用作β的製作方法

2023-05-15 07:01:36 2

專利名稱：用作β的製作方法
技術領域：
本發明涉及新的β2腎上腺素能受體激動劑。本發明還涉及含有這樣的化合物的藥物組合物，用這樣的化合物來治療與β2腎上腺素能受體活性相關的疾病的方法，以及用於製備這樣的化合物的方法和中間體。
背景技術：
β2腎上腺素能受體激動劑認為是治療與肺有關的疾病如哮喘和慢性阻塞性肺病(包括慢性支氣管炎和肺氣腫)的有效藥物。β2腎上腺素能受體激動劑還可用於治療早產，而且潛在地用於治療神經障礙和心臟病。儘管使用某些β2腎上腺素能受體激動劑取得了成功，目前的藥劑在持續時間、效能、選擇性和/或起效(onset)方面仍不太令人滿意。因此，需要另外的具有改進的性質(如改進的作用持續時間、效能、選擇性和/或起效)的β2腎上腺素能受體激動劑。

發明內容
本發明提供了新的化合物，其具有β2腎上腺素能受體激動劑活性。在其它性質中，已經發現本發明的化合物是有效的和選擇性的β2腎上腺素能受體激動劑。此外，發現本發明的化合物具有令人驚訝的和出乎意料的長的作用持續時間，預期其用於每日一次、或者甚至更少的頻率給藥。
因此，本發明提供了式(I)的化合物
其中R1、R2、R3和R4各自獨立選自氫、羥基、氨基、滷素、-CH2OH和-NHCHO，或者R1和R2連在一起選自-NHC(＝O)CH＝CH-、-CH＝CHC(＝O)NH-、-NHC(＝O)S-和-SC(＝O)NH-；R5和R6中的一個是-[X-C1-6亞烷基]n-NR10R11或C1-6亞烷基-NR12R13，而R5和R6中的另一個選自氫、羥基、C1-4烷氧基和C1-4烷基，其中C1-4烷基任選被滷素取代，其中，X各自獨立地選自-O-、-NH-、-S-、-NHSO2-、-SO2NH-、-NHC(＝O)-和-C(＝O)NH-；R10、R11、R12和R13各自獨立的是氫或C1-4烷基；或R10和R11與和其連接的氮原子一起，或R10與和其連接的氮原子以及相鄰的C1-6亞烷基的碳原子一起，或者R12和R13與和其連接的氮原子一起，或者R12與和其連接的氮原子以及相鄰的C1-6亞烷基的碳原子一起，形成具有5-7個環原子的雜環或雜芳基環，所述環任選地含有另外的選自氧、氮和硫的雜原子，其中氮任選地被-S(O)2-C1-4烷基取代；而n是1、2或3；且R7、R8和R9分別獨立的是氫或C1-6烷基；或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體。
本發明還提供了含有本發明化合物和藥物可接受載體的藥物組合物。本發明進一步提供了含有本發明的化合物和一種或多種其它治療劑的組合以及含這樣的組合的藥物組合物。
本發明還提供了一種治療患有與β2腎上腺素能受體活性(例如，與肺有關的疾病如哮喘或慢性阻塞性肺病、早產、神經障礙、心臟病或炎症)有關的疾病或症狀的哺乳動物的方法，所述方法包括向哺乳動物給予治療有效量的本發明的化合物。本發明進一步提供一種治療的方法，包括給予治療有效量的本發明的化合物和一種或多種其它治療劑的組合。
本發明還提供了一種治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關的疾病或病症的哺乳動物的方法，所述方法包括向哺乳動物給予治療有效量的本發明的藥物組合物。
本發明的化合物還可以用作研究工具，即，用於研究生物系統或樣品，或用於研究其它化學上的化合物的活性。因此，在其方面的另一個方面，本發明提供了一種方法，使用式(I)的化合物或其藥物可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體，作為研究生物系統或樣品或發現新的β2腎上腺素能受體激動劑的研究工具。
在分開的和不同的方面，本發明還提供了本文所述的合成方法和中間體，其用於製備本發明的化合物。
本發明還提供了如本文所述的本發明的化合物在醫學治療中的應用，以及本發明的化合物在製備治療患有與β2腎上腺素能受體活性(例如，與肺有關的疾病如哮喘或慢性阻塞性肺病、早產、神經障礙、心臟病或炎症)有關的疾病或病症的哺乳動物的製劑或藥物中的應用。


圖1是實施例17b的產物的x-射線粉末衍射圖。
圖2是實施例17b的產物的差示掃描量熱法曲線。
圖3是實施例17c的產物的x-射線粉末衍射圖。
圖4是實施例17c的產物的差示掃描量熱法曲線。
圖5是實施例17d的產物的x-射線粉末衍射圖。
圖6是實施例17d的產物的的差示掃描量熱法曲線。
發明詳述本發明提供了新的式(I)的芳基苯胺β2腎上腺素能受體激動劑，或其藥物上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體。下面的取代基和涵義將提供本發明不同方面的典型實施例。這些典型的涵義目的在於進一步地定義這樣的方面，而不是為了排除其它涵義或限制本發明的範圍。
在本發明的一個特定方面，R1是滷素、-CH2OH或-NHCHO。
在其它的特定方面，R1是氯、-CH2OH或-NHCHO；或R1是-CH2OH或-NHCHO。
在一個特定方面，R2是氫。
在一個特定方面，R3是羥基或氨基。
在一個特定方面，R4是氫或滷素；或R4是氫或氯。
在一個特定方面，R1是-NHCHO；R3是羥基，且R2和R4分別是氫。
在另一個特定方面，R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-，R3是羥基，和R4是氫。
在另一個特定方面，R1是-CH2OH；R3是羥基，且R2和R4分別是氫。
在還一個特定方面，R1和R4是氯，R3是氨基，且R2是氫。
在又一個特定方面，R1和R2連在一起是-NHC(＝O)S-或-SC(＝O)NH-，R3是羥基，和R4是氫。
在一個特定方面，R5或R6是-[X-C1-6亞烷基]n-NR10R11，其中n、X、R10和R11如式(I)定義。
在另一個特定方面，R5或R6是-[O-C1-6亞烷基]n-NR10R11，其中R10和R11如式(I)中所定義，且n是1或2。
在另一個特定方面，R5或R6是-O-C1-6亞烷基-NR10R11，其中R10和R11各自獨立的是氫或C1-4烷基。典型的R5或R6涵義包括，但不限於-O(CH2)2NH2、-O(CH2)3N(CH3)2、-O(CH2)4NH2和-OCH2C(CH3)2NH2。
在另一個特定方面，R5或R6是-O-C1-6亞烷基-NR10R11，其中R10和R11與和其連接的氮原子一起形成哌嗪基環。例如，R5或R6是-O(CH2)2-1-哌嗪基。
然而在另一個特定方面，R5或R6是C1-6亞烷基-NR12R13，其中R12和R13如式(I)中的定義。
但在另一個特定方面，R5或R6是C1-6亞烷基-NR12R13，其中R12和R13各自獨立的是氫或C1-4烷基。在這個方面，典型的R5或R6的涵義包括但不限於-(CH2)2NH2、-(CH2)2N(CH3)2和-CH2C(CH3)2NH2。
而在其它特定的方面，R5或R6是C1-4烷基，任選地用滷素取代，例如CF3；或R5或R6是C1-4烷氧基，例如-OCH3；或R5或R6是氫；或R5或R6是羥基。
在一個特定方面，R7是氫。
在一個特定方面，R8是氫。
在一個特定方面，R9是氫。
在一個方面，本發明提供了具有通式(II)的化合物 其中R1是-CH2OH或-NHCHO，且R2是氫；或R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-；R5和R6中的一個是-[O-C1-6亞烷基]n-NR10R11或C1-6亞烷基-NR12R13，而R5和R6中的另一個選自氫、羥基、C1-4烷氧基和C1-4烷基，其中C1-4烷基任選被滷素取代，其中R10、R11、R12和R13各自獨立的是氫或C1-4烷基；或R10和R11與和其連接的氮原子一起，或R10與和其連接的氮原子以及相鄰的C1-6亞烷基的碳原子一起，或者R12和R13與和其連接的氮原子一起，或者R12與和其連接的氮原子以及相鄰的C1-6亞烷基的碳原子一起，形成具有5-7個環原子的雜環或雜芳基環，所述環任選地含有另外的選自氧、氮和硫的雜原子，其中氮任選地被-S(O)2-C1-4烷基取代；且n是1或2；或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體。
在另一個方面，本發明提供了式(II)的化合物，其中R5是-[O-C1-6亞烷基]n-NR10R11或C1-6亞烷基-NR12R13，且R6是氫。
在另一個方面，本發明提供了式(II)的化合物，其中R5是C1-4烷氧基，且R6是-[O-C1-6亞烷基]n-NR10R11或C1-6亞烷基-NR12R13。
在另一個方面，本發明提供了式(II)的化合物，其中R5選自-O-C1-6亞烷基-NR10R11和C1-6亞烷基-NR12R13，且R6是氫；或R5是C1-4烷氧基，且R6是-C1-6亞烷基-NR12R13，其中R10、R11、R12和R13各自獨立的是氫或C1-4烷基；或R10和R11與和其連接的氮原子一起，形成哌嗪基環。
在這一方面的化合物的特定的基團是這樣的基團，其中R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-。
在這一方面的化合物的另一個特定基團是這樣的基團，其中R5是-O-C1-6亞烷基-NR10R11，且R6是氫。
而在其它特定方面，本發明提供式(II)的化合物，其中可變的R1、R2、R5和R6具有下表I所列的涵義。


特別值得一提的是以下的化合物5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；8-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(2-{4-[4-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-乙基]-1H-喹啉-2-酮；5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-乙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-二甲氨基-乙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；5-[(R)-2-(2-{4-[3-(2-氨基-乙基)-4-甲氧基-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；其中，化學命名法符合自動命名程序AutoNom，由MDL信息系統，GmbH(Frankfurt，Germany)提供。
如上所述的，本發明的化合物包含一個或多個手性中心。因此，除非另外指出，本發明包括外消旋混合物、純的立體異構體(即，單個的對映異構體或非對映異構體)，以及這種異構體的立體異構體-富集的混合物。當顯示一種特定的立體異構體，本領域技術人員應當理解的是，除非另外指出，較少量的其它立體異構體可以存在於本發明的組合物中，只要組合物作為整體的功用不因為這樣的其它異構體的存在而消除。
更具體的說，本發明的化合物在式(I)和(II)的亞烷基碳原子位上含一個手性中心，羥基連接在該碳原子上。當使用立體異構體的混合物時，在有羥基的手性中心的(R)方向立體異構體的量大於對應的(S)立體異構體的量是有利的。當比較相同化合物的立體異構體時，(R)立體異構體優於(S)立體異構體。
定義當描述本發明的化合物、組合物和方法時，除非另外指出，以下的術語具有下面的意思。
術語「烷基」意思是一價飽和的烴基，其可以是直鏈或支鏈的或其組合。除非另有定義，這樣的烷基典型地包含1-10個碳原子。作為實例，代表性的烷基包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基等。
術語「烷氧基」意思是一價基團-O-烷基，其中烷基如上定義。作為實例，代表性的烷氧基包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基等等。
術語「鏈烯基」意思是一價不飽和的烴基，其含有至少一個碳-碳雙鍵，通常是1或2個碳-碳雙鍵，且其可以是直鏈或支鏈或其組合。除非另有定義，這樣的鏈烯基通常包含2-10碳原子。作為實例，代表性的鏈烯基包括乙烯基、烯丙基、異丙稀基、丁-2-烯基、正-戊-2-烯基、正-己-2-烯基、正-庚-2-烯基、正-辛-2-烯基、正-壬-2-烯基、正-癸-4-烯基、正-癸-2，4-二烯基等等。
術語「炔基」意思是一價不飽和的烴基，其包含至少一個碳-碳三鍵，通常是1個碳-碳三鍵，而且其可以是直鏈或支鏈或其組合。除非另有定義，這樣的炔基通常含有2-10個碳原子。作為實例，代表性的炔基包括乙炔基、炔丙基、丁-2-炔基等。
術語「亞烷基」意思是二價飽和的烴基，其可以是直鏈或支鏈或其組合。除非另有定義，這樣的亞烷基通常包含1-10個碳原子。作為實例，代表性的亞烷基包括亞甲基、亞乙基、正亞丙基、正亞丁基、丙烷-1，2-二基(1-甲基亞乙基)、2-甲基丙烷-1，2-二基(1，1-二甲基亞乙基)等。
