用作抗血小板聚集抑制劑和血管舒張劑的脒衍生物的製作方法

2023-05-16 13:49:21 2

專利名稱：用作抗血小板聚集抑制劑和血管舒張劑的脒衍生物的製作方法
背景技術：
發明領域本發明涉及具有供給一氧化氮性質的新的脒衍生物及其藥物組合物或製劑，以及它們的治療應用，尤其是用來作為血小板聚集、血小板粘連和再狹窄的抑制劑，抗動脈粥樣化劑，和用於治療用途的血管舒張劑，包括對不穩定心絞痛，中風，心肌梗塞，心肌局部缺血和再灌注損傷，內臟局部缺血和再灌注損傷，動脈粥樣硬化，充血性心衰，心律失常，血栓形成，高血壓，肺病，轉移和骨質疏鬆的治療。相關技術纖維蛋白原是作為血漿正常成分存在的糖蛋白。在血液凝固的機制中，它參與了血小板的聚集和纖維蛋白的形成。
血小板是存在於全血中的細胞單元，它也參與了血液凝固。與血小板結合的纖維蛋白原在血液凝固機制中對正常的血小板功能至關重要。一旦血管受到損傷，與纖維蛋白原結合的血小板立即開始聚集並形成血栓。纖維蛋白原與血小板的作用是通過稱作GP IIb/IIIa的膜糖蛋白複合物進行的；這是血小板功能一個重要特徵。該作用的抑制劑對調節血小板的血栓形成有作用。
還已知道，叫做纖連蛋白的另一種大的糖蛋白是主要的胞外基質蛋白，它與血小板相互作用。已發現各種較大的多肽片斷在纖連蛋白的細胞結合區域具有細胞附著活性。參見美國專利4,517,686；4,589,881和4,661,111。同一分子中某些較小的肽片斷，發現當它固定到底物上時，增強了細胞對底物的附著，當它溶解或以懸浮狀態存在時，則抑制附著作用。參見美國專利4,578,079和4,614,517。
美國專利4,683,291中公開了所設計的對血小板功能有抑制作用的合成肽，它是纖維蛋白原與血小板結合的高親合性拮抗劑。美國專利4,857,508公開了具有血小板聚集抑制劑作用的四肽化合物。
其它的合成肽和它們作為纖維蛋白原與血小板結合的抑制劑的應用公開於Kozcewiak等《生物化學》(Biochem.)23，1767-1774(1984)；Plow等《美國國家科學院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.)，82，8057-8061(1985)；Ruggeri等《美國國家科學院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.)，83，5708-5712(1986)；Ginsberg等，《生物化學雜誌》(J.Biol.Chem.)260(7)，3931-3936(1985)；Haverstick等，《血液》(Blood)66(4)，946-952(1985)；和Ruoslahti和Piersbacher《科學》(Science)238，491-497(1987)。在歐洲專利申請275,748和298,820中公開了其它這種抑制性肽。
歐洲專利申請512,831公開了哌啶烷基-氮雜環烷酮，它抑制纖維蛋白原與血小板的結合，因而可用於抑制血小板的聚集。歐洲專利申請503,548公開了環脲衍生物(脒唑啉酮和三唑酮)，它們可用於抑制細胞間的作用，從而用於治療或預防血栓，栓塞和轉移。歐洲專利申請496,378公開了脒基二苯基化合物，它抑制細胞-細胞和細胞-基質間的作用，因此用於治療血栓，腦血管疾病，肺栓塞，心肌梗塞，動脈粥樣硬化，骨質疏鬆和腫瘤轉移。
歐洲專利申請445,796公開了對粘連蛋白與血小板結合及血小板的聚集和細胞粘連有抑制作用的醋酸衍生物。歐洲專利申請372,486公開了N-醯基β-胺基酸衍生物和它們的鹽。該公開的化合物在治療血栓，中風，心肌梗塞，炎症和動脈粥樣硬化中用於抑制血小板的聚集，並抑制轉移。歐洲專利申請381,033公開了脒基或胍基芳基取代的鏈烷酸衍生物用於治療血栓卒中，心肌梗塞，炎症，動脈粥樣硬化和腫瘤。
國際專利申請WO 95/06038和WO 94/22820公開了苯基脒衍生物用作血小板聚集的抑制劑。美國專利5,220,050，5,239,113，5,254,573，5,272,162，5,378,727，5,314,902，5,344,957，5,344,837和5,354,738公開了新的血小板聚集抑制劑。
