及指定抗原的免疫原性片段和免疫原性變體更詳細地描述於本申請中。[0056]在某些實施方案中，將重組表達載體整合進入載體顆粒(例如，病毒載體顆粒或細胞顆粒)。以使得顆粒能夠被引入(即，遞送至)靶細胞的方式構建包含載體的重組表達載體或載體顆粒。在某些實施方案中，靶細胞是抗原呈遞細胞。在更具體的實施方案中，靶細胞是專職抗原呈遞細胞例如樹突細胞。隨後在靶細胞中表達免疫原，免疫原或其片段呈現於抗原呈遞細胞的表面上，並且誘導對於免疫原是特異性(從而對於各自指定抗原是特異性)的免疫反應。[0057]在其它實施方案中，包含至少一種分離的/重組的免疫原(並且其還可包含佐劑)的免疫原性組合物還可包含至少一種另外的免疫原(即，至少2、3、4、5或更多種免疫原，其可被重述為2、3、4、5或更多種免疫原))。在某些實施方案中，免疫原性組合物可包含兩種或更多種分離的/重組的免疫原(即，至少兩種免疫原)，從而形成多價免疫原性組合物。在當將兩種或更多種免疫原與佐劑組合的情況下，免疫原性組合物可包含單獨地用佐劑配製的每一種免疫原，隨後將佐劑化的免疫原組合以形成免疫原性組合物。或者，將兩種或更多種免疫原與佐劑一起配製。在某些具體實施方案中，另外的免疫原(例如，第二、第三等免疫原)的每一種可誘導針對與第一免疫原相同的指定抗原的免疫反應。在其它具體實施方案中，另外的免疫原(例如，第二、第三等免疫原)的每一種可分別誘導對於不同的(例如，第二、第三等)指定抗原是特異性的免疫反應。[0058]在某些替代性實施方案中，多價免疫原性組合物可包含細胞裂解物、細胞器或包括至少兩種免疫原的細胞上清液。例如，從它們的原始環境取出的免疫原，例如從微生物獲得的免疫原可與微生物部分地分離，以便兩種或更多種免疫原存在於免疫原性組合物中。類似地，從腫瘤細胞獲得的免疫原可與腫瘤細胞部分地分離，以便兩種或更多種腫瘤相關抗原存在於免疫原性組合物中。[0059]關於包含重組表達載體的免疫原性組合物，核苷酸序列可編碼超過一種免疫原，例如至少2、3、4、5或更多種免疫原(即，2、3、4、5或更多種免疫原)。在某些具體實施方案中，額外免疫原(例如，第二、第三等免疫原)的每一種可誘導針對與第一免疫原相同的指定抗原的免疫反應。在其它具體實施方案中，另外的免疫原(例如，第二、第三等免疫原)的每一種可分別誘導對於不同的(例如，第二、第三等)指定抗原是特異性的免疫反應。[0060]在具體實施方案中，包含至少一種分離的/重組的免疫原的一種免疫原性組合物(也稱為第一免疫原性組合物)(並且所述組合物還可包含佐劑)能夠誘導對於免疫原是特異性，從而對於指定抗原是特異性的CD4T細胞反應，以及還可誘導針對免疫原和指定抗原的體液反應(即，特異性抗體反應或抗原-特異性抗體反應)。包含含有編碼免疫原的核苷酸序列的重組表達載體的其它免疫原性組合物(或第二免疫原性組合物)能夠誘導對於免疫原是特異性的CD8T細胞反應，從而能夠誘導對於指定抗原是特異性的CD8T細胞反應。如在本申請中更詳細地描述的，免疫原具有一個或多個包含能夠誘導對於免疫原是特異性的CD4T細胞反應和CD8T細胞反應的表位的免疫原性區域。[0061]在其它具體實施方案中，提供了免疫原性製劑，其中包含至少一種分離的/重組的免疫原(為方便起見稱為第一免疫原)的第一免疫原性組合物還可包含至少一種另外的分離的/重組的免疫原。在其它實施方案中，包含在第二不同的免疫原性組合物中的重組表達載體可編碼第一免疫原和編碼至少一種另外的免疫原。在其它可替代性實施方案中，第一免疫原性組合物包含至少兩種分離的/重組的免疫原並且第二免疫原性組合物包含含有編碼第一免疫原的核苷酸序列的表達載體和至少一種另外的免疫原。[0062]在某些實施方案中，當期望引物對於兩種或更多種免疫原是特異性的免疫反應時，至少一種免疫原能夠誘導包括至少一種特定體液和/或⑶4T細胞反應的免疫反應並且至少一種另外的免疫原能夠誘導包括至少一種特異性⑶8T細胞免疫反應的免疫反應。因此，在本申請的一個實施方案中提供了免疫原性製劑，其包含(a)含有第一分離的/重組的免疫原的免疫原性組合物(其可被稱為第一免疫原性組合物)(所述組合物還可包含佐劑)和(b)包含編碼和指導第一免疫原和第二免疫原的表達的重組表達載體的第二免疫原性組合物，其中至少第二免疫原能夠誘導特異性⑶8T細胞反應。在某些實施方案中，至少兩種免疫原的每一種具有誘導針對相同指定抗原的免疫反應。或者，至少兩種免疫原的每一種具有誘導對於不同抗原(為方便起見，也分別稱為第一和第二指定抗原)是特異性的免疫反應的能力。_3]免疫原和指定抗原[0064]用於本申請中描述的方法和用途的免疫原(其可以是包含在一種免疫原性組合物中的分離的和/或重組的免疫原和/或由包含在第二免疫原性組合物中的重組表達載體編碼的)包括期望針對其誘導特定的免疫反應的任何免疫原。在某些實施方案中，免疫原包含指定的目標抗原的示例性全長胺基酸序列，或免疫原可以是各自的指定抗原的免疫原性片段。在其它某些實施方案中，免疫原可包括指定抗原的變體，所述變體與示例性全長指定抗原共有高百分比同一性並且顯示與包含示例性氨基序列的指定抗原大體上相同水平的免疫原性(即，變體保持相較於示例性或野生型抗原的免疫原性達到統計學上、臨床上和/或生物學上顯著的程度的免疫原性的水平)。具體地，作為指定抗原的免疫原性片段或變體的免疫原以統計學上、臨床上或生物學上顯著的方式保持誘導受試者的體液免疫反應(即，B細胞反應導致特定抗體的表達)或細胞介導的反應(即，CD4T細胞反應和/或CD8T細胞反應，包括細胞毒性T淋巴細胞反應))或體液和細胞介導的反應的能力。指定的目標抗原及其免疫原性片段和免疫原性變體更詳細地描述於本申請中。[0065]如本申請中更詳細描述的，免疫原包含至少一個能夠誘導受試者的對於指定抗原是特異性的免疫反應的免疫原性區域或免疫原性表位。在一個具體實施方案中，免疫原包含一個或多個免疫原性區域以便免疫原能夠誘導抗體反應、CD4T細胞反應和CD8T細胞反應的任一種或多種，其中每一個反應對於免疫原是特異性的，從而對於各自指定抗原是特異性的。因此，免疫原性區域包含至少一個誘導抗體反應、⑶4T細胞反應和⑶8T細胞反應的一種或多種的表位(即，一個或多個表位)。[0066]細胞介導的免疫反應包括細胞毒性T淋巴細胞反應，所述反應可破壞或損害產生或表達免疫原或各自指定抗原的細胞(例如，腫瘤細胞、細菌細胞、病毒、寄生蟲或真菌細胞)或感染性顆粒(例如，病毒顆粒)。與疾病或障礙相關的任何抗原(針對所述抗原的體液反應或細胞介導的免疫反應或兩者對於免疫的受試者是有益的)可用作免疫原。[0067]與許多疾病和障礙相關的抗原在本領域是公知的。目標抗原(即，指定抗原)先前可能已知與疾病或障礙相關，或可被本領域中已知和實施的任何方法鑑定為與疾病或障礙相關的抗原。例如，與患者所遭受的癌症類型相關的抗原可以是已知的，例如腫瘤相關抗原，或可通過本領域中實施的多種方法的任一種從腫瘤本身鑑定。在某些實施方案中，指定抗原是來源於癌細胞(例如，腫瘤細胞)的腫瘤相關抗原(在本申請中也稱為腫瘤抗原)，一種或多種此類腫瘤抗原可用於癌症的免疫治療性治療。以非限定性實例為例，腫瘤相關抗原可來源於前列腺癌、乳腺癌、結直腸癌、肺癌、前列腺癌、腎癌、間皮癌、卵巢癌或黑色素瘤癌。此類和另外的腫瘤相關抗原是如本申請中和本領域中所描述的。[0068]在某些實施方案中，免疫原包括作為指定抗原和來源於腫瘤或惡性腫瘤的全長蛋白質。在其它某些實施方案中，免疫原包含一種或多種包含一個或多個來自此類蛋白質的表位的免疫原性片段。在其它實施方案中，免疫原包括包含全長指定抗原或包含來源於腫瘤細胞的指定抗原的1、2、3或更多個免疫原性片段的融合多肽。在其它實施方案中，當免疫原性組合物被製備用於誘導抗兩種或更多種指定抗原的免疫反應時，融合多肽可包括兩種或更多種指定抗原的每一種的全長抗原或其一個或多個免疫原性片段的任意組合。例如，融合多肽可包含獲自一種腫瘤相關抗原的一個或多個免疫原性片段並且還可包含獲得第二不同的腫瘤相關抗原的一個或多個免疫原性片段。除了免疫原性多肽或肽以外，融合蛋白還可包含至少一種多肽或肽，所述多肽或肽在免疫學領域有時稱為載體蛋白，其增強對目標免疫原的免疫反應。[0069]示例性腫瘤相關抗原或腫瘤細胞來源的抗原包括MAGE1，3和MAGE4(或其它MAGE抗原例如國際專利申請公布N0.W099/40188中公開的那些抗原)；PRAME；BAGE；RAGE,Lage(也稱為NYES01)；SAGE；和HAGE(參見，例如，國際專利申請公布N0.W099/53061)或GAGE(Robbins等人，Curr.0pin.1mmunol.8:628-36(1996)；VandenEynde等人，Int.J.Clin.Lab.Res.27:81-86(1997)；VandenEynde等人，Curr.0pin.1mmunol.9:648-93(1997);Correale等人，J.Natl.CancerInst.89:293(1997))。腫瘤抗原的這類非限定性實例在許多腫瘤類型例如黑色素瘤、肺癌、肉瘤和膀胱癌中表達。參見，例如，美國專利N0.6，544，518。前列腺癌腫瘤相關抗原包括例如前列腺特異性膜抗原(PSMA)、前列腺特異性抗原(PSA)、前列腺酸性磷酸鹽、NKX3.1和前列腺的6跨膜上皮細胞抗原(STEAP)(Hubert等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA9614523-28,1999);也參見，例如，Reiter等人，Proc.Nat.Acad.Sc1.USA95:1735-40，1998;Nelson等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA96:3114-19(1999)；W098/12302;美國專利N0.5，955，306;5，840，871和5，786，148;國際專利申請公布N0.W098/20117；W000/04149;W098/137418)。[0070]其它腫瘤相關抗原包括Plu-1(J.Biol.Chem.274:15633-45，1999)、HASH-1、HasH-2、Cripto(Salomon等人，Bioessaysl99,21:61-70;美國專利5，654，140)和Criptin(美國專利N0.5，981，215)。此外，腫瘤抗原可以是用於治療許多癌症的自身肽激素例如全長促性腺激素釋放激素(GnRH，國際專利申請公布N0.W095/20600)、短的10個胺基酸長的妝。[0071]腫瘤抗原包括來源於特徵在於腫瘤相關抗原表達例如HER-2/neu表達的癌症的腫瘤抗原。目標腫瘤相關抗原包括譜系特異性腫瘤抗原例如黑色素細胞-黑素瘤譜系抗原MART-l/Melan-A、gplOO、gp75、mda_7、酪氨酸酶和酪氨酸酶相關蛋白。