術語「雜芳基」意思是一價芳香基，其具有一個單環或兩個稠合環，並且在環上含至少一個選自氮、氧和硫的雜原子(通常是1-3個雜原子)。除非另有定義，這樣的雜芳基通常含有5-10個的總環原子。作為實施例，代表性的雜芳基包括吡咯基、異噁唑基、異噻唑基、吡唑基、吡啶基、噁唑基、噁二唑基、噻二唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、三嗪基(triazinyl)、噻吩基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、苯丙噁唑基、苯並噻唑基、苯並咪唑基、苯並呋喃基、苯並噻吩基、喹啉基、吲哚基、異喹啉基等，其中連接點在任何有效的碳或氮環原子上。
術語「雜環基」或「雜環」意思是一價飽和的或部分不飽和環狀的非芳香族基團，其可以是單環或多環(即，稠合或橋連的)，而且其包含至少一個選自N、O和S的雜原子(通常為1至3個雜原子)。除非另外定義，所述雜環基團通常包含5-10個總環原子。作為實例，代表性的雜環基團包括吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、咪唑烷基、嗎啉基、二氫吲哚-3-基、2-咪唑啉基、1，2，3，4-四氫異喹啉-2-基、奎寧環基等等。
術語「滷素」意思是氟、氯、溴或碘。
在此所用的術語「治療」意思是患者如哺乳動物(尤其是人)的疾病或醫學上的病症的治療，其包括(a)防止疾病或醫學上的病症的發生，即，患者的預防性治療；(b)改善疾病或醫學上的病症，即，消除患者的疾病或醫學上的病症或引起患者的疾病或醫學上的病症的消退；(c)抑制疾病或醫學上的病症，即，減緩或阻止患者的疾病或醫學上的病症的發展；或(d)減輕患者的疾病或醫學上的病症的症狀。
術語「治療有效量」意思是當向需要治療的患者給藥時，足以使治療有效的量。
術語「與β2腎上腺能受體活性有關的疾病或病症」包括通過用β2腎上腺能受體激動劑治療減輕的所有醫學上的病症，包括目前所知的或在將來發現的與β2腎上腺能受體活性有關的所有疾病症狀和/或病症。這樣的疾病症狀包括，但不限於，與肺有關的疾病如哮喘和慢性阻塞性肺病(包括慢性支氣管炎和肺氣腫)，以及神經障礙和心臟病。還已知β2腎上腺能受體活性與早產(參見美國專利號5,872,126)和某些類型的炎症(參見國際專利申請號WO99/30703和美國專利號5,290,815)有關。
術語「藥物可接受的鹽」是指由適於向患者如哺乳動物給藥的鹼或酸製備的鹽。所述的鹽可以來源於藥物可接受的無機或有機鹼以及來源於藥物可接受的無機或有機酸。
對於衍生自藥物可接受的酸的鹽，所述酸包括，但不限於乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、延胡索酸、葡糖酸、穀氨酸、氫溴酸、鹽酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、半乳糖二酸、硝酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸、xinafoic(1-羥基-2-萘酸)、1，5-萘二磺酸、肉桂酸等等。衍生自延胡索酸、氫溴酸、鹽酸、乙酸、硫酸、甲磺酸、1，5-萘二磺酸、昔萘酸(xinafoic)、草酸、酒石酸和4-甲基-肉桂酸的鹽是特別重要的。
對於衍生自藥物可接受的無機鹼的鹽，包括鋁、銨、鈣、銅、三價鐵(ferric)、二價鐵、鋰、鎂、三價錳、二價錳、鉀、鈉、鋅等等。特別優選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。衍生自藥物可接受的有機鹼的鹽包括伯胺、仲胺和叔胺的鹽，所述胺類包括取代的胺、環胺、天然存在的胺等等，如精氨酸、甜菜鹼、咖啡鹼、膽鹼、N，N′-苄乙撐二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、氨茶鹼、N-乙基嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、組氨酸、哈胺(hydrabamine)、異丙胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉，哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可鹼、三乙胺、三甲基胺、三丙基胺、氨基丁三醇等等。
術語「溶劑化物」意思是由一個或多個溶質分子，即，本發明的化合物或其藥物可接受的鹽，和一個或多個溶劑的分子形成的絡合物或聚集體。這樣的溶劑化物通常是具有基本上固定的溶質和溶劑摩爾比的結晶固體。作為實例，代表性的溶劑和物包括水、甲醇、乙醇、異丙醇、乙酸等等。當溶劑是水時，形成的溶劑和物是水合物。
應當理解，術語「或其藥物可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體」是指包括鹽、溶劑化物和立體異構體的所有排列，如式(I)的化合物的立體異構體的藥物可接受的鹽的溶劑化物。
術語「離去基團」意思是在取代反應如親核取代反應中可以被另外的官能團或原子置換的官能團或原子。作為實例，代表性的離去基團包括Cl、Br、I；磺酸酯基團如甲磺酸酯(mesylate)、甲苯磺酸酯、對溴苯磺酸酯、nosylate等等；和醯氧基如乙醯氧基、三氟乙酸基等等。
術語「氨基保護基團」意思是適於防止在氨基氮上的不希望的反應的保護基團。代表性的氨基保護基團包括，但不限於甲醯基；醯基，例如烷醯基如乙醯基；烷氧羰基如叔丁氧羰基(Boc)；芳基甲氧羰基如苄氧羰基(Cbz)和9-芴基甲氧羰基(Fmoc)；芳基甲基如苄基(Bn)、三苯甲基(Tr)、和1，1-二-(4′-甲氧基苯基)甲基；甲矽烷基如三甲基矽烷基(TMS)和叔丁基二甲基矽烷基(TBS)；等等。
術語「羥基保護基團」意思是適於防止在羥基上的不希望的反應的保護基團。代表性的羥基保護基團包括，但不限於烷基如甲基、乙基和叔丁基；醯基，例如烷醯基如乙醯基；芳基甲基如苄基(Bn)、對甲氧基苄基(PMB)、9-芴基甲基(Fm)和二苯基甲基(二苯甲基、DPM)；甲矽烷基如三甲基矽烷基(TMS)和叔丁基二甲基矽烷基(TBS)；等等。
一般的合成步驟本發明的化合物可以由容易得到的起始物質採用以下的一般方法和步驟製得。儘管在以下的流程圖說明了本發明的特定方面，本領域的技術人員將認識到本發明的所有方面可以採用在此描述的方法或本領域技術人員已知的其它方法、試劑和起始物質來製得。應當理解，當給出典型或優選的工藝條件(即，反應溫度、時間、反應物的摩爾比、溶劑、壓力等)，除非另外說明，也可以使用其他工藝條件。最適的反應條件可以隨使用的特定反應物或溶劑而變化，但是本領域的技術人員通過常規優化的操作可以確定這樣的反應條件。
此外，為了防止某些官能團經受不希望的反應，需要常規的保護基團，這對本領技術人員來講是顯而易見的。用於特定官能團的適合的保護基團的選擇以及保護和脫保護的適宜的條件，也是為現有技術所熟知的。例如，多數的保護基團以及其引入和除去，描述於T.W.Greene和G.M.Wuts，Protecting Groups in Organic Synthesis，第三版，Wiley，紐約1999，並且在此引入作為參考。
在一個合成的方法中，式(I)和(II)的化合物按照流程圖A的說明製備。(下述的流程圖所示的取代基和可變量，除非另外指出，具有如上所給出的定義)
流程圖A 其中P1表示羥基-保護基團，P2表示羥基-保護基團，且L表示離去基團，如溴。
如流程圖A所示，式1的化合物首先和芳胺(2)反應得到式3的中間體。通常，這個反應在有鹼和過渡金屬催化劑和芳基膦配體存在的有機溶劑中加熱進行。將芳基偶合到芳胺上的有用的催化劑是三(二亞苄基丙酮)二鈀(O)和外消旋-2，2′-雙(二苯基膦基)-1，1′-二萘基。反應通常在約50℃-約120℃之間加熱約0.25-約12小時。保護基團P1通常是甲矽烷基保護基團，通常使用氟化物或酸試劑將其從式3的中間體上除去，得到式4的中間體。保護基團P2通常是苄基保護基團，通常使用碳載鈀催化劑將其從式4的中間體除去，得到產物。
流程圖B中說明了製備中間體3的另一種的方法。
流程圖B 在流程圖B中，中間體5和6偶合製得中間體3的條件，與流程圖A中中間體1和2偶合所採用的條件通常是相同的。
然而，在流程圖C中說明了製備中間體3的另一個可選擇性的方法。
流程圖C 流程圖C的反應通常是在有鹼存在下的極性的非質子溶劑中進行。通常適合的溶劑包括二甲亞碸、二甲基甲醯胺、二甲基乙醯胺等等。反應通常是在約60℃-約140℃之間加熱約0.25-約4小時。
在本申請所述反應中使用的式1和7的化合物，根據本領域已知的步驟是容易製得的，例如美國專利6,653,323 B2和6,670,376 B1中描述的，其在此引入作為參考，並在此參考。在加熱下，在非質子溶劑中中間體7和2-(4-氨基苯基)乙胺反應可以製得中間體5。
中間體2和6是可商購的或由容易獲得的起始原料容易地製得。例如，當R5是-[O-C1-6亞烷基]n-NR10R11而R6是氫，通式2的中間體2′，可以由流程圖D的方法製備。
流程圖D 其中R5a是這樣定義的，-OR5a是-[O-C1-6亞烷基]n-NR10R11。作為流程圖D的適合反應條件的一個實例，反應在氫化鈉存在的條件下，在二甲亞碸中進行。
例如，當R5是C1-6亞烷基-NR12R13而R6是氫時，通式2的中間體2″，可以由流程圖E的方法製備。
流程圖E 其中R5b是C1-6亞烷基。
式8的中間體可以由式2的中間體與用離去基團在苯環的4-位取代的苯乙胺(例如4-溴苯乙胺)反應來製得。
關於製備本發明的代表性的化合物或對此的中間體的特定的反應條件和其它步驟的進一步的細節，描述於以下的實施例中。
因此，在方法方面，本發明提供了一種製備式(I)的化合物或其鹽或立體異構體或保護的衍生物的方法，所述方法包括(a)(i)在過渡金屬催化劑存在下，使式(III)的化合物 與式(IV)的化合物反應 或(ii)使式(V)的化合物 與式(VI)的化合物反應 其中P1是羥基保護基團，R1a、R2a、R3a和R4a或者各自獨立地與式(I)中的R1、R2、R3和R4的定義相同，或者是-OP2，其中P2是羥基保護基團，A和B中的一個是離去基團，而A和B中的另一個是-NH2；L是離去基團；且R5、R6、R7、R8和R9如式(I)中所定義，得到式(VII)的化合物

(b)脫去保護基團P1得到式(VIII)的化合物 (c)當R1a、R2a、R3a或R4a任一個是-OP2時，脫去保護基團P2得到式(I)的化合物或其鹽或立體異構體。
藥物組合物本發明還提供了包含本發明的化合物的藥物組合物。因此，該化合物，優選以藥物可接受的鹽的形式，可以配製成任何適合的給藥形式，如口服或胃腸外給藥，或吸入給藥。
作為說明，化合物可以與常規藥物載體和賦形劑混合，以粉劑、片劑、膠囊劑、酏劑、混懸劑、糖漿劑和薄片(wafer)等形式使用。這樣的藥物組合物將包含約0.05-約90％重量的活性化合物，更通常的是約0.1-約30％。藥物組合物可以包含常規的載體和賦形劑，如玉米澱粉或明膠、乳糖、硫酸鎂、硬脂酸鎂、蔗糖、微晶纖維素、高嶺土、甘露醇、磷酸二鈣、氯化鈉和藻酸。常用於本發明製劑中的崩解劑包括交聯羧甲基纖維素、微晶纖維素、玉米澱粉、羥乙酸澱粉鈉和藻酸。
液體組合物一般由在適合液體載體中化合物或其藥物可接受的鹽的混懸劑或溶液組成，例如乙醇、甘油、山梨糖醇、非水溶劑如聚乙二醇、油類或水，任選含助懸劑、增溶劑(如環糊精)、防腐劑、表面活性劑、溼潤劑、芳香劑或著色劑。選擇性地，液體製劑可以由可重製的粉末製得。
例如，含活性化合物、助懸劑、蔗糖和增甜劑的粉末可以用水重製形成混懸液；糖漿劑可以由含活性成分、蔗糖和增甜劑的粉末製得。
片劑形式的組合物可以採用任何合適的常規用於製備固體組合物的藥物載體。所述載體的實例包括硬脂酸鎂、澱粉、乳糖、蔗糖、微晶纖維素和粘合劑，例如聚乙烯吡咯烷酮。片劑還可以用彩色薄膜包衣，或內含顏色作為載體的一部分。此外，活性化合物可以配製成受控釋放的劑型如含親水或疏水基質的片劑。
膠囊劑形式的組合物，可以採用常規的裝膠囊步驟製得，例如將活性化合物和賦形劑摻入硬明膠膠囊中。或者地，可以製備活性化合物和高分子量的聚乙二醇的半固體基質，裝填入硬明膠膠囊中；或可以製備活性化合物的聚乙二醇的溶液或可食用油的混懸液，例如製備成液體石蠟或分餾椰子油，並將其裝入軟明膠膠囊中。
可以包括的片劑粘合劑是阿拉伯膠、甲基纖維素、羧甲基纖維鈉、聚乙烯吡咯烷酮(聚維酮)、羥丙基甲基纖維素、蔗糖、澱粉和乙基纖維素。可以使用的潤滑劑包括硬脂酸鎂或其它硬脂酸金屬鹽、硬脂酸、矽油、滑石、蠟、油和膠態二氧化矽。
也可以使用芳香劑如薄荷、冬青油，櫻桃調味劑。相應地，可能需要加入著色劑使劑型在外觀上更吸引人或有助於產品的識別。
本發明的化合物及其藥物可接受的鹽當胃腸外給予時是有效的，可以配製成肌肉內、鞘內或靜脈內給藥。
用於肌內或鞘內給藥的典型的組合物將由在油中的活性成分的混懸液或溶液組成，例如花生油或芝麻油。用於靜脈內或鞘內給藥的典型的組合物將由無菌等滲的水溶液組成，例如含活性成分和葡萄糖或氯化鈉或葡萄糖和氯化鈉的混合物。其它實例是乳酸林格注射液，加葡萄糖的乳酸格林注射液、含葡萄糖的Normosol-M、Isolyte E、醯化(acylated)格林注射液等等。任選的，共溶劑例如聚乙二醇；鰲合劑例如乙二胺四乙酸；增溶劑例如環糊精；和抗氧化劑例如焦亞硫酸鈉，可以包括在配方中。或者，溶液可以冷凍乾燥，隨後在給藥前用適合的溶劑重製。