自80年代初就已知道由乙醯膽鹼導致的血管的鬆弛作用依賴於內皮並將該活性歸因於稱作內皮細胞舒血管因子(EDRF)的不穩定體液因子。作為血管舒張藥物一氧化氮(NO)的活性為人們熟知已遠遠超過100年，而且NO是亞硝酸戊酯，三硝酸甘油酯和其它硝基血管擴張藥物的活性成分。近來對EDRF的鑑定如同NO一樣與生物化學路徑的發現一致，通過該途徑在NO合成酶的作用下由L-精氨酸中合成出NO。通過組成酶進行的NO的釋放起著一種轉導機制的作用，構成了幾種生理響應的基礎。由誘導酶產生的NO是腫瘤細胞和侵入的微生物的細胞毒素分子。
NO是可溶性的鳥苷酸環化酶的內源刺激質，除了依賴於內皮的松馳作用包括吞噬細胞的細胞毒性和中樞神經系統內的細胞間通訊外，還有許多生物作用(參見Moncada等《生化藥理學》(BiochemicalPharmacology)38，1709-1715(1989)和Moncada等《藥理學評論》(Pharmacological RevieWS)43，109-142(1991))。另外，在動物模型中，NO已顯示出具有抗血栓形成的作用(參見Radomski等《英國藥理學雜誌》(British Journal of Pharmacology)92，639-646(1987)，Moncada等《心血管藥理學雜誌》(Journal ofCardiovascular Pharmacology)17，S25(1991)，Yao等《循環》(Circulation)86，1302-1309(1992)，Byrne等，世界專利申請WO 9403421-A2和Schonafinger等，德國專利申請DE 4223800-A1)，支氣管松馳作用(Persson等《歐洲藥理學雜誌》(European Journalof Pharmacology)249，R7-R8(1993)，消炎作用，殺微生物作用(Alspaugh和Granger《感染和免疫》(Infection and Immunity)59，2291-2296(1991)和胃保護作用(參見Wallace等《歐洲藥理學雜誌》，(European Journal of Pharmacology)257，249-255(1994)。此外，已經指出，在骨質疏鬆的體外模型中一氧化氮對骨損失具有療效(MacIntyre等《美國國家科學院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.)88，2936-2940(1991) 。
因此，這些性質使得一氧化氮在前述的各種疾病的治療中通過增加生物作用和減少副作用成為增強血小板聚集抑制劑作用的理想試劑。本發明涉及新的血小板聚集抑制劑的硝酸酯和亞硝酸酯，它們的製備方法，含有它們的藥物組合物及它們的使用方法。發明概述按照本發明提供了新的脒衍生物。這些新的抑制劑化合物或其藥學上適用的鹽可用下面的化學式(I)代表
其中；A獨立地選自下組基團
其中虛線代表單鍵或雙鍵並且B選自羰基或亞氨基羰基基團；W選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，脂環烴基和芳香烴基，其中所說的所有取代基均可任意用羥基，低級烷基，低級烷氧基，滷素，硝基，氨基，醯氧基，以及可用滷素、硝基、低級烷氧基和低級烷基任意取代的苯基和萘基所取代；Z，Z′獨立地選自氫，滷素，氰基，磺醯基，羥基，低級烷氧基，和低級烷基；X是低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，羰基，脂環或雜環基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，或一氧化氮供給化合物，優選為2-氧化呋咱衍生物或有機硝酸酯/亞硝酸酯化合物，例如S-亞硝基半胱氨酸，S-亞硝基青黴胺和下式
其中R是氧或亞氨基；n為1到約4的整數。本發明進一步涉及包括式(I)化合物的藥物組合物。該化合物和組合物具有作為血小板聚集、血小板粘連和再狹窄抑制劑的用途，具有抗動脈粥樣化劑，和有治療作用的血管舒張劑的用途，包括對不穩定心絞痛，中風，心肌梗塞，心肌局部缺血和再灌注損傷，內臟局部缺血和再灌注損傷，動脈粥樣硬化，充血性心衰，局部缺血性心律失常，血栓形成，高血壓，肺病，轉移和骨質疏鬆症的治療。本發明還涉及一種在需要這種治療的哺乳動物內抑制血小板聚集和血小板粘連，預防再狹窄，預防動脈粥樣硬化和促進血管舒張作用的方法。發明詳述本發明優選實施方案是式I化合物或其藥學上適用的鹽；