說明性腫瘤相關抗原包括但不限於來源於如下抗原的任一種或多種或包含如下抗原的任一種或多種的腫瘤抗原:p53、Ras,c-Myc、細胞質絲氨酸/蘇氨酸激酶(例如，A-Raf、B-Raf和C-Raf、細胞周期蛋白質依賴激酶)、MAGE-A1、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A6、MAGE-AIO、MAGE-A12、MART-1、BAGE、DAM-6、-10、GAGE-1、-2、-8、GAGE-3、-4、-5、-6、-7B、NA88-A、MART-1、MC1R、Gpl00、PSA、PSM、酪氨酸酶、TRP-l、TRP-2、ART-4、CAMEL、CEA、Cyp-B、hTERT、hTRT、iCE、MUCl、MUC2、磷酸肌醇酯3-激酶(P13K)、TRK受體、PRAME、P15、RU1、RU2、SART-1、SART-3、WiIms』腫瘤抗原(WTl)、AFP、-連環蛋白/m、半胱天冬酶-8/m、CEA、CDK-4/m、ELF2M、GnT-V,G250、HSP70-2M、HST-2、KIAA0205、MUM-1、MUM-2、MUM-3、肌球蛋白/m、RAGE、SART-2、TRP-2/INT2、707-AP、膜聯蛋白I1、CDC27/m、TPI/mbcr-abl、BCR-ABL、幹擾素調節因子4(IRF4)、ETV6/AML、LDLR/FUT、Pml/RAR、腫瘤相關鈣信號轉導蛋白I(TACSTD1)TACSTD2、受體酪氨酸激酶(例如，表皮生長因子受體(EGFR)(特別地，EGFRvIII)、血小板衍生生長因子受體(TOGFR)、血管內皮生長因子受體(VEGFR))、細胞質酪氨酸激酶(例如，src-家族、syk-ZAP70家族)、整聯蛋白連接的激酶(ILK)、信號轉導蛋白和轉錄激活子STAT3、STAT5和STAT6、缺氧誘導因子(例如，HIF-1.和HIF-2)、細胞核因子-KB(NF-B)、Notch受體(例如，Notchl-4)、c-Met、雷帕黴素的哺乳動物祀(mammaliantargetsofrapamycin)(mTOR)、WNT、細胞外信號調節激酶(ERK)及其調節亞基、PMSA,PR-3、MDM2、間皮素、腎細胞癌-5T4、SM22-α、碳酸酐酶I(CAI)和IX(CAIX)(也稱為G250)、STEAD、TEL/AML1、GD2、蛋白酶3、hTERT、肉瘤易位斷裂點、EphA2、ML-1AP,EpCAM,ERG(TMPRSS2ETS融合基因)、NA17、PAX3、ALK、雄激素受體、細胞周期蛋白81、多唾液酸、1^^、1^0(:、0)3、巖藻糖基611、間皮素(mesothelian)、PSCA、sLe、PLACl、GM3、BORIS、Τη、GLoboH、NY-BR-1、RGs5、SART3、STn、PAX5、0Y-TES1、精子蛋白17、LCK,miWMAA、AKAP-4、SSX2、XAGEl、B7H3、legumain、TIE2、Page4、MAD-CT-UFAP,MAD-CT-2、fos相關抗原I和獨特型(idiotype)。[0072]免疫原還包括包含表位區或表位肽的腫瘤抗原，所述表位區或表位肽來源於腫瘤細胞中突變的基因或來源於腫瘤細胞中相較於正常細胞以不同水平轉錄的基因例如端粒酶、存活素、間皮素、突變的·ras、bcr/abl重排、Her2/neu、突變型或野生型p53、細胞色素P4501B1和異常表達的內含子序列例如N-乙醯葡糖氨基轉移酶-V;在黑色素瘤和B細胞淋巴瘤中產生獨特的獨特型的免疫球蛋白的克隆性重排；包含來源於腫瘤病毒過程的表位區或表位肽的腫瘤抗原，例如人乳頭狀瘤病毒蛋白E6和E7;愛潑斯坦巴爾病毒蛋白LMP2;具有腫瘤選擇性表達的非突變型癌胚胎蛋白質例如癌胚抗原和甲胎蛋白。也參見Boon等人，Ann.Rev.Tmmunol.12:337-65(1994);Renkvist等人,CancerTmmunol.1mmunother.50:3-15(2001)。[0073]在其它實施方案中，免疫原分離自或來源於病原微生物或來自條件致病性微生物(在本申請中也稱為感染性疾病微生物)，例如病毒、真菌、寄生蟲和細菌。在某些實施方案中，來源於這樣的微生物的免疫原包括為選擇的指定抗原的全長蛋白質。在其它某些實施方案中，免疫原包括一種或多種包含一個或多個來自這樣的蛋白質的表位的免疫原性片段。在其它實施方案中，免疫原包含含有來源於微生物的蛋白質的1、2或更多個免疫原性片段的融合多肽。在其它實施方案中，免疫原包括含有全長指定抗原或含有來源於微生物的指定抗原的1、2、3或更多個免疫原性片段的融合多肽。在其它實施方案中，當免疫原性組合物被製備用於誘導抗感染性疾病微生物的2或更多個指定抗原的免疫反應時，融合多肽可包含兩種或更多種指定抗原的每一種的全長抗原或其一個或多個免疫原性片段的任意組合。例如，融合多肽可包含一個或多個獲自一種微生物抗原(即，病毒、細菌、寄生蟲或真菌抗原)的一個或多個免疫原性片段，並且還可包含獲自第二不同的微生物抗原(即，第二不同的病毒、細菌、寄生蟲或真菌抗原)的一個或多個免疫原性片段。除了免疫原性多肽或肽以外，融合蛋白還可包含至少一個有時在免疫學領域中稱為載體蛋白的增強針對目標免疫原的免疫反應的多肽或肽。[0074]其抗原預期為用於本申請中描述的免疫原性組合物的指定抗原和免疫原並且由本申請中描述的載體和載體顆粒編碼的舉例說明性病原微生物包括人免疫缺陷病毒(HIV)、單純皰疹病毒(HSV)、呼吸道合胞病毒(RSV)、巨細胞病毒(CMV)、愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)、A、B和C型流感病毒、水皰性口炎病毒(VSV)、水皰性口炎病毒(VSV)、包括抗甲氧西林金黃色葡萄球菌(Methicillin-resistantStaphylococcusaureus)(MRSA)的葡萄球菌屬(Staphylococcus)物種和包括肺炎鏈球菌(Streptococcuspneumoniae)的鏈球菌屬(Streptococcus)物種。如本領域技術人員可理解的,來源於這類和其它病原微生物的用作本申請中描述的免疫原的蛋白質在本領域是已知的並且此類蛋白質(及其種類)的胺基酸序列和編碼所述蛋白質的核苷酸序列可在出版物和公共資料庫例如GENBANK、Swiss-Prot和TrEMBL中得以鑑定。[0075]可以為免疫原並且如本申請中所述使用的來源於人免疫缺陷病毒(HIV)的抗原包括HIV病毒體結構蛋白(例如，gpl20、gp41、pl7、p24)、蛋白酶、逆轉錄酶或由tat、rev、nef、vif、vpr和vpu編碼的HIV蛋白的任一種。HIV蛋白及其免疫原性片段對於本領域技術人員來說是公知的，並且可見於許多公共資料庫的任何資料庫(參見，例如，Vider-Shalit等人，AIDS23(11):1311-18(2009)；ffatkins,Mem.1nst.0swaldoCruz.103(2):119-29(2008);Gao等人，ExpertRev.Vaccines(4Suppl):S161-68(2004))。(也參見，例如，Klimstra等人，2003.J.Virol.77:12022-32;Bernard等人，Virology276:93-103(2000)；Byrnes等人，J.Virol.72:7349-56(1998)；Lieberman等人，AIDSResHum.Retroviruses13(5):383-92(1997);Menendez_Arias等人，ViralImmunol.11(4):167-181(1998)。[0076]預期用作本申請中描述的組合物的免疫原並且由本申請中描述的載體和載體顆粒編碼的來源於單純皰疹病毒的抗原(例如，HSVl和HSV2)包括但不限於從HSV晚期基因表達的蛋白質。後一組基因主要編碼形成病毒體顆粒的蛋白質。此類蛋白質包括從其形成病毒衣殼的5種蛋白質(UL):UL6、UL18、UL35、UL38和大衣殼蛋白UL19、UL45和UL27,其各自可用作本申請中描述的免疫原(參見，例如，McGeoch等人，VirusRes.117:90-104(2006);Mettenleiter等人，Curr.0pin.Microbiol.9:423-29(2006))?其它預期在本申請中用作免疫原的舉例說明性HSV蛋白包括ICP27(H1，H2)、糖蛋白B(gB)和糖蛋白D(gD)。HSV基因組包括至少74個基因，每一個基因編碼可潛在地用作誘導T細胞反應(包括CTL反應)、B細胞反應或CTL反應和B細胞反應的免疫原的蛋白質。[0077]人(參見，例如，Corey等人，「GenitalHerpes,」SexuallyTransmittedDiseases,Holmes等人,編(McGraw-Hill,NewYork,1999)285-312)和動物模型(參見，例如，Parr等人，J.Virol.72:2677(1998))中抗HSV-2的保護性免疫反應表明適當的HSV-2疫苗製劑是期望的和可獲得的目標。在過去40年中，在美國和歐洲已進行了一系列使用失活的完整HSV製劑和利用佐劑配製的亞單位HSV蛋白的HSV疫苗人試驗。雖然對於這類疫苗在一些短期研究中觀察到適度的治療效果，但來自具有更長的隨訪窗口的適當地受控試驗的結果一直以來令人十分失望(參見，例如，Rajcani等人，FoliaMicrobiol.(Praha)51:67(2006))ο[0078]在歐洲，在1960年代和1970年代，利用甲醛滅活的HSV(EliLilly試驗)或熱滅活的HSV(LupidonH試驗)進行了大型臨床試驗。雖然報導了HSV復發的嚴重度和頻率的改善，但僅有小亞組的這些試驗採用安慰劑對照和雙盲試驗。此外，這類疫苗不賦予長期治療效果。1980年代的母-胎HSV-2傳播研究顯示HSV-2血清陽性婦女的嬰兒相對於近期獲得HSV-2的婦女的嬰兒具有更低的傳播風險，這表明抗HSV-2糖蛋白gD和gB的中和抗體(nAb)可賦予保護作用(參見，例如，Koelle等人,Clin.Microbiol.Rev.16:96(2003))。在1990年代由美國的Glaxo-SmithKline和Chiron設計來產生抗此類HSV-2糖蛋白的nAb的試驗測試了具有單獨的gD或具有利用3種不同佐劑:明礬、MF-59(水包油)和單磷醯脂質A(MPL)配製的gB的重組亞單位疫苗。這類疫苗引發或加強血清陰性個體的HSV-2特異性nAb和HSV-1血清陽性個體的交叉反應性nAb(參見，例如，Burke,Rev.1nfect.Dis.13Supplll:S906-S911(1991))。然而，儘管達到目標水平的體液免疫原性，但此類疫苗在男人中未顯示治療效果並且在女人中僅顯示短暫的療效，這表明抗-HSVnAb是不足的並且成功的HSV疫苗將可能需要產生有效力的T細胞免疫(參見，例如，Corey等人，JAMA282:331(1999)；Stanberry等人，N.Engl.J.Med.347:1652(2002))。[0079]先前進行的HSV疫苗試驗表明nAb可能不足以保護人免受HSV-2感染，數據表明HSV-2特異性T細胞在減少病毒的獲取、傳播和再激活中起著至關重要的作用(參見，例如，Corey等人，JAMA(1999)，同上)。例如，在T細胞功能上具有缺陷的個體具有延長的更嚴重的HSV-2感染的發作，並且在HSV-2損傷的縱向活組織檢查研究中，病毒清除與CD8T細胞的滲入相關(參見，例如，Koelle等人，J.Clin.1nvest.101:1500(1998))。另外的HSV研究已顯示:1型輔助T細胞(Thl)反應在動物模型中具有保護性(參見,例如,Koelle等人，J.1mmunol.166:4049(2001);Zhu等人，J.Exp.Med.204:595(2007))。HSV-2再活化的嚴重度和頻率與HSV特異性T細胞的頻度反相關，並且HSV-2特異性CTL至生殖器損傷的滲入與病毒清除相關(參見，例如，Koelle等人,J.1nfect.Dis.169:956(1994);Koelle等人,J.Clin.1nvest.110:537(2002)；Koelle等人，J.Clin.1nvest.(1998)，同上)。這些發現與來自牽涉黏膜HSV-2清除中CD8和ThlCD4T細胞反應的亞單位疫苗研究的數據一致(參見，例如，Posavad等人，Nat.Med.4:381(1998))。