Il－23及其受體、相關試劑和方法

2023-05-16 16:01:21 2

專利名稱：Il－23及其受體、相關試劑和方法
技術領域：
本發明涉及影響哺乳動物生理機能(包括免疫系統功能)的組合物和方法。具體地講，本發明提供了調節發育和/或免疫系統的方法。本發明還公開了這些物質的診斷性和治療性用途。
背景技術：
總體而言，重組DNA技術指這樣的技術將供體源的遺傳信息整合入載體中，以供隨後進行加工，例如通過導入到宿主中，由此在新環境中拷貝和/或表達轉移的遺傳信息。通常，遺傳信息以互補DNA(cDNA)形式存在，cDNA源自編碼所需蛋白產物的信使RNA(mRNA)。載體經常為能夠摻入cDNA的質粒，用於以後在宿主中複製，在某些情況下，其實際上控制cDNA表達，由此引導所編碼產物在宿主中合成。參見例如Sambrook等，(1989)Molecular CloningALaboratory Manual，(第2版)1-3卷，CSH Press，NY。
一段時間以來，業已知曉哺乳動物免疫應答基於被稱為「免疫網絡」的一系列複雜的細胞相互作用。近期的研究為該網絡的內部工作情況提供了新視點。許多免疫應答實際上確實以淋巴細胞、巨噬細胞、粒細胞和其它細胞的網絡樣相互作用為中心，儘管這仍很明確，但現在，免疫學家一般認為，被稱為淋巴因子、細胞因子或單核因子的可溶性蛋白在控制這些細胞相互作用方面起關鍵作用。因此，細胞調節因子的分離、表徵和作用機制相當令人感興趣，理解這些方面對眾多醫學異常現象(如免疫系統障礙)的診斷和治療將產生顯著進步。
淋巴因子明顯以各種途徑介導細胞活性。參見例如Paul(編輯)(1996)Fundamental Immunology第3版，Raven Press，New York；和Thomson(編輯)(1994)The Cytokine Handbook第2版，Academic Press，San Diego。業已表明，淋巴因子支持多能造血幹細胞增殖、生長和/或分化成大量祖細胞，這些祖細胞含有組成複雜免疫系統的不同細胞譜系。細胞組分之間的適當且平衡的相互作用是健康免疫應答所必需的。當淋巴因子連同其它物質一起給予時，不同的細胞譜系經常以不同的方式應答。
對免疫應答特別重要的細胞譜系包括兩類淋巴細胞B細胞，其可生產和分泌免疫球蛋白(能夠識別和結合異物以使其去除的蛋白)；和各種亞群的T細胞，其分泌淋巴因子，誘導或抑制B細胞和組成免疫網絡的各種其它細胞(包括其它T細胞)。這些淋巴細胞與許多其它細胞類型相互作用。
免疫系統細胞一般不能在體外保持，這阻礙了為更好地了解和治療各種免疫疾病而進行的研究。免疫學家已發現，這些細胞中有許多可通過使用T細胞和其它細胞的上清液(其含各種生長因子，包括多種淋巴因子)實現培養。
存在各種調節形態發生發育的生長因子和調節因子。細胞因子的許多受體是已知的。通常，在功能受體中存在至少兩種關鍵的亞基。參見例如Heinrich等，(1998)Biochem.J.334297-314；Gonda andD′Andrea(1997)Blood 89355-369；Presky等，(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 9314002-14007；Drachman和Kaushansky(1995)Curr.Opin.Hematol.222-28；Theze(1994)Eur.Cytokine Netw.5353-368；以及Lemmon和Schlessinger(1994)Trends Biochem.Sci.19459-463。
根據前述內容，顯然，新的可溶性蛋白及其受體(包括類似於淋巴因子的可溶性蛋白及其受體)的發現和開發應當有助於廣泛的退行性或異常病症的新療法，所述病症直接或間接涉及例如免疫系統和/或造血細胞的發育、分化或功能。具體地說，發現和理解增強或加強其它淋巴因子有益活性的淋巴因子樣分子的新受體將是非常有利的。本發明提供與細胞因子樣組合物具有相似性的新配體受體和相關化合物及其使用方法。
發明概述本發明涉及與細胞因子受體相關的新受體及其生物活性，所述新受體例如為稱為DNAX細胞因子受體亞基(DCRS)的靈長類動物細胞因子樣分子結構。具體地說，本發明提供了對一種稱為DCRS5(也叫做IL-23R)的亞基的描述。本發明包括多肽編碼核酸自身及其製備和使用方法。本發明核酸的部分特徵在於其與本文包含的克隆互補DNA(cDNA)序列同源。另外，本發明提供了p40/p19配體與受體亞基DCRS5和IL-12Rβ1的配對，該配對使得可基於其所涉及試劑深入了解激動劑和拮抗劑所應用的適應症。
本發明提供含SEQ ID NO2胞內部分至少10個連續胺基酸的大致純或重組的多肽。在某些實施方案中，該多肽含SEQ ID NO2胞內部分至少25個連續胺基酸；是含SEQ ID NO2胞內部分的重組體；進一步含SEQ ID NO2非胞內部分的至少10個連續胺基酸；含SEQ ID NO2胞外部分的至少25個胺基酸；含成熟的SEQ ID NO2；或是大致純的天然多肽。在其它實施方案中，所述重組多肽由SEQID NO2的成熟序列組成；是非糖基化多肽；得自人類；含SEQ ID NO2的至少40個連續胺基酸；具有至少3個具有SEQ ID NO2的至少15個連續胺基酸的非重疊區段；是SEQ ID NO2的天然多態變異體；長度至少約30個胺基酸；具有至少兩個靈長類動物DCRS5特異性的非重疊表位；被天然糖基化且分子量至少為30kD；是合成多肽；為無菌形式；處於水性或緩衝溶液中；附著至固體基質；與另一個化學部分綴合；或與IL-12Rβ1多肽物理結合。
本發明的其它實施方案提供含SEQ ID NO2胞內部分至少12個連續胺基酸的大致純或重組的多肽；或含成熟SEQ ID NO2的大致純的天然序列多肽。多肽含至少兩個不同的非重疊區段，其中非重疊區段具有SEQ ID NO2胞內部分的至少6個連續胺基酸，這種多肽的具體形式是其中不同的非重疊區段包括一個至少12個胺基酸的區段；包括一個至少7個胺基酸的區段和第二個至少9個胺基酸的區段；包括第三個至少6個胺基酸的不同區段；或包含R355-L373、P378-L405、V407-D426、K428-D439、P441-V452、I454-G460、I465-T587或N592-606之一；或該多肽進一步包含至少兩個不同的非重疊區段，其中非重疊區段具有SEQ ID NO2胞外部分的至少6個連續胺基酸。或者，含SEQ ID NO2胞內部分至少12個連續胺基酸的多肽其中至少12個連續胺基酸的區段包含R355-L373、P378-L405、V407-D426、K428-D439、P441-V452、I454-G460、I465-T587或N592-606之一；或該多肽進一步包含至少兩個不同的非重疊區段，其中非重疊區段具有SEQ ID NO2胞外部分至少6個連續胺基酸。或者，含成熟SEQ ID NO2的純天然序列多肽可進一步含有純化或檢測表位。這樣的多肽可由SEQ ID NO2的成熟序列組成；為非糖基化多肽；得自人類；含SEQ ID NO2的至少40個連續胺基酸；具有至少三個非重疊區段，其中非重疊區段具有SEQ ID NO2的至少15個連續胺基酸；為SEQ ID NO2的天然多態變異體；長度至少約30個胺基酸；具有至少兩個靈長類動物DCRS5特異性的非重疊表位；被天然糖基化且分子量至少為30kD；是合成多肽；為無菌形式；處於水性或緩衝溶液中；附著至固體基質；與另一個化學部分綴合；或與IL-12Rβ1多肽物理結合。
本發明提供各種其它組合物，其例如包含與IL-12Rβ1蛋白組合的大致純的多肽；或在載體中的所述多肽，其中載體為水性化合物，包括水、鹽水和/或緩衝液；和/或配製用於口服、直腸、鼻、局部或胃腸外給藥的載體。
本發明提供試劑盒，其包含所述多肽和含該多肽的隔室(compartment)；含IL-12R□1多肽的隔室；含p40、p19或p40/p19多肽的隔室；或試劑盒中試劑的使用或處理說明書。
本發明提供抗體和其它結合化合物，所述抗體或結合化合物例如包含特異性結合DCRS5胞內部分的抗體的抗原結合位點，其中結合化合物在容器中；多肽得自人類；結合化合物為Fv、Fab或Fab2片段；結合化合物與另一個化學部分綴合；或者所述抗體針對表1成熟多肽的肽序列產生；針對成熟DCRS5產生；針對純化的人DCRS5產生；是經免疫選擇的；是多克隆抗體；結合變性DCRS5；與抗原的Kd至少為30μm；附著至固體基質，包括珠或塑料膜；於無菌組合物中；或被可檢測地標記，包括放射性或螢光標記。本發明還提供試劑盒，其包含結合化合物和含結合化合物的隔室；含以下多肽的隔室p40多肽；p19多肽；DCRS5多肽；和/或IL-12Rβ1多肽；含以下多肽編碼核酸的隔室p40多肽；p19多肽；DCRS5多肽；和/或IL-12Rβ1多肽；或試劑盒中試劑的使用或處理說明書。
本發明還提供例如生產抗原抗體複合物的方法，其包括在合適條件下使靈長類動物DCRS5多肽與抗體接觸，由此使複合物形成。這樣的方法可為其中複合物純化自其它細胞因子受體；複合物純化自其它抗體；接觸是和含幹擾素的樣品接觸；接觸允許定量檢測抗原；接觸是和含抗體的樣品接觸；或接觸允許定量檢測抗體。本發明提供其它組合物，例如，組合物包含無菌結合化合物，或結合化合物和載體，其中載體為水性化合物，包括水、鹽水和/或緩衝液；和/或配製用於口服、直腸、鼻、局部或胃腸外給藥的載體。
本發明還提供編碼DCRS5多肽的分離或重組核酸，其中DCRS5得自人類；或所述核酸編碼SEQ ID NO2的抗原肽序列；編碼SEQID NO2的多個抗原肽序列；在至少13個核苷酸中與編碼該區段的天然cDNA具有同一性；為表達載體；進一步包含複製起點；得自天然來源；含可檢測標記；含合成核苷酸序列；小於6kb，優選小於3kb；得自靈長類動物；含天然全長編碼序列；是DCRS5編碼基因的雜交探針；或是PCR引物、PCR產物或誘變引物。本發明提供含所述重組核酸的細胞，其中所述細胞為原核細胞、真核細胞、細菌細胞、酵母細胞、昆蟲細胞、哺乳動物細胞、小鼠細胞、靈長類動物細胞或人細胞。
試劑盒實施方案所包括的試劑盒含所述核酸和含該核酸的隔室；含以下多肽編碼核酸的隔室p40多肽；p19多肽；DCRS5多肽；和/或IL-12Rβ1多肽；含以下多肽的隔室p40多肽；p19多肽；DCRS5多肽；和/或IL-12Rβ1多肽；含選擇性結合以下多肽的抗體的隔室p40多肽；p19多肽；DCRS5多肽；和/或IL-12Rβ1多肽；或試劑盒中試劑的使用或處理說明書。
其它的核酸實施方案所包含的核酸在30分鐘、30℃、低於2M鹽的條件下與SEQ ID NO1中編碼胞內部分的部分雜交；或在至少約30個核苷酸的一段序列中與靈長類動物DCRS5的胞內部分具有同一性。優選地，這樣的核酸為其中洗滌條件為45℃和/或500mM鹽；或55℃和/或150mM鹽；或該序列段至少為55或75個核苷酸。
治療用途包括調節細胞的生理機能或發育的方法，其包括使細胞和以下物質接觸p40/p19拮抗劑，其是含靈長類動物DCRS5胞外部分和/或靈長類動物IL-12Rβ1胞外部分的複合物；p40/p19拮抗劑，其為結合含靈長類動物DCRS5和/或靈長類動物IL-12Rβ1的複合物的抗體；p40/p19拮抗劑，其為結合DCRS5的抗體；p40/p19拮抗劑，其為抗IL-12Rβ1抗體；p40/p19拮抗劑，其為DCRS5或IL-12Rβ1的反義核酸；或p40/p19激動劑，其為結合含靈長類動物DCRS5和/或靈長類動物IL-12Rβ1的複合物的抗體。在一類方法中，接觸是和拮抗劑接觸，並且接觸是與IL-12、IL-18、TNF和/或IFNγ的拮抗劑相結合；或細胞所來自的宿主具有慢性TH1介導疾病的病症或症狀；具有多發性硬化、類風溼性關節炎、骨關節炎、炎性腸病、糖尿病、銀屑病或敗血症的症狀和病症；或接受同種異體移植。相反，所述方法可為與激動劑接觸，以及接觸是與IL-12、IL-18、TNF或IFNγ相結合；或細胞所來自的宿主具有慢性TH2應答的病症或症狀；有腫瘤、病毒或真菌生長；接受疫苗；或有變態反應。
本發明提供治療經受生理疾病的人受治療者的方法，其包括給予有效量的DCRS5(SEQ ID NO1或2)或p19(SEQ ID NO5或6)的激動劑或拮抗劑，其中所述疾病包括類風溼性關節炎；哮喘或變態反應；慢性梗阻性肺病(COPD)；間質性肺病；炎性腸病(IBD)；或炎性皮膚病。本發明還提供以上方法，其中皮膚病為銀屑病或特應性皮炎；其中IBD是節段性迴腸炎(Crohn病)或潰瘍性結腸炎；其中間質性肺病是特發性肺纖維化、嗜酸性細胞肉芽腫或過敏性肺炎。
在另一個實施方案中，本發明提供以上方法，其中拮抗劑含衍生自特異性結合DCRS5(SEQ ID NO2)或p19(SEQ ID NO6)的抗體的抗原結合位點的結合組合物；或其中結合組合物含多克隆抗體、單克隆抗體、人源化抗體或Fab、Fv或F(ab′)2片段；或其中激動劑含DCRS5(SEQ ID NO2)或p19(SEQ ID NO6)；以及提供上述的方法，其中激動劑或拮抗劑包含核酸，或其中拮抗劑包含反義核酸或RNA幹擾核酸。
本發明的又一實施方案是診斷生理性疾病的方法，其包括將特異性結合DCRS5(SEQ ID NO1或2)或p19(SEQ ID NO5或6)的結合組合物與來自經受類風溼性關節炎、哮喘或變態反應、慢性梗阻性肺病(COPD)、間質性肺病、炎性腸病(IBD)或炎性皮膚病的測試受試者的樣品接觸。本發明還提供以上方法，其進一步包括使結合組合物與來源於對照受試者的樣品或對照樣品接觸；比較在測試受試者中觀測的結合和在對照受試者或對照樣品中觀測的結合。本發明提供以上方法，其中結合組合物含多克隆抗體；單克隆抗體；人源化抗體；Fab、Fv或F(ab′)2片段；核酸；或可檢測標記；以及提供上述方法，其中核酸包含探針或引物；或分子信標。
在另一個實施方案中，本發明提供上述診斷方法，其中樣品來源於人細胞、組織或生物流體；其中皮膚病為銀屑病或特應性皮炎；其中IBD是節段性迴腸炎或潰瘍性結腸炎；或其中間質性肺病是特發性肺纖維化、嗜酸性細胞肉芽腫或過敏性肺炎。
優選實施方案的詳述除非正文另有明確說明，否則本文(包括所附權利要求書)使用的單數形式的詞語，例如「a」、「an」和「所述(the)」，包括其對應的複數形式。在本文中提到的所有參考文獻都引入作為參考，其程度如同各個單獨的出版物、專利申請或專利被明確和個別指出引入作為參考。
I.一般描述本發明提供哺乳動物(本文為靈長類動物)細胞因子受體樣亞基分子的胺基酸序列和DNA序列，該亞基分子被稱為DNAX細胞因子受體亞基5(DCRS5)，具有特別限定的結構和生物學特性。編碼這些分子的各種cDNA都得自靈長類動物(例如人)cDNA序列文庫。其它靈長類動物或其它哺乳動物相應物也合乎要求。
另外，本發明提供p40/p19配體與受體亞基DCRS5和IL-12Rb1的匹配，該配對基於其所涉及試劑為激動劑和拮抗劑所應用的適應症提供了深入了解。
描述或引用了一些可應用的標準方法，參見例如Maniatis等，(1982)Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold SpringHarbor Press；Sambrook等，(1989)Molecular CloningA LaboratoryManual，(第2版)，13卷，CSH Press，NY；Ausubel等，(1987和定期增刊)Current Protocols in Molecular Biology，Greene/Wiley，New York。
本發明提供靈長類動物(例如人)DCRS5編碼區段的核苷酸序列(SEQ ID NO1)和對應的胺基酸序列(SEQ ID NO2)。標出了預測的信號序列，但其可能取決於細胞類型，或者可為任一方向的一些殘基。潛在的N糖基化位點位於天冬醯胺殘基6、24、58、118、157、209和250(SEQ ID NO2)。在29位和78位的半胱氨酸之間可能存在二硫鍵；在110/121/123位存在保守的C_CXW基序。219位的色氨酸和281-285的WxxWS基序值得注意。約1-101的區段是Ig結構域；約102-195的區段是細胞因子結合結構域1；約196-297的區段是細胞因子結合結構域2；約298-330的區段是接頭；約329-354的區段是跨膜區段；約356-606的區段是胞內結構域。胞內特徵包括在Y374-I377、Y461-Q464和Y588-Q591的推定SH2結合位點；和在406、427、440和453的可能重要的酪氨酸殘基。
可讀框(ORF)含推定的信號序列，預計其在如上所示的...CHG/GIT...被切割。預測的328個胺基酸的胞外結構域後接推定的跨膜區段，最後是約252個胺基酸的胞質結構域。預計配體結合功能處於胞外結構域。鑑別出的變異位置在核苷酸127和563(SEQ IDNO1)。含核苷酸127的密碼子可編碼組氨酸或穀氨醯胺，而含核苷酸563的密碼子可編碼精氨酸、甘氨酸或色氨酸。
表1.各種細胞因子受體亞基的序列比對。人IL-6受體蛋白gp130是SEQ ID NO3(GenBank M57230)；人IL-12受體β2亞基是SEQ IDNO4(GenBank U64198)。
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表1顯示了可獲得的靈長類動物受體亞基序列和靈長類動物(例如人)DCRS5(IL-30R)的序列對比。DCRS5顯示與IL-6受體亞基gp130(例如IL-6R亞基)和IL-12Rβ2亞基具有相似性。DCRS5具有β亞基的結構特徵，但真正的蛋白相互作用和信號轉導序列仍未確定。
本文使用的術語DCRS5用於描述含SEQ ID NO2的胺基酸序列的蛋白。在許多情況下，其重要片段是在功能或結構上等同的片段，包括例如另外的胞外區段。本發明還包括已提供序列的各個DCRS5等位基因的蛋白變異體，例如突變蛋白或其它構建物。通常，這樣的變異體與靶區域具有少於約10％的序列差異，因此經常具有1-11重的置換，例如2重、3重、5重、7重等。本發明還包括所述蛋白的等位基因變異體和其它變異體，例如天然多態性。通常，其可能以和α受體亞基二聚化的形式與其對應的生物配體高親和性結合，親和性例如至少約100nM，通常低於約30nM，優選低於約10nM，更優選低於約3nM。該術語在本文中還用於指相關的天然形式，例如哺乳動物蛋白的等位基因變異體、多態變異體和代謝變異體。優選形式的受體複合物以適於配體-受體相互作用的親和性和選擇性結合合適的配體。
本發明還包括與SEQ ID NO2和6的胺基酸序列具有顯著胺基酸序列同一性的蛋白或肽的組合。其包括具有相對較少置換的序列變異體，例如優選少於約3-5個置換。
可通過用p19的抗原性區段或片段免疫，製備人p19特異性的結合組合物。這些結合組合物包括多克隆抗體、單克隆抗體、人源化抗體、抗體片段(例如Fab、Fv或F(ab′)2片段)、雙鏈抗體(diabody)、單鏈抗體、雙功能抗體和抗體的肽模擬物。任選使用Vector NTISuite(Informax，Inc.，Bethesda，MD)的軟體，按照Parker等，(1986)Biochemistry 255425-5432和Welling等，(1985)FEBS Lett.188215-218的分析，人p19抗原性增加的區域包括例如SEQ ID NO6的胺基酸16-21、57-69、72-81、136-140、143-146、151-154和135-164。