其中；A選自下列基團；
其中的虛線指單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，1到約6個碳原子的低級烷基，2到約6個碳原子的低級鏈烯基，3到約6個碳原子的脂環烴基，和6到約12個碳原子的芳香烴基，其中所說的所有基團均可用羥基，低級烷氧基，低級烷基，滷素，硝基，氨基，和醯氧基任意取代；Z，Z′獨立地選自氫，滷素，氰基，磺醯基，羥基，低級烷基和低級烷氧基；X是低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，羰基，脂環或雜環基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，或一氧化氮供給基團，優選為2-氧化呋咱衍生物或有機硝酸酯亞硝酸酯(ONO)化合物，如S-亞硝基半胱氨酸，S-亞硝基青黴胺和下式基團，
其中R是氧或亞氨基；n是1到約4的整數。本發明的另一優選實施方案是式I化合物或其藥學上適用的鹽；
其中A選自下列基團，
其中虛線是指單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，1到約6個碳原子的低級烷基，3到約6個碳原子的脂環烴基，和6到約12個碳原子的芳香烴基，其中所述的所有基團均可任選用羥基，低級烷氧基，低級烷基，滷素，硝基，氨基，和醯氧基取代；Z，Z′獨立地選自氫，滷素，烷氧基，和低級烷基；X是低級烷基，羰基或脂環基；Y是硝酸酯基(ONO2)或一氧化氮供給基團，優選為2-氧化呋咱衍生物或有機硝酸酯化合物如下式
其中R是氧或亞氨基；n是1到約3的整數。
本發明的另一優選實施方案是式I化合物或其藥學上適用的鹽
其中A是
其中虛線代表單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，甲基，乙基，丙基，環己基；Z，Z′獨立地選自氫和羥基；X是羰基或脂環基；Y是硝酸酯基(ONO2)或一氧化氮供給基，優選2-氧化呋咱衍生物或有機硝酸酯化合物如下
其中R是氧或亞氨基；n是1到約3整數。本發明的又一優選實施方案是式I化合物或其藥學上適用的鹽
其中A是下式基團
其中的虛線代表單鍵或雙鍵；B是羰基；W選自氫，乙基和環己基；Z，Z′是氫；X是羰基；Y是一氧化氮供給基團，優選是有機硝酸酯化合物如
其中R是氧；n是1到約2的整數。
雖然如上述所定義的製劑或化合物可以其未處理的化學製品形式給藥，但優選是以藥物製劑的形式給藥。按另一方面，本發明提供了一種藥物製劑，它包括如上定義的一種製劑或化合物或藥學上適用的鹽或其溶劑合物，以及一種或多種藥學上適用載體和任選的一種或多種其它治療成分。在和其它製劑成分可配伍並對其接受者無害的意義上該載體必須是「可接受」的。
製劑中包括適合口服，非腸胃外的(包括皮下，真皮內，肌內，靜脈內和關節內)，直腸和局部(包括經皮，經頰，舌下和眼內)給藥的各種形式製劑，但最合適的給藥途逕取決於接受者的狀況和疾病。該製劑可方便地製成單位劑型，並可用藥學領域熟知的方法製備。所有的方法都包括將上述所定義的製劑或化合物或其藥學上適用的鹽或溶劑合物(「活性成分」)與構成一種或多種輔助成分的載體進行組合的步驟。一般地，通過均勻和充分地將活性成分與液體載體或細碎的固體載體或這兩種載體進行組合製備該製劑，如果必要將產品製成所需劑型。
適合於口服給藥的本發明製劑可製成分離的單位如每一單位含有預定量活性成分的膠囊劑，扁囊劑或片劑；粉劑或顆粒劑；水或非水的溶液或懸浮液；或水包油型的乳狀液或油包水型的乳狀液。該活性成分也可製成濃縮藥團、藥糖劑或糊劑。
任選用一種或多種輔助成分，經壓制或模壓可製備片劑。壓製片可在適合的機器上壓制任選與粘合劑，潤滑劑，惰性稀釋劑，表面活性劑或分散劑混合的自由流動式的(如粉末或顆粒)活性成分製備。模壓片可通過在合適的機器上模製用惰性液體稀釋劑溼潤的粉狀化合物的混合物製備。該片劑可任選包衣或刻痕並可製成活性成分的緩釋或控釋片。