此外，在生殖器皰疹消退後在真皮表皮接合部長期檢測到HSV-2-特異性CD8T細胞(參見，例如，Cattamanchi等人，Clin.VaccineImmunol.15:1638(2008))。[0080]預期用於本申請中描述的現有免疫原性組合物和方法的某些實施方案中的來源於巨細胞病毒(CMV)的抗原包括CMV結構蛋白、在病毒複製的立即早期和早期中表達的病毒抗原、糖蛋白I和II1、衣殼蛋白、外殼蛋白、低基質蛋白PP65(PPUL83)、p52(ppUL44)、El和IE2(UL123和UL122)、來自來自UL128-UL150的基因簇的蛋白質產物(Rykman等人，J.Virol.2006Jan；80(2):710-22)、包膜糖蛋白B(gB)、gH、gN和ppl50。如由本領域技術人員理解的，用作本申請中描述的免疫原的CMV蛋白可在公共資料庫例如GenBank、Swiss-Prot和TrEMBL中被鑑定(參見例如，Bennekov等人，Mt.SinaiJ.Med.71(2):86-93(2004)；Loewendorf等人，J.1ntern.Med.267(5):483-501(2010)；Marschall等人，FutureMicrobiol.4:731-42(2009))。[0081]預期用於某些實施方案的來源於愛潑斯坦巴爾病毒(EBV)的抗原包括EBV裂解蛋白gp350和gpllO、在潛伏周期感染過程中產生的EBV蛋白(包括愛潑斯坦巴爾核抗原(EBNA)-l、EBNA-2、EBNA-3A、EBNA-3B、EBNA-3C、EBNA-前導蛋白(EBNA-LP)和潛伏膜蛋白(LMP)-ULMP-2A和LMP-2B)(參見，例如，Lockey等人，Front.Biosc1.13:5916-27(2008))。[0082]預期用作本申請中描述的免疫原的來源於呼吸道合胞病毒(RSV)的抗原包括由RSV基因組編碼的11種蛋白質的任一種或其免疫原性片段:NS1、NS2、N(核殼體蛋白)、M(基質蛋白)SH、G和F(病毒衣殼蛋白)、M2(第二基質蛋白)、M2-1(延伸因子)、M2-2(轉錄調節)、RNA聚合酶和磷蛋白P。[0083]預期用作免疫原的來源於水皰性口炎病毒(VSV)的抗原包括由VSV基因組編碼的5種主要蛋白質的任一種及其免疫原性片段:大蛋白質(L)、糖蛋白(G)、核蛋白(N)、磷蛋白(P)和基質蛋白(M)(參見，例如，Rieder等人，J.1nterferonCytokineRes.(2009)(9):499-509!Roberts等人，Adv.VirusRes.(1999)53:301-19)。[0084]預期用於某些實施方案的來源於流感病毒的抗原包括血凝素(HA)、神經氨酸酶(NA)、核蛋白(NP)、基質蛋白Ml和M2、NSUNS2(NEP)、PA、PBUPB1-F2以及PB2。參見例如，Nature437(7062):1162-66。[0085]作為病毒抗原的免疫原的實例還包括但不限於腺病毒多肽、甲病毒多肽、杯狀病毒多肽(例如，杯狀病毒衣殼抗原)、冠狀病毒多肽、溫熱病病毒多肽、伊波拉病毒多肽、腸病毒多肽、黃病毒多肽、肝炎病毒(AE)多肽(B型肝炎病毒核心或表面抗原、C型肝炎病毒El或E2糖蛋白、核心或非結構蛋白質)、皰疹病毒多肽(如本申請中論述的，包括單純皰疫病毒或水痘帶狀皰疫病毒糖蛋白)、感染性腹膜炎病毒多肽、白血病病毒多肽、馬爾堡病毒多肽、正粘病毒多肽、乳頭狀瘤病毒多肽、副流感病毒多肽(例如，血凝素和經氨酸酶多肽)、副粘病毒多肽、細小病毒多肽、痕病毒多肽、微小RNA病毒多肽(例如，脊髓灰質炎病毒衣殼多肽)、痘病毒多肽(例如，痘苗病毒多肽)、狂犬病病毒多肽(例如，狂犬病病毒糖蛋白G)、裡奧病毒多肽、逆轉錄病毒多肽和輪狀病毒多肽。[0086]在某些實施方案中，細胞抗原可被選擇作為指定抗原，並且細菌抗原或其免疫原性片段或變體可用作免疫原。在某些實施方案中，目標細菌抗原可以是分泌的多肽。在其它某些實施方案中，可用作誘導免疫反應的免疫原的細菌抗原包括具有在細菌的外細胞表面上表達的多肽的一部分或多部分的抗原。在細胞表面上表達的多肽免疫苗原的部分對於宿主中的免疫細胞和/或抗體是可及的，因而可以是由重組表達載體編碼的有用的免疫原，並且包含在含有本申請中描述的免疫原的免疫原性組合物(其還可包含佐劑)中。[0087]預期用作免疫原的來源於葡萄球菌屬物種(包括抗甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA))的抗原包括毒性介質例如Agr系統、Sar和Sae、Arl系統、Sar同源物(Rot、MgrA、SarS、SarR、SarT、SarU、SarV、SarX、SarZ和TcaR)、Srr系統和TRAP。可用作免疫原的其它葡萄球菌屬蛋白質包括Clp蛋白、HtrA、MsrR、順烏頭酸酶、CcpA、SvrA、Msa、CfvA和CfvB(參見，例如，葡萄球菌屬:MolecularGenetics,2008CaisterAcademicPress,Ed.JodiLindsay)。金黃色葡萄球菌的兩個物種(N315和Mu50)的基因組已進行了測序，並且是可以例如在PATRIC(PATRIC:TheVBIPathoSystemsResourceIntegrationCenter,Snyder等人，NucleicAcidsRes.(2007)35=401-406)中公共獲得的。如本領域技術人員可理解的，用作免疫原的葡萄球菌屬蛋白質還可在其它公共資料庫例如GenBank、Swiss-Prot和TrEMBL中被鑑定。[0088]預期在本申請中描述的某些實施方案中用作免疫原的來源於肺炎鏈球菌的抗原包括肺炎球菌溶血素(pneumolysin)、PspA、膽鹼結合蛋白A(CbpA)、NanA>NanB>SpnHL>PavA、LytA、Pht和菌毛蛋白(RrgA；RrgB；RrgC)。肺炎鏈球菌的免疫原性蛋白在本領域也是已知的並且預期用作免疫原(參見，例如，Zysk等人，Infect.1mmun.200068(6):3740-43)。肺炎鏈球菌的強毒株的完整基因組序列已被測序(參見，例如，TettelinH等人，Science(2001)293(5529):498-506)並且，如本領域技術人員所理解的，用於本申請中描述的組合物的肺炎鏈球菌(S.pneumoniae)蛋白還可在其它公共資料庫例如GenBank、Swiss-Prot和TrEMBL中被鑑定。用於根據本公開內容的免疫原的特定目標蛋白質包括預測在肺炎雙球菌的表面上表達的毒力因子(virulencefactor)和蛋白質(參見,例如，Tettelin等人，同上；Frolet等人，BMCMicrobiol.(2010)Jull2;10:190；Rigden等人，Crit.Rev.Biochem.Mo1.Biol.(2003)38(2):143-68；Jedrzejas,Microbiol.Mo1.Biol.Rev.(2001)65(2):187-207)。[0089]可用作免疫原的細菌抗原的實例包括但不限於放線菌屬(Actinomyces)多肽、芽孢桿菌屬(Bacillus)多肽、擬桿菌屬(Bacteroides)多肽、博德特菌屬(Bordetella)多肽、巴爾通體屬(Bartonella)多肽、疏螺旋體屬(Borrelia)多肽(例如，博氏疏螺旋體(B.burgdorferi)OspA)、布魯氏菌屬(Brucella)多妝、彎曲桿菌屬(Campylobacter)多肽、二氧化嗜纖維菌屬(Capnocytophaga)多肽、衣原體屬(Chlamydia)多肽、棒桿菌屬(Corynebacterium)多肽、考克斯體屬(Coxiella)多肽、嗜皮菌屬(Dermatophilus)多肽、腸球菌屬(Enterococcus)多肽、埃立克體屬(Ehrlichia)多肽、埃希氏菌屬(Escherichia)多肽、弗朗西斯氏菌屬(Fra·ncisella)多肽、梭桿菌屬(Fusobacterium)多肽、支原體屬(Haemobartonella)多肽、嗜血菌屬(Haemophilus)多肽(例如，乙型流感嗜血桿菌(H.1nfluenzaetypeb)外膜蛋白)、螺桿菌屬(Helicobacter)多肽、克雷伯氏菌屬(Klebsiella)多肽、L型細菌(L-formbacteria)多肽、鉤端螺旋體屬(Leptospira)多肽、利斯特菌屬(Listeria)多肽、分枝桿菌屬(Mycobacteria)多肽、支原體屬(Mycoplasma)多肽、奈瑟球菌屬(Neisseria)多肽、新立克次體屬(Neorickettsia)多肽、諾卡爾菌屬(Nocardia)多肽、巴斯德氏菌屬(Pasteurella)多肽、消化球菌屬(Peptococcus)多肽、蛋白腖鏈球菌屬(Peptostreptococcus)多肽、肺炎球菌多肽(即，肺炎鏈球菌(S.pneumonia)多肽)(參見本申請所述的)、變形桿菌屬(Proteus)多肽、假單胞細菌屬(Pseudomonas)多肽、立克次體屬(Rickettsia)多肽、羅沙利馬體屬(Rochalimaea)多肽、沙門菌屬(Salmonella)多肽、志賀菌屬(Shigella)多肽、葡萄球菌屬(Staphylococcus)多肽、A組鏈球菌屬(groupAstreptococcus)多肽(例如，化膿性鏈球菌(S.pyogenes)M蛋白)、B組鏈球菌(groupBstreptococcus)(無乳鏈球菌(S.agalactiae))多肽、密螺旋體屬(Treponema)多肽、和耶爾森氏菌屬(Yersinia)多肽(例如，鼠疫耶爾森氏菌Fl(Y.pestisFl)和V抗原(Vantigens))。[0090]可以為免疫原的真菌抗原的實例包括但不限於犁頭黴屬(Absidia)多肽、支頂孢屬(Acremonium)多肽、鏈格孢屬(Alternaria)多肽、麴黴菌屬(Aspergillus)多肽、娃糞黴菌屬(Basidiobolus)多肽、雙極黴屬(Bipolaris)多肽、芽生菌屬(Blastomyces)多肽、假絲酵母屬(Candida)多肽、球孢子菌屬(Coccidioides)多肽、耳黴屬(Conidiobolus)多肽、隱球菌屬(Cryptococcus)多肽、彎孢菌屬(Curvalaria)多肽、表皮癖菌屬(Epidermophyton)多肽、外小杯菌(Exophiala)多肽、地絲菌屬(Geotrichum)多肽、組織胞眾菌屬(Histoplasma)多肽、馬杜拉分枝菌屬(Madurella)多肽、馬拉色黴菌屬(Malassezia)多肽、小孢子菌屬(Microsporum)多肽、小叢梗孢屬(Moniliella)多肽、被孢黴菌(Mortierella)多肽、毛黴菌屬(Mucor)多肽、擬青黴屬(Paecilomyces)多肽、青黴屬(Penicillium)多肽、單胞瓶黴屬(Phialemonium)多肽、瓶黴菌屬(Phialophora)多肽、原壁菌屬(Prototheca)多肽、假黴樣真菌屬(Pseudallescheria)多肽、假小託菌屬(Pseudomicrodochium)多妝、腐黴菌屬(Pythium)多妝、鼻抱子菌屬(Rhinosporidium)多肽、根黴菌屬(Rhizopus)多肽、線狀擔子菌屬(Scolecobasidium)多肽、孢子絲菌屬(Sporothrix)多肽、匍柄黴屬(Stemphylium)多肽、發癖菌屬(Trichophyton)多肽、毛孢子菌屬(Trichosporon)多肽和木絲黴屬(Xylohypha)多肽。