重要的肽「片段」或「區段」是這樣一段胺基酸殘基序列，該序列至少約8個胺基酸，一般至少10個胺基酸，更一般至少12個胺基酸，通常至少14個胺基酸，更通常至少16個胺基酸，典型至少18個胺基酸，更典型至少20個胺基酸，經常至少22個胺基酸，更經常至少24個胺基酸，優選至少26個胺基酸，更優選至少28個胺基酸，在特別優選的實施方案中，至少約30個或更多個胺基酸。不同蛋白的區段序列可在合適長度的序列段內互相對比。在許多情況下，片段可具有完整亞基的功能特性，例如跨膜受體的胞外結構域可保留配體結合特徵，並可用於製備可溶性受體樣複合物。
通過優化殘基匹配，測定胺基酸序列同源性或序列同一性。在某些對比中，可根據需要引入空位，參見例如Needleham等，(1970)J.Mol.Biol.48443-453；Sankoff等，(1983)Time Warps，String Edits，andMacromoleculesThe Theory and Practice of Sequence Comparison，第1章，Addison-Wesley，Reading，MA；IntelliGenetics，Mountain View，CA的軟體包；和University of Wisconsin Genetics Computer Group(GCG)，Madison，WI。當認為保守置換是匹配時，同源性可變化。保守置換通常包括以下組別中的置換甘氨酸、丙氨酸；纈氨酸、異亮氨酸、亮氨酸；天冬氨酸、穀氨酸；天冬醯胺、穀氨醯胺；絲氨酸、蘇氨酸；賴氨酸、精氨酸；以及苯丙氨酸、酪氨酸。在細胞因子序列中，同源胺基酸序列擬包括天然等位基因變異和種間變異。典型的同源蛋白或肽與SEQ ID NO2的胺基酸序列區段的同源性為50-100％(如果引入空位的話)至60-100％(如果包括保守置換的話)。同源性測量值為至少約70％，一般至少76％，更一般至少81％，通常至少85％，更通常至少88％，典型至少90％，更典型至少92％，經常至少94％，更經常至少95％，優選至少96％，更優選至少97％，在特別優選的實施方案中，至少98％或更高。同源程度隨著對比區段的長度而變化。同源蛋白或肽，如等位基因變異體，將具有SEQ ID NO2(特別是胞內部分)的大部分生物活性。
本文使用的術語「生物活性」無限制性地用於描述細胞因子樣配體對信號轉導、炎症反應、先天免疫和/或形態發生發育的作用。例如，這些受體應介導磷酸酶或磷酸化酶活性，該活性易於通過標準方法檢測。參見例如Hardie等，(編輯)(1995)The Protein KinaseFactBook I和II卷，Academic Press，San Diego，CA；Hanks等，(1991)Meth.Enzymol.20038-62；Hunter等，(1992) Cell 70375-388；Lewin(1990)Cell 61743-752；Pines等，(1991)Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.56449-463；和Parker等，(1993)Nature 363736-738。受體或其部分可用作磷酸標記酶，以標記一般性或特異性底物。亞基還可為可激發識別抗體的功能性免疫原或能夠結合抗體的抗原。
術語例如DCRS5蛋白的配體、激動劑、拮抗劑和類似物以配體-受體相互作用為特徵，例如其中受體是天然受體或抗體。通常，細胞應答可能通過受體酪氨酸激酶途徑被介導。
另外，配體是起結合所述受體或其類似物的天然配體作用的分子，或是作為天然配體的功能類似物的分子。功能類似物可為具有結構修飾的配體，或者可為具有與合適的配體結合決定蔟相互作用的分子形狀的完全不相關分子。配體可起激動劑或拮抗劑作用，參見例如Goodman等，(編輯)(1990)Goodman Gilman′sThePharmacological Bases of Therapeutics，Pergamon Press，New York。
合理的藥物設計還可基於受體或抗體和其它效應物或配體的分子形狀的結構研究。參見例如Herz等，(1997)J Recept.Signal Transduct.Res.17671-776；和Chaiken等，(1996)Trends Biotechnol.14369-375。效應物可以是對在配體結合應答而介導其它功能的其它蛋白，或與受體正常相互作用的其它蛋白。一種測定哪些位點與特定的其它蛋白相互作用的方法是物理結構測定法，例如x-射線晶體學或2維NMR技術。這些技術將提供關於哪些胺基酸殘基形成分子接觸區的指引。關於蛋白結構測定的詳述，參見例如Blundell和Johnson(1976)ProteinCrystallography，Academic Press，New York。
II.活性細胞因子受體樣蛋白將具有多種不同的生物學活性，例如，如經STAT4進行胞內信號轉導、調節細胞增殖或在磷酸代謝中加入至特異性底物(通常為蛋白)或由特異性底物中移除。這一般對炎症功能、其它先天免疫應答或形態學作用產生調節。亞基可能以特定的低親和性結合配體。
DCRS5具有通過JAK途徑進行信號轉導的受體特徵基序。參見例如Ihle等，(1997)Stem Cells 15(增刊1)105-111；Silvennoinen等，(1997)APMIS 105497-509；Levy(1997)Cytokine Growth Factor Review881-90；Winston和Hunter(1996)Current Biol.6668-671；Barrett(1996)Baillieres Clin.Gastroenterol.101-15；和Briscoe等，(1996)Philos.Trans.R.Soc.Lond.B.Biol.Sci.351167-171。特別令人感興趣的是上述SH2結合基序。
細胞因子受體亞基的生物活性與磷酸部分加入至底物或由底物移除相關，加入或移除通常為特異性方式，但偶爾為非特異性方式。可通過標準方法鑑別底物或分析酶活性條件，如Hardie等，(編輯)(1995)The Protein Kinase FactBook I和II卷，Academic Press，SanDiego，CA；Hanks等，(1991)Meth.Enzymol 20038-62；Hunter等，(1992)Cell 70375-388；Lewin(1990)Cell 61743-752；Pines等，(1991)ColdSpring Harbor Symp.Quant.Biol.56449-463；和Parker等，(1993)Nature 363736-738所述。
受體亞基可組合形成功能複合物，例如其可用於結合配體或製備抗體。這些受體亞基具有重要的診斷用途，包括檢測和定量。受體和p40/p19配體的功能性連接為受體可應用的臨床適應症提供了重要理解。因此，拮抗劑和激動劑具有預測的功能作用。
在活化的情況下，肥大細胞、T細胞和NK細胞表現出IL-23的p19亞基的表達增加，而活化的樹突細胞表現出IL-23的p40亞基的表達增加。這些細胞與各種炎性疾病和病症的病理相關。
肥大細胞在哮喘和變態反應、COPD、類風溼性關節炎、IBD(例如節段性迴腸炎或潰瘍性結腸炎)和皮膚炎症(例如銀屑病或特應性皮炎)的病因學中起作用，參見例如Edwards(2003)Clin.Exp.Allergy331164-1165；Grashoff等，(1997)Am.J.Pathol.1511785-1790；Woolley(2003)New Engl.J.Med.3481709-1711；Malaviya等，(1995)Am.J Ther.2787-792；Jiang等，(2001)Int.J.Dermatol.40699-703。
NK細胞涉及哮喘和變態反應、類風溼性關節炎和皮膚病(例如銀屑病或特應性皮炎)的機理，參見例如Korsgren(2002)Curr.Phare.Des.81871-1876；Cameron等，(2003)Br.J.Dermatol.149160-164。
DC與哮喘和變態反應、類風溼性關節炎、炎性腸病(IBD)(例如節段性迴腸炎或潰瘍性結腸炎)和皮膚病(例如銀屑病或特應性皮炎)相關，參見例如Upham(2003)Respirology 8140-148；Santiago-Schwarz等，(2001)J.Immunol.1671758-1768；Stagg等，(2003)Gut 521522-1529；Mrowietz等，(2001)Exp.Dermatol.10238-245。
IL-23的p19亞基在各種肺病(例如間質性肺病)中表現出表達增加。本發明提供用於治療或診斷間質性肺病的IL-23的激動劑或拮抗劑，例如p19或DCRS5多肽或核酸的特異性結合組合物。間質性肺病包括特發性肺纖維化、肺部嗜酸性細胞肉芽腫或過敏性肺炎。預後可怕的特發性肺纖維化涉及肺泡上皮細胞活化、纖維形成病灶和胞外基質沉積。出現炎症，但主要特徵在於纖維形成病灶(參見例如Kamp(2003)Chest 1241187-1189；White等，(2003)J.Pathol.201343-354)。肺部嗜酸性細胞肉芽腫是一種局在性非惡性組織細胞增多病。其可消散，或發展至纖維變性階段。該病與吸菸有關(參見例如Levine和Nickelleit(1994)New Engl.J.Med.330347-353；Rajagopol和Mark(2002)New Engl.J.Med.3471262-1268；Miadoma等，(2000)MonaldiArch Chest Dis.553-5)。過敏性肺炎(也叫做外因性變應性肺泡炎)由吸入的變應原引起，與外周氣道和周圍的間質組織中的炎症有關。單核細胞積聚並成熟為泡沫狀巨噬細胞，其發展成肉芽腫。該病還包括細支氣管炎、間質淋巴細胞浸潤，並可包括「蜂窩肺」纖維化(參見例如Patel等，(2001)J.Allergy Clin.Immunol.108661-670；Yi(2002)Crit.Rev.Clin.Lab.Sci.39581-629)。
IL-23的p19亞基在蛔蟲(Ascaris)處理時也表現出表達增加。蛔蟲處理是一種變態反應和哮喘模型。蠕蟲處理，例如蛔蟲，用於肺病動物模型，例如氣管過度反應、哮喘、肺嗜酸粒細胞增多和變態反應。蛔蟲處理誘導肺嗜酸粒細胞增多，其是哮喘的特徵。蛔蟲還誘導肺中性白細胞增多，其是COPD的特徵。接觸蛔蟲與人類哮喘相關(參見例如Billah等，(20Q2)J.Pharmacol.Exp.Therapeutics302127-137；Mochizuki等，(2001)Eur.J.Pharmacol.430123-133；Boucher等，(1979)J.Allergy Clin.Immunol.64197-201；Padrid等，(1995)Am.J Respir.Crit.Care Med.151184-193；Sengoku等，(2001)Pharmacol.6382-89；Abraham等，(1999)Am.J.Respir.Crit.Care Med.1591205-1214；Jones等，(1998)Can.J.Physiol.Pharmacol.76210-217；Wright等，(1999)J.Pharmacol.Exp.Therapeutics 2891007-1014；D』Brot等，(1989)Am.Rev.Respir.Dis.139915-920；Barnes(2000)NewEngl.J.Med.343269-280；Palmer等，(2002)Am.J.Respir.Crit.CareMed.1651489-1493；Lynch等，(1997)Am.J.Respir.Crit.Care Med.15650-54)。
在IBD如節段性迴腸炎中，IL-23的p19亞基和IL-23R的表達出現增加。而且，蠕蟲、原生動物和寄生蟲與腸炎症如IBD的發病率增加有關(參見例如Sacco等，(1998)Am.J.Pathol.1531717-1722；Takeyama等，(1997)J.Gastroenterol.Hepatol.12204-206；Bundy(1986)Trans.R.Soc.Trop.Med.Hyg.80706-718；Tanaka等，(1983)Parasitology 86291-300；Ustun等，(2003)World J.Gastroenterol.91834-1835；Waters等，(1999)J.Parasitol.851100-1105；Faussone-Pellegrini等，(2002)Neurogastroenterol.Motil.1483-95)。
本發明的IL-23R在COPD患者的Clara細胞上的表達增加。Clara細胞是氣道的無纖毛呼吸道上皮細胞，在例如哮喘、吸菸和COPD中調節氣道病理學。COPD與Clara細胞的生理學變化相關(參見例如Pilette等，(2001)Am.J.Respir.Crit.Care Med.163185-194；Kaup等，(1990)Equine Vet J.22349-355；Zhang等，(2001)Zhonghua Jie He HeHu Xi Za Zhi 24524-526)。Clara細胞產生許多調節免疫應答的分子，例如子宮珠蛋白(也叫做Clara細胞分泌蛋白)。在哮喘和COPD中，Clara細胞減少，粘液細胞增多，其中由此出現的粘液產生增加促成了氣道阻塞。Clara細胞似乎是粘液細胞的前體細胞(參見例如Jeffrey(1998)Thorax 553129-136；Rogers(2002)Clin.Exp.Allergy 321124-1127；Watson等，(2001)Am.J.Physiol.Lung Cell Mol.Physiol.281L1523-L1530；Reader等，(2003)Am.J.Physiol.1622069-2078；Stripp等，(2002)Am.J.Respir.Cell Mol.Biol.27170-178)。纖維化是哮喘和慢性梗阻性肺病(COPD)的病理特徵，參見例如Barnes(2000)New Engl.J.Med.343269-280；Barnes(2000)Chest 11710s-14s；Saetta等，(2001)Eur.Respir.J.Suppl.3418s-23s；Redington(2000)MonaldiArch.Chest Dis.55317-323；Vignola等，(2001)Curr.Allergy AsthmaRep.1108-115。
細胞因子，例如腫瘤壞死因子(TNF)、IL-4或IL-13，可刺激IL-23、p19或DCRS5(也叫做IL-23R)表達。相反，IL-23可刺激許多細胞因子如IL-6、IL-19、CXCL-1和IL-17表達。TNF促成了許多炎性疾病，例如哮喘、COPD、類風溼性關節炎、炎性腸病(IBD)和銀屑病，參見例如Das等，(2002)Pulm.Pharmacol.Ther.15409-416；Halasz等，(2002)Respir.Med.96262-267；Barnes(2000)New Engl.J.Med.343269-280；Tutuncu等，(2002)Clin.Exp.Rheumatol.20(6 suppl.28)s146-151。IL-4在哮喘、變態反應和COPD中起作用，而IL-13是哮喘和變態反應、COPD、類風溼性關節炎、IBD(例如節段性迴腸炎或潰瘍性結腸炎)和皮膚病(例如銀屑病或特應性皮炎)機理的一部分，參見例如Steinke等，(2001)Respir.Res.266-70；Jeffery(2001)Novartis Found.Symp.234149-161；van der Pouw Kraan等，(2002)Genes Immuno1.3436-439；Spadero等，(2002)Clin.Exp.Rheumatol.20213-216；Bouma等，(2003)Nat.Rev.Immunol.3521-533；Van derPloeg等，(1997)Clin.Exp.Immunol.109526-532。
III.核酸本發明設想了應用分離的核酸或片段，例如編碼這些蛋白或緊密相關蛋白或其片段的分離的核酸或片段，來例如編碼對應的多肽，優選具有生物活性的多肽。另外，本發明包括編碼蛋白或多肽組合的分離或重組DNA，所述蛋白或多肽具有例如DCRS5(SEQ ID NO2)或人p19(SEQ ID NO6)的特徵序列，DCRS5或人p19是單獨的，或者分別與其它物質如IL-12Rβα1或p40組合(參見Showe等，(1996)Ann.N.Y.Acad.Sci.795413-425；Gately等，(1998)Ann.Rev.Immunol.16495-521；GenBank U03187，NM_005535)。通常，所述核酸能夠在合適的條件下與SEQ ID NO1或5的核酸序列區段雜交，但優選不與表1所述的其它受體(即hIL-6R gp130或hIL-1Rβ2)的對應區段雜交。所述生物活性蛋白或多肽可為全長蛋白或片段，通常具有與SEQID NO2所示序列高度同源的胺基酸序列區段(例如具有顯著同一性的序列段)。而且，本發明包括分離或重組的核酸或其片段的應用，其中所述核酸或片段編碼具有與DCRS5蛋白(例如胞內部分)等同之片段的蛋白。分離的核酸在其5′和3′側可具有單獨的調節序列，例如啟動子、增強子、聚腺苷酸加入信號和該天然基因的其它調節序列。還提供如所述的組合，例如包含DCRS5和IL-12Rβ1、或包含它們的胞外配體結合部分作為配體拮抗劑的組合。診斷用途明顯也是重要的，例如多態變異體或其它變異體的診斷用途。
「分離的」核酸，例如RNA、DNA或混合的聚合物，是大致純的，例如與天然伴隨天然序列的其它組分、如起源物種的核糖體、聚合酶和側翼基因組序列相分離。該術語包括由其天然環境中取出的核酸序列，包括重組或克隆的DNA分離物，由此可使其可區別於天然組合物和化學合成的類似物或異源系統生物合成的類似物。大致純的分子包括完全純或大致純的分離形式的分子。
分離的核酸一般是分子的均一組合物，但在某些實施方案中，含不均一性，優選不均一性較小。這種不均一性通常存在於聚合物末端或對所需生物活性或功能不關鍵的部分中。
「重組」核酸分子通常由其生產方法或其結構定義。關於其生產方法，例如方法製備的產物，該方法使用重組核酸技術，例如涉及核苷酸序列中的人為幹預的技術。通常，此幹預涉及體外操作，儘管在某些環境下其可能涉及更經典的動物育種技術。或者，其可為通過產生含兩種片段的融合物的序列而製備的核酸，其中所述片段彼此之間不天然連續，但該術語將天然產物排除在外，例如以其天然狀態存在的天然突變異體。因此，例如，包括用具有非天然載體轉化細胞而製備的產物，也包括含使用任何合成寡核苷酸方法衍生的序列的核酸。這樣的方法經常被實行，以例如某密碼子被編碼相同或保守胺基酸的冗餘密碼子所替換，同時通常導入或去除限制酶序列識別位點，或用於某些結構-功能分析。或者，實行該方法，以將所需功能的核酸區段連接在一起，產生含在通常可獲得的天然形式中不存在的所需功能組合(例如編碼融合蛋白)的單個遺傳實體。限制酶識別位點經常是此種人工操作的靶，但其它位點特異性的靶，例如啟動子、DNA複製位點、調節序列、控制序列或其它有用特徵，可通過設計加入。計劃將相似的理念應用於重組體，例如融合蛋白、多肽。其可包括DCRS5和IL-12Rβ1亞基的二聚重複序列或融合體。具體而言，包括合成核酸，其由於遺傳密碼冗餘性而編碼與DCRS5片段和各種不同相關分子(例如其它細胞因子家族成員)的序列的融合蛋白等同的多肽。