非腸胃外的給藥的製劑包括水和非水的滅菌注射液，其中可以含有抗氧劑，緩衝劑，抑菌劑和使製劑與接受者血液等滲的溶質；還包括水和非水的滅菌的懸浮液，其中可以含有懸浮劑和增稠劑。該製劑可裝在單劑量或多劑量的容器中，如密封於安瓿和小玻璃瓶中，也可在冷凍乾燥條件下貯存，使用前只需加入無菌的液體載體，例如，生理鹽水，注射用水。臨時的注射液和懸浮液可從上述的這種無菌粉劑，粒劑和片劑製備。
直腸給藥的製劑可用通常使用的載體如可可脂或聚乙二醇製成栓劑。
口腔中局部給藥(例如通過頰或舌下給藥)的製劑包括在矯味基料如蔗糖和阿拉伯膠或黃蓍膠中含有活性成分的錠劑，和在如明膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠等基料中含有活性成分的軟錠劑。
優選的單位劑型是如下列舉的含有效劑量或其適當分數的有效成分的製劑。
理應理解，除了上面具體提到的有效成分外，本發明製劑可從包括在本技術領域對於所考慮的劑型常用的其它試劑，例如適合口服給藥的劑型中可包括矯味劑。
本發明化合物可按每天0.1-500mg/kg劑量口服或注射給藥。成人的劑量一般為5mg-5g/天。片劑或其它以分離單位存在的劑型中宜含有有效劑量或其倍數為有效劑量的本發明化合物，例如，單位製劑含2.5mg-500mg的化合物，通常約含5mg-200mg。
式(I)化合物優選通過口服或注射(靜脈內或皮下)給藥。給病人施用的化合物的準確劑量將由出診醫生負責。然而，所使用的劑量取決於許多因素，包括病人的年齡和性別，所治療的確切病症和它的嚴重程度。給藥途徑也依賴於病情和程度而改變。
在此使用的術語「低級烷基」(獨立或結合形式)指無環烷基，它含有1-約10個、優選1-約8個碳原子，更優選1-約6個碳原子。這類基團的實例包括甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，仲丁基，叔丁基，戊基，異戊基，己基，辛基等。
術語「低級鏈烯基」指至少含有1個雙鍵的不飽和的無環烴基。該基團含約2-約10個碳原子，優選約2-約8個碳原子而更優選2-約6個碳原子。適合的鏈烯基的實例包括丙烯基，丁烯-1-基，異丁烯基，戊烯-1-基，2-2-甲基丁烯-1-基，3-甲基丁烯-1-基，己烯-1-基，庚烯-1-基和辛烯-1-基等。
術語「低級炔基」指至少含一個或多個三鍵的不飽和無環烴基，這類基團含約2-約10個碳原子，優選含約2-約8個碳原子，更優選含2-約6個碳原子。合適的炔基的實例包括乙炔基，丙炔基，丁炔-1-基，丁炔-2-基，戊炔-1-基，戊炔-2-基，3-甲基丁炔-1-基，己炔-1-基，己炔-2-基，己炔-3-基，3，3-二甲基-丁炔-1-基等。
術語「低級烷氧基」(單獨或結合形式)指烷基醚基，其中術語烷基定義如上且最好含有1到約4個碳原子。適合的烷基醚基的實例包括甲氧基，乙氧基，正丙氧基，異丙氧基，正丁氧基，異丁氧基，仲丁氧基，叔丁氧基等。
術語「脂環的」或「環烷基」指3到約10個碳原子的環狀脂族基，優選為3到約6個碳原子。合適的脂環基的實例包括環丙基，環丁基，環戊基，環己基，環己烯基等。
術語「芳香烴」指4到約16個碳原子的芳香基，優選6到約12個碳原子，更優選6到約10個碳原子。合適的芳烴基的實例包括苯基，萘基等。
術語「雜環基」指有4到約10個碳原子，優選約5-約6個碳原子的飽和或不飽和的環狀烴基，包括芳香系烴基；其中1到約4個碳原子由氮、氧或硫所代替。該「雜環基」可稠合到芳香烴基上。合適的實例包括吡咯基，吡啶基，吡唑基，三唑基，嘧啶基，噠嗪基，噁唑基，異噁唑基，噻唑基，咪唑基，吲哚基，噻吩基，呋喃基，四唑基，2-吡咯啉基，3-吡咯啉基，吡咯烷基，1，3-二氧戊烷，2-咪唑啉基，咪唑烷基，2-吡唑啉基，吡唑烷基，異噁唑基，異噻唑基，噁二唑基，三唑基，噻二唑基，2H-吡喃基，4H-吡喃基，哌啶基，1，4-二噁烷基，嗎啉基，1，4-二噻烷基，硫代嗎啉基，吡嗪基，哌嗪基，三嗪基，1，3，5-三噻烷基，苯並噻吩基，苯並咪唑基，喹啉基等。
術語「滷素」指氟，氯，溴或碘。
術語「前藥」指在體內會變得更有效的化合物。
在這裡所用的涉及病人的「治療」其意也包括預防。