局部給藥有效的本發明的化合物及其藥物可接受的鹽可以配製為經皮組合物或經皮傳送系統(「貼劑」)。這樣的組合物包括，例如背襯、活性化合物儲庫、控釋膜、襯墊和壓敏膠。所述經皮貼劑可用於提供以受控的量連續或不連續的注入本發明的化合物。用於藥物製劑傳送的經皮貼劑的結構和用途是現有技術熟知的。例如，參見美國專利申請號5,023,252。所述貼劑可以製成連續的、脈衝式釋放藥物的形式，或者需要時即釋放的劑型。
給予本發明的化合物的一個優選的方式是吸入劑。吸入劑是一個有效的傳送藥劑至呼吸道的方式。有三種一般類型的藥物吸入裝置噴霧器吸入器、乾粉吸入器(DPI)和定量吸入器(MDI)。常規噴霧器裝置產生高速的氣流，引起治療劑像霧一樣噴霧，其被帶進患者的呼吸道。治療劑配製成液體形式如可呼吸大小的微粒化顆粒的溶液或混懸液，其中微粒化通常定義為具有約90％或更多的直徑小於約10μm的顆粒。
常規噴霧器裝置中使用的典型的製劑是活性劑藥用鹽的等滲水溶液，活性劑的濃度介於約0.05μg/mL至1mg/mL之間。適合的噴霧器裝置能從商業上購得，例如，PARI GmbH(Starnberg，德國)。例如，其它噴霧器裝置已經公開於美國專利號6,123,068。
DPI通常以自由流動的粉末的形式給予治療劑，在吸入的時候其可以分散於患者的吸入的氣流。使用外部的能源來分散粉末的選擇性的DPI裝置，也有了進展。為了得到自由流動的粉末，治療劑可以用適合的賦形劑(例如，乳糖或澱粉)來配製。例如，乾粉製劑可以通過將幹的乳糖顆粒與本發明的化合物(即，活性劑)適合形式的微粒化的顆粒混合，通常是藥物可接受的鹽的形式，再幹摻和來製得。選擇性地，製劑可以不加入賦形劑進行配製。製劑裝入乾粉配送器或用於乾粉傳送裝置的吸入藥筒或膠囊。
可商購的DPI傳送裝置的實例包括Diskhaler(GlaxoSmithKline，Research Triangle Park，NC)(參見，例如美國專利號5,035,237)；Diskus(GlaxoSmithKline)(參見，例如美國專利號6,378,519)；Turbuhaler(AstraZeneca，Wilmington，DE)(參見，例如美國專利號4,524,769)；和Rotahaler(GlaxoSmithKline)(參見，例如美國專利號4,353,365)。適合的DPI裝置的進一步實例描述於美國專利號5,415,162、5,239,993和5,715,810，以及其中的參考文獻。
MDI通常用壓縮的氣體推進劑排放出計量量的治療劑。用於MDI給藥的製劑包括在液化的推進劑中的活性成分的溶液或混懸液。含氯氟烴如CCl3F，已被常規用作推進劑，由於對於這樣的藥物對臭氧層的不利影響的擔心，開發使用了採用氫氟烷烴(HFA)如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134a)和1，1，1，2，3，3，3，-七氟-正丙烷(HFA 227)的製劑。用於MDI給藥的HFA製劑的另外的組分包括共溶劑如乙醇或戊烷，和表面活性劑如脫水山梨醇三油酸酯、油酸、卵磷脂和甘油(參見，例如美國專利號5,225,183、EP 0717987 A2和WO92/22286)。
因此，用於MDI給藥的適合的製劑可以包括約0.001％-約2％重量的已有的晶型，約0％-約20％重量的乙醇和約0％-約5％重量的表面活性劑，剩餘物是HFA推進劑。在一個製備製劑的方法中，冷凍和加壓的氫氟烷烴加入含已有的晶型、乙醇(假如存在)和表面活性劑(假如存在)的管瓶中。為了製備混懸液，以微粒化顆粒形式提供藥用鹽。將製劑裝入氣霧劑罐中，所述罐形成了MDI裝置的一部分。美國專利號6,006,745和6,143,227提供了專門開發的用於HFA推進劑使用的MDI裝置的實施例。
在另一種製劑中，通過在活性化合物的藥用鹽的微粒化顆粒上噴霧乾燥的表面活性劑的包衣，製得混懸劑配方(參見，例如WO 99/53901和WO 00/61108)。製備適合呼吸的顆粒的方法的另外的實施例與適於吸入給藥的製劑和裝置參見美國專利號6,268,533、5,983,956、5,874,063和6,221,398，WO 99/55319和WO 00/30614。
應該理解的是適於特定方式的給藥的本發明化合物的任何形式(即，游離鹼、藥用鹽或溶劑化物)，可以適用於上述的藥物組合物形式。
預計活性化合物在廣泛的劑量範圍內是有效的，並以治療有效量給藥。然而，應當理解，實際給藥的化合物量是由醫生按照有關的事實(包括將要治療的病症、選擇的給藥途徑、實際給藥的化合物及其相對活性、年齡、體重、個體患者的反應、患者症狀的嚴重性等)來決定的。
化合物可以周期性的劑量給藥每周一次、每周多次、每日一次或每日多次劑量。治療方案可能要求在很長的時間階段給藥(例如幾周或數月)，或治療方案可能要求長期給藥。口服給藥的合適劑量是約0.05μg/天-約100mg/天的一般範圍，優選是約0.5μg/天-約1000μg/天。
吸入給藥的治療劑的合適劑量是約0.05μg/天-約1000μg/天的一般範圍，優選是約0.1μg/天-約500μg/天。應當理解的是，在確定吸入給藥的合適劑量時，要考慮作為特定的傳送裝置的特徵的傳送到肺的活性劑的比例。
在其它性質中，已發現本發明的化合物是強有力的和選擇性的β2腎上腺素能受體激動劑。特別地，與β1和β3腎上腺素能受體比較，本發明的化合物顯示了對β2腎上腺素能受體有極好的選擇性。此外，已發現本發明的化合物具有令人驚訝和出人意料的作用持續時間。如以下生物測定中描述的，已證明本發明的化合物在支氣管保護的動物模型中的作用時間大於24小時。
因此本發明提供了一種治療哺乳動物中與β2腎上腺素能受體活性有關的疾病和病症的方法，所述方法包括向所述哺乳動物給於治療有效量的本發明的化合物或含本發明化合物的藥物組合物。
本活性劑還可以用作另外含一種或多種其它的治療劑的組合的一部分。例如，本活性劑可以與一種或多種治療劑聯合給藥，所述治療劑選自抗炎藥(例如，皮質類固醇和非甾體類抗炎藥(NSAIDs)、抗膽鹼能藥(特別是毒蕈鹼的受體拮抗劑)、其它β2腎上腺素能受體激動劑、抗感染藥(例如，抗生素或抗病毒藥)或抗組胺劑。因此，在進一步方面，本發明提供包含本發明的化合物和一種或多種治療劑(例如，抗炎藥、抗膽鹼能藥、另外的β2腎上腺素能受體激動劑、抗感染藥或抗組胺劑)的組合。
其它的治療劑可以藥物可接受的鹽或溶劑化物的形式使用。合適時，其它治療劑可以光學上純的立體異構體形式使用。
適合的抗炎藥包括皮質類固醇和NSAIDs。可以用於與本發明的化合物組合的合適的皮質類固醇為那些口服和吸入的皮質類固醇及其具有抗炎活性的前藥。實例包括甲基潑尼松龍、潑尼松龍、地塞米松、氟替卡松丙酸酯、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸(carbothioic acid)S-氟代甲酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙醯氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氫-呋喃-3S-基)酯、倍氯米松酯(例如，17-丙酸酯或17，21-二丙酸酯)、布地奈德、氟尼縮松、莫米松酯(例如，糠酸酯)、曲安奈德、羅氟奈德、環索奈德、布替可特丙酸酯、RPR-106541和ST-126。優選的皮質類固醇包括氟替卡松丙酸酯、6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-17α-[(4-甲基-1，3-噻唑-5-羰基)氧基]-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯和6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯，更優選6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯。
合適的NSAIDs包括色甘酸鈉、奈多羅米鈉、磷酸二酯酶(PDE)抑制劑(例如茶鹼、PDE4抑制劑或者混合的PDE3/PDE4抑制劑)、白三烯拮抗劑(例如，孟魯司特)、白三烯合成抑制劑、iNOS抑制劑、蛋白酶抑制劑如類胰蛋白酶和彈性蛋白酶抑制劑、β-2整聯蛋白拮抗劑和腺苷受體激動劑或拮抗劑(例如腺苷2a激動劑)、細胞因子拮抗劑(例如趨化因子拮抗劑，如白介素抗體(αIL抗體)、特別地αIL-4療法、αIL-13療法或其組合)；或者細胞因子合成抑制劑。合適的其它的β2-腎上腺素受體激動劑包括沙美特羅(例如作為昔萘酸鹽)、沙丁胺醇(例如作為硫酸鹽或者游離鹼)、福美特羅(例如作為富馬酸鹽)、非諾特羅或者特布他林及其鹽。
還有益的是本活性劑與磷酸二酯酶4(PDE4)抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑組合的用途。代表性的磷酸二酯酶-4(PDE4)抑制劑或混合的PDE3/PDE4抑制劑包括，但是不限於，順式4-氰基-4-(3-環戊氧基-4-甲氧基苯基)環己烷-1-羧酸、2-甲氧甲醯-4-氰基-4-(3-環丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環己烷-1-酮、順式-[4-氰基-4-(3-環丙基甲氧基-4-二氟甲氧基苯基)環己烷-1-醇]、順式-4-氰基-4-[3-(環戊氧基)-4-甲氧基苯基]環己烷-1-羧酸等，或其藥學上可接受的鹽。其它代表性的PDE4或混合的PDE3/PDE4抑制劑包括AWD-12-281(elbion)、NCS-613(INSERM)、D-4418(Chiroscience和Schering-Plough)、CI-1018或PD-168787(Pfizer)、WO 99/16766中公開的苯並間二氧雜環戊二烯化合物、K-34(Kyowa Hakko)、V-11294A(Napp)、羅氟司特(Byk-Gulden)、WO99/47505中公開的pthalazinone化合物(Byk-Gulden)、Pumafentrine(Byk-Gulden，目前為Altana)、阿羅茶鹼(Almirall-Prodesfarma)、VM554/UM565(Vernalis)、T-440(Tanabe Seiyaku)和T2585(TanabeSeiyaku)。
合適的抗膽鹼能藥是充當毒蕈鹼受體拮抗劑的那些化合物，特別是M1、M2或M3受體的拮抗劑的那些化合物或其組合。示範性化合物有顛茄植物的生物鹼，例如阿託品、東莨菪鹼、後馬託品、莨菪鹼；這些化合物通常是作為叔胺的鹽而給藥的。這些藥物、特別是鹽形式容易從大量商業來源獲得或者可以利用文獻資料製備阿託品-CAS-51-55-8或者CAS-51-48-1(無水形式)，阿託品硫酸鹽-CAS-5908-99-6；阿託品氧化物-CAS-4438-22-6或者其HCl鹽-CAS-4574-60-1和甲基阿託品硝酸鹽-CAS-52-88-0。
後馬託品-CAS-87-00-3，氫溴酸鹽-CAS-51-56-9，甲基溴化物鹽-CAS-80-49-9。
莨菪鹼(d，1)-CAS-101-31-5，氫溴酸鹽-CAS-306-03-6和硫酸鹽-CAS-6835-16-1。
東莨菪鹼-CAS-51-34-3，氫溴酸鹽-CAS-6533-68-2，甲基溴化物鹽-CAS-155-41-9。
優選抗膽鹼能藥包括以愛全樂(Atrovent)的名稱銷售的異丙託銨(例如作為溴化物)，氧託銨(例如作為溴化物)和噻託銨(例如作為溴化物)(CAS-139404-48-1)。重要的還有甲胺太林(CAS-53-46-3)、溴化丙胺太林(CAS-50-34-9)、甲溴辛託品或Valpin50(CAS-80-50-2)、克利溴銨(Quarzan，CAS-3485-62-9)、copyrrolate(Robinul)、異丙碘銨(CAS-71-81-8)、溴美噴酯(美國專利2,918,408)、曲地氯胺(Pathilone，CAS-4310-35-4)和甲硫己環銨(Tral，CAS-115-63-9)。還參見鹽酸環噴託酯(CAS-5870-29-1)、託品醯胺(CAS-1508-75-4)、鹽酸苯海索(CAS-144-11-6)、哌侖西平(CAS-29868-97-1)、替侖西平(CAS-80880-90-9)、AF-DX 116或者美索曲明和在WO 01/04118中公開的化合物，其公開通過引用結合到本文中。
合適的抗組胺藥(也稱作H1-受體拮抗劑)包括任何一種或者更多種的大量已知抑制H1-受體並且對於人類使用是安全的拮抗劑。它們都是組胺與H1-受體相互作用的可逆的、競爭性抑制劑。這些抑制劑的大部分，大多數為第一代拮抗劑，其特徵在於，基於它們的核心結構，如乙醇胺、乙二胺和烷基胺。另外，其它的第一代抗組胺藥包括那些可以以基於哌嗪和吩噻嗪為特徵的藥物。第二代拮抗劑，其為非-鎮靜的，具有類似的結構-活性關係，它們保留了核心亞乙基(烷基胺)或者模擬具有哌嗪或者哌啶的叔胺基團。舉例說明的拮抗劑如下乙醇胺類馬來酸卡比沙明、富馬酸氯馬斯汀、鹽酸苯海拉明和茶苯海明。
乙二胺類馬來酸美吡拉明、曲吡那敏HCl和枸櫞酸曲吡那敏。
烷基胺類氯吡那敏及其鹽例如馬來酸鹽和阿伐斯汀。
哌嗪類羥嗪HCl、雙羥萘酸羥嗪、賽克利嗪HCl、乳酸賽克利嗪、美克洛嗪HCl和西替利嗪HCl。
哌啶類阿斯咪唑、左卡巴斯汀HCl、氯雷他啶或其脫乙酯基類似物，和特非那定和鹽酸非索非那定或者另一種藥學上可接受的鹽。