有關核酸方面的「片段」是至少約17個核苷酸的連續區段，一般至少21個核苷酸，更一般至少25個核苷酸，平常至少30個核苷酸，更平常至少35個核苷酸，經常至少39個核苷酸，更經常至少45個核苷酸，典型至少50個核苷酸，更典型至少55個核苷酸，通常至少60個核苷酸，更通常至少66個核苷酸，優選至少72個核苷酸，更優選至少79個核苷酸，在特別優選的實施方案中，至少85個或更多個核苷酸，包括90、100、120、140、160、180、200個等。通常，不同基因序列的片段可在合適的長度段(特別是例如下文描述的結構域的限定區段)內相互對比。
編碼DCRS5或p19的核酸對鑑別編碼自身或緊密相關蛋白的基因、mRNA和cDNA物質以及編碼多態變異體、等位基因變異體或其它基因變異體(例如來自不同個體或相關物種)的DNA特別有用。用於這種篩選的優選探針是不同多態變異體之間保守或含沒有特異性的核苷酸的那些受體區域，優選為全長或接近全長。在其它情況下，多態變異體特異性序列更有用。還可以診斷DCRS5多態變異體和IL-12β1變異體的組合。
在核酸序列對比方面的大致同一性是指在比對時區段或其互補鏈在具有合適的核苷酸插入或缺失的情況下優化比對時，至少約60％的核苷酸是相同的，一般至少66％，普通至少71％，經常至少76％，更經常至少80％，通常至少84％，更通常至少88％，典型至少91％，更典型至少約93％，優選至少約95％，更優選至少約96-98％或更高的核苷酸，在具體的實施方案中，高至約99％或更高的核苷酸，包括例如編碼結構域的區段或所述其它區段是相同的。或者，當在選擇性雜交條件下所述區段與某鏈或其互補鏈(通常使用來源於SEQ IDNO1或5的序列)雜交時，存在大致同一性。通常，在至少約14個核苷酸的一段序列中具有至少約55％同源性時發生選擇性雜交，更通常至少約65％，優選至少約75％，更優選至少約90％，參見例如Kanehisa(1984)Nucl.Acids Res.12203-213。如所述，同源對比的長度可處於較長的序列段範圍內，在某些實施方案中，在至少約17個核苷酸的序列段範圍內，一般至少約20個核苷酸，普通至少約24個核苷酸，通常至少約28個核苷酸，典型至少約32個核苷酸，更典型至少約40個核苷酸，優選至少約50個核苷酸，更優選至少約75-100或更多個核苷酸。這包括例如125、150、175、200、225、250、275、300、325、350等和其它長度。
涉及雜交方面的同源性時，嚴格條件是通常在雜交條件中所控制的鹽、溫度、有機溶劑和其它參數的嚴格組合條件。嚴格溫度條件通常包括超過約30℃的溫度，更通常超過約37℃，典型超過約45℃，更典型超過約55℃，優選超過約65℃，更優選超過約70℃。嚴格鹽條件普通低於約500mM，通常低於約400mM，更通常低於約300mM，典型低於約200mM，優選低於約100mM，更優選低於約80mM，甚至低至低於約50或20mM。但是，參數組合遠比檢測任一單個參數重要，參見例如Wetmur和Davidson(1968)J.Mol.Biol.31349-370。
分離的DNA可容易地通過核苷酸置換、核苷酸缺失、核苷酸插入和核苷酸序列段倒位修飾。這些修飾產生編碼該蛋白或其衍生物的新DNA序列。這些修飾序列可用於產生突變蛋白或增強變異體物質的表達。增強的表達可能涉及基因擴增、轉錄增加、翻譯增加和其它機制。這樣的突變DCRS5所具有的胺基酸序列與天然存在的其它細胞因子受體樣蛋白的胺基酸序列不同，無論是缺失、置換還是插入。具體地說，「位點特異性突變DCRS5」包括與SEQ ID NO2的蛋白具有大致序列同一性的蛋白，通常具有本文所公開形式的大部分生物活性或作用。還將鑑定各種天然多態變異體序列。
儘管預先確定了位點特異性突變位點，但突變異體不必是位點特異性的。哺乳動物DCRS5誘變可通過在與表達相關聯的基因中產生胺基酸插入或缺失來實現。可產生置換、缺失、插入或許多組合從而獲得最終的構建物。插入包括氨基或羧基末端融合。可在靶密碼子進行隨機誘變，然後可根據所需活性，對所表達的哺乳動物DCRS5突變異體進行篩選，提供某些方面的結構-活性關係。在具有已知序列的DNA中於預先確定的位點產生置換突變的方法在本領域眾所周知，例如利用M13引物誘變。另參見Sambrook等，(1989)和Ausubel等，(1987和定期增刊)。特別有用的構建物是與IL-12Rβ1區段結合的DCRS5的胞外部分。
DNA中的突變一般不應將編碼序列置於讀框外，優選不產生能夠雜交而產生二級mRNA結構(例如環或髮夾結構)的互補區。
Beaucage和Carruthers(1981)Tetra.Letts.221859-1862描述的亞磷醯胺法可產生合適的合成DNA片段。經常通過合成互補鏈並在合適的條件下將鏈一起退火，或通過使用合適引物序列和DNA聚合酶加入互補鏈，獲得雙鏈片段。
聚合酶鏈式反應(PCR)技術通常可用於誘變。或者，誘變引物是常用的在預定位點產生限定突變的方法。參見例如Innis等，(編輯)(1990)PCR ProtocolsA Guide to Methods and ApplicationsAcademic Press，San Diego，CA；以及Dieffenbach和Dveksler(編輯)(1995)PCR PrimerA Laboratory Manual Cold Spring Harbor Press，CSH，NY。
本發明的某些實施方案涉及含所述受體序列的聯合組合物。在其它實施方案中，序列的功能部分可連接在一起，以編碼融合蛋白。在其它形式中，所述序列的變異體可被置換。
IV.蛋白，肽如上所述，本發明包括靈長類動物DCRS5和p19，例如其序列公開於SEQ ID NO1-2和5-6的以及上述的DCRS5和p19。還設想了等位基因變異體和其它變異體，包括例如組合了所述序列的部分和其它序列(包括例如IL-12Rβ1、p40、附加表位和功能結構域)的融合蛋白。
本發明還提供重組蛋白，例如使用這些靈長類動物或嚙齒類動物蛋白區段的異源融合蛋白。異源融合蛋白是一般天然不以同樣方式融合的蛋白或區段的融合體。因此，DCRS5和另一種細胞因子受體的融合產物是一種連續蛋白分子，其序列以典型的肽鍵融合，通常製成單個翻譯產物，並具有來自每個來源肽的特性，例如序列或抗原性。相似的概念適用於異源核酸序列。還提供成為複合物的各種指定蛋白的組合。
另外，可組合其它相關蛋白(例如細胞因子受體或Toll樣受體，包括種變異體)的相似功能域或結構域而製備新構建物。例如，不同新融合多肽或片段之間的配體結合區段或其它區段可為「可交換的」，參見例如Cunningham等，(1989)Science 2431330-1336；O′Dowd等，(1988)J Biol.Chem.26315985-15992。因此，具有新的特異性組合的新嵌合多肽將產生自受體結合特異性的功能性連接。例如，可加入其它相關受體分子的配體結合結構域，或用其置換該蛋白或相關蛋白的其它結構域。所得蛋白通常具有雜合的功能和特性。例如，融合蛋白可包括靶向結構域，該結構域可用於使融合蛋白匯集至特定的亞細胞器。
候選的融合配偶體和序列可選自各種序列資料庫，例如GenBank，c/o IntelliGenetics，Mountain View，CA；和GCG，University ofWisconsin Biotechnology Computing Group，Madison，WI。具體地說，特別優選SEQ ID NO2-4中提供的多肽序列的組合。可以所述組合中蛋白的變異體形式可被置換。
本發明特別提供結合細胞因子樣配體和/或影響信號轉導的突變蛋白。人DCRS5和細胞因子受體家族其它成員的結構比對顯示了保守的特徵/殘基(表1)。人DCRS5序列和細胞因子受體家族其它成員的比對表明了各種共有的結構和功能特徵。另參見Bazan等，(1996)Nature 379591；Lodi等，(1994)Science 2631762-1766；Sayle和Milner-White(1995)TIBS 20374-376；和Gronenberg等，(1991)ProteinEngineering 4263-269。
特別優選用小鼠序列或人序列置換。相反，遠離配體結合互作區的保守取代有可能保留大部分信號轉導活性；遠離胞內結構域的保守取代有可能保留大部分配體結合特性。
靈長類動物DCRS5的「衍生物」包括胺基酸序列突變異體、糖基化變異體、代謝衍生物和與其它化學部分的共價或聚集綴合物。共價衍生物可通過例如本領域眾所周知的方法，將官能團連接至存在於DCRS5胺基酸側鏈或N-末端的基團來製備。這些衍生物可包括但不限於羧基端的脂肪族酯或醯胺，或含羧基側鏈的殘基的脂肪族酯或醯胺，含羥基殘基的O-醯基衍生物，和含氨基末端胺基酸或含氨基殘基(例如賴氨酸或精氨酸)的N-醯化衍生物。醯基選自烷基部分，包括C3至C18正烷基的基團，由此形成烷醯基芳醯基物質。
具體地說，包括糖基化改變，例如在其合成和加工過程中或在進一步的加工步驟中通過改變多肽的糖基化模式而產生的糖基化改變。用於實現糖基化改變的特別優選的方法是使多肽接觸來源於一般提供這種加工的細胞的糖基化酶，例如哺乳動物糖基化酶。還設想了去糖基化酶。還包括具有其它微小修飾的相同一級胺基酸序列形式，所述修飾包括磷酸化胺基酸殘基，例如磷酸酪氨酸、磷酸絲氨酸或磷酸蘇氨酸。
主要類別的衍生物是受體或其片段和其它多肽蛋白的共價綴合物。這些衍生物可在重組培養基中合成，如N端融合蛋白，或使用本領域已知的在通過反應性側基交聯蛋白方面有用的物質來合成。優選的與交聯劑衍化的位點為游離氨基、碳水化合物部分和半胱氨酸殘基。
還提供受體和其它同源或異源蛋白間的融合多肽。同源多肽可為不同受體之間的融合體，產生例如具有多種不同細胞因子配體結合特異性的雜合蛋白，或可放寬或弱化底物作用特異性的受體。同樣，可構建具有衍生蛋白的特性或活性組合的異源融合體。典型實例是報告多肽(如螢光素酶)和受體區段或結構域(如配體結合區段)的融合體，以使所需配體的存在和定位易於測定，參見例如授予Dull等的美國專利第4,859,609號。其它基因融合配偶體包括穀胱甘肽-S-轉移酶(GST)、細菌β-半乳糖苷酶、trpE、A蛋白、β-內醯胺酶、α澱粉酶、乙醇脫氫酶和酵母α交配因子，參見例如Godowski等，(1988)Science 241812-816。所述蛋白組合中的標記蛋白經常被置換。
Beaucage和Carruthers(1981)Tetra.Letts.221859-1862的亞磷醯胺法可產生合適的合成DNA片段。通常通過合成互補鏈並在合適的條件下將鏈退火在一起，或通過使用合適引物序列和DNA聚合酶加入互補鏈，獲得雙鏈片段。
這種多肽還可以具有這樣的胺基酸殘基，所述胺基酸殘基已通過磷酸化、磺化、生物素化、或者添加或去除其它部分(特別是具有類似於磷酸基團的分子形狀的那些部分)而加以化學修飾。在某些實施方案中，修飾是有用的標記試劑，或用作純化靶，例如親和配體。
融合蛋白通常利用重組核酸方法或合成肽方法製備。核酸操作和表達的技術一般述於例如Sambrook等，(1989)Molecular CloningALaboratory Manual(第2版)，13卷，Cold Spring Harbor Laboratory，和Ausubel等，(編輯)(1987和定期增刊)Current Protocols in MolecularBiology，Greene/Wiley，New York。合成肽技術的描述參見例如Merrifield (1963)J Amer.Chem.Soc.852149-2156；Merrifield(1986)Science 232341-347；Atherton等，(1989)Solid Phase Peptide SynthesisA Practical Approach，IRL Press，Oxford。關於較大多肽製備方法另參見Dawson等，(1994)Science 266776-779。
本發明還設想了胺基酸序列或糖基化變化以外的DCRS5衍生物的應用。這樣的衍生物可涉及與化學部分的共價或聚集結合。這些衍生物一般分為三類(1)鹽；(2)側鏈和末端殘基共價修飾；和(3)吸附複合物，例如和細胞膜吸附的複合物。這樣的共價或聚集衍生物可用作免疫原，在免疫測定中用作試劑，或用於純化方法，例如親和純化受體或其它結合分子，例如抗體。例如，可利用本領域眾所周知的方法，通過共價結合至固體支持體，例如溴化氰活化的Sepharose，或用或不用戊二醛交聯使其吸附至聚烯烴表面上，固定細胞因子配體，用於細胞因子受體、抗體或其它相似分子的測定或純化。還可用可檢測基團標記配體，例如用氯胺T方法放射性碘標記配體，配體還可共價結合至稀土金屬螯合物或綴合至用於診斷測定的另一種螢光部分。
本發明的組合(例如包括DCRS5)可用作免疫原，用以生產所述組合特異性的抗血清或抗體，例如能夠分辨其它細胞因子受體家族成員的抗血清或抗體。複合物可用於篩選通過用各種形式的含該蛋白的不純製品免疫製備的單克隆抗體或抗原結合片段。具體地說，術語「抗體」還包括天然抗體的抗原結合片段，例如Fab、Fab2、Fv等。純化的DCRS5還可以用作試劑，來檢測對表達水平出現升高應答而產生的抗體，或檢測導致產生內源受體的抗體的免疫疾病。另外，DCRS5片段可用作免疫原，以按照下文緊接著的描述生產本發明抗體。例如，本發明設想了與SEQ ID NO2、其片段或各種同源肽具有結合親和性的抗體或針對其產生的抗體。具體地說，本發明設想了與特定片段具有結合親和性或針對其產生的抗體，其中所述特定片段預計或實際上暴露於天然DCRS5的蛋白外表面。蛋白組合複合物也是有用的，可製備其抗體製品。
在某些其它實施方案中，可溶性構建物，例如DCRS5和IL-12Rβ1的胞外配體結合區段的可溶性構建物，可為配體的結合組合物，並可用作配體拮抗劑，或用作阻斷配體介導的信號轉導的抗原。這樣的可溶性構建物或者在診斷上有用，例如用於配體的組織學標記，或者在治療上有用，例如用作配體拮抗劑。
阻斷對受體配體的生理反應可能是抑制(有可能通過競爭抑制)配體與受體結合的結果。因此，本發明的體外測定通常使用抗體或這些抗體的抗原結合區段、可溶性受體構建物或連接至固相基質的片段。這些測定還允許診斷性測定配體結合區突變和修飾或者其它突變和修飾(例如影響信號轉導或酶功能的其它突變和修飾)的作用。
本發明還設想了競爭性藥物篩選測定的應用，例如在該測定中，抗受體複合物或片段的中和抗體與受試化合物競爭結合配體或其它抗體。以此方式，中和抗體或片段可用於檢測是否存在具有一個或多個受體結合位點的多肽，還可用於佔據受體上可能另外結合某種配體的結合位點。組合了DCRS5或IL-12Rβ1之胞外結構域或配體結合結構域的可溶性受體構建物，可能是競爭結合p40/p19配體的有用的拮抗劑。
V.製備核酸和蛋白編碼該蛋白或其片段的DNA可通過化學合成、篩選cDNA文庫或篩選由各種各樣的細胞系或組織樣品製備的基因組文庫獲得。可使用標準方法和本文提供的序列，例如SEQ ID NO2，分離天然序列。可通過雜交技術或各種PCR技術，結合序列資料庫(例如GenBank)或通過在序列資料庫中檢索，鑑別其它物種的對應物。
該DNA可在各種各樣的宿主細胞中表達，用於合成全長受體或片段，受體或片段又可例如用於產生多克隆或單克隆抗體；用於結合研究；用於構建和表達經修飾的配體結合結構域或激酶/磷酸酶結構域；以及用於結構/功能研究。變異體或片段可在用合適表達載體轉化或轉染的宿主細胞中表達。除了來源於重組宿主的蛋白或細胞雜質外，這些分子可大致沒有蛋白或細胞雜質，因此在與藥學可接受的載體和/或稀釋劑組合的藥用組合物中特別有用。蛋白或其部分可以與其它蛋白融合的融合蛋白表達。所述蛋白或其編碼核酸的組合特別令人感興趣。
表達載體通常是自我複製的DNA或RNA構建物，其包含所需受體基因、其片段或組合基因，所述基因或片段通常與在合適的宿主細胞中可被識別的合適遺傳控制元件有效連接。這些控制元件能夠影響合適宿主中的表達。多個基因可協同表達，並可處於多順反子信息上。實施表達所必需的控制元件的具體類型取決於最終使用的宿主細胞。一般來說，遺傳控制元件可包括原核啟動子系統或真核啟動子表達控制系統，通常包含轉錄啟動子、任選的控制轉錄開始的操縱基因、提升mRNA表達水平的轉錄增強子、編碼合適的核糖體結合位點的序列和終止轉錄和翻譯的序列。表達載體通常還包含允許載體在宿主細胞中獨立複製的複製起點。
本發明的載體包括含編碼所述蛋白組合或生物活性等同的多肽的DNA。該DNA可處於病毒啟動子控制之下，可編碼選擇標記。本發明進一步設想了能夠使編碼所述蛋白的真核cDNA在原核或真核宿主中表達的這種表達載體的應用，其中載體與宿主相匹配，並且其中真核cDNA插入到載體中，使得含載體的宿主的生長表達所述cDNA。通常，表達載體用於在其宿主細胞中穩定複製，或用於擴增，以大幅增加每個細胞的所需基因的總拷貝數。不一定總是需要表達載體在宿主細胞中複製，例如使用不包含宿主細胞所識別的複製起點的載體，有可能實現蛋白或其片段在各種宿主中瞬時表達。也有可能使用通過重組使蛋白編碼部分整合入宿主DNA的載體。
本文使用的載體包括質粒、病毒、噬菌體、整合型DNA片段和其它能夠將DNA片段整合入宿主基因組中的載體。表達載體是含影響有效連接基因表達的遺傳控制元件的特化載體。質粒是最常用的載體形式，但起相同功能的本領域已知或將會知曉的所有其它形式的載體都適用，參見例如Pouwels等，(1985和增刊)Cloning VectorsALaboratory Manual，Elsevier，N.Y.，和Rodriguez等，(編輯)(1988)VectorsA Survey ofmolecular Cloning Vectors and their Uses，Buttersworth，Boston。
轉化細胞是已用使用重組DNA技術構建的載體轉化或轉染的細胞，優選哺乳動物細胞。轉化的宿主細胞通常表達所需蛋白，但對於克隆、擴增和操作其DNA的目的，並不需要表達目標蛋白。本發明進一步設想在營養培養基中培養轉化的細胞，因此使蛋白累積。蛋白可由培養物中或在某些情況下由培養基中回收。
對於本發明，當核酸序列在功能上彼此相關時，其有效連接。例如，如果前序列或分泌前導序列的DNA表達為前蛋白或參與引導多肽至細胞膜或參與分泌多肽，則其有效連接至多肽。如果啟動子控制多肽轉錄，則其有效連接至編碼序列；如果核糖體結合位點定位使得允許翻譯，則其有效連接至編碼序列。通常，有效連接是指連續並符合讀框，但是，某些遺傳元件如阻抑基因不連續連接，但其仍結合操縱基因序列，操縱基因序列再控制表達。
合適的宿主細胞包括原核生物、低等真核生物和高等真核生物。原核生物包括革蘭氏陰性和革蘭氏陽性生物，例如大腸桿菌和枯草芽孢桿菌(B.subtilis)。低等真核生物包括酵母，例如釀酒酵母(S.cerevisiae)和畢赤酵母屬(Pichia)，以及網柄菌屬(Dictyostelium)物種。高等真核生物包括由動物細胞建立的組織培養細胞系，其既可以是非哺乳動物來源，例如昆蟲細胞和鳥類，也可以是哺乳動物來源，例如人、靈長類動物和嚙齒類動物。
原核宿主載體系統包括許多不同物種用的各種各樣的載體。本文使用的大腸桿菌及其載體從屬類上說用於包括在其它原核生物中使用的等同載體。用於擴增DNA的代表性載體是pBR322或其眾多衍生物。可用於表達受體或其片段的載體包括但不限於含lac啟動子(pUC系列)、trp啟動子(pBR322trp)、Ipp啟動子(pIN系列)、λpP或λpR啟動子(pOTS)或雜合啟動子如ptac(pDR540)的載體，參見例如Brosius等，(1988)「Expression Vectors Employing Lambda，and Ippderived Promoters」，載於VectorsA Survey of molecular Cloning Vectorsand Their Uses，(Rodriguez和Denhardt編輯)，Buttersworth，Boston，第10章，205 236頁。