本申請中所引用的所有美國或外國的參考文獻，專利或申請，如文中所寫出的那樣被引入本文作為參考。
用來實施本發明的起始物是可從市場如西格馬(Sigma)公司買到的。
本發明化合物的兩個通用合成流程概括在下面。
流程I
流程II
為製備在此公開的本發明化合物而在起始物的選擇和工藝條件方面進行改動對於本領域技術人員是顯而易見的。
由下述的實施例說明本發明實施例1
將N-9-芴基甲氧羰基-天冬氨酸(OtBu)-OH(Fmoc-Asp(OtBu)-OH)(5.0g；10毫摩爾)，單硝酸異山梨醇酯(2.0g；10毫摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(DMAP，100mg)溶於二氯甲烷(150ml)中。在攪拌下向該溶液加入N，N′-二環己基碳二亞胺(DCC，2.3g；12毫摩爾)。室溫下將該混合物攪拌一個周末。取小份樣品送檢質譜，結果表明有所需的中間體(FAB-MS(M+Li)+＝591)的存在。經過濾除去固體脲並用二乙胺(DEA，40ml)處理濾液1小時。在旋轉蒸發儀上蒸去溶劑後不需任何純化直接使用殘留物。FAB-MS(M+Li)+＝369。實施例2
按照實施例1所述方法從Fmoc-Asp(OtBu)-OH和2-氨基-1，43，6-二脫水山梨醇-5-硝酸酯製備標題化合物。實施例3
將4-脒基苯基戊酸鹽酸鹽(2.6g；10毫摩爾)，二琥珀醯亞胺基碳酸酯(DSC，2.5g；10毫摩爾)和4-二甲基氨基吡啶(0.5g)於二甲基甲醯胺/吡啶(3∶1；200ml)中攪拌過夜。向該混合物中緩緩加入天冬氨醯(OtBu)-異山梨醇-5-單硝酸酯(實施例1)。該混合物室溫下再攪拌一天後過濾。從濾液中得到的小份樣品所作的質譜表明存在所需的中間體(FAB-MS(M+H)+＝565)。將濾液蒸發至幹後殘留物用三氟醋酸(TFA，100ml)處理1小時。在旋轉蒸發儀上減壓蒸去酸後，油狀殘留物經製備型反相高效液相層析在Deltapak C18柱上純化，使用5-50％乙腈/水/0.05％三氟醋酸的線性梯度洗脫液。將產物冷凍乾燥得到450mg白色固體產物。
FAB-MS(M+H)+＝508.9.1H-NMR(DMSO-d6)1.4-1.6(m，4H，-CH2-CH2-)，2.15(t，2H，CH2-苯基)，4.35 and5.1(d，2H，異山梨醇)，4.5(q，1H，α-CH)，4.92 and 5.5(t，2H，異山梨醇)，7.4 and 7.75(dd，4H，苯基)，8.34(m，1H，NH)，9.05 and 9.2(s，2H，脒)實施例4
從4-脒基苯基戊酸鹽酸鹽和實施例2的標題產物按實施例3所述的方法製備本標題化合物。實施例5
將實施例3產物(100mg)溶於含有10mM半胱氨酸的磷酸鹽緩衝溶液(pH7.4；10ml)中並將該混合物於室溫下攪拌一個周末。用分析型高效液相層析監測反應進程。通過製備型反相高效液相層析於Deltapak C18柱上用線性梯度的5％到50％乙腈/水/0.05％三氟醋酸洗脫將得到的混合物純化。將該產物冷凍乾燥得到5mg白色固體。FAB-MS(M+H)+＝464.4。實施例6
室溫下將4-[[4-脒基苯基]-氨基]-4-氧代丁酸三氟醋酸鹽(3.5g；10毫摩爾)加到無水二甲基甲醯胺(100ml)中再加N-甲基嗎啉(NMM，1g；10毫摩爾)和氯甲酸異丁酯(1.37g；10毫摩爾)。向所得混合物中依次加入天冬氨醯(OtBu)-異山梨醇-5-單硝酸酯(實施例1；～10毫摩爾)和N-甲基嗎啉(1g；10毫摩爾)。將反應混合物室溫攪拌2小時後過濾。再將濾液蒸發至幹並用三氟醋酸(TFA，50ml)處理殘留物1小時。在旋轉蒸發儀上減壓蒸去該酸後，油狀的殘留物經製備型反相高效液相層析，在Deltapak C18柱上純化，用線性梯度的5％到50％乙腈/水/0.05％三氟醋酸洗脫。將產物冷凍乾燥後得到700mg的白色固體。F.AB-MS(M+H)+＝524.4.1H-NMR(DMSO-d6)4.35 and 5.05(d，2H，異山梨醇)，4.5(q，1H，α-CH)，4.92 and 5.5(m，2H，異山梨醇)，7.75(s，4H，苯基)，8.44(m，1H，NH)，8.85 and 9.15(s，2H，脒)實施例7