鹽酸氮卓斯汀也是一種H1受體拮抗劑，它可以用於與本發明的化合物的組合。
優選抗組胺藥的實例包括美沙吡林和氯雷他定。
因此，本發明在進一步方面提供一種含式(I)的化合物或其藥物可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體與皮質類固醇的組合。特別地，本發明提供一種組合，其中皮質類固醇是丙酸氟替卡松或皮質類固醇是6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯或6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙醯氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氫-呋喃-3S-基)酯。
因此，本發明在進一步方面提供了包含式(I)的化合物或其藥物可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體與PDE4抑制劑的組合。
因此，本發明在進一步方面提供了包含式(I)的化合物或其藥物可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體與抗膽鹼能藥的組合。
因此，本發明在進一步方面提供了包含式(I)的化合物或其藥物可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體和抗組胺劑的組合。
因此，本發明在進一步方面提供了包含式(I)的化合物或其藥物可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體連同PDE4抑制劑和皮質類固醇的組合。
因此，本發明在進一步方面提供了包含式(I)的化合物或其藥物可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體連同抗膽鹼能藥和皮質類固醇的組合。
如以上所用的組合，術語「式(I)的化合物」包括式(II)的化合物及其優選的基團，任何單獨公開的一種或多種化合物。
因此，本發明藥物組合物可以任選的包含式(I)的化合物或其藥物可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體與一種或多種其它治療劑，如以上所述的。
本發明的組合的單個化合物可以分開配製或以單一的藥物組合物配製在一起。單個化合物可以以分開或者組合的藥用製劑順序或者同時給藥。已知治療劑的合適劑量對本領域技術人員來講是顯而易見的。因此，本發明的治療方法包括該組合的單個化合物以分開或者組合的藥用製劑順序或者同時給藥。
因此，根據進一步方面，本發明提供治療哺乳動物中與β2腎上腺素能受體活性有關的疾病或病症的方法，包括向哺乳動物給予治療有效量的式(I)的化合物或其藥物可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體與一種或多種其它治療劑的組合。
由於本發明的化合物是β2腎上腺素能受體激動劑，所述化合物還可以用作調查或研究含有β2腎上腺素能受體的生物系統或樣品的研究工具，或用來發現新的β2腎上腺素能受體激動劑。而且，因為與其它β腎上腺素能亞型受體的結合和功能活性的比較，本發明的化合物表現出對β2腎上腺素能受體的選擇性，所以所述化合物還用於研究生物系統或樣品中的β2腎上腺素能受體的選擇性的激動作用。任何含β2腎上腺素能受體的合適的生物系統或樣品可用於所述研究中，該研究可以在體外或體內進行。適合於研究的代表性的生物系統和樣品包括，但不限於細胞、細胞提取物、質膜、組織樣品、哺乳動物(如小鼠、大鼠、豚鼠、兔子、狗、豬等)等等。
使含β2腎上腺素能受體的生物系統或樣品與β2腎上腺素能受體-激動(agonizing)量的本發明的化合物接觸。採用常規的操作和裝置(如放射配基結合試驗和功能測定)，來確定激動β2腎上腺素能受體的效應，例如如下所述的配基-介導的細胞內環腺苷酸單磷酸(cAMP)變化的測定或相似性質的測定。本發明化合物的β2腎上腺素能受體激動量通常是約1毫微摩爾至約1000毫微摩爾的範圍。當本發明的化合物用作發現新的β2腎上腺素能受體激動劑的研究工具時，作為分開的實施方式本發明還包括，對比數據(使用合適的測定)的產生和鑑定目標試驗化合物的試驗數據的分析。
下述的非限制性實施例說明了本發明的代表性的藥物組合物。本發明活性化合物的製劑的另外的合適載體還可以在RemingtonTheScience and Practice of Pharmacy，第二十版，Lippincott Williams Wilkins，Philadelphia，PA，2000中找到。
製劑實施例A這個實施例說明了用於本發明化合物口服給藥的代表性藥物組合物的製備。
成分 每片的量(mg)活性化合物1乳糖、乾燥噴霧148硬脂酸鎂 2混合上述成分，填充入硬殼明膠膠囊內。
製劑實施例B這個實施例說明了用於本發明化合物口服給藥的另一個代表性藥物組合物的製備。
成分 每片的量(mg)活性化合物1玉米澱粉 50乳糖 145硬脂酸鎂 5以上成分直接混合，壓成有單個壓痕的片劑。
製劑實施例C這個實施例說明了用於本發明化合物口服給藥的代表性藥物組合物的製備。
製備具有以下組分的口服混懸劑。
成分活性化合物 3mg富馬酸 0.5g氯化鈉 2.0g尼泊金甲酯 0.1g砂糖 25.5g山梨糖醇(70％溶液) 12.85g矽酸鎂鋁K(Vanderbilt Co.) 1.0g芳香劑 0.035mL著色劑 0.5mg蒸餾水 適量至100mL製劑實施例D這個實施例說明了含本發明化合物的代表性藥物組合物的製備。製備具有以下組分的已緩衝至pH4的可注射的製劑。
成分活性化合物 0.1mg醋酸鈉緩衝溶液(0.4M) 2.0mLHCl(1N) 適量至pH4水(蒸餾過的、無菌的) 適量至20mL製劑實施例E這個實施例說明了用於注射本發明化合物的代表性藥物組合物的製備。
通過向1mg的本發明化合物中加入20mL的無菌水製備重製的溶液。使用前，該溶液用200mL的可與活性化合物配伍的靜脈注射的液體稀釋。所述液體選自5％葡萄糖溶液、0.9％氯化鈉溶液或5％的葡萄糖和0.9％的氯化鈉的混合溶液。其它實施例是乳酸格林注射液、含5％的葡萄糖的乳酸格林注射液、含5％的葡萄糖的Normosol-M、Isolyte E和醯化的格林注射液。
製劑實施例F這個實施例說明了用於本發明化合物的局部施用的代表性藥物組合物的製備。
成分 克活性化合物 0.2-10司盤60 2吐溫60 2礦物油 5凡士林 10尼泊金甲酯 0.15尼泊金丙酯 0.05BHA(丁基化羥基苯甲醚) 0.01水 適量至100合併以上除了水的所有成分，攪拌下加熱至60℃。在60℃時，在劇烈攪拌下加入足量的水使成分乳化，再適量加入水至100g。
製劑實施例G這個實施例說明了含本發明化合物的代表性藥物組合物的製備。
把0.1mg活性化合物的藥用鹽溶解於用檸檬酸酸化的0.9％的氯化鈉溶液中，製得用於噴霧器的含水氣霧劑製劑。攪拌混合物並超聲處理直到活性鹽溶解完。緩慢加入NaOH調節溶液的pH至3-8的範圍。
製劑實施例H這個實施例說明了用於吸入藥筒的含本發明化合物的乾粉製劑的製備。
成分mg/藥筒活性化合物的藥用鹽0.2乳糖 25活性化合物的藥用鹽在與乳糖摻和前，先微粒化。使用粉劑吸入器來給予藥筒的內含物。
製劑實施例I這個實施例說明了用於乾粉吸入裝置的含本發明化合物的乾粉製劑的製備。
製備微粒化的藥用鹽和乳糖的體積配方比為1∶200的藥物組合物。把組合物填充入乾粉吸入裝置，所述裝置能傳送每劑量約10μg-約100μg的活性藥物成分。
製劑實施例J這個實施例說明了用於計量劑量吸入器的含本發明化合物的製劑的製備。
將5g平均尺寸小於10μm的微粒化顆粒的活性化合物分散於膠體溶液中製成含5％的活性化合物的藥用鹽、0.5％卵磷脂和0.5％海藻糖的混懸液，所述膠體溶液由0.5g的海藻糖和0.5g的卵磷脂溶解於100mL的軟化水中形成。混懸液噴霧乾燥，所得的物質微粒化得到平均直徑小於1.5μm的顆粒。將顆粒裝填入含加壓的1，1，1，2-四氟乙烷的罐中。
製劑實施例K這個實施例說明了用於計量劑量吸入器的含本發明化合物的製劑的製備。
將10g平均尺寸小於10μm的微粒化顆粒的活性化合物分散於溶液中製成含5％的活性化合物的藥用鹽、0.1％卵磷脂的混懸液，所述溶液由0.2g的卵磷脂溶解於200mL的軟化水中形成。混懸液噴霧乾燥，所得的物質微粒化得到平均直徑小於1.5μm的顆粒。將顆粒裝填入含加壓的1，1，1，2，3，3，3-七氟-正丙烷的罐中。
生物學測定本發明的化合物及其藥物可接受的鹽，表現出生物活性，用於藥物治療。化合物結合β2腎上腺素能受體的能力及其選擇性、激動潛能和內在活性，可以用以下的試驗A-B證明，或使用本領域已知的其它試驗證明。
縮寫％Eff ％效價ATCC 美國典型培養物保藏中心BSA牛血清白蛋白cAMP 3′5′-環磷酸腺苷DMEM Dulbecco改進的Eagle培養基DMSO 二甲亞碸EDTA 乙二胺四乙酸Emax 最大效價FBS胎牛血清Gly甘氨酸HEK-293人胚腎-293PBS磷酸鹽緩衝鹽水rpm轉/分Tris 三(羥甲基)氨基甲烷來自表達人β1或β2腎上腺素能受體的細胞的膜製劑HEK-293衍生的細胞系穩定地表達克隆的人β1或β2腎上腺素能受體，使之在含10％的透析的FBS並存在500μg/mL的遺傳黴素(Geneticin)的DMEM中分別地生長到幾乎布滿(匯合，confluency)。使用乙二胺四乙酸鈉(Versene)1∶5,000(PBS中0.2g/L EDTA)和細胞刮刀移出(lifted)單層細胞。細胞在1,000rpm的離心分離下沉澱，細胞沉澱在-80℃下冷凍保存或立刻製成膜。就製備而言，細胞沉澱再懸浮於溶胞緩衝液(10mM的Tris/HCL pH 7.4@4℃，每50mL的緩衝液(Roche cat.#1697498，Roche Molecular Biochemicals，Indianapolis，IN)有一片「含2mM的EDTA的完全性蛋白酶抑制劑混合物片」)，並在冰上使用吻合緊密的Dounce玻璃勻漿器(20strokes)勻化。勻漿在20,000xg下離心分離，經過如上的再懸浮和離心分離，該沉澱用溶胞緩衝液洗一次。最後的沉澱(pellet)再懸浮於膜緩衝液(75mM的Tris/HCl pH 7.4，12.5mM的MgCl2，1mM的EDTA@25℃)。用Bradford的方法(Bradford MM.，Analytical Biochemistry，1976，72，248-54)測定膜懸浮液的蛋白質濃度。薄以等分試樣在-80℃下冷凍保存。
試驗A對人β1和β2腎上腺素能受體的放射配基結合試驗結合測定在96-孔的微量滴定板中進行，在測定緩衝液(75mM的Tris/HCl pH 7.4@25℃，12.5mM的MgCl2，1mM的EDTA，0.2％的BSA)中以100μL的總測定量，含有5μg的含有人β2腎上腺素能受體膜的膜蛋白或含2.5μg的含有人β1腎上腺素能受體膜的膜蛋白。採用[3H]二氫阿普洛爾(NET-720，100Ci/mmol，PerkinElmer LifeSciences Inc.，Boston，MA)在從0.01nM-200nM的10個不同的濃度範圍下，進行放射性配基的Kd值的測定的飽和結合研究。用1nM的[3H]二氫阿普洛爾和從40pM-10μM的10個不同的濃度的化合物，進行化合物pKi值的測定的置換測定。化合物溶解於溶解緩衝液(25mM的Gly-HCl，pH3.0，含50％的DMSO)中濃度為10mM，然後在50mM的pH3.0的Gly-HCl中稀釋至1mM，從這裡連續稀釋成測定的緩衝液。在存在10μM的未標記的阿普洛爾的條件下，測定非特異結合。測定在室溫下溫育(incubated)90分鐘，通過預先浸漬在0.3％的聚乙烯亞胺中的GF/B玻璃纖維濾板(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)快速過濾使反應終止。濾板用濾過的緩衝液(75mM的Tris/HCl，pH7.4@4℃，12.5mM的MgCl2，1mM的EDTA)衝洗三次除去未結合放射性配基。將板乾燥，加入50μL的Microscint-20液體閃爍流體(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)，板用液體閃爍計數器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)計數。採用使用一位點競爭的3參數模型的GraphPad Prism軟體包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通過非線性回歸分析結合數據。當存在10μM的阿普洛爾的條件下測定時，曲線最小值固定在非特異結合的值上。採用Cheng-Prusoff方程，從觀察到的IC50值和放射性配基的Kd值計算化合物的Ki(Cheng Y.和Prusoff WH.，Biochemical Pharmacology，1973年，22期，23期，第3099-108頁)。受體亞型選擇性計算為Ki(β1)/Ki(β2)之比。本發明的化合物證明，與β1腎上腺素能受體的結合比，與β2腎上腺素能受體的結合更好，即，Ki(β1)＞Ki(β2)，選擇性大於約30。