低等真核生物，例如酵母和網柄菌屬，可用含DCRS5序列的載體轉化。對於本發明，最常用的低等真核生物宿主是麵包酵母，即釀酒酵母。從從屬類上說其用於代表低等真核生物，儘管還可利用許多其它菌株和物種。酵母載體通常包括複製起點(除整合型以外)、選擇基因、啟動子、編碼受體或其片段的DNA，以及翻譯終止序列、聚腺苷酸化序列和轉錄終止序列。酵母用的合適表達載體包括例如3-磷酸甘油酸激酶和各種其它糖酵解酶基因啟動子的組成型啟動子或例如乙醇脫氫酶2啟動子或金屬硫蛋白啟動子的誘導型啟動子。合適的載體包括以下類型的衍生物自我複製的低拷貝數(例如YRp系列)、自我複製的高拷貝數(例如YEp系列)、整合型(例如YIp系列)或微型染色體(例如YCp系列)。
高等真核組織培養細胞一般是表達功能活性白介素或受體蛋白的優選宿主細胞。原則上，許多高等真核組織培養細胞系是可使用的，例如昆蟲杆狀病毒表達系統，無論是來自無脊椎動物源還是來自脊椎動物源。但是，優選哺乳動物細胞。所述細胞的轉化或轉染或增殖已成為常規程序。有用細胞系的實例包括HeLa細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞系、幼鼠腎(BRK)細胞系、昆蟲細胞系、鳥細胞系和猴(COS)細胞系。所述細胞系的表達載體通常包括複製起點、啟動子、翻譯起始位點、RNA剪接位點(如果使用基因組DNA的話)、聚腺苷酸化位點和轉錄終止位點。這些載體通常還包含選擇基因或擴增基因。合適的表達載體可為攜帶啟動子的質粒、病毒或逆轉錄病毒，其中所述啟動子來自例如以下來源腺病毒、SV40、細小病毒、痘苗病毒或巨細胞病毒。合適表達載體的代表性實例包括pCDNA1、pCD，參見Okayama等，(1985)Mol.Cell Biol.51136 1142；pMClneoPolyA，參見Thomas等，(1987)Cell 51503 512；和杆狀病毒載體，例如pAC 373或pAC 610。
對於分泌性蛋白或某些膜蛋白，可讀框通常編碼的多肽由在其N端共價連接信號肽的成熟或分泌性產物組成。信號肽在分泌成熟的或活性多肽之前被切割。根據經驗法則，例如von-Heijne(1986)Nucleic Acids Research 144683-4690和Nielsen等，(1997)Protein Eng.101-12，可高度精確地預測切割位點，信號肽的準確胺基酸組成似乎經常對其功能並不重要，例如Randall等(1989)Science 2431156-1159；Kaiser等，(1987)Science 235312-317。本發明的成熟蛋白可易於使用標準方法測定。
經常需要在提供特定或限定糖基化模式的系統中表達這些多肽。在此情況下，通常的模式是由表達系統天然提供的模式。但是，通過使多肽(例如未糖基化形式的多肽)接觸合適的導入異源表達系統中的糖基化蛋白，可修改模式。例如，可將受體基因和一個或多個編碼哺乳動物或其它糖基化酶的基因共轉化。使用此方法，將在原核生物或其它細胞中可實現某些哺乳動物糖基化模式。在原核細胞中的表達通常形成未糖基化形式的蛋白。
DCRS5來源可為例如上述的表達重組DCRS5的真核或原核宿主。來源也可以是細胞系，但本發明還設想了其它哺乳動物細胞系，優選來自人類物種的細胞系。
靈長類動物DCRS5、其片段或衍生物，可通過常規的肽合成法製備。這些方法包括例如描述於Stewart和Young(1984)Solid PhasePeptide Synthesis，Pierce Chemical Co.，Rockford，IL；Bodanszky和Bodanszky(1984) The Practice of Peptide Synthesis，Springer Verlag，New York；Bodanszky(1984)The Principes of Peptide Synthesis，Springer Verlag，New York的方法。例如，可使用疊氮化物法、醯氯法、酸酐法、混合酸酐法、活性酯法(例如對硝基苯酯、N羥基琥珀酸亞胺酯或氰甲基酯)、碳二咪唑法、氧化還原法或二環己基碳二亞胺(DCCD)加成法。固相和液相合成都適用於前述方法。相似的技術可用於部分DCRS5序列。
DCRS5蛋白、片段或衍生物可適當按照以上通常用於肽合成的方法製備，一般通過所謂的分步法製備，其包括將胺基酸一個接一個按照順序縮合至末端胺基酸，或者將肽片段偶聯至末端胺基酸。不用於偶聯反應的氨基通常必須要保護，以防止在不正確的位置偶聯。
如果採用固相合成，則C端胺基酸通過其羧基結合至不溶性載體或支持體。對於不溶性載體沒有特別限制，只要其具有和活性羧基結合的能力。這種不溶性載體的實例包括滷甲基樹脂，例如氯甲基樹脂或溴甲基樹脂、羥甲基樹脂、苯酚樹脂、叔烷氧基羰基醯肼化樹脂等。
通過縮合氨基受保護的胺基酸之活性羧基和先前已形成的肽或鏈的活性氨基，按順序使所述胺基酸結合，以逐步合成肽。在合成整個序列後，將肽與不溶性載體分離，以產生肽，參見例如Merrifield等，(1963)J.Am.Chem.Soc.852149 2156。
可利用例如提取、沉澱、電泳、各種形式的層析、免疫親和等進行肽分離，由此由反應混合物中分離和純化所製備的蛋白及其片段。根據所需用途，可獲得不同純度的本發明受體。利用本文公開的蛋白純化技術或使用在免疫吸附親和層析方法中描述的抗體，可實現純化。首先將抗體連接至固體支持體，然後使連接的抗體與合適細胞的經溶解的裂解物、表達該受體的其它細胞的裂解物或由DNA技術製備的生產蛋白的細胞的裂解物或上清液接觸，進行此免疫吸附親和層析。
一般來說，純化的蛋白至少約40％純，普通至少約50％純，通常至少約60％純，典型至少約70％純，更典型至少約80％純，優選至少約90％純，更優選至少約95％純，在具體的實施方案中，為97％-99％或更高。純度通常以重量為基準，但也可以摩爾為基準。合適的情況下可應用於不同測定。可純化各個蛋白，然後組合。
VI.抗體可產生抗各種哺乳動物(例如靈長類動物)DCRS5蛋白及其片段的抗體，抗體既可以是天然形式，也可以是其重組形式，不同之處在於抗活性受體抗體更有可能識別僅在天然構型中存在的表位。還設想了識別例如功能性組合DCRS5和IL-12Rβ1所提供表位的抗體。變性抗原檢測也可用於例如蛋白質印跡分析。還設想了抗獨特型抗體，其應可用作天然受體或抗體的激動劑或拮抗劑。
可通過用預先確定的蛋白片段和免疫原性蛋白的綴合物免疫動物，產生抗該片段的抗體，包括結合片段和單鏈形式。由分泌所需抗體的細胞製備單克隆抗體。可根據結合正常或缺陷蛋白的情況，或根據激動活性或拮抗活性，對這些抗體進行篩選。這些單克隆抗體通常以至少約1mM的KD結合，更通常至少約300μM，典型至少約100μM，更典型至少約30μM，優選至少約10μM，更優選至少約3μM或更佳。
本發明的抗體，包括抗原結合片段，可具有顯著的診斷或治療價值。其可為結合所述受體、抑制與配體結合或抑制受體激發生物反應(例如作用於其底物)的能力的有效拮抗劑。其還可用作非中和抗體，可偶聯毒素或放射性核素，以結合生產細胞或被定位為白介素源的細胞。此外，這些抗體可直接或利用接頭間接綴合至藥物或其它治療劑。
本發明的抗體還可用於診斷用途。作為捕獲抗體或非中和抗體，其可結合受體，而不抑制配體或底物結合。作為中和抗體，其可用於競爭性結合測定。其還可用於檢測或定量測量配體。其可用作各個蛋白的蛋白質印跡分析、免疫沉澱或免疫純化的試劑。同樣，核酸和蛋白可固定至固體基質，用於親和純化或檢測方法。所述基質可為例如固體樹脂珠或塑料板。
蛋白片段可連接至其它物質，特別是多肽，作為融合或共價結合的多肽，以用作免疫原。哺乳動物細胞因子受體和片段可融合或共價連接至各種免疫原，例如匙孔血藍蛋白、牛血清白蛋白、破傷風類毒素等。製備多克隆抗血清的方法已有描述，參見例如Microbiology(1969)Hoeber Medical Division，Harper和Row；Landsteiner(1962)Specificity of Serological Reactions，DoverPublications，New York；Williams等，(1967)Methods in Immunology andImmunochemistry，第1卷，Academic Press，New York。典型方法包括用抗原超免疫動物。然後在重複免疫後不久收集動物血，並分離γ球蛋白。
在某些情況下，理想的是製備各種哺乳動物宿主(例如小鼠、嚙齒類動物、靈長類動物、人等)的單克隆抗體。關於所述單克隆抗體製備技術的描述可見於例如Stites等，(編輯)Basic and ClinicalImmunology(第4版)，Lange Medical Publications，Los Altos，CA和其中引用的參考文獻；Harlow和Lane(1988)AntibodiesA LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Press，Cold Spring Harbor，NY；Goding(1986)Monoclonal AntibodiesPrinciples and Practice(第2版)Academic Press，New York；特別是Kohler和Milstein(1975)Nature256495 497，其論述了一種生產單克隆抗體的方法。該方法包括用免疫原注射動物。然後處死動物，從其脾中取出細胞，然後將其與骨髓瘤細胞融合。結果是能夠在體外再生的雜種細胞或「雜交瘤」。然後篩選雜交瘤群，以分離單個克隆，其中每個克隆都分泌抗免疫原的單一抗體物質。以此方式獲得的單一抗體物質是響應於免疫原性物質上被識別的特定位點而產生的免疫動物無限增殖化和克隆的單一B細胞的產物。
其它合適的技術包括淋巴細胞體外接觸抗原性多肽或在噬菌體或相似載體中選擇抗體文庫。參見Huse等，(1989)Science 2461275-1281；和Ward等，(1989)Nature 341544-546。可使用有或沒有修飾的本發明多肽和抗體，包括嵌合抗體或人源化抗體。常常通過共價或非共價連接提供可檢測信號的物質來標記多肽和抗體。合適的標記包括放射性核素、酶、底物、輔因子、抑制劑、螢光部分、化學發光部分、磁性顆粒等。講述所述標記應用的專利包括美國專利第3,817,837、3,850,752、3,939,350、3,996,345、4,277,437、4,275,149和4,366,241號。另外，可生產重組或嵌合免疫球蛋白，參見Cabilly，美國專利第4,816,567號，或在轉基因小鼠中製備，參見Mendez等，(1997)Nature Genetics 15146-156。
本發明的抗體還可用於分離DCRS5蛋白或肽的親和層析。可製備其中抗體連接至固體支持體(例如顆粒，如瓊脂糖、Sephadex等)的柱，其中細胞裂解物可流過柱，洗滌柱，接著增加溫和變性劑的濃度，由此釋放純化的蛋白。或者，該蛋白可用於純化抗體。可應用合適的交叉吸收或消除。
所述抗體還可用於篩選特定表達產物的表達文庫。通常用允許通過抗體結合容易地檢測抗原存在的部分來標記在此方法中使用的抗體。
還可使用針對細胞因子受體產生的抗體，產生抗獨特型抗體。這些抗獨特型抗體可用於檢測或診斷與該蛋白表達或表達該蛋白的細胞相關的各種免疫病症。其還可用作配體的激動劑或拮抗劑，其可為天然配體的競爭性受體抑制劑或替代品。某些抗受體亞基或組合的抗體可起活化抗體的作用，這可實現信號轉導，由此起例如作為配體激動劑的作用。
特異性結合針對限定免疫原(例如由SEQ ID NO2的胺基酸序列構成的免疫原)產生的抗體或與其特異性免疫反應的細胞因子受體蛋白，通常以免疫測定測定。免疫測定通常使用例如針對SEQ ID NO2的蛋白產生的多克隆抗血清。選擇對其它細胞因子受體家族成員(例如IL-12Rβ受體亞基或IL-6受體亞基gp130，優選來自相同物種)具有低交叉反應性的該抗血清，任何所述交叉反應性在用於免疫測定前都通過免疫沉澱去除。
為了生產用於免疫測定的抗血清，如本文所述分離例如SEQ IDNO2的蛋白。例如，可以哺乳動物細胞系生產重組蛋白。通常使用標準佐劑，如弗氏佐劑，以及標準小鼠免疫方案(參見Harlow和Lane，出處同上)，用選定蛋白免疫合適宿主，例如小鼠近交系，如Balb/c。或者，來源於本文公開序列並綴合至載體蛋白的合成肽可用作免疫原。收集多克隆血清，並以免疫測定(例如用固定在固體支持體上的免疫原的固相免疫測定)測定多克隆血清抗免疫原蛋白的效價。選擇效價為104或更高的多克隆抗血清，並使用競爭性結合免疫測定，如在Harlow和Lane(出處同上)的第570-573頁中描述的方法，測試其對其它細胞因子受體家族成員如gp130或IL-12Rβ1的交叉反應性。優選在該測定中使用至少兩種細胞因子受體家族成員。可生產作為重組蛋白的這些細胞因子受體家族成員，並使用標準分子生物學和本文所述的蛋白化學技術進行分離。
競爭性結合形式的免疫測定可用於交叉反應性測定。例如，可將SEQ ID NO2的蛋白固定在固體支持體上。該測定中所加入的蛋白與抗血清競爭結合固定化抗原。將以上蛋白與抗血清競爭結合固定化蛋白的能力與例如gp130或IL-12Rβ2蛋白相比較。計算以上蛋白的交叉反應性百分率。選擇並合併那些與以上列出的每種蛋白的交叉反應性低於10％的抗血清。然後通過用以上列出蛋白進行免疫吸附，去除合併的抗血清中的交叉反應性抗體。
然後將經免疫吸附並合併的抗血清用於如上所述的競爭結合免疫測定，以比較第二種蛋白和免疫原蛋白(例如SEQ ID NO2的DCRS5樣蛋白)。為了進行該對比，以廣泛的濃度範圍分析兩種蛋白的每一種，並測定抑制50％的抗血清與固定化蛋白結合所需的每種蛋白的量。如果第二種蛋白的需要量低於所選擇的一種或多種蛋白的需要量的兩倍，則認為第二種蛋白特異性結合針對免疫原產生的抗體。
當然，這些細胞因子受體蛋白是含許多已鑑定基因的同源蛋白家族的成員。對於特定基因產物，例如DCRS5，該術語不僅指本文公開的胺基酸序列，而且指作為等位基因變異體、非等位基因變異體或種變異體的其它蛋白。還要理解的是，該術語包括通過使用常規重組技術(如單一位點突變)的蓄意突變或通過切除編碼各蛋白的DNA的短部分或置換新胺基酸或加入新胺基酸而導入的非天然突變。這樣的微小改變通常基本上保持了起源分子的免疫同一性和/或其生物活性。因此，這些改變包括與指定的天然DCRS5蛋白特異性免疫反應的蛋白。已改變蛋白的生物特性可通過在合適的細胞系中表達該蛋白並測量例如對轉染的淋巴細胞的合適作用來測定。被認為是微小的特定蛋白修飾應包括如上所述對整個細胞因子家族而言具有相似化學特性的胺基酸的置換。通過將蛋白與細胞因子受體蛋白進行最佳比對，並使用本文描述的測定免疫同一性的常規免疫測定，人們可確定本發明的蛋白組合物。
而且，抗受體亞基的抗體可在空間上起封閉配體與功能受體結合的作用。可產生抗單獨的亞基，或者抗DCRS5與IL-12Rβ1的組合的此種抗體。應得到抗體拮抗劑。
VII.試劑盒、診斷學和定量測定天然和重組形式的本發明細胞因子受體樣分子都可用於試劑盒和測定方法。例如，這些方法還可用於篩選結合活性，例如這些蛋白的配體。近些年已開發了若干自動化測定方法，以便可每年篩選數萬種化合物，參見例如BIOMEK automated workstation，BeckmanInstruments，Palo Alto，California，Fodor等，(1991)Science 251767-773。後者描述了利用多種在固體基質上合成的指定聚合物測試結合的方法。大量純化的活化狀態的可溶性細胞因子受體(例如本發明提供的受體)的可得性，可極大地促進適於篩選配體或激動劑/拮抗劑同源蛋白的測定的開發。
可直接將純化的DCRS5包被在用於前述配體篩選技術的平板上。但是，這些蛋白的非中和抗體可用作例如用於診斷用途的捕獲抗體，以將各自的受體固定在固相上。
本發明還設想了DCRS5和/或p19、其片段、肽及其融合產物在各種診斷試劑盒和檢測蛋白或其配體是否存在的方法中的用途。或者或另外，抗所述分子的抗體可加入到試劑盒或方法中。通常，所述試劑盒具有含DCRS5和/或p19肽或基因區段或識別一種或另一種的試劑的隔室。通常，對於肽，識別試劑應是受體或抗體，對於基因區段，識別試劑通常應是雜交探針。其它試劑盒組分可包括與配體/受體配對的p40、p19(也叫做IL-B30)或IL-12Rβ1多肽相關的其它蛋白或試劑。
測定樣品中DCRS5濃度的優選試劑盒通常包含具有已知的DCRS5結合親和性的標記化合物，例如配體或抗體；作為陽性對照的天然或重組DCRS5源；以及分離結合標記化合物和游離標記化合物的工具，例如用於固定受試樣品中的DCRS5的固相。一般提供含試劑的隔室和說明書。還提供含合適的核酸或蛋白的試劑盒。
哺乳動物DCRS5或肽片段或受體片段特異性的抗體，包括抗原結合片段，可用於診斷用途，以檢測配體和/或其片段的水平是否存在提高。診斷測定可為均相的(在游離試劑和抗體-抗原複合物之間沒有分離步驟)或異相的(有分離步驟)。存在各種商業性測定，例如放免測定(RIA)、酶聯免疫吸附測定(ELISA)、酶免疫測定(EIA)、酶多免疫檢測技術(EMIT)、底物標記螢光免疫測定(SLFIA)等。例如，可通過使用被標記並識別抗細胞因子受體或其特定片段抗體的二抗，使用未標記抗體，參見例如Harlow和Lane，出處同上；和Coligan(編輯，1991和定期增刊)Current Protocols In Immunology Greene/Wiley，New York。
抗獨特型抗體可具有相似的用途，起細胞因子受體激動劑或拮抗劑的作用。在合適的環境下，這些抗獨特型抗體應可用作治療劑。
試劑盒中經常提供用於診斷測定的試劑，以便使測定的敏感性最優化。對於本發明，根據測定的性質，提供方法和標記物、標記或未標記的抗體或標記配體。這通常與其它添加物聯合，例如緩衝液、穩定劑、信號產生所必需的物質(例如酶底物)等。優選地，試劑盒還包含正確使用和使用後內容物處理的說明書。通常，試劑盒具有每種有用試劑的隔室，並包含試劑正確使用和處理的說明書。理想地，試劑以凍乾粉末提供，其中試劑可用具有適於進行實驗的濃度的水性介質重建。
可不加修飾地使用所述診斷測定的前述成分，或者可以各種方式對其進行修飾。例如，可通過共價或非共價連接直接或間接提供可檢測信號的部分而實現標記。在許多這樣的測定中，可直接或間接標記受試化合物、細胞因子受體或其抗體。可能直接標記的物質包括以下標記組放射性標記，例如125I；酶(美國專利第3,645,090號)，例如過氧化物酶和鹼性磷酸酶；以及能夠監測螢光強度變化、波長遷移或螢光極化的螢光標記(美國專利第3,940,475號)。可能的間接標記包括生物素化一種成分，接著與偶聯於以上標記組中一種標記的抗生物素蛋白結合。
還有眾多的分離結合配體和游離配體或分離受試化合物和游離受試化合物的方法。細胞因子受體可固定在各種基質上，接著進行洗滌。合適的基質包括塑料，如ELISA板、濾膜和珠。將受體固定在基質上的方法包括但不限於直接附著至塑料、使用捕獲抗體、化學偶聯和生物素抗生物素蛋白。該方法的最後一步包括用幾種方法中的任一種，包括利用例如有機溶劑(如聚乙二醇)或鹽(如硫酸銨)的方法，來沉澱抗體/抗原複合物。其它合適的分離技術包括但不限於描述於Rattle等，(1984)Clin.Chem.30(9)1457 1461的螢光素抗體可磁化顆粒法，以及描述於美國專利第4,659,678號的雙抗體磁性顆粒分離法。