[0091]原生動物寄生蟲抗原的實例包括但不限於巴貝蟲屬(Babesia)多肽、腸袋蟲屬(Balantidium)多肽、貝諾孢子蟲屬(Besnoitia)多肽、隱孢子蟲屬(Cryptosporidium)多肽、艾美蟲屬(Eimeria)多肽、腦胞內原蟲屬(Encephalitozoon)多肽、內阿米巴屬(Entamoeba)多肽、賈第蟲屬(Giardia)多肽、哈蒙德蟲屬(Hammondia)多肽、肝簇蟲屬(Hepatozoon)多肽、等孢子球蟲屬(Isospora)多肽、利什曼原蟲屬(Leishmania)多肽、微孢子蟲(Microsporidia)多肽、新孢子蟲屬(Neospora)多肽、微粒子蟲屬(Nosema)多肽、五鞭毛滴蟲屬(Pentatrichomonas)多肽、痕原蟲屬(Plasmodium)多肽。螺蟲寄生蟲抗原的實例包括但不限於棘唇線蟲屬(Acanthocheilonema)多肽、貓圓線蟲屬(Aelurostrongylus)多妝、鉤蟲屬(Ancylostoma)多妝、管圓線蟲屬(Angiostrongylus)多肽、蛔蟲屬(Ascaris)多肽、布魯絲蟲屬(Brugia)多肽、仰口線蟲(Bunostomum)多肽、毛細線蟲屬(Capillaria)多肽、夏柏特線蟲(Chabertia)多肽、古柏線蟲屬(Cooperia)多肽、環體線蟲屬(Crenosoma)多肽、網尾線蟲屬(Dictyocaulus)多肽、膨結線蟲屬(Dioctophyme)多肽、棘唇屬(Dipetalonema)多肽、裂頭屬(Diphyllobothrium)多肽、犬復孔絛蟲(Diplydium)多肽、惡絲蟲屬(Dirofilaria)多肽、龍線蟲屬(Dracunculus)多肽、蟯蟲屬(Enterobius)多肽、絲狀蟲屬(Filaroides)多肽、血矛線蟲屬(Haemonchus)多肽、兔唇蛔線蟲屬(Lagochilascaris)多肽、羅阿絲蟲屬(Loa)多肽、曼森線蟲屬(Mansonella)多肽、繆勒線蟲屬(Muellerius)多肽、侏形吸蟲屬(Nanophyetus)多肽、板口線蟲屬(Necator)多肽、細頸線蟲屬(Nematodirus)多肽、結節線蟲屬(Oesophagostomum)多肽、盤尾絲蟲屬(Onchocerca)多肽、後睪屬(Opisthorchis)多肽、胃線蟲屬(Ostertagia)多肽、畐1J絲蟲屬(Parafilaria)多肽、並殖吸蟲屬(Paragonimus)多肽、副蛔屬(Parascaris)多肽、泡翼屬線蟲(Physaloptera)多肽、原圓線蟲屬(Protostrongylus)多肽、腹腔絲蟲屬(Setaria)多肽、旋毛線蟲屬(Spirocerca)多肽、迭宮絛蟲屬(Spirometra)多肽、冠絲蟲屬(Stephanofilaria)多肽、類圓線蟲屬(Strongyloides)多肽、圓線蟲屬(Strongylus)多肽、吸晚線蟲屬(Thelazia)多肽、弓蛔線蟲屬(Toxascaris)多肽、弓蛔蟲屬(Toxocara)多肽、毛線蟲屬(Trichinella)多肽、毛圓線蟲屬(Trichostrongylus)多肽、鞭蟲屬(Trichuris)多肽、鉤蟲屬(Uncinaria)多肽和吳策線蟲屬(Wuchereria)多肽(例如，惡性痕原蟲環子孢子(P.falciparumcircumsporozoite)(PfCSP))、子孢子表面蛋白2(PfSSP2)、肝狀態抗原I的羧基末端(PfLSAlc-term)以及輸出蛋白I(PfExp-1)、肺囊蟲(Pneumocystis)多肽、肉孢子蟲屬(Sarcocystis)多肽、血吸蟲屬(Schistosoma)多肽、泰勒蟲屬(Theileria)多肽、弓形蟲屬(Toxoplasma)多肽和錐蟲屬(Trypanosoma)多肽。[0092]外寄生蟲抗原的實例包括但不限於來自如下外寄生蟲的多肽(包括保護性抗原以及變應原):蚤；蝶(ticks),包括硬蝶科(hardticks)和軟蝶科(softticks);蒼蜆，例如蚊(midges)、蚊子(mosquitoes)、白蛉子(sandflies)、黑蜆(blackflies)、馬妮(horseflies)、角妮(hornflies)、斑!lit(deerflies)、米米妮(tsetseflies)、螫妮(stableflies)、引起妮咀病的蒼妮(myiasis-causingflies)和朦(bitinggnats);蟻(ants);蜘蛛(spiders)、風(lice);蟎(mites);和椿象例如床風(bedbugs)和獵蝽。[0093]免疫反應包括體液反應(即,B細胞反應)或細胞介導的反應(包括細胞毒性T淋巴細胞(CTL)反應)或兩者的誘導還可促成另外的生物例如銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)、結核分枝桿菌屬(Mycobacteriumtuberculosis)、麻瘋分枝桿菌(M.leprae)和無害利斯特菌(Listeriainnocula)的吞曬或殺死。CTL免疫反應促成銅綠假單胞菌、結核分枝桿菌、麻瘋分枝桿菌和無害利斯特菌的殺死(參見，例如，Oykhman等人，J.Biomed.Biotechnol.(2010=249482);於2010年6月23日在線出版的)。因此，用於本申請中描述的免疫原性組合物並且由重組表達載體和包含所述載體的載體顆粒編碼的免疫原還可來源於這類細菌。許多由細菌物種的任一種的細菌基因組編碼的和由細菌表達的多肽的胺基酸序列可在本領域中和公共可獲得的蛋白質序列資料庫中被容易地鑑定。(也參見，例如，Stover等人，Nature406:959(2000))。[0094]本申請中描述的免疫原可獲自或來源於真菌或寄生蟲。誘導免疫反應包括CTL免疫反應的示例性寄生蟲包括曼森氏血吸蟲(Schistosomamansoni)、溶組織阿米巴變形蟲(Entameobahistolytica)、剛地弓形蟲(Toxoplasmagondii)和惡性痕原蟲(Plasmodiumfalciparum)(參見例如,Oykhman,同上)。因此,來源於或獲自這類寄生蟲的蛋白質抗原可用作誘導抗各自寄生蟲的免疫反應的免疫原。免疫原還可獲自或來源於真菌的物種，包括但不限於新型隱球菌(Cryptococcusneoformans)和白色念珠菌(Candidaalbicans)(參見例如，Oykhman,同上)。[0095]包含免疫原性多肽(例如，本申請中和/或本領域中描述的腫瘤相關抗原或微生物抗原的任一種)的至少一個免疫原性片段的多肽可用作免疫原並且由本申請中描述的重組表達載體編碼。免疫原性片段包含至少一個T細胞表位或至少一個B細胞表位。免疫原性片段可由免疫原性多肽的至少6、10、15、20、30、40、50、60、70、80、90、100或更多個連續胺基酸組成。免疫原性片段可包含上述連續胺基酸數目之間的任何數目的連續胺基酸，以便例如免疫原性片段為免疫原性多肽的約6-10、10-15、15-20、20-30、30-40、40-50、50-60、60-70、70-80、80-90、90-100或更多個連續胺基酸。免疫原性片段可包含形成線性表位的充足數量的連續胺基酸和/或可包含允許片段以與片段所源自的全長多肽相同(或充分相似)的三維構象摺疊(以提供非線性表位(在本領域也稱為構象表位))的充足數量的連續胺基酸。用於評估免疫原性片段是否摺疊成可與全長多肽相比較的構象的測定包括例如蛋白質與對於天然的或展開的表位是特異性的單克隆或多克隆抗體反應的能力、其它配體結合功能的保留以及多肽片段對利用蛋白酶的消化的敏感性或抗性(參見，例如，Sambrook等人,MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,NY(2001))。因此,例如，當特異性結合全長多肽的抗體對於片段的結合能力和結合水平與對於全長多肽的大體上相同(即，結合的水平保持與示例性或野生型全長抗原的免疫原性相比較達到在統計學上、臨床上和/或生物學上充分的程度)時，多肽片段的三維構象與全長多肽充分相似。[0096]目標多肽或其免疫原性片段的三維結構的測定可通過確定免疫原性片段是否保持如在全長多肽中發現的胺基酸的空間定位的常規方法來進行。參見，例如，Bradley等人，Science309:1868-71(2005);Schueler-Furman等人，Science310:638(2005)；Dietz等A,Proc.Nat.Acad.Sc1.USA103:1244(2006)；Dodson等人，Nature450:176(2007)；Qian等人，Nature450:259(2007)。還可在本領域中獲得的是軟體工具，例如PSORT或PSORTII和Spscan(WisconsinSequenceAnalysisPackage,GeneticsComputerGroup),所述軟體工具用於預測已知或據信橫跨細胞膜的多肽的跨膜區段和膜拓撲學(參見，例如，Nakai等人，TrendsBiochem.Sc1.24:34-36(1999))。[0097]單獨地，或與上述技術組合地，以及在給定指定的目標抗原的示例性胺基酸序列的情況下，本領域技術人員可鑑定多肽抗原的潛在表位(參見，例如，Jameson和Wolf,Comput.Appl.Biosc1.4:181-86(1988))。以另一個實例為例，Hopp和Woods描述了親水性方法，所述方法基於多肽區域的親水性與它們的抗原性之間的密切關係的經驗實證(參見，例如，Hopp,Pept.Res.6:183-90(1993)；Hofmann等人，Biomed.Biochim.Acta46:855-66(1987))。電腦程式也可用於鑑定B細胞或T細胞表位。稱為EPIPL0T的BASIC程序根據它們的一級結構，通過使用13個不同等級(scale)計算和標繪柔性、親水性和抗原性特徵譜來預測蛋白質中的B細胞抗原性位點(參見,例如,Menendez等人,Comput.Appl.Biosc1.6:101-105(1990)),也參見,例如,VanRegenmortel,Methods:acompaniontoMethodsinEnzymology,9:465-472(1996);Pellequer等人，「Epitopepredictionsfromtheprimarystructureofproteins,」InPeptideantigens:apracticalapproach(編者G.B.Wisdom),第7_25頁；0xfordUniversityPress,Oxford(1994)；VanRegenmortel,「Moleculardissectionofproteinantigens」InStructureofantigens(編者Μ.Η.V.VanRegenmortel),第I卷，第1-27頁.CRCPress,BocaRaton(1992)。[0098]可用作免疫原的指定抗原的T細胞表位還可使用基於由Rammensee等人(Immunogenetics50:213-219(1999))；由Parker等人(同上)開發的算法的肽基序搜索程序，或通過使用方法例如由Doytchinova和Flower在Immunol.CellBiol.80(3):270-9(2002)；Blythe等人，Bioinformaticsl8:434-439(2002)；Guan等人，AppliedBioinformatics2:63-66(2003)；Flower等人，AppliedBioinformaticsl:167-176(2002)；Mallios,Bioinformaticsl7:942-48(2001)；Schirle等人，J.1mmunol.Meth.257:1-16(2001)中描述的那些方法來鑑定。