試驗B分別異源地表達人β1腎上腺素受體、β2腎上腺素受體和β3腎上腺素受體的細胞系的全細胞cAMP閃式板(Flashplate)測定法穩定地表達克隆的人β1腎上腺素能受體(克隆H34.1)的HEK-293細胞系，在由用10％的FBS和500μg/mL的遺傳黴素補充的DMEM組成的培養基中長到約70％-90％的匯合(confluency)。穩定地表達克隆的人β2-腎上腺素受體(克隆H24.14)的HEK-293細胞系在相同的培養基中長到全部匯合。穩定地表達人β3-腎上腺素受體的CHO-K1的細胞系在用10％FBS和每第五傳代加入800μg/mL的遺傳黴素補充的Ham’s F-12培養基中長到70％-90％的匯合。在測定前一天，培養物都轉換到相同的不含抗生素的生長培養基中。
根據廠商的說明書，採用含125I-cAMP的閃式板腺苷酸環化酶活化測定系統(NEN SMP004，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)的放射免疫測定格式完成cAMP的測定。
在測定的當天，細胞用PBS漂洗一次，用1∶5,000的乙二胺四乙酸(PBS中含0.2g/L的EDTA)懸浮起來(lifted)並計數。在1,000rpm下，細胞用離心機分離沉澱，再懸浮在預加熱至37℃的刺激緩衝液中。因為細胞表達β1-腎上腺素受體，10nM的ICI 118,551加入刺激緩衝液，細胞在37℃下溫育10分鐘。細胞在分別表達β1-腎上腺素受體-、β2-腎上腺素受體-和β3-腎上腺素受體的細胞的30,000、40,000和70,000個細胞/孔的最後濃度下使用。化合物溶解於DMSO為10mM的濃度，然後用50mM的pH3.0的Gly-HCl稀釋至1mM，從這裡連續稀釋成分析緩衝液(75mM的Tris/HCl，pH7.4@25℃，12.5mM的MgCl2，1mM的EDTA，0.2％的BSA)。化合物在測定法中以10μM-9.5pM的11個不同的濃度進行試驗。反應在37℃下溫育10分鐘，通過加入100μL的冰冷的檢驗緩衝液停止反應。將平皿密封，在4℃下溫育整夜，在第二天早上用topcount閃爍計數器(Packard BioScience Co.，Meriden，CT)計數。基於觀察到的樣品和cAMP標準計算出反應每mL產生的cAMP的量，如廠商的使用說明書描述的。採用使用S形劑量響應(希爾斜率＝1)的3參數模型的GraphPad Prism軟體包(GraphPadSoftware，Inc.，San Diego，CA)通過非線性回歸分析數據。激動劑的效力表達為pEC50值。
本發明的化合物顯示了在測定中對β2腎上腺素能受體的有效活性，如證據pEC50值大於約9所示。此外，測試的化合物顯示了在功能性活動中與β1受體和β3受體相比，對β2受體有選擇性。特別地，本發明的化合物顯示了EC50(β1)/EC50(β2)之比大於約10，EC50(β3)/EC50(β2)之比大於約50。
試驗C內源性地表達人β2腎上腺素能受體的肺上皮細胞系的全細胞cAMP閃式板測定法因為在表達內源性水平的β2腎上腺素能受體的細胞系中測定激動劑潛能和效力(內在活性)，所以使用人肺上皮細胞系(BEAS-2B)(ATCC CRL-9609，American Type Culture Collection，Manassas，VA)(January B等人，British Journal of Pharmacology，1998年，123卷第4期，第701-11頁)。細胞在完全無血清的培養基(含腎上腺素和維甲酸的LHC-9 MEDIUM，cat #181-500，BiosourceInternational，Camarillo，CA)長到75％-90％的匯合。在測定前一天，培養基轉換為LHC-8(不含腎上腺素和維甲酸，cat #141-500，Biosource International，Camarillo，CA)。
根據廠商的說明書，採用含125I-cAMP的閃式板腺苷酸環化酶活化測定系統(NEN SMP004，PerkinElmer Life Sciences Inc.，Boston，MA)的放射免疫測定格式完成cAMP的測定。
在測定的當天，細胞用PBS漂洗，刮下並用5mM的含EDTA的PBS懸浮起來，並計數。在1,000rpm下，細胞用離心機分離沉澱，再以600,000細胞/mL的最後濃度懸浮於預加熱至37℃的刺激緩衝液中。在測定中，細胞使用30,000細胞/mL的最終濃度。化合物溶解於溶解緩衝液(25mM的pH3.0的Gly-HCl，含50％的DMSO)中為10mM的濃度，然後用50mM的pH3.0的Gly-HCl稀釋至1mM，從這裡連續稀釋成測定的緩衝液(75mM的Tris/HCl，pH7.4@25℃，12.5mM的MgCl2，1mM的EDTA，0.2％的BSA)。
化合物在測定中在10μM-40pM的10個不同濃度下進行試驗。最大響應在存在10μM的異丙醇的條件下確定。反應在37℃下溫育10分鐘，通過加入100μL的冰冷的檢驗緩衝液停止反應。把平皿密封，在4℃下溫育整夜，在第二天早上用topcount閃爍計數器(PackardBioScience Co.，Meriden，CT)計數。基於觀察到的樣品和cAMP標準計算出反應每mL產生的cAMP的量，如廠商的使用手冊中描述的。採用具有可變斜率的S形劑量響應的4參數模型的GraphPad Prism軟體包(GraphPad Software，Inc.，San Diego，CA)通過非線性回歸進行數據分析。在這個測定中，試驗的本發明的化合物證明pEC50值大於約8。
化合物的效價(％Eff)由觀察到的Emax(擬合曲線的頂點)和從10μM的異丙醇獲得的最大響應之比計算出，表達為相對於異丙醇的％Eff。證明測試的化合物％Eff大於約50。
試驗D豚鼠模型中的對抗乙醯膽鹼誘導的支氣管痙攣的支氣管保護的測定幾組體重介於250和350g之間的6隻雄性豚鼠(Duncan-Hartley(HsdPocDH)Harlan，Madison，WI)，分別用籠子卡片辨別。自始至終，允許研究的動物隨意地吃食物和喝水。
在全身暴露於定量給藥室(dosing chamber)(RS Molds，SanCarlos，CA)中，通過吸入10分鐘給予測試的化合物。安排定量給藥室，使氣霧劑從中央的多支管(central manifold)同時遞送到6個單獨的室(chamber)。60分鐘順應周期和暴露於噴霧的注射用水(WFI)10分鐘後，豚鼠暴露於試驗化合物的氣霧劑或載體(WFI)。這些氣霧劑由使用22psi壓力的氣體混合物(CO2＝5％、O2＝21％和N2＝74％)推動的LC星級噴霧裝置(型號22F51，PARI呼吸裝備，Inc.Midlothian，VA)的水溶液產生。在工作壓力下通過噴霧器的氣流大約是3L/分鐘。產生的氣霧劑通過正壓推進腔內。未稀釋的空氣用於霧化器溶液的傳送。在10分鐘的噴霧過程中，大約噴霧了1.8mL的溶液。通過比較噴霧前後的填充了液體的噴霧器的重量，用重量分析法測量出噴霧的溶液的量。
服藥後1.5、24、48和72小時，採用全身體積描記法評價吸入法給藥的化合物的支氣管保護的效果。肺部評估開始前45分鐘，每隻豚鼠肌內注射氯胺酮(43.75mg/kg)、賽拉嗪(3.50mg/kg)、乙醯丙嗪(1.05mg/kg)來麻醉。外科手術位點剃毛和用70％的酒精清理過後，做一個2-5cm的頸前側面的中線切口。然後，分離頸靜脈，用充滿生理鹽水的聚乙烯導管(PE-50，Becton Dickinson，Sparks，MD)插管，使靜脈內輸注0.1mg/mL的乙醯膽鹼(Ach)的生理鹽水溶液(Sigma-Aldrich，St.Louis，MO)。然後，自由地切開氣管，用14G聚四氟乙烯管(#NE-014，Small Parts，Miami Lakes，FL)插管。如果需要，通過另外肌肉內注射前面提及的麻醉劑混合物來保持麻醉。如果動物對捏擰其腳爪有反應或其呼吸速率大於100次/分鐘，監視並調節麻醉的深度。
一旦完成插管，將動物固定在體積描記器(#PLY3114，BuxcoElectronics，Inc.，Sharon，CT)上，插入食管壓力插管來測量肺驅動壓(壓力)。聚四氟乙烯氣管的導管連在體積描記器的開口上，使豚鼠呼吸給藥室外面的房間空氣。密封給藥室。熱燈用於維持體溫，吸入4mL的空氣，豚鼠的肺膨脹3次，採用10mL的標準刻度注射器(#5520級，Hans Rudolph，Kansas City，MO)，來確保下面的氣道不會萎陷並且動物不會遭受通氣過度的痛苦。
基線值在順應性的0.3-0.9ml/H2O的範圍內，在耐藥性的每秒0.1-0.199cm H2O/mL的範圍內，一旦確定就開始肺的評估。Buxco肺測量電腦程式能夠採集並導出與肺有關的值。啟動引起實驗原始記錄和採集的數據的程序。隨時間在體積描記器內出現的每次呼吸的體積變化，通過Buxco壓力傳感器測量。通過累計隨時間出現的信號，計算出每次呼吸測量的流量。信號與肺的驅動壓一起變化，使用Sensym壓力傳感器(#TRD4100)採集信號，通過Buxco(MAX 2270)前置放大器將信號和數據採集界面(#’s SFT3400和SFT3813)相連接。所有其它與肺有關的參數從這兩個輸入信號導出。
基線值採集5分鐘，5分鐘後豚鼠與Ach發生激發。Ach從實施例1開始按照下述的劑量和規定的時間從注射泵(sp210iw，WorldPrecision Instruments，Inc.，Sarasota，FL)中由靜脈內輸入1分鐘在5分鐘時1.9μg/分，在10分鐘時3.8μg/分，在15分鐘時7.5μg/分，在20分鐘時15.0μg/分，在25分鐘時30μg/分，在30分鐘時60μg/分。如果緊跟每次Ach給藥後的3分鐘耐藥性或順應性沒有回到基線值，豚鼠的肺隨著來自10mL的標準刻度注射器的4mL的空氣已經膨脹了3次。記錄的與肺有關的參數包括呼吸(呼吸/分鐘)、順應性(mL/cm H2O)和肺耐藥性(每秒的cm H2O/mL)(Giles et al.，1971)。一旦在這個實驗設計的35分鐘完成肺功能測量，將豚鼠從體積描記器上移開，通過CO2窒息安樂死。
量PD2，其定義為使基線肺耐藥性加倍的所需Ach的量，其採用肺耐藥性值計算出，所述肺耐藥性值使用下列方程由Ach激發範圍內的流量和壓力導出。從所用的方程導出臨床上的PC20的計算值(Am.Thoracic Soc，2000)。
PD2=antilog[logC1+(logC2-logC1)(2R0-R1)R2-R1]]]>其中C1＝第二次至最後一次Ach濃度(C2前面的濃度)C2＝Ach最後濃度(導致肺耐藥性(RL)增加兩倍的濃度)R0＝基線RL值R1＝C1後的RL值R2＝C2後的RL值使用方差的單相分析完成數據的統計分析，接著使用Bonferroni/Dunn試驗完成此後的分析。P-值＜0.05認為是顯著的。
劑量響應曲線與四參數對數方程擬合，採用GraphPad Prism，Windows 3.00版本(GraphPad Software，San Diego，California)。
Y＝Min+(Max-Min)/(1+10^((logED50-X)*Hillslope))，其中X是劑量的對數，Y是響應值(PD2)，且Y在最小值開始，漸近地到最大值，具有S形。
發現本發明代表性的化合物在服藥後超過24小時的時間點上具有顯著的支氣管保護活性。
提供以下的合成實施例用於說明本發明，無論如何並不理解為限制本發明的範圍。
實施例一般的除非另外指出，試劑、起始物質和溶劑是從供應商處購得，例如Sigma-Aldrich(St.Louis，MO)、J.T.Baker(Phillipsburg，NJ)和Honeywell Burdick和Jackson(Muskegon，MI)，並且無需進一步純化而使用；反應在氮保護氣氛下進行；用薄層色譜法(二氧化矽TLC)、分析型高效液相色譜法(分析HPLC)或質譜測定法監測反應混合物；反應混合物通常用矽膠快速柱色譜法或用製備HPLC，採用以下所述的一般方案提純；NMR試樣溶解於氘代溶劑(CD3OD、CDCl3或DMSO-d6)中，光譜用Varian Gemini 2000儀器(300MHz)在標準參數下獲得；採用Perkin Elmer儀器(PE SCIEX API 150 BX)的電噴離子化方法(ESMS)進行質譜測定法鑑別。
實施例15-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成a.4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯胺鹽酸化物的製備劇烈攪拌氫化鈉(60％分散於礦物油，11.32g、0.28mol)的二甲亞碸(400mL)漿液，在45℃下加熱1小時。然後，向這個漿液中加入純的2-氨基-2-甲基-1-丙醇(25.3g，1當量)。反應混合物加熱至75℃，持續1小時，再在冰浴中冷卻至20℃。緩慢加入1-氟代-4-硝基苯(40g，1當量)並保持溫度低於30℃，所得的暗紅溶液在室溫下進一步攪拌1小時。用水(1000mL)結束反應，用二氯甲烷(500mL)萃取，洗滌有機層(1∶1飽和氯化鈉水溶液∶水，1000mL)。向有機層中加入3M的鹽酸(400ml)來沉澱得到產物。再濾過所得的橙色固體，並用二氯甲烷衝洗直到濾液為無色。