自4-[[4-脒基苯基]-氨基]-4-氧代丁酸三氟醋酸鹽和實施例2的標題產物按實施例6所述的方法製備本標題化合物。實施例8
將實施例6產物(100mg)溶解於含有10mM半胱氨酸的碳酸氫鈉稀溶液(pH7.4；5ml)中並將該混合物於室溫下攪拌過夜。通過分析型高效液相層析監測反應進程。由製備型反相高效液相層析在DeltapakC18柱上用線性梯度的5％到50％的乙腈/水/0.05％三氟醋酸為洗脫液將所得混合物純化。產品冷凍乾燥後得到40mg白色固體。FAB-MS(M+H)+＝479.4。實施例9
自α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2-氧-吡咯烷-3-基]醋酸和實施例1的標題產物按實施例3所述的方法製備該標題化合物。實施例10
自α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2-氧-吡咯烷-3-基]醋酸和實施例2的標題產物按實施例3所述的方法製備本標題化合物。實施例11
從α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2-咪唑啉酮-3-基]醋酸和實施例1的標題產物按實施例3所述的方法製備該標題化合物。實施例12
從α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2-咪唑啉酮-3-基]醋酸和實施例2的標題產物按實施例3所述方法製備該標題化合物。實施例13
從α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2-巰基-咪唑啉-3-基]醋酸和實施例1的標題產物按實施例3所述的方法製備本標題化合物。實施例14
從α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2(3H)-氧-1H-咪唑-3-基]醋酸和實施例1的標題產物按實施例3所述的方法製備本標題化合物。實施例15
自α-[1-[4-(氨基亞氨基甲基)苯基]-2(3H)-氧-1H-咪唑-3-基]醋酸和實施例2的標題產物按實施例3所述的方法製備本標題化合物。實施例16
實施例3的產物(25mg)用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液(5ml)處理。將該混合物減壓下蒸發至幹，殘留物通過反相高效液相層析，在Deltapak C18柱上用5％到50％乙腈/水/0.05％三氟醋酸線性梯度洗脫進行純化，所得產物冷凍乾燥得到20mg白色固體。FAB-MS(M+H)+＝536.9.1H-NMR(DMSO-d6)1.18(t，3H，CH3)，1.4-1.6(m，4H，-CH2-CH2-)，2.1(t，2H，CH2-苯基)，4.05(m，2H，-OCH2-)，4.35 and 5.1(d，2H，異山梨醇)，4.5(q，1H，α-CH)，4.95 and 5.5 (t，2H，異山梨醇)，7.4and 7.75(dd，4H，苯基)，8.38(m，1H，NH)，8.95 and 9.1(s，2H，脒)實施例17
按實施例16的方法將實施例6的產物(25mg)用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理生成白色固體的本標題化合物(20mg)。
FAB-MS(M+H)+＝552.5.1H-NMR(DMSO-d6)1.18(t，3H，CH3)，4.05(m，2H，-OCH2-)，4.35 and 5.05(d，2H，異山梨醇)，4.5(q，1H，α-CH)4.92 and 5.5(m，2H，異山梨醇)，7.75(s，4H，苯基)，8.44(m，1H，NH)，8.75 and 9.15 (s，2H，脒)實施例18
按實施例16的方法將實施例7的產物用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理生成本標題化合物。實施例19