[0099]可在本申請中描述的組合物和方法中用作免疫原的指定微生物抗原或指定腫瘤抗原的表位區域也在本領域中進行了描述。參見例如，Lamb等人，Rev.1nfect.Dis.Mar-Apr:Suppl2:s443-447(1989)；Lamb等人，EMBOJ.6:1245-49(1987)；Lamb等人，Lepr.Rev.Suppl2:131-37(1986)；Mehra等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA83:7013-27(1986)；Horsfall等人，Immunol.Todayl2:211-13(1991)；Rothbard等人，Curr.Top.Microbiol.Tmmunol.155:143-52(1990)；Singh等人，Bioinformaticsl7:1236-37(2001)；DeGroot等人，Vaccinel9:4385-95(2001)；DeLalla等人，J.1mmunol.163:1725-29(1999);Cochlovius等人，J.1mmunol.165:4731-41(2000)；Consogno等人，BloodlO1:1039-44(2003)；Roberts等人，AIDSRes.Hum.Retrovir.12:593-610(1996);Kwok等人,TrendsImmunol.22:583-88(2001);Novak等人,J.Tmmunol.166:6665-70(2001)。[0100]用於鑑定表位區域的另外的方法包括Hoffmeister等人，Methods29:270-281(2003);Maecker等人，J.1mmunol.Methods255:27-40(2001)中描述的方法。用於鑑定表位的測定描述於本申請中並且對於本領域技術人員來說是已知的，包括例如Immunology,Coligan等人(編)，Johnffiley&Sons,NewYork,NY(1991)中的現有方案(CurrentProtocol)中描述的那些測定。[0101]鑑定指定的目標抗原的免疫原性區域和/或表位還可由本領域技術人員憑經驗和/或通過計算機分析和計算機建模，使用由本領域技術人員常規實施的方法和技術來容易地確定。經驗方法包括例如合成包含特定長度的蛋白質的連續胺基酸的多肽片段，或通過使用一種或多種蛋白酶產生片段，隨後使用本領域中常規實施的許多結合測定或免疫測定法的任一種來測定片段的免疫原性。用於測定抗體(多克隆抗體、單克隆抗體或其抗原結合片段)特異性結合片段的能力的示例性方法包括但不限於ELISA、放射免疫測定、免疫印跡、競爭性結合測定、螢光激活細胞分選儀分析(FACS)和表面等離子體共振。[0102]T細胞和B細胞表位的序列可獲自公共可獲得的資料庫。例如，包括T細胞確定的腫瘤抗原的肽資料庫可在網際網路上見於定期更新的由癌症免疫(CancerImmunity)(參見cancerimmunity(dot)org/peptidedatabase/Tcellepitopes.htm)資助的妝數據中。另一個可獲得的由國家過敏及傳染病研究所(NationalInstituteofAllergyandInfectiousDisease)支持的資料庫，其提供用於搜索B細胞和T細胞表位的工具和提供表位分析工具(參見immunoepitope(dot)org上的免疫表位資料庫和分析源(ImmuneEpitopeDatabaseandAnalysisResource))。[0103]在某些情況下，當抗原特異性T細胞或克隆是可獲得的時，例如腫瘤-浸潤淋巴細胞(TIL)、病毒特異性或細菌特異性細胞毒性T淋巴細胞(CTL)，可使用利用特定抗原製備的靶細胞將此類細胞用於篩選相關表位的存在。此類靶可使用隨機肽文庫或選擇的合成肽文庫來製備，所述靶可用於使靶細胞易於被CTL裂解。當T細胞系或克隆是可獲得的時，鑑定相關表位的另一個方法將使用重組DNA法。首先製備來自對CTL易感的靶的基因或cDNA文庫，隨後將其轉染進入非易感靶細胞。這允許鑑定和克隆編碼包含CTL表位的肽的蛋白質前體的基因。本方法的第二步驟是從相關的克隆化基因製備截短的基因，以使縮小編碼至少一個CTL表位的區域。如果基因不太大，該步驟是任選的。第三步驟是製備例如長度約10-20個胺基酸、重疊5-10個殘基的合成肽，所述肽用於使靶對CTL敏感。當肽經顯示包含相關表位時，需要時，可製備更小的肽來建立包含表位的具有最小尺寸的肽。這些表位通常(但不一定)包含在9-10個殘基(對於CTL表位而言)和達到20或30個殘基(對於輔助T淋巴細胞(HTL)表位而言)內。[0104]或者，表位可通過肽的直接洗脫來確定，所述肽被特定主要組織相容性複合物(MHC)分子非特異性結合，隨後對洗脫的肽進行胺基酸測序(參見，例如，Engelhard等人，CancerJ.2000May；6Suppl3:S272-80)。簡而言之，使用純化法例如HPLC分離洗脫的肽，測試單個級分的使靶易於被CTL裂解或誘導細胞因子在HTL中的分泌的增加的能力。當級分已被鑑定為包含肽時，將其經歷進一步純化和接受序列分析。肽序列還可使用串聯質譜法來測定。隨後利用CTL或HTL製備和測試合成肽以確證正確的序列和肽已被鑑定。[0105]表位還可使用計算機分析例如Tsites程序(參見,例如,Rothbard和Taylor,EMBOJ.7:93-100，1988；Deavin等人，Mol.1mmunol.33:145-155，1996)來鑑定，所述計算機分析搜索具有引發Th反應的潛能的肽基序。具有適用於結合鼠和人I類或II類MHC的基序的CTL肽可按照BIMAS(Parker等人，J.1mmunol.152:163,1994)和其它HLA肽結合預測分析來鑑定。簡而言之，檢查例如來自微生物組分或抗原或腫瘤細胞組分或腫瘤抗原的蛋白質序列的MHC結合基序的存在。對於每一個MHC等位基因存在的這類結合基序是通常在通常為9-10個殘基長的MHCI類結合肽的位置2(或3)和9(或10)上的保守胺基酸殘基。隨後製備包含具有MHC結合基序的這類序列的合成肽，隨後測試此類肽的結合MHC分子的能力。MHC結合測定可使用表達高數目的空(未被佔據的)MHC分子的細胞(細胞結合測定)或使用純化的MHC分子來進行。最後，隨後在體外使用人淋巴細胞或在體內使用HLA轉基因動物測試MHC結合肽誘導首次用於實驗的個體的CTL反應的能力。使用肽致敏的靶細胞和天然加工抗原的靶例如病毒感染的細胞或腫瘤細胞測試這類CTL。為了進一步確認免疫原性，可使用HLAA2轉基因小鼠模型和/或多種體外刺激測定的任一種來測試肽。[0106]在某些實施方案中，免疫原包括指定抗原的肽物種，所述肽物種在本領域中為已知的並且可獲得的各自免疫原的胺基酸序列中具有一個或多個胺基酸置換、插入或缺失。胺基酸的保守置換是公知的並且通常可天然地存在於多肽中，或當重組產生多肽時可被引入。胺基酸置換、缺失和添加·可使用公知的和常規實施的誘變方法(參見，例如，Sambrook等人MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版，ColdSpringHarborLaboratoryPress,NY2001))來引入多肽。寡核苷酸指導的定點(或區段專一性)誘變法可被用於提供具有按照期望的置換、缺失或插入改變的特定密碼子的改變的多核苷酸。可用作免疫原的指定抗原的缺失或截斷變體還可通過使用與期望的缺失相鄰的方便的限制性內切核酸酶位點來構建。在限制性位點之後，可填充懸突，再連接DNA。或者，可使用隨機誘變技術例如丙氨酸掃描誘變、易錯聚合酶鏈式反應誘變和寡核苷酸指導的誘變來製備免疫原多肽變體(參見，例如，Samtoook等人，同上)。特定指定抗原的物種(或變體)(或其多肽片段)包括與本領域已知的示例性胺基酸序列的任一個具有至少85%、90%、95%或99%的胺基酸序列同一'I"生的多肽免疫原。[0107]這類多肽免疫原變體保持各自指定抗原的一個或多個生物活性或功能。具體地，作為指定抗原的變體的免疫原以統計上、臨床上或生物學上顯著的方式保持誘導受試者的免疫反應(例如，例如體液反應(即，B細胞反應)、細胞介導的反應(即，T細胞反應(包括細胞毒性T淋巴細胞反應))或體液和細胞介導的反應的能力。給定在本領域中常規實施的用於在多肽中引入突變、製備多肽片段、分離片段和變體以及分析所述片段和變體的許多分子生物學、蛋白質表達和蛋白質分離技術及方法，具有期望的生物活性的免疫原多肽變體和片段可被容易地製備而無需過多實驗。[0108]本領域技術人員已知的多種標準指明在肽或多肽的特定位點上被置換的胺基酸是否是保守的(或相似的)。例如，相似胺基酸或保守胺基酸置換是其中胺基酸殘基被具有相似側鏈的胺基酸殘基置換的置換。相似胺基酸可包括在下列分類中:具有鹼性側鏈的胺基酸(例如，賴氨酸、精氨酸、組氨酸)；具有酸性側鏈的胺基酸(例如，天冬氨酸、穀氨酸)；具有不帶電的極性側鏈的胺基酸(例如，甘氨酸、天冬醯胺、穀氨醯胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、組氨酸)；具有非極性側鏈的胺基酸(例如，丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸)；具有β分枝側鏈的胺基酸(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)以及具有芳香側鏈的胺基酸(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸)。被認為更難分類的脯氨酸與具有脂肪族側鏈的胺基酸(例如，亮氨酸、纈氨酸、異亮氨酸和丙氨酸)共有許多性質。在某些情況下，用穀氨醯胺替代穀氨酸或用天冬醯胺替代天冬氨酸的置換可被認為是相似置換，因為穀氨醯胺和天冬醯胺分別是穀氨酸和天冬氨酸的醯胺衍生物。如本領域中所理解的，兩個多肽之間的「相似性」可通過將多肽的胺基酸序列和對於其的保守胺基酸置換與第二多肽的序列相比較(例如，使用GENEWORKS、Align、BLAST算法或本申請中描述的和本領域實施的其它算法)來進行測定。[0109]如本申請中對於免疫原性片段所描述的，用於評估各個變體是否摺疊成可與非變體多肽或片段相比較的構象的測定包括例如蛋白質與對於天然或展開的表位是特異性的單克隆或多克隆抗體反應的能力、配體結合功能的保留以及突變蛋白質對利用蛋白酶的消化的敏感性或抗性(參見Sambrook等人，同上)。此類變體可按照本申請中描述的方法或本領域內已知的其它方法來鑑定、表徵和/或製備，所述方法由本領域技術人員常規地實施。[0110]包含在本申請中描述的免疫原性組合物中的分離的/重組的免疫原可按照分子生物學和/或多肽純化領域中常規實施的各種方法和技術來產生和製備。用於重組產生目標免疫原的表達載體的構建可使用本領域內已知的許多適當的分子生物學工程技術的任一種來實現，包括但不限於限制性內切核酸酶降解、連接、轉化、脂質體純化和DNA測序的標準技術，例如如Sambrook等人(1989和2001版；MolecularCloning:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratoryPress,NY)和Ausubel等人(CurrentProtocolsinMolecularBiology(2003))中描述的。