固體物質立刻轉移至氫化燒瓶內。加入鈀(碳載10％w/w，50％w/w水)，接著加入甲醇(500mL)。在3個大氣壓的氫氣下，劇烈振搖漿液16小時。然後濾掉催化劑，減壓除去溶劑，通過用甲苯(3×150mL)共沸乾燥得到的固體，獲得標題中間產物，為白色固體(40g，0.18mol，65％)。
b.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基]-8-苯甲氧基-1H-喹啉-2-酮的製備在90℃下，步驟a的產物(23.2g，1.1當量)、8-苄氧基-5-{(R)-2-[2-(4-溴代-苯基)-乙氨基-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基]-1H-喹啉-2-酮的鹽酸化物(66.0g，0.1mol)和叔丁醇鈉(54.0g，5.5當量)的混合物在甲苯(600mL)中攪拌，直到獲得均一的溶液。加入三(二亞苄基丙酮)鈀(1.4g，0.015當量)，接著加入外消旋-2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-二萘基(2.87g，0.045當量)。反應混合物在90℃下攪拌3小時，再使其冷卻。溶液用水(100mL)洗，用1∶1的飽和的氯化鈉水溶液∶水(100mL)洗，然後通過硫酸鈉乾燥。減壓除去溶劑獲得標題中間產物，為暗褐色固體(40g粗製的)，其無需進一步純化即可使用。
c.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮的製備上步的產物用含三乙胺三氫氟化物(36g)的2-丙醇(500mL)/乙醇(100mL)溶液在室溫下處理16小時。混合物減壓濃縮至其原體積的三分之一。加入1M的氫氧化鈉水溶液(500mL)，接著加入乙腈(500mL)和乙酸異丙酯(500mL)。除去水層，有機相用1∶1的飽和氯化鈉水溶液∶水(400mL)洗，再用飽和氯化鈉水溶液(400mL)洗。有機層通過硫酸鈉乾燥，在真空下除去溶劑獲得標題中間產物(50g粗製的)，為棕色固體，其無需進一步純化即可使用。
d.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成氫氧化鈀(10g，碳載20％w/w，水50％w/w)加到上步反應得到的產物中，接著加入乙醇(500mL)。在一個大氣壓的氫氣下，劇烈攪拌該漿體8小時。濾掉催化劑，減壓濃縮濾液得到標題化合物(40g)，其用反相HPLC純化，並凍幹分離，為其三氟乙酸鹽。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)10.4(s，1H)，9.3(br s，1H)，8.7(br s，1H)，8.15(m，2H)，7.8(br s，1H)，7.03(d，1H，J＝8.2)，6.76-7.01(m，10H)，6.42(d，1H，J＝9.6)，6.1(br s，1H)，5.33(d，1H，J＝9.1)，3.8(s，2H)，2.7-3.1(m，6H)，1.21(s，6H)；C29H34N4O4的m/z[M+H+]的計算值為503.3；實測值為503.5。
實施例2-8化合物2-8的合成除了在步驟a用適合的醇代替2-氨基-2-甲基-1-丙醇外，採用與實施例1中描述的那些相似的步驟，製得化合物2-8的三氟乙酸鹽。
化合物25-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-乙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮C27H31N4O4的m/z[M+H+]的計算值為475.2，實測值為475.3。
化合物35-[(R)-2-(2-{4-[4-(3-氨基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮C28H33N4O4的m/z[M+H+]的計算值為489.2，實測值為489.5。
化合物45-[(R)-2-(2-{4-[4-(4-氨基-丁氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮C29H35N4O4的m/z[M+H+]的計算值為503.3，實測值為503.5。
化合物55-{(R)-2-[2-(4-{4-[2-(2-氨基-乙氧基)-乙氧基]-苯基氨基}-苯基)-乙氨基]-1-羥基-乙基}-8-羥基-1H-喹啉-2-酮C29H35N4O5的m/z[M+H+]的計算值為519.3，實測值為519.5。
化合物68-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(2-{4-[4-(2-嗎啉-4-基-乙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-乙基]-1H-喹啉-2-酮C31H37N4O5的m/z[M+H+]的計算值為545.3，實測值為545.6。
化合物78-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(2-{4-[4-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-乙基]-1H-喹啉-2-酮C31H38N5O4的m/z[M+H+]的計算值為544.7，實測值為544.7。
化合物88-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(2-{4-[4-嘧啶-2-基甲氧基]-苯基氨基}-苯基)-乙氨基]-乙基]-1H-喹啉-2-酮C31H31N4O4的m/z[M+H+]的計算值為523.1，實測值為523.2。
實施例95-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-3-三氟甲基-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成除了在步驟a中用1-氟代-4-硝基-2-三氟甲苯替代1-氟代-4-硝基苯之外，採用與實施例1中描述的那些相似的步驟，製得標題化合物。C30H34F3N4O4的m/z[M+H+]的計算值為571.3，實測值為571.3。
實施例108-羥基-5-{(R)-1-羥基-2-[2-(4-{4-[2-(4-甲烷磺醯基-哌嗪-1-基)-乙氧基]-苯基氨基}-苯基)-乙氨基]-乙基}-1H-喹啉-2-酮的合成a.8-苄氧基-5-[(R)-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-2-(2-{4-[4-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-乙基]-1H-喹啉-2-酮的製備除了在步驟a中用N-(2-羥基乙基)哌嗪替換2-氨基-2-甲基-1-丙醇之外，採用與實施例1中，步驟a和b，描述的那些相似的步驟，製得標題中間產物。
b.8-苄氧基-5-{(R)-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-2-[2-(4-{4-[2-(4-甲烷磺醯基-哌嗪-1-基)-乙氧基]-苯基氨基}-苯基)-乙氨基]-乙基}-1H-喹啉-2-酮的製備步驟a的產物(100mg)用含甲烷磺醯基氯化物(15.3mg，1當量)的二異丙基乙胺(0.14mL)和四氫呋喃(2mL)的混合液在室溫下處理1小時。蒸發混合物產出標題中間產物。
c.8-羥基-5-{(R)-1-羥基-2-[2-(4-{4-[2-(4-甲烷磺醯基-哌嗪-1-基)-乙氧基]-苯基氨基}-苯基)-乙氨基]-乙基}-1H-喹啉-2-酮的合成採用與實施例1中步驟c和d描述的那些相似的步驟，步驟b的中間產物轉化成標題化合物。C32H40N5O6S的m/z[M+H+]的計算值為622.3，實測值為622.5。
實施例115-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-乙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成a.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-乙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮的製備在室溫下，向含2-(4-氨基苯基)乙胺(0.100g，0.740mmol)、8-苄氧基-5-{(R)-2-[2-(4-溴代-苯基)-乙氨基-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基]-1H-喹啉-2-酮的鹽酸化物(0.393g，0.612mmol)和叔丁醇鈉(0.265g，2.75mmol)的甲苯(20mL)溶液中加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(O)(0.028g，0.031mmol)，接著加入外消旋-2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-二萘基(0.057g，0.092mmol)。所得混合物在90℃下加熱2小時，再使其冷卻。溶液用水(100mL)洗，再用1∶1飽和氯化鈉水溶液∶水(100mL)洗，然後通過硫酸鈉乾燥。減壓除去溶劑，獲得標題中間產物，為暗褐色固體(0.473g)，其無需進一步純化即可使用。
b.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-乙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮的製備上步的產物(0.473g，0.714mmol)用含三乙胺三氫氟化物(0.173g，1.07mmol)的四氫呋喃(20mL)在室溫下處理16小時。混合物用二氯甲烷(100mL)和水(100mL)稀釋。劇烈攪拌所得的混合物，加入1N的氫氧化鈉水溶液成鹼性(pH＞10)。有機相用水(200mL)洗，再用飽和的氯化鈉水溶液(200mL)洗。有機層通過硫酸鎂乾燥，減壓除去溶劑獲得標題中間產物(0.500g)，為棕色固體，其無需進一步純化即可使用。
c.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-乙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成將鈀(0.100g，活性碳載10％wt.)加入到含上步產物的1∶1甲醇∶二氯甲烷(20mL)溶液中。漿液在一個大氣壓的氫氣下劇烈攪拌16小時。反應混合物通過硅藻土過濾，並減壓濃縮獲得標題化合物，其用反相HPLC純化，並凍幹分離，為其三氟乙酸鹽。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.4(d，2H)，8.6(br s，2H)，8.0(d，2H)，7.7(brs，3H)，7.0(d，1H)，6.96(d，4H)，6.84-6.88(m，4H)，6.45(d，1H)，6.08(s，1H)，5.19(d，1H)，3.0-3.2(m，2H)，2.8(br s，2H)，2.72-2.75(m，2H)，2.62(m，2H)；C27H30N4O3的m/z[M+H+]的計算值為458.56，實測值為459.4。
實施例125-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-二甲基氨基-乙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成a.二甲基-[2-(4-硝基-苯基)-乙基]-胺的製備將鹽酸二甲胺(0.390g，4.78mmol)加入到含4-硝基苯乙基溴化物(1.0g，4.35mmol)和N，N-二異丙基乙胺(1.69g，13.05mmol)的無水二甲基甲醯胺(20mL)溶液中。反應混合物加熱至60℃，持續5小時，再使其冷卻。溶液用1∶1的水∶二氯甲烷(200mL)稀釋，加入到分液漏鬥中。收集有機層，產物用1N的氯化氫溶液萃取。除去有機層，水層加入1N氫氧化鈉水溶液成鹼性。產物用二氯甲烷(100mL)萃取並用飽和氯化鈉水溶液(200ml)洗滌。有機層通過硫酸鎂乾燥，減壓除去溶劑獲得標題中間產物(0.426g粗製的)，為澄清的油，無需進一步純化即可使用。
b.4-(2-二甲基氨基-乙基)-苯胺的製備將鈀(0.043g，活性碳載10％wt.)加入到含上步產物(0.430g，2.2mmol)的甲醇(20mL)溶液中。漿液在一個大氣壓的氫氣下劇烈攪拌6小時。過濾反應混合物，濾液減壓濃縮獲得標題中間產物(0.307g粗製的)，其無需進一步純化即可使用。