按實施例16的方法將實施例11的產物用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理得到本標題化合物。實施例20
按實施例16的方法將實施例12的產物用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理得到本標題化合物。實施例21
將實施例16的方法將實施例9的產物用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理得到本標題化合物。實施例22
按實施例16的方法將實施例14的產物用氯化氫(氣體)飽和的乙醇溶液處理得到本標題化合物。生物學將上述發明的化合物用在富血小板血漿(PRP)中的體外人血小板聚集試驗法和對純化的人纖維蛋白原及玻連蛋白受體的競爭性固相結合試驗法進行試驗。富血小板血漿中的體外人血小板聚集試驗至少兩星期沒有接受抗血小板藥物的健康男性或女性供血者，抽血前禁食8小時，然後用蝶形針和含有3ml 0.129M的檸檬酸鈉緩衝液(3.8％)的30ml塑料注射器收集30ml全血。抽血時小心地轉動注射器以使與檸檬酸鹽混合。通過室溫下在250×g下離心12分鐘後不加制動使離心機自然停止的方法製備富含血小板的血漿(PRP)。從血中用塑料吸管吸出富含血小板血漿並將其放入室溫下的50ml康寧錐形無菌帶塑料蓋的離心試管中。通過將除去PRP而將餘下的血液在室溫下於2000×g離心15分鐘，不加制動而使離心機自然停下，製得貧血小板血漿(PPP)。用PPP將PRP調至含血小板數為每ml 2-3×108個。將450μl的PRP製品和50μl要試驗的化合物或鹽水於37°下在Payton集合度計(Payton科學公司，布法羅，N.Y(Payton Scientific，Inc.，Buffalo，N.Y.))中預溫育1分鐘。將50μl的腺苷5′-二磷酸(ADP)(200mM)加到樣品池中並監測聚集過程1分鐘。所有化合物均進行雙份試驗。按下式計算結果對照百分數＝[(最大光密度-化合物的起始光密度)/(最大光密度-對照鹽水的起始光密度)]×100。抑制率(％)＝100-(對照百分數)。所試驗化合物及其用半數抑制濃度(IC50)表示的活性結果記錄在表1中。
表1對人的富含血小板血槳中ADP誘導的血小板聚集的抑制化合物 IC50[μM]實施例3 2.0實施例5 2.0實施例6 0.4實施例8 0.3固相受體試驗這些試驗基本上與上述報導的相同。用含有1.0mM Ca2+，Mg2+和Mn2+的pH7.4的三羥甲基氨基甲烷緩衝鹽水(TBS+++)將純化的人的玻連蛋白受體(αvβ3)或純化的人的纖維蛋白原受體(IIbβ3)從原溶液稀釋為1.0μg/ml的溶液。立刻將稀釋後的受體轉移到每孔100μl的Linbro微量滴板中(100ng受體/孔)。將該板密封后在4℃保溫過夜以便使受體與孔結合。以後所有步驟都在室溫下進行。將試驗板騰空並加入200μl的1％放射免疫測定級的牛血清白蛋白TBS+++溶液(TBS+++/BSA)以便封閉暴露的塑料表面。溫育2小時後用TBS+++藉助96孔板洗滌器洗滌試驗板。用2nM的生物素化的玻連蛋白在TBS+++/BSA中的溶液為稀釋劑，將起始濃度為2mM的試驗化合物和對照物按對數級稀釋。所標記的配體與試驗(或對照)的配體預先的混合以及隨後將其50μl小份液樣轉移到試驗板中是用CETUS自動加樣器(CETUS Propette robot)進行的；最終標記的配體濃度是1nM而試驗化合物的最高濃度是1.0×10-4M。競爭反應進行2小時後用板洗器如前一樣洗滌所有的孔。同樣，親合純化的辣根過氧化物酶所標記的山羊抗生物素抗體用TBS+++/BSA稀釋成1∶3000並向每孔中加125μL。30分鐘後，衝洗該板並與鄰苯二胺/H2O2底物在pH5.0 100mM/L的檸檬酸緩衝溶液中溫育。用微量滴定板讀數器在450nm波長處讀板並當最大結合的對照孔達到約為1的吸光度時，記錄最終的A450用於分析。使用一個為了與EXCELTM電子數據表程序一起使用而書寫的宏指令對數據進行分析。測定雙份濃度樣本的均數值，標準偏差和百分變異係數。A450均數值對4個最大結合的對照(沒加競爭劑)的平均值進行規一化。該規一化數值按半對數比例作圖，進行四參數曲線擬合計算，並報導算出的IC50值和相應的相關係數。將纖維蛋白原的肽片斷，GRGDSP裝入每一板中溫育作陽性對照。