為了獲得高效的轉錄和翻譯,每一個重組表達構建體中的多核苷酸序列包括至少一個適當的表達控制序列(也稱為調控序列)，例如有效地連接至編碼免疫原的核苷酸序列的前導序列和特別地啟動子序列。[0111]通過重組技術，利用重組表達載體對宿主細胞進行遺傳工程來產生免疫原、其片段或變體。可將本申請中描述的多肽和融合多肽的每一種在適當的啟動子控制下於哺乳動物細胞、酵母、細菌、昆蟲或其它細胞中表達。無細胞翻譯系統還可被用於使用來源於DNA構建體的RNA來產生此類蛋白質。用於與原核和真核宿主一起使用的適當的克隆和表達載體例如由Sambrook等人，MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版，ColdSpringHarbor,NewYork,(2001)進行描述。[0112]—般而言，用於產生目標免疫原的重組表達載體包括複製起始點、允許轉化宿主細胞的可選擇標記(例如大腸桿菌(E.coli)的氨苄青黴素抗性基因和釀酒酵母(S.cerevisiae)TRPl基因)和來源於高度表達的基因的啟動子來指導下遊結構序列的轉錄。啟動子可來源於編碼糖酵解酶例如3-磷酸甘油酸酯激酶(PGK)、α-因子、酸性磷酸酶或熱激蛋白及其它的操縱子。將異源結構序列以適當的相位與翻譯起始和終止序列裝配在一起。[0113]任選地，可將異源序列與編碼免疫原的核苷酸序列框內插入，以提供賦予期望的特徵(例如簡化表達的重組產物)的純化的肽或多肽。這樣鑑定的肽包括多組氨酸標記(his標記)或FLAG?表位標記(DYKDDDDK，SEQIDNO:35)、β-半乳糖苷酶、鹼性磷酸酶、GST或XPRESS?表位標記(DLYDDDDK,SEQIDNO:41；InvitrogenLifeTechnologies,Carlsbad,CA)等(參見，例如，美國專利N0.5，011，912;Hopp等人(Bio/Technology6:1204(1988))。親和序列可由載體提供，例如在pBAD/His(Invitrogen)中提供的六組氨酸標記。或者，親和序列可通過合成添加進入或工程化進入用於重組產生核酸編碼序列的引物(例如，使用聚合酶鏈式反應)。[0114]包含描述的重組表達構建體的宿主細胞可利用表達構建體(例如，克隆載體、穿梭載體或表達構建體)來遺傳工程化(轉導、轉化或轉染)。載體或構建體可以質粒、病毒顆粒、噬菌體等形式存在。可將工程化宿主細胞培養在經改良適合於激活啟動子、選擇轉化體或擴增編碼核苷酸序列的常規營養培養基中。用於特定宿主細胞的培養條件例如溫度、PH等的選擇和維持對於本領域技術人員來說是顯而易見的。優選地，可按照已建立的用於產生多肽的方法改造宿主細胞以使之適合於在培養中持續增殖來產生細胞系。在某些實施方案中，細胞系是永生化細胞系，其是指可在對數期生長後於培養中反覆(至少10次，同時保持活力)傳代的細胞系。[0115]有用的細菌表達構建體可通過將表達載體以可操作的閱讀相與適當的翻譯起始和終止信號以及與功能性啟動子一起插入編碼期望的免疫原的結構DNA序列來構建。構建體可包括一個或多個表型可選擇標記和複製起始點來確保載體構建體的維持以及，必要時，在宿主內提供擴增。用於轉化的適當的原核宿主包括大腸桿菌、枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、鼠傷寒沙門菌(Salmonellatyphimurium)和假單胞菌屬(Pseudomonas)、鏈黴菌屬(Streptomyces)和葡萄球菌屬(Staphylococcus)內的不同種，儘管其它細菌也可用作選擇的主題。可使用任何其它質粒或載體，只要它們是在宿主中是可複製的和有活力的。因此，例如，可將編碼目標免疫原或指定抗原的核苷酸序列包含在多種用於表達多肽的重組表達構建體的任一種中。此類載體和構建體包括染色體、非染色體和合成DNA序列，例如細菌質粒；噬菌體DNA;杆狀病毒；酵母質粒；來源於質粒與噬菌體DNA的組合的載體；病毒DNA，例如牛痘病毒、腺病毒、雞痘病毒和假性狂犬病毒病毒。然而，任何其它載體可用於製備重組表達構建體，只要其在宿主中是可複製的和有活力的。[0116]可利用多種方法將適當的DNA序列插入載體。一般而言，利用本領域已知的方法將DNA序列插入適當的限制性內切核酸酶位點。用於克隆、DNA分離、擴增和純化、用於牽涉DNA連接酶、DNA聚合酶、限制性內切核酸酶等的酶促反應的標準技術以及各種分離技術是本領域技術人員已知和通常使用的那些技術。許多標準技術描述於例如Ausubel等人(CurrentProtocolsinMolecularBiology(GreenePubl.Assoc.1nc.&Johnffiley&Sons,Inc.,2003));Sambrook等人(MolecularCloning:ALaboratoryManual,第3版，(ColdSpringHarborLaboratory2001));Maniatis等人(MolecularCloning,(ColdSpringHarborLaboratoryl982))中，以及其它地方。[0117]表達載體中編碼多肽免疫原的DNA序列有效地連接至至少一個適當的表達控制序列(例如，啟動子或調節啟動子)以指導mRNA合成。此類表達控制序列的代表性實例包括LTR或SV40啟動子、大腸桿菌Iac或trp、噬菌體λPL啟動子以及其它已知在原核或真核細胞或它們的病毒中控制基因的表達的啟動子。啟動子區域可選自任何期望的使用CAT(氯黴素轉移酶)載體或具有可選擇標記的其它載體的基因。具體的細菌啟動子包括lad,lacZ、T3、T5、T7、gpt、λPR、PL和trp。真核生物啟動子包括CMV立即早期啟動子、HSV胸苷激酶啟動子、早期和晚期SV40啟動子、來自逆轉錄病毒的LTR啟動子和小鼠金屬硫蛋白-1啟動子。適當的載體和啟動子的選擇以及某些包含至少一個有效地連接至編碼至少一個免疫原的核苷酸序列的啟動子或調節啟動子的重組表達構建體的製備完全在本領域技術人員的能力水平之內。[0118]誘導型調節啟動子和/或受密切調控的啟動子的設計和檢測在本領域是已知的並且將取決於具體的宿主細胞和表達系統(參見，例如，Guzman等人，J.Bacteriologyl77:4121-30(1995)；Smith等人，J.Biol.Chem.253:6931-33(1978)；Hirsh等人，Cellll:545-50(1977)中描述的大腸桿菌阿拉伯糖操縱子(Pbad或Para);可從Stratagene(LaJolla,CA)獲得的PET表達系統(參見美國專利N0.4.952，496);受tet調控的表達系統(Gossen等人,Proc.Natl.Acad.Sc1.USA89:5547-51(1992)；Gossen等人，Science268:1766-69(1995));pLP_TRE2受體載體(BDBiosciencesClontech,PaloAlto,CA)被設計來與CLONTECH’sCreator?克隆試劑盒一起使用)；也參見，例如，Sauer,Methodsl4:381-92(1998)；Furth,J.Mamm.GlandBiol.Neoplas.2:373(1997));參見，例如，Cascio,Artif.0rgans25:529(2001))。[0119]編碼免疫原的核酸序列可被克隆進入杆狀病毒穿梭載體，隨後將其與杆狀病毒重組以產生用於感染例如Sf9宿主細胞的重組杆狀病毒表達構建體(參見，例如，BaculovirusExpressionProtocols,MethodsinMolecularBiology第39卷，Richardson,Ed.(HumanPressl995)；Piwnica-fforms,「ExpressionofProteinsinInsectCellsUsingBacu·loviralVectors,，，ShortProtocolsinMolecularBiology,第2版，Ausubel等人編，(JohnWiley&Sonsl992)中的第II部分，第16章)。[0120]可用於分離和純化重組免疫原的方法例如可包括從將重組免疫原分泌進入培養基的適當的宿主/載體系統獲得上清液，隨後使用商購可得的過濾器濃縮培養基。在濃縮後，可將濃縮物應用於單個適當的純化基質或一系列適當的基質，例如親和基質或離子交換樹脂。可將一個或多個反相HPLC步驟用於進一步純化重組多肽。當從其天然環境分離免疫原或指定抗原時，還可使用這類純化法。[0121]用於大規模產生本申請中描述的分離的/重組的免疫原的一種或多種的方法包括分批細胞培養，所述培養被監控和控制以維持適當的培養條件。免疫原的純化可按照本申請中描述的和本領域內已知的並且與國內和外國管理機構的法律和指導方針相符的方法來進行。[0122]佐劑和佐劑組合物[0123]如本申請中所述，免疫原性組合物還可包含至少一種意欲增強(或改善、增進)對免疫原和其各自指定抗原的免疫反應(即，相較於在不施用佐劑下的特異性免疫反應的水平以在統計學上、生物學上或臨床上顯著的方式增加針對免疫原和指定抗原的特異性免疫反應的水平)的佐劑。在某些實施方案中，免疫原性組合物包含至少一種可以是分離的和/或重組的免疫原和至少一種佐劑。[0124]在其它某些實施方案中，包含編碼至少一種免疫原並且能夠指導免疫原的表達的重組表達載體的免疫原性組合物還包含佐劑。在其它某些實施方案中，包含至少一種免疫原的免疫原性組合物和包含重組表達載體的免疫原性組合物均還包含佐劑。在其它實施方案中，不是將佐劑與包含重組表達載體的免疫原性組合物組合或將佐劑與該免疫原性組合物同時施用，而是在更晚的時間施用佐劑，以及通過與包含載體的免疫原性組合物不同的途徑和/或不同的位置施用佐劑。當在施用包含重組表達載體的免疫原性組合物後施用佐劑時，在施用免疫原性組合物後第18小時、24小時、36小時、72小時或I天、2天、3天、4天、5天、6天或7天(I周)施用佐劑。用於測定免疫反應的水平的方法和技術在本申請中進行了更詳細地論述並且在本領域中被常規地實施。[0125]可包含在免疫原性組合物和用於本申請中描述的方法中的示例性佐劑包括但不一定限於下列佐劑。可用於此類方法的佐劑包括用於增強對於免疫原和各自指定抗原是特異性的體液反應、細胞反應或體液反應和細胞反應的佐劑。細胞免疫反應包括對於免疫原和其各自指定抗原是特異性的⑶4T細胞反應(其可包括記憶⑶4T細胞反應)和CD8T細胞反應。細胞反應還可包括針對免疫原(或針對具有或表達免疫原的細胞或顆粒)的細胞毒性T細胞反應(CTL反應)。期望的佐劑增強對免疫原的反應而不引起可能不利地影響反應的定性形式的免疫原的構象變化。適當的佐劑包括鋁鹽例如明礬(硫酸鋁鉀)或其它含鋁佐劑；無毒性脂質A相關佐劑例如，以非限定性實例為例，無毒性單磷酸脂質A(參見，例如，Tomai等人,J.Biol.ResponseMod.6:99—107(1987);Persing等人，TrendsMicrobiol.10:s32-s37(2002));本申請中描述的GLA;3脫-0-醯化單磷醯脂質A(MPL)(參見，例如，英國專利申請N0.GB2220211);佐劑例如QS21和QuilA,其包含從在南美洲發現的阜皮樹(QuillajasaponariaMolinatree)的樹皮中分離的三職糖苷(triterpeneglycoside)或阜苷(saponin)(參見，例如，Kensil等人，於VaccineDesign:TheSubunitandAdjuvantApproach(編PowellandNewman,PlenumPress,NY,1995)；美國專利N0.5，057，540中)。