c.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-二甲基氨基-乙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成除了用上步的產物替換實施例11步驟a中的2-(4-氨基苯基)乙胺之外，採用與實施例11中描述的那些相似的步驟，製得標題化合物的三氟乙酸鹽。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.4(s，2H)，9.8(brs，1H)，8.9(br s，1H)，8.7(br s，1H)，8.0(d，2H)，6.8-7.2(m，10H)，6.4(d，1H)，6.2(br s，1H)，5.2(d，1H)，2.8-3.1(m，6H)，2.3-2.7(m，8H)；C29H34N4O3的m/z[M+H+]的計算值為486.61，實測值為487.5。
實施例135-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成a.1，1-二甲基-2-(4-硝基-苯基)-乙胺的製備α，α-二甲基苯乙胺鹽酸化物(20g，108mmol)溶解於濃縮的硫酸(40mL)中。溶液冷卻至-10℃。在30分鐘內滴加硝酸(31mL，90％)並保持反應溫度低於-5℃。溶液再攪拌45分鐘，然後傾倒在冰上，過夜使其加溫到室溫。過濾收集產物(13.7g)。氫氧化銨水溶液(1N)加入到濾液中，分離標題化合物，為澄清的油。
b.4-(2-氨基-2-甲基-丙基)-苯胺的製備將鈀(0.136g，活性碳載10％wt.)加入到含步驟a的產物(1.36g，7.0mmol)的甲醇(20mL)溶液中。漿液在一個大氣壓的氫氣下劇烈攪拌6小時。過濾反應混合物，減壓濃縮濾液獲得標題中間產物(1.04g粗製的)，其無需進一步純化即可使用。
c.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成除了用上步的產物替換實施例11步驟a中的2-(4-氨基苯基)乙胺之外，採用與實施例11中描述的那些相似的步驟，製得標題化合物的三氟乙酸鹽。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ10.4(d，2H)，8.8(brs，1H)，8.65(br s，1H)，8.0(d，2H)，7.7(s，3H)，6.8-7.0(m，8H)，6.4(d，1H)，6.1(br s，1H)，5.2(d，1H)，3(br s，4H)，2.7(m，2H)，2.6(s，2H)，1.0(s，6H)；C29H34N4O3的m/z[M+H+]的計算值為486.61，實測值為487.5。
實施例14N-{5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-2-羥基-苯基}-甲醯胺的合成a.[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基-苯基)-[4-(2-氨基乙基)-苯基]-胺的製備在90℃下，4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯胺(1.0g，5.5mmol)(實施例1、a部分的中間產物的游離鹼)、4-溴代苯乙胺(1.1g，1當量)和數丁醇鈉(1.9g，3.5當量)的混合物在甲苯(30mL)中攪拌，直到獲得均一的溶液。
加入三(二亞苄基丙酮)二鈀(0)(252mg，0.05當量)，接著加入外消旋-2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-二萘基(516mg，0.015當量)。反應混合物在90℃下攪拌16小時，再使其冷卻。溶液用乙酸乙酯(100mL)稀釋，用1∶1飽和氯化鈉水溶液∶水(100mL)洗，然後，在6M的鹽酸(100mL)中萃取。水層用乙酸乙酯(2×100mL)洗，然後用乙酸異丙酯(100mL)稀釋。混合物冷卻到0℃並用氫氧化鈉(20mL水中含13g)中和。除去水層，有機層用1∶1飽和氯化鈉水溶液∶水(100mL)洗，通過硫酸鈉乾燥，蒸發獲得標題中間產物(1.3g粗製)。
b.N-{5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基]-2-苄氧基-苯基}-甲醯胺的製備N-[5-((R)-2-溴代-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基)-2-苄氧基-苯基]-甲醯胺(2.0g，4.35mmol)、上步的產物(1.3g，1當量)、碳酸鉀(2.4g，4當量)和碘化鈉(718mg，1.1當量)的混合物在二甲亞碸(8mL)中，在140℃下加熱20分鐘。使混合物冷卻，用水(20mL)稀釋，並用乙酸乙酯(2×20mL)萃取。有機層用飽和的氯化鈉水溶液(20mL)洗，通過硫酸鈉乾燥，並蒸發。殘留物用反相HPLC純化，獲得標題中間產物(500mg，0.73mmol，17％產率)。
c.N-{5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-2-羥基-苯基}-甲醯胺的合成使用和實施例1，步驟c和d中描述的那些相似的步驟，步驟b的中間產物轉化為標題化合物。C27H35N4O4的m/z[M+H+]計算值為479.3，實測值為479.3。
實施例155-[(R)-2-(2-{4-[3-(2-氨基-乙基)-4-甲氧基-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成a.5-{(R)-2-[2-(4-氨基-苯基)-乙氨基]-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基}-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮的製備5-(2-溴代-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基)-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮(5.0g，1.0當量)和2-(4-氨基苯基)乙胺(2.8g，2.0當量)的混合物在二甲亞碸(10mL)中，在100℃下加熱12小時。反應混合物冷卻至20℃，所得的紅色油狀物用乙酸乙酯(200mL)稀釋，並用兩部分的水(200mL)萃取。有機層用兩份的1∶1的10％乙酸水溶液和飽和的氯化鈉水溶液(200mL)洗。有機層通過小心地用兩份飽和的碳酸氫鈉(200mL)萃取，接著用飽和的氯化鈉(200mL)萃取來鹼化。所得的有機溶液用無水的硫酸鈉處理，減壓除去溶劑獲得標題中間產物(5.1g)，其無需進一步純化即可使用。
b.5-[(R)-2-(2-{4-[3-(2-氨基-乙基)-4-甲氧基-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮的製備在90℃下，上步產物(0.500g，1.0當量)、5-溴代-2-甲氧基苯乙胺氫溴化物(0.343g，1.2當量)和叔丁醇鈉(0.397g，4.5當量)的混合物在甲苯(10mL)中攪拌，直到獲得均質的溶液。加入三(二苯亞甲基丙酮)鈀(0.0042g，0.05當量)，接著加入rac-2，2′-二(二苯基膦基)-1，1′-二萘基(0.0086g，0.15當量)。反應混合物在90℃下攪拌5小時，再使其冷卻至20℃。溶液用二氯甲烷(100mL)稀釋，並用水(2×100mL)洗。有機溶液通過硫酸鈉乾燥。反應混合物過濾，減壓除去溶劑得到標題中間產物(1.0g)，為暗褐色固體，其無需進一步純化即可使用。
c.5-[(R)-2-(2-{4-[3-(2-氨基-乙基)-4-甲氧基-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基]-乙基]-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮的製備上步的粗製固體(1.0g)用含三乙胺三氫氟化物(0.70mL)的四氫呋喃(10mL)在室溫下處理5小時。混合物用二氯甲烷(100mL)稀釋並用0.1M的NaOH萃取(2×100mL)，接著飽和氯化鈉水溶液(100mL)。有機層用無水硫酸鈉處理，溶劑減壓除去。所得的固體用反相HPLC純化，凍幹分離得到標題中間產物(200mg)，為其三氟乙酸鹽。
d.5-[(R)-2-(2-{4-[3-(2-氨基-乙基)-4-甲氧基-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基]-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的合成鈀(10mg，碳載10％w/w)加到上步的中間產物(50mg)中，接著加入甲醇(5mL)，漿液在一個大氣壓的氫氣下劇烈攪拌5小時。過濾反應混合物，減壓濃縮濾液獲得標題化合物(42.0mg)，其用反相HPLC純化，並凍幹分離，為其三氟乙酸鹽。C28H32N4O4的m/z[M+H+]計算值為489.3，實測值為489.5。
實施例16N-{5-[(R)-2-(2-{4-[3-(2-氨基-乙基)-4-甲氧基-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-2-羥基-苯基}-甲醯胺的合成除了用N-[5-((R)-2-溴代-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基)-2-苄氧基-苯基]-甲醯胺替換5-(2-溴代-1-(叔-丁基-二甲基-矽烷氧基)-乙基)-8-苄氧基-1H-喹啉-2-酮之外，使用與實施例15中描述的那些相似的步驟，製得標題化合物。C26H32N4O4的m/z[M+H+]的計算值為465.3，實測值為465.3。
實施例175-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基]-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的鹽a.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮游離鹼的製備碳酸氫銨(10％)的水溶液(50mL)，一次加入到含實施例1的產物、5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的三氟乙酸鹽(1.80g，2.1mmol)的乙醇(6mL)溶液中。溶液在室溫下攪拌1小時。濾過得到的固體，減壓乾燥獲得標題化合物(0.84g，1.67mmol，80％)，為黃色固體。
b.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的硫酸鹽的合成在90℃下，如上步得到的游離鹼(5.85g，11.6mmol)溶於乙腈∶水(200mL∶60mL)中，過濾除去殘留的固體顆粒。濾液再加熱至90℃，加入含濃縮硫酸(2mL)的乙腈∶水(18mL∶2mL)溶液。使溶液在2小時內冷卻至室溫，然後在冰/水浴中冷卻到10℃。濾過固體並減壓乾燥獲得粗製的標題鹽(5.70g，82％)。物質(5.70g)在90℃下，再溶解於乙腈∶水(120mL∶410mL)中，又使其在2小時內冷卻至室溫。漿液在冰/水浴中冷卻至10℃，濾過固體並減壓乾燥獲得標題鹽的水合物(4.40g，63％總的(overall))，為米色粉。產品的x-射線粉末衍射(XRPD)圖如圖1所示。差示掃描量熱法曲線如圖2所示。
c.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的萘二磺酸鹽的合成在60℃下，向含如a部分製得的游離鹼(23mg，0.046mmol)的異丙醇∶水(1.8mL∶0.2mL)溶液中，加入1，5-萘-二磺酸四水合物(33mg，2當量)，得到白色沉澱。溫度升至70℃，加入另外的1mL的水獲得澄清的溶液。冷卻到室溫後，過濾漿液，乾燥得到標題鹽(25mg，63％)，為白色的粉。產物的x-射線粉末衍射圖(XRPD)如圖3所示。差示掃描量熱法曲線如圖4所示。
d.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基-1-乙氨基}-1-羥基-乙基)-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的草酸鹽的合成在60℃下，向含如a部分製得的游離鹼(100mg，0.2mmol)的異丙醇∶水(3.6mL∶0.4mL)溶液中，加入草酸(50mg，2當量)，得到白色沉澱。溫度升至70℃，加入另外的4mL的水獲得澄清的溶液。冷卻到室溫後，過濾漿液，乾燥得到標題鹽(82mg，65％)，為米色的粉。產物的x-射線粉末衍射圖(XRPD)如圖5所示。差示掃描量熱法曲線如圖6所示。