表2對純化的人的纖維蛋白原和玻連蛋白受體的競爭性結合試驗化合物 IC50[nM]纖維蛋白原受體玻連蛋白受體實施例3 3.11 ＞100,000實施例5 1.28 ＞100,000實施例6 0.25 ＞100,000實施例8 0.71 ＞100,000根據上述，本領域的技術人員很容易明確本發明的基本特點，在不改變其精神和範圍的情況下，對本發明可進行各種變化和修改以使其適合各種應用和情況。
權利要求
1.具有式I結構的化合物或藥學上適用的其鹽
其中；A獨立地選自以下基團
其中虛線代表單鍵或雙鍵和B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，低級烷基，低級鏈烯基，低級炔基，脂環烴基和芳香烴基，其中所說的所有取代基任選羥基，低級烷基，低級烷氧基，滷素，硝基，氨基，醯氧基，可用滷素、硝基、低級烷氧基、和低級烷基任選取的苯基和萘基所取代；Z，Z′獨立地選自氫，滷素，氰基，磺醯基，羥基，低級烷氧基，和低級烷基；X是羰基，脂環或雜環基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，S-亞硝基-半胱氨酸，S-亞硝基-青黴胺或下列基團之一
其中R是氧或亞氨基；n是1到約4的整數。
2.權利要求1中列舉的化合物，其中；A選自
其中虛線代表單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，1到約6個碳原子的低級烷基，2到約6個碳原子的低級烯基，3到約6個碳原子的脂環烴基，和6到約12個碳原子的芳香烴基，其中所說的所有基團均可任選用羥基，低級烷氧基，低級烷基，滷素，硝基，氨基，和醯氧基所取代；Z，Z′獨立地選自氫，滷素，氰基，磺醯基，羥基，低級烷基和低級烷氧基；X是羰基，脂環或雜環基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，S-亞硝基-半胱氨酸，S-亞硝基-青黴胺或下列基團之一
其中R是氧或亞氨基；和n是1到約4的整數。
3.權利要求2中列舉的化合物，其中；A選自
其中虛線代表單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，1到約6個碳原子的低級烷基，3到約6個碳原子的脂環烴基，和6到約12個碳原子的芳香烴基，其中所說的所有基團均可任選用羥基，低級烷氧基，低級烷基，滷素，硝基，氨基，和醯氧基所取代；Z，Z′獨立地選自氫，滷素，烷氧基，和低級烷基；X是羰基或脂環基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，S-亞硝基-半胱氨酸，S-亞硝基-青黴胺或下列基團之一
其中R是氧或亞氨基；和n是1到約3的整數。
4.權利要求3中列舉的化合物，其中A是
其中的虛線代表單鍵或雙鍵；B選自羰基或亞氨基羰基；W選自氫，甲基，乙基，丙基，環己基；Z，Z′選自氫和羥基；X是羰基或脂環基；Y是硝酸酯基(ONO2)，亞硝酸酯基(ONO)，S-亞硝基-半胱氨酸，S-亞硝基-青黴胺或下列基團之一
其中R是氧或亞氨基；和n是1-3的整數。
5.權利要求4中列舉的化合物，其中A是
其中虛線代表單鍵或雙鍵和B是羰基；W選自氫，乙基和環己基；Z，Z′是氫；X是羰基；Y是下列基團之一
其中R是氧；和n是1-2的整數。
6.一種藥物組合物，其中包括權利要求1，2，3，4，或5的一種化合物和至少一種無毒的藥學上適用的載體。
7.一種治療哺乳動物的方法，用來抑制需要該治療的哺乳動物的血小板聚集和促進血管擴張作用，該方法包括給哺乳動物有效治療量的至少一種權利要求1，2，3，4或5的化合物。
全文摘要
本發明公開了具有供給一氧化氮性質的新的脒衍生物,其每一化合物都具有抑制血小板聚集和增強血管擴張的作用。
文檔編號A61P7/02GK1189833SQ96195239
公開日1998年8月5日 申請日期1996年5月15日 優先權日1995年5月15日
發明者M·G·庫爾裡, F·S·喬恩, M·E·祖佩克 申請人:G.D.瑟爾公司