將蛋白或片段連接至各種標記的方法可包括通過使用碳二亞胺或活性酯形成肽鍵而活化的羧基；通過使巰基反應而形成硫酯；和活化滷素(如氯乙醯)或活化烯烴(如馬來醯亞胺)，以用於連接等等。融合蛋白也可用於這些用途。
本發明的另一診斷方面涉及使用取自細胞因子受體序列的寡核苷酸或多核苷酸序列。這些序列可用作檢測免疫疾病疑似患者的各種細胞因子受體水平的探針。RNA和DNA二者核苷酸序列的製備、序列標記和序列的優選大小在本領域眾所周知。寡核苷酸探針一般應當具有至少約14個核苷酸，通常至少約18個核苷酸，多核苷酸探針可達數千個鹼基。可使用各種標記，最常見的是放射性核素，特別是32P。但是，還可以使用其它技術，例如使用供導入到多核苷酸用的生物素修飾的核苷酸。然後生物素起結合抗生物素蛋白或抗體的位點的作用，其可用各種各樣的標記物標記，例如放射性核素、螢光劑、酶等。或者，可使用可識別特定雙鏈體的抗體，所述雙鏈體包括DNA雙鏈體、RNA雙鏈體、DNA RNA雜合雙鏈體或DNA蛋白雙鏈體。抗體又可被標記，並進行其中雙鏈體結合至表面的測定，以便在表面上形成雙鏈體時，可檢測是否存在結合至雙鏈體的抗體。可在常規技術中使用針對新反義RNA的探針，所述常規技術例如為核酸雜交、加減篩選、重組探測、雜交分子釋放翻譯(HRT)和雜交分子中止翻譯(HART)。其還包括擴增技術，例如聚合酶鏈式反應(PCR)。
還設想了也可定性或定量測試其它標記存在的診斷試劑盒。診斷或預後可隨用作標記的多種指標的組合而變。因此，試劑盒可測試標記的組合，參見例如Viallet等，(1989)Progress in Growth FactorRes.189-97。對可反映功能受體信號轉導差異的多態變異的檢測，可用於決定治療策略。反映出對配體反應更大或更小的變異，使得可鑑定反應/無反應患者亞群。
本發明的診斷方法提供來自測試受試者(例如患免疫疾病的患者)的樣品，用於測量DCRS5或p19的表達或活性。非複合和複合形式的DCRS5，例如與IL-12β1複合的DCRS5，皆可檢測。非複合和複合形式的p19，例如與p40複合的p19，皆可檢測。表達或活性可與對照受試者或對照樣品的表達或活性對比。對照樣品可為例如患免疫疾病的患者中的未受影響或未發炎組織的樣品。可提供對照受試者或對照樣品的表達或活性作為預定值，例如由統計上適合的對照受試者組獲得。
VIII.治療應用本發明提供具有顯著治療價值的試劑，參見例如Levitzki(1996)Curr.Opin.Cell Biol.8239-244。天然或重組細胞因子受體、其片段、突變蛋白受體和抗體，以及被鑑別為對所述受體或抗體具有結合親和性的化合物，應當可用於治療表現出受體或其配體異常表達的病症。這樣的異常通常出現於免疫疾病，參見例如WO 01/18051。另外，本發明應在與配體異常表達或異常觸發針對配體的反應相關的疾病或障礙中提供治療價值。例如，已提示，p40/IL B30配體參與細胞介導免疫性的發展，例如抗腫瘤活性、建立體液和細胞免疫以及抗病毒作用。具體地說，該配體似乎活化NK和T細胞。治療可與IL-18、IL-12、TNF、IFNγ、放療/化療、佐劑、抗腫瘤化合物、抗病毒化合物或抗真菌化合物聯合。
相反，可與TNF、IFNγ、IL-18或IL-12拮抗劑或與IL-10或類固醇聯用的拮抗劑，可適用於慢性Th1介導的疾病、自身免疫病或移植和/或排斥情況、多發性硬化、銀屑病、慢性炎病、類風溼性關節炎、骨關節炎或炎性腸病。拮抗劑可採用抗受體亞基的抗體、可溶性受體構建物、一種或多種受體亞基的反義核酸或RNA幹擾核酸的形式。p40/p19配體與受體亞基DCRS5和IL-12R的配對，為使用激動劑或拮抗劑所應用的適應症提供了深入理解。
在治療上，根據所述的p40/p19活性，所述細胞因子的拮抗劑可由例如可溶性DCRS5加上或不加可溶性IL-12Rβ1、或任一種受體亞基的抗體來實現。拮抗劑可作為不需要的免疫反應或炎症反應的抑制劑用於靶向記憶T細胞，或與IL-12/IL-12R拮抗劑或其它抗炎或免疫抑制劑聯用。臨床適應症可為慢性炎症或移植情況。各種多態性可增強或降低受體功能，如果顯著的話，可用作治療劑。所述變異體的鑑別使得可鑑定反應或無反應患者亞群。試劑可用作記憶T細胞和/或NK細胞的檢測或標記試劑或消除試劑。
本發明設想了使用人p19(SEQ ID NO5)或人DCRS5(SEQ IDNO1)的反義核酸或RNA幹擾核酸的治療方法，參見例如Arenz和Schepers(2003)Naturwissenschaften 90345-359；Sazani和Kole(2003)J.Clin.Invest.112481-486；Pirollo等，(2003)Pharmacol.Therapeutics9955-77；Wang等，(2003)Antisense Nucl Acid Drug Devel 13169-189；Haraoui等，(2000)Curr.Pharm.Biotechnol.1217-233；Alvarez等，(2001)Curer.Pharm.Des.71059-1081；Sandborn和Targan(2002)Gastroenterol.1221592-1608。
基因療法可使所需細胞群響應例如作為腫瘤免疫治療的佐劑的p40/p19配體，以利於腫瘤浸潤淋巴細胞、T細胞或NK細胞的活化。反義或RNA幹擾策略可應用於例如防止受體反應性。
根據RNA印跡分析知曉，各種異常病症出現在顯示同時產生IL-12p40和/或p19mRNA的細胞類型中。參見Berkow(編輯)TheMerck Manual of Diagnosis and Therapy，Merck Co.，Rahway，N.J.；Thorn等，Harrison′s Principles of Internal Medicine，McGraw-Hill，N.Y.；和Weatherall等，(編輯)Oxford Textbook of Medicine，OxfordUniversity Press，Oxford。許多其它醫學病症和疾病對本文提供的激動劑或拮抗劑治療會有反應。參見例如Stites和Terr(編輯)(1991)Basicand Clinical Immunology Appleton and Lange，Norwalk，Connecticut；和Samter等，(編輯)Immunological Diseases Little，Brown and Co。其它可能治療的適應症包括骨重建、性機能障礙、防止神經退化病、痴呆、緊張等。這些問題應對使用本文提供的組合物的預防或治療敏感。
可純化重組細胞因子受體、突變蛋白、其激動劑或拮抗劑抗體或抗體，然後給予患者。這些試劑可與其它活性成分(例如於常規藥學可接受的載體或稀釋劑中)以及生理學上無害的穩定劑和賦形劑組合，用於治療用途。這些組合可以是無菌的，例如除菌過濾，並以凍幹劑型放置入劑量瓶中或儲存在穩定化的水性製劑中。本發明還設想了使用非補體結合的抗體或其結合片段的應用。
可使用細胞因子受體或其片段進行配體篩選，以鑑別對該受體具有結合親和性的分子。然後，後續的生物測定可用於測定推定的配體是否可提供可阻斷內在刺激活性的競爭結合。受體片段可用作阻滯劑或拮抗劑，因為其可阻斷配體活性。同樣，具有內在刺激活性的化合物可活化受體，因此是激動劑，因為其刺激配體活性，例如誘導信號轉導。本發明進一步設想了抗細胞因子受體的抗體作為拮抗劑的治療應用。
有效治療所需的試劑量取決於許多不同因素，包括給藥方法，靶部位、試劑生理周期、藥理學周期、患者的生理狀態和給予的其它藥物。因此，應滴定分析治療劑量，以優化安全性和功效。通常，體外使用的劑量可為這些試劑原位給藥的使用量提供有用的指引。特定疾病的治療有效劑量的動物實驗進一步提供人用劑量的推測指示，參見例如Gilman等，(編輯)(1990)Goodman and Gilman′sThePharmacological Bases of Therapeutics，第8版，Pergamon Press；和Remiragton′s Pharmaceutical Sciences，第17版(1990)，MackPublishing Co.，Easton，Penn。這些文獻和下文討論了給藥方法，例如用於口服、靜脈內、腹膜內或肌內給藥、經皮擴散等的給藥方法。藥學可接受的載體包括水、鹽水、緩衝液和其它描述於Merck Index，Merck Co.，Rahway，New Jersey的化合物。因為推定的配體及其受體之間可能有高親和結合或轉換數，所以最初預期低劑量的這些試劑應是有效的。再者，信號轉導途徑提示極低的配體量可能具有作用。因此，在有合適載體的情況下，一般預期劑量範圍為低於1mM濃度的量，典型低於約10μM濃度，經常低於約100nM，優選低於約10pM(皮摩爾濃度)，最優選低於約1fM(費摩爾濃度)。經常使用緩釋製劑或緩釋裝置來持續給藥。
細胞因子受體、其片段以及抗體或其片段、拮抗劑和激動劑，可直接給予要治療的宿主，或者根據化合物的大小，可能需要將其與載體蛋白(如卵清蛋白或血清白蛋白)綴合，然後給予。可以許多常規劑型製劑給予治療性製劑。儘管活性成分有可能單獨給予，但優選以藥用製劑提供。製劑包含至少一種如上定義的活性成分，以及一種或多種可接受的其載體。就其與其它成分相配伍和對患者無害而言，每種載體都必須是藥學和生理學二者接受的。製劑包括適於口服、直腸、鼻內或胃腸外(包括皮下、肌內、靜脈內和皮內)給藥的製劑。製劑可方便地以單位劑型提供，並可利用藥學領域眾所周知的方法製備。參見例如Gilman等，(編輯)(1990)Goodman and Gilman′sThe Pharmacological Bases of Therapeutics，第8版，Pergamon Press；和Remington′s Pharmaceutical Sciences，第17版(1990)，MackPublishing Co.，Easton，Penn.；Avis等，(編輯)(1993)PharmaceuticalDosage FormsParenteral Medications Dekker，NY；Lieberman等，(編輯)(1990)Pharmaceutical Dosage FormsTablets Dekker，NY；和Lieberman等，(編輯)(1990)Pharmaceutical Dosage FormsDisperseSystems Dekker，NY。本發明的療法可與其它治療劑組合，或與其聯合使用，所述治療劑具體地說是其它細胞因子受體家族成員的激動劑或拮抗劑。
本發明提供用於治療和診斷哮喘或變態反應的試劑和方法。這些疾病與IL-6、IL-19、CXCL1(也叫做GROα)、IL-17和GM-CSF的表達或活性增加相關，參見例如Cembrzynska-Nowak等，(1998)Arch.Immunol.Ther.Exp.(Warsz)46381-386；Hsieh等，(1996)J.Allergy Clin.Immunol.98580-587；Prause等，(2003)Eur.J.Pharmacol.462193-198；Molet等，(2001)J.Allergy Clin.Immunol.108430-438；Linden(2001)Int.Arch.Allergy Immunol.126179-184；Cates等，(2003)J.Allergy Clin Immunol.1111076-1086；Yamashita等，(2002)CellImmunol.21992-97。本發明還提供用於COPD的試劑和方法，COPD是一種與IL-6、CXCL1和GM-CSF的表達或活性增加有聯繫的疾病，參見例如Chung等，(2001)Eur.Respir.J.Suppl.3450s-59s；Traves等，(2002)Thorax 57590-595；Profita等，(2003)Thorax 58573-579。
本發明還提供用於類風溼性關節炎的試劑和方法，類風溼性關節炎是一種涉及IL-6、CXCL1、IL-17和GM-CSF的表達或活性增加的疾病，參見例如Gentiletti和Fava(2003)Arthritis Rheum.481471-1474；Nakahara等，(2003)Arthritis Rheum.481521-1529；Konig等，(2000)Virchows Arch.436449-458；Koch等，(1995)J.Immunol.1553660-3666；Borzi等，(1999)FEBS Lett.455238-242；Boiardi等，(1999)Clin.Exp.Rheumatol.17419-425；Hogan等，(1994)Cytokine661-69；Kehlen等，(2002)Clin.Exp.Immunol.127539-546；Cook等，(2001)Arthritis Res.3293-298。
本發明還提供治療和診斷炎性腸病(IBD)的試劑和方法，炎性腸病(IBD)是一種特徵為IL-6、CXCL-1、IL-17和GM-CSF的表達或活性增加的疾病，參見例如Rahbar等，(2003)Inflamm.Bowel Dis.9154-161；Isaacs等，(1992)Gastroenterol.1031587-1595；Imada等，(2001)Scand.J.Gastroenterol.36854-864；Brandt等，(1998)Eur.CytokineNetw.9647-653；Fujino等，(2003)Gut 5265-70；Nielsen等，(2003)Scand.J Gastroenterol.38180-185；Carlson等，(2002)Gut 50501-506。另外，本發明包括診斷和治療皮膚炎性疾病如銀屑病的試劑和方法，皮膚炎性疾病是一類與IL-6、CXCL1、IL-17和GM-CSF的表達或活性增加相關的疾病，參見例如Ishihara和Hirano(2002)CytokineGrowth Factor Rev.13357-368；Gillitzer等，(1996)J.Invest.Dermatol.107778-782；Steude等，(2002)J.Invest.Dermatol.1191254-1260；Albanesi等，(2000)J.Invest.Dermatol.11581-87；Schon等，(2000)J.Invest.Dermatol.114976-983。
IX.篩選可使用DCRS5或其片段進行藥物篩選，以鑑別對受體亞基具有結合親和性的化合物，包括分離相關組分。然後，後續的生物測定可用於測定化合物是否具有內在刺激活性，該化合物因此是阻滯劑或拮抗劑，因為其可阻斷配體活性。
此外，p40/p19配體和DCRS3與IL-12Rβ1的功能受體的配對，使得可以用陽性信號轉導對照篩選拮抗劑和激動劑。可進行小分子或抗體篩選。
一種藥物篩選方法使用真核或原核宿主細胞，該細胞用表達DCRS5的重組DNA分子與另一種細胞因子受體亞基例如IL-12Rβ1的組合穩定轉染。據信信號轉導使用STAT4。可分離表達與其它功能受體分離的受體的細胞。這樣的細胞或者為活體形式，或者為固化形式，可用於標準的抗體/抗原或配體/受體結合測定，參見例如Parce等，(1989)Science 246243-247，和Owicki等，(1990)Proc.Natl.AcadSci.USA 874007-4011，其描述了檢測細胞反應的靈敏方法。競爭測定特別有用，其中細胞與對配體具有已知結合親和性的標記受體或抗體(例如125I抗體)和待對結合組合物結合親和性的檢測受試樣品接觸並溫育。然後，將結合和游離的標記結合組合物分離，以評價配體結合程度。結合的受試化合物的量與結合已知來源的標記受體的量成反比。許多技術可用於分離結合配體和游離配體，以評價配體結合程度。該分離步驟通常可包括例如以下的方法粘附至濾膜，接著洗滌；粘附至塑料，接著洗滌；或離心細胞膜。活體細胞也可用於根據藥物對細胞因子介導功能(例如STAT4信號轉導等)的作用來進行篩選。某些檢測方法允許去除分離步驟，例如鄰近敏感(proximity sensitive)檢測系統。
參照以下實施例可最好地理解廣義範圍的本發明，以下的實施例無意將本發明限於具體的實施方案。
實施例I.一般方法在例如Maniatis等，(1982)Molecular Cloning，A LaboratoryManual，Cold Spring Harbor Laboratory，Cold Spring Harbor Press；Sambrook，等，(1989)Molecular CloningA LaboratoryManual，(第2版)，1-3卷，CSH Press，NY；或Ausubel等，(1987和增刊)Current Protocolsin Molecular Biology，Greene/Wiley，New York中描述或引用了一些標準方法。蛋白純化方法包括例如硫酸銨沉澱、柱層析、電泳、離心、結晶等的方法。參見例如Ausubel等，(1987和定期增刊)；Coligan等，(編輯)(1996和定期增刊)Current Protocols In Protein ScienceGreene/Wiley，New York；Deutscher(1990)「Guide to ProteinPurification」，載於Methods in Enzymology，182卷和該系列中的其它卷；以及關於蛋白純化產物使用的生產商文獻，例如Pharmacia，Piscataway，N.J.，或Bio-Rad，Richmond，CA。與重組技術組合使得可以融合至合適的區段，例如融合至FLAG序列或可經蛋白酶可去除序列融合的等同物。參見例如Hochuli(1990)「Purification ofRecombinant Proteins with Metal Chelate Absorbent」，載於Setlow(編輯)Genetic Engineering，Principle and Methods 1287-98，Plenum Press，N.Y.；和Crowe等，(1992)QIAexpessThe High Level Expression Protein Purification System QIAGEN，Inc.，Chatsworth，CA。
使用可獲得的軟體程序進行計算機序列分析，包括得自GCG(U.Wisconsin)和GenBank來源的程序。還可以使用公共序列資料庫，例如GenBank等的資料庫。
許多可應用於IL-10受體的技術都可應用於DCRS5，如USSN08/110,683(IL-10受體)所述。
II.功能性複製人們觀察到抗-hIL-12Rβ1抗體阻斷人T細胞對p40/p19的應答和p40/p19與IL-12Rβ1的結合。這提示IL-12Rβ1是p40/p19受體複合物的一個亞基。
鑑別出對p40/p19有反應但對IL-12無反應的小鼠T細胞群，以及對IL-12有反應但對p40/p19無反應的另一個細胞群。另外，觀察到表達重組mIL-12Rβ1和mIL-12Rβ2的Ba/F3細胞對IL-12有反應，但對p40/p19無反應。這些結果共同表明，p40/p19受體複合物包含IL-12Rβ1和至少一種其它亞基，該亞基不是IL-12Rβ2。因此，設計了表達克隆策略以分離此第二種受體組分。