e.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的4-甲基-肉矽酸鹽的合成5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(0.21g)溶解於四氫呋喃(1.2mL)和水(1.2mL)的混合液中。4-甲基-肉桂酸(0.07g，主要是反式)在室溫下加入到攪拌的溶液中，其溶解。大約10分鐘後，出現結晶。漿液攪拌整夜並過濾。濾餅用四氫呋喃水溶液(1∶1 THF∶water，2×0.4mL，1×0.2mL)洗，得到標題化合物，其在真空45℃下乾燥整夜(產率0.207g)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6；DMSO-d5，如在δ(ppm)2.5處參考)。δ(ppm)1.22(6H)s；2.30(3H)s；2.64(2H)t J＝6.6Hz；2.72-2.86(4H)m；3.74(2H)s；5.09(1H)m；6.43(1H)d J＝15.9Hz；6.49(1H)d J＝10.0Hz；6.86(4H)m；6.93-7.03(5H)m；7.06(1H)d J＝7.8Hz；7.17(2H)d J＝7.8Hz；7.34(1H)d J＝15.9Hz；7.45(2H)d J＝7.8Hz；7.75(1H)s；8.19(1H)d J＝10.0Hz。結晶產物用XRPD和DSC表徵。
f.5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的4-甲基-肉矽酸鹽的合成5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮(17.77g)溶解於四氫呋喃(89mL)和水(89mL)的混合液中。稱重4-甲基-肉桂酸(6.02g，主要是反式)，約1/4加入到游離鹼溶液中，接著加入e部分得到的晶種。攪拌混合物，剩餘的酸在以下的1.5小時內一份份加入。進一步攪拌漿液4小時，然後過濾漿液。濾餅用四氫呋喃水溶液(1∶1 THF∶水，36mL)洗，再用四氫呋喃(2×18mL)洗，得到標題化合物，其在真空40-50℃下整夜乾燥(產率16.916g)。1H NMR(400MHz，CD3OD；TMS如在δ(ppm)0處參考)δ(ppm)1.39(6H)s；2.32(3H)s；2.79(2H)t J＝7.2Hz；2.92-3.03(4H)m；3.87(2H)s；5.25(1H)d of d J＝3.9和8.8Hz；6.44(1H)d J＝15.9Hz；6.63(1H)dJ＝9.8Hz；6.86-6.93(4H)m；6.96(1H)d J＝8.3Hz；6.99-7.05(4H)m；7.15(2H)d J＝7.8Hz；7.19(1H)d J＝8.3Hz；7.36(1H)d J＝15.9Hz；7.38(2H)d J＝7.6Hz；8.34(1H)d J＝9.8Hz。結晶產物用XRPD和DSC表徵。
g.分析方法通過採用Cu Kα(30.0kV，15.0mA)輻射的Rigaku衍射計，獲得圖1、3和5的X射線粉末衍射圖。運用測角儀進行分析，測角儀在2-45°的範圍內，以連續掃描的模式運行，每分鐘3°，每步的大小是0.03°。樣品配製在石英樣品容器中，為一薄層粉末狀物質。儀器用矽金屬標準品校準。
採用型號為DSCQ10的TA儀器獲得圖2、4、6的差示掃描量熱法曲線。樣品固定在密封的鋁盤中用於分析，一個空盤作為參照。樣品在30℃下均衡，並以每分鐘加熱5℃，加熱至300℃。儀器以銦標準品校準。
根據其具體的實施方式描述了本發明，本領域技術人員應當理解在不背離本發明真實的精神和範圍下，可以產生多種變化並且可以取代同等物質。此外，可以進行很多修飾適應特定的情形、原料、物質的組合物、方法、步驟，適應本發明的目的、精神和保護範圍。所有這些修飾認為是在此附加的權利要求的範圍之內的。另外地，在上文中引用的所有的出版物、專利、專利文獻在此以全文引入作為參考，好像個別地引入作為參考。
權利要求
1.一種式(I)的化合物 其中R1、R2、R3和R4各自獨立選自氫、羥基、氨基、滷素、-CH2OH和-NHCHO，或者R1和R2連在一起選自-NHC(＝O)CH＝CH-、-CH＝CHC(＝O)NH-、-NHC(＝O)S-和-SC(＝O)NH-；R5和R6中的一個是-[X-C1-6亞烷基]n-NR10R11或C1-6亞烷基-NR12R13，而R5和R6中的另一個選自氫、羥基、C1-4烷氧基和C1-4烷基，其中C1-4烷基任選被滷素取代，其中X各自獨立地選自-O-、-NH-、-S-、-NHSO2-、-SO2NH-、-NHC(＝O)-和-C(＝O)NH-；R10、R11、R12和R13各自獨立的是氫或C1-4烷基；或R10和R11與和其連接的氮原子一起，或R10與和其連接的氮原子以及相鄰的C1-6亞烷基的碳原子一起，或者R12和R13與和其連接的氮原子一起，或者R12與和其連接的氮原子以及相鄰的C1-6亞烷基的碳原子一起，形成具有5-7個環原子的雜環或雜芳基環，所述環任選地含有另外的選自氧、氮和硫的雜原子，其中氮任選地被-S(O)2-C1-4烷基取代；而n是1、2或3；且R7、R8和R9各自獨立的是氫或C1-6烷基；或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體。
2.權利要求1的化合物，其中R7、R8和R9各自是氫。
3.權利要求1的化合物，其中X是-O-。
4.權利要求1的化合物，其是式(II)的化合物 其中R1是-CH2OH或-NHCHO，且R2是氫；或者R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-；R5和R6中的一個是-[O-C1-6亞烷基]n-NR10R11或C1-6亞烷基-NR12R13，而R5和R6中的另一個選自氫、羥基、C1-4烷氧基和C1-4烷基，其中C1-4烷基任選被滷素取代，其中R10、R11、R12和R13各自獨立的是氫或C1-4烷基；或R10和R11與和其連接的氮原子一起，或R10與和其連接的氮原子以及相鄰的C1-6亞烷基的碳原子一起，或者R12和R13與和其連接的氮原子一起，或者R12與和其連接的氮原子以及相鄰的C1-6亞烷基的碳原子一起，形成具有5-7個環原子的雜環或雜芳基，所述環任選地含有另外的選自氧、氮和硫的雜原子，其中氮任選地被-S(O)2-C1-4烷基取代；且n是1或2；或其藥學上可接受的鹽或溶劑化物或立體異構體。
5.權利要求4的化合物，其中R5是-[O-C1-6亞烷基]n-NR10R11或C1-6亞烷基-NR12R13，且R6是氫。
6.權利要求4的化合物，其中R5是C1-4烷氧基，且R6是-[O-C1-6亞烷基]n-NR10R11或C1-6亞烷基-NR12R13。
7.權利要求4的化合物，其中R5是選自-O-C1-6亞烷基-NR10R11和C1-6亞烷基-NR12R13，且R6是氫；或R5是C1-4烷氧基，且R6是-C1-6亞烷基-NR12R13，其中R10、R11、R12和R13各自獨立的是氫或C1-4烷基，或R10和R11與和其連接的氮原子一起，形成哌嗪基環。
8.權利要求7的化合物，其中R1和R2連在一起是-NHC(＝O)CH＝CH-或-CH＝CHC(＝O)NH-。
9.權利要求8的化合物，其中R5是-O-C1-6亞烷基-NR10R11，且R6是氫。
10.權利要求4的化合物，其中帶有羥基的亞烷基碳的立體化學是(R)。
11.權利要求4的化合物，其選自5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；8-羥基-5-[(R)-1-羥基-2-(2-{4-[4-(2-哌嗪-1-基-乙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-乙基]-1H-喹啉-2-酮；5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-乙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-二甲基氨基-乙基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；5-[(R)-2-(2-{4-[3-(2-氨基-乙基)-4-甲氧基-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮；和其藥物可接受的鹽和溶劑化物和立體異構體。
12.權利要求11的化合物，其是5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮，或其藥物可接受的鹽和溶劑化物和立體異構體。
13.權利要求12的化合物，其是5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的硫酸鹽。
14.權利要求12的化合物，其是5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的萘二磺酸鹽。
15.權利要求12的化合物，其是5-[(R)-2-(2-{4-[4-(2-氨基-2-甲基-丙氧基)-苯基氨基]-苯基}-乙氨基)-1-羥基-乙基]-8-羥基-1H-喹啉-2-酮的草酸鹽。
16.一種藥物組合物，其包含治療有效量的權利要求1-15任一項所述的化合物和藥物可接受的載體。
17.權利要求16的藥物組合物，其中組合物進一步包含治療有效量的一種或多種其它治療劑。
18.權利要求17的藥物組合物，其中其它治療劑是皮質類固醇、抗膽鹼能藥或PDE4抑制劑。
19.權利要求17的藥物組合物，其中其它治療劑選自丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯和6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙醯氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氫呋喃-3S-基)酯。
20.權利要求16的藥物組合物，其中組合物適於吸入給藥。
21.一種組合，包含權利要求1-15任一項所述的化合物和一種或多種其它治療劑。
22.權利要求21組合，其中其它治療劑是皮質類固醇、抗膽鹼能藥或PDE4抑制劑。
23.一種組合，其包括權利要求1-15任一項所述的化合物和選自丙酸氟替卡松、6α，9α-二氟-17α-[(2-呋喃基羰基)氧基]-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-氟代甲酯和6α，9α-二氟-11β-羥基-16α-甲基-3-氧代-17α-丙醯氧基-雄甾-1，4-二烯-17β-硫代羧酸S-(2-氧代-四氫呋喃-3S-基)酯的化合物。
24.用於治療的權利要求1-15任一項所述的化合物。
25.權利要求1-15任一項所述的化合物在製備藥物中的應用。
26.權利要求25的應用，其中所述藥物用於治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關的疾病或病症的哺乳動物。
27.權利要求26的應用，其中所述疾病或病症是與肺有關的疾病或病症。
28.權利要求27的應用，其中所述與肺有關的疾病或病症是哮喘或慢性阻塞性肺病。
29.權利要求26的應用，其中所述藥劑適於吸入給藥。
30.權利要求1-15任一項所述的化合物在製備用於治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關的疾病或病症的哺乳動物的藥物中的應用，所述藥物用於和一種或多種治療劑聯合給藥。
31.一種製備權利要求1-15任一項所述的式(I)化合物的方法，該方法包括(a)(i)在過渡金屬催化劑存在下，使式(III)的化合物 與(IV)的化合物反應 或(ii)使式(V)的化合物 與式(VI)的化合物反應 其中P1是羥基保護基團，R1a、R2a、R3a和R4a或者各自獨立地與式(I)中的R1、R2、R3和R4的定義相同，或者是-OP2，其中P2是羥基保護基團，A和B中一個是離去基團，而A和B中的另一個是-NH2；L是離去基團；且R5、R6、R7、R8、和R9如式(I)中所定義，得到式(VII)的化合物 (b)脫去保護基團P1得到式(VIII)的化合物 (c)當R1a、R2a、R3a或R4a任一個是-OP2時，脫去保護基團P2得到式(I)的化合物或其鹽或立體異構體。
32.根據權利要求31的方法製得的產品。
33.一種治療患有與β2腎上腺素能受體活性有關的疾病或病症的哺乳動物的方法，所述方法包括向所述哺乳動物給予治療有效量的權利要求1-15任一項所述的化合物。
34.權利要求33的方法，進一步包括給予治療有效量的一種或多種另外的治療劑。
35.權利要求34的方法，其中所述另外的治療劑是皮質類固醇、抗膽鹼能藥或PDE4抑制劑。
36.權利要求33的方法，其中所述方法包括吸入給予化合物。
37.一種治療哺乳動物中與肺有關的疾病或病症的方法，所述方法包括向所述哺乳動物給予治療有效量的權利要求1-15任一項所述的化合物。
38.一種治療哺乳動物中的哮喘或慢性阻塞性肺病的方法，所述方法包括向所述哺乳動物給予治療有效量的權利要求1-15任一項所述的化合物。
39.一種研究含β2腎上腺素能受體的生物系統或樣品的方法，所述方法包括(a)使生物系統或樣品與權利要求1-15任一項所述的化合物接觸；和(b)測定該化合物所引起的對生物系統或樣品的效應。
全文摘要
本發明提供了新的β
文檔編號C07D215/24GK1910137SQ200580002279
公開日2007年2月7日 申請日期2005年1月11日 優先權日2004年1月12日
發明者R·M·馬克金內爾, J·R·扎考布森, S·G·特拉普, D·R·塞託 申請人:施萬製藥