其它適當的佐劑包括任選地與免疫刺激物例如單磷醯脂質A組合的水包油乳液(例如角S烯或花生油)(參見，例如，Stoute等人，N.Engl.J.Med.336，86-91(1997))。另一種適當的佐劑是CpG(參見，例如，Klinman,Int.Rev.1mmunol.25(3-4):135-54(2006);美國專利N0.7，402，572;歐洲專利N0.772619)。[0126]如本申請中所述，適當的佐劑是鋁鹽例如氫氧化鋁、磷酸鋁或硫酸鋁。此類佐劑可與或可以不與其它特定免疫刺激劑例如MPL或3-DMP、QS21、多聚胺基酸或單體胺基酸例如多聚穀氨酸或多聚賴氨酸一起使用。另一種類的適當佐劑是水包油乳液製劑(在本申請中也稱為穩定的水包油乳液)。可任選地將此類佐劑與其它特定免疫刺激例如胞壁醯肽(例如，N-乙醯基胞壁醯基-L-蘇氨醯-D-異穀氨醯胺(thr-MDP)、N-乙醯基-正胞壁醯-L-丙氨醯基-D-異穀氨醯胺(正-MDP)、N-乙醯基胞壁醯基-L-丙氨醯-D-異穀氨醯胺醯-L-丙氨酸_2-(1』-2，二棕櫚醯-Sn-甘油-3-羥基磷醯氧基)_乙胺(MTP-PE)、N-乙醯基葡糖胺基-N-乙醯基胞壁醯基-L-Al-D-異穀氨醯-L-Ala-二棕櫚醯丙醯胺(DTP-DPP)theramide?)或其它細菌細胞壁組分一起使用。水包油乳液包括(I)使用微射流機(microfIuidizer)例如ModelllOY微射流機(Microfluidics,NewtonMass.)配製成亞微米顆粒的含有5%角鯊烯、0.5%Tween80和0.5%Span85(任選地包含不同量的MTP-PE)的MF59(W090/14837)；⑵包含10%角鯊烷、0.4%Tween80、5%普流尼克嵌段聚合物L121和thr-MDP的SAF被微流化成亞微米乳劑或經渦旋以產生更大的顆粒尺寸乳劑，和(3)Ribi佐劑系統(RAS)(RibiImmunochem,Hamilton,MT)，包含2%角S烯、0.2%Tween80和一種或多種來自由單磷醯脂質A(MPL)、海藻糖二黴菌酸酯(TDM)和細胞壁骨架(CWS)組成的組的細菌細胞壁組分，優選MPL+CWS(Detox?)。同樣地如上文中所描述的，適當的佐劑還包括皂苷佐劑例如Stimulon?(QS21，Aquila,Worcester,Mass.)或從其產生的顆粒例如ISC0M(免疫刺激複合物)和ISCOMATRIX。其它佐劑包括完全弗式佐劑(CFA)(其適用於非人用途但不適合於人用途)和不完弗氏佐劑(IFA)。其它佐劑包括細胞因子例如白細胞介素(IL-1、IL-2和IL-12)、巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)和腫瘤壞死因子(TNF)。[0127]如本申請中所述，佐劑可以是無毒性脂質A-相關(或脂質A衍生物)佐劑。在具體實施方案中，基於其用作Toll-樣受體(TLR)激動劑的能力選擇佐劑。例如，用作TLR4激動劑並且可用於本申請中描述的組合物的無毒性脂質A相關佐劑被鑑定為DSLP。DSLP化合物共有這樣的特徵:它們包含通過將兩個選自葡萄糖和氨基取代的葡萄糖的單糖基團連接在一起形成的二糖(DS)基團，其中二糖被化學地結合至磷酸(P)基團和多種脂質(L)基團。更具體地，二糖可被視為是從兩個單糖單位(每一個具有6個碳)形成的。在二糖中，單糖之一將形成還原端，另一個單糖將形成非還原端。為方便起見，按照常規碳水化合物編號命名法，形成還原端的單糖的碳被指定為位於位置1、2、3、4、5和6，然而形成非還原端的單糖的對應的碳被指定為位於位置1』、2』、3』、4』、5』和6』。在DSLP中，非還原端的位置I上的碳通過醚基(-0-)或氨基(-NH-)連接至還原端的6』位置上的碳。磷酸基團優選通過非還原端的4』碳連接至二糖。脂質基團的每一個通過醯胺(-NH-C(O)-)或酯(-O-C(O)-)鍵連接至二糖，其中羰基連接至脂質基團。二糖具有7個可被連接至醯胺或酯基團的位置，即，非還原端的位置2』、3』和6』以及還原端的位置1、2、3和4。[0128]脂質基團具有至少6個碳，優選至少8個碳，更優選至少10個碳，其中在每一種情況下，脂質基團具有不超過24個碳，不超過22個碳，或不超過20個碳。在一個實施方案中，脂質基團一起提供60-100個碳，優選70至90個碳。脂質基團可僅由碳和氫原子組成，即，其可以是烴基脂質基團，或其可包含一個羥基，即，其可以是羥基取代的脂質基團，或其可包含酯基團，所述酯基團反過來通過酯基團的羰基(-c(o)-)連接至烴基脂質或羥基取代的脂質基團，即酯取代的脂質。烴基脂質基團可以是飽和的或不飽和的，其中不飽和烴基脂質基團可在相鄰的碳原子之間具有一個雙鍵。[0129]DSLP包含3或4或5或6或7個脂質基團。在一個方面，DSLP包含3至7個脂質基團，然而在另一個方面DSLP包含4-6個脂質。在一個方面，脂質基團獨立地選自烴基脂質、羥基取代的脂質和酯取代的脂質。在一個方面，1、4』和6』位置被羥基取代。在一個方面，單糖單位各自是葡糖胺。DSLP可以游離酸形式或以鹽形式例如銨鹽形式存在。[0130]在某些實施方案中，DSLP上的脂質通過下列方面進行描述:3』位置被-O-(CO)-CH2-CH(Ra)(-O-C(O)-Rb)取代；2』位置被-NH-(CO)-CH2-CH(Ra)(-O-C(O)-Rb)取代；3位置被-O-(CO)-CH2-CH(OH)(Ra)取代；2位置被-NH-(CO)-CH2-CH(OH)(Ra)取代；其中Ra和Rb的每一個選自癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基，其中這些術語的每一個是指飽和的烴基。在一個實施方案中，Ra是十一烷基並且Rb是十三烷基，其中該佐劑在例如美國專利申請公布2008/0131466被描述為「GLA」。其中Ra是十一烷基並且Rb是十三烷基的化合物可以以立體化學上定義的形式(如可從例如AvantiPolarLipid以PHAD?佐劑獲得)使用。[0131]在一個方面，DSLP是稱為3D-MPL的天然來源的化合物。3D-MPL佐劑可由GlaxoSmithKlineCompany將其作為它們的MPL?佐劑以醫藥級形式商業地生產。3D-MPL已在科學和專利文獻中進行了詳盡描述，參見例如VaccineDesign:thesubunitandadjuvantapproach,PowellM.F.和Newman,M.J.編，第21章MonophosphorylLipidAasanadjuvant:pastexperiencesandnewdirectionsbyUlrich,J.T.和Myers,K.R.，PlenumPress,NewYork(1995)和美國專利公布N0.4，912，094。[0132]在另一個方面，DSLP佐劑可被描述為包含(i)二葡糖胺骨架，所述骨架具有通過非還原端葡糖胺的己糖胺位置I與還原端葡糖胺的己糖胺位置6之間的醚鍵連接至非還原端葡糖胺的還原端葡糖胺；(ii)連接至非還原端葡糖胺的己糖胺位置4的O-磷醯基；和(iii)達到6個脂肪醯基鏈；其中脂肪醯基鏈之一通過酯鍵連接至還原端葡糖胺的3-羥基，其中脂肪醯基鏈之一通過醯胺鍵連接至非還原端葡糖胺的2-氨基並且包含通過酯鍵連接至具有超過12個碳原子的烷醯基鏈的十四醯基鏈，並且其中脂肪醯基鏈之一通過酯鍵連接至非還原端葡糖胺的3-羥基並且包含通過酯鍵連接至具有超過12個碳原子的烷醯基鏈的十四醯基鏈。參見，例如，美國專利申請公布N0.2008/0131466。[0133]在另一個方面，佐劑可以是具有6個脂質基團的合成二糖，如美國專利申請公布2010/0310602中所描述的。[0134]在另一個方面，DSLP佐劑通過化學式⑴進行描述，稱為吡喃葡萄糖基脂質A(GLA):[0135]【權利要求】1.一種用於誘導受試者的免疫反應的方法，所述方法包括(a)給所述受試者施用至少一個劑量的包含至少第一免疫原的第一免疫原性組合物，其中所述至少一種免疫原能夠誘導對於第一指定抗原是特異性的免疫反應；和(b)給所述受試者施用至少一個劑量的包含含有編碼所述第一免疫原的核苷酸序列的重組表達載體的第二免疫原性組合物，從而誘導對於所述第一指定抗原是特異性的免疫反應。2.根據權利要求1所述的方法，其中所述第一免疫原是第一多肽，並且所述核苷酸序列編碼與所述第一多肽不同的第二多肽。3.根據權利要求1所述的方法，其中(i)所述第一免疫原性組合物還包含佐劑；(ii)所述第二組合物還包含佐劑；或(iii)所述第一組合物和所述第二組合物的每一種還包含佐劑。4.根據權利要求1或權利要求3所述的方法，其中在施用所述第一免疫原性組合物之後施用所述第二免疫原性組合物。5.根據權利要求1或權利要求3所述的方法，其中在施用所述第一免疫原性組合物之前施用所述第二免疫原性組合物。6.根據權利要求1或權利要求3所述的方法，其中共同施用所述第一免疫原性組合物和所述第二免疫原性組合物。7.根據權利要求1-5中任一項所述的方法，其中施用至少兩個劑量的所述第一免疫原性組合物或其中施用至少兩個劑量的所述第二免疫原性組合物。8.根據權利要求1或權利要求3所述的方法，其中施用(a)兩個劑量；(b)三個劑量；(C)四個劑量；或(d)五個劑量的第一免疫原性組合物。9.根據權利要求8所述的方法，其中(a)在施用所述第二免疫原性組合物之前施用每一個劑量的所述第一免疫原性組合物；(b)在施用所述第二免疫原性組合物之後施用至少一個劑量的第一免疫原性組合物；(C)將至少一個劑量的所述第一免疫原性組合物與所述第二免疫原性組合物的施用同時施用；(d)在施用所述第二免疫原性組合物之前施用至少一個劑量的所述第一免疫原性組合物並且在施用所述第二免疫原性組合物之後施用任何剩餘劑量的每一個劑量的所述第一免疫原性組合物；或(e)將每一個劑量的所述第一組合物與所述第二組合物同時施用。10.根據權利要求1-9中任一項所述的方法，其中由所述第一免疫原誘導的免疫反應包括對於所述第一指定抗原是特異性的CD4T細胞免疫反應。11.根據權利要求ι-?ο中任一項所述的方法，其中由所述第一免疫原誘導的免疫反應包括對於所述第一指定抗原是特異性的CD8T細胞免疫反應。12.根據權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述第一免疫原性組合物還包含第二免疫原，並且其中所述重組表達載體還包含編碼第二免疫原的核苷酸序列，其中所述第二免疫原誘導對於第二指定抗原是特異性的免疫反應。13.根據權利要求12所述的方法，其中所述第一指定抗原與所述第二指定抗原相同。14.根據權利要求12所述的方法，其中所述第一指定抗原與所述第二指定抗原不同。15.根據權利要求1-11中任一項所述的方法，其中所述重組表達載體還包含編碼能夠誘導對於第二指定抗原是特異性的免疫反應的第二免疫原的核苷酸序列。16.根據權利要求15所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原相同。17.根據權利要求15所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原不同。18.根據權利要求12-17中任一項所述的方法，其中通過所述第一免疫原誘導的免疫反應包括對於所述第一指定抗原是特異性的CD4T細胞反應。19.根據權利要求12-17中任一項所述的方法，其中由所述第二免疫原誘導的免疫反應包括對於所述第二指定抗原是特異性的CD8T細胞免疫反應。20.根據權利要求中3-19中任一項所述的方法，其中所述佐劑是無毒性脂質A相關佐劑。21.根據權利要求20所述的方法，其中所述無毒性脂質A相關佐劑是吡喃葡萄糖基脂質A(GLA)。