由分離自Kit225細胞的mRNA製備cDNA文庫，Kit225細胞是一種對IL-12和p40/p19都有反應的IL-2依賴性人T細胞系。使用逆轉錄表達載體pMX製備cDNA文庫。用此cDNA文庫感染表達重組hIL-12Rβ1的Ba/F3細胞，讓其在IL-3中恢復3-4天，然後洗滌並以約15,000細胞/孔接種在96孔板中的含50ng/ml hyper-hp40/hp19的培養基中。參見WO 01/18051。約每5天用另外的hyper-hp40/hp19補充培養物。約2周後，5-10％的孔表現出細胞生長。收集每個孔的細胞，在較大的hyper-hp40/hp19培養中單獨擴增，並測試對hyper-hp40/hp19的生長依賴性。
通過PCR擴增逆轉錄cDNA插入物，分析生長依賴於p40/p19的細胞。分析了超過40個分離物，除掉一個以外所有的分離物都包含編碼新受體DCRS5的cDNA。將該候選人cDNA克隆在表達載體中，並轉染至表達hIL-12Rβ1的Ba/F3細胞中。這些細胞成為p40/p19響應性細胞；因此，我們推斷，新的cDNA編碼所需的DCRS5，其在功能上是p19受體亞基。
III.全長DCRS5的特徵；染色體定位DCRS5的胞質結構域總的來說與在該分子家族中常見的其它細胞因子受體胞質結構域並不緊密相關。該胞質結構域包含7個tyr殘基，其中至少3個是可識別的SH2結合基序(YEDI、YKPQ和YFPQ)的一部分。YEDI基序類似於已鑑別出的酪氨酸磷酸酶shp2的結合位點。後兩種基序非常類似於已知分別結合Stat1/Stat3或Stat3的序列。YKPQ基序連同附近的側翼序列一起，在一定程度上也類似於已知結合Stat1-3的Stat4和IL-12Rβ2中的基序。這與初始數據一致，提示p40/p19和IL-12一樣活化Stat4。
使用來源於所述DCRS5序列的PCR引物探測人cDNA文庫。序列可來自例如SEQ ID NO1，優選那些鄰接序列末端的序列。例如通過DNA雜交篩選λgt10噬菌體，克隆靈長類動物、嚙齒類動物或其它物種DCRS5的全長cDNA。在合適的條件下，使用水生棲熱菌(T.aquaticus)TaqplusDNA聚合酶(Stratagene，La Jolla，CA)進行PCR反應。
製備染色體塗片。對由培養72小時的經植物血凝集素刺激的人淋巴細胞製備物獲得的染色體製備物進行原位雜交。在培養的最後7小時加入5-溴脫氧尿苷(60μg/ml培養基)，以確保良好品質的雜交後染色體顯帶。
將在引物輔助下擴增的PCR引物克隆入合適的載體中。載體用3H通過缺口平移標記。以終濃度200ng/ml的雜交溶液使放射性標記探針與分裂中期塗片雜交(Mattei等，(1985)Hum.Genet.69327-331)。
在用核乳膠(KODAK NTB2)包被後，使塗片曝光。為避免顯帶過程中銀粒的任何滑動，首先用緩衝Giemsa溶液染色染色體塗片，並在分裂中期照相。然後通過螢光染料-光解-Giemsa(FPG)法，進行R-顯帶，分析前分裂中期再照相。
對其它物種使用相似的合適方法。
IV.DCRS5 mRNA定位每泳道含約2μg polyA+RNA的人多組織(目錄號1、2)和癌細胞系印跡(目錄號7757-1)來自Clontech(Palo Alto，CA)。探針用[α-32P]dATP放射性標記，例如使用Amersham Rediprime隨機引物標記試劑盒(RPN 1633)。預雜交和雜交例如在0.5M Na2HPO4、7％SDS、0.5M EDTA(pH 8.0)中於65℃進行。例如，高嚴格性洗滌例如按照以下說明進行以2×SSC、0.1％SDS於65℃進行40分鐘的兩次初始洗滌，接著以0.1×SSC、0.1％SDS進行20分鐘的隨後洗滌。然後在增感屏存在下，將膜於-70℃對X射線感光膠片(Kodak)曝光。用選定的合適人DCRS5克隆通過cDNA文庫DNA印跡進行更詳細的研究，以檢測其在造血細胞或其它細胞亞群中的表達。
或者，由SEQ ID NO1選擇兩種合適的引物。選擇存在產生cDNA的信息的合適mRNA樣品，例如表達該基因的樣品，對其應用RT-PCR。
可通過由PCR信號預先選擇的合適組織的cDNA文庫雜交來分離全長克隆。可進行RNA印跡。
通過合適的技術，例如PCR、免疫測定、雜交等，分析DCRS5編碼基因的信息。組織和器官cDNA製備物例如可得自Clontech，Mountain View，CA。如所述鑑別天然表達源是有用的。再者，鑑別功能受體亞基配對，使得可以預測哪種細胞表達對每種細胞因子配體都產生生理反應的受體亞基組合。
對於小鼠分布，例如可進行DNA印跡分析用合適的限制酶消化原初擴增的cDNA文庫的DNA(5μg)，以釋放插入片段，在1％瓊脂糖凝膠上電泳，並轉移至尼龍膜(Schleicher and Schuell，Keene，NY)。
用於小鼠mRNA分離的樣品包括靜息小鼠成纖維L細胞系(C200)；Braf:ER(Braf融合至雌激素受體)轉染細胞，對照(C201)；T細胞，TH1極化(脾臟Mel14 bright，CD4+細胞，用IFNγ和抗IL-4極化7天；T200)；T細胞，TH2極化(脾臟Mel14 bright，CD4+細胞，用IL-4和抗IFN-γ極化7天，T201)；高度Th1極化的T細胞(參見Openshaw等，(1995)J.Exp.Med.1821357-1367；用抗CD3活化2、6、16小時的合併物；T202)；高度Th2極化的T細胞(參見Openshaw等，出處同上；用抗CD3活化2、6、16小時的合併物；T203)；CD44-CD25+前T細胞，由胸腺分揀(T204)；TH1T細胞克隆D1.1，在用抗原最後刺激後靜息3周(T205)；TH1T細胞克隆D1.1，10μg/ml ConA刺激15小時(T206)；TH2T細胞克隆CDC35，在用抗原最後刺激後靜息3周(T207)；TH2T細胞克隆CDC35，10μg/ml ConA刺激15小時(T208)；脾臟Mel14+原初T細胞，靜息(T209)；Mel14+T細胞，用IFN-γ/IL-12/抗IL-4進行Th1極化6、12、24小時的合併物(T210)；Mel14+T細胞，用IL-4/抗IFN-γ進行Th2極化6、13、24小時的合併物(T211)；未經刺激的成熟B細胞白血病細胞系A20(B200)；未經刺激的B細胞系CH12(B201)；未經刺激的脾臟大B細胞(B202)；總脾B細胞，LPS活化(B203)；經三碘苯甲醯氨基葡糖富集的脾臟樹突細胞，靜息(D200)；骨髓樹突細胞，靜息(D201)；用LPS活化4小時的單核細胞系RAW 264.7(M200)；用GM和M-CSF衍化的骨髓巨噬細胞(M201)；巨噬細胞系J774，靜息(M202)；於0.5、1、3、6、12小時合併的巨噬細胞系J774+LPS+抗IL-10(M203)；於0.5、1、3、5、12小時合併的巨噬細胞系J774+LPS+抗IL-10(M204)；氣溶膠攻擊的小鼠肺組織，Th2引發劑(primer)，氣溶膠OVA攻擊7、14、23小時的合併物(參見Garlisi等，(1995)Clinical Immunology andImmunopathology 7575-83；X206)；Nippostrongulus感染的肺組織(參見Coffinan等，(1989)Science 245308-310；X200)；成人全肺，正常(O200)；全肺，rag-1(參見Schwarz等，(1993)Immunodeficiency4249-252；O205)；IL-10敲除(K.O.)的脾臟(參見Kuhn等，(1991)Cell75263-274；X201)；成人全脾，正常(O201)；全脾，rag-1(O207)；IL-10敲除的淋巴集結(O202)；全淋巴集結，正常(O210)；IL-10敲除的腸繫膜淋巴結(X203)；全腸繫膜淋巴結，正常(O211)；IL-10敲除的結腸(X203)；全結腸，正常(O212)；NOD小鼠胰腺(參見Makino等，(1980)Jikken Dobutsu 291-13；X205)；全胸腺，rag-1(O208)；全腎臟，rag-1(O209)；全心臟，rag-1(O202)；全腦，rag-1(O203)；全睪丸，rag-1(O204)；全肝臟，rag-1(O206)；大鼠正常關節組織(O300)；和大鼠關節炎性關節組織(X300)。
用於人mRNA分離的樣品可包括外周血單核細胞(單核細胞、T細胞、NK細胞、粒細胞、B細胞)，靜息(T100)；外周血單核細胞，用抗CD3活化2、6、12小時的合併物(T101)；T細胞，TH0克隆Mot72，靜息(T102)；T細胞，TH0克隆Mot 72，用抗CD28和抗CD3活化3、6、12小時的合併物(T103)；T細胞，TH0克隆Mot 72，用特異性肽無反應性處理2、7、12小時的合併物(T104)；T細胞，TH1克隆HY06，靜息(T107)；T細胞，TH1克隆HY06，用抗CD28和抗CD3活化3、6、12小時的合併物(T108)；T細胞，TH1克隆HY06，用特異性肽無反應性處理2、6、12小時的合併物(T109)；T細胞，TH2克隆HY935，靜息(T110)；T細胞，TH2克隆HY935，用抗CD28和抗CD3活化2、7、12小時的合併物(T111)；T細胞CD4+CD45RO-T細胞，用抗CD28、IL-4和抗IFN-γ極化27天，TH2極化，用抗CD3和抗CD28活化4小時(T116)；T細胞腫瘤細胞系Jurkat和Hut78，靜息(T117)；T細胞克隆，合併AD130.2、Tc783.12、Tc783.13、Tc783.58、Tc782.69，靜息(T118)；T細胞隨機γδT細胞克隆，靜息(T119)；脾細胞，靜息(B100)；脾細胞，用抗CD40和IL-4活化(B101)；B細胞EBV系，合併WT49、RSB、JY、CVIR、721.221、RM3、HSY，靜息(B102)；B細胞系JY，用PMA和離子黴素活化1、6小時的合併物(B103)；合併的NK 20克隆，靜息(K100)；合併的NK 20克隆，用PMA和離子黴素活化6小時(K101)；NKL克隆，得自LGL白血病患者的外周血，IL-2處理(K106)；NK細胞毒性克隆640-A30-1，靜息(K107)；造血前體細胞系TF1，用PMA和離子黴素活化1、6小時的合併物(C100)；U937前單核細胞系，靜息(M100)；U937前單核細胞系，用PMA和離子黴素活化1、6小時的合併物(M101)；淘洗的單核細胞，用LPS、IFNγ、抗IL-10活化1、2、6、12、24小時的合併物(M102)；淘洗的單核細胞，用LPS、IFNγ、IL-10活化1、2、6、12、24小時的合併物(M103)；淘洗的單核細胞，用LPS、IFNγ、抗IL-10活化4、16小時的合併物(M106)；淘洗的單核細胞，用LPS、IFNγ、IL-10活化4、16小時的合併物(M107)；淘洗的單核細胞，LPS活化1小時(M108)；淘洗的單核細胞，LPS活化6小時(M109)；DC 70％CD1a+，得自12天的CD34+GM-CSF，TNFα，靜息(D101)；DC 70％CD1a+，得自12天的CD34+GM-CSF，TNFα，用PMA和離子黴素活化1小時(D102)；DC 70％CD1a+，得自12天的CD34+GM-CSF，TNFα，用PMA和離子黴素活化6小時(D103)；DC 95％CD1a+，得自12天FACS分揀的CD34+GM-CSF，TNFα，用PMA和離子黴素活化1、6小時的合併物(D104)；DC 95％CD14+，不包括(ex)12天FACS分揀的CD34+GM-CSF，TNFα，用PMA和離子黴素活化1、6小時的合併物(D105)；DC CD1a+CD86+，得自12天分揀的CD34+GM-CSF，TNFα，用PMA和離子黴素活化1、6小時的合併物(K106)；得自5天的單核細胞GM-CSF、IL-4的DC，靜息(D107)；得自5天的單核細胞GM-CSF、IL-4的DC，靜息(D108)；得自5天的單核細胞GM-CSF、IL-4的DC，LPS活化4、16小時的合併物(D109)；得自5天的單核細胞GM-CSF、IL-4的DC，活化的TNFα，單核細胞supe 4、16小時的合併物(D110)；平滑肌瘤L11良性瘤(X101)；正常子宮肌層M5(O115)；惡性平滑肌肉瘤GS1(X103)；肺成纖維細胞肉瘤系MRC5，用PMA和離子黴素活化1、6小時的合併物(C101)；腎上皮癌細胞系CHA，用PMA和離子黴素活化1、6小時的合併物(C102)；胎腎，28周，雄性(O100)；胎肺，28周，雄性(O101)；胎肝，28周，雄性(O102)；胎心，28周，雄性(O103)；胎腦，28周，雄性(O104)；胎膽囊，28周，雄性(O106)；胎小腸，28周，雄性(O107)；胎脂肪組織，28周，雄性(O108)；胎卵巢，25周，雌性(O109)；胎子宮，25周，雌性(O110)；胎睪丸，28周，雄性(O111)；胎脾，28周，雄性(O112)；成熟胎盤，28周(O113)；和發炎的扁桃體，來自12歲個體(X100)。
可在要評價的其它物種中分離相似的樣品。
V.克隆DCRS5的種相應物使用各種策略獲得所述DCRS5的種相對應物，優選由其它靈長類動物或嚙齒類動物獲得。一個方法是利用交叉雜交，使用緊密相關的種DNA探針。其可作為中間步驟用於研究進化相似的種。另一個方法是使用特異性PCR引物，其基於對基因間的相似性或差異性區段(例如高度保守或非保守的多肽或核苷酸序列的區域)的鑑別。
資料庫搜索可鑑別相似的序列，並可產生合適的探針。
VI.生產哺乳動物DCRS5蛋白工程化一種合適的(例如穀胱甘肽S轉移酶(GST))融合構建物，以例如在大腸桿菌中表達。例如，構建小鼠IGIF pGEX質粒，並轉化入大腸桿菌中。將新鮮轉化的細胞在例如含50μg/m1氨苄青黴素的LB培養基中培養，並用IPTG(Sigma，St.Louis，MO)誘導。在過夜誘導後，收穫細菌，分離含DCRS5蛋白的沉澱。例如以2L TE緩衝液(50mM Tris-base pH 8.0，10mM EDTA和2mM Pefabloc)勻漿沉澱。將該物質三次通過Microfluidizer(Microfluidics，Newton，MA)。流化的上清液在Sorvall GS-3轉子中以13,000rpm旋轉1小時。過濾所獲得的含細胞因子受體蛋白的上清液，並通過以50mM Tris-basepH 8.0平衡的穀胱甘肽-Sepharose柱。合併含DCRS5-GST融合蛋白的級分，並例如用凝血酶(Enzyme Research Laboratories，Inc.，SouthBend，IN)切割。然後將經切割的合併液通過以50mM Tris-base平衡的Q-Sepharose柱。合併含DCRS5的級分，以冷蒸餾水稀釋，以降低電導率，並再通過新的Q-Sepharose柱，該柱或者是單獨的，或者與免疫親和抗體柱相連。合併含DCRS5蛋白的級分，等分，並儲存在-70℃冰箱中。
與細胞因子受體蛋白的圓二色性譜對比可提示，蛋白正確摺疊，參見例如Hazuda等，(1969)J Biol.Chem.2641689-1693。
VII.製備DCRS5特異性抗體用重組形式的蛋白，例如純化的DCRS5或穩定轉染的NIH-3T3細胞，腹膜內免疫Balb/c近交小鼠。在有或無附加佐劑的情況下，用蛋白於適合的時間點加強免疫小鼠，以進一步刺激抗體產生。收集血清，或用收集的脾臟生產雜交瘤。
或者，用所述基因或其片段轉化的內源或外源細胞或利用抗原表達富集的分離膜來免疫Balb/c小鼠。在合適的時間收集血清，通常在眾多的進一步給予之後。各種基因治療技術可用於例如原位生產蛋白，以產生免疫應答。可對血清或抗體製品進行交叉吸收或免疫選擇，以製備限定特異性和高親和性的基本純化的抗體。
可製備單克隆抗體。例如，將脾細胞與合適的融合配偶體融合，通過標準方法在生長培養基中選擇雜交瘤。根據存在結合DCRS5的抗體的情況，例如通過ELISA或其它測定，篩選雜交瘤上清液。還可以選擇或製備特異性識別特定的DCRS5實施方案的抗體。
在另一種方法中，將合成肽或純化蛋白提呈給免疫系統，以生產單克隆或多克隆抗體。參見例如Coligan(編輯)(1991)CurrentProtocols in Immunology Wiley/Greene；和Harlow和Lane，出處同上。在合適的情況下，結合試劑或者如上所述以例如螢光等標記，或者固定至用於淘洗法的基質。還可將核酸導入到動物體內的細胞中，以生產起激發免疫應答作用的抗原。參見例如Wang等，(1993)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 904156-4160；Barry等，(1994)BioTechniques16616-619；和Xiang等，(1995)Immunity 2129-135。
VIII.用DCRS5生產融合蛋白用DCRS5製備各種融合構建物，包括組合DCRS5與IL-12Rβ1序列的實施方案。將合適基因的一部分融合至附加表位(如FLAG標誌)或雙雜交系統構建物，參見例如Fields和Song(1989)Nature340245-246。附加表位可用於表達克隆方法，該方法採用抗FLAG抗體檢測結合配偶體，例如各個細胞因子受體的配體。雙雜交系統還可用於分離特異性結合DCRS5的蛋白。
IX結構活性關係使用標準方法和分析測定有關特定殘基關鍵性(criticality)的信息。例如通過在確定的位置(例如在以上鑑別的位置)產生許多不同的變異體，並評價變異體的生物活性，進行標準誘變分析。其可進行至確定修飾活性的位置的程度，或集中在特定位置，以確定可被置換以保留、阻斷或調節生物活性的殘基。
或者，天然變異體分析可表明哪些位置耐受天然突變。這可由個體間變異或跨菌株或物種間變異的群分析產生。分析所選個體的樣品，例如通過PCR分析和測序。這可評價群多態性。
X.DCRS5和IL-12Rβ1的共表達可將一種或多種編碼各個基因的載體轉染入細胞中。優選地，這種載體可具有選擇標記，以鑑別哪種細胞已成功被轉化。這兩種基因的共表達使得該基因產物正確地結合，形成活性受體複合物。或者，可使用引起功能性二聚體結合的方法，參見例如O′Shea等，(1989)Science 245646-648；Kostelny等，(1992)J.Immunol.1481547-1553；Patel等，(1996)J Biol.Chem.27130386-30391。胞外結構域的表達和物理結合(例如由Fos/Jun亮氨酸拉鏈親和性形成的物理結合)產生配體結合構建物，其應起用於診斷或治療用途的結合化合物的作用。
XI.p19(也叫做IL-B30)、p40和DCRS5(也叫做IL-23R)的分布根據Taqman實時PCR測定(PE Applied Biosystems，Foster City，CA)確定，p19、p40和DCRS5由各種細胞和組織表達，其中結果相對於泛蛋白表達表示(表2)。泛蛋白表達定為1。結果發現，p19和p40的表達在炎性皮膚病(例如銀屑病和特應性皮炎)中均提升，對蛔蟲攻擊有反應(表2)。在過敏性肺炎、特發性肺纖維化、炎性腸病(IBD)如節段性迴腸炎中，p19的表達升高(表2)。例如在銀屑病和類風溼性關節炎中，發現IL-23R(也叫做DCRS5)表達增加(表2)。
表2.通過Taqman分析細胞和組織中的p19、p40和IL-23R的表達
XII.IL-23受體(IL-23R)的組織學使用抗IL-23R抗體(24F9)和同種型對照抗體(31F11)對人組織進行組織學分析(表3)。淋巴細胞、巨噬細胞和罕見漿細胞亞群經抗IL-23R抗體染色顯示為陽性。陽性染色的淋巴細胞位於淋巴結中的濾泡間區域，而不是淋巴結中的生發中心。
類風溼性關節炎(RA)的滑膜樣品表明，炎性細胞(特別是漿細胞)的染色比正常對照樣品更強，且炎性細胞更廣泛。正常滑膜樣品不含炎性細胞浸潤物。
來自患炎性腸病(IBD)(即節段性迴腸炎和潰瘍性結腸炎)的結腸和小腸的樣品揭示，測試陽性的淋巴細胞和漿細胞比正常對照更普遍。普遍性的增加與組織中的炎性細胞總數的增加成比例。慢性梗塞性肺病(COPD)的肺樣品顯示出Clara細胞測試陽性，而正常患者樣品的Clara細胞是陰性。一名正常62歲男性的皮膚樣品顯示的淋巴細胞染色值為0，而一名54歲銀屑病患者的皮膚樣品顯示的淋巴細胞值為2(罕見)。
表3.人組織的組織學。用抗IL-23R抗體(24F9)相對於同種型對照抗體的染色。數值反映染色強度。(--)表示未測定。
XIII.給予小鼠IL-23hyperkine和基因表達用鼠IL-23hyperkine或鹽水治療C57BI6/NT小鼠，接著通過Taqman實時PCR分析，測定157種基因的表達。每隻小鼠都在背部皮下注射鹽水或10μgIL-23hyperkine。在注射後的1、3或7天取出並提取組織樣品，其中合併這三天的樣品，然後用於Taqman分析。顯示了有和無IL-23 hyperkine治療時的基因表達比率(表4)。在測試的157種基因中，IL-23 hyperkine激發15種基因的表達增加1倍或以上(表4)。用IL-23治療增加的IL-6、CXCL-1、IL-17和GM-CSF，是在哮喘或變態反應、COPD、類風溼性關節炎、IBD和銀屑病中表現出表達或活性增加的細胞因子(表4)。
表4.[用IL-23治療的基因表達]/[用鹽水治療的基因表達]的比率
XIV.IL-23調節膠原蛋白誘發的關節炎(CIA)製備p19敲除(p19KO)小鼠(Cua等，(2003)Nature 421744-748)。p19KO小鼠為IL-23缺陷型，IL-23是一種含p19亞基和p40亞基的異源二聚細胞因子，業已發現p19KO小鼠抗膠原蛋白誘發的關節炎(CIA)，CIA是類風溼性關節炎小鼠模型(表5)(參見例如Holmdahl等，(2002)Ageing Res.Rev.1135-147；Luross和Williams(2001)Immunology 103407-416；Durie等，(1994)Clin.Immunol.Immunopathol.7311-18)。相比之下，和野生型對照相比，p35敲除小鼠表現出CIA惡化(表5)，p35敲除小鼠為IL-12缺陷型，IL-12是含p35亞基和p40亞基的異源二聚細胞因子。由小鼠C57BL/6品系製備p35KO、p40KO和p19KO小鼠。
表5.在野生型、p19、p35和p40敲除小鼠中的膠原蛋白誘發的關節炎(CIA)。NA表示不適用。
在不偏離本發明精神和範圍的情況下，可對本發明進行多種修飾和改變，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。提供本文描述的具體實施方案僅作為實例，本發明受所附權利要求書的術語以及該權利要求書所賦予的等同方案的完整範圍的限定；本發明不受本文作為實例提供的具體實施方案的限制。
序列表110先靈公司120哺乳動物受體蛋白、相關試劑和方法130DX01074B1K15060/203,4261512000-05-101606170PatentIn version 3.221012112859212DNA213人(Homo sapiens)220
221CDS222(119)..(2005)220
221成熟肽222(188)..(2005)4001gtggtacggg aattccattg tgttgggcag ccaacaaggg tggcagcctg gctctgaagt 60ggaattatgt gcttcaaaca ggttgaaaga gggaaacagt cttttcctgc ttccagac 118atg aat cak gtc act att caa tgg gat gca gta ata gcc ctt tac ata 166Met Asn Xaa Val Thr Ile Gln Trp Asp Ala Val Ile Ala Leu Tyr Ile-20 -15 -10ctc ttc agc tgg tgt cat gga gga att aca aat ata aac tgc tct ggc 214Leu Phe Ser Trp Cys His Gly Gly Ile Thr Asn Ile Asn Cys Ser Gly-5 -1 1 5cac atc tgg gta gaa cca gcc aca att ttt aag atg ggt atg aat atc 262His Ile Trp Val Glu Pro Ala Thr Ile Phe Lys Met Gly Met Asn Ile10 15 20 25tct ata tat tgc caa gca gca att aag aac tgc caa cca agg aaa ctt 310Ser Ile Tyr Cys Gln Ala Ala Ile Lys Asn Cys Gln Pro Arg Lys Leu30 35 40cat ttt tat aaa aat ggc atc aaa gaa aga ttt caa atc aca agg att 358His Phe Tyr Lys Asn Gly Ile Lys Glu Arg Phe Gln Ile Thr Arg Ile45 50 55aat aaa aca aca gct cgg ctt tgg tat aaa aac ttt ctg gaa cca cat 406Asn Lys Thr Thr Ala Arg Leu Trp Tyr Lys Asn Phe Leu Glu Pro His
60 65 70gct tct atg tac tgc act gct gaa tgt ccc aaa cat ttt caa gag aca 454Ala Ser Met Tyr Cys Thr Ala Glu Cys Pro Lys His Phe Gln Glu Thr75 80 85ctg ata tgt gga aaa gac att tct tct gga tat ccg cca gat att cct 502Leu Ile Cys Gly Lys Asp Ile Ser Ser Gly Tyr Pro Pro Asp Ile Pro90 95 100 105gat gaa gta acc tgt gtc att tat gaa tat tca ggc aac atg act tgc 550Asp Glu Val Thr Cys Val Ile Tyr Glu Tyr Ser Gly Asn Met Thr Cys110 115 120acc tgg aat gct rgg aag ctc acc tac ata gac aca aaa tac gtg gta 598Thr Trp Asn Ala Xaa Lys Leu Thr Tyr Ile Asp Thr Lys Tyr Val Val125 130 135cat gtg aag agt tta gag aca gaa gaa gag caa cag tat ctc acc tca 646His Val Lys Ser Leu Glu Thr Glu Glu Glu Gln Gln Tyr Leu Thr Ser140 145 150agc tat att aac atc tcc act gat tca tta caa ggt ggc aag aag tac 694Ser Tyr Ile Asn Ile Ser Thr Asp Ser Leu Gln Gly Gly Lys Lys Tyr155 160 165ttg gtt tgg gtc caa gca gca aac gca cta ggc atg gaa gag tca aaa 742Leu Val Trp Val Gln Ala Ala Asn Ala Leu Gly Met Glu Glu Ser Lys170 175 180 185caa ctg caa att cac ctg gat gat ata gtg ata cct tct gca gcc gtc 790Gln Leu Gln Ile His Leu Asp Asp Ile Val Ile Pro Ser Ala Ala Val190 195 200att tcc agg gct gag act ata aat gct aca gtg ccc aag acc ata att 838Ile Ser Arg Ala Glu Thr Ile Asn Ala Thr Val Pro Lys Thr Ile Ile205 210 215tat tgg gat agt caa aca aca att gaa aag gtt tcc tgt gaa atg aga 886Tyr Trp Asp Ser Gln Thr Thr Ile Glu Lys Val Ser Cys Glu Met Arg220 225 230tac aag gct aca aca aac caa act tgg aat gtt aaa gaa ttt gac acc 934Tyr Lys Ala Thr Thr Asn Gln Thr Trp Asn Val Lys Glu Phe Asp Thr235 240 245aat ttt aca tat gtg caa cag tca gaa ttc tac ttg gag cca aac att 982Asn Phe Thr Tyr Val Gln Gln Ser Glu Phe Tyr Leu Glu Pro Asn Ile250 255 260 265aag tac gta ttt caa gtg aga tgt caa gaa aca ggc aaa agg tac tgg1030Lys Tyr Val Phe Gln Val Arg Cys Gln Glu Thr Gly Lys Arg Tyr Trp270 275 280cag cct tgg agt tca ccg ttt ttt cat aaa aca cct gaa aca gtt ccc1078Gln Pro Trp Ser Ser Pro Phe Phe His Lys Thr Pro Glu Thr Val Pro285 290 295
cag gtc aca tca aaa gca ttc caa cat gac aca tgg aat tct ggg cta1126Gln Val Thr Ser Lys Ala Phe Gln His Asp Thr Trp Asn Ser Gly Leu300 305 310aca gtt gct tcc atc tct aca ggg cac ctt act tct gac aac aga gga1174Thr Val Ala Ser Ile Ser Thr Gly His Leu Thr Ser Asp Asn Arg Gly315 320 325gac att gga ctt tta ttg gga atg atc gtc ttt gct gtt atg ttg tca1222Asp Ile Gly Leu Leu Leu Gly Met Ile Val Phe Ala Val Met Leu Ser330 335 340 345att ctt tct ttg att ggg ata ttt aac aga tca ttc cga act ggg att1270Ile Leu Ser Leu Ile Gly Ile Phe Asn Arg Ser Phe Arg Thr Gly Ile350 355 360aaa aga agg atc tta ttg tta ata cca aag tgg ctt tat gaa gat att1318Lys Arg Arg Ile Leu Leu Leu Ile Pro Lys Trp Leu Tyr Glu Asp Ile365 370 375cct aat atg aaa aac agc aat gtt gtg aaa atg cta cag gaa aat agt1366Pro Asn Met Lys Asn Ser Asn Val Val Lys Met Leu Gln Glu Asn Ser380 385 390gaa ctt atg aat aat aat tcc agt gag cag gtc cta tat gtt gat ccc1414Glu Leu Met Asn Asn Asn Ser Ser Glu Gln Val Leu Tyr Val Asp Pro395 400 405atg att aca gag ata aaa gaa atc ttc atc cca gaa cac aag cct aca1462Met Ile Thr Glu Ile Lys Glu Ile Phe Ile Pro Glu His Lys Pro Thr410 415 420 425gac tac aag aag gag aat aca gga ccc ctg gag aca aga gac tac ccg1510Asp Tyr Lys Lys Glu Asn Thr Gly Pro Leu Glu Thr Arg Asp Tyr Pro430 435 440caa aac tcg cta ttc gac aat act aca gtt gta tat att cct gat ctc1558Gln Asn Ser Leu Phe Asp Asn Thr Thr Val Val Tyr Ile Pro Asp Leu445 450 455aac act gga tat aaa ccc caa att tca aat ttt ctg cct gag gga agc1606Asn Thr Gly Tyr Lys Pro Gln Ile Ser Asn Phe Leu Pro Glu Gly Ser460 465 470cat ctc agc aat aat aat gaa att act tcc tta aca ctt aaa cca cca1654His Leu Ser Asn Asn Asn Glu Ile Thr Ser Leu Thr Leu Lys Pro Pro475 480 485gtt gat tcc tta gac tca gga aat aat ccc agg tta caa aag cat cct1702Val Asp Ser Leu Asp Ser Gly Asn Asn Pro Arg Leu Gln Lys His Pro490 495 500 505aat ttt gct ttt tct gtt tca agt gtg aat tca cta agc aac aca ata1750Asn Phe Ala Phe Ser Val Ser Ser Val Asn Ser Leu Ser Asn Thr Ile
510 515 520ttt ctt gga gaa tta agc ctc ata tta aat caa gga gaa tgc agt tct1798Phe Leu Gly Glu Leu Ser Leu Ile Leu Asn Gln Gly Glu Cys Ser Ser525 530 535cct gac ata caa aac tca gta gag gag gaa acc acc atg ctt ttg gaa1846Pro Asp Ile Gln Asn Ser Val Glu Glu Glu Thr Thr Met Leu Leu Glu540 545 550aat gat tca ccc agt gaa act att cca gaa cag acc ctg ctt cct gat1894Asn Asp Ser Pro Ser Glu Thr Ile Pro Glu Gln Thr Leu Leu Pro Asp555 560 565gaa ttt gtc tcc tgt ttg ggg atc gtg aat gag gag ttg cca tct att1942Glu Phe Val Ser Cys Leu Gly Ile Val Asn Glu Glu Leu Pro Ser Ile570 575 580 585aat act tat ttt cca caa aat att ttg gaa agc cac ttc aat agg att1990Asn Thr Tyr Phe Pro Gln Asn Ile Leu Glu Ser His Phe Asn Arg Ile590 595 600tca ctc ttg gaa aag tagagctgtg tggtcaaaat caatatgaga aagctgcctt2045Ser Leu Leu Glu Lys605gcaatctgaa cttgggtttt ccctgcaata gaaattgaat tctgcctctt tttgaaaaaa 2105atgtattcac atacaaatct tcacatggac acatgttttc atttcccttg gataaatacc 2165taggtagggg attgctgggc catatgataa gcatatgttt cagttctacc aatcttgttt 2225ccagagtagt gacatttctg tgctcctacc atcaccatgt aagaattccc gggagctcca 2285tgccttttta attttagcca ttcttctgcc tmatttctta aaattagaga attaaggtcc 2345cgaaggtgga acatgcttca tggtcacaca tacaggcaca aaaacagcat tatgtggacg 2405cctcatgtat tttttataga gtcaactatt tcctctttat tttccctcat tgaaagatgc 2465aaaacagctc tctattgtgt acagaaaggg taaataatgc aaaatacctg gtagtaaaat 2525aaatgctgaa aattttcctt taaaatagaa tcattaggcc aggcgtggtg gctcatgctt 2585gtaatcccag cactttggta ggctgaggtr ggtggatcac ctgaggtcag gagttcgagt 2645ccagcctggc caatatgctg aaaccctgtc tctactaaaa ttacaaaaat tagccggcca 2705tggtggcagg tgcttgtaat cccagctact tgggaggctg aggcaggaga atcacttgaa 2765ccaggaaggc agaggttgca ctgagctgag attgtgccac tgcactccag cctgggcaac 2825aagagcaaaa ctctgtctgg aaaaaaaaaa aaaa 28592102
211629212PRT213人(Homo sapiens)220
221misc_feature222(-21)..(-21)223-21位的′Xaa′代表Gln或His.
220
221misc_feature222(126)..(126)223126位的′Xaa′代表Gly或Arg.