22.根據權利要求21所述的方法，其中在穩定的水包油乳液中配製GLA。23.根據權利要求1-22中任一項所述的方法，其中所述第一指定抗原是(a)腫瘤相關抗原或(b)來自選自病毒、細菌、真菌和寄生蟲的感染性微生物。24.根據權利要求23所述的方法，其中所述第一指定抗原是選自腎細胞癌抗原、前列腺癌抗原、間皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原的腫瘤相關抗原。25.根據權利要求24所述的方法，其中所述前列腺癌抗原是前列腺酸性磷酸酶、前列腺特異性抗原、NKX3.1或前列腺特異性膜抗原。26.根據權利要求23所述的方法，其中所述第一指定抗原來自病毒。27.根據權利要求26所述的方法，其中所述病毒是單純皰疹病毒-2(HSV-2)。28.根據權利要求27所述的方法，其中所述第一指定抗原是HSV-2UL19多肽或HSV-2gD多肽。29.根據權利要求12-22中任一項所述的方法，其中第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一種是腫瘤相關抗原。30.根據權利要求29所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一種選自腎細胞癌抗原、前列腺癌抗原、間皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原。31.根據權利要求30所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一種是選自前列腺酸性磷酸酶、前列腺特異性抗原、NKX3.1或前列腺特異性膜抗原的前列腺癌抗原。32.根據權利要求12-22中任一項所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一種是來自選自病毒、細菌、真菌和寄生蟲的感染性微生物的抗原。33.根據權利要求32所述的方法，其中所述感染性疾病生物是病毒。34.根據權利要求33所述的方法，其中所述病毒是單純皰疹病毒-2(HSV-2)。35.根據權利要求34所述的方法，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的至少一種是HSV-2UL19多肽並且所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的另一種是HSV-2gD多肽。36.根據權利要求1-35中任一項所述的方法,其中所述重組表達載體選自慢病毒載體基因組、痘病毒載體基因組、痘苗病毒載體基因組、腺病毒載體基因組、腺病毒相關病毒載體基因組、皰疹病毒載體基因組和a病毒載體基因組。37.根據權利要求36所述的方法，其中將所述重組表達載體整合進入載體顆粒。38.根據權利要求37所述的方法，其中所述載體顆粒優先將所述重組表達載體遞送至抗原呈遞細胞。39.根據權利要求38所述的方法，其中所述抗原呈遞細胞是樹突細胞，優選表達DC-SIGN的樹突細胞。40.根據權利要求37-39中任一項所述的方法，其中所述載體顆粒是包含慢病毒載體基因組的慢病毒載體顆粒；包含痘病毒載體基因組的痘病毒載體顆粒；包含痘苗病毒載體基因組的痘苗病毒載體顆粒；包含腺病毒載體基因組的腺病毒載體顆粒；包含腺病毒相關病毒載體基因組的腺病毒相關病毒載體顆粒；包含皰疹病毒載體基因組的皰疹病毒載體顆粒；或包含α病毒載體基因組的α病毒載體顆粒。41.根據權利要求40所述的方法，其中所述載體顆粒是包含慢病毒載體基因組的慢病毒載體顆粒，和優先將所述慢病毒載體顆粒遞送至表達DC-SIGN的樹突細胞的包膜，任選地為蟲媒病毒包膜或甲病毒包膜的變體的包膜。42.根據權利要求41所述的方法，其中所述載體顆粒是包含優先將甲病毒載體顆粒遞送至表達DC-SIGN的樹突細胞的甲病毒載體顆粒。43.根據權利要求42所述的方法，其中所述慢病毒載體顆粒還包含含有辛德比斯病毒Ε2糖蛋白的包膜，所述糖蛋白包含相較於SEQIDNO:1具有至少一個胺基酸變化的胺基酸序列，其中SEQIDNO:1的殘基160不存在或為除穀氨酸外的胺基酸，並且其中所述Ε2糖蛋白不是包含辛德比斯病毒Ε3蛋白的融合蛋白的部分。44.根據權利要求43所述的方法，其中所述Ε2糖蛋白結合樹突細胞特異性細胞間粘附分子-3-捕捉非整聯蛋白(DC-SIGN)。45.一種製劑，其包含(a)第一`免疫原性組合物，其包含至少一種能夠誘導對於第一指定抗原是特異性的免疫反應的第一免疫原；和(b)第二免疫原性組合物，其包含含有編碼所述第一免疫原的核酸序列的重組表達載體。46.根據權利要求45所述的製劑，其中由所述第一免疫原誘導的特定免疫反應包括對於所述第一指定抗原是特異性的CD4T細胞反應。47.根據權利要求45所述的製劑，其中由所述第一免疫原誘導的特定免疫反應包括對於所述第一指定抗原是特異性的CD8T細胞反應。48.根據權利要求45-47中任一項所述的製劑，其中所述第一免疫原性組合物還包含第二免疫原，並且其中所述重組表達載體還包含編碼所述第二免疫原的核苷酸序列，其中所述第二免疫原誘導對於第二指定抗原是特異性的免疫反應。49.根據權利要求48所述的製劑，其中所述第一指定抗原與所述第二指定抗原相同。50.根據權利要求48所述的製劑，其中所述第一指定抗原與所述第二指定抗原不同。51.根據權利要求45所述的製劑，其中所述重組表達載體還包含編碼能夠誘導對於第二指定抗原是特異性的免疫反應的第二免疫原的核苷酸序列。52.根據權利要求51所述的製劑，其中所述第一指定抗原與所述第二指定抗原相同。53.根據權利要求51所述的製劑，其中所述第一指定抗原與所述第二指定抗原不同。54.根據權利要求51-53中任一項所述的製劑，其中由所述第一免疫原誘導的免疫反應包括對於所述第一指定抗原是特異性的CD4T細胞反應。55.根據權利要求51-53中任一項所述的製劑，其中由所述第二免疫原誘導的免疫反應包括對於所述第二指定抗原是特異性的CD8T細胞反應。56.根據權利要求45-55中任一項所述的製劑，其中(a)所述第一免疫原性組合物還包含佐劑；(b)所述第二免疫原性組合物還包含佐劑；或(c)所述第一免疫原性組合物和所述第二免疫原性組合物各自還包含佐劑。57.根據權利要求56所述的製劑，其中所述佐劑是無毒性脂質A相關佐劑。58.根據權利要求57所述的製劑，其中所述無毒性脂質A相關佐劑是吡喃葡萄糖基脂質A(GLA)。59.根據權利要求58所述的製劑，其中在穩定的水包油乳液中配製GLA。60.根據權利要求45-59中任一項所述的製劑，其中所述第一指定抗原是(a)腫瘤相關抗原或(b)來自選自病毒、細菌、真菌和寄生蟲的感染性微生物。61.根據權利要求60所述的製劑，其中所述第一指定抗原是選自腎細胞癌抗原、前列腺癌抗原、間皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原的腫瘤相關抗原。62.根據權利要求61所述的製劑，其中所述前列腺癌抗原是前列腺酸性磷酸酶、前列腺特異性抗原、NKX3.1或前列腺特異性膜抗原。63.根據權利要求60所述的製劑,其中所述第一指定抗原來自病毒。64.根據權利要求63所述的製劑，其中所述病毒是單純皰疹病毒-2(HSV-2)。·65.根據權利要求64所述的製劑，其中所述第一指定抗原是HSV-2UL19多肽或HSV-2gD多肽。66.根據權利要求49-59中任一項所述的製劑，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一種是腫瘤相關抗原。67.根據權利要求66所述的製劑，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一種選自腎細胞癌抗原、前列腺癌抗原、間皮瘤抗原、胰腺癌抗原、黑色素瘤抗原、乳腺癌抗原、肺癌抗原和卵巢癌抗原。68.根據權利要求67所述的製劑，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一種是選自前列腺酸性磷酸酶、前列腺特異性抗原、NKX3.1或前列腺特異性膜抗原的前列腺癌抗原。69.根據權利要求48-59中任一項所述的製劑，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的每一種是來自選自病毒、細菌、真菌和寄生蟲的感染性微生物的抗原。70.根據權利要求69所述的製劑，其中所述感染性疾病生物是病毒。71.根據權利要求70所述的製劑，其中所述病毒是單純皰疹病毒-2(HSV-2)。72.根據權利要求71所述的製劑，其中所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的至少一種是HSV-2UL19多肽並且所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的另一種是HSV-2gD多肽。73.根據權利要求45-72中任一項所述的製劑，其中所述重組表達載體選自慢病毒載體基因組、痘病毒載體基因組、痘苗病毒載體基因組、腺病毒載體基因組、腺病毒相關病毒載體基因組、皰疹病毒載體基因組和a病毒載體基因組。74.根據權利要求73所述的製劑，其中將所述重組表達載體整合進入載體顆粒。75.根據權利要求74所述的製劑，其中所述載體顆粒能夠將所述重組表達載體遞送至抗原呈遞細胞。76.根據權利要求75所述的製劑，其中所述抗原呈遞細胞是樹突細胞。77.根據權利要求74-76中任一項所述的製劑，其中所述載體顆粒是包含慢病毒載體基因組的慢病毒載體顆粒；包含痘病毒載體基因組的痘病毒載體顆粒；包含痘苗病毒載體基因組的痘苗病毒載體顆粒；包含腺病毒載體基因組的腺病毒載體顆粒；包含腺病毒相關病毒載體基因組的腺病毒相關病毒載體顆粒；包含皰疹病毒載體基因組的皰疹病毒載體顆粒；或包含a病毒載體基因組的a病毒載體顆粒。78.根據權利要求77所述的製劑，其中所述載體顆粒是包含慢病毒載體基因組的慢病毒載體顆粒。79.根據權利要求78所述的製劑，其中所述慢病毒載體顆粒還包含含有辛德比斯病毒E2糖蛋白的包膜，所述糖蛋白包含相較於SEQIDNO:1具有至少一個胺基酸變化的胺基酸序列，其中SEQIDNO:1的殘基160不存在或為除穀氨酸外的胺基酸，並且其中所述E2糖蛋白不是包含辛德比斯病毒E3蛋白的融合蛋白的部分。80.根據權利要求79所述的製劑，其中所述E2糖蛋白結合樹突細胞特異性細胞間粘附分子-3-捕捉非整聯蛋白(DC-SIGN)。81.根據權利要求60-62和66-68中任一項所述的製劑，其用於誘導針對具有(a)所述第一指定抗原；(b)所述第二指定抗原；或(C)所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的腫瘤細胞的細胞毒性T淋巴細胞反應。82.根據權利要求60、63-65和69-72中任一項所述的製劑，其用於誘導針對具有(a)所述第一指定抗原；(b)所述第二指定抗原；或(C)所述第一指定抗原和所述第二指定抗原的感染性疾病微生物的細胞毒性T淋巴細胞反應。83.根據權利要求60-62和66-68中任一項所述的製劑，其用於減小包含多個具有腫瘤相關抗原的腫瘤細胞的腫瘤的發生或復發的可能性。84.根據權利要求60、63-65和69-72中任一項所述的製劑，其用於預防或治療由所述感染性微生物引起的感染。【文檔編號】A61K39/00GK103596586SQ201280027969【公開日】2014年2月19日申請日期:2012年4月6日優先權日:2011年4月8日【發明者】湯瑪士·W·杜本斯基,史考特·H·羅賓斯申請人:免疫設計公司