4002Met Asn Xaa Val Thr Ile Gln Trp Asp Ala Val Ile Ala Leu Tyr Ile-20 -15-10Leu Phe Ser Trp Cys His Gly Gly Ile Thr Asn Ile Asn Cys Ser Gly-5 -1 1 5His Ile Trp Val Glu Pro Ala Thr Ile Phe Lys Met Gly Met Asn Ile10 15 20 25Ser Ile Tyr Cys Gln Ala Ala Ile Lys Asn Cys Gln Pro Arg Lys Leu30 35 40His Phe Tyr Lys Asn Gly Ile Lys Glu Arg Phe Gln Ile Thr Arg Ile45 50 55Asn Lys Thr Thr Ala Arg Leu Trp Tyr Lys Asn Phe Leu Glu Pro His60 65 70Ala Ser Met Tyr Cys Thr Ala Glu Cys Pro Lys His Phe Gln Glu Thr75 80 85Leu Ile Cys Gly Lys Asp Ile Ser Ser Gly Tyr Pro Pro Asp Ile Pro90 95 100 105Asp Glu Val Thr Cys Val Ile Tyr Glu Tyr Ser Gly Asn Met Thr Cys110 115 120Thr Trp Asn Ala Xaa Lys Leu Thr Tyr Ile Asp Thr Lys Tyr Val Val125 130 135
His Val Lys Ser Leu Glu Thr Glu Glu Glu Gln Gln Tyr Leu Thr Ser140 145 150Ser Tyr Ile Asn Ile Ser Thr Asp Ser Leu Gln Gly Gly Lys Lys Tyr155 160 165Leu Val Trp Val Gln Ala Ala Asn Ala Leu Gly Met Glu Glu Ser Lys170 175 180 185Gln Leu Gln Ile His Leu Asp Asp Ile Val Ile Pro Ser Ala Ala Val190 195 200Ile Ser Arg Ala Glu Thr Ile Asn Ala Thr Val Pro Lys Thr Ile Ile205 210 215Tyr Trp Asp Ser Gln Thr Thr Ile Glu Lys Val Ser Cys Glu Met Arg220 225 230Tyr Lys Ala Thr Thr Asn Gln Thr Trp Asn Val Lys Glu Phe Asp Thr235 240 245Asn Phe Thr Tyr Val Gln Gln Ser Glu Phe Tyr Leu Glu Pro Asn Ile250 255 260 265Lys Tyr Val Phe Gln Val Arg Cys Gln Glu Thr Gly Lys Arg Tyr Trp270 275 280Gln Pro Trp Ser Ser Pro Phe Phe His Lys Thr Pro Glu Thr Val Pro285 290 295Gln Val Thr Ser Lys Ala Phe Gln His Asp Thr Trp Asn Ser Gly Leu300 305 310Thr Val Ala Ser Ile Ser Thr Gly His Leu Thr Ser Asp Asn Arg Gly315 320 325Asp Ile Gly Leu Leu Leu Gly Met Ile Val Phe Ala Val Met Leu Ser330 335 340 345Ile Leu Ser Leu Ile Gly Ile Phe Asn Arg Ser Phe Arg Thr Gly Ile350 355 360Lys Arg Arg Ile Leu Leu Leu Ile Pro Lys Trp Leu Tyr Glu Asp Ile365 370 375
Pro Asn Met Lys Asn Ser Asn Val Val Lys Met Leu Gln Glu Asn Ser380 385 390Glu Leu Met Asn Asn Asn Ser Ser Glu Gln Val Leu Tyr Val Asp Pro395 400 405Met Ile Thr Glu Ile Lys Glu Ile Phe Ile Pro Glu His Lys Pro Thr410 415 420 425Asp Tyr Lys Lys Glu Asn Thr Gly Pro Leu Glu Thr Arg Asp Tyr Pro430 435 440Gln Asn Ser Leu Phe Asp Asn Thr Thr Val Val Tyr Ile Pro Asp Leu445 450 455Asn Thr Gly Tyr Lys Pro Gln Ile Ser Asn Phe Leu Pro Glu Gly Ser460 465 470His Leu Ser Asn Asn Asn Glu Ile Thr Ser Leu Thr Leu Lys Pro Pro475 480 485Val Asp Ser Leu Asp Ser Gly Asn Asn Pro Arg Leu Gln Lys His Pro490 495 500 505Asn Phe Ala Phe Ser Val Ser Ser Val Asn Ser Leu Ser Asn Thr Ile510 515 520Phe Leu Gly Glu Leu Ser Leu Ile Leu Asn Gln Gly Glu Cys Ser Ser525 530 535Pro Asp Ile Gln Asn Ser Val Glu Glu Glu Thr Thr Met Leu Leu Glu540 545 550Asn Asp Ser Pro Ser Glu Thr Ile Pro Glu Gln Thr Leu Leu Pro Asp555 560 565Glu Phe Val Ser Cys Leu Gly Ile Val Asn Glu Glu Leu Pro Ser Ile570 575 580 585Asn Thr Tyr Phe Pro Gln Asn Ile Leu Glu Ser His Phe Asn Arg Ile590 595 600Ser Leu Leu Glu Lys
6052103211918212PRT213人(Homo sapiens)4003Met Leu Thr Leu Gln Thr Trp Val Val Gln Ala Leu Phe Ile Phe Leu1 5 10 15Thr Thr Glu Ser Thr Gly Glu Leu Leu Asp Pro Cys Gly Tyr Ile Ser20 25 30Pro Glu Ser Pro Val Val Gln Leu His Ser Asn Phe Thr Ala Val Cys35 40 45Val Leu Lys Glu Lys Cys Met Asp Tyr Phe His Val Asn Ala Asn Tyr50 55 60Ile Val Trp Lys Thr Asn His Phe Thr Ile Pro Lys Glu Gln Tyr Thr65 70 75 80Ile Ile Asn Arg Thr Ala Ser Ser Val Thr Phe Thr Asp Ile Ala Ser85 90 95Leu Asn Ile Gln Leu Thr Cys Asn Ile Leu Thr Phe Gly Gln Leu Glu100 105 110Gln Asn Val Tyr Gly Ile Thr Ile Ile Ser Gly Leu Pro Pro Glu Lys115 120 125Pro Lys Asn Leu Ser Cys Ile Val Asn Glu Gly Lys Lys Met Arg Cys130 135 140Glu Trp Asp Gly Gly Arg Glu Thr His Leu Glu Thr Asn Phe Thr Leu145 150 155 160Lys Ser Glu Trp Ala Thr His Lys Phe Ala Asp Cys Lys Ala Lys Arg165 170 175Asp Thr Pro Thr Ser Cys Thr Val Asp Tyr Ser Thr Val Tyr Phe Val180 185 190
Asn Ile Glu Val Trp Val Glu Ala Glu Asn Ala Leu Gly Lys Val Thr195 200 205Ser Asp His Ile Asn Phe Asp Pro Val Tyr Lys Val Lys Pro Asn Pro210 215 220Pro His Asn Leu Ser Val Ile Asn Ser Glu Glu Leu Ser Ser Ile Leu225 230 235 240Lys Leu Thr Trp Thr Asn Pro Ser Ile Lys Ser Val Ile Ile Leu Lys245 250 255Tyr Asn Ile Gln Tyr Arg Thr Lys Asp Ala Ser Thr Trp Ser Gln Ile260 265 270Pro Pro Glu Asp Thr Ala Ser Thr Arg Ser Ser Phe Thr Val Gln Asp275 280 285Leu Lys Pro Phe Thr Glu Tyr Val Phe Arg Ile Arg Cys Met Lys Glu290 295 300Asp Gly Lys Gly Tyr Trp Ser Asp Trp Ser Glu Glu Ala Ser Gly Ile305 310 315 320Thr Tyr Glu Asp Arg Pro Ser Lys Ala Pro Ser Phe Trp Tyr Lys Ile325 330 335Asp Pro Ser His Thr Gln Gly Tyr Arg Thr Val Gln Leu Val Trp Lys340 345 350Thr Leu Pro Pro Phe Glu Ala Asn Gly Lys Ile Leu Asp Tyr Glu Val355 360 365Thr Leu Thr Arg Trp Lys Ser His Leu Gln Asn Tyr Thr Val Asn Ala370 375 380Thr Lys Leu Thr Val Asn Leu Thr Asn Asp Arg Tyr Leu Ala Thr Leu385 390 395 400Thr Val Arg Asn Leu Val Gly Lys Ser Asp Ala Ala Val Leu Thr Ile405 410 415Pro Ala Cys Asp Phe Gln Ala Thr His Pro Val Met Asp Leu Lys Ala
420 425 430Phe Pro Lys Asp Asn Met Leu Trp Val Glu Trp Thr Thr Pro Arg Glu435 440 445Ser Val Lys Lys Tyr Ile Leu Glu Trp Cys Val Leu Ser Asp Lys Ala450 455 460Pro Cys Ile Thr Asp Trp Gln Gln Glu Asp Gly Thr Val His Arg Thr465 470 475 480Tyr Leu Arg Gly Asn Leu Ala Glu Ser Lys Cys Tyr Leu Ile Thr Val485 490 495Thr Pro Val Tyr Ala Asp Gly Pro Gly Ser Pro Glu Ser Ile Lys Ala500 505 510Tyr Leu Lys Gln Ala Pro Pro Ser Lys Gly Pro Thr Val Arg Thr Lys515 520 525Lys Val Gly Lys Asn Glu Ala Val Leu Glu Trp Asp Gln Leu Pro Val530 535 540Asp Val Gln Asn Gly Phe Ile Arg Asn Tyr Thr Ile Phe Tyr Arg Thr545 550 555 560Ile Ile Gly Asn Glu Thr Ala Val Asn Val Asp Ser Ser His Thr Glu565 570 575Tyr Thr Leu Ser Ser Leu Thr Ser Asp Thr Leu Tyr Met Val Arg Met580 585 590Ala Ala Tyr Thr Asp Glu Gly Gly Lys Asp Gly Pro Glu Phe Thr Phe595 600 605Thr Thr Pro Lys Phe Ala Gln Gly Glu Ile Glu Ala Ile Val Val Pro610 615 620Val Cys Leu Ala Phe Leu Leu Thr Thr Leu Leu Gly Val Leu Phe Cys625 630 635 640Phe Asn Lys Arg Asp Leu Ile Lys Lys His Ile Trp Pro Asn Val Pro645 650 655
Asp Pro Ser Lys Ser His Ile Ala Gln Trp Ser Pro His Thr Pro Pro660 665 670Arg His Asn Phe Asn Ser Lys Asp Gln Met Tyr Ser Asp Gly Asn Phe675 680 685Thr Asp Val Ser Val Val Glu Ile Glu Ala Asn Asp Lys Lys Pro Phe690 695 700Pro Glu Asp Leu Lys Ser Leu Asp Leu Phe Lys Lys Glu Lys Ile Asn705 710 715 720Thr Glu Gly His Ser Ser Gly Ile Gly Gly Ser Ser Cys Met Ser Ser725 730 735Ser Arg Pro Ser Ile Ser Ser Ser Asp Glu Asn Glu Ser Ser Gln Asn740 745 750Thr Ser Ser Thr Val Gln Tyr Ser Thr Val Val His Ser Gly Tyr Arg755 760 765His Gln Val Pro Ser Val Gln Val Phe Ser Arg Ser Glu Ser Thr Gln770 775 780Pro Leu Leu Asp Ser Glu Glu Arg Pro Glu Asp Leu Gln Leu Val Asp785 790 795 800His Val Asp Gly Gly Asp Gly Ile Leu Pro Arg Gln Gln Tyr Phe Lys805 810 815Gln Asn Cys Ser Gln His Glu Ser Ser Pro Asp Ile Ser His Phe Glu820 825 830Arg Ser Lys Gln Val Ser Ser Val Asn Glu Glu Asp Phe Val Arg Leu835 840 845Lys Gln Gln Ile Ser Asp His Ile Ser Gln Ser Cys Gly Ser Gly Gln850 855 860Met Lys Met Phe Gln Glu Val Ser Ala Ala Asp Ala Phe Gly Pro Gly865 870 875 880
Thr Glu Gly Gln Val Glu Arg Phe Glu Thr Val Gly Met Glu Ala Ala885 890 895Thr Asp Glu Gly Met Pro Lys Ser Tyr Leu Pro Gln Thr Val Arg Gln900 905 910Gly Gly Tyr Met Pro Gln9152104211862212PRT213人(Homo sapiens)4004Met Ala His Thr Phe Arg Gly Cys Ser Leu Ala Phe Met Phe Ile Ile1 5 10 15Thr Trp Leu Leu Ile Lys Ala Lys Ile Asp Ala Cys Lys Arg Gly Asp20 25 30Val Thr Val Lys Pro Ser His Val Ile Leu Leu Gly Ser Thr Val Asn35 40 45Ile Thr Cys Ser Leu Lys Pro Arg Gln Gly Cys Phe His Tyr Ser Arg50 55 60Arg Asn Lys Leu Ile Leu Tyr Lys Phe Asp Arg Arg Ile Asn Phe His65 70 75 80His Gly His Ser Leu Asn Ser Gln Val Thr Gly Leu Pro Leu Gly Thr85 90 95Thr Leu Phe Val Cys Lys Leu Ala Cys Ile Asn Ser Asp Glu Ile Gln100 105 110Ile Cys Gly Ala Glu Ile Phe Val Gly Val Ala Pro Glu Gln Pro Gln115 120 125Asn Leu Ser Cys Ile Gln Lys Gly Glu Gln Gly Thr Val Ala Cys Thr130 135 140Trp Glu Arg Gly Arg Asp Thr His Leu Tyr Thr Glu Tyr Thr Leu Gln145 150 155 160
Leu Ser Gly Pro Lys Asn Leu Thr Trp Gln Lys Gln Cys Lys Asp Ile165 170 175Tyr Cys Asp Tyr Leu Asp Phe Gly Ile Asn Leu Thr Pro Glu Ser Pro180 185 190Glu Ser Asn Phe Thr Ala Lys Val Thr Ala Val Asn Ser Leu Gly Ser195 200 205Ser Ser Ser Leu Pro Ser Thr Phe Thr Phe Leu Asp Ile Val Arg Pro210 215 220Leu Pro Pro Trp Asp Ile Arg Ile Lys Phe Gln Lys Ala Ser Val Ser225 230 235 240Arg Cys Thr Leu Tyr Trp Arg Asp Glu Gly Leu Val Leu Leu Asn Arg245 250 255Leu Arg Tyr Arg Pro Ser Asn Ser Arg Leu Trp Asn Met Val Asn Val260 265 270Thr Lys Ala Lys Gly Arg His Asp Leu Leu Asp Leu Lys Pro Phe Thr275 280 285Glu Tyr Glu Phe Gln Ile Ser Ser Lys Leu His Leu Tyr Lys Gly Ser290 295 300Trp Ser Asp Trp Ser Glu Ser Leu Arg Ala Gln Thr Pro Glu Glu Glu305 310 315 320Pro Thr Gly Met Leu Asp Val Trp Tyr Met Lys Arg His Ile Asp Tyr325 330 335Ser Arg Gln Gln Ile Ser Leu Phe Trp Lys Asn Leu Ser Val Ser Glu340 345 350Ala Arg Gly Lys Ile Leu His Tyr Gln Val Thr Leu Gln Glu Leu Thr355 360 365Gly Gly Lys Ala Met Thr Gln Asn Ile Thr Gly His Thr Ser Trp Thr370 375 380
Thr Val Ile Pro Arg Thr Gly Asn Trp Ala Val Ala Val Ser Ala Ala385 390 395 400Asn Ser Lys Gly Ser Ser Leu Pro Thr Arg Ile Asn Ile Met Asn Leu405 410 415Cys Glu Ala Gly Leu Leu Ala Pro Arg Gln Val Ser Ala Asn Ser Glu420 425 430Gly Met Asp Asn Ile Leu Val Thr Trp Gln Pro Pro Arg Lys Asp Pro435 440 445Ser Ala Val Gln Glu Tyr Val Val Glu Trp Arg Glu Leu His Pro Gly450 455 460Gly Asp Thr Gln Val Pro Leu Asn Trp Leu Arg Ser Arg Pro Tyr Asn465 470 475 480Val Ser Ala Leu Ile Ser Glu Asn Ile Lys Ser Tyr Ile Cys Tyr Glu485 490 495Ile Arg Val Tyr Ala Leu Ser Gly Asp Gln Gly Gly Cys Ser Ser Ile500 505 510Leu Gly Asn Ser Lys His Lys Ala Pro Leu Ser Gly Pro His Ile Asn515 520 525Ala Ile Thr Glu Glu Lys Gly Ser Ile Leu Ile Ser Trp Asn Ser Ile530 535 540Pro Val Gln Glu Gln Met Gly Cys Leu Leu His Tyr Arg Ile Tyr Trp545 550 555 560Lys Glu Arg Asp Ser Asn Ser Gln Pro Gln Leu Cys Glu Ile Pro Tyr565 570 575Arg Val Ser Gln Asn Ser His Pro Ile Asn Ser Leu Gln Pro Arg Val580 585 590Thr Tyr Val Leu Trp Met Thr Ala Leu Thr Ala Ala Gly Glu Ser Ser595 600 605
His Gly Asn Glu Arg Glu Phe Cys Leu Gln Gly Lys Ala Asn Trp Met610 615 620Ala Phe Val Ala Pro Ser Ile Cys Ile Ala Ile Ile Met Val Gly Ile625 630 635 640Phe Ser Thr His Tyr Phe Gln Gln Lys Val Phe Val Leu Leu Ala Ala645 650 655Leu Arg Pro Gln Trp Cys Ser Arg Glu Ile Pro Asp Pro Ala Asn Ser660 665 670Thr Cys Ala Lys Lys Tyr Pro Ile Ala Glu Glu Lys Thr Gln Leu Pro675 680 685Leu Asp Arg Leu Leu Ile Asp Trp Pro Thr Pro Glu Asp Pro Glu Pro690 695 700Leu Val Ile Ser Glu Val Leu His Gln Val Thr Pro Val Phe Arg His705 710 715 720Pro Pro Cys Ser Asn Trp Pro Gln Arg Glu Lys Gly Ile Gln Gly His725 730 735Gln Ala Ser Glu Lys Asp Met Met His Ser Ala Ser Ser Pro Pro Pro740 745 750Pro Arg Ala Leu Gln Ala Glu Ser Arg Gln Leu Val Asp Leu Tyr Lys755 760 765Val Leu Glu Ser Arg Gly Ser Asp Pro Lys Pro Glu Asn Pro Ala Cys770 775 780Pro Trp Thr Val Leu Pro Ala Gly Asp Leu Pro Thr His Asp Gly Tyr785 790 795 800Leu Pro Ser Asn Ile Asp Asp Leu Pro Ser His Glu Ala Pro Leu Ala805 810 815Asp Ser Leu Glu Glu Leu Glu Pro Gln His Ile Ser Leu Ser Val Phe820 825 830
Pro Ser Ser Ser Leu His Pro Leu Thr Phe Ser Cys Gly Asp Lys Leu835 840 845Thr Leu Asp Gln Leu Lys Met Arg Cys Asp Ser Leu Met Leu850 855 86021052111025212DNA213人(Homo sapiens)4005ccgaattcgg cacgagaaca actgagggaa ccaaaccaga gacgcgctga acagagagaa 60tcaggctcaa agcaagtgga agtgggcaga gattccacca ggactggtgc aaggcgcaga120gccagccaga tttgagaaga aggcaaaaag atgctgggga gcagagctgt aatgctgctg180ttgctgctgc cctggacagc tcagggcaga gctgtgcctg ggggcagcag ccctgcctgg240actcagtgcc agcagctttc acagaagctc tgcacactgg cctggagtgc acatccacta300gtgggacaca tggatctaag agaagaggga gatgaagaga ctacaaatga tgttccccat360atccagtgtg gagatggctg tgacccccaa ggactcaggg acaacagtca gttctgcttg420caaaggatcc accagggtct gattttttat gagaagctgc taggatcgga tattttcaca480ggggagcctt ctctgctccc tgatagccct gtggcgcagc ttcatgcctc cctactgggc540ctcagccaac tcctgcagcc tgagggtcac cactgggaga ctcagcagat tccaagcctc600agtcccagcc agccatggca gcgtctcctt ctccgcttca aaatccttcg cagcctccag660gcctttgtgg ctgtagccgc ccgggtcttt gcccatggag cagcaaccct gagtccctaa720aggcagcagc tcaaggatgg cactcagatc tccatggccc agcaaggcca agataaatct780accaccccag gcacctgtga gccaacaggt taattagtcc attaatttta gtgggacctg840catatgttga aaattaccaa tactgactga catgtgatgc tgacctatga taaggttgag900tatttattag atgggaaggg aaatttgggg attatttatc ctcctgggga cagtttgggg960aggattattt attgtattta tattgaatta tgtacttttt tcaataaagt cttatttttg 1020tggct 10252106211189212PRT213人(Homo sapiens)4006Met Leu Gly Ser Arg Ala Val Met Leu Leu Leu Leu Leu Pro Trp Thr
1 5 10 15Ala Gln Gly Arg Ala Val Pro Gly Gly Ser Ser Pro Ala Trp Thr Gln20 25 30Cys Gln Gln Leu Ser Gln Lys Leu Cys Thr Leu Ala Trp Ser Ala His35 40 45Pro Leu Val Gly His Met Asp Leu Arg Glu Glu Gly Asp Glu Glu Thr50 55 60Thr Asn Asp Val Pro His Ile Gln Cys Gly Asp Gly Cys Asp Pro Gln65 70 75 80Gly Leu Arg Asp Asn Ser Gln Phe Cys Leu Gln Arg Ile His Gln Gly85 90 95Leu Ile Phe Tyr Glu Lys Leu Leu Gly Ser Asp Ile Phe Thr Gly Glu100 105 110Pro Ser Leu Leu Pro Asp Ser Pro Val Ala Gln Leu His Ala Ser Leu115 120 125Leu Gly Leu Ser Gln Leu Leu Gln Pro Glu Gly His His Trp Glu Thr130 135 140Gln Gln Ile Pro Ser Leu Ser Pro Ser Gln Pro Trp Gln Arg Leu Leu145 150 155 160Leu Arg Phe Lys Ile Leu Arg Ser Leu Gln Ala Phe Val Ala Val Ala165 170 175Ala Arg Val Phe Ala His Gly Ala Ala Thr Leu Ser Pro180 18權利要求
1.一種治療經受生理疾病的人類受試者的方法，其包括給予有效量的DCRS5(SEQ ID NO1或2)或p19(SEQ ID NO5或6)的激動劑或拮抗劑，其中所述疾病包括a)哮喘或變態反應；b)慢性梗阻性肺病(COPD)；或c)間質性肺病。
2.權利要求1的方法，其中所述間質性肺病為a)特發性肺纖維化；b)嗜酸性細胞肉芽腫；或c)過敏性肺炎。
3.權利要求1的方法，其中所述拮抗劑包含來自抗體的抗原結合位點的結合組合物，該抗體特異性結合a)DCRS5(SEQ ID NO2)；或b)p19(SEQ ID NO6)。
4.權利要求3的方法，其中所述結合組合物包含a)多克隆抗體；b)單克隆抗體；c)人源化抗體；或d)Fab、Fv或F(ab′)2片段。
5.權利要求1的方法，其中所述激動劑包含a)DCRS5(SEQ ID NO2)；或b)p19(SEQ ID NO6)。
6.權利要求1的方法，其中所述激動劑或拮抗劑包含核酸。
7.權利要求6的方法，其中所述拮抗劑包含a)反義核酸；或b)RNA幹擾核酸。
8.一種診斷生理疾病的方法，其包括使特異性結合DCRS5(SEQID NO1或2)或p19(SEQ ID NO5或6)的結合組合物與來自測試受試者的樣品接觸，其中所述測試受試者經受a)哮喘或變態反應；b)慢性梗阻性肺病(COPD)；或c)間質性肺病。
9.權利要求8的方法，其進一步包括a)使結合組合物與來自對照受試者的樣品或對照樣品接觸；和b)比較用測試受試者觀察到的結合和用對照受試者或對照樣品觀察到的結合。
10.權利要求8的方法，其中所述結合組合物包含a)多克隆抗體；b)單克隆抗體；c)人源化抗體；d)Fab、Fv或F(ab′)2片段；e)核酸；或f)可檢測標記。
11.權利要求10的方法，其中所述核酸包含a)探針或引物；或b)分子信標。
12.權利要求8的方法，其中所述樣品來源於人細胞、組織或體液。
13.權利要求8的方法，其中所述間質性肺病為a)特發性肺纖維化；b)嗜酸性細胞肉芽腫；或c)過敏性肺炎。
全文摘要
編碼哺乳動物(例如靈長類動物)受體的核酸、純化的受體蛋白及其片段。還同時提供多克隆抗體和單克隆抗體。描述了使用同時具有診斷和治療用途的組合物的方法。
文檔編號C07K14/715GK1906297SQ200480040614
公開日2007年1月31日 申請日期2004年11月18日 優先權日2003年11月21日
發明者M·奇裡卡, R·A·卡斯特萊恩, K·W·莫雷, C·L·帕哈姆 申請人:先靈公司